UNIVERSIDAD DE COLIMA

Maestra en Ciencias: rea Biotecnologa

Aislamiento y evaluacin de hongos nematfagos asociados a
quistes de Globodera rostochiensis (Woll.) en la regin del Cofre
de Perote


Tesis
Que para obtener el grado de:

Maestro en Ciencias, rea Biotecnologa


Presenta:


ANGEL ENRIQUE NEZ SNCHEZ


Asesores:

DR. OSCAR REBOLLEDO DOMNGUEZ.
M. en C. GLORIA LUZ LAURA CARRIN VILLARNOVO.

Tecomn, Colima, Mxico. Septiembre del 2002.
UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
OFI CI O No. 440/2002.
C. ANGEL ENRIQUE NUEZ SANCHEZ
EGRESADO DE LA MAESTRIA EN CIENCIAS
AREA: BIOTECNOLOGIA
P R E S E N T E .
Con fundamento en el dictamen emitido por el jurado revisor del colegiado del rea: de
Biotecnologa de esta Facultad a mi cargo, de su trabajo de tesis de Maestra y en virtud de que
efectu las correcciones y acat las sugerencias que le haban indicado los integrantes del mismo,
se le autoriza la impresin de la tesis " Aislamiento y evaluacin de hongos nemtofagos
asociados a quistes de Globodera rostochiensis (Woll) en la regin Cofre de Perote ", misma
que ha sido dirigida por los C.C. Dr. Oscar Rebolledo Dominguez y la M.C. Gloria Luz Laura
Carrin Villarnovo, Profesor-Investigador de la Universidad de Colima e Investigadora del
Instituto de Ecologa de Xalapa, Veracruz.
Este documento reuni todas las caractersticas apropiadas como requisito parcial para
obtener el grado de Maestro en Ciencias; Area: Biotecnologa y fue revisado en cuanto a forma
y contenido por los C.C. Dr. Alfonso Pescador Rubio. Dr. Oscar Rebolledo Domnguez y la
M.C. Edelmira Galindo Velasco, Profesores-Investigadores de la Universidad de Colima.
Sin otro particular de momento. me despido de usted muy cordialmente.

ATENTAMENTE

ESTUDIA * LUCHA * TRABAJA
TECOMN, COL., A 27 DE AGOSTO DEL 2002.
C.C.P. EXPEDI ENTE CORRESPONDI ENTE.
C.C.P. ARCHI VO. Of. No. 44012002.
RVMD/Lety* *
Km 40 Autopista Colima-Manzanillo Tecomn, Colima, Mxico C.P. 28100
Tel. 01 (313) 322 94 05 Ext. 52251 Fax 52252 fcba@tecoman.ucol.mx
C.C.P. EXPEDI ENTE ACADEMI CO DEL ALUMNO
ING. RODOLFO VALENTINO MORENTN DELGADO
DIRECTOR
DEDICATORIA


A mi esposa Conchita, mis hijos Mara del Carmen, Luisa Fernanda y Angel
Enrique, por ensearnos que este logro es el resultado de el esfuerzo conjunto, con
todo lo que exige de renuncia y entrega, de lucha y de esperanza, de contagiar valores,
de soar utopias y generar proyectos, de sealar causes y seguir con constancia nuestro
propio camino.

A mis padres J os Cruz y Mara del Carmen, por tanto ejemplo por tanto orgullo,
por su invaluable apoyo y su lucha incansable para sacarnos adelante.

A mis hermanos, Mara Araceli, Luis Carlos, Marco Antonio, Carmen Patricia,
Mario Alberto, Mara Cristina, Edna Guadalupe, J os Cruz y J os Manuel, Angel Armando
y Alma Angelina, Gerardo Alonso; por ese espritu de lucha que los caracteriza y la
seguridad de saber que nunca hemos estados solos.

A mis cuados y cuadas, nuestros sobrinos por formar parte una gran familia.

A Don Norberto y Lola Gmes de Ocoroni Sinaloa por demostrarme que la
humildad es toda una virtud.

A los amigos de ayer generacin 1959-1965 de la Escuela Primaria Enrique
Quijada de Nogales Sonora, por todas las vivencias de esa poca que fuerte influencia
gnero en mi formacin. Donde quiera que estn, los recuerdo; desde siempre y hasta
siempre.





AGRADECIMIENTOS

A Dios, por permitir encontrar en mi camino a personas generosas y
comprensivas, que con su apoyo pude alcanzar es meta....Gracias Seor


A m hija Mara del Carmen, por su apoyo, su dedicacin y esfuerzo, deseando
que este estudio sea muy significativo en tu formacin profesional.

Al Dr. Oscar Rebolledo Domnguez, Profesor investigador de la Universidad de
Colima, a quien agradezco su invaluable asesoramiento, apoyo y dedicacin para la
realizacin de esta trabajo y por ser un autentico tutor y amigo.

A la M. En C. Gloria L. L. Carrin V. Investigadora del Instituto de Ecologa Xalapa
A.C. por darme la oportunidad de superarme por su comprensin y valioso apoyo en el
asesoramiento y realizacin de esta investigacin eternamente agradecido.

A la comisin revisora, integrada por el Dr. Alfonso Pescador Rubio, Dr. Oscar
Rebolledo Domnguez y M. en C. Edelmira Galindo Velazco por su dedicacin,
observaciones y sugerencias al manuscrito del presente trabajo.

A la Universidad Veracruzana, por otorgarme la oportunidad de participar en los
programas de posgrado.

A la Secretaria de Agricultura, Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin
por su apoyo para llevar acabo esta etapa de capacitacin.

A la Universidad de Colima, por permitirme realizar con el apoyo de su personal
acadmico y administrativo los estudios de Maestra en Ciencias en Biotecnologa.

Al Instituto de Ecologa Xalapa, A.C. por permitirme desarrollar el presente
estudio en sus instalaciones m reconocimiento al personal acadmica y administrativo
por su apoyo en pro de la investigacin.

A Promep, por el apoyo econmico y moral otorgado para proseguir estudio de
posgrado.

Al Dr. J aime Molina Ochoa, por apoyar mi ingreso a la Universidad de Colima, por
su amistad y ayuda desinteresada.

Al Dr. Roberto Lezama Gutirrez de la Universidad de Colima por su simpata a
este proyecto, sus acertado consejos y conocimientos para logar culminar este estudio.

A la M. en C. Marycruz Abato Zarate de la Facultad de Ciencias Agrcolas de
Universidad Veracruzana por su orientacin y apoyo tan valioso para la realizacin de
este trabajo, pero ente todo por su alegra y entusiasmo.

Al Qumico J ess Gerrero de la Falcultad de Ciencias Agrcolas de Universidad
Veracruzana por la ayuda durante el desarrollo de este estudio.

A la M. en C. Irma Lpez Guerrero, al M. en C. Santiago Chacn Zapata,
investigadores del Instituto de Ecologa por sus recomendaciones en la realizacin de
esta Tesis.

Al Tcnico Tiburcio Laez Aponte, del Instituto de Ecologa Xalapa A.C. por su
ayuda en la toma de fotografas en el microscopio electrnico de barrido.

Al Ing. J os Regalado Aguayo, J efe de Distrito de Desarrollo Rural Coatepec
por su apoyo y autorizacin para continuar estudio de posgrado.
Al Lic. Mario Urbina de la Unidad de Capacitacin de la Delegacin SAGARPA en
Veracruz, por su entusiasta apoyo.

Al Ing. Arturo Paredes Tenorio, por la formacin aportada sobre el nematodo
dorado de la papa en Perote.

A Doa Chepi, por su apoyo moral, pero sobre todo por su confianza y amistad.

A mi compaero de Maestra en Ciencias Ing. Rubn Ramiro Sandoval por su
apoyo y amistad.

A todas aquellas personas que de alguna o otra manera contribuyeron a la
realizacin de un sueo de tantos........


















INDICE


RESUMEN ......................................................................................... 1
ABSTRACT ......................................................................................... 2
I.- INTRODUCCIN ......................................................................................... 3
HIPTESIS ......................................................................................... 7
OBJ ETIVOS ......................................................................................... 7
II.-ANTECEDENTES. ......................................................................................... 8
2.1. Sntomas y dao ocasionado por Globodera rostochiensis........................... 11
2.2. Clasificacin taxonmica de Globodera rostochienis.................................... 15
2.3. Caracterstica morfolgicas de Globodera rostochiensis................................ 16
2.4.Biologa..................................................................................................... 18
2.5. Mtodos de control de nematodos fitoparsitos........................................... 20
2.5.1. Control qumico.................................................................................. 21
2.5.2. Control fsico....................................................................................... 22
2.5.3. Inundacin Artificial y Natural............................................................... 22
2.5.4. Rotacin de Cultivos............................................................................ 22
2.5.5. Control gentico.................................................................................. 23
2.5.6. Plantas antagonistas y cultivos trampas................................................ 24
2.5.7. Legislacin de control......................................................................... 24
2.6. Control biolgico de nematodos fitoparsitos............................................. 25
2.6.1. La bacterias en el control biolgico de nematodos fitopatogenos............. 26
2.6.2. Rickettisas.......................................................................................... 26
2.6.3. Nematodos Depredadores.................................................................... 26
2.6.4. Depredadores Heterogneos................................................................ 27
2.7. Hongos parsitos de nematodos................................................................. 28
2.7.1. Los Hongos predadores o atrapadores de Nematodos........................... 28
2.7.2. Los Hongos endoparsitos.................................................................. 31
2.7.3. Productores de toxinas....................................................................... 34
2.7.4. Hongos facultativos antagonistas de nematodos................................... 34
2.7.5. Hongos parsitos de huevos, hembra y quistes..................................... 35
2.7.6. Distribucin de hongos parsitos de nematodos.................................... 39
III.- MATERI ALES Y MTODOS........................................................................ 42
3.1. Ubicacin y descripcin del rea de estudio................................................. 42
3.1.1. Clima................................................................................................. 42
3.1.2. Geologa............................................................................................. 42
3.1.3. Suelos................................................................................................ 44
3.1.4. Hidrografa.......................................................................................... 44
3.1.5. Topografa.......................................................................................... 44
3.1.6. Vegetacin......................................................................................... 44
3.1.7. Toma de muestra............................................................................... 47
3.1.8. Extraccin de quistes.......................................................................... 47
3.1.9. Densidad de la poblacin de quistes..................................................... 48
Pgina
3.2. Aislamiento de hongos asociados a quistes................................................. 48
3.2.1. Identificacin de hongos...................................................................... 49
3.2.2. Conservacin de los aislamientos.......................................................... 49
3.3. Bioensayo del proceso de infeccin de hongos sobre quistes de Globodera
rostochienis.............................................. .............................................. 50
3.3.1. Preparacin del inoculo........................................................................ 50
3.3.2. Obtencin de quistes sanos.................................................................. 50
3.3.3. Inoculacin de los quistes de Globodera rostochiensis............................ 51
3.3.4. Pruebas de patogenicidad.................................................................... 51
IV.- RESULTADOS................................. ........................................................... 53
4.1. Densidad de poblacin de Globodera rostochiensis en las localidades de
estudio ..................................................................................................

53
4.2. Anlisis de suelo........................................................................................ 56
4.3. Correlacin entre materia orgnica y densidad de poblacin ........................ 57
4.4. Hongos aislados de los quistes de Globodera rostochiensis en la regin de
Cofre de Perote.......................................................................................

58
4.5. Proceso de infeccin de tres hongos aislados de quistes de Globodera
rostochiensis...... .............................................. .....................................

60
4.6. Patogenicidad y esporulacin de tres hongos sobre Globodera
rostochiensis................. .........................................................................

66
V.- DISCUSIN................................................................................................ 72
VI.- CONCLUSIN............................................................................................ 80
VII.- LITERATURA CITADA.............................................................................. 81





















Pgina
INDICE DE CUADROS


Pgina
Cuadro 1. Zonas ms infestadas con nematodo dorado de la papa 11
Globodera rostochienis en Mxico.

Cuadro 2. Hongos predadores y endoparsitos de larvas de nematodos. 33

Cuadro 3. Reportes de parasitismo naturales por hongos en hembras,
huevos y quistes de nematodos en diferentes regiones
en el mundo 41

Cuadro 4. Anlisis de los datos de densidad de poblacin de quistes en
las localidades de estudio, con la Prueba G de Bondad
de Ajuste con Repeticin 54

Cuadro 5. Proporciones de cada localidad en sus tres categoras. 55

Cuadro 6: Anlisis de los datos de densidad de poblacin de quistes en
las localidades de estudio, con la Prueba G de Bondad
de Ajuste con Repeticin. 56

Cuadro 7. Niveles de pH y contenido de materia orgnica en
las muestras de las localidades estudiadas. 56

Cuadro 8. Resultado de la correlacin entre la cantidad de materia
orgnica, el pH, la cantidad total de quistes y las condiciones
fsicas de los quistes en las seis localidades estudiadas. 57

Cuadro 9. Hongos nativos asociados a quistes de Globodera rostochiensis
en la regin Cofre de Perote. 58

Cuadro 10. Clasificacin taxonmica de los hongos aislados a quistes de
Globodera rostochienis. 59

Cuadro 11. Anlisis de varianza de la patogenicidad de hongos nativos
sobre quistes de Globodera rostochiensis. 66

Cuadro 12. Porcentajes de quistes de G. rostochiensis con la esporulacin
de hongos nativos inoculados. 67




I NDI CE DE FI GURAS


Pgina

FIGURA 1. Dispersin Globodera rostochiensis en el mundo. 9

FI GURA 2: Cuello y puntuaciones del quistes 750x. 17

FIGURA 3: Corte transversal del quiste, corin y masa de huevos 750x. 17

FIGURA 4: Cono vulvar 500x. 17

FIGURA 5: Estras del corin 1000x. 17

FIGURA 6. Ciclo biolgico de Globodera rostochiensis. 19

FIGURA 7. Ubicacin geogrfica de zona de estudio. 43

FIGURA 8. Diagrama de flujo de Materiales y Mtodos. 52

FI GURA 9. Total de quistes obtenidos por kilogramo de
suelo en las localidades de estudio. 53

FIGURA 10. Clasificacin de los quistes obtenidos de acuerdo
a condiciones fsicas por localidad. 55

FIGURA 11. Acremonium incrustatum esporas de sobre el corin 12 hrs
despus de la inoculacin 2,000x. 61

FIGURA 12: Acremonium incrustatum Tubos germinativos vistos
en la parte interna del corin 24 hrs despus de la
inoculacin 1,500x. 61

FIGURA 13: Acremonium incrustatum tubos germinativos a las
48 hrs 1,500x. 61

FIGURA 14: Huevos de Globodera rostichienis con micelio de
Acremonium incrustatum a las 72 hrs 1,000x. 61

FIGURA 15: Acremonium incrustatum micelio de saliendo del corin
96 hrs 1,000x. 61



FIGURA 16: Acremonium incrustatum conidiforo emergiendo
del corin 120 hrs 2,000x. 61


FIGURA 17: Paecilomyces carneus grupo de esporas germinando 12 hrs
despus de la inoculacin 3,500x. 63

FIGURA 18: Paecilomyces carneus esporas con tubos germinativos
inmersos y superficiales 24 hrs despus de la
inoculacin 1,500x. 63

FIGURA 19: Paecilomyces carneus micelio desarrollado sobre el corin
a las 72 hrs 500x. 63

FIGURA 20: Paecilomyces carneus formacin de fialides y conidiforos
esporulando a las 96 hrs 1,500x. 63

FIGURA 21: Paecilomyces carneus cadenas de esporas sobre
el corin 750x. 63

FIGURA 22: Huevos rodeados de micelio de Paecilomyces carneus 100x. 63

FIGURA 23: Phialophora malorum germinacin de una espora 12 hrs
despus de la inoculacin 3,500x 65

FIGURA 24: Phialophora malorum tubos germinativos 72 hrs 1,500x. 65

FIGURA 25: Phialophora malorum micelio desarrollndose sobre el
corin a las 96 hrs 750x. 65

FIGURA 26: Phialophora malorum micelio sobre huevos 120 hrs
despus de la germinacin 750x. 65

FIGURA 27: Parte interna del corin con micelio de a Phialophora malorum
los 18 das 750x. 65

FIGURA 28: Quiste cubierto de micelio de Phialophora malorum a
los 28 das. 65

FIGURA 29: Porcentaje de quistes infectados. 66



FI GURA 30: Acremonium incrustatum conidiforo y micelio sobre
el corin 2,000x. 68

FIGURA 31: Huevo enrollado de micelio de Acremonium incrustatum 500x. 68

FIGURA 32: Micelio de Acremonium incrustatum interior del quiste 500x. 68

FIGURA 33: Quiste cubierto de micelio Acremonium incrustatum 100x. 68


FIGURA 34: Testigo quiste de Globodera rostochienis 750x. 68

FIGURA 35: Testigo huevos de en el interior del quiste de
Globodera rostochiensis 500x. 68

FIGURA 36: Paecilomyces carneus conidiforo 2,000x. 69

FIGURA 37: Paecilomyces carneus cadenas de conidios y micelio
sobre el quiste 750x. 69

FIGURA 38: Micelio de Paecilomyces carneus sobre la masa
de huevos 750x. 69

FIGURA 39: Quiste cubierto por micelio y conidiforos de Paecilomyces
carneus 150x. 69

FIGURA 40: Testigo quiste sano 100x. 69

FIGURA 41: Huevos de Globodera rostochiensis en el interior
del quiste 500x. 69

FIGURA 42: Phialophora malurum grupo de esporas 1,500x. 70

FIGURA 43: Espora y micelio de Phialophora malurum sobre el quiste 100x. 70

FIGURA 44: Micelio de Phialophora malurum sobre el corin 200x. 70

FIGURA 45: Micelio de Phialophora malurum en la masa de huevos 750x. 70

FIGURA 46: Micelio de Phialophora malurum en la masa de huevos y
corin 500x. 70

FIGURA 47: Quiste cubierto por micelio de Phialophora malurum 150x. 70

FIGURA 48: Testigos de Globodera rostochiensis 250x. 71

FIGURA 49: Conjunto de huevos de Globodera rostochiensis en el interior
del quiste 500x. 71


Aislamiento y evaluacin de hongos nematfagos asociados a quistes de
Globodera rostochiensis (Woll.) en la regin del Cofre de Perote.

Nez Snchez, Angel Enrique. Facultad de Ciencias Biolgicas Agropecuarias, Universidad de
Colima.
RESUMEN

El nematodo dorado Globodera rostochiensis es una de las principales plagas en el
cultivo de la papa Solanum tuberosum a nivel mundial; en Mxico se encuentra
extendido prcticamente en toda las regiones donde se cultiva. Diversas especies de
hongos funcionan en la naturaleza como reguladores de poblaciones, sin embargo sobre
este nematodo pocas especies se conocen. Los objetivos de este trabajo fueron aislar y
determinar los hongos parsitos de G. rostochiensis en cultivos de papa de la regin del
Cofre de Perote, Veracruz, Mxico y describir el proceso de infeccin sobre los quistes
de especies seleccionadas.
Se tomaron muestras de suelo de seis localidades (Conejos, Tembladeras, Rancho
Nuevo, Escobillo, Pescados y Los Altos). Los quistes se obtuvieron mediante la tcnica
del flotador de Fenwick, se cuantificaron. La cantidad de quistes obtenida fue de 300
hasta 2216 quistes/kg de suelo. De cada muestra se tomaron al azar 100 quistes
jvenes para aislar hongos parsitos. El parasitismo natural obtenido del total de
muestras trabajadas fue de 3.5%. Se obtuvieron 21 cepas de hongos: Aspergillus sp.
(1), Chetomidium sp. (1), Cladosporium sp. (3), Drechslera sp. (1), Fusarium sp. (1),
Micelia sterilia (1), Pteroconium sp. (1), Trichocladium asperum (2), Ulocladium atrum
(1), Acremonium incrustatum (1), Paecilomyces carneus (5), Phialophora malorum (1),
Phialophora sp. (2).

Acremonium incrustatum, Paecilomyces carneus y Phialophora malorum, fueron
seleccionados para estudiar el proceso de infeccin. En los quistes inoculados con A.
incrustatum y P. carneus se encontr evidencia de germinacin, penetracin y desarrollo
del micelio sobre el corin y en los huevos, la capa vitalina se separ y se observ
vacuolizacin en la superficie de los huevos y el muclago desapareci; los conidiforos
emergieron del quiste, y se formaron las primeras esporas a las 72hrs. Sin embargo, en
los quistes inoculados con P. malorum no se observ la germinacin de las esporas
hasta 5 das despus de la inoculacin, el micelio dentro de los quistes continu su
crecimiento y 15 das despus se encontraron algunos quistes negros, esto debido a que
gran cantidad de micelio estaba desarrollado en el interior del quiste, posteriormente
entre los 18-20 das se observ su esporulacin. A. incrustatum y P. carneus pueden ser
considerados buenos candidatos para usarlos en pruebas de control biolgico a nivel de
parcelas experimentales, por la velocidad para infectar y destruir los quistes.

Palabras clave: Control biolgico, papa, nematodo enquistado, Globodera rostochiensis,
hongos nematofagos.


1
I solation and evaluation of nematophagus fungi associated to cyst of
Globodera rostochiensis in the region Cofre de Perote.

Nez Snchez, Angel Enrique. Facultad de Ciencias Biolgicas Agropecuarias, Universidad de
Colima.

ABSTRACT


The golden cyst nematode Globodera rostochiensis is one of the main pest in the
crop potato Solanum tuberosum to world level; in Mexico is extended practically in the
whole regions where it cultivated. Diverse species of fungi work in the nature like
controllers of populations, however on this nematode few species know. The objectives
of this work were isolate and determine parasites fungi parasites of G. rostochiensis in
cultivation potato of the region of Cofre de Perote, Veracruz, Mxico and describe the
process of infection on the cysts of selected species.
Were taken samples of soil of six localities (Conejos, Tembladeras, Rancho
Nuevo, Escobillo, Pescados and Los Altos). The cysts were obtained by means of the
technique of the float of Fenwick, were quantified. The amount of obtained cysts was
from 300 up to 2216 cysts/kg soil. From each sample taken 100 young cysts at random
in order to isolate parasites fungi . The natural parasitism obtained of the total of
worked samples was from 3.5%. 21 stumps were obtained: Aspergillus sp. (1),
Chetomidium sp. (1), Cladosporium sp. (3), Drechslera sp. (1), Fusarium sp. (1),
Micelia sterilia (1), Pteroconium sp. (1), Trichocladium asperum (2), Ulocladium atrum
(1), Acremonium incrustatum (1), Paecilomyces carneus (5), Phialophora malorum (1),
Phialophora sp. (2).
Acremonium incrustatum, Paecilomyces carneus and Phialophora malorum, were
selected to study the process of infection. In the cysts inoculated with A. incrustatum
and P. carneus was evidence of germination, penetration and mycelium was
development on the chorion and in the eggs, the vitelline membrane separated and was
observed vacuolization in the surface of the eggs and the mucilage disappeared; the
conidiophore emerged of the cyst, and they were formed the first spores to the 72hrs.
However, in the cysts inoculated with P. malorum was not observed the germination of
the spores up to 5 days after the inoculation, the mycelium inside the cysts continued its
growth and 15 days later were some black cysts, this because great amount of
mycelium was developed inside the cyst, later on between the 18-20 days their
sporulation was observed. A. incrustatum and P. carneus could be considered good
candidates to use them in tests of biological control to level of experimental parcels, for
the speed in order to infect and destroy the cysts.

Key words: Biological control, potato, golden cyst nematode, Globodera rostochiensis,
nematophagus fungi.



2
I.- INTRODUCCIN


La papa, Solanum tuberosum L., es originaria de Sudamrica de la regin de los
Andes y es uno de los cultivos ms extendidos en el mundo (FAO, 1996). Entre los
parsitos que la afectan, los nematodos son muy importantes; en Norteamrica ms de
20 especies de nematodos han sido registrados asociados al cultivo de papa
(MacGuidwin, 1993). Globodera rostochiensis (Woll.) es uno de los nematodos que
causa ms estragos en la mayora de las zonas productoras de papa (Eppo, 1994).

Globodera rostochiensis es un nematodo endoparsito sedentario, con alta
capacidad de reproduccin y sobrevivencia ya que las hembras estn cubiertas por una
capa dura (corin) formando un quiste, de manera que los huevos estn bien
protegidos. Los quistes permanecen normalmente en el suelo hasta 20 aos. Cada
quiste joven contiene entre 200-500 huevos (Evans y Trudgill, 1993; Franco, 1994).
Este nematodo se ha registrado en ms de 90 especies de Solanceas, aunque los
hospederos ms susceptibles, adems de la papa, son el tomate, Lycopersicum
esculentum Mill. y la berenjena, Solanum melongena L. (Greco y Moreno, 1992).

Afecta el sistema radicular de la planta, disminuyendo la cantidad de minerales
absorbidos (fsforo, potasio, magnesio y calcio) y su translocacin; adems aumenta la
concentracin de sodio (Perry, 1996; Trudgill, 1991). De manera que al daar a las
membranas de la raz de la planta, facilita la entrada de hongos y bacterias (Evans y
Trudgill, 1992). El efecto de este nematodo en el rendimiento del cultivo, vara de
acuerdo a la densidad de poblacin. El lmite de tolerancia establecido en Europa hacia
los nematodos formadores de quistes, para no afectar el rendimiento, es de 1.9
huevos/g de suelo o de hasta 40 quistes/kg de suelo.


3
Cuando el nivel poblacional del nematodo en el suelo alcanza 16 y 32 huevos/g
de suelo, el rendimiento de la papa puede ser reducido entre 20 y 50%
respectivamente; y puede disminuir completamente cuando la poblacin inicial del
nematodo es de 64 huevos/gr de suelo (EPPO, 1994; Perry, 1996; Greco, 1993).

Debido a la fuerte infestacin de G. rostochiensis, en la regin de Perote, donde
se han registrado en promedio 1000 quistes/kg de suelo, la Secretaria de Agricultura
estableci la Cuarentena Interior Permanente No. 17 (SARH, 1987), que comprende
6,000 hectreas dedicadas al cultivo de la papa. La alta densidad de la poblacin del
nematodo, obliga a la aplicacin de agroqumicos, utilizando hasta 50 kg de nematicidas
por hectrea al momento de la siembra; las consecuencias son: el incremento en los
costos de produccin, aumento de los riesgos de la salud humana por los residuos
qumicos (Gommers et al., 1992), la contaminacin del suelo y mantos freticos y el
desarrollo de resistencia del nematodo a los nematicidas (Whitehead et al., 1994).

El control de los nematodos enquistados sobre el cultivo de la papa, se realiza con
el uso de los nematicidas qumicos, sin embargo, por razones del peligro que
representan para la salud y las dificultades en el desarrollo comercial han llevado a la
bsqueda de alternativas de control que reduzcan los riesgos del uso de los productos
qumicos. Un acercamiento lgico a esta alternativa, es la implementacin de prcticas
que incluyan la aplicacin de microorganismos antagonistas, que suceden de forma
natural o que pueden ser establecidos en el desarrollo de un ecosistema (Sikora, 1992).

El hecho, de que los niveles de parasitismo de hongos sobre los nematodos
enquistados, donde son introducidos, sea mucho menor, que en los centros de origen,
pareciera indicar, que estos fitopatgenos no tienen enemigos naturales y que el control
biolgico para ellos no tendra grandes expectativas (Sayre et al., 1991; Sikora, 1992;
Dackman y Norbring-Hertz, 1992).

4
Sin embargo en la naturaleza las poblaciones de los animales mantienen una
fluctuacin cclica, cuyo nmero varia ao con ao y de generacin en generacin. Los
nematodos son muy pequeos y sus hbitats han sido raramente estudiados. En este
aspecto los nematodos no se diferencian de los animales (Varley et al. 1973; Knipling,
1979; Berryman, 1981).

Hay dos factores que gobiernan la abundancia de los animales; una, que opera
independientemente de la densidad y otra, que depende de la densidad. Pero en el
suelo, la ms comn, son los factores que actan independientemente de la densidad.
Los factores que ms influyen sobre las poblaciones de los nematodos fitoparsitos son
la humedad y la temperatura, as como, las prcticas agrcolas, adems de los parsitos
facultativos y depredadores (Stirling, 1991; Varley et al., 1973; Knipling, 1979;
Berryman, 1981).

Estas fuerzas son impredecibles, pero juegan un importante papel en la
determinacin de las reas ecolgicas, en las cuales estos organismos pueden existir
permanentemente, y determinan la fluctuacin de la poblacin (Stirling, 1991). Los
factores densodependientes son la clave para los procesos regulatorios del tamao
poblacional de las especies. Esta accin tiende a crear un efecto estabilizador sobre una
poblacin que esta arriba de su punto de equilibrio, de manera que la reduce y si la
poblacin est por debajo de ese punto, la aumenta.

Como consecuencia de lo anterior, los hongos habitantes del suelo de la Clase,
Hyphomycetes, consistentemente colonizan quistes de nematodos fitoparsitos y que
son, en gran medida, la causa del control de las poblaciones de estos nematodos,
logrando penetrar al quiste, destruir los huevecillo y a las larvas, por varios medios
(Dackman y Nordbring-Hertz, 1985; Gintis et al., 1983; Morgan-J ones y Rodriguez-
Kabana, 1988).

Esto, hace suponer, que si bien es cierto, que el nematodo en quistado G.
rostochiensis, no se le han reportado enemigos naturales fuera de su centro de origen,
5
segn Tribe (1980), no se puede concluir que este exento de microorganismos parsitos
y depredadores.

El uso de microorganismos para el control de plagas y enfermedades de las
plantas por otros microorganismos es una alternativa al uso del control qumico; y
estimula la bsqueda de agentes de biocontrol (Inbar y Chet, 1997; Lindow y Wilson,
1998). Los organismos que abundan en el suelo, particularmente con potencial
antagonista, han sido propuestos como un marcador biolgico til para la sanidad del
ecosistema (Niles y Freckman, 1998; Stork y Eggleton, 1992; Yeates, 1994) y han
impulsado el estudio de los enemigos naturales para el control de nematodos (Sayre et
al., 1991), y que en alguna etapa del ciclo de vida los utilizan como una fuente de
nutrientes, y desempean un importante papel en el reciclaje del carbono, nitrgeno y
otros elementos de la biomasa.

El aumento de la poblacin de nematodos en el suelo va acompaada por
epizootias de hongos antagonistas (Sikora, 1992; Stirling et al., 1990); de esta forma
atacan a los nematodos continuamente en todos los suelos (Uziel y Sikora, 1992). Las
plagas de la raz son generalmente raras en los ecosistemas no perturbados o naturales,
mientras que en los sistemas de produccin convencionales, los patgenos del suelo y
las enfermedades que causan, son severas y a menudo, un factor limitante de la
produccin (Cook y Baker, 1983). Los hongos nativos son reconocidos como
contribuidores comunes para la supresin de plagas en sistemas de cultivo (Dackman y
Norbring-Hertz, 1992).

El control biolgico es efectivo cuando un antagonista tiene un alto grado de
adaptabilidad al medio donde se va a establecer (Lindow y Wilson, 1998).
Generalmente, el suelo no estril, es considerado un ambiente hostil para la
introduccin de microorganismos, incluyendo agentes de control biolgico, ya que los
microorganismos nativos frecuentemente son rivales superiores de lo contrario son
antagonistas (Cook y Baker, 1983).

6
El nematodo dorado de la papa Globodera rostochiensis representa un grave
problema en la Regin Cofre de Perote, sin embargo poco es el conocimiento, sobre la
diversidad de especies de hongos nematofagos asociados y el potencial de estos como
agentes de control biolgico.

De tal forma que la investigacin parte de la siguiente hiptesis

HIPTESIS

Las poblaciones de hongos nativos de la zona productora de papa en el Cofre de
Perote tienen actividad nematofaga contra G. rostochiensis.

OBJ ETIVOS

Evaluar el estado actual de la poblacin de G. rostochiensis en las localidades de
estudio en la regin Cofre de Perote.

Aislar e identificar hongos nativos parsitos de quistes de G. rostochiensis en la
regin del Cofre de Perote, Veracruz.

Evaluar la patogenicidad de hongos nativos sobre quistes de G. rostochiensis, in
vitro.









7
II.-ANTECEDENTES


El nematodo dorado se considera originario de los pases andinos (Per y Bolivia).
Se detect por primera vez en Alemania en 1881 y fue descrito en 1923 por
Wollenweber (Franklin, 1971). La introduccin original del nematodo a Europa fue muy
probablemente durante el establecimiento del cultivo en 1850 y se dispers a pases de
Asia (India, Pakistn J apn y Malasia), frica (Egipto, Marruecos, Sierra Leona y
Sudfrica), Australia y centro y norte de Amrica, probablemente con el comercio de
tubrculos de papa para semilla. Actualmente se registra en 65 pases (J ones, 1976)
(Fig.1).

Otro aspecto que influye en la magnitud del dao ocasionado por este nematodo,
son los cinco patotipos identificados; (Ro1, Ro2, Ro3, Ro4, Ro5) a nivel mundial (Evans
y Trudgill, 1993; Greco, 1993).

Globodera pallida (Stone) es otra especie de nematodo que forma quistes,
llamada quiste blanco de la papa y al igual que G. rostochiensis causa graves daos. Se
ha registrado en el centro y oeste de Europa. En Amrica se le conoce de Colombia,
Ecuador y gran parte del Per. (Evans y Trudgill, 1993; Greco, 1993). Seis patotipos se
han determinado en G. pallida: tres en Europa (Pa1, Pa2, Pa3) y tres en la zona andina
(P4A, P5A, P6A). Ambas especies se tienen registradas para el sur del Per, Bolivia, y
Argentina, donde han cohabitado con sus hospederos por cientos de aos (Stone,
1986). Sin embargo solo se ha registrado G. rostochiensis en Chile, Venezuela, Centro
Amrica, Mxico y EUA (Stone, 1979; Sosa-Moss, 1986).






8

9
La papa que se produce en Mxico se siembra en 25 estados de la Repblica en
tres ciclos agrcolas otoo-invierno, invierno-primavera y primavera-verano en este
ltimo se hace el 80% de la siembra. La superficie cultivada es de alrededor de 70 mil
hectreas aproximadamente, con una produccin de 1200,000 toneladas los principales
estados productores de papa son: Chihuahua, Sinaloa, Sonora, Guanajuato, Mxico,
Nuevo Len, Coahuila, Puebla y Veracruz (ASERCA, 1999).

La produccin comercial en la regin montaosa de Mxico se concentra entre los
2,000-3,000 m de altitud, en zonas de temporal y se distingue en seis reas: Puebla,
Toluca, Sierra Tarasca de Michoacn, La Malinche en Tlaxcala, Pico de Orizaba y Cofre
de Perote, que en conjunto comprenden una superficie de 25,000 hectreas
aproximadamente (CONPAPA, 1994).

Se tienen registros de Globodera spp. de muestras de suelo tomadas de un carro
de carga americano utilizado para transporte de papas en el centro de Mxico en 1953.
Sin embargo la presencia de G. rostochiensis fue confirmada en Guanajuato por Iverson
(1972); por lo cual se inici la inspeccin de las zonas productoras de papa. Hasta 1986
se tena registrado el nematodo dorado en 46 zonas de 9 estados; Mxico, Puebla y
Tlaxcala son los estados ms infectados (Sosa-Moss, 1986). Actualmente esta disperso
en la mayora de las zonas en las que se cultiva papa en Mxico (Cuadro 1).









10
Cuadro 1. Zonas ms infestadas con nematodo dorado de la papa Globodera
rostochiensis en Mxico.
ESTADO MUNICIPIO
Coahuila Arteaga

Distrito Federal Delegacin Tlalpan y Delegacin Milpa Alta

Hidalgo Metztitn

Guanajuato Len, San Francisco del Rincn, Silao, Romita, Pursima del
Rincn.

Estado de Mxico Zinantepec, Temascaltepec, Calimaya, San Antonio de la Isla,
Santa Mara Rayn, Amanalco de Becerra, San Bartolo
Morelos, Naucalpan, Donato Guerra, Lerma, San Felipe del
Progreso, Valle de Bravo, J oquincingo y Metepec.

Nuevo Len Galeana

Puebla Ixtacamaxtitln, Saltillo Lafragua, Tlapanala, Guadalupe
Victoria, Atzitzintla, Tehuacan, Chalchicomula de Sesna,
Huitziln, de Serdn y Tlachichuca.

Tlaxcala Cuapiaxtla, Altzayanca, El Carmen, Huamantla, Terrenate,
Tlaxco y Santa Ana Chiautempan

Veracruz Altotonga, Ayahualulco, Perote y Xico

2.1. Sntomas y dao ocasionado por G. rostochiensis

El sntoma tpico de la presencia de nematodo dorado de la papa en el suelo es la
marchites temprana en las plantas de papa asociado con estrs hdrico (Evans y Stone,
1977). Como consecuencia de la alimentacin del nematodo, el dao histolgico es
manifestado por necrosis de las clulas de las races, perforadas por los estados
juveniles larvarios, cuando stos se detienen en el lugar definitivo de alimentacin, las
clulas de las races alrededor de la cabeza del nematodo sufren una profunda
transformacin.
11
La hembra se adhiere y alimenta cerca del cilindro vascular, dando origen a
unidades multinucleadas denominadas sincitio (hiperplasia de las clulas) cerca de la
cabeza del nematodo, las que se forman por incorporacin de un conjunto de las clulas
adyacentes cuyas paredes se han disuelto.

La formacin del sincitio ocasiona una interrupcin de los vasos cribosos y leosos
limitando notablemente la funcionalidad de las races. Las plantas de papa atacadas por
el nematodo presentan crecimiento y rendimiento reducidos, la senectud se anticipa y
en suelos muy infestados, el follaje presenta un ligero amarillamiento; las hojas
individuales de las plantas infectadas son pequeas por la pobre divisin celular. Por
consiguiente las plantas infestadas tienen una mayor proporcin de materia en la pared
celular, el volumen de materia seca es mayor que en las plantas sanas.

La presencia de nematodos enquistados causa la reduccin fotosinttica (por la
ruptura del translocamiento de nutrientes, la relacin planta-agua); incrementa la
materia seca, la adhesin de races y por consiguiente la produccin de menos tallos y
hojas pequeas poco suculentas y mueren tempranamente, hay poca formacin de
nuevas hojas, el nmero de tubrculos decrece.

Las altas densidades del nematodo reducen el rendimiento y es ms difcil decir
debido a que combinacin, la reduccin del crecimiento de la planta es causado por una
reduccin de la absorcin, incrementando el contenido de materia seca, la necrosis del
follaje y la muerte temprana del mismo.

El decremento de agua absorbida por las plantas altamente infestadas por el
nematodo debido al mal funcionamiento del sistema radicular, tiene como consecuencia
el desprendimiento de las hojas. Finalmente la muerte ocurre cuando el nivel de agua
continua decreciendo y se prolonga la resistencia estomtica (Evans y Trudgill, 1992).

12
Las larvas se vuelven activas a 10C y la mxima invasin de las races se realiza
a 16C. Temperaturas del suelo de 26C, en perodos prolongados limitan el desarrollo
del nematodo y reducen su reproduccin.

El nematodo dorado de la papa se desarrolla bien en los suelos arcillosos
medianos a pesados, bien drenados o arenosos con aireacin, suelos sedimentados o de
musgo con un contenido de humedad de 50 a 75% de capacidad de campo. El pH del
suelo tolerado por la planta de papa, es aparentemente aceptado por los nematodos
(Stone, 1979). En ausencia del cultivo de la papa, en zonas de clima templado, el nivel
poblacional disminuye en un 50% cada ao, mientras que en pases con clima clido,
como Marruecos, puede ocurrir una reduccin de casi 100% (Schuster y Sikora, 1992a).

En pases con clima clido, la superficie del suelo, en el verano, se calienta mucho
y los nematodos que se encuentran en los primeros 5-10 cm mueren naturalmente. Por
lo tanto, las prcticas agrcolas en la preparacin del suelo en esta poca del ao,
reducen sensiblemente el nivel poblacional del parsito. Los huevos enquistados toleran
la desecacin y pueden sobrevivir 20 aos o ms en suelos bajo condiciones extremas
del medio ambiente. Cuando la cosecha se realiza al final del ciclo biolgico de la papa,
todos los nematodos que han penetrado en las races alcanzan el estado de quiste,
logrando un nivel poblacional muy alto. No ocurre as cuando se cosecha temprano la
papa; de esta forma muchos nematodos se encuentran todava en los estados juveniles
y el nivel poblacional en el suelo permanece bajo.

La diseminacin local o a gran distancia se realiza por la movilizacin de suelo
infestado, como por ejemplo el que se adhiere a la maquinaria, semillas o envases para
almacenaje. Los tubrculos contaminados proporcionan durante la siembra, condiciones
ideales para la diseminacin y constituyen el factor principal en la distribucin mundial
del nematodo.


13
En la ausencia de un hospedero viable en suelos infectados los quistes del
nematodo de la papa pueden persistir por 20-30 aos. Dentro del quiste pueden pasar
al segundo estado juvenil (J 2) o bien entrar en extrema inactividad conocida como
letargo.

Generalmente el letargo se presenta algunas veces antes del establecimiento del
prximo cultivo de papa y la mayora de los J 2 solo entran en letargo durante el 1er
ao. Despus de esta estimulacin la mayora de los juveniles eclosionar. As las
poblaciones del nematodo de la papa son introducidas a nuevas regiones y pueden
adaptarse a diferentes etapas de desarrollo del cultivo hospedante con 2-3 aos de
establecimiento (Mulvey y Stone, 1976).

La cantidad de J 2 que eclosiona es variable. En la ausencia de una planta
hospedante, algunos juveniles eclosionan espontneamente en ciertas pocas del ao,
cuando la temperatura del suelo y la humedad sean adecuadas. En suelos de Europa
estas eclosiones espontneas son en promedio de 30-33% anualmente, pero esto es
influenciado por las condiciones ambientales (Mulvey y Stone, 1976).

En general se ha registrado mayor eclosin en suelos arenosos que en suelos de
turba y arcilla (Berry et al., 1977). La textura de suelos arcillosos sedimentados puede
estimular la eclosin de la poblacin del nematodo en un 32%, cuando hay presencia de
restos de races de un cultivo, pueden estimular la eclosin de los J 2 en un 60-80%.

Como parte de la estrategia de sobrevivencia del nematodo dorado de la papa,
nunca eclosiona el 100% de las larvas de los quistes, algunos juveniles llegan a
permanecer en letargo por varios aos antes de eclosionar.

La raz de la planta hospedante tambin influye en las proporciones de
multiplicacin, generalmente sistemas radiculares grandes toleran altos niveles de
invasin.
14
En un campo, el primer foco de infeccin se manifiesta en una pequea rea
circular que luego se agranda hasta afectar toda la superficie. El nematodo, por accin
propia, puede moverse 1-2 m/ao; sin embargo, el movimiento pasivo es ms rpido. El
suelo adherido a los implementos agrcolas, zapatos y patas de los animales, puede
contener quistes, favoreciendo la diseminacin de los nematodos dentro de la misma
unidad de produccin o a otras unidades. Todo sistema de riego que favorezca la
escorrenta del agua, as como las inundaciones pueden ser importantes.

Sin embargo, el comercio de la papa, y especialmente los tubrculos utilizados
como semilla, son la forma ms eficaz de diseminar los quistes entre estados, pases y
continentes. La limpieza de la maquinaria agrcola, uso de tubrculos-semilla sanos y
medidas cuarentenarias son muy eficaces para evitar la diseminacin de los nematodos
(Matos y Canto-Senz, 1993).

2.2. Clasificacin taxonmica de Globodera rostochiensis (Mulvey y Stone,
1976).

Phylum: Nematelmintos
Clase: Nematoda
Subclase: Secernentea
Orden: Tylenchida
Suborden: Tylenchinae
Superfamilia: Tylenchoidea
Familia: Heteroderidae
Gnero: Globodera
Especie: rostochiensis






15
2.3. Caractersticas morfolgicas de Globodera rostochiensis

Hembras cuerpo esferoidal a piriforme, sin cuello protuberante y carente de
protuberancia en el cono terminal; dimetro longitudinal de 420-640 m y ecuatorial de
270-430 m. Longitud del estilete de 22-24 m, con un ngulo del ndulo dorsal del
estilete de 136. Distancia del extremo de la cabeza al cono excretor de 105-175 m.
Altura vulvar de 6-11 m. Distancia del ano al margen ms cercano de la fenestra
(reas membranosas de pared delgada sobre el cono vulvar) de 39-80 m.

Quistes color caf dorado a oscuro, superficie arrugada, formando patrones
acanalados, lo cual puede ser diferente sobre el cono vulvar, circunfenestrados y con
ano subterminal, dimetro longitudinal de 450-999 m, dimetro ecuatorial de 250-810
m, dimetro longitudinal/ecuatorial de 1-1.4 m; distancia del ano al margen ms
cercano de la fenestra de 29-116 m, y radio de Granek de 2-7 m, con 16-31 estras
entre el ano y fenestra vulvar (Figs. 2 a 5).

Huevos elipsoidales, hialinos de 95-115 x 42-48 m. Larvas de 370-470 m, cuya
anchura a la mitad del cuerpo de 19-26 m. Longitud del estilete de 21-23 m, distancia
de la base de los ndulos a la desembocadura de la glndula esofgica dorsal de 5-6.7
m. Longitud de la cola de 44-57 m, y la porcin hialina de la cola 18-30 x 16-23 m.
Glndula esofgica dorsal 2.2-2.5 m disco oral subcircular con sectores labiales.

Machos con cuerpo vermiforme con torcedura axial de 890-1270 x 22-36 m y de 31-
46 m de ancho a la mitad del cuerpo, disco labial de bajo perfil. Estilete fuerte de 25-
27 m con protuberancias bien formadas. Distancia de la base de los ndulos a la
desembocadura de la glndula esofgica dorsal de 5-7 m. Cola de 1.6-6.7 m; una
bolsa seminal, y una sola espcula en la punta (Franklin, 1971).



16


Figs. 2-5. Globodera rostochiensis. 2:Cuello y puntuaciones del quistes 750x; 3: Corte
transversal del quiste, corin y masa de huevos 750x; 4:Cono vulvar 500x;
5:Estras del corin 1000x.












17
Despus de la siembra, las races de la planta de papa, producen exudados
radicales que estimulan la eclosin de los huevos (cada quiste contiene de 200-500
huevos) de los cuales emergen los juveniles de segundo estado. El nematodo al salir
del huevo, se encuentra en un estadio infectivo, migra hacia el pice radical y despus
de recorrer algunos milmetros de la raz, el juvenil se fija a las races y contina su
desarrollo como sedentario, pasando por tres estados juveniles (segundo, tercero y
cuarto) antes de lograr el estado adulto (Mulvey y Stone, 1976). El periodo de tiempo
que el nematodo necesita para cumplir una generacin, desde la penetracin del juvenil
de segundo estado hasta la formacin de quistes con huevos, es de 45-60 das, segn
las condiciones ambientales. Si se considera una temperatura de 10C como la mnima a
la cual el nematodo puede comenzar su desarrollo, puede desarrollarse una generacin
despus de 40 das (Fig. 6).

En Globodera rostochiensis existe un dimorfismo sexual muy marcado, el
segundo estado juvenil es mvil y vermiforme; en las hembras el tercero y cuarto
estado juvenil, as como las adultas, son inmviles y abultadas. La hembra posee un
aparato reproductivo muy desarrollado y despus de ser fecundada produce gran
cantidad de huevos que retiene en el interior del cuerpo. La hembra adulta adquiere
una coloracin amarillenta, luego se transforma en quiste. El macho adulto es mvil y su
capacidad patognica no ha sido demostrada. El tamao de los individuos es afectado
por el husped y por el nivel poblacional del nematodo, siendo ms pequeos cuando la
poblacin es elevada o el husped se encuentra fuertemente daado (Greco et al.,
1982).

Las hembras fecundadas aumentan de tamao y se vuelven subesfricas, lo cual
depende probablemente de las caractersticas de la planta hospedante y de la nutricin
durante su desarrollo. En comparacin con la hembra madura el quiste tiene una
cutcula ms gruesa y de color castao oscuro para proteger los huevos contenidos.

2.4. Biologa
18




Fig. 6. Ciclo biolgico del nematodo Globodera rostochienis.





19
Globodera rostochiensis posee un promedio de 21.6 estras y G. pallida 12 (Stone,
1979). A veces, el nmero promedio puede ser de 15, lo cual causa confusin; en este
caso, es necesario identificar la especie. A la madurez tanto G. rostochiensis como G.
pallida se convierten en quistes redondeados de color castao oscuro, con un diseo
irregular de puntuaciones en la superficie del cuerpo. El largo del cuerpo de las larvas,
del estilete y de la cola son generalmente mayores en G. pallida que en G. rostochiensis
(Mulvey y Stone, 1976).

Los quistes no se alimentan y se desprenden fcilmente de las races o de los
tubrculos. Los huevos, al final del desarrollo embrionario, aproximadamente despus
de 2-3 semanas, contienen juveniles de segundo estado.

Las condiciones que lo favorecen son una temperatura de 20-26C, una humedad
en el suelo y pH de 2.6-4. Cuando las condiciones ambientales son desfavorables, como
en casos de alta temperatura (28C), sequas, cuando la planta se aproxima al final del
ciclo, o bien las races estn muy daadas; las hembras se transforman temprano en
quiste y el ciclo es ms corto; en cambio si la temperatura del suelo es menor de 20C,
el ciclo de vida es ms largo. Estudios comparativos han demostrado que G. pallida se
desarrolla mejor que G. rostochiensis a bajas temperaturas (Greco et al., 1982).

2.5. Mtodos de control de nematodos fitoparsitos

Con el fin de evitar que el ataque de nematodos afecte el crecimiento y desarrollo
de las plantas cultivadas, es necesario efectuar una evaluacin de los niveles de
poblacin que desde un punto de vista econmico y ecolgico justifique, dependiendo
de la condicin especfica de cada sistema productivo, la inversin que implica la
utilizacin de uno o varios de los mtodos de control.



20
2.5.1. Control qumico

En pases europeos donde se cultiva papa, la aplicacin de nematicidas esta
dirigida a los nematodos formadores de quistes (Mulder et al., 1990). Winslow y Willis
(1972) indican que, en general, el tratamiento con nematicidas para el control de G.
rostochiensis no ha sido econmicamente recomendable, debido a sus altos costos, los
implementos especiales requeridos para su aplicacin y la fitotoxicidad de algunos de
ellos. Muchos de los nematicidas inician su actividad cuando el crecimiento de la planta
es avanzado, sin embargo, hacen notar que cuando el suelo esta mojado y fro los
materiales o substancias aplicadas tienden a difundirse menos, a degradarse y a
disminuir su efectividad aunque las condiciones sean ptimas, la eliminacin de las
larvas casi siempre es incompleta.

Los principales nematicidas utilizados son el DD (1,3 dicloropropeno, 1,2-
diclopropano con hidrocarbono, el DB (etileno dibromo) y el DBCP (1,2 dibromo-3
cloropropano) los cuales son altamente txicos y solubles en agua. El DD ha sido el
nematicida mas ampliamente utilizado y es fitotxico. El uso del DBCP fue suspendido
en California durante 1977 y cancelado su registro en diversos lugares de Estados
Unidos, ya que se demostr que los mantos freticos estaban contaminados con
nematicidas como el EDP y el DD (Whitehead et al., 1994).

En Mxico los nematicidas que ms se utilizan son los carbamatos, aldicarb
(Temik) carbofuran (Furadan) y oxamyl (Vydate) (CONPAPA, 1994). Los nematicidas
adems de ser costosos sus residuos pueden permanecer en el tubrculo hasta despus
de la cosecha (Gommers et al., 1992).





21
2.5.2. Control fsico

Una tcnica no contaminante es el uso de la energa solar, la cual consiste en
calentar el suelo hasta una temperatura letal para los estados mviles del nematodo. El
efecto invernadero que se produce bajo el plstico permite que la temperatura del suelo
alcance valores de 5-12C, superiores a los del aire, esto es letal para los nematodos
hasta 20-30 cm de profundidad. Este mtodo es efectivo con niveles poblacionales
medios-bajos del nematodo del quiste de la papa (25 huevos/g de suelo).

Sin embargo es poco utilizado ya que se requiere que el terreno este libre de
cultivos en el verano y que la temperatura sea muy elevada, lo cual no es factible donde
se cultiva papa ya que las temperaturas a lo largo del ao son muy bajas. El efecto
detrimente en otros agentes de control biolgico en el suelo tiene que ser tambin
considerado (Mani et al., 1993).

2.5.3. Inundacin Artificial y Natural

Las inundaciones matan a los nematodos del suelo, pero las inundaciones
artificiales resultan ser una herramienta costosa en el control de nematodos, an para
los productores comerciales, y no es recomendable para los pequeos productores
(Bridge, 1996). En Mxico, la mayora de la superficie dedicada al cultivo de papa se
localiza en zonas de montaa bajo rgimen de temporal (CONPAPA, 1994).

2.5.4. Rotacin de cultivos

La rotacin de cultivos es efectiva en la lucha contra G. rostochiensis, que tiene
un rango de hospedantes limitado, se pueden lograr buenos resultados cultivando papa
cada cuatro o cinco aos en suelos infectados. Estudios dirigidos en Bolivia demostraron
que la mejor secuencia despus de cultivar papa para reducir densidades de quistes, fue
cultivando cebada y frijol lima, por un ao, posteriormente barbechar y sembrar papa
otra vez (Canto-Senz y Mayer de Scurrach, 1993).
22

Para poder recomendar una rotacin efectiva, es necesario determinar el nivel
poblacional de los nematodos (Trudgill, 1991). El ciclo de siembra primavera-verano es
el ms favorable para la reproduccin del nematodo y ocasiona el dao ms grave, la
tasa de reproduccin de G. rostochiensis es en promedio de 39% con siembra de
primavera y el 8-9% con siembra en verano e invierno (Greco y Moreno, 1992).

2.5.5. Control gentico

El cultivar de papa juega un papel importante sobre la dinmica de Globodera
pallida y G. rostochiensis. Se conocen cultivares susceptibles a ambas especies y
cultivares resistentes o parcialmente resistentes a una sola de ellas, que afectan la tasa
de reproduccin de los nematodos. En presencia de cultivares resistentes los juveniles
de segundo estado salen del quiste, penetran en las races, pero no se desarrollan. A
veces, la reduccin poblacional, utilizando un cultivar resistente, puede ser mayor que
utilizando un cultivo no husped o dejando el suelo en barbecho. El uso de cultivares
resistentes ejerce una presin selectiva sobre el nematodo, debido a que no existen
cultivares resistentes a ambas especies o a todos los patotipos de la misma especie
(Greco y Moreno, 1992).

La resistencia a G. rostochiensis ha sido buscada en Solanum tuberosum,
subespecies andigena y la resistencia de los hbridos resultantes de las cruzas con S.
andigena, lo que ha hecho necesario continuar con las investigaciones teniendo en
cuenta al patotipo presente en cada regin, puesto que las variedades resistentes no se
comportan de igual manera con todos los patotipos existentes (Kirkham y Marshall,
1996).


23
incidencia de una especie o patotipo, pero favorece el desarrollo de la otra. Se ha
determinado que el uso continuo de un mismo cultivar resistente ocasiona la seleccin
de patotipos que antes no eran importantes.

Las razas se diferencian por su patogenicidad o por la habilidad que tienen de
multiplicarse en los clones con resistencia proveniente ya sea de S. tuberosum subsp.
andigena, S. multidissectum, S. vernei y S. kutzianum (Evans y Stone, 1977).

2.5.6. Plantas antagonistas y cultivos trampas

Muchas plantas poseen propiedades nematicidas; las ms reportadas son las
Tagetes spp. como las calndulas africanas T. erecta, calndula francesa T. patula, la
calndula sudafricana T. minuta, al igual que la mostaza y esprragos que al producir
elementos txicos son factibles para el control o reduccin de nematodos y otros en
ciertas circunstancias (Sukul, 1992).

Sin embargo pocas veces las legumbres son utilizadas por los productores,
porque los abonos verdes no generan ganancia directa y al usarlos solo para el control
de quistes de nematodos no ser econmicamente viable (Prot et al., 1992).

2.5.7. Legislacin del control

En los pases donde se encuentra presente el nematodo dorado de la papa, una
de las primeras prcticas llevadas acabo son las cuarentenas, ya que es la manera
inmediata de prevencin que impide la diseminacin del parsito (EPPO, 1997).



en el mismo campo, de manera que el uso de un cultivar resistente puede reducir la
Por otro lado, ambas especies o diferentes patotipos de ellas, pueden encontrarse
24
Vegetal establece cuarentenas en regiones afectadas, la cual comprende aspectos
oficiales que deben cumplirse para fomentar y proteger contra el ataque del nematodo
dorado a la produccin nacional de papa (siembra, cosecha, tratamiento, transporte y
movilizacin de semillas, entre otras).

Sin embargo, est cuarentena no se ha cumplido en la regin del Cofre de
Perote, ya que se continua sembrando papa en los campos abiertos y se siguen
eliminando reas de bosque para dicho cultivo.

El quiste de la papa puede difundirse con los tubrculos utilizados como semilla,
es necesario que la papa para semilla sea producida en reas donde estos parsitos no
estn presentes y debe ser certificada como libre de nematodos y otros patgenos. En
muchos pases el uso de semilla certificada es limitado; mucha semilla es producida por
los mismos agricultores o por otros de la misma zona, sin ningn tipo de control
fitosanitario (Trudgill, 1991).

2.6. Control biolgico de nematodos fitoparsitos

Varios aspectos del control biolgico de los nematodos parsitos de plantas han
sido revisados por Mankau (1981) y han impulsado, el estudio de los enemigos
naturales para el control de nematodos (Sayre y Walter, 1991). El manejo apropiado de
organismos antagnicos dispuestos a la proteccin de la planta contra patgenos
constituyen una forma de control biolgico y una alternativa para el control de
nematodos (Azcon Aguilar y Barea, 1997).

Organismos como hongos, bacterias, virus y protozoarios han sido identificados
como parsitos o predadores de nematodos (Dackman et al., 1992; Adams, 1990;
Deacon, 1991; Stirling, 1991).

Fitopecuaria de los Estados Unidos Mexicanos y su Reglamento en materia de Sanidad
Es por ello que la Secretaria de Agricultura, con base en la Ley de Sanidad
25
No obstante que las bacterias son el grupo ms abundante dentro de los
microorganismos del suelo, poco esfuerzo ha sido dirigido a su estudio como agentes
potenciales de control biolgico para nematodos (Sayre y Walter, 1991).

Diferentes bacterias se ha reportado asociadas con la cutcula, cavidad del
cuerpo, aparato digestivo y las gnadas de nematodos; sin embargo como lo seala
Sayre y Walter (1991) la naturaleza parastica de tales asociaciones es dudosa debido a
la ausencia de la aplicacin rigurosa de los postulados de Koch (Stirling et al., 1990).

Uno de los mayores problemas al utilizar bacterias como agentes de control
biolgico, es la dificultad de cultivarlas in vitro en cualquiera de los medios
bacteriolgicos estndar. Ni las clulas vegetativas ni las esporas del organismo pueden
ser cosechadas en cantidades suficientes para examinarlas extensivamente en el
laboratorio o para infestar suelos en los que se puedan realizar exmenes de campo a
gran escala con el fin de determinar la viabilidad del organismo como un agente de
control biolgico contra nematodos (Mankau, 1981).

2.6.2. Rickettsias

Son microorganismos intracelulares que fueron encontrados en especies de
quiste de nematodos: Heterodera goettingiana (Woll.) y G. rostochiensis por Shepherd
et al. (1972).

2.6.3. Nematodos Depredadores

Son importantes en la dinmica de poblacin de numerosas especies de
nematodos del suelo puesto que su biomasa en algunos suelos son sustanciales, sin
embargo, su papel en el control biolgico de nematodos fitfagos es poco conocido.
Los nematodos Monochida, Dorylaimida y Diplogasterroidea son considerados
como predadores y posibles agentes de biocontrol de nematodos parsitos de plantas.
El gnero Monochida ha llamado ms la atencin que cualquier otro depredador que
2.6.1. Las bacterias en el control biolgico de nematodos fitopatgenos
26
vive en el suelo, hay observaciones de laboratorio sobre la alimentacin de los
monochidos que concluye que estos depredadores no tienen eficiente habilidad de
alcance o tropismo hacia la presa (Nelmes y Mculloch, 1975).

Ciertas especies de Dorylaimida son abundantes en suelos, aunque su diversidad
de nmeros y especies parecen declinar en suelos removidos por frecuentes
operaciones agrcolas. Mientras muchas especies son omnvoras, un nmero sustancial
de especies son depredadoras. En general los hbitos alimenticios de este grupo de
nematodos son poco conocidos, su ciclo de vida tiende a ser relativamente largo y bajas
tasas de productividad por individuo.

2.6.4. Depredadores Heterogneos

Otro grupo importante de depredadores de nematodos son los caros Sayre et al.
(1991). Los colmbolos y caros estn entre los ms numerosos artrpodos del suelo, la
mayora de los colmbolos se alimentan de materia descompuesta de plantas, hongos,
humus y a veces son depredadores de nematodos (Mankau, 1981).

De manera similar, los caros de suelo muestran una variedad de hbitos
alimenticios, incluyendo la depredacin. Se ha demostrado que los colmbolos se
alimentan vorazmente de Heterodera y nematodos que viven libremente (Gilmore,
1970).
Adems su distribucin en el suelo difiere de la de los nematodos parsitos de
plantas. Las densidades mas altas de microartropodos se encuentran en la capa superior
del suelo, particularmente en basureros o en capas orgnicas en la superficie y tambin
estn restringidas, por su tamao a suelos con aberturas de poros suficientemente
grandes para que se puedan mover (Mankau, 1981).

27
Diversos investigadores han agrupado a los hongos segn el modo de infectar o
el estado del nematodo que infecta: predadores o atrapadores de nematodos,
endoparsitos, parsitos de huevos, hembras y productores de toxinas.

2.7.1. Los Hongos predadores o atrapadores de Nematodos

Desarrollan hifas, ramificaciones, redes semejantes a una telaraa y
protuberancias pegajosas, o bien forman anillos que pueden ser constrictores o no-
constrictores, con los cuales atrapan las larvas de nematodos (Dackman y Norbring-
Hertz, 1992). Los mecanismos de adhesin de nematodos, las estructuras del hongo
infecciosas y la competencia por infeccin han sido tambin investigadas (Barron,
1992). Despus de la captura, los hongos desarrollan un apresorio, el cual se ramifica y
crece a lo largo del cuerpo. Este tipo de hongos esta relacionado con los estados
larvarios y las especies de hongos pertenecen a grupos diversos como Zygomycetes,
Deuteromycetes y Basidiomycetes. Han sido considerados prometedores agentes
biolgicos para control de nematodos.

Arthrobotrys oligospora (Corda) forma redes de hifas, Monacrosporium
cianopagun (Oudem) desarrolla ramificaciones, Dactylaria candida (Sacc.) produce
protuberancias y tambin es considerada como un hongo no constrictor. Stylopage sp. y
Cytopage sp. tiene hifas inmodificadas. Entre los formadores de anillos constrictores
estn D. brochopaga y A. dactyloides. En hongos endoparsitos los conidios tambin
muestran sofisticadas adaptaciones morfolgicas para habilitar su interaccin con los
nematodos.

Su comportamiento predador en las placas de agar los convierte en fascinantes
organismos de estudio y especializacin. Algunos de los primeros exmenes en
invernadero o en el campo probablemente tendieron a exagerar su potencial y no
fueron diseados para evaluar crticamente los efectos sobre los nematodos. La mayora
de esos experimentos consistieron generalmente en aadir un hongo en un suelo
modificado con materia orgnica, con el objetivo de que los hongos aumentaran en la
2.7. Hongos parsitos de nematodos
28
modificacin y especialmente los parsitos atacan a los nematodos, antes o despus de
haber utilizado el sustrato.

Todo lo que se conoce sobre el hongo examinado es que en algn punto, este
haba atrapado a los nematodos. El criterio general que se emple para escoger a un
hongo como agente de control fue que ste deba ser til y fcilmente cultivado (Abawi
y Thurston, 1992).

Cook y Baker (1983) demostraron que la oportunidad de establecer especies
forneas en la fase predatoria es pequea. Ninguno de los hongos que examinaron
parecieron ser capaces de colonizar y explotar rpidamente el micro hbitat del suelo.
Fueron considerados saprofitos poco competitivos y fueron susceptibles al antagonismo
de otros organismos del suelo ; adems demostraron persistencia en el suelo, incluso en
la presencia de fuentes de energa.

As mismo Cook y Baker (1983) reexaminaron algunas de las relaciones
ecolgicas en que se incluyen a los hongos predadores e identificaron algunos de los
problemas asociados al utilizarlos como agentes de control biolgico antes de que
suceda la depredacin, el crecimiento micelial y la formacin de la trampa. Ambos
procesos requieren energa la cual puede ser proporcionada por una fuente de
nutrientes fcilmente disponible.

Por lo tanto la adicin de modificaciones orgnicas en el suelo es seguida
generalmente por un corto periodo, en el cual aumenta la actividad de los hongos
predadores de nematodos. Cook y Baker (1983) indicaron que la captura de los
nematodos podra ser un medio de actividad en el microhbitat con sustratos orgnicos
fcilmente disponibles.

Tambin notaron que la depredacin no se relacion aparentemente con la
densidad de la poblacin del nematodo a pesar de que la adaptacin de modificaciones
29
orgnicas en el suelo resulta en un aumento de la poblacin de nematodos disolutos; de
hecho el incrementar el nmero de modificaciones podra resultar en una reduccin en
la actividad de depredacin de los hongos.

Esto sucede debido a la intensificacin en la actividad de los microbios del suelo
que compiten con los hongos predadores por los nutrientes. Obviamente, las
interacciones complejas entre los hongos predadores, que descomponen sustancias
orgnicas y el remanente de la poblacin microbiana del suelo determinan el final de
cada uno de ellos en el suelo.

Las capacidades nutricionales de los predadores del nematodo siguen siendo un
aspecto enigmtico de su biologa que se requiere de prximas investigaciones para
comprender que es lo que inicia la actividad predadora y cuanto tiempo puede durar.

El factor que requieren los hongos depredadores para ser activados cuando la
materia orgnica es adicionada al suelo ha sido auxiliar para mantener a los hongos de
inters como agentes biolgicos (Mankau, 1981; Gray, 1988). Sin embargo los estudios
sobre ecologa nutricional tienen poco inters en este grupo de hongos como mayores
contribuidores de un control biolgico (Cook y Baker, 1983).

Adems la actividad trampa fue descrita como un mecanismo utilizado por el
hongo para contrarrestar el estrs nutricional, asociados con efectos de competencia de
otros organismos saprofitos usando la materia orgnica como su principal substrato
(Quinn, l987).




Las adaptaciones de las hifas que hacen las trampas de hongos predadores son
comunes, sin embargo, estudios recientes han demostrado que especies que producen
30
trampas o clavijas de infeccin que penetran a los nematodos capturados, despiden una
sustancia o toxina que inmoviliza al nematodo casi inmediatamente. Algunos hongos
predadores tienen rganos que expulsan sustancias atractivas para los nematodos
(J ansson, 1982).

2.7.2. Los hongos endoparsitos

Estos hongos no forman hifas para atrapar los nematodos, en estos hongos las
esporas hacen contacto con la cutcula del nematodo o por la ingestin de ellas,
posteriormente germinan en el esfago y desarrollan su micelio en el interior del
nematodo, hasta que las estructuras reproductoras de los hongos rompen su pared
debido a la esporulacin. Pueden parasitar larvas, hembras, quistes y huevos. Los
grupos a los que pertenecen son Chytridiomycetes, Oomycetes, Zygomycetes,
Deuteromycetes y Basidiomycetes. La habilidad saprofitica/parasitica de los hongos
nematfagos es importante en la relacin de biocontrol de nematodos por hongos
(Kerry y De Leij 1992; Barron, 1992).

Esto sugiere que poseen similitudes que los habilitan para alimentarse sobre los
nematodos y sobrevivir en el ecosistema del suelo (Nordbring-Hertz et al., 1993).

Ms que hongos endoparsitos son considerados como especficos para
desarrollarse sobre nematodos, aunque varan en la especialidad del hospedero atacan
quistes y huevos de nematodos (Barron, 1977; Bird, 1987). Los endoparsitos han sido
estudiados principalmente en laboratorio e invernadero y aunque se han hecho
aplicaciones de este tipo de hongos directamente en suelos para el control de
nematodos, los resultados han sido variados (J affee y Zehr, 1982; J ansson, 1982; Kerry,
1990a; Schuster y Sikora 1992b; Sikora, et al., 1990; Uziel y Sikora, 1992; Roessner,
1987; Morgan-J ones et al., 1986).
31
Aunque el inters en los endopatgenos ha sido poco por la bsqueda de
antagonistas comercialmente viables; el potencial antagonista de los endoparsitos
puede ser manejado.

Las relaciones bioqumicas, parsitas y predadores con los nematodos han
evolucionado entre los diferentes grupos de hongos del suelo (Gray, 1988). La funcin
de estos hongos juega un papel en el control natural y tambin por el inters biolgico y
bioqumico asociado con los procesos de captura, penetracin y digestin (Dackman et
al., 1992; Barron, 1992).

Las esporas de los hongos se han adaptado y especializado en la captura o
penetracin de los nematodos. Entre los hongos inferiores, las zoosporas mviles
parecen tener tropismo positivo hacia los nematodos. La mayora de las especies con
zoosporas no mviles poseen propiedades adhesivas especiales para adherirse
instantneamente a las cutculas de los nematodos transentes.

Tambin parece ser buena evidencia que las hifas asimilativas o haustorios de los
hongos predadores encontrados dentro del nematodo liberan un antibitico que impide
el desarrollo de microorganismos competidores en el nematodo capturado (Barron,
1977). El contenido de los cuerpos de los nematodos capturados es consumido
solamente hasta que una cutcula llena de hifas asimilativas lisas, permanece.

Existen aberturas naturales tales como la cavidad bucal, poro excretorio, vulva, y
ano, a travs de las cuales microorganismos secundarios pueden introducirse. No
obstante, los organismos competidores rara vez se desarrollan en los nematodos
capturados en las trampas de hifas de la mayora de las especies de hongos predadores.




32
Los conidios de los hongos predadores de nematodos son de mayor tamao que
la mayora de saprofitos del suelo y tienen abundantes reservas de nutrientes que
pueden ser utilizados para producir inmediatamente una o ms trampas de las cuales
los hongos dependern para as alimentarse y desarrollarse en un medio predatorio.

Muchas especies tienen conidios que no toleran la desecacin y por lo tanto no
son el escenario en el cual la mayora de estos hongos sobrevive en condiciones
adversas en el suelo, tambin parecen ser fcilmente disueltas o destruidas por accin
de las lisinas, aparentemente los conidios proporcionan un mtodo de propagacin a
ms corto plazo y podra ser la manera en que el hongo puede convenientemente,
cambiar de modo nutricional predatorio a saproftico o viceversa.

Los hongos mas estudiados han sido los que se presentan en larvas; Barron
(1977) registr 19 especies de hongos predadores y 19 de hongos endoparsitos
(cuadro 2).
Cuadro 2. Hongos predatores y endoparsitos de larvas de nematodos (Barron, 1977).

Predatores Endoparsitos

Arthrobotrys anchonia Acrostalagmus goniodes
A. arthrobotryoides A. obocatus
A. conoides A. zeosporus
A. dactyloides Cephalosporium balanoides
A. fragans Gonimochaete horridula
A. musiformis Haptoglossa heterospora
A. oligospora Harposporium anguillulae
Dactilaria candida H. baculiforme
D. haptospora H. crassum
D. megalospora H. diceraeum
D. thaumasia H. helicoides
D. brochopaga H. sicyodes
Dactylella bembicodes Meria coniospora
D. cionopaga Nematoctonus leiosporus
D. gephyropaga N. leptosporus
Nematoctonus campylosporus N. pachysporus
N. concurrens N. tylosporus
N. haptocladus Paecilomyces coccospora
N. robustus Verticillium sphaerosporum
33
2.7.3. Productores de toxinas

Son hongos que se desarrollan dentro de los tejidos de las plantas, como las
endomicorrizas, y manifiestan tener influencia en la relacin de parasitismo para
nematodos endoparsitos sedentarios y migratorios.

2.7.4. Hongos facultativos antagonistas de nematodos

Los hongos que infectan a los huevos de nematodos parsitos de plantas han
sido clasificados como patgenos facultativos, u hongos facultativos oportunistas
(Morgan-J ones y Rodrguez-Kabana, 1985; Sikora et al., 1990).

Muchos hongos colonizadores de quistes y huevos de nematodos, tambin se han
estudiado a nivel de laboratorio e invernadero, y en menor medida en pruebas
experimentales de campo. (J atala, 1986; Kerry, 1990a; Morgan-J ones y Rodrguez
Kabana, 1988; Nicolay y Sikora 1989; Roessner, 1987; Schuster y Sikora 1992a; Sikora
et al., 1990; Uziel y Sikora, 1992).

El manejo de saprofitos facultativos es ms complicado en el ecosistema del
suelo porque son parsitos obligados, los saprofitos no dependen de los nematodos
como una fuente de nutrientes.

Obstculos adicionales son el manejo, insuficiente conocimiento de la etiologa,
biologa de muchos patgenos y los bajos mtodos convenientes para determinar como
manipular los efectos y sus niveles del potencial antagonista (Nicolay y Sikora, 1991;
J atala, 1986; Kerry, 1987).






34
2.7.5. Hongos parsitos de huevos, hembras y quistes

El descubrimiento de hongos parsitos en los huevos de nematodos parsitos de
plantas ha sido reciente. Barron (1977) consider que solo Rhopalomyces elegans
(Corda) era un parsito de huevos declarado; sin embargo, este nunca ha sido
relacionado con los huevos de nematodos plaga.

Los huevos y quistes de nematodos de Heterodera spp. debido a su importancia
como principales parsitos de plantas, han sido frecuentemente examinados y
ocasionalmente buscados para ser infestados. La viabilidad de los huevos de Heterodera
declina cuando el tiempo pasa y estos permanecen en el suelo, se sospecha que los
hongos estn implicados en esto.

La mayora de los hongos atacan a los huevos y parecen producir hifas internas
bastante similares y solo pueden ser identificados despus del aislamiento y la
subsecuente esporulacin (Kerry y De Leij, 1992).

Las especies encontradas comnmente asociadas con los quistes de Heterodera
corresponden al gnero Exophiala spp., Fusarium spp., Gliocladium spp., Paecilomyces
spp., Phoma spp. y Verticillium spp. (Dackman et al., 1992; Nigh et al., 1980).

Goswami y Rumperhorst (1978) reportaron unos hongos no identificados junto
con Fusarium oxysporum (Link) y F. solani (Mart) asociados con quistes de G.
rostochiensis en Alemania Occidental, los cuales no fueron aislados de un cultivo puro:
probablemente corresponden a Exophiala, posiblemente E. jeanselmei (Carmich.) E.
mansonii (Castell) E. pisciplila (Mc Ginntis), los hongos fueron reportados por infectar
varios patotipos de G. rostochiensis .

35
Es importante hacer notar que Pseudoeurotium ovale y Humicola grisea (Traaen)
tambin han sido reportados por encontrarse sobre quistes de H. glycines (Ichioche)
(Gintis et al., 1983).

Dos hongos zoosporicos los cuales son Catenaria auxiliaris (Sorokin), y
Nemathophora gynophila (Kerry) Kerry y Crump no han sido encontrados en laboratorio
en poblaciones de G. pallida.

Las hembras adultas de nematodos parsitos de plantas son objeto de infeccin
por hongos facultativos y parsitos obligados. De los parsitos obligados ms
importantes esta N. gynophila que parsita quistes de nematodos de Heterodera la
densidad de N. gynophila pudo establecerse por los restos de la cosecha, manteniendo
el incremento y la disponibilidad de hembras adultas en el suelo (Kerry, 1987). La
patogenicidad ms registrada ha sido en H. avenae y la patogenicidad del hongo no se
extiende para G. rostochiensis (J ones, 1976; Kerry y Crump, 1980; Kerry, 1990b). En el
caso de el parasitismo obligado tiene lmites, las prcticas y el manejo de sistemas de
cultivos favorecieron al nematodo.

An cuando en Europa se realizan continuamente rotaciones de cultivos, la
mezcla de Heterodera schachtii y H. avenae es comn, ambos nematodos son
hospederos, y los parsitos deben aumentar si las rotaciones de los cultivos han sido
desarrollados con cierta tolerancia. En algunas rotaciones la irrigacin puede ser usada
para incrementar la actividad de las zoosporas que infectan a la hembra. Los parsitos
facultativos de hembras pueden ser manejados efectivamente con una correcta
integracin de nematicidas, cultivos tolerantes y rotaciones de cultivos cortos.

Estos componentes combinados pueden tener un control efectivo sobre la
primera generacin de H. schachtii con Verticillium chlamydosporium (Goddard) y la
segunda generacin con Cylidrocarpon destructans (Woll.) (Crump, 1989; 1991; Yu O y
Coosemans, 1998).
36
Verticillium chamydosporium ha sido recientemente seleccionado por ser
competente en la rizosfera (De Leij y Kerry, 1991). Esta afinidad por las races pudo ser
utilizada para intensificar el control sobre las hembras. La seleccin del cultivo y la
manipulacin, tratamientos fsicos y biolgicos del hospedero son factores que pueden
incrementar la colonizacin y control en la rizosfera.

La relacin de los hongos con la patologa del quiste fue reexaminado por Tribe
(1980), quien enlisto a V. chlamydosporium y otros hongos contorsionistas no
esporuladores. Como resultado de sus estudios Tribe (1989) encontr a C. destructans
en quistes de Heterodera schachtii en Inglaterra y Alemania.

Tribe, discuti tambin la relacin de un nmero relativamente comn de hongos
en el suelo, que se reportan frecuentemente por estar en asociacin con los quistes de
Heterodera. Analiz 112 poblaciones de H. schachtii de varios pases, un poco ms de
un cuarto de esta poblacin constaba de hembras y quistes tomados de las races.

En trminos generales, el 14% de todos los quistes tomados del suelo estaban
enfermos, sin embargo, en monocultivos de remolacha azucarera poco ms del 50%
estuvieron enfermos y observ una gran viabilidad entre las muestras con algunos que
no contenan ningn quiste enfermo.

Las hembras tomadas de las races tenan mas o menos porcentajes similares de
ataque de hongos, pero fueron infestados por parsitos especficos en Catenaria
auxiliaris y algunos de los parsitos de huevos ya mencionados estuvieron involucrados.

Tribe reconoci dos clases de hongos en quistes y huevos, la primera se presenta
en la raz del hospedante entre las hembras y quistes jvenes, la segunda en quistes en
el suelo durante un largo periodo de tiempo.

37
Muchos hongos que habitan el suelo colonizan constantemente quistes de
Heterodera, sin embargo no se tiene una percepcin en el control e influencia sobre la
poblacin (Morgan-J ones y Rodrguez-Kabana, 1988).

Del pequeo y selecto grupo que son los patgenos de nematodos enquistados,
Verticillium spp. es uno de los ms importantes; ms especies en este gnero, se han
registrado ocurriendo en quistes y en huevos de Globodera, Heterodera y Meloidogyne
(Morgan-J ones y Rodriguez-Kabana, 1988).

Godoy et al. 1983, examin in vitro 14 especies de Verticillium, sobre huevos de
Meloidogyne arenaria (Ichonohe) los parsitos de huevos ms efectivos fueron V.
leamellicola y V. leptobactrum. Verticillium chlamydosporium es un importante parsito
de quistes (Kerry y Crump, 1991); y es una de las principales causas de la disminucin
del nmero de quistes de nematodos de cereales (Schennk y Hinson, 1997). Coloniza
frecuentemente a las hembras y al nematodo enquistado y reduce su fertilidad, dando
paso a pequeos quistes conteniendo pocos huevos saludables (Kerry, 1990b; Schuster
et al., 1992b).

Algunas especies del gnero Paecilomyces, que penetra la cutcula de la cscara
del huevo por medio de hifas, produciendo un crecimiento hinchazn; por medio de
un apresorio, se distribuye totalmente en el contenido del huevo; los mecanismos que
se consideren para la habilidad del hongo pueden ser, primero una alteracin enzimtica
que afecta la permeabilidad del huevo incluso causar desordenes fisiolgicos antes de la
penetracin de la hifa, y segundo, toxinas fungosas, las cuales podran afectar los
huevos deteriorndolos y finalmente matar la larva. Paecilomyces nostocoides
morfolgicamente similar a P. lilacinus ha demostrado ser capaz de colonizar huevos de
H. zeae in vitro (Godoy et al., 1983). Un antibitico pptido puede ser responsable para
la exitosa habilidad saprofitica del hongo (Davide y Zorrilla, 1995). P. lilacinus se ha
encontrado provocando desordenes fisiolgicos, que conducen a un crecimiento y
maduracin vacilante de etapas juveniles. Por lo tanto, es capaz de mantener contacto
38
con nematodos parsitos de plantas por el establecimiento del mismo en las especies de
nematodos de la raz, pero ese comportamiento de colonizacin requiere confirmarse en
un ambiente ms natural.

Hirsutella rhossiliensis (Minter y Brady) tambin ha sido reportado como un
parsito comn en el segundo estado juvenil de Globodera rostochiensis en Holanda
(Velvis y Kamp, 1995). El valor de H. rhossiliensis radica en su capacidad de infestar
nematodos parsitos de plantas como Globodera, Heterodera, Meloidogyne,
Pratylenchus y Datylenchus , tambin parsita nematodos como H. schachtii (J affee et
al., 1991) y otros nematodos parsitos ms o menos especficos (Nez-Fernndez,
1992; Timper y Brodie, 1993; J affee et al., 1994).

Hasta la mitad de la dcada de los setenta, no se tenan registros de hongos que
parasitaran a quistes de G. rostochiensis, y se lleg a plantear que no tena antagonistas
fungosos en suelos agrcolas de regiones templadas como en Inglaterra, (Willcox y
Tribe, 1974; Kerry y Crump, 1991), lo anterior debido a la reducida apertura del cono
vulvar y la presencia de una capa de cutcula adicional que funcionan como barreras
para la penetracin de los hongos parsitos y depredadores (Tribe, 1980).

2.7.6. Distribucin de hongos parsitos de nematodos

Con los estudios realizados en muchas reas del mundo se ha comprobado que
las especies conocidas de los hongos endoparsitos, depredadores de nematodos son
cosmopolitas. Lo que ahora se requiere con respecto a la distribucin son
investigaciones sobre: las relaciones de varas especies con los factores biticos y
abiticos en el suelo, efectos de cosecha, diferentes tipos de suelo y microhbitats. Se
han observado algunas diferencias en la distribucin vertical en el suelo; sin embargo, la
mayora de las especies parecen acontecer en las capas superiores de cualquier tipo de
suelo (Kerry y De Leij, 1992).

39
Algunos hongos depredadores asemejan ser organismos que habitan la rizsfera,
mientras que otros pueden ser clasificados como no-rizsferos. Las relaciones con las
plantas rizsferas podran ser aspectos importantes de las capacidades de control
biolgico de dichos hongos. Las especies que suceden en la rizsfera pueden estar
mejor situados para influir en las poblaciones de nematodos parsitos de plantas.

Por experiencia, Arthrobotrys dactyloides, Dactylaria brochopaga,
Monacrosporium ellipsosporum, y M. gephyropagum, que se encuentran entre las
especies con capacidades saprofticas restringidas, estn todas estrechamente
relacionadas con races de plantas muy consistentes y, por lo tanto, se encuentran en
una posicin favorable para atrapar los nematodos parsitos de plantas.

Un resumen de los hongos encontrados sobre diferentes especies de nematodos
parasitando hembras, huevos y quistes se presenta en el cuadro 3. En particular sobre
las especies de G. pallida y G. rostochiensis se encontraron 28 especies en Per,
considerado como centro de origen (cuadro 3).














40
Cuadro 3. Reportes de hongos parsitos de hembras, huevos y quistes de nematodos en diferentes regiones en el mundo.
NEMATODOS HONGOS PARASITOS INTERACCIN AUTOR
Heterodera ave nae
Heterodera schachtii Cylindrocarpon destructans
Verticillium Chlamydosporium
Acremonium strictum
Fusarium oxysporum
Caternaria auxiliaris
Phialphora malorum
Heterodera glycines Acremonium strictum
Fusarium oxysporum
Fusarium solani
Phoma sp
Exophiala pleociphila
Stegonospora heteroderae
Paecilomyces lilacunus
Verticillium chlamydosporium
Microdochium bolleyi
Catenaria auxiliaris
Hongos no identificados
Bispora spp.
Periconia macroaphoneas
Cylindrocarpon destructans
Nematophthora gynophila
Heterodera mediterrnea Cyliindrocarpon destructans
Heterodera avanae
H. cajani, H, graminis
H. mothi, H. zeae
Globodera rostochiensis
Globodera rostochiensis
y G. pallida
Catenaria auxiliaris
C. vermicola
Quistes no enfermos
Aspergillus sydiwii
Cladosporium cladosporoides
Cylindrocarpon destructans
C. didymun
C. gracile
Drechslera australiensis
Exophiala pisciphila
Fusarium. oxysporum
F. semitectum
F. solani,
F. moniliforme
Gliocladium catenulatum
G. roseum
Humicola grisea
Paecilomyces lilacinus
P. variottii
Penicillium chrysogenum
P. restrictum
P. rubrum
Phoma americana
Ramichloridium schulzeri
Scolecobasidium tscha wytschae
Stachybotrys chartarum
Trichocladium asperum
Trichoderma harzianum
T. longibrachiatum
Ulocladium atrum
Endoparsito
---
Endoparsito
- - -
- - -
Willcox y Tribe (1980); Kerry
(1990); Tribe (1980); Stirling y
Kerry (1983)
de Hoog y Hermanides-Nijhof (1977)
Stirling y Kerry (1983) Keny (1990)
Rogers (1987)
- - -
Parsito de huevos
Endoparsito
Endoparsito y parsito
de huevos
Endoparsito
Parsito de huevos
Parsito de huevos
y hembras
Endoparsito
--------
Parsito de huevos
Parsito de huevos
Parsito de huevos
Kerty (1990)
Kerry y Crump (1980)
Willcox y Tribe (1980)
Bursnall y Tribe (1974)
Nigh et al.( 1980)
Tribe (1980)
Morgan-Jones y Rodrguez
Kabana(1981;1984
---------
Parsito de huevos
Parsito de huevos
Parsito de huevos
Endoparsito
Endoparsito
Gints (1983); Cabanillas et al. (1989)
Vovlas y Frisullo (1983)
Sharma y Swarup (1988)
------------------
Parsito de huevos
Willcox y Tribe (1980)
Morgan-Jones et al. (1986)
41
III. MATERIALES Y MTODOS


3.1. Ubicacin y descripcin del rea de estudio

La presente investigacin se llev en los laboratorios de la Universidad
Veracruzana y en de Fitopatologa y control biolgico del Instituto de Ecologa en
Xalapa, Veracruz. Con muestras de suelo tomadas de cultivos de papa en seis
localidades: Los Pescados, Tembladeras, El Conejo, Rancho Nuevo, Escobillo y Los Altos
de la Regin del Cofre de Perote, ubicada en la parte central montaosa del Estado de
Veracruz, el cual tiene una altitud de hasta 4,282 msnm. La regin esta ubicada entre
los 191930-194858 de latitud Norte y 014000-022458 de longitud Este.
Comprende los municipios de Ayahualulco, Perote y Xico, en la vertiente oriental de la
Sierra Madre Oriental (Medina y Angulo, 1990). (Fig. 7).

3.1.1. Clima

El clima en el rea de estudio se clasifica como C(W
2
)B que vara desde
templado subhmedo a semifro; que tiene una temperatura media anual entre 5 y
12C, con un verano fresco y subhmedo, con lluvias en verano; la precipitacin media
anual es de 600 mm (Medina y Angulo, 1990).

3.1.2. Geologa

El Cofre de Perote es un volcn cuyo origen data posiblemente del Mioceno o
Plioceno, formado en un solo periodo de erupciones y dependiendo de un foco volcnico
importante. Hay rocas cretcicas y sobre las mismas se encuentra un grueso manto de
material cinertico de rocas riolticas. El material madre de la zona de estudio es de la
Era Cenozoica, Periodo cuaternario y la roca es gnea extrusiva bsica (INEGI, 1990a).


42



Fig. 7 Ubicacin geogrfica de la zona de estudio.




43
3.1.3. Suelos

Predominan los andosoles hmicos, mlicos y feozem haplico y tambin se
encuentran zonas cuya unidad principal es regosol calcreo y luvisol crmico. (INEGI,
1990b).

3.1.4. Hidrografa

Debido a las condiciones climticas, topogrficas y latitudinales en las que se
encuentra la montaa, en ella se originan varias corrientes de agua, principalmente en
la parte sur y oriental (ladera hmeda) que en ocasiones se convierten en grandes ros
y afluentes. Entre los principales ros se encuentran el ro Actopan, el cual se origina a
una altitud de 3,000 msnm, cuya parte inicial de su recorrido se le conoce como ro
Sedeo.

3.1.5. Topografa

En la regin del Cofre de Perote se presentan acentuados cambios de altitud que
van desde 1200 a 4240 msnm. Como consecuencia de los derrames del volcn sobre
una porcin de la Sierra Madre Oriental se ha conformado un paisaje abrupto con
pendientes que varan de 5-30.

3.1.6. Vegetacin

La vegetacin original del rea son: pinares (Pinus hartwegii, P. patula, P.
ayacahuite), bosque de Oyamel (Abies religiosa y A. hickelii), bosques de encinos
(Quercus crassifolia y Q. laurina), bosques caducifolios y sus respectivos ecotonos
generalmente se desarrollan sobre suelos de tipo andosol (Narave, 1985).

El bosque de oyamel A. religiosa se encuentra como un cinturn que rodea al
Cofre de Perote de la cota de los 3000-3500 msnm, pero debido a que se desarrolla
44
sobre suelos apropiados para el cultivo de la papa, Solanum tuberosum, se han talado
grandes reas para el cultivo. En la actualidad solo se encuentran manchones
representativos del bosque alrededor de la montaa, mejor conservados hacia el
noroeste, al sur de la congregacin del Escobillo y en los alrededores de El Conejo.

Conejos. Esta comunidad se localiza a una altura de 3140 msnm. El clima es
subhmedo semifro; cuya temperatura media anual vara entre 5 y 12 C y la ms fra
se presenta entre -3 y 18 C; en un verano fresco con lluvias. La vegetacin original
dominante es Abies spp. (oyamel); el uso del suelo de los predios es agrcola y de
pastoreo; el tamao de la superficie destinada a uso agropecuario no es mayor de dos
hectreas; la actividad pecuaria esta principalmente destinada a la explotacin ovina.
Las labores culturales son realizadas con yunta (barbecho y surcado) y con azadn
(limpias y atierres); la rotacin de cultivos generalmente es papa, avena y en pequea
escala haba y ajo. Los factores limitantes en el cultivo de papa son las heladas y el tizn
tardo causado por el hongo Phytophthora infestans (Mont.) de Bary. El consumo de
plaguicidas es considerado como moderado.

Tembladeras. Se localiza a 3110 msnm; en comparacin con los otros sitios de estudio
son los suelos ms hmedos; el clima predominante es fro hmedo; con una topografa
irregular con inclinacin que vara de 15 a 25 de pendiente. En el sitio de estudio el
cultivo se encuentra intercalado con rboles de Abies spp. (oyamel). La variedad de
papa ms sembrada es San J os, en esta localidad solo cultivan papa (monocultivo) y
despus de la cosecha se utiliza para pastoreo de ovejas; las labores culturales se
realizan con arado de yunta y con azadn. Las enfermedades de la papa ms
importantes son el tizn tardo causado por el hongo Phytophthora infestans y la
pudricin del tubrculo causado por el mixomiceto Spongosptera subterrnea (Wall.
Lag.). El consumo de agroqumicos es considerado alto.

Rancho Nuevo. Se localiza a 3040 msnm; son frecuentes los vientos de suaves a
moderados; los suelos presentan alta erosin con pendientes aproximadas de 20 con
45
textura arenosa y alta pedregocidad. La vegetacin arbrea que se localiza en los lmites
de los predios son pinos y encinos; aunque son considerados suelos pobres, cidos y
con poca fertilidad, se cultiva papa y se rota el cultivo con maz o haba. El consumo de
plaguicidas se considera moderado.

Escobillo. Esta comunidad se encuentra a 3040 msnm; con presencia de vientos de
leves a moderados; con buena iluminacin solar; la caracterstica de los suelos es su
textura arenosa con alta pedregocidad y presentan fuerte erosin. La vegetacin
colindante es bosque de pino-encino; la rotacin de cultivos posterior a papa es maz o
haba.

Pescados. Esta localidad se ubica a los 2980 msnm; y los terrenos destinados a la
agricultura en general tienen una topografa plana, son suelos con buen drenaje. El tipo
de clima corresponde a un templado hmedo con lluvias casi todo el ao; la vegetacin
dominante son especies de pinos. Los productores cultivan variedades de papas blancas
y de color, como son: Alfa, Atlantic, Atzimba, Diamante, Gema, Gigant, Marciana y San
J os; la secuencia en la rotacin de cultivos es papa, haba o maz. En lo general los
productores aplican elevadas dosis de agroqumicos.

Los Altos. En esta comunidad el cultivo de papa se siembra desde hace mas de 50
aos, se ubica a 2800 msnm. Aunque son considerados suelos pobres con poca
fertilidad en ellos se puede cultivar papa, maz y haba. La textura del suelo es franco
arenosa con buen drenaje, son suelos con severa erosin elica. La vegetacin en este
sitio esta severamente afectada, debido al cambio de uso de suelo de bosque a uso
agrcola; las variedades de papa ms utilizadas son Alfa, Gema y San J os y el factor
limitante es la falta de humedad. La utilizacin de fertilizantes y plaguicidas es elevada.



46
Para llevar acabo este trabajo de investigacin se programo el siguiente diagrama
de flujo de materiales y mtodos (Fig. 8).
En cada una de las localidades y de suelos cultivado con papa, se tomaron cinco
submuestras (1 kg cada/una), distribuidas en forma de cinco de oros, durante el mes
de octubre del ao 2000. Las submuestras se tomaron de los primeros 20 cm de
profundidad, con pala recta, eliminando la materia orgnica superficial. Cada muestra se
etiquet con los datos de la localidad, municipio, predio, nombre del productor, variedad
de papa y fecha de colecta. En el laboratorio, las submuestras de cada localidad, se
extendieron en charolas de poliuretano para su secado en la sombra. Posteriormente las
submuestras se homogeneizaron y se obtuvo una sola muestra de cada localidad. Una
parte del suelo se utiliz para la evaluacin de la materia orgnica y el pH, la otra parte
de la muestra sirvi para la extraccin de los quistes del nematodo dorado de la papa.

3.1.8. Extraccin de quistes

La extraccin de quistes se realiz por el mtodo de Flotador de Fenwick (1940),
el cual consiste, en vertir la muestra de suelo por un tamiz de 20 mallas/cm
2
, para
eliminar terrones y piedras al embudo, el cual debe de tener agua a dos tercios de su
capacidad; con ayuda de agua corriente se provoca la salida de material que por su bajo
peso flota, el cual es recuperado en un tamiz de 60 mallas/cm
2
para materia orgnica y
125 mallas/cm
2
para los quistes de G. rostochiensis. El material obtenido en el tamiz de
125 mallas/cm
2
se vierte a un vaso de precipitado el cual en su interior contiene una
tira de papel filtro humedecido procurando no desprender la tira de papel. Finalmente
se agrega un poco de detergente en polvo, para romper la tensin superficial y de esta
manera los quistes se adhieran al papel filtro; una vez que el material se adhiri al
papel, este se saca y se coloca en una tapa de caja Petri para observarla al microscopio
estereoscopio (Fenwick, 1940).


3.1.7. Toma de muestras
47
Con el propsito de determinar la importancia del nematodo, G. rostochiensis, en
la zona productora de papa de la regin Cofre de Perote, Veracruz, Mxico; de los
quistes obtenidos y con ayuda de un microscopio estereoscopio, se cuantificaron y se
expresaron, como nmero de quistes/kg de suelo; en cada localidad de estudio.

De acuerdo a las condiciones morfolgicas que presentaban los quistes obtenidos
fueron separados en tres categoras con base en su apariencia fsica: quistes jvenes
(QJ ): aquellos quistes con lozana, al microscopio estereoscopio presentan brillo y se ve
la masa de huevos; quistes maduros (QM): quistes sin lozana, no tienen brillo y la masa
de huevos presentaban diferentes manchas de color caf oscuro-negro; quistes daados
(QD): aquellos cuyo corin estaba afectado por causas no determinadas Roessner,
(1987).

Con el propsito de determinar si la densidad de poblacin de G. rostochiensis, es
significativa entre las localidades estudiadas, a los datos de quistes, se les realiz un
anlisis no paramtrico, al aplicarles la Prueba G de Bondad de Ajuste con Repeticin
(Robert et al., 1995).

3.2. Aislamiento de hongos asociados a quistes

Para cumplir con el primer objetivo (aislar e identificar hongos nativos parsitos
de quistes de G. rostochiensis en la regin del Cofre de Perote, Veracruz) se procedi de
la siguiente manera: una vez seleccionados los quistes aparentemente jvenes y sanos
de cada localidad, se tom un grupo de 100 quistes, se desinfectaron primero con
hipoclorito de sodio al 3% y despus con alcohol al 70%, ambos durante un minuto,
posteriormente se lavaron tres veces con agua destilada estril y se colocaron en papel
estril para secarlos. La metodologa de lavado aqu usada difiere con la de Morgan-
J ones et al. (1986), ya que ellos desinfectaron la superficie de los quistes nicamente
con alcohol al 70%. Cada quiste fue colocado en cajas Petri (56x15 mm) con placas de
3.1.9. Densidad de la poblacin de quistes
48
agar con dextrosa y papa (PDA) a la que se le agreg un antibitico (tetraciclina al 5%)
para evitar el crecimiento de bacterias

Las cajas fueron selladas con cinta parafilm, se etiquetaron por localidad de
estudio y numeradas del uno al 100 (n=100), de manera que se obtuvo una muestra
total de 600 quistes de G. rostochiensis y se mantuvieron a temperatura ambiente 21
+
2C.
Los quistes fueron examinados diariamente para detectar la presencia de micelio.
Aquellos quistes que presentaron desarrollo de micelio, se utilizaron para generar los
cultivos puros en placas de PDA, para llevar cabo la determinacin de los hongos y
reproducirlos para su conservacin.

3.2.1. Identificacin de hongos

Para la identificacin taxonmica de los hongos se tomaron en cuenta las
caractersticas morfolgicas de las cepas: forma, posicin, color y tamao de sus
estructuras (conidiforos, clulas conidigenas y conidios) y se utilizaron claves
especializadas (Ellis, 1971; Gams, 1971; Samson, 1974). Para la determinacin de los
colores de los micelios de las cepas aisladas se utiliz la carta de colores de Methuen
(Kornerup y Wanscher, 1989).

3.2.2. Conservacin de los aislamientos

Las cepas obtenidas en cultivo puro se inocularon en granos de sorgo
esterilizado, el cual fue colocado previamente en crioviales con capacidad de 2 ml. Una
vez desarrollados los micelios sobre los granos de sorgo, se prepararon para su
liofilizacin e incorporarlos al cepario del Instituto de Ecologa.


49
3.3. Bioensayo del proceso de infeccin de hongos sobre quistes de Globodera
rostochiensis

Con el propsito de verificar el proceso de infeccin de algunos de los hongos
aislados de quistes en este trabajo y con base en la literatura de gneros de hongos que
tienen antecedentes nematfagos, se seleccionaron tres especies: Acremonium
incrustatum Gams, Paecilomyces carneus Duch y Phialophora malorum Mc Colloch.

3.3.1. Preparacin del inculo

Las cepas antes mencionadas se reprodujeron sobre placas de PDA, despus de
cuatro semanas de inoculadas, se prepar una suspensin de esporas (10ml) de cada
una de las especies con agua destilada estril al 0.01% de Tween 80. El conteo de
esporas se hizo utilizando el hemacitometro de Neubauer. La suspensin de esporas
utilizada fue de 1 X 10
6
de A. incrustatum, P. carneus y P. malorum como lo indican
Crump y Irving (1992).

3.3.2. Obtencin de quistes sanos

Muestras de suelo de cada sitio de estudio fueron llevadas al laboratorio y se
esterilizaron en autoclave durante ms de 1 hr, una vez aireada se colocaron en 40
macetas de plstico con capacidad de un kg en las cuales se sembraron tubrculos de
papas variedad San J os, previamente lavadas y desinfectadas con hipoclorito de sodio
al 3%. Al momento de la siembra las plantas de papas se inocularon en las macetas 20
quistes jvenes. Todas las macetas se mantuvieron en un invernadero fijo, construido
con tubo de acero de media pulgada y una cubierta de plstico calibre 16, en la regin
de estudio, con el fin de proteger las plantas de posibles heladas y excesos de
humedad, durante 6 meses que comprendi el ciclo vegetativo de la planta.
Los quistes fueron extrados de las macetas, cuando la planta termin su ciclo
vegetativo. Los quistes se extrajeron con la tcnica de Flotador de Fenwick antes
descrita y se cuantificaron, posteriormente se depositaron en viales.
50

3.3.3. Inoculacin de los quistes de Globodera rostochiensis

Los quistes sanos obtenidos de las macetas se lavaron con hipoclorito de sodio al
3% durante 1 minuto y se enjuagaron 5 veces con agua destilada estril. Una vez
desinfectados los quistes, se prepararon para cada especie de hongo seis cajas Petri con
papel filtro esterilizado, en cada caja se colocaron seis grupos (cinco quistes/grupo)
conjuntndose un total de 30 quistes por caja.

Los quistes fueron inoculados asperjando 1ml de la suspensin de esporas con un
atomizador manual de gota fina. Para cada hongo inoculado se coloc un testigo que
fue asperjado con agua destilada estril.

Las cajas Petri se mantuvieron a temperatura ambiente (203C). El proceso de
infeccin se detuvo con lactofenol a las 12, 24, 48, 72, 96 y 120 horas despus de la
inoculacin (Crump y Irving, 1992), se observaron al microscopio compuesto y al
microscopio electrnico de barrido con la tcnica de oro paladio.

3.3.4. Pruebas de patogenicidad

Con el propsito de determinar el efecto parasitico de los hongos sobre los
quistes de G. rostochiensis se procedi de la siguiente manera: por cada hongo
seleccionado se utilizaron cinco cajas Petri conteniendo 20 quistes sanos cada caja. A
los quistes se les aplic la concentracin de esporas antes mencionada. Para observar el
porcentaje de esporulacin se prepar por cada hongo de prueba igual nmero de cajas
con quistes que serviran como testigos.

Para este experimento los quistes inoculados y los quistes testigos se
mantuvieron en observacin durante 30 das, registrando que los quistes presentaran
desarrollo de micelio y esporulacin. La evaluacin se realiz diariamente para obtener
el porcentaje y presencia de la esporulacin durante un mes. El diseo experimental
51
utilizado fue completamente al azar con cuatro tratamientos y cinco repeticiones,
haciendo un total de 15 unidades experimentales; los datos obtenidos, porcentajes, se
les hizo la transformacin al Arco-sen de la x, y se lea hizo el anlisis de varianza,
ANOVA, y pruebas de medias de Tukey con 0.05 de probabilidad.




















Fig. 8. Diagrama de flujo de Materiales y Mtodos

IV.- RESULTADOS


4.1. Densidad de la poblacin de Globodera rostochiensis en las localidades
de estudio

Toma de Muestras
Extraccin de los quistes
Anlisis de
Suelos
pH Materia
Orgnica
Nmero de quistes
de G. rostochiensis
/kg de suelo
Extraccin de
hongos
Aislamiento
de hongos
Cultivos
puros
Determinacin
de hongos
Seleccin
de hongos
Bioensayo
Proceso de
infeccin
Clasificacin de
los quistes
Inoculacin
de macetas
Obtencin de
quistes sanos
Pruebas de
Patogenicidad
52
La densidad de poblacin de quistes G. rostochiensis fue muy alta en todo los sitios
estudiados. La cantidad obtenida de quistes totales de quistes/kg de suelo en cada
localidad fueron los siguientes: Conejos 1220, Tembladeras 2216, Escobillo 360,
Rancho Nuevo 1856, Pescados 1656, Los Altos 1140. Estas cantidades son superiores al
lmite de tolerancia considerado por EPPO (1997) que indica que hasta con una
densidad de 40 quistes/kg de suelo no hay prdidas o afectacin en el desarrollo del
cultivo (Fig. 9). La Prueba G de Bondad de Ajuste con Repeticin mostr, que la
densidad de poblacin en cada localidad es significativamente diferente (Cuadro 4).

0
500
1000
1500
2000
2500
C
O
N
E
J
O
S
T
E
M
B
L
A
D
E
R
A
S
E
S
C
O
B
I
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L
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R
.
N
U
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V
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L
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S

P
E
S
C
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D
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.

d
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q
u
i
s
t
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s
/
k
g
.

d
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s
u
e
l
o

Fig. 9. Total de quistes obtenidos por kilogramo de suelo por cada localidad de estudio
en el Cofre de Perote.

Cuadro 4. Anlisis de los datos de densidad de poblacin de quistes en las localidades
de estudio, con la Prueba G de Bondad de Ajuste con Repeticin.

PRUEBA g. l. G.
Datos agrupados 2 775.556*
Heterogeneidad 10 185.8069*
TOTAL 12 961.3629
53
* Significativo
x
2
0.05
(3-1)= X
2
0.05
(2)= 5.9915

De acuerdo a las condiciones fsicas que presentaron los quistes, el nmero de
quistes daados (QD) fue mayor en todas la localidades (Figura 10), y el porcentaje
vari de 40.6% a 50.3% (Cuadro 5).

El nmero de quistes jvenes (QJ ) fue mayor en las localidades de Escobillo y Los
Altos, que la de los quistes maduros (QM), con valores de 99 y 300, respecto a 87 y 266
respectivamente, (Figura 10); mientras que el nmero de quistes maduros (QM), en las
localidades de Tembladeras, Pescados, Rancho nuevo y Conejos fue mayor que la de los
jvenes, con valores de 696, 557, 468 y 331, respecto a 620, 228, 451 y 317,
respectivamente (Figura 10).


0
200
400
600
800
1000
C
O
N
E
J
O
S
T
E
M
B
L
A
D
E
R
A
S
E
S
C
O
B
I
L
L
O
R
.

N
U
E
V
O
P
E
S
C
A
D
O
S
L
O
S

A
L
T
O
S
N
o
.

d
e

q
u
i
s
t
e
s
/
k
g
.

d
e

s
u
e
l
o
QJ Quistes Jvenes QM Quistes Maduros QD Quistes Daados

54
Fig. 10. Clasificacin de los quistes obtenidos de acuerdo a condiciones fsicas por
localidad.

Cuadro 5. Porcentaje de quistes en suelo en las localidades estudiadas, separadas en
categoras de acuerdo a su condicin fsica.

Comunidad Quistes Quistes Quistes
J venes Maduros Daados
% % %
Conejos 25.98 27.13 46.88
Tembladeras 27.97 31.40 40.61
Escobillo 27.50 24.16 48.33
R. Nuevo 24.29 25.21 50.48
Pescados 13.76 33.63 52.59
Los Altos 26.31 23.33 50.35








El anlisis de los datos mostr que existen diferencias significativas entre todas
las localidades y, que son independientes (Cuadro 6).

Cuadro 6. Anlisis de los datos de densidad de poblacin de quistes en las localidades
de estudio, con la Prueba G de Bondad de Ajuste con Repeticin.
Localidades g.l. G

Conejos 2 96.055*
Tembladeras 2 55.6516*
Escobillo 2 35.2618*
R. Nuevo 2 231.622*
Pescados 2 401.472*
Los Altos 2 141.914*
TOTAL 12 961.9764
* Significativo
x
2
0.05
(3-1)= X
2
0.05
(2)= 5.9915


4.2. Anlisis de suelo

55
De las muestras de suelo de las localidades de estudio se determinaron los
siguientes niveles de pH y contenido de materia orgnica (M O). El nivel de pH en los
suelos de estudio vari de 4.54 a 6.0 en las localidades de Los Pescados y Los Altos
respectivamente. (Cuadro 7). El contenido de materia orgnica de los suelos vari de
1.47% en la localidad de Los Altos y 13.80% en Tembladeras (Cuadro 7).

Cuadro 7. Niveles de pH y contenido de materia orgnica de las muestras de cada
localidad.

LOCALI DAD pH MO
Conejos 5.61 5.89
Tembladeras 4.90 13.80
Escobillo 5.60 3.88
Rancho Nuevo 5.00 5.29
Los Pescados 4.54 4.82
Los Altos 6.00 1.47




4.3. Correlacin entre materia orgnica y densidad de quistes

Para verificar si existe correlacin entre la materia orgnica, ph y la cantidad total
de quistes, quistes jvenes, quistes maduros, quistes daados (Quistes jvenes, Quistes
maduros, Quistes Daados), de las seis localidades estudiadas se realiz mediante la
prueba de correlacin de Pearson del paquete estadstico SAS (1997).

La Hiptesis planteada fue la siguiente:

H
0
: No existe relacin entre la cantidad de materia orgnica, el pH, la cantidad
total de quistes, quistes jvenes, quistes maduros, quistes daados en las seis
localidades estudiadas.

H
1
: Existe relacin entre la cantidad de materia orgnica, el pH, la cantidad total
de quistes, quistes jvenes, quistes maduros, quistes daados en las seis
localidades estudiadas.

56

Los resultados obtenidos en la correlaciones nos indican que no hay correlacin
entre la cantidad de materia orgnica, el pH, la cantidad total de quistes, quistes
jvenes, quistes maduros, quistes daados en las seis localidades estudiadas (Cuadro
8).
Cuadro 8. Resultado de la correlacin entre la cantidad de materia orgnica, el pH, la
cantidad total de quistes, quistes jvenes, quistes maduros, quistes daados
en las seis localidades estudiadas.
Variable Variable Coeficiente probabilidad
dependiente independiente de correlacin
Total quistes Materia orgnica 0.067104 0.1445 ns
pH - 0.67642 0.1401 ns
Quistes J venes Materia orgnica 0.77391 0.0709 ns
pH - 0.33985 0.5098 ns
Quistes Maduros Materia orgnica 0.73506 0.0960 ns
pH - 0.75246 0.0658 ns
Quistes Daado s Materia orgnica 0.46710 0.3503 ns
pH - 0.711152 0.1128 ns
ns= no significativo con una confiabilidad del 95%



4.4. Hongos aislados de los quistes de Globodera rostochiensis en la regin
Cofre de Perote

La presencia de hongos en los quistes se manifest en el 3.5% del total de la
muestra (n=600 quistes). Se obtuvieron 21 cepas asociadas con los quistes.
Una sola especie de hongos se encontr en cada una de los quistes con micelio.
Los 21 hongos obtenidos de los quistes corresponden a 16 especies (Cuadro 9).

Cuadro 9. Hongos nativos encontrados asociados a quistes jvenes de G. rostochiensis
en la regin Cofre de Perote.

Localidad de Estudio Especie Aislada
CONEJ OS Chaetomidium sp.
Cladosporium sp. (1)

TEMBLADERAS Phialophora sp. (1)

57
ESCOBILLO Cladosporium sp. (2)
Fusarium sp.

RANCHO NUEVO Phialophora sp. (2)
Phialophora malorum Kidd. *

LOS PESCADOS Aspergillus sp.
Paecilomyces carneus Duch*
Trichocladium asperum Harz
Paecilomyces carneus Duch*
Drechslera sp.
Pteroconium sp.
Paecilomyces carneus Duch*
Acremonium incrustatum Gams*
Paecilomyces carneus Duch*
Micelia sterilia

LOS ALTOS Paecilomyces carneus Duch *
Cladosporium sp. (3)
Trichocladium asperum Harz
Ulocladium atrum Preuss
* (gneros reportados como nematfagos)
Las cepas numeradas (1) (2) (3) corresponden al mismo gnero pero diferente especie.

Es probable que las tres cepas de Cladosporium sp. correspondan a diferentes
especies, ya que hay diferencia en el color del micelio de cada una; estas cepas se han
marcado con diferentes nmeros.

En el caso de las cepas de Phialophora sp. la cepa de localidad de Tembladeras
tiene micelio verde oliva, y la de Rancho Nuevo es color crema, ambos totalmente
diferente a Phialophora malorum que es de color caf-negro, por esta razn se han
marcado con nmeros diferentes.

La especie con mayor frecuencia fue Paecilomyces carneus Duch (cinco cepas),
seguida de Cladosporium sp. (tres cepas), Phialophora sp. (dos cepas) y Trichlocladium
asperum Harz (dos cepas), de los dems hongos se obtuvo una cepa Acremonium
incrustatum Gams, Aspergillus sp., Chetomidium sp., Drechslera sp., Fusarium sp.,
58
Phialophora malorum Kidd, Pteroconium sp., y Ulocladum atrum. En el cuadro 10, se
presenta la a clasificacin taxonmica de los gneros de las especies obtenidas.

Cuadro 10. Clasificacin taxonmica de los hongos aislados de quistes de G
rostochiensis en la regin del Cofre de Perote.

SUBDIVISIN DEUTEROMYCOTINA
Clase Subclase Orden Familia Gnero
Hyphomycetes Monilialies Moniliaceae Acremonium
Aspergillus
Paecilomyces
Dematiaceae Pteroconium
Cladosporium
Drechslera
Phialophora
Trichocladium
Ulocladium
Turberculariaceae Fusarium

SUBDIVISIN ASCOMYCOTINA
Clase Subclase Orden Familia Gnero
Euascomycetes Pyrenomycetidae Chaetomiales Chaetomiaceae Chaetomidium
4.5. Proceso de infeccin de tres hongos aislados de quistes de Globodera
rostochiensis

Los tres hongos seleccionados para estudiar el proceso de infeccin parasitaron
los quistes. Para hacer notar la diferencia entre los procesos de infeccin de las especies
trabajadas se midieron las estructuras que los hongos iban formando tales como la
longitud, anchura de los tubos germinativos y clulas conidigenas.

Acremonium incrustatum. Se observaron a las 12hrs de la inoculacin algunas
esporas sobre el corin que desarrollaron tubos germinativos de 2 x1 m, pero la
mayora sin evidencia de tubos germinativos. Sin embargo, al observar la pared interna
del quiste a las 24 hrs con el microscopio electrnico de barrido (MEB) tubos
germinativos haban traspasado el corin (Figs. 11-12). Estos micelios se desarrollaron
en los huevos de los quistes entre las 48 y 72 hrs (Figs. 13-14). En la pared externa se
59
observaron a las 96 hrs, las hifas emergiendo desde el interior del mismo. Finalmente a
las 120 hrs haba hifas y conidiforos esporulando en el exterior del quiste (Figs. 15-16).
Proceso de Infeccin de Acremonium incrustatum sobre quistes de G. rostochiensis
60
61

Figs. 11-16: Acremonium incrustatum. 11: Esporas sobre el corin 12 hrs despus de
la inoculacin 2,000x; 12: Tubos germinativos vistos en la parte interna del
corin 24 hrs despus de la inoculacin 1,500x; 13: Tubos germinativos a
las 48 hrs 1,500x; 14: Huevos con micelio a las 72 hrs 1,000x; 15: Micelio




62
saliendo del corin 96 hrs 1,000x; 16: Conidiforo emergiendo del corin
120 hrs 2,000x.


Paecilomyces carneus. Las esporas germinaron a las 12 hrs sobre los quistes, en
general desarrollaron tubos germinativos cortos 2 X 1 m (Fig. 17), as mismo en
algunas esporas se observaron apresorios despus de desarrollar un pequeo tubo
germinativo. El tamao de los tubos germinativos fue menor sobre los quistes que los
observados provenientes de la suspensin de esporas sobrante (5 X2 m). A las 24 hrs
se continu observando los apresorios, la mayora de las esporas formaron hifas
ramificadas de 46 X 3 m; en esta etapa hubo mayor desarrollo micelial en la zonas de
la boca y cono vulvar, que son aberturas naturales del quiste (Figs. 18-19). A las 48 hrs
hubo mayor desarrollo micelial en la parte externa e interna del quiste. El micelio
desarrollado en la parte media del quiste empez a formar una clula conidiogena
(fialide) de 10 X 3 m a las 72 hrs (Fig. 20) y posteriormente se diferenciaron las
estructuras reproductoras, se encontraron conidiforos con 3 filides de 20 X 3 m ya
estaban esporulando. En un corte transversal del quiste se pudo observar el desarrollo
micelial en la masa de huevos as como en larvas que estaban apunto de eclosionar
(Fig. 22). A las 96 hrs se manifestaron los siguientes cambios, la capa vitelina se separ,
tambin se observ la vacuolizacin en la superficie de los huevos y el muclago
desapareci. Se observaron tambin cambios anlogos en la cutcula de algunos huevos
con larvas en estado J 2. Las hifas endgenas en los huevos reemergieron pasando por
ambos lados, en cuya superficie se encontraron esporas provenientes de conidiforos
maduros. Los quistes se cubrieron de conidiforos maduros a las 120 hrs (Figs. 17-22).
Con esta prueba queda comprobada la capacidad nematofaga de P. carneus.





Figs.17-22: Paecilomyces carneus. 17: Grupo de esporas germinando 12 hrs despus
de la inoculacin 3,500x; 18: Esporas con tubos germinativos inmersos y
superficiales 24 hrs despus de la inoculacin 1,500x; 19: Micelio
desarrollado sobre el corin a las 72 hrs 500x; 20: Formacin de filides y
conidiforos esporulando a las 96 hrs 1,500x; 21: Cadenas de esporas
sobre el corin 750X; 22:Huevos rodeados de micelio 100x.
63
Proceso de infeccin de Paecilomyces carneus sobre quistes de G. rostochiensis
Phialophora malorum. Se encontraron pocas esporas que germinaron a las 12 hrs
(Fig. 23); la mayora de las esporas germinaron a las 48 hrs y se empez a desarrollar
micelio. Los quistes cambiaron de color de sus tonalidades de caf claro y brillantes a
caf opaco ennegrecido a 72 hrs. Algunas esporas todava estaban en proceso de
germinacin a las 96 hrs y las que haban germinado desarrollaban su micelio sobre el
corin. El micelio invadi la masa de huevos a las 120 hrs. Despus de este tiempo el
micelio sigui desarrollndose en el interior y fuera del quiste, sin ser conspicuo. El
crecimiento del micelio fue bastante lento; a los 18 das de haber sido inoculados se
observ en la parte bucal y el cono vulvar, mayor desarrollo de micelio (Fig. 28). Se
mantuvo en observacin hasta los 28 das cuando los quistes estaban completamente
negros por el color del micelio (Figs. 23-28).



















64
Proceso de infeccin de Phialophora malorum sobre quistes de G. rostochiensis

Figs. 23-28 Phialophora malorum. 23: Germinacin de una espora 12 hrs despus de
la inoculacin 3,500x; 24: Tubos germinativos 72 hrs 1,500x; 25: Micelio
desarrollndose sobre el corin a las 96 hrs 750x; 26: Micelio sobre huevos
120 hrs despus de la germinacin 750x; 27: Parte interna del corin con
micelio a los 18 das 750x; 28: Quiste cubierto de micelio a los 28 das.



65
4.6. Patogenicidad y esporulacin de tres hongos sobre quistes de Globodera
rostochiensis

El ensayo de patogenicidad demostr que los tres hongos probados A.
incrustatum, P. carneus y P. malorum lograron infectar a los quistes de G. rostochiensis.
Los tres grupos de quistes utilizados como testigos se mantuvieron libres de los hongos
probados (Fig. 29). Ningn hongo fue encontrado como contaminante sobre los quistes.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
%

Q
u
i
s
t
e
s

c
o
n

e
s
p
o
r
u
l
a
c
i

n

Acremonium incrustatum Phialophora malorum
Paecilomyces carneus Testigo
4 7 11 14 18 22 30
Das

Fig. 29. Porcentaje de quistes infectados por hongos nematofagos.

Para este trabajo el diseo experimental utilizado fue completamente al azar;
quedando de la siguiente manera el concentrado de datos (cuadro 11).

Cuadro 11. Anlisis de varianza de la esporulacin de hongos nativos presentada
sobre quistes de Globodera rostochiensis.
F.V. G. L. S.C. C.M. F Cal. Pr > F

Tratamientos 2 392.933 196.466 20.25 0.0001

Error Exp. 12 116.400 9.700

Total 14 509.333
R
2
= 0.7713 66 CV= 23.3586 MSE= 3.114482

66
La prueba de Tukey nos indic que el desarrollo de Acremonium incrustatum y
Paecilomyces carneus es similar pero difieren del desarrollo de Phialophora malorum
(cuadro 12).
Cuadro 12. Porcentajes de quistes de G. rostochiensis con la esporulacin de hongos
nativos inoculados.

TRATAMI ENTOS X
Acremonium incrustatum 19.0 a

Paecilomyces carneus 14.4 a

Phialophora malorum 6.6 b
Medias seguida de la misma literal son estadsticamente iguales. Tukey (P>0.05).




















67
A. incrustatum. El 100% de los quistes fueron infectados. A los 7 das despus de la
inoculacin, el hongo esporul sobre el 35% de los quistes; a los 11 das el 61 % de los
quistes estaban cubiertos por condiforos, aumentando a los 14 das a 64% y a los 18
das a 65%. La esporulacin aument en el 82% a los 22 das, finalmente el 95% de los
quistes estaban cubiertos a los 30 das (Figs. 33-35).
Figs. 30-35: Acremonium incrustatum. 30:Conidiforo y micelio sobre el corin 2,000x;
31: Huevo enrollado de micelio 500x; 32: Micelio interior del quiste 500x;
33: Quiste cubierto de micelio 100x; Testigos 34: Quiste sano 750x; 35:
Huevos en el interior del quiste 500x.

68
P. carneus. El 100% de los quistes inoculados, estuvo infectado por el hongo. La
esporulacin se observ en el 20% de los quistes a los siete das, posteriormente la
esporulacin aument lentamente a los 11 das a 32%, el 61% a los 14 das, el 63% a
los 18 das, 66% a los 22 das y 72% a los 30 das (Figs. 36-41).

Figs. 36-41 Paecilomyces carneus. 36: Conidiforo 2,000x; 37: Cadenas de conidios y
micelio sobre el quiste 750x; 38: Micelio sobre la masa de huevos 750x;
39:Quiste cubierto por micelio y conidiforos 150x; Testigos 40: Quiste
sano 100x; 41: Huevos en el interior del quiste 500x.
69
P. malorum. El micelio sobre los quistes inoculados con este hongo inici su desarrollo
hasta los 11 das, la esporulacin se present en 8% a los 22 das y 33% a los 30 das
(Figs. 42-51).

Figs. 42-47 Phialophora malurum. 42: Grupo de esporas 1,500x; 43: Espora y micelio
sobre el quiste 100x; 44: Micelio sobre el corin 200x; 45: Micelio en la masa de
huevos 750x; 46: Micelio en la masa de huevos y corin 500x; 47: Quiste
cubierto por micelio 150x.
70
Pruebas de Patogenicidad de Phialophora malorum sobre quistes de G. rostochiensis

Figs. 48-49 Globodera rostochiensis. Testigos 48: Quiste sano 250x, 49: Conjunto de
huevos en el interior del quiste 500x.



















71
V. DI SCUSI N

Los resultados obtenidos muestran que la densidad poblacional de quistes de
Globodera rostochiensis fue estadisticamente diferente en todas las localidades. Esto
puede ser debido a que en las localidades se realizan diferentes prcticas culturales
(Stirling, 1991); as tenemos, que en las comunidades de Tembladeras y Escobillo,
donde las poblaciones de quistes son de 2216 y 360 quistes/kg de suelo,
respectivamente; las prcticas culturales son: aos de cultivo, 50 y 30; la rotacin de
cultivo, monocultivo y rotacin; aplicacin de nematicidas qumicos de 60 y 20 kg/ha
respectivamente. Esta variacin en las prcticas culturales del cultivo, podran explicar
las diferencias en las poblaciones de quistes de G. rostochiensis en la regin de Cofre de
Perote, Ver.

La poblacin de quistes de G. rostochiensis en la localidad de Tembladeras, segn
nuestros datos, es de 2216 quistes/kg de suelo, mientras que en ao 1987, esta misma
localidad, eran de 1000 quistes/kg de suelo (SARH, 1987). Sin embargo, se reporta que
en los suelos cuando las poblaciones de Heterodera avenae aumentan y disminuyen, se
debe a que el nematodos se reproduce normalmente y la causa parece ser debido a las
prcticas culturales (Kerry y Crump, 1977). Tambin se ha considerado el efecto del
ataque de los hongos a las hembras (Kerry et al., 1982).

Los datos muestran que no existe correlacin entre el nmero de quistes con la
materia orgnica y el pH del suelo. Este resultado no es raro ya que se menciona que
este factor no tienen efecto significativo sobre las poblaciones de los fitonematodos
enquistados (Stirling, 1991).

La infestacin natural de nematodos enquistados por hongos, se reporta como los
hongos encontrados en hembras jvenes y que pueden ser considerados como parsitos
(Stirling, 1991). Sin embargo, al parecer, los quistes de G. rostochiensis, fuera de su
centro de origen, no son atacados por hongos nematofagos (Willcox y Tribe, 1974;
72
Kerry y Crump, 1977; J ones, 1976; Willcox y Tribe, 1980; Stirling, 1991), lo anterior
debido a la reducida apertura del cono vulvar y la presencia de una capa de cutcula
adicional que funcionan como barreras, para la penetracin de los hongos parsitos y
depredadores (Tribe, 1980).

Los resultados muestran, que los quistes de G. rostochiensis presentan una
infestacin natural, por hongos nativos, del 3.5%. En Per, que es el centro de origen
de este nematodo, se reportaron 32% de infestacin natural sobre quistes de G. pallida
y G. rostochiensis (Morgan-J ones y Rodrguez-Kabana, 1986). En estudios similares
realizados por Willcox y Tribe en 1980 en quistes de G. rostochiensis procedentes de 20
campos de papa, en Inglaterra, y uno de Bolivia, no encontraron quistes enfermos, ni
tampoco quistes con huevos muertos; de la misma manera, los reporta J ones (1976) en
Inglaterra, por lo que se consider, que G. rostochiensis no tena enemigos naturales
fuera de su centro ce origen (Stirling, 1991).

Sin embargo, en la zona productora de papa de la Regin, Cofre de Perote, Ver.,
el cultivo de la papa fue introducido y por consiguiente el nematodo. Los resultados
muestran, que los quistes de G. rostochiensis presente en esta zona, estn infectados
por hongos oportunistas nativos. Esto contrasta con reportes anteriores (Willcox y Tribe,
1974; Kerry y Crump, 1977), ya que se consideraba, que en Europa, donde el
nematodos fue introducido, no se le han encontrado enemigos naturales y que solo se le
reportan en el Per y Sudamrica, donde este nematodo es originario (Morgan-J ones, et
al., 1986).

Diversas investigaciones han sido enfocadas sobre la asociacin entre los hongos
nativos, llamados oportunistas, en el suelo, y quistes de Heterodera especficamente H.
avenae; H. glycines, y H. schachtii (Tribe, 1980; J ones, 1976; Morgan-J ones, et al.,
1981; Gintis et al.,1983; Dackman, et al., 1985), pero investigaciones de la actividad de
hongos nematofagos sobre quistes de especies de Globodera, eran mnimas,
comparativamente (Stirling, 1991), sin embargo, a la fecha se puede decir que la
73
situacin no ha cambiado, debido al uso de los nematicidas qumicos, el problema de
resistencia de los fitonematodos a esos productos y la contaminacin ambiental activar
los estudios sobre estos tpicos (Stirling, 1991).

La inclusin de organismos del suelo en teoras ecolgicas es una moderna
aproximacin que podra potencialmente proporcionar una mejor comprensin de la
estructura y funcin de los ecosistemas subterrneos (Lindow y Wilson, 1998). Todos
los organismos tienen enemigos naturales o antagonistas, que de alguna manera
regulan la densidad de las poblaciones de organismos; existen mecanismos reguladores
en el suelo, que mantienen las poblaciones de nematodos fitoparsitos, dentro de
ciertos niveles; los cuales estn determinados por el equilibrio dinmico existente entre
las poblaciones de los organismos (Rodrguez-Kabana, 1991; Cook, 1993).

Pero Cook y Baker (1983) menciona que, cuando un microorganismo fitopatgeno
es introducido en un ambiente donde no se manifiestan enemigos naturales, stos se
desarrollan sin competencia, y los lmites del tamao de su poblacin es su propia
capacidad de adaptacin al nuevo ambiente. Sin embargo, a los nematodos
enquistados, parece ser, que las prcticas culturales, como la rotacin de cultivos, la
cantidad de aos de cultivo y la aplicacin de nematicidas qumicos, son determinanates
en el desarrollo y control de las poblaciones de este tipo de fitonematodos (Stirling,
1991).

El haber obtenido solo el 3.5% de infestacin natural de quistes por hongos en la
zona de Perote, Ver., demuestra una baja incidencia de quistes infectados de G.
rostochiensis lo que contrasta con los resultados reportados en Per (Morgan-J ones, et
al., 1986) y pudiera asemejarse a lo encontrado en Inglaterra (Willcox y Tribe, 1974),
donde se considera niveles de infestacin relativamente bajo.

Sin embargo, en ningn reporte se mencionan las pruebas de patogenicidad que
nos daran los elementos suficientes, para determinar, si estos hongos, con los nivel de
74
infestacin mencionados, podran tener potencial, como agentes de control biolgico de
este nematodo.

Estos resultados indican, que en los suelos de la zona productora de papa del
Cofre de Perote, los quistes del nematodos dorado G. rostochiensis estn asociados a
hongos nematofagos habitantes del suelo, y estos hongos pertenecen, en su mayor
parte, a la clase Hyphomycetes. En otros reportes se menciona, que los quistes de G.
pallida y G. rostochiensis, estn asociados a varios hongos oportunistas, al menos a 28
especies (Morgan-J ones, et al., 1986); resultados similares se obtuvieron en otros
estudios (Morgan-J ones et al.,1988).

En este estudio, se aislaron los siguientes hongos nativos asociados a quistes de
G. rostochiensis: Paecilomyces carneus, Acremonium incrustatum, Phialophora malorum,
Fusarium sp., Aspergillus sp., Chaetomidium sp., Cladosporium sp., Drechslera
sp.,Micelia sterilia, Pteroconium sp., Trichocladium asperum y Ulocladium atrum.
Ninguna de estas especies de hongos nematofagos haba sido reportada como asociada
a quistes de G. rostochiensis.

La especie Paecilomyces carneus, se encontr asociado a quistes de G.
rostochiensis. El gnero est estrechamente relacionado a Penicillium, es uno de los
principales gneros en estudios de control biolgico (Godoy et al., 1983); tpicamente,
este es un hongo habitante del suelo, pero tambin se conoce por colonizar esclerosios,
larvas de insectos, y tambin tejidos animales y humanos (Godoy et al., 1983). Otras
especies de Paecilomyces se reportan asociadas con quistes de nematodos del gnero
Heterodera en muchas localidades geogrficas (Dackman y Nordbring-Hertz, 1992;
Stirling, 1991; Davide y Zorrilla, 1995; Rodrguez-Kabana et al., 1986).

La especie Paecilomyces lilacinus se aisl de quistes de H. glycines, de huevos de
M. arenaria (Cabanillas et al., 1989; Gintis, 1983; Morgan-J ones, 1984; Davide y Zorrilla,
1995); y se emplea como agente de control biolgico, de Tylenchus semipenetrans
(J atala, 1983).
75
Tambin, parasita huevos (J atala et al., 1983; Dunn, 1983) y hembras de M.
incognita (Godoy et al., 1983), y quistes de G. pallida, (Rodrguez- Kabana, 1986).
En una revisin exhaustiva de literatura no se encontr ningn reporte de este
hongo asociado a quistes de G. rostochiensis, por lo que al parecer, este es el primer
reporte.

En este estudio se aisl, tambin a la especie Acremonium incrustatum cabe
destacar que, en una bsqueda exhaustiva de literatura, no se encontr ningn reporte
de esta especie asociado a quistes de G. rostochiensis; sin embargo, varias especies de
este gnero ya se han reportado como hongos oportunistas asociados a quistes de
Heterodera spp.. A. strictum Gams sobre huevos y quistes de Heterodera schachtii,
(Nigh, 1979); Acremonium sp. fue aislado de quistes de H. avenae en Suiza (Dackman y
Norbring-Hertz, 1985); A. persicinum Nicot y Gams, fue aislado en el segundo estado
juvenil de Meloidogyne javanica (Klopper, 1980); y A. coenophiclum sobre nematodos
ectoparsitos y endoparsitos, M. meryland, y Pratylenchus scribneri (Pedersen, 1988;
Yu O y Cooserman, 1998).

En esta investigacin otro hongo aislado fue Phialophora malorum, asociado a
quistes de G. rostochiensis; de esta especie no se encontr ningn reporte que la
mencionara asociado a quistes de G. rostochiensis; sin embargo, esta especie ya ha sido
reportada como un parsito importante sobre quistes de Heterodera schachtii, en
diferentes pases: Alemania, Blgica, Checoslovaquia, Dinamarca, Holanda, Inglaterra,
Italia, Noruega y Suiza (Van der Laan, 1986; Dove, 1969; Bursnall y Tribe, 1974). Al
parecer este es el primer reporte de P. malorum asociado a G. rostochiensis.

La especie Fusarium oxysporum se encontr asociado a quistes de G.
rostochiensis. Las especies de Fusarium spp. tambin han sido reportadas como
parsitos de huevos y quistes de H. schachtii (Nigh et al., 1980 Morgan-J ones et al.,
1981; West et al., 1988), sobre quistes y huevos de H. glycines (Gintis et al., 1983;
Morgan-J ones et al., 1984); tambin, se ha encontrado atacando huevos de varias
76
especies de nematodos sobre placas de agar in vitro, y creciendo saprofiticamente sobre
huevos muertos. Sin embargo en diversos estudios han concluido, que otro saprofito
facultativo comn era causante de la afectacin de algunos huevos de H. schachtii bajo
ciertas condiciones en los campos (Nigh, 1979).

Aunque F. oxysporum y F. solani estn asociado con quistes y huevos de
nematodos fitoparsitos en varios pases del mundo, tambin se reporta asociados a
quistes de G. rostochiensis (Goswami y Rumpenhorstt, 1978). Sin embargo, se seala
que aunque Fusarium sp. es un parsito de las plantas, ste no puede ser considerado,
para el uso de posibles prcticas de control biolgico, contra quistes de Heterodera
(Tribe, 1980); no obstante este sealamiento, el gnero Fusarium spp. es tan variable
en sus formas especiales que difcilmente la especie que se asocia con lo quistes de G.
rostochiensis sea fitopatgeno.

Se reporta que en una exploracin microscpica de huevos provenientes de
quistes, donde Fusarium est presente, arroja resultados confusos, principalmente en su
capacidad para penetrar el corin (Nigh et al., 1980), estos mismos autores
documentaron la habilidad de los hongos aislados de H. glycines, sin embargo, esto no
significa que los aislamientos de est especie logran la penetracin de la cscara del
huevo; ya que algunos quistes invadidos por Fusarium sp., contenan huevos que
aparentemente no son afectados por el hongo.

Las dems especies de hongos habitantes del suelo, asociados a lo quistes de G.
rostochiensis en la zona productora de papa de la regin del Cofre de Perote, Ver.,
estn reportadas como especies de hongos oportunistas que se asocian a los quistes de
Heterodera spp. o Globodera spp. (Morgan-J ones, et al., 1986; Morgan-J ones et
al.,1988).



77
El hecho de que estas especies de hongos, estn asociados con quistes de G.
rostochiensis en la regin Cofre de Perote, estn adaptados a las condiciones ecolgicas
de esos suelos y son un potencial para usarse en el manejo integrado del nematodo
dorado de la papa.

Es poca la literatura cientfica que aborda el tema de los hongos nematofagos
asociados a los quistes de nematodos fitoparsitos, sobre todo, de los gneros
Heterodera spp. y Globodera spp.; lo anterior puede deberse a, que las estructuras de
las paredes, tanto de los quistes como de los huevecillos, de estos fitonematodos, les
permiten mantenerse casi invulnerables al ataque de enemigos naturales (Stirling,
1991); sin embargo, en los centros de origen de los nematodos enquistados, Heterodera
spp. y Globodera spp., se reportan varias especies de hongos asociados a quistes de
nematodos fitopatgenos (Morgan-J ones, et al., 1986; Morgan-J ones et al.,1988), y en
Inglaterra (Willcox y Tribe, 1974), sin embargo, en ningn reporte se mencionan el
grado de parasitismo, que los hongos presentan sobre los huevecillos y los quistes.

Los datos de nuestro estudio demuestran que las especies, Acremonium
incrustatum, Paecilomyces carneus y Phialophora malorum, presentaron infeccin sobre
los quistes de G. rostochiensis. Los tres gneros de hongos ya han sido reportados, que
contienen especies con caractersticas nematofagas; Acremonium spp. (Night, 1979;
Klopper, 1980; Pedersen, 1988; Yu O y Cooseman, 1998); Paecilomyces spp. (Godoy et
al., 1983; Dackaman y Nordbring-Hertz, 1992; Stirling, 1991; Davide y Zorrilla, 1995;
Rodrguez-Kabana et al., 1986; Cabanillas et al., 1989; J atala, 1983); y Phialophora
spp., (Van der Laan, 1986; Dove, 1969; Bursnall y Tribe, 1974). Sin embargo, las
especies estudiadas en este trabajo, no han sido reportadas, infectando quistes de G.
rostochiensis.




78
En la literatura cientfica, se consideraba que este fitonematodo no tena
enemigos naturales, excepto en los ambientes de su zona de origen (Tribe, 1980;
Stirling, 1991), aunque en Inglaterra, fuera de su centro de origen, ya se haban
reportado hongos asociados a los quistes de este fitopatgeno, y no se demostr
patogenicidad (Willcox y Tribe, 1974); en este estudio se demuestra que lo quistes de
G. rostochiensis son atacados por hongos nativos de la regin del Cofre de Perote, Ver.

La patogenicidad mostrada por las tres especies de hongos nematofagos sobre
los quistes de G. rostochiensis, nos permiten suponer que estas especies tienen
potencial como agentes de control biolgico para este fitonematodo y que es necesario
realizar mas estudios a este respecto, con el propsito de evaluar la virulencia de estos
hongos sobre el fitonematodo, y el potencial como agentes de control biolgico del
mismo en la zona productora de papa del la Regin, Cofre de Perote, Ver.

En revisiones exhaustivas de la literatura cientfica, no se encontr ningn reporte
de la patogenicidad de estas tres especies de hongos sobre quistes de Globodera
rostochiensis. Consideramos a ste, como el primer reporte.













79
VI. CONCLUSIN


Los datos soportan la hiptesis de que existen hongos nativos que parasitan a
quistes de Globodera rostochiensis en los suelos de la zona productora de papa del
Cofre de Perote, Veracruz.

La densidad de poblacin de quistes de Globodera rostochiensis es alta, en todas
las localidades estudiadas. de la zona productora de papa del Cofre de Perote, Veracruz.

Las especies de hongos asociados a los quistes de G. rostochiensis en la regin
del Cofre de Perote, Veracruz, Mxico, son las siguientes: Paecilomyces carneus,
Cladosporium sp., Phialophora sp. Trichocladium asperum, Acremonium incrustatum,
Aspergillus sp., Chaetomidium sp., Drechslera sp., Fusarium sp., Micelia sterilia
Phialophora malorum, Pteroconium sp, y Ulocladium atrum.

Las especies de hongos, Acremonium incrustatum, Paecilomyces carneus y
Phialophora malorum, tienen capacidad para infectar quistes de G. rostochiensis.

Este es el primer reporte de hongos nativos patgenos de quistes de G.
rostochiensis en ambientes fuera de su centro de origen.

En este estudio, se aportan las bases, para continuar estudios de hongos, que
parasitan quistes de G. rostochiensis y el potencial de stos, como agentes de control
biolgico.






80
VII. LITERATURA CITADA


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91
INSTITUTO DE
ECOLOGIA, A.C.
DIVISIN DE SISTEMTICA
Xalapa, Ver. 7 de Junio de 2002
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR DEL POSGRADO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
UNIVERSIDAD DE COLIMA
COLIMA, COLIMA
Estimado Dr. Aguilar:
Por medio de la presente le comunico a Ud. de la manera ms atenta, que el trabajo titulado
Aislamiento y Evaluacin de Hongos Nematofagos Asociados a Quistes de Globodera
rostochiensis (Woll.) en la Regin Cofre de Perote, realizado por el C. ngel Enrique Nez
Snchez, alumno del posgrado en Biotecnologa para optar por el grado de Maestro en Ciencias, ha
sido terminado satisfactoriamente desde mi punto de vista. Por esta razn, considero que puede
continuar con los trmites correspondientes. que marca el reglamento del posgrado que Ud. dirige.
Sin otro particular agradezco de antemano su atencin y aprovecho la oportunidad para
enviarle un cordial saludo.
A T E N T A ME N T E
M. en C. Gloria L. L. Carrin Villarnovo
Departamento Hongos
Km 2.5 Antigua carretera a Coatepec, A.P. 63 Xalapa 91000, Veracruz, Mxico
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DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR
PROGRAMA DE POSGRADO DE LA FCBA
Anexo a la presente. el manuscrito de Tesis de Maestria titulado: AISLAMIENTO Y
EVALUACIN DE HONGOS NEMATOFAGOS ASOCIADOS A QUISTES DE
Globodera rostochiensis (WOLL) EN LA REGION COFRE DE PEROTE. dicho
documento es presentado por el alumno del Progama de Maestra en Biotecnologa: Angel
Enrique Nez Snchez. Adems informa a usted. que acadmicamente, este documento
cumple con los requisitos suficientes. como tesis de maestra. Asimismo. autorizo para que
este documento sea sometido a revisin por expertos y se prosigan los tramites de titulacin
correspondientes.
Sin ms por el momento. aprovecho para saludarle afectuosamente y le reitero la mas alta
de mis consideraciones.
ATENTAMlENTE
Tecomn Colima., a 07 de Junio de 2002.
DR OSCAR REBOLLEDO DOMNGUEZ
Asesor de Tesis
c.c.p.-Ing. Rodolfo V. Morentin Delgado.- M. Director de la FCBA.
c.c.p.-Interesado
c.c.p. -Archivo
P R E S E N T E
UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
Dr. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR DEL POSGRADO
PRESENTE.
Por este conducto, los abajo firmantes profesores-investigadores de la F.C.B.A. de la
Universidad de Colima, hacemos de su conocimiento, que despus de haber revisado el
borrador de tesis titulado AISLAMIENTO Y EVALUACIN DE HONGOS
NEMATOFAGOS ASOCIADOS A QUISTES DE Globodera rostochiensis (WOLL)
EN LA REGION COFRE DE PEROTE, que presenta el C. Angel Enrique Nez
Snchez, alumno del posgrado de esta Facultad, consideramos que rene los elementos
suficientes de contenido y forma de un documento de Maestra. Por ello, expresamos
nuestra aprobacin para que se imprima y se sigan los trmites acadmicos que
correspondan.
Sin otro particular, le saludamos cordialmente
ATENTAMENTE
Tecomn, Colima., a 23 de Julio de 2002
Dr. Alfonso Pescador
Docente de la FCBA.
Rubio

ccp.- Ing. Rodolfo V. Morentn Delgado.- Director de la FCBA.
ccp.- Interasado
ccp.. Archivo personal
ccp.- Expediente correspondiente
Km 40 Autopista Colima-Manzanillo, Tecomn, Colima, Mxico, Cp 28100
Tels. (3) 324 42 37, 324 46 42 fcba@tecoman.ucol.mx