Bioensayo de Toxicidad

BIOENSAYO DE TOXICIDAD EN ARTEMIA SALINA
Equipo 7 Bazn S. Tania Berenice Gonzlez A. Adriana Ortega G. Cynthia Torres C. Gerardo Antonio
INTRODUCCIN
Los estudios de toxicidad constituyen hoy da una parte muy importante dentro del desarrollo de un nuevo frmaco y se extienden prcticamente a lo largo de todo el mismo. El objetivo de los mismos es evaluar el riesgo o peligro potencial que un agente qumico o fsico puede ocasionar sobre la salud humana cuando es objeto de exposiciones agudas o crnicas".
Y no se limitan slo a los frmacos sino que la mayor parte de las sustancias qumicas industriales (pesticidas, agroqumicos, cosmticos, plsticos, etc.) son objeto de estudios de toxicidad iguales o ms complejos que los realizados con los nuevos frmacos.
El presente trabajo se llevo a cabo para determinar experimentalmente la dosis letal media en algunos microorganismos mediante un bioensayo de toxicidad.
ECOTOXICOLOGA
Ciencia que estudia los efectos de las sustancias txicas sobre los organismos combinando las tcnicas ecolgicas y tcnicas. La toxicidad directa sobre los organismos Las alteraciones del medio ambiente en el cual viven los organismos
QU ES UN BIOENSAYO DE TOXICIDAD?
Prueba para establecer la naturaleza y la magnitud del efecto que producir un agente dado cuando los organismos o sistemas biolgicos son expuestos a l. Toxicidad aguda Toxicidad crnica
PARA QU NOS SIRVEN ?
Para evaluar los efectos nocivos que producen sobre los seres vivos diferentes tipos de agentes externos que estn presentes en el ambiente. Si la contaminacin es capaz de producir un dao a los seres vivos que estn en contacto.
Toxicidad aguda
De 48 96 horas Mide los efectos de sustancias en la supervivencia de la especie. CE50
Toxicidad crnica
De acuerdo a la vida de la especie utilizada. Mide el desarrollo o crecimiento y el xito o falla de la reproduccin.
ARTEMIA SALINA
Crustceo perteneciente a la Subclase Branchiopoda. Orden Anostraca. Cuerpo delgado, alargado y est cubierto por un caparazn blando.
Cabeza Trax Abdomen
Su longitud y aspecto Tamao oscila entre 7 y 12 mm de longitud. distribucin amplia (excepto Antrtida) Capacidad de adaptacin y tolerancia a diversas situaciones.
Aguas salinas amplio rango trmico
CARACTERSTICAS DE LOS ANIMALES PARA UTILIZARSE EN BIOENSAYOS

De
amplia distribucin en el pas o de importancia comercial
Disponibilidad
Tamao
suficientemente pequeo fcil cultivo
De
Susceptibilidad
a exposiciones con sustancias
xenobiticas.
ADAPTABILIDAD DE LOS ORGANISMOS COMO ESPECIES PARA BIOENSAYOS

Organismos Adaptabilidad del Comnmente organismo utilizado Cultivo de Recoleccin laboratorio de campo Excelente Muy difcil de Si recolectar cultivo puro Muy difcil de Muy limitado recolectar cultivo puro
Algas
Protozoos
Excelente
Coppodos
Mediano
Alta tasa de Limita mortandad despus do de la recoleccin de campo Bueno Mediano Si Limita do
Camarones Anlidos
Bueno Mediano
Insectos Moluscos Crustceos Peces
Bajo Bueno Bajo Excelente
Mediano Mediano Mediano
Si Si
Alta tasa de Si mortandad despus de la recoleccin de campo
PROCEDIMIENTO
INCUBACION DE LOS HUEVECILLOS:

Armar el dispositivo de incubacin.
Preparar 40 ml de agua de mar artificial, pesando 12.2 g de sal marina y disolver en 400 ml , adicionar una gota de anticloro y dejar reposar 1 min .
Adicionar los huevecillos en la pecera de incubacin (aprox. 10 g de huevecillos) colocar en la zona obscura y dejar incubar durante 24 h.
Tomar 300 ml del agua de mar artificial y colocar en la pecera de incubacin.
Colocar agua de la llave en la pecera mayor a una temp. aprox. de 26-28C .
Conectar los dispositivos de luz y aireacin.
SOLUCIONES
CLORURO DE MERCURIO (II) CH2Cl2
Puede afectar al pasar a travs de la piel causando quemaduras e inhalndolo causando irritacin en los pulmones provocando tos o falta de aire. Provoca irritacin en la piel. Es venenoso, provocando quemaduras en la boca, salivacin, ennegrecimiento de la piel y membranas mucosas de la garganta y abdomen. Es un gas sumamente inflamable.
NITRATO DE PLATA AgNO3
Es corrosivo y peligroso para el medio ambiente.
DICROMATO DE POTASIO K2Cr2O7
Irrita la piel,ojos, membranas mucosas y tracto respiratorio. Provocando sensacin de quemadura, tos respiraciones cortas, dolor de cabeza, nuseas, vmito. Nocivo por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel.
LDLo(oral en humanos): 26mg/Kg LD50(oral en ratones): 190mg/Kg
TIOCIANATO DE POTASIO
LD50(oral rata): 854 mg/Kg LDLo(oral hombre): 80 mg/kg
SOLUCIONES
NICOTINA C1OH14N2
Colicos abdominales, respiracin rpida, paro respiratorio, sensacin de ardor en la boca, inquietud, convulsiones, desmayo, etc.
Inhalacin:Causa irritacin de pulmones, dolor abdominal. Ingestin:Provoca dolor y espasmos abdominales, nuseas, vomito, dolor de cabeza. Ojos:Irritacin local o abrasin. Inhalacin: Los efectos no son serios siempre que se use de manera razonable. Una ihnalacin prolongada de concentraciones altas (mayores de 5000 ppm) produce irritacin de ojos y tracto respiratorio superior, nuseas, vomito, dolor de cabeza, adormecimiento y otros efectos narcticos. Piel: Puede afectar produciendo dermatitis (resequedad y agrietamiento) Ingestion: La ingestin constante de grandes cantidades de etanol provoca dao en el cerebro, hgado y riones que conducen a la muerte.
ACETATO DE PLOMO Pb(C2H3O2)2. 3H2O
LD50: 4665 mg/Kg
ETANOL AL 42%
LD50(oral ratas): 13 ml/kg
REALIZACIN DEL BIOENSAYO:

Se colocarn 10 organismos en cada uno de los tubos de ensaye.
Se observar el movimiento de los organismos por un periodos de 120 min.
Al trmino del periodo de observacin se contarn las artemias que sobrevivieron: a) Las artemias que presentan movimiento Vivas b) Las artemias que permanecen inmviles Muertas
Anlisis Probit
Para el calculo de CL50, CE50 generalmente se usa el anlisis Probit, se deben de tener: Concentracin de la sustancia o dosis Nmero de individuos (n) Nmero de organismo muertos o afectados (r) Porcentaje de efecto (p)
Para establecer una relacin lineal entre el estimulo y su efecto, es necesario transformar : Dosis a su logaritmo Mortalidad a valores probit Ya que si graficamos los porcentajes de mortalidad contra logaritmo de la dosis, obtenemos una curva sigmoidea. En cambio cuando graficamos logaritmos dosis contra unidades probit, obtenemos una lnea recta.
Clculo de DL 50 o DE 50
Mtodo grfico Realizar la curva dosis-respuesta cuantal. Porcentaje de individuos que presentan la respuesta contra logaritmo de la dosis (concentracin del compuesto en este caso).
Realizar la grfica de Unidades Probit Vs Log dosis
1. Las muestras se preparan de acuerdo con las siguiente tabla. Volumen de la Volumen del agua de disolucin de HgCl2 o mar artificial (mL) Ag2SO4 (mL) 0 0.2 0.4 2.0 1.8 1.6
Muestra
1 2 3
4
5 6
0.6
0.8 1.0
1.4
1.2 1.0
7
8 9 10
1.2
1.4 1.6 1.8
0.8
0.6 0.4 0.2
11
2.0
Ejemplo Sustancia: Cloruro de mercurio (ll), Dicromato de potasio , etc.

Dosis (mg)kg) 0.0702
0.0948 0.1547 0.1764
Nmero de artemias Nmero de artemias utilizadas (n) que murieron (r) 6

6 6 6
p=r/n
%E =p*100 16
33 50 66
1
2 3 4
0.16
0.33 0.5 0.66
0.1907
0.222
6
6
5
6
0.83
1
83
100
ln Co -2.657 -2.356 -1.866 -1.735
%E 16
Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con HgCl2 120

100 83
%E 66 50 33 16 -3 -2 -1.86 ln Co -1 100 80 60
50%
33 50 66
40
20 0 0
-1.657
83
-1.505 100
Analisis Probit en artemias salinas con HgCl2

ln Co -2.657 -2.356 -1.866 -1.735 -1.657 Unidad Probit 4.01 4.56 5 5.41
-3 -2 -1 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0
Unidad Probit
5.95
ln Co Ecuacin de la recta Y= mx + b Y= 2.66 x + 10.72
-1.505
8.09
Ecuacin de la recta Y= mx + b Y= 2.66 x + 10.72
Es la dosis nica, de una sustancia que produce la muerte del 50% de la poblacin .
Donde : m es b es
Daz M, Bustos M, Espinoza A. Pruebas de toxicidad acutica: fundamentos y mtodos. Bogot: Universidad Nacional de Colombia; 2004. Mendoza N. Farmacologa Mdica. Mxico: Editorial Medica Panamericana; 2008. http://www.cm.colpos.mx/moodle/file.php/13/BIOENSAYO/ EL_BIOENSAYO_EN_ENTOMOLOGIA.pdf Katzung, Farmacologa bsica y clnica, 10 Edicin, Editorial Manual Moderno, 2007

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PARA QU NOS SIRVEN ?

CARACTERSTICAS DE LOS ANIMALES PARA UTILIZARSE EN BIOENSAYOS

amplia distribucin en el pas o de importancia comercial

suficientemente pequeo fcil cultivo

a exposiciones con sustancias

ADAPTABILIDAD DE LOS ORGANISMOS COMO ESPECIES PARA BIOENSAYOS

Insectos Moluscos Crustceos Peces

Bajo Bueno Bajo Excelente

Mediano Mediano Mediano

Alta tasa de Si mortandad despus de la recoleccin de campo

INCUBACION DE LOS HUEVECILLOS:

Tomar 300 ml del agua de mar artificial y colocar en la pecera de incubacin.

Colocar agua de la llave en la pecera mayor a una temp. aprox. de 26-28C .

Conectar los dispositivos de luz y aireacin.

NITRATO DE PLATA AgNO3

Es corrosivo y peligroso para el medio ambiente.

DICROMATO DE POTASIO K2Cr2O7

LDLo(oral en humanos): 26mg/Kg LD50(oral en ratones): 190mg/Kg

LD50(oral rata): 854 mg/Kg LDLo(oral hombre): 80 mg/kg

ACETATO DE PLOMO Pb(C2H3O2)2. 3H2O

LD50: 4665 mg/Kg

LD50(oral ratas): 13 ml/kg

REALIZACIN DEL BIOENSAYO:

Se observar el movimiento de los organismos por un periodos de 120 min.

Realizar la grfica de Unidades Probit Vs Log dosis

Ejemplo Sustancia: Cloruro de mercurio (ll), Dicromato de potasio , etc.

Nmero de artemias Nmero de artemias utilizadas (n) que murieron (r) 6

ln Co -2.657 -2.356 -1.866 -1.735

Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con HgCl2 120

Analisis Probit en artemias salinas con HgCl2

ln Co Ecuacin de la recta Y= mx + b Y= 2.66 x + 10.72

Ecuacin de la recta Y= mx + b Y= 2.66 x + 10.72

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