UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA

NACIONAL
Facultad Regional Resistencia

QUIMICA ANALÍTICA

Trabajo Práctico N°4: Absorciometría

Alumnos: Ferreyra, Anaclara

Rodas, Araceli
Sansberro, Romina
Vallejos, Alejandro

AÑO 2017
PARTE I: Determinación de la concentración de una muestra de concentración
desconocida.
OBJETIVOS: Seleccionar el filtro más adecuado y la longitud de onda de máxima
absorbancia para la determinación de cromo en soluciones acuosas. Calcular la
concentración de una incógnita de la misma.

INTRODUCCIÓN.
Todo analito molecular es capaz de absorber ciertas longitudes de onda características de
la radiación electromagnética. Cuando se produce la absorción se dice que la radiación
esta atenuada debido a que disminuye su intensidad.
Transmitancia
La atenuación de un haz colimado de radiación monocromática, antes y después de haber
atravesado una capa de solución con un grosor de b cm y una concentración c de una
especie absorbente. A causa de la interacción entre los fotones y las partículas
absorbentes, la potencia del haz disminuye de P0 hasta P. Si llamamos I0 a la radiación
incidente e I a la radiación transmitida, la transmitancia T de la solución se define como la
fracción de la radiación incidente transmitida por la solución:
I
T
I0
La transmitancia puede tomar valores entre 0 y 100%.

Absorbancia
La absorbancia se defina como la inversa del logaritmo decimal de la transmitancia:
1
A lo
gT
lo
gT
La absorbancia toma valores entre cero e infinito.
Ley de Beer
La ley de Beer establece que la absorbancia es linealmente proporcional a la
concentración de la especie absorbente (c) y al camino recorrido por el haz de partículas
de la radiación en el medio absorbente (b). Matemáticamente:
A  a·b·c Donde a es la constante de proporcionalidad denominada absortividad
Cuando la concentración c se expresa en molaridad, y b en centímetros, la constate de
proporcionalidad se denomina absortividad molar, y se la representa con el símbolo  .
Por lo tanto:
L
A  ·b·c donde las unidades de  son
mol·cm

Limitaciones de la ley de Beer:

Limitaciones Químicas: si bien la ley de Beer describe bien el comportamiento de
laabsorción de las soluciones diluidas, a concentraciones elevada, el comportamiento de
las sustancia se desvía del ideal. Esto sucede especialmente en las sustancias que se
disocian, asocian o reaccionan con una determinada constante de equilibrio.
Limitaciones Instrumentales: la ley de Beer describe el comportamiento de las
sustancias respecto de la luz monocromática, sin embargo en la experiencia real es difícil
y poco útil utilizar una fuente de luz verdaderamente monocromática (ej. Láser).
Normalmente se usan luces policromáticas, con filtros o rendijas para seleccionar una
determinada banda de longitudes de onda, el cual no selecciona una longitud de onda
específica sino una banda de ondas. Por esto se elige como longitud de onda aquella en
la que la sustancia presente la mayor absorbancia.

Espectros de absorción
Un espectro de absorción es una gráfica de porcentaje de absorbancia de un analito en
función de la longitud de onda o del número de onda.

Curva de Calibración
Para hacer determinaciones cuantitativas se elige la longitud de onda correspondiente a
un máximo, debido a que el error de medición es mínimo y la sensibilidad resulta máxima.
Para verificar el cumplimiento de la Ley de Beer, se debe realizar la curva de calibración;
absorbancia(A) en función de concentración(c), para lo cual se preparan soluciones de la
sustancia a concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de onda
elegida.

TECNICA OPERATORIA.
Se utilizó K2CrO4.

En el GISTAQ:
Se utiliza el espectrofotómetro Lambda 25 UV/VIS. Realiza lecturas para longitudes de
onda de entre 200 y 700 nm. Primero el aparato realiza una calibración automática para
T=100%. Posee espacio para dos cubetas: el blanco y la muestra a analizar.
Primero se realiza el barrido espectral para cuatro muestras: de 20 ppm, 25 ppm, 33,33
ppm y 40 ppm.
Se carga en el software datos de las 4 muestras para realizar el barrido. Posteriormente
se carga la primer cubeta con agua destilada (blanco) y se coloca en la primer ranura. El
blanco se conserva dentro del espectrofotómetro durante todas las lecturas. Luego se
carga la segunda cubeta con cada una de las muestras y se observa en la pantalla el
barrido espectral de cada una, y posteriormente el gráfico que muestra los barridos para
las 4 concentraciones.
Luego se realiza la curva de calibrado para determinar la concentración de la muestra
incógnita. Se utiliza un blanco con agua destilada y 4 soluciones de cromato de potasio de
16,67 ppm, 20 ppm, 25 ppm y 33,33 ppm como estándares. Se cargan en el software los
datos del blanco, de los 4 estándares y de la muestra incógnita. Se colocan una por una
en orden de concentración creciente las soluciones en la cubeta para medir su
absorbancia. Por último se mide la de la muestra incógnita y se observa en la pantalla la
curva de calibrado.
Finalmente, se determina la concentración incógnita de la solución, mediante la curva de
calibrado y analíticamente usando la Ley de Lambert-Beer.
 Commented [u1]: Agregar la referencia de la imagen indicando
En la imagen se puede observar la curva del barrido espectral de cuatro muestras de lo que se observa
cromato con distintas concentraciones, en ella se puede comprobar que la curva es
característica del compuesto, y que su forma no varía con la concentración.
En el anexo:
Se utiliza el espectrofotómetro 1104 RS VIS. Se elige una longitud de onda de 370 nm ya
que es la que muestra los valores máximos de absorbancia en el espectrofotómetro del
GISTAQ. Commented [u2]: NO. También se realizó el barrido. Agregar lo
Primero se selecciona la longitud de onda y se calibra el aparato con un blanco de agua hecho por todos los grupos que trabajaron con cromato
destilada. Luego se miden las absorbancias de muestras de cromato de potasio en
concentraciones de 16,67 ppm, 20 ppm, 25 ppm y 33,33 ppm, y de una muestra de
concentración desconocida. Se utilizan los resultados para construir una curva de
calibrado y posteriormente determinar la concentración incógnita de la solución.
Nosotros realizamos el barrido solamente con K2CrO4 33,33ppm.

λ (nm) A
700 0,281
650 0,01
600 0,006
550 0,004
500 0,002
480 0,0082
460 0,118
 440 0,103
420 0,042
400 0,266
380 0,107
360 0,443
340 0,082

Barrido espectral
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2 Barrido espectral
0.15
0.1
0.05
0
-0.05
300 400 500 600 700

Teniendo en cuenta la longitud de onda de mayor sensibilidad, las absorbancias para las
respectivas concentraciones son

C (ppm) A
16,67 0,229
25 0,383
33,33 0,443
40 0,576
X 0,308

RESULTADOS.
El objetivo de realizar el barrido espectral es conocer la longitud de onda que provoque la
mayor absorbancia de una solución o de varias soluciones de concentración conocida,
para obtener mayor sensibilidad en el posterior paso que es determinar la concentración
incógnita de una determinada solución.

En el GISTAQ : Se determinó que la longitud de onda en la que se observan mayores

absorbancias es de 371 nm, como muestra la figura:
Teniendo en cuenta esa longitud de onda, las absorbancias para las muestras
consideradas son:

C [ppm] A
 Blanco 0,001
16,67 0,305
20 0,480
25 0,615
33,33 0,825
Incógnita 0,666

Teniendo en cuenta estos valores, se calculó la concentración de la muestra incógnita:

𝐴1 𝐴𝑥 𝐴𝑥
= → 𝐶𝑥 = × 𝐶1
𝐶1 𝐶𝑥 𝐴1
Donde Ax y Cx son la absorbancia y la concentración de la muestra incógnita
respectivamente, y A1 y C1 son la absorbancia y la concentración de una muestra
conocida respectivamente.
Considerando la muestra con concentración de 25 ppm:
𝐴𝑥 0,666
𝐶𝑥 = × 𝐶1 = × 25 𝑝𝑝𝑚 = 27,07 𝑝𝑝𝑚
𝐴1 0,615

Commented [u3]: Agregar la referencia de la imagen

detallando qué se observa

Se puede ver la curva de calibrado, de la absorbancia de la muestra en función de la

concentración, con la misma realizamos los cálculos de la concentración de una muestra
de concentración desconocida.
En el anexo

C [ppm] A
Blanco 0,000
16,67 0,332
20 0,350
25 0,437
33,33 0,520
Incógnita 0,459

Considerando la muestra con concentración de 25 ppm:

𝐴𝑥 0,459
𝐶𝑥 = × 𝐶1 = × 25 𝑝𝑝𝑚 = 26,26 𝑝𝑝𝑚
𝐴1 0,437
Y el gráfico:

Curva de calibrado
0.6 y = 0.0159x + 0.0266
R² = 0.9754
0.5

0.4
Absorbancia

0.3 A de C conocidas
Concentración x
0.2
Linear (A de C conocidas)
0.1

0
0 10 20 30 40
Concentración en ppm
PARTE 2
Determinación espectrofotométrica del pKa de un indicador ácido-base.

Se determinará espectrofotométricamente el pKa del indicador ácido-base permanganato

de potasio. Como regulador ácido-base se utiliza el sistema ácido acético-acetato para Commented [SdCyT4]: Corregir
obtener valores de pH próximos al pKa del indicador.
Indicadores ácido-base. Generalmente estas sustancias son ácidos o bases débiles que
se utilizan como indicadores debido a que sus iones presentan colores diferentes
(absorben longitudes de onda distintas) que su forma sin disociar. Muchos de estos
compuestos son moléculas orgánicas que poseen uno o más protones que pueden ser
cedidos o bien poseen grupos que pueden aceptar protones, comportándose como ácidos
o bases. La especie predominante en la solución depende del pH de la misma.

En forma general el equilibrio en solución acuosa de un indicador se puede representar

por:

𝑯𝑰𝒏 𝑯 𝑶+ 𝑰𝒏− [𝑯𝟑 𝑶+ ][𝑰𝒏− ]

+ 𝑯𝟐 𝑶 ⇔ 𝟑 + 𝑫𝒐𝒏𝒅𝒆 𝑲𝒂 =
𝑪(𝟏 − 𝜶) 𝑪𝜶 𝑪𝜶 [𝑯𝑰𝒏]

[𝑯𝑰𝒏]
𝒑𝑲𝒂 = 𝒑𝑯 + 𝐥𝐨𝐠
[𝑰𝒏− ]

En función de las concentraciones

(𝟏 − 𝜶)
𝒑𝑲𝒂 = 𝒑𝑯 + 𝐥𝐨𝐠
𝜶

Si tanto [𝑯𝑰𝒏] como [𝑰𝒏− ] obedecen a la ley de Lambert-Beer entonces sus

concentraciones pueden determinarse espectrofotométricamente, este método posee la
ventaja de no perturbar el equilibrio. Para ello se selecciona una longitud de onda a la cual
los espectros de la forma acida y básica estén lo más alejados posible y se determinan las
absorbancias de tres soluciones que contengan la misma concentración total del
indicador a diferentes pH:

1- Solución cuyo pH es tal que el indicador se encuentra totalmente en su forma disociada

In-. Solución del indicador a pH alcalino.
2- Solución cuyo pH es tal que el indicador se encuentra totalmente en su forma no
disociada HIn. Solución del indicador a pH acido.
3- Solución cuyo pH es tal que el indicador se encuentra presente en ambas formas.
Solución del indicador a pH intermedio.

En la solución de pH intermedio el termino logarítmico puede determinarse en función de

las absorbancias:
 (𝑨𝒃á𝒔𝒊𝒄𝒂 − 𝑨𝒊𝒏𝒕𝒆𝒓𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂 )
𝒑𝑲𝒂 = 𝒑𝑯 + 𝐥𝐨𝐠
(𝑨𝒊𝒏𝒕𝒆𝒓𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂 − 𝑨á𝒄𝒊𝒅𝒂 )

Punto isosbéstico o isoabsortivo. Punto en el cual las absortividades molares 𝜀𝐼𝑛− 𝑦 𝜀𝐻𝐼𝑛
se igualan. Esto es característico de un sistema que tiene dos cromóferos
interconvertibles

Materiales
-Espectrofotómetro
-Cubetas adecuadas

Reactivos

-Solución 2,5x10-5 M del indicador a pH alcalino. Se prepara colocando en un matraz de

100 ml 5 ml de solución stock del indicador, agregando 5 ml de NaAc 0,2 M y enrasando
con agua destilada.
-Solución de 2,5x10-5 M del indicador a pH ácido. En un matraz de 100 ml se colocan 5 ml
de solución stock de indicador, se agregan 3 gotas de HCl concentrado 12 M y se enrasa
con agua destilada.
- Solución 2,5x10-5 M del indicador a pH intermedio. En matraz de 100 ml se colocan 5 ml
de solución stock de indicador, se agregan 5 ml de NaAc 0,2 M y 10 ml de HAc 0,1 M y se
enrasa con agua destilada.

Procedimiento
Se obtienen los espectros de las tres soluciones del indicador a diferentes pH midiendo la
absorbancia de cada una de las soluciones a intervalos de 50 nm y otros de 20nm desde
400 hasta 640 nm.200nm. Commented [SdCyT5]: Esto en el Lab del Anexo. En GISTAQ se
realizó desde 200 nm
Se cargan las cubetas con las soluciones y un blanco de agua destilada. Se secan y se
introducen en la cámara del espectrofotómetro. Se procede a realizar las determinaciones
de las absorbancias y con un peachímetro se toma el pH de la muestra a pH intermedio.
Del barrido espectral de las soluciones a diferentes pH se obtiene el punto isosbéstico y
en el intervalo donde existe la máxima variación de pH se toman los valores de las
absorbancias de las diferentes soluciones para realizar la estimación del pKa del
indicador.
En el Gistaq:

Commented [SdCyT6]: Agregar referencia

Referencia: Fotografia del barrido espectral realizado con el espectrofotómetro del GISTAQ Lambda 25
UV/VIS. Se observan los espectros del indicador a diferentes pH.

Realizamos un barrido espectral donde se vio que la longitud de onda adecuada (λe), es
decir donde los espectros de la forma ácida y básica estén lo más alejados posible, es de
617nm. Commented [SdCyT7]: Qué sucedió co el punto isosbéstico??
El punto isosbéstico se puede observar aproximandamente a los 500nm, con lo cual en esa
longitud de onda encontraríamos un equilibro entre las tres soluciones.

Solución de indicador, pH intermedio: 5,2.

λe = 620 nm

pH básico pH intermedio pH ácido

 Absorbancia 0,57 0,38 0,005
𝐴𝑏á𝑠𝑖𝑐𝑎 − 𝐴𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎
𝑝𝐾𝑎 = 𝑝𝐻 + 𝑙𝑜𝑔
𝐴𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎 − 𝐴á𝑐𝑖𝑑𝑎

0,57 − 0,38
𝑝𝐾𝑎 = 5,2 + 𝑙𝑜𝑔
0,38 − 0,005
pKa = 4,9 Commented [SdCyT8]: Buscar el valor de tablas y calcular el
error
El error cometido sería:

𝑝𝐾𝑎𝑝𝑟á𝑐𝑡𝑖𝑐𝑜 − 𝑝𝐾𝑎𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 |4,9 − 5,9|

𝐸% = ∙ 100 = ∙ 100 = 16,94%
𝑝𝐾𝑎𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 5,9

En el Anexo:

Longitudes de ABOSRBANCIA
onda (Intermedio)
340 0,082
360 0,443
380 0,107
400 0,266
420 0,042
440 0,103
460 0,118
480 0,0082
500 0,002
550 0,004
600 0,006
650 0,01
700 0,281
Longitud de onda ABSORBANCIA
(Acido)
400 0,130
420 0,138
440 0,277
460 0,364
480 0,128
500 0,074
520 0,052
540 0,079
560 0,014
580 0,228
600 0,145
620 0,051

Longitud de Onda ABSORBANCIA

(Basico)
400 0,147
450 0,050
 500 0,082
550 0,232
600 0,508
650 0,265
700 0,021

ABSORBANCIA
0.6

0.5

0.4
Absorbancia

0.3 Acido
Intermedio
0.2 Basico

0.1

0
400 450 500 550 600 650 700 750
Longitud de Onda

Los valores nos indican que el punto en donde los espectros de onda básica y acida están
lo mas alejados posible es a los 600nm:

Abasica= 0,508

Aacida= 0,145

Aintermedia=0,339

(𝑨𝒃á𝒔𝒊𝒄𝒂 − 𝑨𝒊𝒏𝒕𝒆𝒓𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂 ) (𝟎, 𝟓𝟐𝟓 − 𝟎, 𝟑𝟑𝟗)

𝒑𝑲𝒂 = 𝒑𝑯 + 𝐥𝐨𝐠 = 𝟓, 𝟐 + 𝐥𝐨𝐠 = 𝟓, 𝟏𝟖
(𝑨𝒊𝒏𝒕𝒆𝒓𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂 − 𝑨á𝒄𝒊𝒅𝒂 ) (𝟎, 𝟑𝟑𝟗 − 𝟎, 𝟏𝟒𝟓)

El pKa teórico según bibliografía es de 5,9

El error cometido en la determinación:

𝑝𝐾𝑎𝑝𝑟á𝑐𝑡𝑖𝑐𝑜 − 𝑝𝐾𝑎𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 |5,18 − 5,9|

𝐸% = ∙ 100 = ∙ 100 = 12,2%
𝑝𝐾𝑎𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 5,9
Conclusión

El grupo concluye en que la práctica de Absorciometría nos permitió cumplir con los
cometidos, asimismo, se realizó la determinación del filtro que permite la máxima
absorción de una solución para obtener luego la concentración de una solución
desconocida utilizando esta longitud de onda que es la que permite mayor sensibilidad.
Además, se realizó satisfactoriamente el barrido espectral de distintas soluciones, lo cual
nos permitió entender que los colores que vemos son los correspondientes a las
longitudes de onda que no se absorben. La determinación del pKa por este método de
barrido espectral nos dio un error, comparado con el valor teórico tabulado del 12,2% el
cual puede deberse entre otras cosas a la inexactitud en la preparación de las soluciones
y que los pH se alejen un poco de valor real ya que el espectrofotómetro tiene un rango
de medición muy exacto

Bibliografía

- SKOOG; WEST; HOLLER; CROUCH. “Fundamentos de Química Analítica”.

Editorial Thomson.