INFORME DE LABORATORIO

RECUENTO DE ESTAFILOCOCOS COAGULASA POSITIVA

BARRIOS PAJARO ANDREA CAROLINA

DIAZ SUAREZ DIOMEDES DE JESUS
JIMENEZ GUERRA IVAN ANDRES
JIMENEZ SALAS MILTON DAVID
OSSA PADILLA JUAN JOSE
RAMIREZ AMARIS CRISTIAN DAVID
RIOS BUELVAS DANIEL JOSE
SALCEDO GAMEZ LEINIKER JOSE

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE INGENIERIA Y TECNOLOGIA
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
VALLEDUPAR, CESAR
2016

INTRODUCCION
Este tipo de bacteria denominada tambin como estafilococo ureo o dorado puede crecer en
presencia o ausencia de oxgeno, son grampostiva, productora de coagulasa, catalasa inmvil y
no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo.
Son cocos gran positivos que se disponen en pares, ttradas o racimos. Son microorganismos
inmviles que no forman esporos. Son catalasa positivos y la mayor parte de las cepas
fermentan el manitol, producen pigmento amarillo en medios con sangre, hemolisina y
coagulasa.
Pueden producir una amplia gama de enfermedades, que van desde infecciones cutneas y de
las mucosas relativamente benignas. Adems, tambin puede afectar al aparato gastrointestinal,
ya sea por presencia fsica de staphylococcus aureus o por la ingesta de la entero toxina
estafiloccica secretada por la bacteria.
La contaminacin de alimentos por S. aureus est asociada con una forma de gastroenteritis
que se manifiesta por un cuadro caracterizado por vmitos (76% de casos) y diarrea (77% de
casos). El corto perodo de incubacin, entre una y seis horas, orienta a la sospecha de
enfermedad producida por ingestin de una o ms entero toxinas preformadas en el alimento
que ha sido contaminado con cepas de S. aureus.
Son raramente observados signos de infeccin generalizada como fiebre e hipotensin. En
general, es un cuadro auto limitado que tpicamente se resuelve en 24-48 horas desde el inicio.
No est claro si se desarrolla en humanos inmunidad a largo plazo, pero los anticuerpos no
necesariamente confieren inmunidad frente a la intoxicacin por S. aureus.

MARCO TEORICO:
Los estafilococos son clulas esfricas, habitualmente dispuestas en racimos irregulares
parecidos a racimos de uvas, crecen con rapidez sobre muchos tipos de medios y son
metablicamente activos, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varan desde el
color blanco hasta el amarillo intenso. Al Gram se evidencia como una coccea Gram positiva
de 1 uM dispuesta en racimos, aunque tambin se le puede evidenciar en cadenas cortas o
diplococos.
El gnero Staphylococcus contiene ms de 30 especies. Pero los de importancia clnica son
tres, y nosotros nos referiremos slo a uno de ellos, el Staphylococcus aureus, conocindose
tambin como el Staphylococcus dorado.
El Staphylococcus aureus es un microorganismo del reino de los protistas, ampliamente
distribuido en el ambiente, coloniza al hombre y animales. El hombre es portador asintomtico
entre un 20 y un 40% de los adultos sanos y forma parte de la flora normal de muchos sitios del
organismo como piel y nasofaringe y tracto gastrointestinal, causando diversas manifestaciones
clnicas. Casi toda persona presenta algn tipo de infeccin por S. aureus durante su vida, que
vara en gravedad desde intoxicacin alimentaria o infecciones cutneas menores hasta
infecciones graves potencialmente mortales.
Se identifica con las pruebas de la termonucleasa, manitol y coagulasa (para las cuales es
positivo). Es reconocido por su gran capacidad para producir productos extracelulares. Es
necesario entender, que el S. aureus, es uno de los microorganismos ms resistentes conocidos
(incluso pese a que no forma esporas). Puede mantenerse viable por 6 14 semanas en pus y se
necesitan 15 minutos de exposicin al alcohol de 70 para su eliminacin. La tintura de yodo es
mucho ms activa y requiere solo 1 minuto.

OBJETIVOS:

Determinar el nmero de Staphylococcus coagulasa positiva en muestras de alimentos.

Identificar el nmero de colonias presentes en una muestra de arequipe klarens

mediante mtodos de crecimiento de microorganismos en su respectivo medio.

Observar si la cantidad presente en el ambiente est en el rango permitido

JUSTIFICACION:
El presente informe de laboratorio es con el fin de demostrar si un alimento (arequipe
klarens) es apto o no para el consumo humano, teniendo en cuenta la presencia de
estafilococos coagulasa positiva.

MATERIALES Y REACTIVOS:

Cajas de Petri estriles

Beaker estril

Erlenmeyer estril

Agar Baird parker

Caldo cerebro corazon

Plasma deshidratado

telurito de potasio al 3.5%

Emulsin de yema de huevo.

EQUIPOS:

Incubadoras

Contador de colonias

Incubadora a 35C +/- 2C.

Estufa
PROCEDIMIENTO:
RECUENTO DE ESTAFILOCOCOS COAGULASA POSITIVA.

Se mezcl muy bien la muestra de arequipe para asegranos de su homogenizacin.

Pasamos a desinfectar con alcohol al 75% el sitio en el cual se extrajo la muestra.

Luego se abri aspticamente (con el mechero en medio) y adecuadamente la muestra.

Posteriormente se pes 11 gramos de arequipe (klarens)

Se aadi al recipiente de dilucin que contiene 99 ml de agua peptonada para Obtener

la dilucin de 10-1.

Se mezcl agitando vigorosamente el recipiente para homogenizar.

Posteriormente preparamos la dilucin 10-2 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10-1 a un

tubo de ensayo que contena 9 ml de agua peptonada, y se agito Cuidadosamente.

Luego se Prepar la dilucin 10-3 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10-2 a un tubo de

ensayo que contenia 9 ml de agua peptonada, y se agito cuidadosamente.

se pas por duplicado alcuotas de 0.1 ml de cada una de las diluciones Consecutivas en
cajas de agar Baird parker previamente temperadas.

Se extendi el inoculo sobre la superficie del agar, con la ayuda de la varilla de

HOCKEY, hasta que La superficie quede seca.

Invertimos las placas y se llevaron a incubar a 35C + / - 2C durante 48 horas.

Por ultimo las cajas que presenten entre 20 y 200 colonias aisladas las contamos y
tambin contamos las colonias negras y brillantes, con bordes reducidos blancos,
rodeados de zonas claras que contrastan con el medio opaco, zona de precipitado.
Anotamos el nmero de colonias con las caractersticas anteriormente sealadas y
multiplicamos por el factor de dilucin y luego por 10.

Se tom un mnimo de 3 colonias y realizar la prueba de coagulasa.

PRUEBA DE COAGULASA

Se trasladaron el nmero de colonias a confirmar a un nmero igual de tubos que

contienen 5 ml de Caldo infusin cerebro corazn (BHI).

Se hizo un control positivo sembrando una cepa de estafilococo coagulasa positiva en

un caldo BHI

Se incubaron a 35C + / - 2C durante 18 24 horas

Despus de pasado este tiempo este tiempo se transfiri 0.3 ml de cada uno de los
cultivos de BHI a tubos que contienen 0.3 de plasma deshidratado de conejo con
EDTA.

Trasferimos a un tubo 0.3 ml de plasma deshidratado de conejo como control negativo.

Por ltimo, se llevaron a incuba a 35C + / - 2 C

Se observ las 24 horas despus.

Una vez finalizado el tiempo de incubacin, hicimos la lectura con base en los tubos
que presentan coagulacin del plasma comparndolos con los controles positivos y
negativos.

Sobre el nmero total de colonias despus de las 48 horas de incubacin y la proporcin

de colonias confirmadas por la prueba de la coagulasa, hacer el clculo de estafilococos
coagulasa positiva utilizando como factor de correccin la relacin:

colonias positivas
Colonias examinadas.

RESULTADOS
Segn los anlisis realizados en la prctica de laboratorio reportamos a continuacin los
resultados obtenidos:
Dilucin 10-1
Caja 1= 0 colonias
Dilucin 10-1

Caja 2= 0 colonias

Caja 1= 0 colonias

Caja 2= 0 colonias

Como no se lleg a completar la formacin de las colonias presuntivas que nos indicaban la
posible presencia de staphylococcus coagulasa positiva en el alimento, por tanto, no se llev a
cabo el siguiente paso que en este caso era el anlisis de coagulasa presentes en el alimento.
Por consiguiente, el reporte quedara de la siguiente manera:
<1*10*10 = <100 UFC/g de staphylococcus coagulasa positiva en arequipe klarens

TABLA 1
REQUISITOS MICROBIOLOGICOS
DULCES

PARAMETRO
DE Recuento

LECHE

Staphylococcus

(AREQUIPE)

Coagulasa

100

200

de

Positivos.

UFC/ g o ml.
Donde:
n = Nmero de unidades a examinar.
m = ndice mximo permisible para identificar nivel de buena calidad.
M = ndice mximo permisible para identificar nivel aceptable de calidad.
c = Nmero mximo de muestras permisibles con resultado entre m y M.
Entonces segn Norma Tcnica NTC colombiana 3757 de 2008-05-28, nos indica que el
resultado de <100 UFC/g de staphylococcus coagulasa positiva en arequipe klarens, es un
resultado aceptable por tanto la muestra del alimento(arequipe) es apta para el consumo
humano.
ANALISIS DE RESULTADO.
De acuerdo a los resultados obtenidos, la muestra de arequipe klarens es apto para el consumo
humano, porque su proceso de produccin opto por poseer las siguientes caractersticas:

Buenas prcticas de higiene y manipulacin de la materia prima, entre las cuales se

destacan:
- Parmetros fsicos-qumicos de la leche
- Almacenamiento de la materia prima

- Transporte de la materia prima

Se establecieron las normas de seguridad:
- El alimento debe cumplir las normas alimentarias del gobierno destinario y/o las
normas del Codex alimentario en cuanto a la calidad, envasado, etiquetado y
-

adecuacin a los fines provistos.

Deben responder a las disposiciones legales en vigor y a las normas comerciales
generales, en lo concerniente a su tecnologa de fabricacin, composicin y dems
caractersticas, as como en su forma de presentacin. De lo contrario, se declararn

no apto para el consumo humano.

Transportar y almacenar los alimentos en condiciones adecuadas, utilizando las
mejores prcticas de gestin del almacenamiento, y realizar verificaciones

sistemticas sobre la calidad de los alimentos.

la leche se higieniza para ajustarle el tenor graso y luego se le somete a un tratamiento
trmico de pasteurizacin, la cual elimina todos los microorganismos que resultan

perjudiciales para la salud.

La coccin se debe realizar en ollas llamadas pailas, aqu se clienta y se mezcla el

azcar y una parte de leche con ingredientes.

El dulce de leche debe ser almacenado en depsitos que se encuentren a temperatura
ambiente.

Debe mencionarse, que a diferencia de otras investigaciones existen varias evidencias acerca
de los microorganismos estafilococos coagulasa positiva en arequipe, como en los siguientes
artculos:
Segn un artculo realizado por (Ricardo D. Andrade P; Gabriel I. Vlez H.; Margarita
R. Arteaga M.; Yolanda S. Daz Q.; Saudit S. Snchez S.
del Grupo Investigaciones en Procesos Agroindustriales, Programa de Ingeniera de
Alimentos, Universidad de Crdoba.) en el que obtuvieron un resultado de <100
UFC/g de Staphylococcus Coagulasa Positivo en arequipe.
Por otro lado, investigaciones hechas por el Instituto Nacional de Salud Subdireccin
de Investigacin con respecto a la Evaluacin De Riesgos De Staphylococcus Aureus
Enterotoxignico En Alimentos Preparados No Industriales En Colombia dichas
investigaciones tambin arrojaron un resultado de <100 UFC/g de Staphylococcus
Coagulasa Positivo en arequipe no preparado industrialmente.
Estos dos artculos fueron tomados como muestra representativa debido a que todos los
artculos encontrados arrojaban el mismo resultado lo cual nos sirvi para llegar a la conclusin

de que posiblemente la mayora de los recuentos que se han hecho a este alimento(arequipe)
para determinar la presencia de staphylococcus coagulasa positiva, cientficamente han dado
resultados similares, lo que da a entender que este es un producto muy bien preparado y
minuciosamente analizado, debido a que este es un alimento de mayor riesgo para la salud
segn el Decreto 3075 de 1997.

CONCLUSION.

De lo desarrollado en esta prctica de laboratorio, hemos aprendido lo imprescindible que es

conocer y aplicar ciertas metodologas en base a estudios de anlisis microbiano para productos
elaborados, y de esta manera asimilar y determinar si los parmetros y condiciones bajo los
cuales se llevaron a cabo todos los procesos fueron aplicados correctamente, por ello, fue
necesario que nuestro grupo de trabajo llevara a cabo de manera sistemtica cada una de las
normativas que se nos exige para la realizacin de dicho anlisis, de esta manera se logr
desarrollar una excelente prctica, ya que se cumpli con los parmetros establecidos,
proporcionndonos de una manera veraz todos los procesos desarrollados y confirmndonos de
manera positiva la prueba realizada, es decir, que el producto analizado (arequipe) estuvo
dentro de los parmetros establecidos para ser apto para el consumidor.
En nuestra labor realizada nos enfocamos tambin en los procesos realizados por la empresa
generadora de este tipo de productos, ya que al igual que esta tuvimos que someternos a

normativas y condiciones adecuadas para evitar la contaminacin a las que pueden exponerse
estos tipos de alimentos, de tal forma que nuestros resultados puedan tener un buen grado de
aceptacin y concordancia con los anlisis hechos por la empresa, de no ser as se podran
abordar ciertas deducciones acerca de si lo hecho por parte de estas empresas no fueron las
adecuadas o si el error en el proceso lo obtuvimos en laboratorio, pero prueba de ello fue que
en la prctica logramos obtener resultados propicios para tener la capacidad de establecer lo
positivo de nuestro trabajo desarrollado, pese a que nuestra practica nos arroj buenos
resultados , para practicas posteriores nos hemos enfocado en hacer ms viables estos
procedimientos y tener una metodologa de aplicacin eficaz para que nuestros resultados sean
ms certeros y de mayor confiabilidad para las pruebas que se nos avecinen, pues para ello es
importante recalcar, que se debe laborar en ambientes aptos y la disposicin de equipos que se
hallen en excelentes condiciones para evitar la entrada de microorganismos patgenos, por lo
tanto, en lo visto a este laboratorio (aunque se obtuvieron resultados autnticos) se espera
obtener an mejores resultados en los que siguen y que representen resultados de calidad.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

Ricardo D. Andrade P; Gabriel I. Vlez H.; Margarita R. Arteaga M.;

Yolanda S. Daz Q.; Saudit S. Snchez S. (2009). Efecto De La
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