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    Determinación de Glucosa

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    Leonardo Garcia
    Los métodos para determinar la concentración de glucosa incluyen métodos basados en la reacción de los hidratos de carbono y métodos enzimáticos como la hexoquinasa y la glucosa oxidasa, que son los más utilizados. La hexoquinasa fosforila la glucosa formando glucosa-6-fosfato que luego se transforma en 6-fosfogluconato produciendo NADPH cuya absorción a 340 nm es proporcional a la glucosa. La glucosa oxidasa oxida la glucosa generando peróxido de hidrógeno que oxida

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    Los métodos para determinar la concentración de glucosa incluyen métodos basados en la reacción de los hidratos de carbono y métodos enzimáticos como la hexoquinasa y la glucosa oxidasa, que son los más utilizados. La hexoquinasa fosforila la glucosa formando glucosa-6-fosfato que luego se transforma en 6-fosfogluconato produciendo NADPH cuya absorción a 340 nm es proporcional a la glucosa. La glucosa oxidasa oxida la glucosa generando peróxido de hidrógeno que oxida

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    Determinación glucosa

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    Los métodos para determinar la concentración de glucosa incluyen métodos basados en la reacción de los hidratos de carbono y métodos enzimáticos como la hexoquinasa y la glucosa oxidasa, que son los más utilizados. La hexoquinasa fosforila la glucosa formando glucosa-6-fosfato que luego se transforma en 6-fosfogluconato produciendo NADPH cuya absorción a 340 nm es proporcional a la glucosa. La glucosa oxidasa oxida la glucosa generando peróxido de hidrógeno que oxida

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    Determinación de Glucosa

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    Los métodos para determinar la concentración de glucosa incluyen métodos basados en la reacción de los hidratos de carbono y métodos enzimáticos como la hexoquinasa y la glucosa oxidasa, que son los más utilizados. La hexoquinasa fosforila la glucosa formando glucosa-6-fosfato que luego se transforma en 6-fosfogluconato produciendo NADPH cuya absorción a 340 nm es proporcional a la glucosa. La glucosa oxidasa oxida la glucosa generando peróxido de hidrógeno que oxida

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    DETERMINACIÓN DE

    GLUCOSA
    Submódulo I: Analiza sangre con base en Técnicas de Química Clínica y Pruebas
    especiales
    Los métodos para determinar la concentración de glucosa se clasifican en dos grandes grupos.

    1. Métodos basados en el poder reductor de los hidratos de carbono (reacción Benedict, método de la
    o-toluidina).
    2. Métodos enzimáticos: son los más utilizados, utilizan enzimas como reactivos (ej. Glucosa oxidasa,
    hexoquinasa) a fin de aumentar la especificidad.
    i. Método de la hexoquinasa: Es el método de referencia y consiste en dos reacciones acopladas:

    𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝐴𝑇𝑃 → 𝐺 − 6 − 𝑃𝑂4 + 𝐴𝐷𝑃

    𝐺−6−𝑃𝐷
    𝐺 − 6 − 𝑃𝑂4 + 𝑁𝐴𝐷𝑃+ 6 − 𝑓𝑜𝑠𝑓𝑜𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑛𝑎𝑡𝑜 + 𝑁𝐴𝐷𝑃𝐻 + 𝐻 +

    En la primera reacción (específica), catalizada por la enzima hexoquinasa, se fosforila la


    glucosa formándose glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato, en una reacción posterior
    (reacción indicadora), se transforma en 6-fosfogluconato produciéndose NADPH. La
    producción de NADPH origina un aumento de absorbancia a 340 nm. El incremento de
    absorbancia a esta longitud de onda será directamente proporcional a la concentración de
    glucosa.
    • Método de la glucosa oxidasa: Al igual que el anterior consiste en dos reacciones
    acopladas:

    𝑮𝒍𝒖𝒄𝒐𝒐𝒙𝒊𝒅𝒂𝒔𝒂
    𝜷 − 𝒈𝒍𝒖𝒄𝒐𝒔𝒂 + 𝑶𝟐 𝒅 − 𝒈𝒍𝒖𝒄𝒐𝒏𝒐 − 𝜹 − 𝒍𝒂𝒄𝒕𝒐𝒏𝒂 + 𝑯𝟐 𝑶𝟐

    𝑝𝑒𝑟𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑠𝑎
    𝐻2 𝑂2 + 𝐜𝐫𝐨𝐦ó𝐠𝐞𝐧𝐨 reducido 𝑐𝑟𝑜𝑚ó𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑑𝑜 + 𝐻2 𝑂

    En la primera reacción (reacción específica), catalizada por la enzima glucosa


    oxidasa, se oxida la glucosa y se genera 𝐻2 𝑂2 lo que provoca oxidación de un
    cromógeno que pasa de su forma reducida (incolora) a su forma oxidada
    (coloreada). La aparición del cromógeno oxidado se evalúa mediante un
    espectrofotómetro y será directamente proporcional a la concentración de
    glucosa en la muestra.
    Aspectos prácticos a
    considerar cuando se
    analiza la glucemia
    1. Centrifugar la sangre lo antes posible: los eritrocitos
    y leucocitos consumen glucosa, por tanto, si el
    contacto con las células es prolongado se puede
    dar resultados falsamente bajos.
    2. Si no se van a analizar inmediatamente, se pueden
    refrigerar la muestra o añadir un conservante, ej.
    Fluoruro sódico.
    3. La concentración de glucosa en suero refrigerado
    es estable durante 3 días.

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