Preparatoria Federal Lazaro Cardenas

Tipos de medios de cultivo sólidos.

Elaboró: ​Manuel Díaz Nava

Roberto Alan Rivas Méndez

Noviembre 2018

Capacitación de laboratorista clínico

Procesa técnicas bacteriológicas básicas para el diagnóstico

clínico.
 1. Agar nutritivo
1.1 Composición del agar
● Pluripeptona 5 g/l
● Extracto de carne/extracto de levadura 3g/l
● Agar 15 g/l
● Cloruro de sodio 8 g/l

Contiene: ​carbohidratos, nitrógeno y vitaminas.

Aditivos
● Agua destilada

2.3 Condiciones para su uso

Baterias de facil crecimiento: Medio aerobio de 35-37 C, durante 18-24 horas.
Bacterias exigentes con requerimentos nutricionales: Medio con 5-10% de CO2, durante
24-48 horas.
El agar debe ser ambientado antes de realizar el cultivo para evitar someter a cambios
bruscos de temperatura a las bacterias.

2.3 Características del agar

El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación suficiente para
el desarrollo de los ​microorganismos​. El extracto de carne proporciona al medio fuente de
carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El empleo de este medio es de acuerdo al tipo de
estudio por realizar. PREPARACION: Rehidratar 23 g del medio en un litro de agua
destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de
ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC
(15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de
Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2 a 8ºC.
pH 6.8 ± 0.2)
No es diferencial
MIcroorganismos para cultivar: Gran variedad
Color: Beige claro
Apariencia homogenea

2.4 Microorganismos
Escherichia coli–Colonias grandes, crema brillante y lisas,
Staphylococcus aureus–Colonias grandes ligeramente amarillas, brillantes y lisas,
Enterococcus faecalis–Colonias pequeñas, crema opacas y lisas
Las cepas no presentan ningun tipo de halo ya que no existen eritrocitos para la
hemolisis.
2. Agar sangre
Composición del agar:
Contiene: Nitrógeno, Vitaminas, Aminoácidos
Composición:
Infusión de músculo cardiaco (10 g/l)
Peptona de carne (10 g/l)
Cloruro de sodio (5 g/l)
Agar bacteriológico (15 g/l)

Aditivos:
Sangre de cordero fresca estéril, desfibrinada (50 ml/l)

Características del agar:

pH: 7.3 +- 0.2.
MIcroorganismos para cultivar: Gran variedad
Color: rojo sangre (sin cultivar).
Temperatura de conservación: 2-12 C preferiblemente a 8 C.
Tipo de organismos: Organismos con respiración ​aerobia
Medio de cultivo no selectivo, por lo que puede cultivar cualquier tipo de
microorganismo, lo que podría dificultar su ​aislamiento
Condiciones para uso
Temperatura de cultivo: 35-37 C
Tiempo de cultivo: 24-48 horas
Atmósfera: Variable según el tipo de microorganismo
El agar debe ser ambientado antes de realizar el cultivo para evitar someter a
cambios bruscos de temperatura a las bacterias.

A qué tipo de MO va dirigido:

Bacterias
Streptococcus pyogenes: Crecimiento bueno o excelente con beta hemólisis débil o
adecuada.
Streptococcus pneumoniae: Crecimiento bueno o excelente con alfa hemólisis d
Escherichia coli: Crecimiento bueno o excelente, puede o no tener beta hemólisis:
Staphylococcus aureus: Crecimiento bueno o excelente, puede o no tener beta
hemólisis
Staphylococcus epidermidis: Crecimiento bueno con gamma hemolisis.
Listeria monocytogenes: Colonias de pequeño a mediano tamaño, presenta beta
hemólisis débil.
Géneros de bacterias y hongos:
Streptococcus: Colonias pequeñas blancas o grisáceas, alfa o beta hemólisis.
Enterococcus: Colonias grisáceas pequeñas alfa hemólisis, raramente beta
hemólisis.
Staphylococcus: Colonias grandes blancas, grises, crema o amarillas, con pueden
presentar los tres tipos de hemolisis.
Corynebacterium: Colonias pequeñas o grandes, blancas, gris o amarillas, presentan
gamma o alfa hemólisis.
Enterobacteriaceae: Colonias de mediano a gran tamaño, grises, con alfa o gamma
hemolisis.
Candida (levadura): Pequeñas colonias blancas con gamma o alfa hemólisis.
3. Agar macConkey
Composición del agar:
Fórmula* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de gelatina 17,0 g
Digerido pancreático de caseína 1,5
Digerido péptico de tejido animal 1,5
Lactosa 10,0
Sales biliares 1,5
Cloruro sódico 5,0
Rojo neutro 0,03
Cristal violeta 0,001
Agar 13,5
Características del agar:
pH 7,1 ± 0,2 , el pH se acidifica cuando hay fermentación láctica, tornando el
color del medio de rosa a rojo.
Color sin cultivar: color rosa claro
Temperatura de almacenamiento: 2-8 C
Bacterias ​fermentadoras​ de lactosa: Colonias rosadas o rojizas con
precipitación biliar.
Bacterias no fermentadoras de lactosa: Colonias rosadas del color del medio
(rosa claro)
Condiciones para uso
35-37 C para organismos aerobios
Medios con poca iluminacion
A qué tipo de MO va dirigido:
Cultivo selectivo para bacterias del género Enterobacteriaceae y diversos
bacilos gram negativos.
Genero Enterobacteriaceae: Colonias mucoides color rosa.
Genero Proteus: Colonias incoloras, colonias aisladas
Genero Salmonella: Colonias incoloras, tornan el medio de color ámbar o
anaranjado, por cambio de pH del medio
Escherichia coli Crecimiento; colonias de color rosa, precipitación biliar
positiva.
Proteus mirabilis Crecimiento; colonias de incoloras a color beige,
agrupamiento dinámico inhibido
Salmonella Typhimurium Crecimiento; colonias de incoloras a color beige,
precipitacion biliar negativa.
Salmonella Abony Crecimiento; colonias de incoloras a color beige Shigella
flexneri Crecimiento; colonias incoloras
Enterococcus faecalis: Crecimiento Inhibido parcialmente a completamente
Staphylococcus aureus Inhibición de parcial a completa
4 Agar chocolate
Este medio permite el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos
nutricionales, es una variante del agar sangre, solamente que sus eritrocitos han pasado por
un proceso de hemólisis a 56 C
Composición del agar:
Extracto de carne bovina 2,0 g
Hidrolizado ácido de caseína 17,5
Almidón 1,5
Hemoglobina 10,0
IsoVitaleX 10,0 mL
Agar 17,0 g
Componente IsoVitaleX contiene los siguientes factores de crecimiento en g/l de
agua
Vitamina B12: 0.01 g
L-glutamina 10 g
Adenina 1 g
Clorhidrato de guanina 0.03 g
Adido p-aminobenzoico 0.013 g
Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD)
Pirofosfato de tiamina 0.1 g
Nitrato férrico 0.02 g
Clorhidrato de tiamina 0.003 g
Hidrocloruro de cisteína 25.9 g
L-cistina 1.1 g
Glucosa 100 g

Características del agar:

Color: Cafe o marron, debe su color debido a la presencia de eritrocitos
lisiados a 56 C.
Temperatura de almacenamiento: 2-8 C
Tipo de microorganismos: Bacterias preferiblemente anaerobias con
requerimientos nutricionales específicos. No apto para coprocultivos por la
cantidad de microorganismos que puede cultivar.

Condiciones para uso:

Temperatura de cultivo: variable segun el microorganismo que se desee
cultivar
Atmosfera: bacterias de facil crecimiento: en medio aerobio de 35-37 C de 18
a 24 horas
bacterias exigentes: atmosfera anaerobia con 5% ce CO2 de 35-37 C de
18-48 C
A qué tipo de MO va dirigido:
Género streptococcus: con crecimiento satisfactorio
Genero Haemophilus: con crecimiento satisfactorio
Género Neisseria: Con crecimiento satisfactorio
Haemophilus influenzae: Pequeñas, húmedas, nacaradas con un olor de
"ratón" característico
Neisseria gonorrhoea: Pequeñas, de color blanco grisáceo a incoloro,
mucoides
Neisseria meningitidis: Medianas a grandes, gris azulado, mucoides
Streptococcus pneumoniae: Colonias pequeñas, planas o más grandes,
mucoides verdosas, las colonias circundantes pueden ser verdosas
5 Agar ss
Se le considera un medio moderadamente selectivo según el nivel de
inhibición de los microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae
diferentes de Salmonella spp y de bacterias del género Shigella, este medio
se caracteriza por la inhibición del desarrollo de otro tipo de bacterias por su
contenido de sales biliares, verde brillante y citratos.
Composición del agar:
Extracto de carne 5.0 g
Hidrolizado Pancreático de caseína 2.5 g
Hidrolizado péptico de tejidos animales 2.5g
Lactosa 10.0 g
Sales biliares 8.5 g
Citrato sódico 8.5 g
Tiosulfato sódico 8.5 g
Citrato férrico 1.0 g
Rojo neutro 0.025g (como indicador ácido base intervalo 6.8-8.4 virando de
rojo a amarillo)
Verde Brillante 0,33 mg
Agar 13,5 g
Características del agar:
pH : 7,2 +/- 0,2
Color: Anaranjado ligeramente opalescente, este color se da por el viraje del
rojo neutro en el pH del cultivo sin usar (7.2 +/-0-2) y a la presencia de
extractos de carne
Condiciones para uso
El cultivo debe ser en la superficie del agar.
En medios aerobios:
Temperatura: 35-37 C
Tiem´po: 18-24 horas
A qué tipo de MO va dirigido:
Cepas de control:
Salmonella Enteriditis con crecimiento satisfactorio, colonias incoloras y con
producción de sulfuro de hidrogeno (H2S).
Escherichia coli ATCC 25922, desarrollo inhibido colonias de color rojo
carmesí con precipitación de sales.
Enterococcus faecalis: sin ningún tipo de desarrollo o muy escaso, con
colonias incoloras y sin produccion de sulfuro de hidrogeno.
Salmonella Typhimurium Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color
beige con centros blancos, en ocasiones son incoloras, con produccion de
sulfuro de hidrogeno.
Shigella flexneri Crecimiento de adecuado a excelente; colonias de color de
rosa claro a incoloras, no produce sulfuro de hidrogeno.
Shigella sonnei: Crecimiento satisfactorio con colonias incoloras y con
produccion de sulfuro de hidrogeno.
Proteus: Crecimiento parcial con colonias incoloras, sin produccion de sulfuro
de hidrogeno.
Sin inocular Rojo anaranjado ligeramente opaco (El color se debe a la
presencia de extractos de carne y al indicador rojo neutro)
Resultados
E. coli Ligero crecimiento, colonias rosa o rojas
Enterobacter/Klebsiella Ligero crecimiento, colonias rosas
Genero Proteus: Algunas Colonias incoloras con centro negro
Salmonella Colonias incoloras , habitualmente con centro negro
Shigella Colonias incoloras
Pseudomonas Crecimiento ligero e irregular

Interpretacion de resultados:
Fermentadores de lactosa: colonias rosadas o rojizas
No fermentadores de lactosa: colonias incoloras.
Productoras de H2S: colonias con centro negro.
Puede haber una combinacion de 2 o mas de las caracteristicas antes
mencionadas.
6 ​ ​Agar Mueller-Hinton
Es un ​medio de cultivo​ recomendado para la realización de la prueba de sensibilidad
a los antimicrobianos.
Composición del agar:
Extracto de carne bovina 2,0 g
Hidrolizado ácido de caseína 17,5
Almidón 1,5
Agar 17,0
Características del agar:
pH 7,3 +/- 0,2
Color: Incoloro (deshidratado), ámbar claro (preparado y esterilizado), rojo
cereza (suplementado con sangre)
Espesor del agar: 4 mm
Temperatura de almacenamiento: 10-35 C (deshidratado), 2-8 C (preparado).
Condiciones para uso
Temperatura de cultivo: 35 +/- 1,2
Tiempo: 16-20 horas, (puede variar según el microorganismo)
Antibióticos que se pueden usar:
A qué tipo de MO va dirigido:
Escherichia coli ATCC 35218: Se ​inhibe ​ante ampicilina.sulbactam y
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Crecimiento optimo en medio aerobio,
crecimiento de 33- 37 C durante 16-18 horas.
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Staphylococcus aureus ATCC 29213: Presenta inhibicion ante amicacina,
amoxicilina-acido clavulanico, bencilpenicilina, cefoxitina, ceftarolina, etc.
Crecimiento optimo en medio aerobio de 33- 37 C, de 16 a 16 horas, e
algunos casos hasta 24 horas.
Escherichia coli ATCC 25922: Presenta inhibicion ante aztreonam, cefocitina,
cefpodoxima, cefuroxima, cloranfenicol, etc.
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853: Presenta inhibicion ante anicacina,
aztreonam, cefepima, ciprofloxacino, doripenem, etc. Crecimiento optimo en
medio aerobio, crecimiento de 33- 37 C durante 16-18 horas.
Enterococcus faecalis ATCC 29212: Presenta inhibicion ante gentamicina,
imipenem, levofloxacino, lenezolid, etc. Crecimiento optimo en medio aerobio,
crecimiento de 33- 37 C durante 16-18 horas.
Enterococcus faecalis ATCC 51299: Presenta inhibicion ante gentamicina,
teicoplania y vancomicina. Crecimiento optimo en medio aerobio, crecimiento
de 33- 37 C durante 16-18 horas.
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603: se inhibe ante aztreonam y
Ceftriaxona,
Staphylococcus aureus NCTC 12493: se inhibe ante cefoxitina, y
ticarcilina-acido clavulanico
7. ​Agar Lowenstein-Jensen
El medio de Lowenstein-Jensen se utiliza para el ​aislamiento​ y cultivo de
micobacterias. El medio de agar profundo en tubo se utiliza para la prueba
semicuantitativa de catalasa para facilitar la clasificación de micobacterias
Composición del agar:
Agua purificada 600 ml
Fosfato monopotasico 2.5 g
Sulfato de magnesio 0.24 g
Citrato de sodio 0.6 g
L-aspargina 3.6 g
Fecula de papa 30 g
Verde de malaquita 0.4 g
Glicerol 12 ml
Huevo 1000 ml
Características del agar:
Color: verde claro por el verde de malaquita
Temperatura de almacenamiento: -60 C una vez realizada una suspension de
cultivo, 2-8 C cuando esta sin usar
Es un cultivo diferencial para bacilos del genero mycobacterium, las colonias
se observan de color amarillento (no confundir con los lipidos de la yema de
huevo)
Meustras para sembrar: esputo, contenido gastrico, lavado y aspirado
bronquial, liquido pleural, ascitico y cefalorraquideo, orina, biopsias, exudado
faringeo.
pH:
Condiciones para uso:
Temperatura de cultivo: 35 C 2+/-
Posicion del cultivo: Al ser un tubo debe colocarse inclinado
Tiempo de cultivo: 2-3 semanas (primeras aparciones de pigmentos), 3% de
las micobacterias a los 40 dias.
Las bacterias aisladas deberan ser tincionadas con tincion de ziehl-neelsen
Colonias conflentes: positivo +++
Colonias separadas positivo ++
De 20 a 100 colonias positivo +
menos de 20 colonias: positivo
no se observan colonias: negativo
Atmosfera: aerobia
pH: 7 +/- 0.2
A qué tipo de MO va dirigido:
Organismos del género Mycobacterium, el crecimiento de bacterias gram positivas y
gram negativas se inhibe por la presencia de verde de malaquita.
Mycobacterium tuberculosis (crecimiento estimulado por la glricerina)
Mycobacterium kansasii, (para cultivo con 5% de NaCl) sin crecimiento
Mycobacterium scrofulaceum
Mycobacterium intracellulare
*Mycobacterium fortuitum (para cultivo con 5% de NaCl)
Todas las cepas sembradas presentaran colonias con coloración amarillenta que no
debe ser confundida con los lipidos del huevo
8. Chromagar candida
Composición del agar:
Componentes por cada litro de agua
Cromopeptona 10 g
Glucosa 20 g
Mezcla cromogena 2 g
Cloranfenicol 0.5 g
Agar 15 g
Características del agar:
pH: 6 +/- 0.3
Color sin ​inocular​: Incoloro a beige claro, transparente debido a que no
presenta colorantes
El cloranfenicol es un antibiotico que evita el crecimiento de contaminantes
bacterianos
Temperatura de almacenamiento: 2-8 C en un lugar oscuro
Condiciones para uso
Atmosfera: aerobia
Temperatura de cultivo: 20-48 horas, minimo 42 horas para ver el desarrollo
del color de los hongos
Temperatura de cultivo: 35 C +/- 2 C
A qué tipo de MO va dirigido:
Candida albicans ATCC 60193 Crecimiento de bueno a excelente; colonias
de color verde claro a mediano
Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento de bueno a excelente; colonias
de color verde claro a mediano
Candida krusei ATCC 34135 Crecimiento de bueno a excelente; colonias
grandes y planas, de color de rosado claro a rosa, con un borde blancuzco
Candida tropicalis ATCC 1369 Crecimiento de bueno a excelente; colonias
de azul grisáceo a azul verdoso o azul metálico, con o sin halos violetas en el
medio circundante
Candida tropicalis ATCC 9968 Crecimiento de bueno a excelente; colonias de
color gris azulado, con o sin halos de color violeta
Pseudomonas aeruginosa Inhibición de parcial a completa
Cryptococcus neoformans con un tiempo de incubacion inferior al normal
- VELAZQUEZ M. (2012). BIOLOGIA 1. MEXICO DF: ST EDITORIAL.
- DIAZ, A & VARGAS, B. (2018). PROCESA TECNICAS
BACTERIOLOGICAS BASICAS PARA EL DIAGNOSTICO CLINICO.
TIJUANA BC: SIN EDITORIAL.
- Facultad de ciencias naturales y ciencias de la salud. (1995).
MICROBIOLOGÍA GENERAL CULTIVOS DE BACTERIAS.
NOVIEMBRE 4, 2018, de UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA
PATAGONIA SAN JUAN BOSCO Sitio web:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/
02/04-CULTIVO-DE-BACTERIAS.pdf
- Becton Dickinson Company. (2014). BBL Nutrient Agar. NOVIEMBRE
2, 2018, de Becton Dickinson Compan Sitio web:
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22881
- BRITANIA LAB. (2015). NUTRITIVO AGAR. NOVIEMBRE 2, 2018, de
BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28446b
169d8.pdf
- PROBIOTEK. (2017). AGAR NUTRITIVO. NOVIEMBRE 2, 2018, de
PROBIOTEK S.A DE C.V Sitio web:
https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reacti
vos/agar-nutritivo/
- Becton Dickinson Company. (2013). BD Columbia Agar with 5% Sheep
Blood . NOVIEMBRE 2, 2018, de Becton Dickinson Company Sitio
web: ​http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8760
- BRITANIA LAB. (2015). SANGRE AGAR BASE . NOVIEMBRE 2,
2018, de BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2975a1
ab740.pdf
- BRITANIA LAB. (2015). MAC CONKEY AGAR. NOVIEMBRE 2, 2018,
de BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2ed674
cf661.pdf
- Becton Dickinson Company. (2014). BD MacConkey II Agar.
NOVIEMBRE 2, 2018, de Becton Dickinson Company Sitio web:
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8770
- BRITANIA LAB. (2015). CHOCOLATE AGAR SUPLEMENTADO .
NOVIEMBRE 3, 2018, de BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2ed5cc
d56cc.pdf
- Becton Dickinson Company. (2011). BD Mueller Hinton Chocolate Agar
. NOVIEMBRE 3, 2018, de Becton Dickinson Company Sitio web:
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8775
- BRITANIA LAB. (2015). MUELLER HINTON AGAR. NOVIEMBRE 3,
2018, de BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a284383
6ddd8.pdf
- Becton Dickinson Company.. (2013). BD Salmonella Shigella Agar .
NOVIEMBRE 3, 2018, de Becton Dickinson Company. Sitio web:
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8779
- BRITANIA LAB. (2015). SALMONELLA SHIGELLA AGAR.
NOVIEMBRE 3, 2018, de BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2ed766
9fc8e.pdf
- Becton Dickinson Company. (2017). BD Mueller Hinton II Agar .
NOVIEMBRE 3, 2018, de Becton Dickinson Company Sitio web:
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8774
- BRITANIA LAB. (2017). LOWENSTEIN JENSEN MEDIO.
NOVIEMBRE 4, 2018, de BRITANIA LAB Sitio web:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5af5d91a
cbdae.pdf
- Becton Dickinson Company. (2015). BBL Lowenstein-Jensen Medium.
NOVIEMBRE 3, 2018, de Becton Dickinson Company Sitio web:
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22832
- Becton DIckinson Company. (2014). BBLTM CHROMagarTM Candida
Medium . NOVIEMBRE 3, 2018, de Becton DIckinson Compan Sitio
web: ​http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8810