UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
2018
NIT 891080031-3

ELECTROFORESIS DE ÁCIDOS NUCLEOTICOS

*Cortes Miranda Deimer, Herrera Galarcio Merbin, Monterroza

Palomino Andrés

Universidad de Córdoba; Facultad de Ciencias Básicas.

*
(dejomi12@gmail.com)

RESUMEN
La electroforesis es una de las técnicas más utilizadas para analizar y caracterizar ácidos
nucleicos de distintas procedencias, ya que permiten separar moléculas cargadas en función
de su tamaño y forma. Así, moléculas de DNA de diferente tamaño van a emigrar de forma
distinta en una electroforesis en gel de agarosa. Además, si en dicha electroforesis se
aplican marcadores de peso molecular (fragmentos de DNA de tamaño conocido) se puede
calcular el tamaño aproximado del DNA en estudio.

Palabras claves: ácidos nucleótidos, electroforesis, marcadora molecular.

ABSTRACT

Electrophoresis is one of the most used techniques to analyze and characterize nucleic acids
of different origins, since they allow to separate charged molecules according to their size
and shape. Thus, DNA molecules of different sizes will migrate differently in an agarose
gel electrophoresis. In addition, if molecular weight markers (DNA fragments of known
size) are applied in said electrophoresis, the approximate size of the DNA under study can
be calculated.

Key words: nucleotide acids, electrophoresis, molecular marker.

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INTRODUCCIÓN que se basa la electroforesis de ácidos

nucleicos. Sometidos a un campo
El término electroforesis se usa para eléctrico, la carga neta negativa del ADN
describir la migración de una partícula
La electroforesis en gel es una técnica
cargada bajo la influencia de un campo
utilizada para separar fragmentos de ADN
eléctrico. Muchas moléculas importantes
(u otras macromoléculas, como ARN y
biológicamente (aminoácidos, péptidos,
proteínas) por su tamaño y carga. La
proteínas, nucleótidos, ácidos nucleicos)
electroforesis consiste en aplicar una
poseen grupos ionizables y pueden estar
corriente a través de un gel que contiene
cargadas, bien como cationes, o bien
las moléculas de interés. Con base en su
como aniones. Estas molecular se van a
tamaño y carga, las moléculas se
separar en función de su carga cuando se
desplazarán por el gel en diferentes
aplica un voltaje través de los electrodos
direcciones o a distintas velocidades, con
(Padilla, C., Diez, J., Martínez, E.,
lo que se separan unas de otras.
Bárcena, J., & García, C. 2011).
Como su nombre lo indica, en la
La idea de utilizar la técnica de
electroforesis en gel participa un gel: un
electroforesis a través de una matriz para
bloque de material similar a la gelatina.
analizar muestras de ADN corresponde a
Los geles para separar ADN suelen estar
Vin Thorne, un bioquímico del Instituto
hechos de un polisacárido llamado
de Virología de Glasgow, quien a
agarosa, que se consigue como hojuelas
mediados de los años 60 del pasado siglo
secas pulverizadas. Cuando la agarosa se
estaba interesado en caracterizar las
calienta en una solución amortiguadora
distintas formas de ADN que se obtenían
(agua mezclada con algunas sales) y deja
de partículas purificadas de
enfriar, se forma un gel sólido
polyomavirus. Su razonamiento era que
ligeramente blando. A nivel molecular, el
una combinación de fuerzas eléctricas y
gel es una matriz de moléculas de agarosa
de fricción permitiría el desplazamiento y
que se mantienen unidas por puentes de
separación en función del tamaño o
hidrógeno y que forman pequeños poros.
topología de diferentes moléculas de
ADN. Éste es exactamente el principio en
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Antes de agregar las muestras de ADN, el  Fuente de poder

gel debe colocarse en una cámara. Uno de  Transiluminador UV
 Termómetro
los extremos de la cámara se conecta a un
 Beaker (250 mL)
electrodo positivo y el otro extremo se  Plancha de calentamiento
conecta a un electrodo negativo. El  Pipetas 0.2-2 µL
 Pipetas 1-10 µL
cuerpo principal de la cámara, donde se
 Pipetas 20-200 µL
coloca el gel, se llena con solución  Pipetas 100-1000 µL
amortiguadora con sales que puede  Guantes
 Tapaboca
conducir la corriente. El extremo del gel
que tiene los pozos se coloca hacia el PROCEDIMIENTO
electrodo negativo. El extremo sin pozos
Preparación de gel de agarosa.
(hacia donde migrarán los fragmentos de
ADN) se coloca hacia el electrodo A B
positivo.
https://es.khanacademy.org/science/biolo
gy/biotech-dna-technology/dna-
sequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-
electrophoresis
C D
OBJETIVO

Caracterizar los ácidos nucleótidos

usando electroforesis en gel de agarosa.

MATERIALES Y
REACTIVOS E

 Agarosa
 Buffer TBE 10X
 Bromuro de etilo
 Balanza analítica
 Cinta de enmascarar
 Cámara de electroforesis
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A. Sellar con cinta de enmascarar los bordes dejar polimerizar la agarosa. G. Retirar las
abiertos de la bandeja de electroforesis. B. cintas que sellan la bandeja. H. Retirar con
Preparar el gel de agarosa al 0,8%: pesar 0,8 cuidados los peines. I. Mezclar 5 ul de
gr de agarosa. C. Agregar 3 ml de buffer ADN purificado con 3 ul de loading buffer y
TBX 10X. D. Completar hasta 60 ml de cargar en gel de agarosa al 0,8%. J. Colocar
agua destilada. E. Calentar en horno las muestras en cada pozo. K. Colocar la
microondas hasta que se disuelva la agarosa, bandeja del gel en la cubeta de electroforesis.
dejar enfriar a Tº de 45ºC aproximadamente y
añadir 0,4 ul de bromuro de etidio. L M
Precaución. El bromuro de etidio es
altamente cancerígeno. Debe usarse
guantes para manipularlo

F G

L. Cubrir la cubeta con buffer TBX 1X. M.

Aplicar el voltaje o empareje adecuado
durante el tiempo establecido.

H I

Observación en el transiluminador de luz

J K UV y toma de foto

RESULTADOS Y
ANÁLISIS

Al finalizar la técnica de electroforesis, el

F. Servir la solución de agarosa cuando gel de agarosa se llevó al transiluminador
este a 45ºc aproximadamente, eliminar
burbujas, colocar los peines adecuados y UV, donde se observó que las muestras
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migraron desde el pozo donde sembraron 80% de pureza del ADN extraído en las
hasta el extremo positivas del gel, anteriores prácticas. Esto no significa que
teniendo encueta el grado de pureza que la extracción de ADN no funcione, solo
presento cada muestras. me demuestra que no presenta buena
purificación de estas o también se puede
Tabla 1. Muestras de ADN utilizadas en el
proceso de electroforesis y resultados de decir que hubo mala manipulación, se
migración en el gel de agarosa
extrajo poca muestra con la pipeta o que
ELECTROFORESIS DE DIFERENTES
esta se perdió al momento de ponerlas en
MUESTRAS DE ADN
N° de pozos Muestras de Migración los pozos de gel de agarosa. Por parte los
en el gel de ADN
reactivos utilizados en este método, no
agarosa
Pozo 1 Marcador - permite que el ADN corra correctamente
Pozo 2 ADN Bacteriano + en el gel, dado que la molécula está
Pozo 3 AND Plasmidial + degrada y también presentan una
Pozo 4 AND planta - contaminación proteica. Lo que me
espinaca. Kit
casero impide separar las moléculas
en función de su carga, tamaño y forma
Pozo 5 ADN mosquito +
en el gel de agarosa.
Pozo 6 ADN sangre +
Pozo 7 ADN genómico + CONCLUSIÓN
planta. Kit
comercial La técnica de electroforesis de DNA en
gel de agarosa es muy práctica y sencilla,
Pozo 8 AND Plasmidial -
que permitió tener gran certeza para el
Pozo 9 ADN genómico +
planta. kit análisis debandas visibles en el
comercial transiluminador de luz UV, con ella
Pozo 10 ADN sangre + pudimos evidenciar el grado de pureza y
estados de conservación del ADN, la
mayoría de las muestras estuvo a la altura
La tabla 1 nos indica las muestras que de los resultados debido al buen manejo
migraron en el gel de agarosa; estas en los protocolos de extracción y en la
fueron la 2,3, 5,6 7,9 y 10. No migraron observación debandas se pudo notar que
las muestras 1,4 y 8 lo cual revelo un
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migraron la mayoría de las muestras La agarosa es un polisacárido altamente

(siete de ellas) y solo (tres de ellas no lo purificado derivado del agar tiene un gran
hicieron) (tabla 1). rango de separación, es muy frágil y las
manipulaciones pueden destruirla con
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
facilidad. Los geles de agarosa contienen
3. ¿Teniendo en cuenta la calidad del grandes poros por lo que se pueden
ADN extraído para que tipo de separar fragmentos de ADN que van de
marcador será útil? 200 a 50.000 pares de bases, permitiendo
una electroforesis rápida, pero con una
Al obtener como resultado bandas
resolución limitada por cuanto las bandas
coloreadas en siete muestras distintas nos
que se forman en los geles tienen
indica que hay presencia de ADN al
tendencia a ser difusas y a esparcirse.
momento de realizar la electroforesis, esto
(Jorge, 2015).
nos indica que el ADN extraído es de
buena calidad y es útil dentro de los Los geles de poliacrilamida presentan
marcadores postranscripción-traducción. estabilidad mecánica permiten separar
Estos marcadores son aquellos que están fragmentos de ADN más pequeños es
determinados por análisis indirecto del mucho más pequeña, menos de 500 pares
DNA debido a la poca cantidad de tejido de bases, éstos son mejores en la
que se requiere para la elaboración del separación de proteínas, ya que la
ensayo, su relativamente rápida ejecución, resolución es mejor que la de los geles de
el bajo costo del ensayo y la moderada agarosa por un tiempo prolongado. Una
facilidad para obtener y analizar de sus grandes ventajas es que a través de
resultados, cuentan entre las principales la manipulación de la concentración de
ventajas de este polímeros se puede modificar del tamaño
de los poros que constituyen al gel.
marcador.
También se puede utilizar para separar
4. Describa las diferencias entre un gel ADN que difiere únicamente por un solo
de agarosa y un gel de poliacrilamida. par de bases, pero la agarosa no es tóxica
y es segura de manejar, el gel de
poliacrilamida es tóxico, por lo que se
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debe tener cuidado al manipularlo (Pérez,  Jorge, G. (24 de junio de 2015).

2016) Electroforesis de proteínas y ácidos
nucleicos. Obtenido de
5. ¿Qué diferencias funcionales existen
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/in
entre los principios de electroforesis
icio.htm
verticales y horizontales de ácidos
 Padilla, C., Diez, J., Martínez, E.,
nucleicos?
Bárcena, J., & García, C. (2011).
La diferencia del soporte en posición Electroforesis de ácidos nucleicos en
horizontal, es más utilizado para separar geles de agarosa. Aislamiento y
moléculas de ADN con el gel de agarosa, caracterización electroforética de
se lleva a cabo de modo que el tampón DNA plasmídico. Departamento de
cubra totalmente el gel. Con esta Bioquímica y Biología Molecular, 1–
disposición se disipa mejor el calor 8.
generado por el paso de la corriente y se  Pérez, C. (22 de Mayo de 2016).
consigue un campo eléctrico muy eficaz. Electroforesis en gel. Obtenido de
Para la electroforesis vertical se utiliza https://es.khanacademy.org/science/bi
para separar proteínas geles de ology/biotech-dna-
poliacrilamida, ya que es más resistente  Technology/dna-sequencing-pcr-
físicamente sin posibilidad de deslizarse. electrophoresis/a/gel-electrophoresis
(Ramírez, 2014)  Ramírez, P. C. (2014). Técnica de

BIBLIOGRAFIA Electroforesis en la Biología

Molecular. Molecular Autism, 21-25.
 Fierro, F. F. (2014). Electroforesis de
ADN. Herramientas Moleculares
Aplicadas En Ecología: Aspectos
Teóricos y Prácticos, 27–52.
 https://es.khanacademy.org/science/bi
ology/biotech-dna-technology/dna-
sequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-
electrophoresis
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