Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

PRACTINA NO________

DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA

(ALP)

INTRODUCCION

La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los

monoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del
higado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil)
dando lugar a distintas izoenzimas.

La actividad serica de ALP ósea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los
niños en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta
izoenzima se localiza en los osteoblastos. También es fisiológico el aumento que se produce al
final de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima placentaria que en este
periodo alcanza niveles máximos.

Entre las patologías que afecta la actividad sérica de ALP se pueden citar: carcinomas
metastáticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal.

FUNDAMENTO

La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, la

velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividad
enzimatica en la muestra.

La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la
fosfatasa.
ALP + p-NFF  PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8)

Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT)
y se utiliza para evaluar problemas hepáticos. Suele asociarse en la elevación de GGT excepto
en problemas óseos donde solo se eleva la ALP.

REACTIVO
Buffer DEA : dietanolamina
Sustrato pNFF

MUESTRA
Suero

MATERIAL
• Espectrofotómetro y cubetas
• Baño maria
• Agua destilada
• Pipetas
• Estandar de calibración
• Reactivos de ALP
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PARAMETROS
Longitud de onda 405nm
Temperatura de reacción 25, 30 o 37ºC
Tiempo 3 minutos
Vol final de reacción 2.52mL

PROCEDIMIENTO
Colocar en cubeta a temperatura de Reaccion:
Sustrato reconstituido 2.5mL
Preincubar unos minutos, después agregar
Muestra 20uL

• Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm, disparar cronómetro

• Registrar absorbancias después de 1,2 y 3 minutos después de la primera lectura.
• Determinar la diferencia promedio de Absorbancia / min (∆A/min), restando cada
absorbancia y obteniendo el promedio.

CALCULOS
ALP (U/I) = ∆A/min x 6812

RESULTADOS
ALP= ______________ (U/I)

VALORES DE REFERENCIA
Adultos: Niños y adolescentes
25ºC = 40-190 U/I hasta 400
30ºC = 45-213 U/I hasta 450
37ºC = 65-300 U/I hasta 645

CONCLUSIONES
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PRACTICA NO. ____

DETERMINACION DE CREATININA
DEPURACION DE CREATININA

INTRODUCCION
La determinación de niveles séricos de creatinina, producto de la degradación de la creatina, se
utiliza como índice de funcionalismo renal, dado que su eliminación se efectúa a través del
riñón y casi exclusivamente por filtración.

FUNDAMENTO
La creatinina reacciona con el picrato alcalino, según la reacción de Jaffé, para dar un
cromógeno rojizo. La cantidad de cromógeno que se forma bajo condiciones controladas, es
directamente proporcional a la concentración de creatinina en la muestra y se mide
fotométricamente a 490-510nm. La reacción de jaffé es una reacción no específica para
creatinina, pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino, lo hacen durante los
primeros 30 segundo de iniciada la reacción.

MATERIAL REQUERIDO
• Espectrofotómetro
• Cubetas de lectura
• Material volumétrico
• Sistema de termostatizacion (20-30ºC)
• Cronómetro

PARAMETROS
Longitud de onda 500nm (490-510)
Temperatura 25ºC
Ajuste a cero agua destilada

PROCEDIMIENTO

Pipetear en cubetas Estandar Muestra

espectrofotométricas:
Reactivo de Trabajo 2.0mL 2.0mL
Equilibrar a temperatura de trabajo y pipetear
Estandar 0.4mL
Muestra 0.4mL
Mezclar inmediatamente y disparar el cronómetro
A los 30 seg exactos de incubación registrar las lecturas de Abs de S1 y M1.
A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2.

CALCULOS
*SUERO
Creatinina (mg/L) = (M2-M1) x f f= 20mg/L
S2-S1

*ORINA DE 24 HORAS
Creatinina (g/24h) = (M2 – M1) x f f= 0.020g/L x 50 x V
S2-S1
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Donde 50 es el valor de dilución y V= vol de diuresis en litros en 24h.

*DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA

D.C.E. ml/min = creatinina en orina (g/24h) x 694

Creatinina en suero (mg/L)

RESULTADOS

Creatinina en Suero ___________________mg/L

Creatinina en Orina ___________________g/24h
D.C.E. ___________________ml/min

VALORES DE REFERENCIA
Suero 8-14mg/L
Orina 8-23 mg/kg / 24h
DCE 80-140 ml/min

CONCLUSION
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PRACTINA NO___

CLORO

FUNDAMENTO
El cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado.

REACTIVO

Reactivo: formado por tiocianato de mercurio, nitrato de hierro y ácido nitrico.

Estandar: Cloro

MUESTRA
Suero
Plasma heparinizado
Orina

PARAMETROS
Longitud de onda 480nm
Temperatura 37ºC
Cubeta 1cm de paso de luz
Ajustar a cero blanco de reactivo

PROCEDIMIENTO
Blanco Estandar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mL
Agua destilada 10Ul
Estandar 10uL
Muestra 10uL
Mezclar, incubar 5 minutos
Leer abosrbancias (densidad optica DO)
Color final estable 1 hora.

CALCULO
Muestra DO x n
Estandar DO

n= 100mEq/L
100mmol/L
335mg/dL

RESULTADO

Cloro = ___________mg/dL

VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma orina
98-107 mEq/L 110-250 mEq/24h
98-107 mmol/L 3900-8870 mg/24h
348-380 mg/dL

CONCLUSION
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PRACTICA NO._____

TRIGLICERIDOS

PRINCIPIO DEL METODO

Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula, al igual el colesterol son
transportados por LPL en la sangre. Una dieta alta en grasa eleva los triglicéridos, cirrosis,
hepatitis, obstrucción biliar, pueden estar relacionadas con esta enfermedad.

Los triglicéridos son incubados con LPL, liberan glicerol y ácidos grasos libres, el glicerol es
fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para
producir glicerol 3 fosfato y ADP, el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peróxido de
Hidrógeno por GPO.

Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando
coloración roja.

MUESTRA
Suero o plasma

PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 505nm
Temperatura 37ºC o 15 a 20 ºC
Ajustar el cero con agua destilada.

Blanco Patron Muestra

R ml 1mL 1mL 1mL
Patrón uL 10uL
Muestra uL 10uL
Mezclar
Incubar 10 minutos a temperatura ambiente
Leer absorbancia del calirador, de la muestra frente a blanco. Color estable 30 min.

CALCULOS
ABS muestra x 200 (conc) =__________mg / dL
ABS Patron

RESULTADO
Triglicéridos = ____________mg/dL

VALORES DE REFERENCIA
Hombres 40 a 160 mg/dL
Mujeres 35 a 165 mg /dL

CONCLUSION
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PRACTICA NO._____

COLESTEROL

Los esteres de colesterol se hidrolizan por la acción de la colesterol ester hidrolasa para liberar
colesterol y ácidos grasos. El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reacción
se oxida por la acción de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peróxido de hidrógeno. Este
ultimo, en presencia de peroxidasa, oxida el sistema cromógeno (4-aminoantipirina/fenol) en
un compuesto de color rojo.

PRECAUCIONES
¡toxico! El estandar coniene 2-mettoxietanol, evitese la exposición, nocivo por inhalación,
ingestión o contacto con la piel. Inflamable. Puede perjudicar la fertilidad, riesgo durante el
embarazo de efectos adversos para el feto.

MUESTRAS
Suero
Plasma heparinizado

PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 500nm (492-550)
Temperatura 37ºC
Cubeta 1cm de paso de luz
Leer contra blanco de reactivo

Blanco Estandar Muestra

Reactivo 1mL 1ml 1mL
Agua destilada 10uL - -
Estandar - 10uL -
Muestra - - 10uL

Mezclar, y tras una incubación de 5 min, leer la densidad óptica (DO)

El color final se mantiene estable durante 1 hora.

CALCULOS
Muestra DO *n = n= concentración de std, 200mg/dL
Estandar DO 2g/L
5.17mmol/DL

RESULTADO
CHOL= ___________mg/dL

VALORES DE REFERENCIA
150-260 mg/dL
1.5 – 2.6 g/L
3.87 – 6.71 mmol/L

CONCLUSION
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PRACTINA NO______
BILIRRUBINA

Significado Clínico

La bilirrubina es un compuesto de degradación de la Hemoglobina, captada por el hígado para

su conjugación y excretada en la bilis. Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares
pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia).
La determinación de la bilirrubina sérica en niños recien nacidos es de gran importancia, ya que
aumenta con un consecuente riesgo de difución al sistema nervioso, esto se debe a que en la
eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recien nacido, patología provocada por
incompatibilidad materno-fetal, se produce una destrucción excesiva de glóbulos rojos.

Fundamento del Método

La bilirrubina reacciona con el ácido sulfanílico diazotado originando un producto color rojo-
violeta (azobilirrubina), que se mide a 530nm. La bilirrubina directa reacciona con el
diazorreactivo , pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso. De manera, que para que
reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra, es necesario agregar benzoato
de cafeína al medio de reacción.

Reactivos
• Desarrollador solución acuosa de Benzoato de cafeina 0.13mol/L
• Nitrito de Sodio
• Reactivo Sulfanílico
• Bilirrubina STD (no provista)
• Agua destilada (no provista)

Muestra
• Suero o Plasma heparinizado. Libre de hemolisis. Estable 48 horas de 2 a 10ºC. la
acción de la luz puede destruir en una hora el 50% de la bilirrubina, es necesario
proteger.

Material
• Espectrofotómetro
• Pipetas y micropipetas
• Reloj

Condiciones de Reacción
Longitud de Onda 530nm en espectrofotómetro
Temperatura de Reaccion Ambiente
Tiempo de Reacción 5 min
Vol Muestra 200uL
Vol final de Reaccion 2.9mL

PROCEDIMIENTO
Colocar en tubos separados
Blanco Directa Total
Muestra 200Ul 200uL 200uL
Agua destilada 2.5mL 2.5mL
Desarrolador 2.5mL
Reactivo Sulfanílico 200uL
Diazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS

Bilirrubina Total (mg/L) = (T – B) x f

Bilirrubina Directa (D – B) x f
Bilirrubina Indirecta (libre) BR Total – Br Directa
Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina

RESLTADOS
Bilirrubina Directa ____________mg/L
Bilirrubina Indirecta ____________mg/L
Bilirrubina Total ____________mg/L

VALORES NORMALES
Adultos
Directa hasta 2mg/L
Total hasta 10mg/L

Recien Nacidos
A termino prematuros
Sangre de cordon 25mg/L
24 horas 60mg/L 80mg/L
48 horas 75mg/L 120mg/L
3 a 5 dias 120mg/L 230mg/L

CONCLUSION
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PRACTICA NO.______
ELECTROLITOS EN SUERO

CALCIO

El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo, no solo es factor estructural de huesos y
dientes sino que también se encuentra en la sangre y en la función neuromuscular.

INCREMENTOS
Hipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e
hiperparatiroidismo, el incremento se debe al aumento de la reabsorción en los huesos
causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales.

DECREMENTO
Hipocalemia

METODO
Arsenazo III

El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 6.75 y forma un cromoforo
coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentración de calcio en la
muestra. Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los
otros cationes que se encuenran en suero, plasma u orina.

Reactivo
El reactivo esta listo para su uso

Muestra
Suero, plasma heparinizada u orina. Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ºC y seis
meses en congelación.

PARAMETROS
Longitud de Onda 630nm
Volumen de la muestra 10/20 uL
Volumen de Reactivo 500-1000uL
Incubación 1 min a 37ºC
Concentración STD 10mg/dL
Blanco Reactivo

PROCEDIMIENTO
Pipetear dentro de BLANCO STD MUESTRA
tubos marcados
Reactivo 1000 1000 1000
Agua destilada 20
Estándar 20
Muestra 20
Mezclar y leer absorbancia a 630nm

CALCULOS
Calcio mg/dL = ABS M / ABS STD X (Concentración STD) =

RESULTADO
Calcio = _______________mg/dL
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MAGNESIO

El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino,

proporcional a la concentración de Mg en la muestra.

Es el segundo cation mas numeroso en el organismo.

Niveles altos de Mg se hallan en uremia, fallo renal o enfermedad de Addison.

REACTIVOS
Reactivo 1 amino metil propanol - EGTA
Reactivo 2 Calmagita
Magnesium cal Patron de Mg

MUESTRA
Suero o plasma heparonizado libre de hemolisis, estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ºC.
tambien puede utilizarse orina.

PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 520 nm
Temperatura 371C o 15-20
Ajustar con agua destilada
Pipetear en cubeta

Blanco Patron Muestra

Rt Ml 1 1 1
Patron uL 10
Muestra uL 10

CALCULOS

ABS M / ABS P X 2 (CONC PAT) = mg / dL de Mg.

RESULTADO

Magnesio : _______________mg/dL

VALORES NORMALES

Suero o plasma 1.5 a 2.5 mg/ dL

Orina 24 a 244 mg /dL
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FOSFORO

INTRODUCCION

El fósforo es esencial para la formación de tejido oseo y en el metabolismo energético celular.

Aprox. El 85% se encuentra en hueso y dientes.
Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D, hipertiroidismo, desordenes renales, mala
absorción.
Niveles altos se atribuyen a la dieta, metástasis de huesos, alcoholismo, diarreas, alteraciones
de hígado.

FUNDAMENTO

Método para detección de fósforo inorgánico. El Pi reacciona en medio ácido con molibdato
amónico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo, de intensidad proporcional a la
concentración de Pi presente en la Muestra.

REACTIVO
R molibdico
Phosphorus Cal

MUESTRA
Suero o plasma libre de hemolisis
Orina

PARAMETROS
Longitud de onda 340nm
Cubeta 1cm
Temperatura 37-30-25ºC
Ajustar a cero con agua destilada

PROCEDIMIENTO
Pipetear en una cubeta
Blanco Patrón Muestra
Reactivo 1Ml 1mL 1mL
Patrón 10uL
Muestra 10uL
Mezclar e incubar 5 min
Leer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo.

CALCULOS
Suero
ABS M x 5 (conc. P) = mg/dL
ABS P

Orina 24h
ABS M x 5 x Vol (dL) orina /24h = mg/24h
ABS P

RESULTADO
Fósforo = _____________mg/dL
VALORES NORMALES
Suero o plasma Orina
Niños 4-7mg/dL
Adultos 2.5-5mg/dL 0.4-1.3g/24h
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PRACTICA NO.____
ALBUMINA

FUNDAMENTO

La albúmina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente ácido produciendo coloración

amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentración de la albúmina en la muestra.

La albúmina es una proteína plasmática importante producida por el hígado, sus niveles se
alteran en enfermedades hepáticas, desnutrición, dermatitis.

REACTIVO
Verde bromocresol pH 4.2
Patrón primario acuoso de albúmina

MUESTRA
Suero o plasma libre de hemólisis
Estable 1 mes a 2-8ºC.

PARAMETROS
Longitud de onda 630nm
Temperatura 15-25ºC
Cubeta 1cm
Ajustar a cero agua destilada

PROCEDIMIENTO
Blanco Patrón Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mL
Patron 5uL
Muestra 5uL
Mezclar, incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
Leer absorbancia de Patrón y Muestra contra blanco, color estable 1 hora.

CALCULOS
ABS M X 5 (conc. Patrón) = g/dL
ABS P

RESULTADO

Albúmina = _______________g/dL

VALORES NORMALES
3.5 a 5 g/dL

CONCLUSIONES
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PRACTICA NO.____
PROTEÍNAS TOTALES

En medio alcalino las proteínas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre, la
intensidad es proporcional a la concentración de la proteína total en la muestra.

Las proteínas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de

transporte. Se dividen en dos fracciones: Albúmina y Globulina

Se detección es util para detección de:

Hiperproteinemia
Hipoproteinemia.

REACTIVO
Reactivo de Biuret
T protein Cal

MUESTRA
Suero o plasma heparinizado.
Estable un mes en nevera a 2-8ºC

PARAMETROS
Longitud de onda 540nm
Cubeta 1cm
Temperatura 37ºC/15-25ºC
Ajustar a cero con agua destilada

PROCEDIMIENTO
Blanco Patrón Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mL
Patron 25uL
Muestra 25uL
Mezclar, incubar 5 min a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente.
Leer absorbancia de Patrón y Muestra contra blanco, color estable 30 min.

CALCULOS

Abs M x 7 (conc. P) = g/dL

Abs P

RESULTADOS

Proteinas Totales = ___________g/dL

VALORES NORMALES
Adultos : 6.6-8.3 g/dL
Recien Nacidos : 5.2-9.1 g/dL

CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__
AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA

INTRODUCCION

La AST tiene una alta concentración en el músculo cardiaco, las células hepáticas, las células músculo
esquelético y en menores grados en otros tejidos. Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es
especifico de la enfermedad hepática, se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de
esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT, ALP y bilirrubina)

Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos, pero es mucho menos
especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propósito.

MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2

Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluterato

Plasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica

PARAMETROS

• 340 nm longitud de onda

• 30-37°C
• Cubeta de 1 cm paso de luz
• Blanco agua destilada

PROCEDIMIENTO
Procedimiento de un reactivo

Reactivo de trabajo 1 ml
Muestra 100 ul

Mezclar uncubar un minuto, medir cambio de densidad óptica durante 3 min.

Procedimiento de dos reactivos

Reactivo 1 1mL
Muestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minuto
Reactivo 2 100uL
Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos
Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica.

CALCULOS Un reactivo 2 reactivos

340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.746 1.905

334mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.780 1.942
365mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 3.235 3.529

RESULTADO
AST = _______________ U/L

VALORES NORMALES
30°C hasta 30 U/L
37°C hasta 46 U/L

CONCLUSION:
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ALT
ALANINA AMINO TRANSAMINASA

INTRODUCCION

Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesión hepática.

La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoácido alanita y se
encuentra en varios tejidos, pero presenta concentraciones mayores en el hígado. Cualquier
lesión en el hígado hace que se libere esta enzima a la sangre.

MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2

Suero sin hemólisis L-alanina a-cetogluterato

Plasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica
PARAMETROS
• 340nm longitud de onda
• 30-37°C
• Cubeta de 1 cm paso de luz
• Blanco agua destilada

PROCEDIMIENTO
Procedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1ml
Muestra 100ul

Mezclar, incubar un minuto, medir cambio de densidad optica durante 3 min.

Procedimiento de dos reactivos

Reactivo 1 1ml
Muestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minuto
Reactivo 2 100uL
Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos
Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica.

CALCULOS un reactivo 2 reactivos

340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.746 1,905

334nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.780 1,942
365nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 3.235 3,529

RESULTADOS
ALT = __________________UL

VALORES NORMALES

30°C hasta 35 UL
37°C hasta 49 UL

CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
LIPASA

FUNDAMENTO

La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los
alimentos de manera que se puedan absorber.

La enzima se encuentra en la leche materna y, según estudios bioquimicos, es idéntica a la

enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreática no especifica) por lo que se supone que le
origen que el origen es pancreático y llega a las glándulas mamarias a través de la circulación
sanguínea.

La lipasa gástrica, producida por las glándulas gástricas, reduce los triglicéridos, u tipo de
lípidos presentes en la leche, a ácidos grasos y glicerol.

REACTIVOS

• Reactivo de trabajo
• Patron de lipasa

MUESTRA

• Suero

PROCEDIMIENTO

1. Precalentar reactivo de trabajo a 37°C durante unos minutos

2. Pipetear a una cubeta

Reactivo de trabajo 750 ul

Muestra/Patron 15 ul

3. Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37°C. poner el cronometro

en marcha, a los 3-5 minutos añadir:

Reactivo C 250uL
Mezclar
4. leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos
5. Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales, obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆A/min)

CALCULOS
(∆A/min)MUESTRA X Concentración del patron = U/L
(∆A/min)PATRON

RESULTADOS
Lipasa = _________________U/L

VALORES NORMALES
7-59 U/L
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AMILASA

INTRODUCCION

La amilasa es una enzima que tiene la función de dirigir el glicógeno y el almidón para formar
azucares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares ( glándulas partidas) y
en el páncreas. Cuando una de estas glándulas se inflama derrama amilasa a la sangre y
aparece elevado su nivel en el análisis de la amilasa serica.

MUESTRA

• Suero
• Plasma heparinizado
• Orina diluida una parte en dos de agua

PROCEDIMIENTO

Longitud de onda 405 nm

Temperatura 30 a 37° C
Cubeta 1 cm
Blanco Agua destilada

30°C 37°C
REACTIVO 1mL 1mL
MUESTRA 25uL 15uL

Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos

Obtener (∆A/min)

CALCULOS
Actividad Cambio Densidad Optica / min X 2715 a 30°C
Cambio Densidad Optica / min X 4640 a 37°C

RESULTADOS
Amilasa = _______________ U/L

VALORES DE REFENCIA
En suero:
• <67 U/L a 30°C
• <86 U/L a 37°C

CONCLUSION
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PRACTICA NO.
PRUEBAS SEROLOGICAS

PROTEINA C REACTIVA

Es una tecnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en

suero humano. Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son
aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente.

La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la
cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos, virales, inflamación, y neoplasias
malignas.
El incremento se produce después de unas horas de desarrollarse inflamación alcanzando niveles
de 300mg/L en 12-24h.

Reactivos:
Latex Suspensión de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana.
Control (rojo) Suero humano
Control (azul) Suero animal

Muestra:
Suero fresco estable 7 dias a 2-8ºC o 3 meses a -20.
No hemolisadas ni lipémicas.

PROCEDIMIENTO
Cualitativo.
1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente.
2. en un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los controles positivo y negativo.
3. homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores.
4. mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con palillos
distintos.
5. situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso.

Semicuantitativo.
1. realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L
2. proceder para cada dilución como la prueba cualitativa.

LECTURA E INTERPRETACION
Examinar microscópicamente presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente al retirar el
agitador.
Aglutinación positiva indica una concentración de PCR igual o mayor a 6mg/L
En el semicuantitativo, se define el titulo como la dilución mayor que da resultado positivo.

CALCULOS
La concentración de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula:
6xTitulo de PCR = mg/L
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 6mg/L

RESULTADO
Aglutinación: __________________

CONCLUSION:
 Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

FACTORES REUMATOIDES

PRINCIPIO DEL METODO

FR Latex es una tecnica de aglutinación en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los
factores reuimatoides en el suero humano. Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina
humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra.

Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G. Su

interés clínico es el diagnóstico de la Artritis Reumatoides, aunque estan presentes tambien en
Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen.

Reactivos
Latex suspensión de latex cubierto con gammaglobulina humana
Control Rojo Suero humano
Control Azul Suero animal

Muestra:
Suero fresco estable 7 dias a 2-8ºC o 3 meses a -20.
No hemolisadas ni lipémicas.

PROCEDIMIENTO
Cualitativo.
1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente.
2. En un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los controles positivo y negativo. En
circulos distintos.
3. Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con palillos
distintos.
5. Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso.

Semicuantitativo.
1. realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L
2. proceder para cada dilución como la prueba cualitativa.

LECTURA E INTERPRETACION
Examinar microscópicamente presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente al retirar el
agitador.

Aglutinación positiva indica una concentración de FR Latex igual o mayor a 8UI/mL

En el semicuantitativo, se define el titulo como la dilución mayor que da resultado positivo.

CALCULOS
8 X TITULO DE FR = UI/mL

VALORES DE REFERENCIA
Hasta 8 UI/ mL

RESULTADO
Aglutinación: _____________________

CONCLUSIÓN
 Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

REACCIONES FEBRILES

INTRODUCCION

Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella,
Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19.

Salmonella. La reacción de Widal en un método serológico usado comúnmente en el diagnóstico de las

fiebres tifoideas, entérica y ondulante, la reacción mide el título del suero contra una suspensión de
microorganismo conocidos. La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres
especies clínicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y thyphi. Tres síndromes
principales, resultan de la infección por salmonella.

1. gastroenteritis ( la forma más común ).

2. fiebre tifoidea.
3. septicemia.

Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por
Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crónica
que se manifiesta principalmente por escalofríos, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles
ondulatorios que han dado lugar al nombre de “fiebre ondulante” de la enfermedad.

Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigénos idiotípicos con
Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relación se usó en el diagnóstico de tifo. Las especies de Rickettsia
son cocobaciolos pequeños plemórfos que funcionan como parásitos intracelulares. La inmunidad por lo
general es de larga duración, con algunas excepciones. El tifus endémico puede causar recaíadas 10 o
20 años después de la aparente recuperación (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras
se caracteriza por las recaídas.

FUNDAMENTO.
Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes
infecciosos, responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de
manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo específico. El título del anticuerpo
depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico el título
de ellos debe aumentar

MUESTRA
Suero libre de hemolisis

REACTIVOS
Paratifico A
Paratifico B
Tifico O
Tifico H
Proteus OX
Brucella

PROCEDIMIENTO.
Puede efectuarse por medio de dos maneras.
Método de aglutinación rápida en placa.
1. Anotar el antígeno correspondiente en la placa de vidrio.
2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antígenos que se vayan
a utiliza.
3. A cada gota de suero añadir una gota de cada antígeno.
4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antígeno.
5. Agitar suavemente la placa por rotación (120 r.p.m) durante 2 ó 3 minutos.
6. Observar la aglutinación con ayuda de una lámpara.
Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las
siguientes cantidades del suero en la siguiente forma.
 Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

Mililitros de suero Dilución

0.08 1:20
0.04 1:40
0.02 1:80
0.01 1:160
0.005 1:329

INTERPRETACION
Reportar el resultado, empleando la recíproca de la dilución más alta que presenta aglutinación.

Grado de aglutinación.
• 100% ++++ Sedimentación de los grumos y el sobrenadante claro.
• 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro.
• 50% ++ sedimentación marcada y sobrenadante ligeramente claro.
• Negativo. Ninguna evidencia de aglutinación, sobrenadante idéntico al control.

RESULTADO
Paratifico A __________________
Paratifico B __________________
Tifico O __________________
Tifico H __________________
Proteus OX __________________
Brucilla __________________

CONCLUSION
 Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

VDRL
INTRODUCCION

La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una técnica serológica
con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sífilis y
analizar la respuesta al tratamiento específico. Su costo y complejidad la hacen ideal para el
estudio de esta enfermedad de trasmisión sexual en grandes masas de población.1-4

El Médico de la Familia es el máximo responsable de los programas nacionales para el control

de las enfermedades sexualmente trasmisibles; por tanto, entre sus funciones básicas se
encuentran la indicación y la interpretación a primera instancia de los resultados de ésta.5,6

El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar
anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo ante una infección
sifilítica. Se practica normalmente en lámina de cristal, en la que se mezcla el suero del
paciente (previamente calentado para inactivar el complemento), con una suspensión fresca de
antígeno de cardiolipina; esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos
puede observarse la floculación utilizando un microscopio de bajo aumento; sus resultados
pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente.

MUESTRA
Suero o plasma libre de hemolisis.

PROCEDIMIENTO
En un porta, depositar una gota (50uL) de suero del paciente,
Añadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circulo
Observar el resultado.

RESULTADO
VDRL ____________________

CONCLUSION