Trabajo científico

Recogida de muestras para el

laboratorio ¿Qué, cómo, cuál,
cuánto?
Paloma Chaves Sanz
Directora técnica del laboratorio APG
Rodriguez San Pedro 10
28015 Madrid

Obtención
La primera pregunta que nos planteamos cuando te-
nemos que hacer un análisis de sangre es ¿qué tipo de
aguja debo emplear, en que tipo de tubo tengo que reco-
gerlo, qué cantidad de sangre se necesitará?

El uso de palomillas o agujas y el distinto calibre de las

mismas, lo mismo que el volumen de las jeringuillas y la
elección de la vena dependerá en ocasiones del tamaño
del animal al que vamos a extraer la sangre.
Figura 2 ¿Qué tubo elijo?
La cantidad de sangre extraída dependerá también de
las pruebas que solicitemos al laboratorio.

La aguja rosa es de 18G (la más gruesa), la amarilla de

20G, la verde de 21G, la azul de 23G y la naranja de 25G
de insulina (la más fina). (Fig. 1)
Figura 3 Código
Internacional de
colores para recogida
de tubos
(Norma ISO 6740)

Figura 1¿Qué calibre de aguja, que jeringuilla, qué cantidad?

Dependerá del tipo de animal.

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 Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto? - Chaves P.

Cantidad/ ml
Modo de Color
sangre
Anticoagulante acción Ventajas Inconvenientes Utilización tapón

EDTA Na o K Conserva
Interfiere Hemograma
Quelante 1-2 mg/ml morfología
determinaciones Parásitos LILA
Calcio células
bioquímicas hemáticos
sanguíneas

Inhibe paso Conserva

Heparina Na,K, Desaconsejable Perfiles
protrombina- 20 U/ml pH sanguíneo VERDE
Li, Li,NH4 hematología bioquímicos
trombina

Conserva
Sol. 3,8%:
Quelante factores
1vol.citrato/ 9
Citrato sódico calcio Hemostasia lábiles Coagulación AZUL
vol. sangre
coagulación
algunas horas

Desaconsejable
Fluoruro Inhibe Conservador
en otras Deter. de la
Sódico glucólisis 2-4mg/ml de la GRIS
determinaciones glucosa
glucosa
bioquímicas

Sin
Bioquímica
anticoagulante ROJO
Inmunología

En cuanto a los tubos, existe un Código internacional Hemograma

de colores para recogida de tubos (norma ISO 6740),
(Figura 3). El tapón lila corresponde al anticoagulante EDTA (etilendia-
minotetra-acético) en forma de sales de sodio o potasio (Fig.4).
Dependiendo del color del tapón el anticoagulante será
diferente y se utilizará para distintos fines. El EDTA es el anticoagulante que mejor conserva las cé-
lulas sanguíneas.
Tubo de tapón lila lleva EDTA sódico o potásico se usa
para la realización de hemogramas y estudio de células Actúa como anticoagulante por ser quelante del calcio
y parásitos hemáticos. de la muestra.

Tubo de tapón verde lleva heparina sodio, potasio, litio La concentración de la muestra debe ser de 1-2 mgr/ml
y amonio se utiliza para perfiles bioquímicos. de sangre. Esto lo conseguimos añadiendo la cantidad
de sangre que nos indica el tubo.
Tubo de tapón azul lleva citrato sódico y se utiliza para
pruebas de coagulación.

El tubo de tapón gris lleva fluoruro sódico y se utiliza

para determinación de glucosa.

Tubo de tapón rojo no lleva ningún tipo de anti-

Fig.4
coagulante. Con él obtenemos suero para pruebas de
Tubos de
bioquímica, hormonas e inmunología. EDTA
 
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Trabajo científico

Excepcionalmente podemos hacer un hemograma en tubos Se puede hacer un hemograma con 0,5 a 1 ml de sangre.
con otro tipo de anticoagulante como por ejemplo Heparina
litio pero conserva peor la morfología celular y se producen Mirad en el tubo siempre la señal hasta donde hay que
con más frecuencia todavía agregados plaquetarios. llenarlo de sangre.

Métodos En caso de usar tubos Tapval podemos quitar la aguja e

introducir en émbolo por el orificio superior (Fig. 8), es muy có-
Una vez obtenida la muestra de sangre quitamos la aguja modo pero si lo vamos a remitir al laboratorio, la sangre puede
de la jeringuilla y solo con esta introducimos la sangre en salirse y no os podéis imaginar lo que cunde una gota de sangre
el tubo correspondiente. (Figuras 5 y 6). Tapamos con el (Fig. 9) en un sobre y no podéis imaginaros como llega el tubo
tapón e invertimos suavemente varias veces (cinco o seis) o tubos que le acompañan al laboratorio pues sigue goteando.
para que la sangre se mezcle bien con el anticoagulante.
Nunca bruscamente como si fuera una coctelera.

Figura 9

Figura 8
Figura 5 Figura 6
SI NO
Si añadimos un volumen distinto de sangre al indicado
en el tubo tendremos problemas.

Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coa-

gulará la sangre. Figura 10
Por favor quitad el tapón, os llevará unos segundos más y
Si el volumen de sangre es menor se nos producirán: hacedlo como si fuera un tubo de tapón hermético (Fig.10).
Hemólisis, crenación de los hematíes, falsas disminucio-
nes del hematocrito, VCM y falsos aumentos de CCMH. Identificación
Figura 7 El
tubo de la Es importantísimo identificar los tubos con los datos del ani-
izquierda mal al que realizaremos el análisis antes incluso de depositar
tiene poco la sangre en él. Evitaremos así un posible error preanalítico
volumen de que puede complicarse en el laboratorio. (Figura 11)
sangre y el
de la derecha
Si además acompañamos a las muestras identificadas de
demasiada por
lo que se ha un protocolo facilitaremos mucho el trabajo al laborato-
formado un rio, indicando:
coágulo.
• Los datos del animal: Nombre, raza, sexo, edad.
• Datos de la clínica o veterinario que la remite.
• Tipo de muestra.
NO • Breve historia clínica.
• Tratamientos empleados.
  • Determinación que se solicita.

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Trabajo científico

La contaminación con un exceso de antiséptico puede

producir hemólisis debido al alcohol.

La extracción de sangre extravasada puede producir he-

mólisis y agregación plaquetaria (Fig. 13 y 14)

Figura 10 Fig.13. Agregados plaquetarios. Fig. 14. Hemólisis

SI NO
La contaminación con el
Conservación: líquido de fluidoterapia
producirá una dilución de
Lo ideal son dos horas desde la obtención de la muestra la muestra e incluso con-
a temperatura ambiente o 24 horas en nevera a 4º C pa- taminación de la misma
ra no alterar los valores del hemograma. si el fluido lleva potasio Fig. 15. Crenación de hematíes
produciendo hiperkalemia
JAMÁS introducir en el congelador. (Fig. 16).
Figura 16
Las plaquetas deben determinarse lo antes posible para
evitar agregados.

Los frotis sanguíneos deben realizarse como máximo

dos horas después de haber obtenido la muestra y fijar-
los en metanol durante dos minutos una vez secos. NO

Hay una serie de factores a considerar

Un animal estresado puede presentar Híperglucemia,

neutrofilia madura y/o linfocitosis.
Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coa-
Produciremos hemólisis si usamos agujas de bajo calibre gulará la sangre.
y jeringas de alto volumen (Figura 12).
Si el volumen de sangre es menor se nos producirán:
Hemólisis, creación de los hematíes (Fig. 15), falsas dis-
Figura 12
minuciones del hematocrito, VCM y falsos aumentos
de CCMH.

NO
Pruebas de bioquímica

Las podemos hacer prácticamente todas en suero, en

plasma también siempre que el anticoagulante no inter-
fiera en la prueba.

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 Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto? - Chaves P.

Los tubos de suero no llevan ningún tipo de anticoagu- Lo ideal es separarlos antes de las dos horas de recogida
lante y el tapón es de color rojo, según las norma ISO de la sangre.
6710 (Fig.17). En el mercado hay tubos sin anticoagu-
lante que no siguen esta norma y hay tapones de todos Si la sangre la recogemos en tubo de heparina litio po-
los colores. Tenemos que asegurarnos que el tubo ele- demos centrifugarla inmediatamente después para la
gido para suero no lleve anticoagulante de ningún tipo. obtención del plasma.
Para inmunología el tubo de elección es el de suero lo
mismo que para la determinación de hormonas. Diferencias entre el suero y el plasma

Las pruebas de bioquí- Suero

mica también pueden • Riesgo de hemólisis mayor que en suero
hacerse en plasma re- • Centrifugación tras coagulación
cogido en un tubo con • Muestra idónea para la mayoría de pruebas: bioquí-
heparina litio, tubos micas e inmunológicas
con tapón verde (Fig. • No contiene fibrinógeno
17) pues no interfie-
ren los resultados sin Plasma
embrago en EDTA in- • Riesgo de hemólisis menor que en suero
terfieren las pruebas • Centrifugación inmediata
enzimáticas (fosfatasa • En pruebas bioquímicas posible interferencia con an-
 
alcalina) y los iones Ca ticoagulante (mínimas con heparina Litio)
Fig. 17. Tubos de Heparina Li
y K. • Contiene fibrinógeno
y sin nada

Manejo de las muestras Conservación de suero o plasma

Si recogemos la sangre en tubo de suero, tenemos que Se conserva 3 días a 4º C y congelado a – 20º C durante
dejarlo en posición vertical y a temperatura ambiente mucho tiempo
Fig. (18 y 19). No debemos refrigerarlo antes de su coa-
gulación y retracción del coagulo (de treinta minutos a Conservación de las muestras
una hora después de la recogida) pues produciríamos
hemólisis. Compuesto 20 – 25 º C 4º C -20º C
Albúmina 6 días 6 días Varios meses
ALT (GPT) 1 día 7 días 1 mes
AST (GOT) 3 días 7 días 1 mes
Bilirrubina Solo muestra
- -
total reciente
Calcio 10 días 10 días 8 meses
Colesterol 6 días 6 días 4 meses
Creatinina 1 día 1 día Varios meses
Fosfatasa 10%actividad
7 días 1 mes
alcalina en 7 d.
Fósforo
2 días 7 días Varios meses
Fig. 18 Fig.19 inorgánico
El microtubo de la Fig. 18 se dejó en posición horizontal el de GGT 5 días 10 días 1 mes
la Fig. 19 en posición vertical, en los dos se ve el coagulo y su Glucosa
retracción. 1 día 2 días -
(en FlNa)
Potasio 2 semanas 2 semanas Varios meses
Si la sangre no desuera bien, esto suele ser lo habitual, Proteínas
centrifugaremos a 2.500-3000 rpm durante 5-10 mi- 7 días 1 mes Varios meses
totales
nutos. Urea 1 día 3 días 6 meses

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Trabajo científico

Determinación de glucosa micción espontánea, sonda o cistocentesis y especial-

mente cuando se trate de urocultivos, en cuyo caso el
La sangre la podemos recoger en un tubo de suero, en frasco o tubo deberá ser estéril.
cuyo caso la deberemos centrifugar en el momento que
se haya coagulado o en un tubo con Heparina Litio en Se conservan perfectamente de 12 a 24 horas a 4 ºC.
cuyo caso deberemos centrifugar inmediatamente o en
un tubo de Fluoruro sódico, tubo de tapón gris (Fig. 20),
que inhibirá las enzimas de la glucólisis y conserva el va- Análisis de heces
lor de glucosa durante 24 horas a temperatura ambiente
o 48 horas a 4 º C. Lo ideal son los análisis seriados de 3 a 5 días en caso de
diagnóstico de giardias por ejemplo.
Si no lo hacemos siguiendo
este protocolo no podre- Se conservaran a 4ºC excepto la última muestra que se
mos valorar la glucosa pues enviará a temperatura ambiente y lo más fresca posible.
se produce un consumo de Usar recipientes adecuados NO USAR BOLSAS DE
esta por parte de los he- PLASTICO o PAPEL DE ALUMINIO para remitir las
matíes. muestras.

Para coprocultivos los frascos deberán ser estériles.

Coagulación

La sangre se recogerá en un Líquidos orgánicos

Fig. 20 Tubos de fluoruro tubo de citrato sódico, tubo
Na
de tapón azul (Fig. 21). Se remitirán en dos tubos, uno con EDTA para el recuen-
to de células y la citología y otro de suero para pruebas
Las cantidades de sangre se- bioquímicas en caso de que se soliciten.
rán las correspondientes al
volumen de anticoagulante, Para el cultivo bacteriológico se empleará un tubo estéril
(9 partes de sangre por 1 de o la propia jeringuilla de extracción.
anticoagulante).
Los portas con las extensiones para las citologías deben
Centrifugar antes de los 30 ir fijadas en metanol.
minutos de extracción de la
sangre a 3.000 rpm durante
15 minutos. Citologías y biopsias
 
Fig. 21 Tubos de Citrato Refrigerar un máximo de 2 Citologías
sódico horas o congelar a -20 ºC.
Materiales: Agujas, jeringuillas y portas.

Urianálisis Métodos: Podemos

realizarla de dos for-
Recomendamos NO USAR frascos de orina para remitir mas: Punción con
la muestra al laboratorio, a no ser que sean herméticos aguja fina o pun-
es preferible remitirla en tubos. Durante el transporte ción–aspiración con
suelen ser frecuentes los accidentes. aguja fina.

Para el urianálisis solo son necesarios 5 ó 10 ml de orina.

Conviene indicar la forma de recogida de la muestra: Fig. 22

22
 Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto? - Chaves P.

Las dos técnicas son Fig. 24

muy similares. La pri-
mera es ideal para
ganglios pues al ser
estos muy frágiles ase-
gura la integridad de
las células y en tejidos
muy vascularizados
Fig. 22 para minimizar la con-
taminación sanguínea. Fig. 25

No tomaremos muestras de zonas ulceradas pues solo Métodos:

reflejara el proceso inflamatorio.
Tamaño
En lesiones de gran tamaño la zona central suele estar
necrosada/inflamada por tanto debemos ir a los bordes. El tamaño ideal
de la muestra se-
Introducimos la aguja y aspiramos con una jeringuilla ria de 1cm x 1cm aproximadamente. En caso de muestras de
de 10 ml. mayor tamaño deberemos hacer cortes cada 1,5 cms perpen-
diculares al eje mayor o tomar varias muestras incluyendo los
Sacamos la aguja y la volvemos a introducir en otra di- márgenes de extirpación (Fig. 25).
rección y aspiramos de nuevo.
Fijación
Una vez realizada la aspiración, separamos la aguja y lle-
namos la jeringuilla de aire. La fijación de las muestras para oncología se hace por méto-
dos químicos (fijadores). El más común es el formol al 10%.
Ponemos la aguja de nuevo y vaciamos la jeringa en un
porta (Fig. 22). Formol al 10%: Se prepara con 1 parte de formaldehído
al 40%, 9 partes de agua (también puede substituirse el
Hacemos la extensión inmediatamente por el procedi- agua por solución salina fisiológica al 9%). Hay otras fór-
miento de squash o aplastamiento (Fig. 23). Es decir, mulas pero esta es la más común.
ponemos sobre el porta que contiene la gota otro porta
formando una cruz con el anterior y lo deslizamos sua- Recipientes
ve y rápidamente.
Existen distintos tipos de recipientes, la única condición es
Dejamos secar y fijamos con metanol. que sea hermético y adecuado para la muestra (Fig. 26 y 27).

Lo remitimos al laboratorio sin teñir. Se enviarán en Deberá ir perfectamente identificado.

porta- preparaciones de plástico o envueltas en papel ab-
sorbente para acolcharlas.

Si lo visualizamos nosotros se teñirá con técnicas

Romanowsky.

Biopsias

Materiales: Bisturí, tijeras, pinzas, punch, frascos her-

méticos, fijador (Fig.24).
Fig. 26

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Trabajo científico

Fig. 27
Volumen de fijador

Deberá superar el volumen de la muestra en una propor-

ción 20:1 o 40:1

Figura 28 Figura 29
Se debe sumergir el material en el fijador y no a la in-
NO NO
versa para evitar el contacto de esta con las paredes y el
fondo del recipiente, evitando que se adhiera.

Si la muestra flotara (pulmón) la sumergiremos total-

mente en el fijador. • El volumen del fijador no es el adecuado.
• La muestra no está fileteada en porciones de 1,5 cms,
Duración de la fijación está entera.
• No está etiquetado o identificado el frasco
Generalmente las muestras están fijadas a las 24-36 ho-
ras de haberlas introducido en el fijador.
Figura 29
En formol las muestras no se alteran en semanas o meses. • El frasco es de plástico y hermético pero demasiado
pequeño para la muestra.
Protocolo • La muestra no está fileteada en porciones de 1,5 cm.
• No hay fijador en el frasco, está vacío.
Las muestras deberán ir acompañadas de un protoco-
lo con:
Bibliografía
• Los datos del animal: nombre, raza, sexo, edad.
• Datos de la clínica o veterinario que la remite. 1. Bush B.M.: Manual del Laboratorio Veterinario de Análisis Clínicos.
• Historia clínica. Ed. Acribia
• Localización: Día y hora de la extracción y fijación. 2. BE Powers “The Pathology of Neoplasia” Small Animal Clinical
• Tratamientos empleados y respuestas a estos. Oncology 2.001-WD Saunders Co
• Analíticas si las hubiera. 3. Cowell RL,Tayler RD: Diagnostic Cytology of dog and cat. Ed.
American Veterinary publications, Inc 1.989
Por favor recordad que enviáis la muestra a un citólogo o 4. CowellRL, Tayler RD, Meinkoth JH: Diagnostic cytology and hema-
a un patólogo no a un adivino. tology of the dog and cat. Ed. Mosby 1.999
5. Davidsohn I. Henry J.B.: Diagnóstico clínico por el laboratorio. Ed.
Errores Salvat 6ª edición
6. Martínez de Merlo, E.: Atlas de citología clínica del perro y el gato.
Figura 28 Ed. Servet 2.008
• No es aconsejable el uso de frascos de cristal pues du- 7. Steven E. Weisbrode: “The Histopathology laboratory in Diagnosis
rante el transporte pueden ocurrir accidentes. of Neoplasia”

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