Re Cuento

Recuento de microorganismos aerobios mesofilos por el mtodo de recuento en placa
Laboratorio de microbiologa de alimentos
Matallana Klisman, Rivera Mauricio, Rodas Yesid
Programa de ingeniera de alimentos
Universidad de Caldas Manizales, Caldas
RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS POR EL METODO DE RECUENTO EN PLACA
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RESUMEN El mtodo de recuento en placa tiene como objetivo cuantificar la cantidad de colonias que crecen en un medio de cultivo determinado; los resultados que se observan en este informe fueron obtenidos en el laboratorio de microbiologa de alimentos de la universidad de caldas, en donde se prepar una serie de diluciones 10-1, 10-2, 10-3; con este mtodo se pudo obtener la cantidad de micro organismos que se desarrollan en un alimento determinado, la siembra seleccionada fue por profundidad la cual se llev acabo en 4 cajas de Petri que haban sido esterilizadas para garantizar buenos resultados, se llev acabo la respectiva incubacin y luego de pasar el respectivo tiempo de incubacin se realiz el conteo de las colonias formadas, el cual presento una cantidad de 35000 UFC/mL; se puede concluir que en la muestra que se analiz avena en hojuelas marca QUAKER, se encuentra por encima de los valores establecidos por la norma, esto puede indicar que no hubo una buena manipulacin durante el procesamiento del alimento ya sea en la produccin, empaque o almacenamiento del producto.
1. INTRODUCCIN: En diversos estudios microbiolgicos (como anlisis de alimentos, de agua de bebida, de productos farmacuticos o del medioambiente entre otros), se requiere conocer el nmero de microorganismos presentes en un material con objeto de determinar su calidad. El procedimiento es esencialmente el mismo que para la medida del crecimiento de las poblaciones de bacterias. El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante mtodos de medida de la masa total celular, que
generalmente es directamente proporcional al nmero de clulas, (mtodos de determinacin del peso, de la actividad del cultivo o mtodos turbidimtricos) o por la determinacin del nmero de clulas. Principales mtodos de recuento del nmero bacterias en una muestra El nmero de bacterias puede determinarse directamente por recuento del nmero total de clulas o indirectamente por la estimacin del nmero ms probable, por filtracin o por el recuento de clulas viables en placa (clulas capaces de dividirse en
un medio de cultivo slido, tambin se refieren como unidades formadoras de colonias, UFCs). 2. MATERIALES Y MTODO En el desarrollo de la prctica se utilizaron instrumentos estriles y apropiados para la toma de muestras para el anlisis microbiolgico.
Figura 3. Homogenizacin de la muestra.
Para realizar la primera dilucin se tom un mililitro de la suspensin madre con una pipeta volumtrica de 1 mililitro y se llevaron a un tubo de ensayo que contena 9 ml de agua peptonada al 0,1%.
Figura 1. Materiales para realizar el recuento
El laboratorio proporciono un empaque de avena (Quaker) del cual se utilizaron 10 g de muestra. Fue necesaria la utilizacin del homogeneizador ya que la muestra es slida, esta se mezcl con 90 ml de agua peptonada al 0,1%.
Figura 4. Primera dilucin 1:100
Posteriormente del tubo de ensayo se procede a tomar 1 ml para llevarlo a otro tubo de ensayo y as obtener la siguiente dilucin 1:1000.
Figura 2. Obtencin de la muestra de la avena.
Figura 5. Dilucin 1:1000
Antes de realizar la siembra se debe rotular le material de vidrio que ser utilizado, en este caso las cajas de Petri esto con el fin de identificar las muestras al momento del recuento de las colonias, la rotulacin deber ser en los bordes de la caja para no interferir con en conteo.
Figura 8.homogenizacion del cultivo.
Seguidamente se incuban las cajas de Petri que se encuentran rotuladas, por 48 horas a una temperatura de 35C para lograr un crecimiento favorable de los microorganismos.
Figura 6. Rotulacion
En esta prctica el recuento se realiz por siembra en profundidad y por duplicado, en la cual se utiliz 1mL de las diluciones y se sembr en cada caja Petri, donde adems se agreg el medio de cultivo ya preparado; al momento de hacer la siembra se debe hacer una homogenizacin con suaves movimientos para la dispersin adecuada del medio, y as lograr el crecimiento de los microorganismos
Figura 9. Incubacin
3. Resultados y discusin
Pasado el tiempo de 48 horas se realiz el recuento de aerobios mesfilos en las cajas, se logr dividiendo las cajas en 4 cuadrantes cada una, con el fin de facilitar el recuento; las colonias contadas fueron marcadas, con el fin de contarlas varias veces.
Figura 7.siembra en la caja de Petri
Tabla 2. Recuento de Aerobios Mesfilos de acuerdo a las muestras sembradas. N de Nmero Dilucin Volumen UFC/ml caja de sembrada sembrado Petri colonias -Caja 1 DNPC 10-2 1 ml Caja 2 Prom. Caja 3 Caja 4 Prom. DNPC -388 308 348 10-2 -10 10
-3 -3
1 ml -1 ml 1 ml --
--3,9x105 3.1x105 3,5x105
--
Segn la NTC 2159 del 22 de Septiembre del 2006, los lmites mximos que se permiten de aerobios mesfilos en avenas en hojuelas para consumo humano son de 20000 UFC/gr o ml. Segn lo anteriormente mencionado el recuento de aerobios mesfilos encontrados en la muestra de avena en hojuelas de la marca QUAKER se puede evidenciar que no cumple con los parmetros que exige la norma, ya que presenta un recuento de 35000 UFC/mL en la dilucin 1:1000, este resultado nos puede decir varias hiptesis como por ejemplo: hubo una mala manipulacin del alimento, mala limpieza y desinfeccin de los equipos, mala higiene en los operarios, contaminacin de la materia prima. En la otra dilucin 1:100 el recuento no fue posible esto se debe a la gran cantidad de colonias que crecieron. 4. Conclusiones Homogenizar la muestra es muy importante ya que en nuestro caso que es un material solido nos puede marcar la diferencia en el crecimiento de los microorganismos.
Los resultados se muestran en las tablas 1 y 2.
Tabla 1. Recuento de Aerobios Mesfilos de acuerdo a los cuadrantes N de caja Petri Diluci n sembr ada 10-2 Cuadran te UFC/cuadra nte UFC/4 cuadrant es DNPC DNPC 388 308
Caja 1 DNPC 1 Caja 10-2 1 DNPC 2 -3 Caja 10 1 97 3 Caja 10-3 1 77 4 DNPC= Demasiado numerosas para contar
Para que un microorganismo se desarrolle adecuadamente en un medio de cultivo se debe garantizar una serie de requisitos como: temperatura, grado de humedad, disponibilidad de oxgeno, pH, tipo de agar, etc. El recuento de aerobios mesfilos puede ser un indicador de la vida de anaquel de un producto. En algunos productos la presencia de microorganismos pueden indicar condiciones inadecuadas de tiempo y condiciones de almacenamiento. Se pudo comprobar que el RAM en la avena en hojuelas de marca QUAKER, sobrepasa los lmites establecidos por la norma tcnica colombiana 2159, lo cual nos indica que este producto no es apto para la consumo humano pues presenta una alta carga microbiana la cual puede ser perjudicial para el consumidor.
Se tendra que revisar mas detalladamente el proceso de produccin para saber con exactitud cul es el foco de contaminacin.
5. Bibliografa NORMAS TECNICAS COLOMBIANAS 2159: Productos de molinera. Avena en hojuelas para consumo humano. MARTNEZ MIRANDA, M, 2013. Guas de laboratorio microbiologa de alimentos. Programa de ingeniera de alimentos, departamento de ingeniera, Universidad de Caldas. NORMAS TECNICAS COLOMBIANAS. microbiologa de alimentos y productos para alimentacin animal. Requisitos generales y directrices para anlisis microbiolgicos. Bogot: ICONTEC, 2009.67: il(NTC 4092).

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RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS POR EL METODO DE RECUENTO EN PLACA

Figura 1. Materiales para realizar el recuento

Figura 4. Primera dilucin 1:100

Figura 2. Obtencin de la muestra de la avena.

Figura 5. Dilucin 1:1000

Figura 8.homogenizacion del cultivo.

Figura 7.siembra en la caja de Petri

--3,9x105 3.1x105 3,5x105

Los resultados se muestran en las tablas 1 y 2.

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