Informe N°6

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
INFORME N06
DETERMINACIN DE PROTEINAS - METODO
LOWRY
NOMBRE : RUBY MAGALY ARIAS TUCO
CDIGO : 2014-111008
CURSO : ANALISIS INSTRUMENTAL DE ALIMENTOS
DOCENTE : DR. MIGUEL A. LARREA CSPEDES
TURNO : MIERCOLES 11-13 PM
TACNA PER
2016
UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE DE GROHMANN
DETERMINACIN DE PROTEINAS METODO LOWRY
INTRODUCCION
Los El mtodo de Lowry es una tcnica colorimtrica que permite calcular la

concentracin de protenas totales presentes en una disolucin o extracto
biolgico. El mtodo se basa en el empleo de dos reactivos. El componente
fundamental del Reactivo A es el CuSO4, que aporta iones Cu2+. En medio
alcalino, estos iones reaccionan con aquellas molculas que tengan varios
enlaces peptdicos consecutivos, es decir, pptidos y protenas, dando lugar a
complejos solubles que presentan un color azul plido. El Reactivo B, tambin
conocido como reactivo de Folin-Ciocalteau o reactivo de fenoles, reacciona con
aquellos aminocidos de la protena que lleven en su cadena lateral grupos
fenlicos (la tirosina, la fenilalanina y el triptfano), dando lugar a un color azul
intenso.
La intensidad del color producido en el tubo de ensayo, que se mide con un
espectrofotmetro, es directamente proporcional a la cantidad de protena
presente en la disolucin, lo que permite cuantificar sta si se compara con
tubos preparados de forma similar con cantidades conocidas de una protena de
referencia, con los que se hace una recta de calibrado.
I. OBJETIVOS:
Determinar la cantidad de protenas en una muestra de frejol molido,
aplicando el mtodo de Lowry.
II. FUNDAMENTO TEORICO:

Mtodo de Lowry
El mtodo de Lowry (1951) o mtodo de folin-fenol es un anlisis
colorimtrico de valoracin cuantitativa de las protenas. A la muestra se
aade un reactivo que forma un complejo coloreado con las protenas, siendo
la intensidad del color proporcional a la concentracin de protenas, segn la
ley de Lambert-Beer, ya vista anteriormente.
Este mtodo consta de dos etapas:

Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las protenas formando
complejos con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Estos
complejos Cu2+-protena tienen un color azul claro. Adems, provocan
el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la protena,
exponindose los residuos fenlicos de Tyr que van a participar en la
segunda etapa de la reaccin. El Cu2+ se mantiene en solucin
alcalina en forma de su complejo con tartrato.
La reduccin, tambin en medio bsico, del reactivo de Folin-
Ciocalteau, por los grupos fenlicos de los residuos de Tyr, presentes
en la mayora de las protenas, actuando el cobre como catalizador. El
principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el cido
fosfomolibdotngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los
grupos fenlicos da lugar a un complejo de color azul intenso. El color
azuloso desarrollado es ledo a 750 nm (alta sensibilidad para una
concentracin proteica baja) o a 500 nm (alta sensibilidad para una
concentracin proteica alta).
Ventajas del mtodo de Lowry
Muy sensible. El rango es de 0,1 a 1 mg/mL.
Menos afectado por la turbidez de la muestra.
Ms especfico que la mayora de los otros mtodos.
Relativamente simple.
Se puede completar en 1 a 1,5 h.
Desventajas del mtodo de Lowry

El color vara con diferentes protenas (ms que el mtodo de Biuret).
El color no es estrictamente proporcional a la concentracin de
protenas.
La sacarosa, lpidos, buffers fosfato, monosacridos y hexoaminas
interfieren con la reaccin.
Las altas concentraciones de azcares reductores, sulfato de amonio y
compuestos con sulfidrilo interfieren con la reaccin.
Reactivo de Folin-Ciocalteu
El reactivo de Folin-Ciocalteu (FCR) o reactivo de Folin-Denis es una mezcla

de fosfomolibdato y fosfotungstato, usado para la determinacin de
antioxidantes fenlicos y polifenlicos.1 Funciona midiendo la cantidad de
sustancia analizada que se necesita para inhibir la oxidacin del reactivo.2
Sin embargo, este reactivo no slo mide los fenoles totales, sino que
reaccionar con cualquier sustancia reductora. En consecuencia, el reactivo
mide la capacidad reductora total de una muestra, no slo el nivel de
compuestos fenlicos. Este reactivo forma parte del ensayo de protenas de
Lowry, y tambin reaccionar con algunos compuestos que contienen
nitrgeno, como la hidroxilamina y la guanidina.3
Este reactivo no debe ser confundido con el reactivo de Folin, que es usado
para detectar aminas y compuestos que contienen azufre.
III. MATERIALES Y METODOS:
Materiales:
Tamiz 60 mesh
Mortero
Centrifuga
Tubos de ensayo de 10 ml
Balanza analtica
Espectrofotmetro
Pipetas
Reactivos:
NaCl 0.15 M
NaOH
Sulfato de cobre
Reactivo de biuret
Albumina de suero bovina
Muestra: frijol
IV. METODOS:
Para la determinacin de azucares totales se utiliz el mtodo de lowry.

V. PROCEDIMIENTO:
PREPARACION DE LA MUESTRA:
Tomar 50gr de frijol y moler hasta una granulometra menor a
60mesh.
Preparar suspensiones de 10% en soluciones de cloruro de sodio

0.15M y agitar por 1 hora.
Centrifugar y medir el volumen del sobrenadante.
70 ml de
sobrenadante
Determinar el contenido de protenas por el mtodo de lowry.

Hacer una diucion de 1/25 ml y tomando alcuotas de 0.2 y 0.3 ml.
PROCEDIMIENTO DEL MTODO DE LOWRY:
A partir del extracto salino obtenido, se toma alcuotas de 0.2 ml (muestra 1)

y 0.3ml (muestra2). Seguidamente completar a 1.0ml con agua destilada,
adicionar 5 ml de mezcla reactiva, esperar 10 minutos y adicionar 0.6 ml de
reactivo follin y realizar la lectura despus de 30min a 660nm. Del mismo
modo se prepara una curva padrn a partir de suero de albumina bovina en
la concentracin de 50 mg/100ml.
1. Solucin padrn de Albmina Bobina:
- Pesar 50mg de suero albumina bovina y 0.1ml de

NaOH 1 N.
- disolver con agua destilada y completar para 100ml

(sin mucha agitacin)
- esta concentracin equivale a 50mg/100ml

VI. RESULTADOS:
a) IMAGEN DE LOS TUBOS DE LA CURVA DE PATRN Y LAS

MUESTRAS:
b) Curva de calibracin:
Numero Padrn H2O Mezcla Conc Abs

Folin (ml) (mg)
de tubo gluc. (ml) ml Reac.(ml) (660 nm)
1 0.1 0.9 5.0 0.6 0.05 0.1455
2 0.2 0.8 5.0 0.6 0.10 0.2316
3 0.3 0.7 5.0 0.6 0.15 0.3269
4 0.4 0.6 5.0 0.6 0.20 0.4170
5 0.5 0.5 5.0 0.6 0.25 0.5113
6 0.6 0.4 5.0 0.6 0.30 0.5801
7 0.7 0.3 5.0 0.6 0.35 0.6657
Blanco --- 1.0 5.0 0.6 --- 0.000

c) GRAFICO:
Grafico N1: Curva de calibracion a 660nm

0.75
0.7
0.65
y = 1.7443x + 0.0623
0.6 R = 0.9984
0.55
Absorvancia nm
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4
Concentracion mg
d) PARA LA MUESTRA:
Muestra Muestra ml Absorbancia(Y)

A 0.2 0.3349
B 0.3 0.5304
ABSORBANCIA DE MUESTRA A : 0.3349 nm
a = 0.0623 Y = a + bx
b = 1.7443
Y = 0.0623 + 1.7443 X
r = 0.9984
0.3349 = 0.0623 + 1.7443 X
0.3349 0.0623
= = .
1.7443
Se sabe que:
El peso de la muestra es 10 gramos de frejol molido.
Entonces, la dilucin fue as:
10 gr / 100 ml
70 ml
1 ml / 25 ml
0.2 ml
(Abs: 0.3349 mn)
0.1563 mg 0.2 ml
X 25 ml
X = 19.5375 mg
19.5375 mg 1 ml
X 70 mg
X = 1367.625 mg=1.368 gr
1.368 gr 10 gr
X 100 gr
X = 13.68 % de protenas en el frejol
ABSORBANCIA DE MUESTRA B : 0.5304 nm
a = 0.0623 Y = a + bx
b = 1.7443
Y = 0.0623 + 1.7443 X
r = 0.9984
0.5304 = 0.0623 + 1.7443 X
0.5304 0.0623
= = .
1.7443
Se sabe que:
El peso de la muestra es 10 gramos de frejol molido.
Entonces, la dilucin fue as:
10 gr / 100 ml
70 ml
1 ml / 25 ml
0.3 ml
(Abs: 0.5304 mn)
0.2684 mg 0.3 ml
X 25 ml
X = 22.3667 mg
22.3667 mg 1 ml
X 70 mg
X = 1565.669 mg=1.566 gr
1.566 gr 10 gr
X 100 gr
X = 15.66 % de protenas en el frejol
Por promedio:15.68 + 13.68= 14.67%. Este porcentaje es para las

globulinas y albuminas en el frejol.
VII. DISCUSION DE RESULTADOS:
Segn la pgina web InformacinNutricional.com nos informa lo

siguiente:
Lo que se obtuvo fue 5.74 gr de protena por 100 gr de frijol, se explic que
al momento de preparar la muestra el frijol ya estaba remojado, saliendo
as las albuminas del frejol reduciendo el porcentaje de protenas que
deba de estar entre 19-25 % de protenas.
Las protenas de almacenamiento representan en el frijol el 50% de la

protena que contiene el grano (Samour et al., 2007) y de estas, las
albminas representan un 14,8 - 20,8%, las globulinas 33 - 45%, las
glutelinas 12,8 - 41,2% y las prolaminas en general, menos del 1%
(Perazzini et al., 2008). Por tal motivo se pierde porcentaje en protenas.
Es necesario hacer una buena preparacin de la muestra ante de enviarla

a analizar, generalmente para obtener una buena muestra en este caso de
frijol esta debe remojarse en agua para que pueda salir la protena,
debido a ello la muestra molida de estar por lo menos 3 4 horas,
nosotros trabajamos con una agitador y la muestra se expuso al agitador
una hora, hubiera sido recomendable ms tiempo de reposo y agitacin
para la muestra para obtener datos ms exactos.
VIII. CONCLUSIONES:
Se determin que hubo 14.67% de Protena en el frijol.

Se aplic el mtodo de espectrofotmetro en regin de UV.
Se observ que durante la realizacin de la prctico se pueden
cometer muchos errores que son parte de la balanza, de los productos
hidrofilicos, la humedad del aire, del espectrofotmetro (por
vibraciones de la tierra).
Las protenas son las molculas ms importantes en nuestra dieta
alimenticia. As que debemos de saber qu cantidad de protenas
consumimos, para no presentar dficit, por ello es necesario este tipo
de pruebas de determinacin de protenas para saber la calidad del
cereal que estamos consumiendo.
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

http://drcormillot.com/diccionario/
D. PARSON, Manual de tcnicas de Laboratorio para el Anlisis
de los Alimentos.

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DOCENTE : DR. MIGUEL A. LARREA CSPEDES

TURNO : MIERCOLES 11-13 PM

DETERMINACIN DE PROTEINAS METODO LOWRY

Los El mtodo de Lowry es una tcnica colorimtrica que permite calcular la

II. FUNDAMENTO TEORICO:

Este mtodo consta de dos etapas:

Desventajas del mtodo de Lowry

El reactivo de Folin-Ciocalteu (FCR) o reactivo de Folin-Denis es una mezcla

III. MATERIALES Y METODOS:

Para la determinacin de azucares totales se utiliz el mtodo de lowry.

Preparar suspensiones de 10% en soluciones de cloruro de sodio

Centrifugar y medir el volumen del sobrenadante.

Determinar el contenido de protenas por el mtodo de lowry.

A partir del extracto salino obtenido, se toma alcuotas de 0.2 ml (muestra 1)

1. Solucin padrn de Albmina Bobina:

- Pesar 50mg de suero albumina bovina y 0.1ml de

- disolver con agua destilada y completar para 100ml

- esta concentracin equivale a 50mg/100ml

a) IMAGEN DE LOS TUBOS DE LA CURVA DE PATRN Y LAS

Numero Padrn H2O Mezcla Conc Abs

1 0.1 0.9 5.0 0.6 0.05 0.1455

2 0.2 0.8 5.0 0.6 0.10 0.2316

3 0.3 0.7 5.0 0.6 0.15 0.3269

4 0.4 0.6 5.0 0.6 0.20 0.4170

5 0.5 0.5 5.0 0.6 0.25 0.5113

6 0.6 0.4 5.0 0.6 0.30 0.5801

7 0.7 0.3 5.0 0.6 0.35 0.6657

Blanco --- 1.0 5.0 0.6 --- 0.000

Grafico N1: Curva de calibracion a 660nm

Muestra Muestra ml Absorbancia(Y)

ABSORBANCIA DE MUESTRA A : 0.3349 nm

0.3349 = 0.0623 + 1.7443 X

El peso de la muestra es 10 gramos de frejol molido.

Entonces, la dilucin fue as:

ABSORBANCIA DE MUESTRA B : 0.5304 nm

0.5304 = 0.0623 + 1.7443 X

El peso de la muestra es 10 gramos de frejol molido.

Entonces, la dilucin fue as:

Por promedio:15.68 + 13.68= 14.67%. Este porcentaje es para las

VII. DISCUSION DE RESULTADOS:

Segn la pgina web InformacinNutricional.com nos informa lo

Las protenas de almacenamiento representan en el frijol el 50% de la

Es necesario hacer una buena preparacin de la muestra ante de enviarla

Se determin que hubo 14.67% de Protena en el frijol.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

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