INFORME TRABAJO PRÁCTICO

Para cátedra BIOTECNOLOGÍA

UTN-FRM

INFORME TRABAJO PRÁCTICO

MICROBIOLOGIA DEL AGUA

CURRILEN MIGUEL (LEG 40350)

FIGUEROA, MAXIMILIANO (LEG 38436)
LARDONE, FLORENCIA (LEG 40204
OLAZÁBAL, PAULA (LEG 41146)
SARADETCH, AGNES (LEG 38649)
INTRODUCCION: ¿QUE ES UN ANALISIS MICROBIOLOGICO?

Los análisis microbiológicos consisten en una inspección de alimentos o sustancias por medio de
pruebas que permiten detectar si se presentan o no elementos patógenos, o lo que es lo mismo, a
través de cultivos elaborados con ese fin.

De acuerdo con la cantidad de agentes patógenos encontrados y el grado de contaminación que

tengan los alimentos o sustancias analizadas, se puede determinar si es apto o no para su
posterior procesamiento y consumo en humanos o animales y el objetivo debe está enfocado a
un estricto control microbiológico ya que así se previene la manufactura de productos baja
calidad microbiológica y se le señala a las industrias cuáles son los factores contaminantes o de
multiplicación de microbios.

En este informe nos centraremos en las técnicas utilizadas para realizar análisis microbiológicos
del agua, ya que el agua es el principal vector de la vida y de la actividad humana. En su circulación
puede cargarse de substancias en suspensión (arcilla, restos orgánicos, virus y organismos vivos) y
substancias disueltas (sales y gases); por lo tanto su uso implica un tratamiento un tratamiento
anterior para hacerla apta y un tratamiento posterior para evitar su contaminación. Es por esto
que es el alimento más controlado.

Dentro de los microorganismos patógenos en los que se busca encontrar con esas tecnicas, se
encuentran el grupo de bacterias coliformes el cual está conformado por dos subgrupos: los
coliformes totales y los termotolerantes. A estos últimos antes se los denominaba coliformes
fecales. El cambio de nombre se debe a que se demostró que en el grupo de coliformes que se
detectaban en siembras incubadas a temperaturas de 44,5 °C y en medios de cultivo específicos,
sólo una parte del grupo eran bacterias de origen fecal; el resto eran bacterias ambientales. Se les
puso entonces el nombre de bacterias coliformes termotolerantes debido a la alta temperatura de
incubación (44,5 °C) en la cual se obtenía un óptimo desarrollo.

En el grupo de bacterias termotolerantes está incluida la Escherichia coli , considerada como un

organismo indicador de contaminación fecal. Se ha demostrado que esta bacteria siempre está
presente en un número elevado en las heces de humanos y animales de sangre caliente y
comprende casi 95% de los coliformes en las heces. Por esta razón, la contaminación de origen
fecal puede ser evaluada mediante la determinación de coliformes termotolerantes o mediante la
presencia de E. coli. En los valores guía para la calidad bacteriológica del agua de bebida (OMS,
1995), ambas determinaciones se consideran como alternativas aceptables y su presencia indica
contaminación de origen fecal. Por esta razón, en los métodos descritos en el presente manual se
encontrará que algunos están dirigidos a la investigación de coliformes.
METODO DE FERMENTACION EN TUBOS O DE TUBOS MULTIPLES

OBJETIVOS:

• Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua o alimentos mediante la búsqueda de

microorganismos coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli.
• Diferenciar los organismos coliformes totales de los microorganismos coliformes fecales.
• Organizar e interpretar los resultados.

GENERALIDADES

Debido a que un gran número de enfermedades son transmitidas por vía fecal-oral
utilizando como vehículo los alimentos y el agua, es necesario contar con microorganismos
que funcionen como indicador de contaminación fecal. Estos deben de ser constantes,
abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener una sobrevivencia similar a la de
los patógenos intestinales y deben ser capaces de desarrollarse extraintestinalmente.
Dichos indicadores de contaminación fecal se subdividen en
Primario (grupo coliforme):
➢ E. coli (contaminación fecal)
➢ Grupo C.E.K.

Complementarios:

➢ Enterococos
➢ Clostridios reductores de sulfito

El grupo coliforme constituyen un grupo heterogéneo con hábitat primordialmente

intestinal para la mayoría de las especies que involucra, es constante, abundante y casi
exclusivo de la materia fecal, su capacidad de sobrevivencia y multiplicación fuera del
intestino también se observan en aguas potables, por lo que este grupo se utiliza como
indicador de contaminación fecal en agua; encontrándose que mientras mayor sea el
número de coliformes en agua, mayor será la probabilidad de estar frente a una
contaminación reciente.
Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no sólo sobreviven, sino que se multiplican,
por lo que en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado distinto al que
recibe en el agua.
Cuando los productos alimenticios han recibido un tratamiento térmico (pasteurización,
horneado, cocción, etc.), estos microorganismos se utilizan como indicadores de malas
prácticas sanitarias.
Para su estudio, se dividen en dos grupos:
Bacterias coliformes totales: Comprende a todos los bacilos Gram-negativos aerobios o
anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con producción de gas
 en un lapso máximo de 48 h a 35°C ± 1oC. Este grupo está conformado por 4 géneros
principalmente: Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella. Son oxidasa-negativos
Coliformes fecales: Son las bacterias coliformes totales termorresistentes que fermentan
la lactosa con producción de gas a las 48 h de incubación a 44.5 ± 0.1°C y de origen
específicamente fecal.
La demostración y el recuento de organismos coliformes, puede realizarse mediante el
empleo de medios de cultivo líquidos y sólidos con características selectivas y
diferenciales.

DESCRIPCION DEL METODO

Consiste en sembrar con la muestra a examinar volúmenes variables de un medio de cultivo

líquido. Después de un tiempo prefijado de incubación a una temperatura también establecida, se
observan los cambios producidos en los tubos para decidir cuáles son positivos y cuales negativos.

Esta determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.

Fase presuntiva: El medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite
la recuperación de los microorganismos dañados que se encuentren presentes en la muestra y que
sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono.

Fase confirmativa: Se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual
es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las
sales biliares como el verde brillante.

Los resultados son estadísticos y se leen en una tabla de Número más

Probable (NMP) según la combinación de tubos positivos y negativos (“numero característico”). La

lectura exige que haya tubos negativos.

La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del NMP, se fundamenta

en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al
incubarlos a 35°C +/- 1°C durante 48 h. utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares.

Con este método puede investigarse cualquier especie microbiana, solo se debe modificar el
medio de cultivo y las condiciones de inoculación (tiempo, pH y temperatura).
MATERIAL Y EQUIPO

✓ Mechero.
✓ Propipeta.
✓ Gradilla.
✓ Lámpara de luz ultravioleta de longitud amplia 4 watts. (366 nm)
✓ Lentes de seguridad
✓ Pipetas de 10.0 mL estériles con tapón de algodón.
✓ Pipetas de 1.0 mL estériles con tapón de algodón.
✓ Pipetas Pasteur estériles
✓ Asa bacteriológica
✓ Portaobjetos
✓ Microscopio óptico
✓ Termómetro calibrado
✓ Baño de agua a 44.5° ± 0,1°C.
✓ Incubadora a 35° ± 2,0oC .
✓ Horno para esterilizar material de vidrio a 160-180°C
✓ Autoclave

MEDIOS DE CULTIVO Y DILUYENTES

1. Para análisis de agua

Para la preparación del medio de cultivo utilizado en la prueba presuntiva de muestras de agua o
hielo, consultar el cuadro 1.

o 5 ó 10 tubos de 22 x 175 mm con 10.0 mL de caldo lauril sulfato de sodio o caldo lactosado
concentración doble o triple con campana de Durham.
o 5 ó 10 tubos de 16 x 150 mm con 10.0 mL de caldo bilis verde brillante con campana de
Durham.
o 5 ó 10 tubos de 16 x 150 mm con 10.0 mL de caldo EC y campana de Durham o caldo EC
MUG con campana de Durham.
o 2 cajas Petri con agar para métodos estándar
o 2 cajas Petri con agar Eosina azul de metileno
o 6 tubos de 13 x 100 con 3.0 mL c/u de caldo RM-VP
o 3 tubos de 13 x 100 con 3.0 mL c/u de caldo triptona o agar SIM (opcional)
o 3 tubos de 13 x 100 con 3.5 mL c/u de caldo citrato de Koser o citrato de Simmons
(opcional)
SOLUCIONES, REACTIVOS E INDICADORES

o Frascos gotero con reactivo de Ehrlich o Kovac

o Frascos gotero con indicador rojo de metilo
o Frascos gotero con reactivo alfa naftol VP1
o Frascos gotero con solución de hidróxido de potasio al 40 % VP2
o COLORANTES PARA TINCIÓN DE GRAM

PROCEDIMIENTO

1. Agua y hielo

1.1 Prueba presuntiva

• Agitar la muestra y transferir volúmenes de acuerdo con el cuadro 1, a cada uno de los
tubos con caldo lauril sulfato de sodio que se hayan seleccionado. Agitar los tubos para
homogeneizar la muestra.

CUADRO 1. Preparación de inóculo con caldo lauril sulfato de sodio

• Incubar los tubos a 35 ± 0,5°C. Examinar los tubos a las 24 h., observar si hay formación de
gas (desplazamiento del medio en la campana de Durham); si no se observa producción de
gas, incubar 24 h. más.
1.2 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes totales

• Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva, a

tubos que contiene caldo de bilis verde brillante (brila), con campana de Durham.
• Agitar suavemente los tubos para su homogeneización.
• Incubar a 35 +/- 2 °C durante 24 a 48 h.
• Registrar como positivos aquellos tubos en donde se observe turbidez (crecimiento) y
producción de gas después de un período de incubación de 24 a 48 h.
• Consultar la tabla 1 ó 2 de NMP para conocer el número más probable de organismos
coliformes totales/100 mL.

1.3 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes fecales.

▪ Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva a

tubos con caldo EC.
▪ Agitar suavemente los tubos para su homogeneización.
▪ Incubar a 44.5 +/- 0.1°C en incubadora o un baño de agua con circulación durante 24 a
48h.
▪ Registrar como positivos todos los tubos en donde se observe crecimiento y producción de
gas después de un período de incubación de 24 a 48 h.
▪ Consultar la tabla 1 ó 2 de NMP para conocer el número más probable de organismos
coliformes fecales/ 100 mL.

 Control de calidad para coliformes fecales

1. Inocular en tubos de caldo EC una cepa de E. coli como control positivo y una de
Enterobacter aerogenes como control negativo e incubar junto con las muestras.

1.4 Prueba confirmativa para Escherichia coli

❖ Tomar una asada de cada uno de los tubos positivos de caldo EC y sembrar por estría
cruzada en agar eosina azul de metileno para su aislamiento.
❖ Incubar las placas invertidas a 35°C por 18-24 h.
❖ Seleccionar dos colonias de cada placa con la siguiente morfología colonial: Colonias con
centro negro, planas con o sin brillo metálico. Si no hay colonias con morfología típica,
probar una o más colonias lo más parecido E. coli de cada placa y sembrarlas en agar
cuenta estándar para realizar las pruebas de morfología microscópica y pruebas
bioquímicas.
❖ Incubar las placas a 35°C por 18-24 h.
❖ Hacer un frotis y teñirlo por Gram. Observar al microscopio la presencia de bacilos cortos
o cocobacilos Gram-negativos.
1.4.1 Prueba confirmativa opcional para Escherichia
coli utilizando caldo EC-MUG
(4 metil-umbeliferil-β-D-glucuronido)

FUNDAMENTO
Alrededor del 94% de las cepas de Escherichia coli
incluso las cepas no productoras de gas producen la
enzima beta-glucuronidasa (GUD), la cual rompe el
sustrato específico 4-metilumbeliferil-beta-D-
glucurónido (MUG) en 4-metilumbeliferona (MU); el
cual al ser expuesto a una fuente de luz ultravioleta
(UV) de onda larga (365 nm) produce una
fluorescencia azul fácil de observar. Cuando el MUG
es incorporado al caldo EC se puede identificar
Escherichia coli.

a. Prueba confirmativa
⬧ A partir de la fase presuntiva (inciso 1.1.) tomar una asada de cada tubo que
muestre formación de gas y sembrar en un número igual de tubos con medio EC-
MUG.
⬧ Incubar a 44,5 ± 0,2°C en baño de agua durante 24 h., observar si hay formación
de gas; si no se observa la formación de gas continuar la incubación 24 h. más.
⬧ Finalizado el periodo de incubación, irradiar los tubos con una fuente de luz UV,
observar cuantos tubos presentan fluorescencia.
⬧ Utilizar estos resultados para calcular el número más probable (NMP) de E. coli.
Control de calidad.
⬧ Inocular en dos tubos con caldo EC-MUG una cepa de E. coli como control positivo
y K. pneumoniae como control negativo
CÁLCULOS Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS
Calcular la densidad microbiana con base en el número más probable conforme al
procedimiento señalado en la tabla 1, para estimar la población de bacterias coliformes
totales, bacterias coliformes fecales y Escherichia coli en muestras de agua.

TABLA 1. Índice del NMP con 95% de límite de confianza para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan 5 tubos con 20 mL de muestra de agua o
hielo.

TABLA 2. Índice del NMP con 95% de límite de confianza para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan 10 tubos con
10 mL de muestra de agua o hielo.

NOTA: Para calcular el NMP de E. coli utilizar a proporción de los tubos positivos de la
prueba confirmatoria en caldo EC.
RESULTADOS OBTENIDOS:

Muestra A:

Nº de 0 1 2 3 4 5 6 7
Tubo
coli total 3 2 2 1 0

coli fecal 2 1 1 0

coli total:

COMBINACION DE POSITIVOS: 2 2 1

Nº MAS PROBABLE/ 100ML: 30*106 = 3*107

coli fecal:

COMBINACION DE POSITIVOS: 2 1 1

Nº MAS PROBABLE/ 100ML: 20*104= 2*105

Muestra B:

Nº de 0 1 2 3 4 5 6 7
Tubo
coli total 3 2 2 1 0

coli fecal 2 1 1 0

RESULTADOS: Ídem muestra A

CONCLUSIONES:

Según las Normas Oficiales para la calidad del agua argentina se considera agua potable si cumple
con las siguientes características micológicas:

Bacterias coliformes: NMP a 37oC-48 hs. (Caldo Mc Conkey o Lauril Sulfato), en 100 ml: igual o
menor de 3.

Escherichia coli: ausencia en 100 ml.

Pseudomonas aeruginosa: ausencia en 100 ml.

En la evaluación de la potabilidad del agua ubicada en reservorios de almacenamiento domiciliario

deberá incluirse entre los parámetros microbiológicos a controlar el recuento de bacterias
mesófilas en agar (APC 24 h a 37oC); en el caso de que el recuento supere las 500 UFC /ml y se
cumplan el resto de los parámetros indicados, sólo se deberá exigir la higienización del reservorio y
un nuevo recuento.

En las aguas ubicadas en los reservorios domiciliarios no es obligatoria la presencia de cloro

activo.(pag 3 de la adjuntada Norma)

Para agua de bebida envasada o agua potabilizada envasada, debe cumplir que:

Bacterias coliformes: NMP a 37°C- 48 h (Caldo Mc Conkey o Lauril Sulfato), en 100 ml: igual o
menor de 3.

Escherichia coli: ausencia en 100 ml.

Pseudomonas aeruginosa: ausencia en 100 ml.

Bacterias mesófilas (APC - 37oC-24 hs.) máx.: 500 UFC/ml.

En el caso de que el recuento supere las 500 UFC/ml y se cumplan (sic) con el resto de los
parámetros indicados, sólo se deberá exigir la higienización de la planta y realizar un nuevo
recuento. (pag 7 de la adjuntada norma)

Se concluye entonces que el agua analizada no es potable ni apta para ser consumida ya que no
cumple con los parámetros establecidos por dicha Norma.
INVESTIGACION DE BACTERIAS MESÓFILAS

MATERIALES Y SUBSTANCIAS
 Muestras de agua potable de diferente origen (Grifo, purificada y
embotellada u otro), de un volumen mínimo de 100 mL obtenida en
recipiente estéril y con Tiosulfato de Sodio al 10%.
 3 tubos de ensayo conteniendo c/u 9 mL de agua de dilución estéril.
 9 tubos de 20 x 160 mm, con tapón conteniendo c/u de 15-20 mL de agar
cuenta estándar estéril, manteniéndolo a 45-47°C en baño de temperatura
constante.
 Gradilla.
 Pipetas estériles de 1 mL graduadas en décimas.
 9 cajas Petri estériles.
 Mechero Bunsen.
 Cerillos ó encendedor.
 Incubadora.
 Contador de Colonias Quebec

PROCEDIMIENTO

En condiciones asépticas:

1. Agitar vigorosamente la muestra de agua, para homogeneizar.

2. Pipetear 1 mL de muestra y verterlo en el primer tubo con 9 mL de agua de
dilución estéril, quedando entonces una dilución de 10-1
3. Agitar para homogeneizar y tomar 1 mL de esta dilución (10-1) y verterlo en el
segundo tubo, quedando una dilución de 10-2.
4. Agitar para homogeneizar y tomar 1 mL de esta dilución (10-2) y verterlo en el
tercer tubo, quedando una dilución de 10-3.
5. Utilizando pipeta estéril, tomar 1 mL de la dilución 10-1 y verterlo en la caja Petri estéril
marcada con 10-1, distribuyéndolo bien en el fondo de la caja Petri vacía.Efectuar esta
misma operación por triplicado.
6.De la misma manera, tomar 1 mL de la dilución 10-2 y verterlo en la caja Petri
marcada con 10-2. Efectuar esta misma operación por triplicado.
7. Hacer lo mismo con el tubo de la dilución 10-3 y la caja marcada con 10-3.Efectuar la
misma operación por triplicado. Es recomendable usar una pipeta estéril para cada
dilución.
8.Antes de que pasen 10 minutos, agregar a cada caja Petri el medio de cultivo
contenido en un tubo, a una temperatura máxima de 47°C (todavía líquido).
NOTA: Si la temperatura del agar es superior a 47°C al vaciarlo a las cajas,
puede producirse la destrucción total ó parcial de las bacterias sembradas.
9.Antes de que el medio de cultivo solidifique homogeneizar cada caja mediante
movimientos de translación y rotación en una superficie plana aproximadamente
durante 1 minuto evitando que se mojen la tapa y los costados de la caja, de esta
manera el agua y el agar son mezclados íntimamente.
10. Dejar reposar las cajas el tiempo necesario para que solidifique el agar.
11.Una vez solidificado el agar en las cajas, incubar en posición invertida con objeto
de que el agua de condensación del agar no caiga sobre la superficie del cultivo.
Las condiciones de incubación son: 37°C (±1°C) durante 24 horas (± 3 h). Ahora bien,
si se desea conocer la flora bacteriana total de la muestra las condiciones serán: 22°C
(±2°C), durante 72 horas (±4h).
12.Transcurrido el tiempo de incubación contar las colonias que se han
desarrollado en cada una de las placas, usando un cuenta colonias para efecto de
facilitar la lectura.
NOTA: Si la investigación de mesófilos se practica a otro tipo de muestra de agua que no
sea potable, se procede a realizar los grados de dilución necesarios, dependiendo del
origen de la misma, pero solo se trabajará con las últimas tres diluciones, procediendo
de la misma forma descrita anteriormente pero incubando durante 48 horas a 37°C
(±1°C).
Al hacer el recuento, tener en cuenta las siguientes consideraciones:

•Seleccionar las cajas que contengan entre 25 y 250 colonias y descartar las otras.

• Si son varias las que entran en este intervalo, contar todas y seleccionar las del grado de
dilución por triplicado que represente menor margen de error en el recuento y
como resultado, tomar el promedio de las tres cajas y referirlo al volumen real de
muestra sembrado para efectos del cálculo correspondiente.

• Si no hay ninguna caja con un recuento dentro del intervalo mencionado, se hará
de aquella que tenga el valor más próximo a cualquiera de los dos extremos. En
estos casos los resultados se tomarán como aproximados, excepto en los casos de
siembra de muestra directa donde se efectuará, también el recuento en cajas con
menos de 25 colonias.

•Si el recuento no se hace en el mismo momento de sacarlas de la incubadora, se pueden

conservar las cajas dentro del refrigerador entre 5 y 10°C, durante un período
máximo de 24 horas.
CÁLCULO Y PRESENTACION DE RESULTADOS

Una vez efectuado el recuento de las cajas correspondientes, los resultados

obtenidos se elaboran de la siguiente manera:

−Si la cantidad de agua sembrada ha sido de 1 mL la expresión del resultado es directa.

−Si la cantidad de agua sembrada ha sido de 0.1 mL, el número de colonias

contadas habrá de dividirse por el volumen de muestra sembrada, es decir, por 0.1, para
obtener el número de colonias por mililitro.

En general se tiene:

Bacterias Mesófilas aerobias/mL = Número de colonias en volumen real de muestra

sembrada, en mL.

Los resultados se expresarán así:

NUMERO DE BACTERIAS MESOFILAS AEROBIAS: ____ UFC/mL.

NOTA: Si no se observan colonias en ninguna de las cajas sembradas, el resultado

no será de 0 (cero) UFC/mL, sino que será referido al menor grado de dilución
sembrado. En el presente experimento éste es de 10-1, por lo tanto el resultado
sería: <10 UFC/mL
INVESTIGACION DE Pseudomonas aeruginosa

NUMERACIÓN DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA POR EL MÉTODO DE TUBOS MÚLTIPLES (NMP).

MATERIALES

Tener en cuenta los materiales e insumos para la preparación de la muestra se realizara conforme
al P-SA-83 Procedimientos generales de los Análisis Microbiológicos de muestras de
alimentos para consumo humano.

Equipos

 Equipo Sellador
 Incubadora a 38°C +/-0.5
 Lámpara de Luz Ultravioleta 365 nm

Insumos

 Frascos estériles de 100ml

 Frascos estériles de 1000ml

Reactivos

 Agua destilada
 Reactivo Pseudalert
 Bolsas Quanti tray 2000. Pozos :grandes 49 , pequeños 48

Patrones

 Pseudomona aeruginosa ATCC 10145 o 27853

 Escherichia coli ATCC 25922

PROCEDIMIENTO

Controles y/o curvas de calibración

 Llene tres recipientes estériles con 100 ml de agua estéril, e inocule con un asa estéril los
siguientes controles microbiológicos:
➢ Frasco 1: Control positivo: Cepa ATCC Escherichia coli
➢ Frasco 2: Control negativo: Cepa ATCC Pseudomonas aeruginosa
 El análisis no exige condiciones ambientales específicas
Detección de Pseudomona aeruginosa por la Técnica de Sustrato Definido -Pseudalert* NMP
en muestras de Agua Potable Tratada Envasada.

 Mezclar la muestra de agua por 15 a 20 segundos con movimientos rotación

 Servir en el frasco estéril de 100ml de la muestra en Cabina.
 Adicionar el contenido del vial de Pseudalert en su totalidad del sobre los 100ml de
agua(muestra) y Añadir 2 gotas de solución antiespumante.
 Tapar y agitar el recipiente, asegurarse de que el reactivo se disuelva completamente.
 Mezclar por 15 a 20 segundos, dejar en reposo, mezclar nuevamente y verificar la
completa disolución del reactivo.
 Transferir del contenido del frasco (agua a analizar + reactivo) a una Bolsa Quati Tray
 Tomar la bolsa Quanty tray colocarla en el porta bandeja del sellador Quanti tray y
pasarla a traves del sellador con los pozos hacia abajo con la bandeja de soporte
de abajo hacia arriba.
 Llevar la Bandeja de incubación a 38°C ± 0.5ªC por 24 horas. Los resultados son
válidos hasta transcurridas 28 horas.

Pseudalert*: Tecnología de Substrato Definido que detecta la presencia de

Pseudomona aeruginosa en aguas. El análisis se basa en la detección de una enzima
bacteriana de Pseudomona aeruginosa que catalizala hidrólisis del sustrato presente en el
reactivo del Kit Pseudalert* , la Pseudomona aeruginosa crece y se multiplica con rapidez
gracias al gran aporte en amino ácidos, vitaminas y otros nutrientes del reactivo, las
cepas en crecimiento activo posee una enzima que hidroliza el sustrato del reactivo y
produce una fluorescencia azul cuando se expone a la luz U.V. Pseudalert detecta
bacterias Pseudomona aeruginosa a una concentración desde 1UFC en muestras de 100ml
en 24 horas en agua no carbonatada y en 26 horas en muestras de agua carbonatada.