AYUDA PARA ANTIBIOGRAMA Y SEROLOGIA

Antibiograma

Un antibiograma mostrando la resistencia de la bacteria ante varios antibioticos

Medicin de resistencia a los antibioticos El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos. Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.

Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos o semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural). La historia moderna de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecas procesos infecciosos, aunque desgraciadamente tambin supuso un aumento en los niveles de resistencia antibitica. El antibiograma tiene cuatro utilidades principales: La utilidad bsica del antibiograma es la instauracin de un tratamiento antibitico correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infeccin posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algn antibitico para no incluirlo como terapia. En cuanto al tratamiento el antibiograma no slo es necesario en la instauracin, tambin resulta til en el seguimiento e incluso en la confirmacin de tratamientos empricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento. Otra aplicacin de las tcnicas de estudio de resistencia es la epidemiologa. Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clnicos para tomar medidas correctoras. Por otro lado tambin puede tener utilidad diagnstica porque el perfil de resistencia puede en algn caso orientar en la identificacin bacteriana. Existen multitud de antimicrobianos en el mercado y el nmero sigue creciendo porque el desarrollo de ms mecanismos de resistencia por parte de los microorganismos se traduce en un esfuerzo mayor por fabricar ms y mejores antibiticos. No es necesario contrastar la eficacia de todos los antibiticos para cada aislamiento bacteriano. Los criterios que se siguen para seleccionar que antimicrobianos se ensayan respondes a factores de diversa ndole: Factores microbiolgicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos de resistencia descritos previamente en su especie. Factores farmacolgicos: Tipo de antimicrobiano y parmetros de absorcin, distribucin y eliminacin. Factores del paciente: Tipo de infeccin. Factores de riesgo y estado general de salud. Situacin inmunolgica e hipersensibilidad.

Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia antibitica mas habituales para cada especie.

Mtodo Kirby-Bauer
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En el test de Kirby-Bauer, los filtros blancos que contienen antibitico son colocados en una placa con bacterias. Los halos blancos donde se observa un escaso crecimiento bacteriano indica susceptibilidad al antibitico testado.

El mtodo Kirby-Bauer (mtodo de difusin en agar) es empleado para determinar la sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibitico o quimioterpico. Este mtodo comprende lo que se denomina un antibiograma o prueba de susceptibilidad bacteriana frente a drogas especficas.

ndice
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1 Forma de aplicacin 2 Comportamiento de inhibicin 3 Errores al realizar un antibiograma 4 Limitaciones de este mtodo 5 Vase tambin 6 Enlaces externos

[editar] Forma de aplicacin

Sobre la superficie de una placa de agar Mller-Hinton (medio de cultivo rico, diseado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad) se inocula una cantidad estandarizada de bacterias, sembrndolas de forma pareja para obtener despus de la inoculacin un "csped" bacteriano. A continuacin se colocan discos de papel de filtro impregnados con concentraciones conocidas de los diferentes antibiticos. La eleccin de los antibiticos a probar dependen del germen y del foco de infeccin. El antibitico difundir desde el papel filtro al agar de forma radial. Se incuba la placa durante 18-24 horas a 37 C (respetar este parmetro, porque temperaturas menores pueden disminuir la velocidad del crecimiento del germen y la difusin del antibitico, dando halos irregulares difciles de medir), y luego se miden los halos de inhibicin de desarrollo, interpretndose de acuerdo a tablas confeccionadas previamente. Los resultados se expresan como: Sensible (S), Intermedio o Moderadamente sensible (I) y Resistente (R).

[editar] Comportamiento de inhibicin

El tamao del halo de inhibicin de desarrollo variar en base a los siguientes parmetros o variables:
1. 2. 3. 4. 5. La concentracin de la droga. Sensibilidad bacteriana. Coeficiente de difusin de la droga en el agar. Tiempo y temperatura de incubacin. pH y composicin del medio. Se usan preparados comerciales que den resultados reproducibles, por ejemplo: agar Mller-Hinton. Son cultivos aceptados por el comit de la OMS para la normalizacin de las pruebas de susceptibilidad. 6. Profundidad del medio en las placas. Esto est estandarizado: se emplean placas de 9 cm de dimetro, y se agrega siempre el mismo volumen de medio de cultivo: 15 ml por placa. De esta manera las placas poseen siempre la misma altura de agar. 7. Tamao del inculo. Debe estar estandarizado ya que si ste es muy pequeo dar una sensibilidad mayor a la real, y si el inculo es muy denso pueden aparecer mutantes resistentes.

En los mtodos de difusin de mutantes resistentes aparecen como colonias aisladas dentro del halo de inhibicin, por lo tanto esto indica que no se puede usar ese antibitico y se debe informar como resistente. La forma rigurosa de estandarizar un inculo es normalizando la turbidez por un mtodo fotomtrico utilizando una suspensin de sulfato de bario como estndar, segn la escala de Mac Farland.

[editar] Errores al realizar un antibiograma

Dentro de las posibilidades que se cuentan estn: densidad del inculo mal estandarizada, utilizacin de cultivos no puros, humedad o sequedad excesiva del medio de cultivo que puede conducir a un crecimiento demasiado confluente o pobre, y deterioro de los discos de aplicacin.

[editar] Limitaciones de este mtodo

Es un mtodo solo cualitativo, orientado al tratamiento. No es aplicable a microorganismos de crecimiento lento ni a microorganismos anaerobios. Antibiticos como la polimixina o la vancomicina no tienen buena difusin en agar

Concentracin inhibitoria mnima

De Wikipedia, la enciclopedia libre (Redirigido desde Concentracin mnima inhibitoria) Saltar a: navegacin, bsqueda La Concentracin mnima inhibitoria (CMI), en microbiologa, es la concentracin ms baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento visible de un microorganismo despus de su incubacin. La concentracin mnima inhibitoria es importante en diagnsticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a un agente antimicrobiano y adems para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos.1 Las concentraciones mnimas inhibitorias pueden ser determinadas mediante mtodos de microdilucin en caldo, normalmente siguiendo las directrices de centros de referencia tales como el CLSI (Clinical Laboratory Institute Standards), BSAC (British Society for Antimicrobial Chemotherapy) o EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing). Existen otros mtodos basados en la difusin en agar, tales como difusin de discos, y tiras de Etest. Las tiras de Etest son un mtodo cuantitativo de difusin en agar comercializado por AB Biodisk, Solna, Sweden. Consiste en unas tiras de plstico inerte que incorporan un gradiente de concentracin de antimicrobiano. Cuando se

depositan sobre las placas de agar inoculadas, el antimicrobiano difunde en el medio, y tras la incubacin, se determina la CMI en el punto de interseccin de la elipse de inhibicin del crecimiento.[1]. [2] En medicina, la concentracin mnima inhibitoria no slo se usa para determinar la concentracin de antimicrobiano que recibir el paciente sino tambin el tipo de antimicrobianos a utilizar, lo que a su vez reduce la oportunidad de resistencia microbiana a agentes antimicrobianos especficos

Que es exactamente la Solucin Fisiolgica ?

La solucion fisiologica se usa para reponer sales y electrolitos en el caso de perdida de los mismos por deshidratacion, se compone de: Composicin de la solucin: Glucosa Cloro Sodio Bicarbonato Potasio Todo en un medio liquido como el agua

Como se hace la solucin salina?

Solucin salina no es ms que agua con sal. (Cloruro de sodio) pero si a lo que te refieres es a la solucin fisiolgica (osmolaridad = a la del plasma) es cloruro de sodio 9 % el resto es agua. Nota: la solucin debe ser estril para fines teraputicos y eso es ms complicado porque el agua debe ser destilada. Para fines de hidratacin es mejor el suero oral que conlleva otras cosas como potasio, glucosa, cloruro de sodio.

Escala de Mc Farland

La utilidad de la escala es poder realizar suspensiones bacterianas ajustadas a un patrn, generalmente se suele usar el 0,5 Mc Farland, para esto se toma una muestra de nuestra bacteria y la inoculamos en un tubo con solucin salina, en el momento en que se produzca un poco de turbidez ya estamos en el 0,5 (de forma visual).

La finalidad, es establecer una relacin entre una precipitacin qumica y una suspensin bacteriana. Creamos 10 estndares (en la tabla aparece la composicin de estos) y por espectrofotometra, creamos una recta patrn, de forma que vamos a poder detectar la concentracin de nuestras diluciones bacterianas (de manera aproximada, ya que depende de factores como el tamao de la bacteria, la formacin de agregados,...). La escala se basa en la capacidad de precipitacin del cloruro de bario en presencia de cido sulfrico.
TUBO 1 2 3 Cl2Ba 1% 0,1 0,2 0,3 SO4H2 1% 9,9 9,8 9,7 u.f.c/ml 3,0x108 6,0x108 9,0x108

4 5 6 7 8 9 10

0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0

9,6 9,5 9,4 9,3 9,2 9,1 9,0

1,2x109 1,5x109 1,8x109 2,1x109 2,4x109 2.7x109 3,0x109

INICIO

Estndar de McFarland
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Tubos de McFarland 0.5, 1 y 2 En microbiologa, los estndares de turbidez de McFarland se usan como referencia en suspensiones bacteriolgicas para saber que el nmero de bacterias por mililitro, o ms bien en UFC segn una escala que va de 0.5 a 10. Estos estndares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con cido sulfrico al 1% en volmenes especficos, 1 para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectofotometros.2

Los estndares pueden ser visualmente comparados con suspensiones de bacterias en salina estril o en caldos. Si la suspensin es demasiado turbia, puede aadirse diluyente, y si no es lo suficiente turbia, se puede agregar ms bacterias. La ventaja es que no es necesario incubar ni usar equipo especial para estimar el nmero de bacterias.3 Casos especficos en los que se usa es en el de antibiogramas o pruebas de sensibilidad, donde es necesario para estandarizar el mtodo y se eviten falsos positivos o negativos

Los Discos de ATB

Mantenerlos refrigerados a 8C Los discos que pertenecen a la familia de los betalactmicos pierden su potencia al estar frente al calor. Antes de colocar los discos deben de atemperarse y evitar su desecacin.

Antgeno

Cada anticuerpo se une a un antgeno especfico de forma similar a una llave en una cerradura.

Un antgeno ("anti", del griego - que significa 'opuesto' o 'con propiedades contrarias' y "geno", de la raz griega , generar, producir; que genera o crea oposicin) es una sustancia que desencadena la formacin de anticuerpos y puede causar una respuesta inmunitaria.1 La definicin moderna abarca todas las sustancias que pueden ser reconocidas por el sistema inmune adaptativo, bien sean propias o ajenas. Los antgenos son usualmente protenas o polisacridos. Esto incluye partes de bacterias (cpsula, pared celular, flagelos, fimbrias, y toxinas), de virus y otros microorganismos. Los lpidos y cidos nucleicos son antignicos nicamente cuando se combinan con protenas y polisacridos. Los antgenos no-microbianos exgenos (ajenos al individuo) pueden incluir polen, clara de huevo, y protenas de tejidos y rganos trasplantados, o protenas en la superficie de glbulos rojos transfundidos. Cada antgeno est definido por su anticuerpo, los cuales interactan por complementariedad espacial. La zona donde el antgeno se une al anticuerpo recibe el nombre de eptopo o determinante antignico, mientras que el rea correspondiente de la molcula del anticuerpo es el paratopo

Anticuerpo

Molcula de inmunoglobulina con su tpica forma de Y. En azul se observan las cadenas pesadas con cuatro dominios Ig, mientras que en verde se muestran las cadenas ligeras. Entre el tallo (Fraccin constante, Fc) y las ramas (Fab) existe una parte ms delgada conocida como "regin bisagra" (hinge).

Los anticuerpos (tambin conocidos como inmunoglobulinas, abreviado Ig) son glicoprotenas del tipo gamma globulina. Pueden encontrarse de forma soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los vertebrados, disponiendo de una forma idntica que acta como receptor de los linfocitos B y son empleados por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar elementos extraos tales como bacterias, virus o parsitos.

Funcin

Cada anticuerpo se une a un antgeno especfico de forma similar a una llave en una cerradura.

Puesto que los anticuerpos se dan de forma libre en el torrente sanguneo, se dice que son parte del sistema inmunitario humoral. Los anticuerpos circulantes son producidos por lneas clonales de linfocitos B que responden especficamente a un antgeno que puede ser un fragmento de protena de la cpside viral, por ejemplo. Los anticuerpos contribuyen a la inmunidad de tres formas distintas: pueden impedir que los patgenos entren en las clulas o las daen al unirse a ellas (neutralizacin). Pueden estimular la eliminacin de un patgeno por los macrfagos y otras clulas revistiendo al patgeno (opsonizacin) y pueden desencadenar la destruccin directa del patgeno estimulando otras respuestas inmunes como la va del complemento (lisis).

QUE ES LA PRUEBA ELISA?

La prueba Elisa es una tcnica o mtodo de inmunoensayo (Ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas) de laboratorio en sangre basndose en la deteccin de antgenos mediante los anticuerpos, existen numerosas enfermedades que se detectan con esta prueba siendo 100% confiable como lo es el Elisa para hiv/sida entre otras. Suerte

Western blot

Resultado del Western blot: una membrana con las protenas separadas en la electroforesis unidas, de las que slo se disciernen aquellas contra las se ha aadido un anticuerpo. El Western blot, o inmunoblot, es una tcnica analtica usada para detectar protenas especficas en una muestra determinada (una mezcla compleja de protenas, como un extracto tisular). Mediante una electroforesis en gel se separan las protenas atendiendo al criterio que se desee: peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc. Hay casi tantas posibilidades como tipos de electroforesis existen. Luego son transferidas a una membrana adsorbente (tpicamente de nitrocelulosa o de PVDF) para poder buscar la protena de inters con anticuerpos especficos contra ella.1 2 Finalmente, se detecta la unin antgenoanticuerpo por actividad enzimtica, fluorescencia entre otros mtodos. De esta forma se puede estudiar la presencia de la protena en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto a otras protenas. Esta tcnica es hoy en da imprescindible en varios campos de la biologa, como la biologa molecular, la bioqumica, la biotecnologa o la inmunologa. Existe toda una industria especializada en la venta de anticuerpos (monoclonales y policlonales) contra decenas de miles de protenas diferentes

Concentracin inhibitoria mnima

La Concentracin mnima inhibitoria (CMI), en microbiologa, es la concentracin ms baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento visible de un microorganismo despus de su incubacin. La concentracin mnima inhibitoria es importante en diagnsticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a un agente antimicrobiano y adems para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos.1 Las concentraciones mnimas inhibitorias pueden ser determinadas mediante mtodos de microdilucin en caldo, normalmente siguiendo las directrices de centros de referencia tales como el CLSI (Clinical Laboratory Institute Standards), BSAC (British Society for Antimicrobial Chemotherapy) o EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing). Existen otros mtodos basados en la difusin en agar, tales como difusin de discos, y tiras de Etest. Las tiras de Etest son un mtodo cuantitativo de difusin en agar comercializado por AB Biodisk, Solna, Sweden. Consiste en unas tiras de plstico inerte que incorporan un gradiente de concentracin de antimicrobiano. Cuando se depositan sobre las placas de agar inoculadas, el antimicrobiano difunde en el medio, y tras la incubacin, se determina la CMI en el punto de interseccin de la elipse de inhibicin del crecimiento.[1]. [2] En medicina, la concentracin mnima inhibitoria no slo se usa para determinar la concentracin de antimicrobiano que recibir el paciente sino tambin el tipo de antimicrobianos a utilizar, lo que a su vez reduce la oportunidad de resistencia microbiana a agentes antimicrobianos especficos

Halo de inhibicin
zona alrededor de un disco de antibitico en un antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar inoculada con el germen.