ESTUDIO DE LOS

MICROORGANISMOS
Microorganismo

Salmonela (Salmonella typhimurium), en rosa, en un cultivo de

clulas humanas.
Un microbio (del griego cientfico [microbios]; de
[micrs], pequeo, y [bos], vida;1 ser vivo
diminuto), tambin llamado microorganismo, es un ser vivo, o
un sistema biolgico, que solo puede visualizarse con
el microscopio. La ciencia que estudia los microorganismos es
la microbiologa. Son organismos dotados de individualidad que
presentan, a diferencia de las plantas y los animales, una

organizacin
biolgica
elemental.
En
su
mayora
son unicelulares, aunque en algunos casos se trate de
organismos centicos compuestos por clulas multinucleadas, o
incluso multicelulares.
El concepto de microorganismo es operativo y carece de
cualquier
implicacin taxonmica o filogentica dado
que
engloba
organismos
unicelulares
y
pluricelulares
no
relacionados evolutivamente entre s, tantoprocariotas (como
las bacterias), como eucariotas (como los protozoos), una parte
de las algas y los hongos, e incluso entidades biolgicas
acelulares de tamao ultramicroscpico, como los virus o
los priones. Estos ltimos generalmente no son considerados
seres vivos y por lo tanto no son microorganismos en sentido
estricto; no obstante, tambin estn incluidos en el campo de
estudio de la microbiologa.
Los microbios tienen mltiples formas y tamaos. Si un virus de
tamao promedio tuviera el tamao de una pelota de tenis, una
bacteria sera del tamao de media cancha de tenis y una
clula eucariota sera como un estadio entero de ftbol.
[cita requerida]

Algunos
microorganismos
son patgenos y
causan
enfermedades a personas, animales y plantas, algunas de las
cuales han sido un azote para la humanidad desde tiempos
inmemoriales. No obstante, la inmensa mayora de los
microbios no son en absoluto perjudiciales y bastantes juegan
un papel clave en la biosfera al proporcionar oxgeno
(algas y cianobacterias), y, otros, descomponer la materia
orgnica, mineralizarla y hacerla de nuevo accesible a
los productores, cerrando el ciclo de la materia.
Tipos de microbios
En los microbios estn representados cuatro grupos de
seres: bacterias, protozoos, hongos y algas.
Virus[editar]
Artculo principal: Virus

Los virus son sistemas biolgicos que presentan incluso

tamaos ultramicroscpicos (los ms pequeos y los de
tamaos
medianos
solo
se
pueden
observar
mediante microscopio electrnico), los cuales pueden causar
infecciones y solo se reproducen en clulas husped. Los virus
fuera de clulas husped estn en forma inactiva. Los virus
constan de una cubierta protectora proteica o cpside que
rodea el material gentico. Su forma puede ser espiral, esfrica
o como clulas pequeas, de tamao entre 10 y 300 nm. Al
tener un tamao menor que las bacterias, pueden
pasar filtros que permiten la retencin de las mismas.
Al contrario que las bacterias y los protozoos parsitos, los virus
contienen un solo tipo de cido nucleico (ARN o ADN). No se
pueden reproducir por s solos, sino que necesitan de la
maquinaria metablica de la clula husped para asegurar que
su informacin gentica pasa a la siguiente generacin.
Al contrario que las bacterias, los virus no estn presentes en el
ser humano de manera natural (excepto como un elemento
viral endgeno). Cuando las personas quedan afectadas por un
virus, estos generalmente se eliminan del cuerpo humano
mediante secreciones.
En las ltimas dcadas se han empezado a utilizar virus en
medicina, por ejemplo para la debilitacin de bacterias, la
creacin de antitoxinas, la utilizacin para libreras genmicas,
como vectores en terapia gnica, para la destruccin de clulas
tumorales2

Micrococcus luteus.
Microorganismos procariotas
Artculos principales: Bacteria y Archaea.
Las bacterias y
las arqueas son
microorganismos procariontes de forma esfrica (cocos), de
bastn recto (bacilos) o curvado (vibrios), o espirales (espirilos).
Pueden existir como organismos individuales, formando
cadenas, pares, ttradas, masas irregulares, etc. Las bacterias
son una de las formas de vida ms abundantes en la tierra.
Tienen una longitud entre 0,4 y 14 m. Consecuentemente solo
se pueden ver mediante microscopio. Las bacterias se
reproducen mediante la multiplicacin del ADN, y divisin en
dos clulas independientes; en circunstancias normales este
proceso dura entre 30 y 60 minutos.
Cuando las condiciones del medio son desfavorables, cuando
cambia la temperatura o disminuye la cantidad de los
nutrientes, determinadas bacterias forman endosporas como
mecanismo de defensa, caracterizadas por presentar una capa
protectora resistente al calor, a la desecacin, a la radiacin y a
la trituracin mecnica y que protege la bacteria de manera

muy eficiente. De esta manera, pueden soportar temperaturas

elevadas, periodos de sequa, heladas, etc. Cuando las
condiciones del medio mejoran, se desarrolla una nueva
bacteria que contina el crecimiento y la multiplicacin.
Las bacterias tienen un papel funcional ecolgico especfico. Por
ejemplo, algunas realizan la degradacin de la materia
orgnica, otras integran su metabolismo con el de los seres
humanos.
Si bien algunas bacterias son patgenas (causantes de diversas
enfermedades), una gran parte de ellas son inocuas o incluso
buenas para la salud.
Algas Cianoficeas
Artculo principal: Cyanobacteria
Las algas cianoficeas o Cyanobacterias son bacterias capaces
de realizar fotosntesis oxignica, cuyas clulas miden solo unos
micrmetros (m) de dimetro, pero son ms grandes que la
mayora de las otras bacterias. Contienen la enzima ribulosa1,5-bisfosfatocarboxilasa RuBisCO, que realiza la fijacin del
CO2.
Microorganismos eucariotas
Se denomina eucariotas a todas las clulas que tienen su
material hereditario (su informacin gentica) encerrado dentro
de una doble membrana, la envoltura nuclear, que delimita un
ncleo celular.
Hay tres tipos de microorganismos eucariotas, los protozoos
(hetertrofos y sin pared celular), las algas microscpicas
(auttrofos y con pared celular de celulosa) y los hongos
microscpicos (hetertrofos y con pared celular de quitina).
Protistas
Artculo principal: Protozoo

Los protozoos son

microorganismos
unicelulares eucariticos cuyo tamao va de 10-50 m hasta
ms de 1 milmetro, y pueden fcilmente ser vistos a travs de
un microscopio.
Son hetertrofos, fagtrofos,
depredadores
o detritvoros, a veces mixtrofos(parcialmente auttrofos), que
viven en ambientes hmedos o directamente en medios
acuticos, ya sean aguas saladas o aguas dulces. La
reproduccin puede ser asexual por biparticin y tambin
sexual por isogametos o por conjugacin intercambiando
material gentico. En este grupo encajan taxones muy diversos
con una relacin de parentesco remota, que se encuadran en
muchos filos distintos del reino protista, definiendo un
grupo polifiltico, sin valor en la clasificacin de acuerdo con los
criterios actuales.
Hongos
Artculo principal: Fungi
El reino Fungi incluye muchas especies macroscpicas que en
absoluto encajan en la definicin de microorganismo, pero
tambin forma microscpicas, como las levaduras, que son
campo de estudio de la microbiologa. Adems, numerosos
hongos producenenfermedades infecciosas en animales y
plantas y tienen un gran inters sanitario y agropecuario.
Microorganismos patgenos
Artculo principal: Enfermedad infecciosa
Algunos microorganismos son capaces de penetrar y
multiplicarse en otros seres vivos, a los que perjudican,
originando
una infeccin;
son
los
denominados
microorganismos patgenos. Los problemas que causa una
infeccin dependen del tipo de patgeno, el modo en que se
transfiere, dosis o concentracin de patgenos, persistencia de
los microorganismos y la resistencia del organismo infectado.
La dosis de infeccin significa el nmero de microorganismos.
Esta dosis es muy baja para los virus y protozoos parsitos. La
persistencia de los microorganismos depende del tiempo viable
de los microorganismos cuando no se encuentran en el husped

humano. Por ejemplo, las bacterias son generalmente menos

persistentes mientras los quistes de los protozoos son los ms
persistentes.
Los jvenes, personas mayores y enfermos de otras patologas
son los menos resistentes a las enfermedades y por lo tanto son
ms frgiles. Cuando una persona es infectada, los patgenos
se multiplican en el husped, y esto supone un riesgo de
infeccin o enfermedad. No todas las personas infectadas por
patgenos enferman. Las personas que enferman pueden
contagiar y extender la enfermedad mediante las secreciones y
mediante contacto directo de alguna manera con la mucosa del
infectado.

ESTEQUIOMETRA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

La

conversin

microbiolgica

de

carbohidratos

para

obtener biomasa y productos de inters industrial es tema de

constante actualidad debido a la creciente dependencia de los
recursos renovables.
Los rendimientos alcanzados en biomasa y productos son
de relevancia significativa debido a que, generalmente, el valor
de los sustitutos empleados en la formulacin de medios de
cultivo tiene una importancia sustancial en el costo de
operacin de las plantas industriales. El grado en que un
microorganismo puede transformar los componentes del medio
de cultivo en nueva biomasa y productos juega un papel
fundamental, a punto tal que puede llegar a ser factor
determinante de la viabilidad de un proceso en gran escala.
Desde este punto de vista, resulta de sumo inters poder llegar

a determinar, estimar o predecir rendimientos que den cuenta

de las transformaciones que se estn llevando a cabo en un
biorreactor. Los balances de materia y energa resultan a tal fin
de suma utilidad y su empleo se ha extendido ampliamente en
ciencias bsicas y aplicadas.
La aparicin en el mercado de sensores que permiten
medir importantes variables de los cultivos microbianos y el uso
de ordenadores acoplados a los biorreactores (biorreactor =
recipiente en el cual se cultivan los microorganismos) han
ampliado el horizonte para la aplicacin de balances de materia
y energa. la produccin de biomasa (biomasa = concentracin
de microorganismos expresada en gramos de clulas secas /
litro de cultivo), consumo de las fuentes de C y energa, de
nitrgeno y Oxgeno y las produccin de CO 2 y desprendimiento
de calor son algunas de las variables que pueden ser estimadas
a partir de medidas experimentales y utilizadas en el planteo y
clculo de balances de materia y energa.
Antes de proceder a considerar el sistema de anlisis
propuesto, es conveniente introducir algunas definiciones y
hacer ciertas consideraciones sobre algunas regularidades
observadas

experimentalmente

en

el

cultivo

de

microorganismos.
En primer lugar se ha encontrado que la composicin
elemental de un importante nmero de microorganismos,
cultivados

bajo

prcticamente
microorganismo

diferentes
constante;
promedio

condiciones,
as

se

podemos

(composicin

mantiene
definir

standard)

un
como

aquel cuya composicin es (% p/p): C = 46,5; H = 6,94; 0 =

31,0 y N = 10,85, donde el aproximadamente 5 % restante est
representado por sales. Es importante recalcar que si bien la
composicin elemental promedio de la biomasa se mantiene
prcticamente constante, la concentracin intracelular de
protenas, RNA y dems constituyentes celulares puede variar
sensiblemente

entre

diferentes

especies

incluso

entre

diferentes estados del cultivo de un mismo microorganismo.

Teniendo en cuenta esta composicin media, podemos
escribir lo que sera la frmula mnima de nuestro m.o.
promedio como C H1,79O0,5N0,2 (en la que est representada el
95% p/p de la biomasa) y con fines netamente prcticos definir
1 C-mol de biomasa como la cantidad de biomasa que
contiene 1 tomo gramo de C. As pues tenemos que:

1 C - mol de biomasa =

12 1,79 16x0,5 14 x0,2

= 25,8 g
0,95

Para conocer la cantidad de biomasa que corresponde a n

C-moles

de

biomasa

debemos

conocer

su

composicin

elemental y en base a dicha composicin, el peso de 1 cmol. En

trminos generales la masa resulta ser:

n . Pcmol g

de biomasa.

De forma anloga a como lo hicimos con la biomasa,

podemos definir 1 C-mol de sustrato (entindase por sustrato
fuente de carbono y energa, FCE), 1 C-mol de fuente de N, etc.
Como ejemplo, para la glucosa: C6H12O6, 1 C-mol de glucosa

estar representado por CH2O y pesar 30 g, y para el etanol, 1

C-mol de etanol (CH3O0,5) pesar 23 g.
Otro concepto que debemos introducir es el de grado de
reduccin o grado de reductancia, el cual ser de gran
utilidad en el momento de plantear nuestros balances de
materia y energa.
Tomemos como ejemplo las siguientes reacciones de
oxidacin:
C + O2. CO2

=4

CH4 + 2O2 CO2 + 2H2O

=8

CO + 0,5 O2 CO2

=2

CH2O + O2 CO2 + H2O

=4

CH3O0,5 + 1,5 O2 CO2 + 1,5 H2O

=6

Podemos observar que los distintos valores de que

figuran a la derecha de cada ecuacin coinciden con el nmero
de electrones disponibles que fueron transferidos desde el
compuesto a oxidar al oxgeno. En general se expresa en
trminos de n de e- disponibles / c-mol.
Para calcular el valor de de un determinado compuesto
se toman los grados de reduccin 4 para el C; 1 para el H; -2
para el O y -3 para el N. En el caso del CO 2, H2O y NH3 no se
tienen e- disponibles (estados de referencia), luego CO2 = H2O =
NH3 = 0. Se considera adems que el estado de oxidacin
predominante del N en la biomasa es -3. En trminos generales

para un compuesto de frmula CH aObNc, su grado de reduccin

vendr dado por:
= 4 + a - 2b - 3c

(1)

Si tenemos un compuesto cuya frmula es C h Hi Oj Nk, debemos

llevarlo a la forma
CH i O j N k
h

Si tomamos como ejemplo a nuestro m.o. promedio su x

(donde el subndice x indica biomasa) ser:

= 4,19

e - disp.
C - mol

Este valor, junto a Pcmol = 25,8 son dos de las

regularidades

las

que

nos

habamos

referido

con

anterioridad. Estos valores pueden ser empleados en balances

de materia y energa en aquellos casos en que se desconoce la
composicin de la biomasa sin temor de incurrir en errores
groseros de clculo. Otras regularidades observadas en el
cultivo de m.o. es que el calor de reaccin por mol de e transferidos al O2 es relativamente constante para la oxidacin
de una amplia variedad de molculas orgnicas y corresponde a
27 Kcal/mol e- disponibles transferidos al O2.

Estamos ahora en condiciones de plantear una serie de

balances de materia y energa, para lo cual trataremos al
cultivo de un m.o. como si fuera una reaccin qumica simple.
r = velocidad de

1Cmol S +a mol FN +b O2
reaccion

yX X

yP prod +y CO2 CO2 +w H 2O +q (calor )

Donde X significa biomasa, cualquiera sea su naturaleza.

Debemos

hacer

notar

que

los

coeficientes

estequiomtricos estn referidos a 1 C-mol de fuente de C y

energa. As pues:

yx

C - mol de X
C - mol de fte. de C y E

lo mismo para yp e yCO2.

El balance de carbono para esta reaccin de formacin de

biomasa y producto ser:
y x + y p + y CO2 1

(2)

De igual forma podemos establecer un balance del grado de

reduccin:

s + (-4)b = yx . x + yp . p

(3)

Reordenando y dividiendo por s obtenemos

4b y x . x y p . p

1
s
s
s

(4)

o lo que es lo mismo
++=1

donde

(5)

4b
s

(fraccin de e- disponibles de la FCE

transferidos al O2)

y x .
s

(fraccin de e- disp. de la FCE transferidos a la

biomasa)
y p . p

(fraccin de e- disp. de la FCE transferidos al

producto)
Estos dos balances obedecen directamente al principio de
conservacin de la masa y la energa, en el primero de ellos, no
puede haber entre los productos ms carbono del que un c-mol
de sustrato puede aportar y el en el caso del segundo, los
electrones disponibles del sustrato deben ir obligadamente a
los distintos productos.
Si asumimos, como ya se mencion, que el calor de
reaccin por mol de e- disponibles transferidos al oxgeno es
constante para un importante nmero de molculas orgnicas,

el primer trmino de la ecuacin (4) nos da la fraccin de

energa del sustrato que evoluciona como calor. Si llamamos q o
a esa constante con qo = 27 Kcal/mol e- disponibles transferidos
al O2, el calor generado en la ecuacin l vendr dado por:
q = 4 qo b kcal/C-mol de sustrato

(6)

Si conocemos la velocidad de consumo de O 2 de nuestro

cultivo podemos calcular la velocidad de produccin de calor y
por lo tanto los requerimientos de H 2O de enfriamiento para
mantener constante la temperatura de nuestro biorreactor.
El concepto de e- disponibles nos brinda un mtodo simple
de

clculo

para

chequear

los

resultados

obtenidos

experimentalmente en lo que se da en llamar anlisis de

consistencia interna. Empleando las ecuaciones (2) y (4) o (5)
con datos obtenidos en el laboratorio, podemos estimar
parmetros no medidos y tener idea de cun confiables fueron
nuestras determinaciones. Medidas realizadas en el laboratorio
deben encontrarse dentro de los intervalos:
0,94 yx + yp + yCO2 1,06
0,93 + + 1,07
Valores
aceptabilidad

inferiores

superiores

determinados

estos

estadsticamente

lmites

de

ponen

en

evidencia errores en las determinaciones experimentales.

En el trabajo habitual de laboratorio la cuantificacin de la

biomasa producida se efecta gravimtricamente, es decir, se
determina el incremento en biomasa expresado en g/l (x)
correspondiente a la utilizacin de una determinada cantidad de
sustrato (s) (igualmente expresada en g/l) con lo cual
Yx

definimos nuestro rendimiento en base a sustrato como

x
s

al que tomamos como rendimiento global en el que slo se

tienen en cuenta los valores finales e iniciales de biomasa y
sustrato, ms rigurosamente Yx debiera ser expresado por el
Yx

lmite x / s con s 0, esto es:

dx
ds

(observar que el

signo negativo es introducido porque x y s varan en sentido

contrario).
Estamos ahora en condiciones de calcular los valores de
yx, yp, y yCO2 conociendo los respectivos rendimientos globales y
los valores de P cmol de X, S, P y CO2 tal cual vemos a

yx Yx

continuacin:

P cmol S
;
P cmol X

yp YP

P cmol S
;
P cmol P

yCO2 YCO2

P cmol S
PM CO2

(7)
Resulta de gran inters conocer los destinos que toma la fuente
de C y energa durante el crecimiento microbiano y la fraccin

de la misma empleada por el m.o. para obtener la energa

necesaria para llevar adelante sus funciones metablicas.
Por balance de sustrato:
s = sx + sp + sE

(8)

S = Sustrato total consumido

donde

Sx = Fraccin de sustrato utilizado en la formacin

de biomasa
Sp = Fraccin de sustrato utilizado en la formacin
de producto
SE = Fraccin de sustrato utilizado para obtener
energa

por consiguiente:
SE = S - Sx - Sp

..

SE = S + X

P cmol S
P cmol S
P.
P cmol X
P cmol P

fE = 1 - yx - yp =
obtencin de E.

y CO 2

fE : fracc. de FCE destinada a la

(11)

Experimentalmente lo que se hace es determinar la

produccin global de CO2 y conociendo la masa de CO2 y
sustrato consumido y calcular SE por estequiometra. Este
mtodo presenta dos inconvenientes: en primer lugar existen
reacciones enzimticas que incorporan O 2 a determinados
componentes celulares (O2 que no es empleado para obtener
energa) no obstante este consumo puede ser despreciado
frente al global para oxidar la fte. de C y E; y el ms importante
es que debemos suponer que x s, caso contrario se introduce
un grosero error en el clculo.

CINTICA
DEL CRECIMIENTO

CINTICA DEL CRECIMIENTO

Hasta aqu hemos visto las relaciones estequiomtricas
que existen en los cultivos microbianos, y cmo a travs de
ellas es posible obtener informacin del destino que tiene la
fuente de carbono y energa. Las ecuaciones (2) y (4), resumen
toda la informacin que es posible obtener mediante los
balances de materia y energa, pero nada dicen acerca de la
velocidad, r, con que transcurre el proceso; por lo que ahora
centraremos la atencin en este aspecto.
Convendr antes definir la forma en que expresaremos las
distintas velocidades. De este modo llamaremos a:

rx =

dx
;
dt

velocidad de crecimiento microbiano (o, brevemente,

velocidad de crecimiento) y las unidades sern:

Cmol biomasa
L.h

del mismo modo:

rs =

rp =

ds
dt

Cmol FCE

L.h

dp
dt

Cmol de producto

L.h

= velocidad de consumo de sustrato

= velocidad de formacin de producto.

O2

d O 2

CO 2

dt

mol O 2

L.h

d CO2
dt

= velocidad de consumo de O2

mol CO 2

L.h

= velocidad de produccin de CO2

Estas velocidades tambin pueden ser expresadas en

g
L.h

; y en

este caso, para diferenciarlo del anterior, las denotaremos con

R. Por ej.:

Rx =

dx gramos de biomasa
;
dt
L.h

O2

Anlogamente tendremos: Rs, R , etc.

La conversin entre rx y Rx estar dada por:
Rx = 25,8 . rx
Anlogamente:

Rs =

O2

g de S
. rs
c mol de S

32. . rO 2

, etc.

Velocidades especficas:
Corresponden alas anteriormente definidas pero referidas
a la unidad de biomasa, es decir:
rx
x

rs
x

= ; velocidad especfica de crecimiento.

= qs ; velocidad especfica de consumo de sustrato (s puede

ser la fuente de carbono y energa o cualquier otro
componente del medio)

rO2
x

rp
x

q O2

; velocidad especfica de consumo de O2.

qp

; velocidad especfica de formacin de producto.

etc.
Las velocidades especficas suelen brindar informacin

acerca de cul es la actividad metablica del microorganismo (o

de la biomasa) durante el cultivo, ya que el estar referidos a la
unidad de biomasa cualquier modificacin en el valor de , qs,
etc. estar indicando que "algo" est ocurriendo en el
metabolismo del microorganismo en cuestin.

De hecho es frecuente que las velocidades especficas

varen durante el cultivo, y es muy comn que por ej. el valor
de al principio del cultivo difiera del que se encuentra en
estadios posteriores. Lo mismo vale para q s,

q O2

, etc.

SISTEMAS DE CULTIVO
BATCH
CONTINUO
Y BATCH ALIMENTADO

CULTIVO EN BATCH
La evolucin del cultivo en el tiempo, sigue una curva
tpica la cual recibe el nombre de curva de crecimiento en
batch. Los sucesos que tienen lugar durante la misma pueden
separarse en cuatro fases perfectamente diferenciables. En
primer lugar existe una fase donde prcticamente no hay
divisin celular pero s aumento de la masa individual de los
microorganismos (fase lag o fase de retardo). Le sigue una
etapa donde el crecimiento ocurre a velocidad especfica ()
mxima y constante = m (fase exponencial). Al final de esta
fase

se

alcanza

la

mxima

concentracin

microbiana.

Posteriormente hay un rpido perodo de desaceleracin donde

0 y se entra en la fase estacionaria la cual es causada por
agotamiento de algn nutriente (el sustrato limitante) o bien
por

acumulacin

de

inhibidores.

Durante

esta

fase

la

concentracin microbiana (o de biomasa) permanece constante.

Finalmente se llega a una ltima etapa donde la concentracin
de biomasa disminuye por autolisis o como consecuencia del
metabolismo endgeno (fase de decaimiento).
La duracin de cada una

de estas fases es funcin del

microorganismo en estudio y de la composicin del medio de

cultivo. En particular la fase lag depende adems de la fase de
crecimiento en que se encuentran las clulas en el momento de
ser sembradas y de la composicin del medio de cultivo en que
fueron crecidas. Si ste es igual a la composicin del medio en
que se van a sembrar y las clulas estn en fase exponencial, la

duracin de la fase lag, en general se acorta y puede llegar a

desaparecer, lo cual es deseable ya que constituye tiempo
perdido.
La descripcin matemtica (modelado) de las cuatro fases
descriptas es sumamente compleja y escapa a los fines de esta
gua, por lo que slo veremos una ms simple que slo
contempla la fase exponencial y la estacionaria.
De la definicin de obtenemos
rx = . x

(12)

donde x = concentracin de biomasa. Hemos visto que vara

durante el cultivo, siendo un valor constante y mximo en la
fase exponencial (m) y nulo en la estacionaria. Monod ha
propuesto una relacin muy simple entre el valor de y la
concentracin de sustrato limitante, S, entendindose por ste
al componente del medio de cultivo que est en menor
proporcin respecto de las necesidades del microorganismo. Por
tanto S puede ser la fuente de N, de C, algn aminocido, etc.
La ecuacin es:

= m

S
KS S

(13)

A KS se la conoce como Constante de Saturacin, y da una

idea de la afinidad que tiene el microorganismo por el sustrato

en cuestin. A menor KS mayor afinidad. Normalmente K S tiene

valores

muy

pequeos

(10-2

10-3

g/l)

por

lo

que

concentraciones relativamente pequeas de S son suficientes

para hacer que:
= m

(14)

Reemplazando la ec. (13) en (12) queda:

rx = m

S
KS S

.x

(15)

Al principio del cultivo todos los nutrientes estarn en exceso, y

en particular el sustrato limitante tambin, por lo que la ex. (15)
se reduce a (fase exponencial)

rx = m x ; o bien:

dx
dt

= m . x

(16)

La ec. (16) es fcilmente integrable y si hacemos a t = 0; x = x o

(concentracin inicial de microorganismos) queda:
ln x = ln xo + m t
o bien

(17)

x = xo em t

(18)

Por tanto en esta fase la concentracin de biomasa

aumenta exponencialmente, y tambin lo hace rx ya que
reemplazando: rx = m xo e

A partir de la ec. (17) se puede calcular el tiempo de

generacin del microorganismo (perodo de tiempo en que la

biomasa se duplica) haciendo x = 2 xo y nos queda tg =

ln 2
m

A medida que transcurre el tiempo de cultivo, S va

disminuyendo (y por tanto rx) hasta que finalmente S = 0 (fase
estacionaria), y
rx = 0

(19)

lo que implica:
x = cte = xf

(20)

xf = concentracin final de biomasa.

Si graficamos ln x vs. t se obtiene un grfico como el de la fig.

Ln X

Ln Xf

max

Ln X0

tiempo

De la fase exponencial se calcula m mediante la ecuacin

(17). La duracin de la fase lag, t L, se puede calcular del grfico,
o bien haciendo una correccin en la ec. (17).
ln x = ln xo + m (t - tL)
Si tomamos un valor cualquiera de x que corresponda a la
fase exponencial, xe, podemos calcular tL.

tL = t e -

l
x
ln e
m
xo

Consumo de Sustrato

Hemos visto que el rendimiento se defina como y x = dx

dx / dt rx

ds
ds / dt rs q s

por tanto

rs =

rx
yx

(22)

reemplazando en la ec. (22) la ec. (15) queda:

rs =

m
S
.
. x
yx
kS S

(23)

A medida que S tiende a cero, rs tambin.

En fase exponencial ser S ks y adems x estar dado por la
ec. (18), por tanto:

ds x e
m o
dt
yx

mt

(24)

Si a t = 0 es S = So implica:

S = So -

xo m t
e 1
yx

(25)

La ec. (25) da la variacin de S en funcin de t durante la

fase exponencial.
Si se conoce de antemano el rendimiento y x (o Yx) y las
concentraciones iniciales de sustrato y biomasa, es fcil estimar
el valor de xf ya que:
x = -Yx . S

(26)

x - xo = Yx (S - So)

(27)

Si S es el sustrato limitante, se tendr que para x = x f ser

Sf = 0, por tanto:
xf = xo + Yx. So

(28)

La ec. (27) permite calcular S para un x dado (o viceversa)

en cualquier parte de la curva de crecimiento, siempre y
cuando Yx (o yx) se mantenga constante. Alternativamente la
ec. (27) puede emplearse para verificar si tal supuesto se
cumple ya que la grfica de (x - x o) en funcin de (So - S) deber
ajustarse a una recta. De todos modos siempre es posible
calcular un rendimiento global, independientemente de las
variaciones que pueda tener durante el cultivo, empleando slo
valores iniciales y finales:

Yx = -

xf xo
Sf So

(29)

Consumo de O2
Hemos

visto

que

realizando

un

balance

entre

la

composicin de los gases que ingresan y salen del biorreactor

O2

se puede calcular r . Con este valor y el de la concentracin de

biomasa, x, se puede calcular a distintos tiempos el valor de
q O2

rO 2
x

, con lo cual tendremos una idea de lo que ocurre con la

capacidad respiratoria de los microorganismos durante el

cultivo. Al respecto es til estudiar cules son las posibles
causas de variacin de

q O2

x
t

1) Sea yx/o =

rO 2 dt

(30) yx/o = rendimiento de biomasa

base a O2 consumido
Al igual que en la ec. (21) podemos hacer:

yx/o =

rx

rO 2 q O 2

(31)

de donde reemplazando por la ec. (13)

q O2

m S
yx / o k s S

(32)

En fase exponencial es S ks y

q O2

m
q O2 m
yx / o

(33)

es decir que en esta fase

q O2

se mantiene constante y con un

valor mximo. A medida que S disminuye,

q O2

tambin hasta

que virtualmente se hace nulo en la fase estacionaria. Esto es

particularmente vlido cuando el sustrato limitante es la fuente
de

carbono

energa,

ya

que

al

agotarse

sta,

los

microorganismos se quedan sin combustible y por tanto el

consumo de O2 cesa. No ocurre lo mismo cuando el sustrato
limitante es por ej. la fuente de nitrgeno, pues si bien cuando
sta se agote se detendr el crecimiento, nada impide que los
microorganismos

sigan

respirando

ya

que

cuentan

con

combustible en exceso.
2) Otra causa que afecta el valor de

q O2

es la concentracin de

O2 disuelto. Por analoga con la ecuacin de Monod, se ha

propuesto la ecuacin:

q O2 q O2 m

C
ko C

(34)

donde C = concentracin de Os disuelto.

Al igual que ks, se encuentra que ko es pequeo, y en
general valores de C del orden de 0,8 mg/l (10% de saturacin)
son normalmente suficientes para que

q O2

q O2

m. A la

concentracin de O2 disuelto por encima de la cual el valor de

q O2

se mantiene constante, se la conoce como concentracin

crtica (Cc).

PARTE EXPERIMENTAL
Microorganismo: Saccharomyces cerevisiae.
Medio de cultivo:
Glucosa ..............................................................................10,00
g/l
Urea ................................................................................... 1,50
g/l
K2HPO4

.............................................................................

1,00

g/l
MgSO4.7H2O

.....................................................................

0,60

g/l
CaCl2.2H2O ........................................................................ 0,10
g/l
cido ctrico ........................................................................ 0,45
g/l
H3BO3 ................................................................................. 0,10
mg/l
CuSO4 ................................................................................. 0,10
mg/l
KI ........................................................................................ 0,10
mg/l
FeCl3 ................................................................................... 0,10
mg/l

Na2MoO4 ............................................................................. 0,10

mg/l
inositol ................................................................................. 6,00
g/l
biotina .................................................................................. 6,00
g/l
acido flico .......................................................................... 6,00
g/l
pantotenato

de

calcio

............................................................

0,80 mg/l
tiamina

..................................................................................

0,80 mg/l
cido

nicotnico

.....................................................................

0,80 mg/l
cido

p-amino

benzoico

.........................................................

0,40 mg/l
riboflavina

.............................................................................

0,40 mg/l
piridoxina

..............................................................................

1,60 mg/l
antiespumante ....................................................................... 3
gotas
pH 5,50 (ajustado con HCl o H2SO4 1N)
Volumen de cultivo: 4,0 l

Los fosfatos se esterilizan por calor hmedo (autoclave),

fraccionados en un erlenmeyer con salida lateral, disolviendo la
cantidad necesaria para preparar 3,7 l de medio de cultivo, en
500 ml de H2O y se ajusta el pH en 5,50. El resto de los
componentes (excepto la urea y la solucin de vitaminas) se
disuelven en 3,2 l. de H2O, los microelementos se agregan en
solucin concentrada 1000 veces a razn de 1 ml/l, se ajusta el
pH en 5,50 y se esterilizan, en autoclave, en el biorreactor.
El tiempo de esterilizacin ser en ambos casos de 15
minutos. La urea se esteriliza por filtracin. Se prepara una
solucin madre con 500 g/l de urea y se esteriliza con
membrana absoluta. Esta solucin se adiciona en proporcin de
6,0- ml por litro de medio de cultivo.
Las vitaminas se preparan en solucin concentrada 1000
veces, se esterilizan por filtracin y se adicionan a razon de 1
ml/l de medio.
Inculo: Tres erlenmeyers de 1000 ml conteniendo 100 ml de
medio de cultivo diluido 2,5 veces se esterilizan por calor
durante 10 min. En este caso para mayor simplicidad se
esterilizar el medio de cultivo completo (excepto la urea y las
vitaminas que se adicionarn en proporcin de 0,5 ml y de 0,1
ml

de

las

soluciones

madres).

Los

erlenmeyers

sern

sembrados el da anterior a la realizacin de trabajo prctico

con clulas de levaduras provenientes de un cultivo en agar
inclinado. Las mismas se resuspenden fcilmente en agua. La
temperatura de incubacin ser en todos los casos de 30C.

Procedimiento:
1.- Termostatizar el biorreactor a 30C
2.- Conectar el sistema de aireacin al filtro estril del
biorreactor.
3.- Conectar el sistema de agitacin del biorreactor. Fijar la
agitacin en 600 rpm.
4.- Adicionar en forma estril los fosfatos, la urea y las
vitaminas al resto del medio de cultivo contenido en el
biorreactor.
5.- Calibrar el electrodo para medir O 2 disuelto haciendo pasar
por el biorreactor, primero una corriente de nitrgeno y
ajustando la lectura a 0% de saturacin (ajuste del cero) y
luego aire a un caudal de 2 l/min., ajustando con la perilla de
calibracin a 100% de saturacin. En ambos casos, antes de
realizar los ajustes, se debe dejar transcurrir 10 a 15 minutos.
Los gases que ingresen al biorreactor debern pasar por el
filtro estril.
6.- Calibrar los instrumentos de medida para efectuar el anlisis
de los gases a la salida del biorreactor (analizador de O 2 y de
CO2).
7.- Trasvasar, en forma estril, los tres erlenmeyers de inculo a
otro con salida lateral.
8.- Sembrar el biorreactor y aguardar 2 a 3 minutos

9.- Tomar 15 mL de muestra (descartar antes 2 o 3 mL) y tomar

el tiempo CERO. Anotar en cada caso el volumen de muestra
y el de descarte.
10.-Medir el porcentaje de O2 y CO2 en lo gases de salida del
biorreactor

Anlisis de las muestras

11.- 10 mL se centrifugan 10 minutos. Guardar el sobrenadante
para determinar concentracin de FCE y producto. Lavar
(una vez) con agua destilada el pellet de levaduras,
centrifugar, resuspender las clulas con ms agua destilada
y hacer peso seco a 105C.
12.- Al resto de la muestra medirle:
12.1.- pH
12.2.- DO a 620. La muestra deber diluirse de forma tal de
obtener lecturas entre 0,1 y 0,6.
12.3.-

Control

de

contaminacin

por

observacin

microscpica.
13.- Repetir los pasos 9 a 12 cada hora.
14.- Finalizado el cultivo, medir el volumen remanente. Con este
dato y los de volumen de muestra y lavado calcular el
volumen de cultivo a la hora CERO, 1; 2, 3; etc. El volumen

obtenido en cada caso ser el utilizado para el clculo de

y

rCO2

rO2

a los correspondientes tiempos.

Resultados
Los datos se volcarn en una tabla del siguiente formato y
luego se harn las graficas correspondientes en funcin del
tiempo

Hora T

pH

DO62 X
0

Vext Vre
r

rO2

rCO2

C.R.

I.- Graficar ln x vs. t. y DO vs. t. Calcular max .

II.-1 Verificar si YX se mantuvo constante durante el cultivo.
II-2 Calcular YX e yX globales.
II-3 Calcular el consumo global de O 2 y el CO2 total producido.
Con estos valores calcular b e yCO2 respectivamente.
III- Verificar si se cumplen los balances de carbono y de grado
de reduccin.
++=1
yx + yCO2 = 1

CULTIVO CONTINUO
De

los

tres

mtodos

usuales

para

el

cultivo

de

microorganismos, batch, batch alimentado y continuo, es

este ltimo el que ofrece mayores posibilidades de control. Por
sus caractersticas especiales permite controlar el proceso a un
valor de velocidad especfica de crecimiento () prefijado de
manera muy simple. Este punto es de suma importancia ya que
el comportamiento de la mayora de los microorganismos se ve
afectado por el valor de al que estn creciendo.
Mediante el cultivo continuo es posible estudiar el efecto
de

variables

como

PH,

temperatura,

concentracin

de

nutrientes, etc., a valores constantes el valor de , o bien,

fijadas las anteriores, analizar el efecto de

sobre la

estequiometra del crecimiento. De este modo es posible

F , S , separar
X,P

los distintos efectos y obtener informacin valiosa para

la mejora del proceso.

X
P

S
Para
poner en marcha un cultivo continuo, se realiza
F, SR

previamente un cultivo batch y en un momento dado,

normalmente antes que se agote el substrato limitante, se
comienza a alimentar con medio de cultivo fresco a un caudal F
(Fig. 1).

Fig. 1

El volumen del cultivo se mantiene constante. El lquido

que sale del biorreactor, a un caudal F tendr clulas, y la
concentracin de nutrientes ser menor que en el caudal de
entrada debido a que en parte fueron consumidos por los
microorganismos. Eventualmente se encontrar tambin algn
producto(s) proveniente de la actividad metablica de los
microorganismos.
Una de las variables de operacin fundamental en este
tipo de cultivos es la velocidad de dilucin, D, la cul se define
como la relacin entre el caudal de alimentacin, F, y el
volumen de cultivo, V.

F
V

(1)

Teniendo en cuenta las unidades usuales de F (L. h -1) y de V (L),

las de D sern de h-1. El valor de D corresponde a las veces que
se renueva el volumen del biorreactor por unidad de tiempo, as
un valor de D= 0.25 h-1 indica que en una hora se renov un 25
% del volumen de cultivo, o bien que al cabo de 16 h se habr

renovado cuatro veces el volumen de cultivo. Podra pensarse

que luego de la renovacin reiterada del volumen de cultivo ya
no quedan microorganismos dentro del biorreactor, pero no es
as; debe tenerse en cuenta que estos se estn multiplicando
activamente lo cual compensa las perdidas debidas a los
microorganismos que son arrastrados fuera del biorreactor por
el caudal de salida. Bajo ciertas condiciones ambos procesos se
compensan

de

modo

tal

que

la

concentracin

de

microorganismos se mantiene constante en el tiempo, es decir

que se habr alcanzado un estado estacionario. En estas
condiciones tambin se mantendrn constantes en el tiempo
las concentraciones de nutrientes, en particular la del substrato
limitante del crecimiento, y la de producto(s).
Balances de materia:
De acuerdo al esquema de la Fig. 1 podemos plantear los
siguientes balances de materia para la concentracin de
microorganismos ( X ) , de substrato ( S ) y de producto (P).

V.

V.

dX
V .r F . X
x
dt

(2)

dS
F . S F . S~ V . r
R
s
dt

(3)

V.

dP
V .r F .P
P
dt

(4)

Cuando se alcanza el estado estacionario, X, S y P ya no

varan con el tiempo, lo que equivale a igualar a cero las Ecs.
(2), (3) y (4), de donde resulta:
r

~
D. X

(5)

r D . (S S~)
S
R

r D . P~
P

donde

~, P
~, S
~
X

(6)

(7)

representan las respectivas concentraciones en

estado estacionario. La Ec. (6) es vlida para cualquier

nutriente del medio de cultivo, sea el substrato limitante o no,
ya que la misma surge de un balance de materia en el que no
se ha hecho ninguna consideracin con relacin a la naturaleza
del substrato considerado.
Lo primero que debe destacarse en este tipo de cultivo es
que permite determinar experimentalmente y de modo muy
simple las velocidades de crecimiento, consumo de substrato y
de formacin de producto, tal como se desprende de las Eqs.
(5),

(6)

(7).

Del

mismo

modo

permite

calcular

los

rendimientos. Por ej. Si suponemos que S representa a la fuente

de carbono y energa, el rendimiento celular se calcula
fcilmente:

x/s

~
X
(S S~)
R

(8)

De modo similar puede calcularse YP/S , o bien las velocidades

especficas. Por ej. Para qs ser:

qS

~)
r S D.(S R S

x
x~

(9)

mientras que para la velocidad especfica de crecimiento ser:

~
rX
D. X
~ D
X
X

( 10 )

La Ec. (10) es de suma importancia pues significa que en

estado estacionario es = D, y como D puede ser variado a
voluntad por el operador (variable de operacin) resulta que el
cultivo continuo permite imponerle externamente a los
microorganismos el valor de al que deben crecer.
El estado estacionario

En el estado estacionario = D. Cuanto tiempo demora el

sistema en alcanzar este estado?. En rigor, la respuesta surge
de la misma definicin de estado estacionario, es decir cuando
todas las variables del cultivo (X, S, P, concentracin de O 2
disuelto y composicin de la biomasa) no varan en el tiempo. El
criterio prctico que se suele seguir es que, una vez fijado el
valor de D, debe esperarse al menos 4.t R, donde tR se conoce
como tiempo de retencin medio y puede demostrarse que :
tR = 1 / D
Por tanto si se fija un valor de D= 0.15 h-1, habr que esperar
26,7 hs. para suponer que se ha alcanzado el estado
estacionario, lo que deber ser corroborado experimentalmente
midiendo las concentraciones de X, S, P hasta observar que no
varan con el tiempo. Usualmente con 4.tR es suficiente.

PARTE EXPERIMENTAL
Microorganismo y condiciones de cultivo
Los gneros Rhizobium, Shinorhizobium y Bradyrhizobium en
relacin simbitica con plantas leguminosas infectan las races
de las mismas y estimulan la produccin de ndulos, dentro de
los cuales las bacterias fijan Nitrgeno (bacterias diaztrofas) y
la

planta

responde

entregando

la

bacteria

nutrientes

orgnicos que produce durante la fotosntesis. La cepa 2011 de

Sinorhizobium meliloti, que es capz de colonizar y nodular
plantas de alfalfa es la que utilizaremos para realizar el
experimento de cultivo continuo bajo dos condiciones de
limitacin: - limitado en Carbono, donde esperamos obtener los
mayores rendimientos en biomasa y limitado en Nitrgeno,
donde esperamos obtener rendimientos menores ya que
estamos frente a un exceso de fuente de Carbono y hay
formacin de producto extracelular, el exopolisacrido.
Las condiciones bajo las cuales se realizarn los cultivos
sern:
T=30C
pH (controlado automticamente)=6.8
D (velocidad de dilucin)= 0.10 h-1
La velocidad de agitacin se mantendr a un valor tal que
asegure alrededor de 25% de oxgeno disuelto en el cultivo

(esta condicin es slo para asegurarnos que el cultivo no se

limite en Oxgeno). La concentracin de O 2 disuelto se medir
continuamente empleando un electrodo polarogrfico Ingold
(Wilmington, MA, USA).
Los pasos a seguir son:
Preparar

los

reactores.

Chequear

todo

el

sistema

de

mangueras para agregado de medio de cultivo, de lcali, de

antiespumante, entrada y salida de gases, toma de muestra,
inoculacin, etc..
Preparar el medio de cultivo y esterilizarlo dentro del
biorreactor (30 minutos, 121 oC) junto con los electrodos de pH
y oxgeno disuelto. Conjuntamente esterilizar los reservorios
con medio fresco que se emplearn para alimentar el reactor.
Realizar todas las conexiones necesarias (elctricas y de
tubera), llevar los reactores a temperatura y calibrar el
electrodo de oxgeno disuelto.
Inocular el reactor con aproximadamente 50 ml de un cultivo
de Sinorhizobium meliloti crecido durante 12-18 h en frascos
agitados en agitador rotatorio.

Calibrar el caudal de las bombas peristlticas a un valor tal

que satisfaga el valor de D preestablecido. Nota: los cultivos
deben conducirse al mismo valor de D para su posterior
comparacin.
Los cultivos sern chequeados peridicamente (una o dos
veces por da). Se determinar: el contenido de O 2 y CO2 en los
gases de salida del reactor, que el valor de pH y de O 2 disuelto
sean los requeridos, los caudales de aire y medio fresco que
estn ingresando al reactor y el consumo de lcali. Se tomarn
muestras (alrededor de 30 ml) a las que se les determinar:
densidad ptica (650 nm), peso seco por duplicado y se
conservarn congeladas muestras de los sobrenadantes de los
cultivos para luego determinar en los mismos la concentracin
residual de fuente de carbono y de nitrgeno. Tambin se
debern tomar muestras de los reservorios para determinar la
concentracin real de glucosa utilizada en la alimentacin de
los reactores.
Estas

determinaciones

se

realizarn

hasta

obtener

condiciones de estado estacionario en los parmetros medidos

y calculados.
Durante las dos semanas de curso se llevarn a cabo cultivos
bajo 2 condiciones de limitacin diferentes:
1er. semana: Cultivo limitado en C (glucosa)
2da. semana: Cultivo limitado en N (amonio)
Medios de cultivo

El medio mnimo definido que se utilizar para realizar el C. C.

ser el medio de Evans, que limitado en C tiene la siguiente
composicin:

glucosa
KCl
NaH2PO4.2H2
(NH4)Cl
O
Na2SO4
cido ctrico
MgCl2.2H2O
Oligoelemen
H2O csp
tos

5.0 g
0.3725
0.78 g
g
2.675
0.142
g
0.21 g
g
0.127
5 ml
g
1000

ml
El medio que se emplear para la condicin de limitacin por
Nitrgeno tiene los mimos nutrientes pero la concentracin de
glucosa se triplic (15 g.l-1) y la de (NH4)Cl se baj a 0.8 g.l-1 .

CULTIVO

DISCONTINUO

ALIMENTADO

(BATCH

ALIMENTADO)
Otro modo de operar un biorreactor es empleando la
tcnica de batch alimentado (BA) o fed batch. Esta tcnica se
define

como

continuamente

un

cultivo

medio

en

batch

nutritivo

fresco

donde
o

se

alguno

alimenta
de

sus

componentes. Si el nutriente que se alimenta es el limitante del

crecimiento, esta tcnica permite controlar la velocidad de
crecimiento () del microorganismo.
El BA es particularmente til en procesos en los que el
crecimiento celular y/o la formacin de producto son sensibles a
la concentracin del sustrato limitante, es decir cuando el
rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del
metabolito buscado se ven afectados. As, este mtodo se
emplea cuando se quieren evitar fenmenos de inhibicin por
sustrato y se requiere alcanzar una alta concentracin de
biomasa.
ESQUEMA

F(t)
SR(t)

Vf, Xf
VR = Vf - V0
V0, X0, S0

RESERVORIO

BOMBA
BIORREACTOR

Donde F(t): caudal de alimentacin

Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin
Vf: volumen final de trabajo
Vo: volumen al inicio de la alimentacin
Xo:

concentracin

de

biomasa

al

inicio

de

la

alimentacin
So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la
alimentacin
El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo
que Vo, Xo y So son las condiciones finales de dicho batch.
Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya
sea mediante el empleo de caudales variables (F = F(t)), o bien
mediante la variacin de la concentracin de sustrato limitante
(Sr=Sr(t)). En el caso del Trabajo Prctico se utilizar el sistema
ms simple, es decir F=cte y Sr=cte.

PRODUCCION DE BIOMASA: ECUACIONES Y DISEO

El

cultivo

puede

describirse

matemticamente.

La

resolucin de las ecuaciones as obtenidas permitir calcular la

evolucin de la biomasa durante el cultivo, la velocidad
especfica de crecimiento, y la productividad. Asimismo se
podrn determinar parmetros de diseo, tales como F y S r.
Para estudiar la evolucin de X durante el cultivo se deben
plantear las ecuaciones de balance de materia.
Sustrato
acumulacin = suministro - consumo

(1)

d(S.V)
xV
F SR
dt
Yx/s

En este caso el volumen no es constante, como ocurre en

cultivos en batch o en continuo. Por lo tanto la expresin (1)
quedar:

(2)

dS
dV
xV
S
F.S R
dt
dt
Yx/s

La condicin final del batch es S = 0, pues, como se

intenta controlar , S no puede ser saturante (recordar a
Monod).

Si S~ 0, dS/dt = 0, con lo que (2) se transforma en

(3)

xV
0
Yx/s

F . SR -

de aqu, y recordando que rx = . X

(4)

F . SR =

rx V
Yx/s

esta ecuacin indica que la velocidad de produccin de biomasa

se acomoda a la velocidad de suministro de sustrato, es decir
que rx puede controlarse externamente, modificando F y/o S r.
La ecuacin (3) es en realidad un lmite superior ya que
dados , X y V, cualquier par de valores F, S r que satisfagan la
condicin

(4)

F . SR

xV
Yx/s

harn que la velocidad de crecimiento est limitada por la

velocidad de alimentacin. Esta ecuacin (3) ser muy til en el
momento de disear la alimentacin.
Biomasa
La velocidad de acumulacin de biomasa ser:

(5)

d(xV)
d (xV)
x V o bien
rx V
dt
dt

o, reordenando,

(6)

rx =

1 d(xV)
V dt

Si se reemplaza en (4) se obtiene

(7)

F . SR =

1 d (x V)
Yx/s d t

que indica que la velocidad de acumulacin de biomasa

depende de la velocidad de alimentacin de sustrato.
Integrando (7), se llega a
(8) X V = xo Vo + Yx/s F SR t
Uno de los objetivos planteados es conocer cmo vara la
concentracin de biomasa con el tiempo. En cultivo en batch, al
ser V = cte, X.V es proporcional a X. En BA V no es constante,
sino que vara con el tiempo (F = dV/dt). Integrando se tiene
(9)

V = Vo + F t

reemplazando en (8) y despejando X, se tendr

(10)

X=

x o Vo
Y F SR t
x/s
Ft + Vo
Ft + Vo

expresin que describe la variacin de X con t a lo largo del

cultivo alimentado. Puede darse el caso en que el aumento de V
sea tal que haya un efecto de dilucin que provoque la
disminucin de la concentracin de biomasa. As, puede ocurrir
que la concentracin final alcanzada sea menor que la inicial,
pero no as la cantidad total X.V.
DISEO
Se desea obtener una concentracin final de biomasa X f,
con un volumen final Vf. El volumen total adicionado durante el
BA ser:
(11) Vf - Vo = F.t
donde tf es el tiempo total de alimentacin. Cuando t = t f, la
ecuacin (8) se transforma en

(12) XfVf = XoVo +

Yx s

SR F.tf

Reemplazando (11) en (12), y despejando Sr queda

X f V f X oVo

(13) SR =

Yx s (V f Vo )

La ecuacin (13) permite calcular la concentracin de

sustrato limitante en el reservorio. Resta calcular F, cuyo valor
debe ser tal que satisfaga la ecuacin (4). En particular, para t
= 0 (inicio de la alimentacin )ser:

(14) F SR

o X oVo
``
Yx s

El valor de tf se calcula a partir de la ecuacin (11).

NOTA: o puede ser igual a max si la alimentacin se inicia el
final de la fase exponencial del batch.
Debe destacarse que si F.Sr fuera mayor que la velocidad
de consumo de sustrato, habra una acumulacin de sustrato en
el medio, y el crecimiento no sera limitado.
Es interesante conocer la variacin de durante el batch
alimentado. Recordando el balance de materia para la biomasa
d ( xV)

dt

xV =

1 d ( xV)
xV dt

d ( xV )
Yx s FS R
dt

Por lo tanto se obtiene

Yx s FS R

(15) =

1
xV

Si se reemplaza (8) en (15), ser

FS RYx s

(16) =

X oVo FS RYx st

expresin que indica que disminuye con t a lo largo del batch

alimentado.
Puede representarse un cultivo en batch alimentado
operando en las condiciones halladas.

Al obtener valores de S r y F, se ha DISEADO una

alimentacin para el cultivo en batch alimentado. El caso
descrito hasta aqu tiene en cuenta que tanto F como S r sean
constantes. Es claro que en caso de ser F = F(t) y/o S r = Sr(t),
dicha funcionalidad habr de ser tenida en cuenta para resolver
las ecuaciones planteadas.