QUÍMICA ANALÍTICA INSTRUMENTAL.

MÉTODOS ÓPTICOS DE ANÁLISIS.

TP 5: Colorimetría visual y estudio del Spectronic 20.

Primera parte: Colorimetría visual

La colorimetría visual consiste en el uso de la vista para comparar las intensidades de dos rayos de luz.
Las técnicas experimentales se basan en el siguiente principio: si dos soluciones de una misma sustancia
coloreada son iluminadas con la misma intensidad y las condiciones de medición son tales que las intensidades
de los rayos emergentes también son iguales, es posible determinar la concentración de una de ellas (muestra
desconocida) conociendo la concentración de otra (patrón o referencia).

Si se cumple la ley de Lambert Beer:

donde: P0 es la intensidad de luz incidente, Pt la intensidad de luz transmitida, a la absortividad, b el camino

Bajo las condiciones arriba mencionadas y aplicando la ley de Beer a la solución de referencia y a la
muestra desconocida, se llega a:

donde r corresponde a la referencia o patrón y x corresponde a la muestra desconocida.

En las técnicas más simples, br y bx se hacen iguales y el análisis consiste en preparar una solución cuya
concentración sea conocida e igual a la de la muestra. En otras técnicas se varía el camino óptico y se mide br/bx
(por ejemplo en el colorímetro de Duboscq, Fig.1) y así se determina Cx.

Este tipo de procedimientos por comparación se hacen necesarios, dada la incapacidad del ojo humano de
medir intensidad de luz o realizar una estimación exacta de diferencias de intensidades. Los resultados serán
satisfactorios si se usa el ojo sólo para detectar diferencias entre dos intensidades, sin prestar atención al valor
absoluto de cada una o de la diferencia entre ambas. La máxima precisión que puede alcanzarse en estas
técnicas es del 6%, ya que en condiciones óptimas, el ojo verá como iguales dos intensidades que difieren en
realidad en un 6%. Si tomamos este valor como la máxima diferencia que se puede observar, entonces para un
número grande de pares de soluciones que aparentan ser iguales al ojo, el error será  3%. De acuerdo a la
relación logarítmica entre el valor de P y la concentración, el error promedio en la determinación de Cx será del
1,3%. Este valor representa la máxima precisión posible en el método de colorimetría visual. Sin embargo,
existen otros factores que, combinados, aumentan el error hasta un 5%, entre ellos está el error instrumental, el
hecho que la sensibilidad del ojo depende del color transmitido, la fatiga del operador, etc.

Las técnicas en las que el camino óptico es el mismo (br = bx) y por lo tanto las intensidades son las
mismas, resulta Cr = Cx es válido aunque no se cumpla la ley de Beer. En estos casos es suficiente que la
absorbancia sea una función monótona de la concentración, es decir que dos soluciones de distinta
concentración tengan distinta absorbancia. Sin embargo, es siempre deseable poder demostrar
experimentalmente que el producto b x C sea una constante bajo cualquier tipo de condiciones (o sea igual
número de partículas).

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Figura 1. (a) Fotografía de un colorímetro Duboscq. (b) Tubos cilíndricos de base plana asociados a un sistema de émbolos que
permite aumentar o disminuir el camino óptico. (c) Dos fotografías del campo visual (arriba, situación inicial, con los caminos
ópticos iguales; debajo, situación final, luego del ajuste relativo de caminos ópticos). (d) Lectura inicial (arriba) y final (abajo)
de las escalas que marcan el desplazamiento de los tubos.

Comparación con tubos de Nessler

La técnica más simple consiste en la preparación de una serie de soluciones de distintas concentraciones
de la sustancia a determinar. Estas soluciones patrones se transfieren, junto con la solución problema, a una
serie de tubos de vidrio transparente (o las mismas pueden ser preparadas directamente en ellos) y se llevan a
volumen hasta la misma altura. Usualmente los tubos de Nessler tienen una base plana que evita reflexiones y
están calibrados de manera tal que poseen un volumen definido (los más comunes son de 50 y 100 mI).

Figura 2. Comparación con tubos de Nessler, observación.

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 Los tubos se colocan sobre un soporte que posee agujeros en la base a través de los cuales pasan los
rayos de luz reflejados desde una superficie iluminada. Los tubos se observan desde arriba y comparando las
intensidades entre los distintos tubos con la de la muestra problema se decide con cual coincide. Generalmente
la muestra tiene una intensidad intermedia entre dos tubos patrones, en este caso se preparan nuevas
soluciones intermedias de los patrones hasta lograr que el color de la muestra problema coincida con la del
patrón. Y cuando queda entre dos que no difieren mucho el valor de la concentración se saca por interpolación.

Determinación colorimétrica de hierro o tiocianato

El hierro férrico reacciona con el tiocianato para dar un compuesto soluble de color rojo intenso. La
fórmula del compuesto depende de las concentraciones relativas de los reactivos. Se debe usar gran exceso de
tiocianato para aumentar la intensidad de coloración. La reacción debe realizarse en medio clorhídrico o nítrico
para evitar la hidrólisis del férrico (en caso de usarse ácido nítrico su concentración no debe ser superior a 1 M
pues da coloración con el tiocianato). Previamente debe oxidarse el hierro con solución diluida de permanganato
de potasio o agua de bromo para asegurarse que todo el hierro se encuentra como Fe 3+.

Procedimiento general

a) Preparación de los patrones: preparar una serie de estándares que contengan desde 0,02 mg a 0,4 mg
de SCN/Fe pipeteando volúmenes de la solución estándar de KSCN o Fe en los matraces de 200 mI y diluir con
agua destilada.
b) Desarrollo del color: en una serie de tubos de Nessler, preparar la escala de patrones y desarrollar el
color agregando FeNO3 en caso de analizar SCN- o agregar KSCN en caso de estar analizando Fe+3.
c) Medida de la concentración de la muestra problema: comparar el tubo que contiene la muestra
problema con los patrones y una vez establecido cual es el patrón que coincide con la muestra calcular el
contenido de la sustancia analizada en la muestra original.

Aplicaciones

En agua natural o de efluentes para concentraciones de Fe +3/SCN- entre 0,1 a 2 mg/l. Para mayores
concentraciones se debe diluir la muestra apropiadamente.

Las muestras sólidas que pueden ser analizadas por esta técnica pueden ser: alúmina (materia prima para
la fabricación de aluminio), aluminio, Zn en bruto y/o refinado, pigmentos, etc. Siempre debe disolverse la
muestra (pesando una cantidad según el tenor de Fe en la muestra) en un medio ácido fuerte (ej: HCl
concentrado), seguido de alguna etapa de filtración o de separación de los elementos insolubles.

Interferencias

 Agentes reductores del férrico a ferroso, que obstaculizan la formación del complejo con el SCN-
presente, son destruidos agregando unas pocas gotas de peróxido de hidrógeno. Debe evitarse el
exceso del mismo para prevenir su reacción con el SCN-.
 Si la muestra contiene CN- susceptible a coloración y se desea preservarlo para una eventual
determinación a pH alto, el sulfuro podría interferir por conversión del cianuro a tiocianato.
Para preservar el tiocianato y el cianuro, se precipita el sulfuro agregando sales de plomo, luego
se filtra y elimina el precipitado.
 Si tiocianato es biodegradable, se deben preservar las muestras a pH menor de 2, por agregado
de un ácido mineral y refrigeración.
 Los efluentes industriales pueden estar ligeramente coloreados o contener algunas sustancias
orgánicas interferentes. Para eliminarlas se debe realizar un pretratamiento.
 Si no se eliminan las interferencias en los efluentes industriales, considerar la opción de una
técnica de extracción con solvente, con un análisis colorimétrico o de absorción atómica sobre los
extractos.
 Presencia de oxidantes que destruyen el reactivo, como el persulfato y el periodato.
 Presencia de aniones que pueden complejar al Fe+3, como fluoruros, fosfatos y oxalato.

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Determinación de hierro empleando tubos de Nessler

Procedimiento

El objeto del trabajo práctico es determinar el contenido de Fe presente en una muestra desconocida
mediante el uso de los tubos de Nessler, para la comparación del color desarrollado por la muestra y por
soluciones patrones con el reactivo tiocianato de potasio.

Técnica

Se colocan en un tubo de Nessler, una alícuota de 10,00 ml de muestra, 5,0 ml de HCl 1:1, gotas de
KMnO4 diluido hasta leve color rosado, 5,0 ml de KSCN al 10 % y se lleva a volumen con agua destilada (100,0
ml). Respetar el orden de agregado de las soluciones.

En una serie de tubos iguales al anterior, se prepara la escala de patrones mediante diluciones apropiadas
de la solución patrón y efectuándose el mismo procedimiento que con la muestra.

Entonces, se compara observando los tubos desde la parte superior, cuidando que estén igualmente
iluminados desde abajo. Una vez establecido cuál es el patrón que coincide con la muestra se calcula el
contenido de Fe en la muestra original.

Bibliografía

- Willard, H. H., Merritt L. L., Dean, J. A., y Settle, F. A., Instrumental Methods of Analysis. Wadsworth Publishing Co., 1988.

- Vogel, Arthur I., Química analítica cuantitativa. Kapelusz, 1976.

- Mellon, M. G., Analytical Absorption spectroscopy. John Wiley, 1950.

Segunda parte: Estudio del Spectronic 20

Descripción del Spectronic 20

En las figuras 3 y 4 se muestran el Spectronic 20 y un esquema óptico del mismo, respectivamente.

Figura 3. Spectronic 20: 1-compartimento de la muestra, 2-lámpara testigo, 3-selector de longitudes de onda, 4-control de
transmitancia, 5-encendido/control de cero y 6-selector de filtro.
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 Figura 4. Esquema óptico del Spectronic 20.

La luz blanca que emana de la lámpara de tungsteno del Spectronic 20 pasa a través de una ranura de
entrada y es dispersada por una red de difracción. Del rayo de luz dispersado, una banda muy estrecha de
longitud de onda pasa a través de una segunda ranura hacia la solución problema. Parte de esta luz no es
absorbida por la solución, pasa a través de la misma y llega al fototubo del instrumento, que permite medir
electrónicamente la intensidad de la luz transmitida.
La red de difracción es una copia de una lámina plana de vidrio, rayada muy finamente en forma paralela,
con 600 rayas por milímetro, y cuya superficie está aluminizada para hacerla reflectora. La luz blanca que incide
en la red es dispersada en un haz de rayos horizontales con las longitudes de onda cortas (violeta y ultravioleta
en un extremo y las largas (rojo e infrarrojo) en el otro.

El espectro de luz incide en una pantalla negro mate que tiene una ranura. Solamente aquella porción del
espectro que cae sobre la rendija o ranura, pasará a través de la muestra, siendo posible proyectar cualquier
parte del espectro sobre la ranura simplemente por rotación de la red de difracción. La red se gira por medio de
una perilla ubicada en la parte superior del instrumento. Solidario con esta perilla existe un dial calibrado en
longitudes de onda, que permite elegir la longitud de onda adecuada. Las longitudes de onda están dadas en
nanómetros.

Por una ranura del instrumento pasa un haz de luz con una longitud de onda dominante y un ancho de
banda de 20 nm (no se aísla un haz de luz con una única longitud de onda o sea un láser, sino un rango). A
causa de la dispersión lineal de la red, este ancho de banda de 20 nm es constante en toda la región de
longitudes de onda.

El espectrofotómetro se enciende girando en el sentido de las agujas del reloj una perilla que está a la
izquierda del frente del aparato. La misma perilla se usa para ajustar la amplificación del fototubo de tal manera
que la aguja indicadora marque "0" en la escala de transmitancia, porque no incide luz en el fototubo (cuando
no hay ninguna cubeta colocada en el portacubetas). A esto se llama compensación de corriente oscura.

La perilla de la derecha regula la cantidad de luz que pasa a través de la segunda ranura hacia el fototubo.
La necesidad de este control de luz reside en el hecho de que la lámpara de W no emite luz de iguales
intensidades a diferentes longitudes de onda y que el fototubo no tiene la misma respuesta para las distintas
longitudes de onda. Además la solución blanco (el medio o solvente en el cual se disuelve la sustancia problema)
puede absorber luz de ciertas longitudes de onda. En rigor para medir la absorbancia debida solamente a
especies particulares en solución, tales efectos que afectan la lectura de transmitancia, deben ser compensados.
Por consiguiente, después que el espectrofotómetro ha sido llevado a cero (por medio de la perilla de control de
amplificación) se coloca una solución blanco en el paso de la luz y se gira la perilla de control de luz hasta que
la lectura en el dial alcance el 100% de transmitancia y se tendrá así la compensación deseada. Si ahora se coloca
la cubeta con la solución problema en el paso de luz, cualquier cambio en la lectura de % T, se debe a la

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absorción de la luz por una especie particular en la muestra y la lectura de la % T es una medida de la
concentración de las especies presentes, que se llama transmisión interna.

Por supuesto cuando se hace un cambio de longitudes de onda, aunque sea pequeño, debe ajustarse el
0% y el 100%, puesto que la compensación necesaria varía con la longitud de onda. La aguja del instrumento
debería estar en 0% de transmitancia toda vez que la cubeta sea sacada del portacubetas, porque al retirarla se
acciona un obturador que se interpone en el rayo de luz e impide que éste alcance el fototubo. Debe verificarse
que el instrumento marque 0% T siempre que el portacubetas esté vacío, caso contrario debe ajustarse antes de
la medida.

El fototubo es una célula fotoemisiva con superficie de cesio-antimonio (tipo 8-4). La respuesta relativa
del fototubo a un rayo de luz monocromática de intensidad constante es:

Longitud de onda Respuesta relativa Respuesta relativa Longitud de onda Respuesta relativa Respuesta relativa
(nm) SP 20 (%) Turner SP 830 (%) (nm) SP 20 (%) Turner SP 830 (%)
350 90 21,08 512 61 0,31
375 98 82,20 525 53 0,52
400 100 100,00 550 37 1,19
425 98 43,55 575 21 1,65
450 91 9,13 600 10 1,48
475 81 1,21 612 7 1,40
500 68 0,31 625 5 1,43

Este fototubo es mucho más sensible a la luz de 400 nm que a la luz de 600 nm. Esto significa que el
fototubo requiere mayor flujo de luz monocromática de 600 nm que de 400 nm para que el instrumento indique
la misma transmitancia. Aunque el instrumento está protegido contra excesos de luz, es preferible girar la
perilla de control de luz en el sentido contrario a las agujas del reloj antes de cambiar la longitud de onda.
El manipuleo de las cubetas es extremadamente importante. Cualquier variación en la cubeta (tal como
cambio en el diámetro o en la curvatura del vidrio, arrugas, rayas o imperfecciones) puede causar resultados
erróneos. Por lo tanto, es esencial durante la medida seguir las siguientes instrucciones:

1. No tocar la parte inferior de la cubeta (porción a través de la cual pasa la luz).

2. Enjuagar siempre la cubeta con algunas porciones de la solución a medir antes de hacer una medición.

3. Eliminar cualquier gota de líquido o suciedad en la mitad inferior de la cubeta con un papel especial para
superficies ópticas, antes de colocada en el instrumento. Nunca limpiarla con pañuelos comunes o tela. Observar
que no queden burbujas de aire en el interior, ni pelusas en el exterior.

4. Cuando se inserta la cubeta en el portacubetas, para evitar cualquier posible rayadura en el camino óptico se
deben seguir las siguientes reglas:

a. Insertar la cubeta con la línea índice mirando hacia el frente del instrumento
b. Después que la cubeta esté colocada, alinearla haciendo coincidir la línea blanca con la marca del
portacubetas
c. Luego de la medida, sacar la cubeta de manera inversa.
d. Cuando se usan dos cubetas simultáneamente, una de ellas se usa siempre para la solución blanco
(cubeta de referencia) y la otra para las soluciones problema (cubeta para la muestra). Marcar las
cubetas y no intercambiarlas durante el resto del trabajo.

Estas reglas deben ser observadas en todos los trabajos experimentales con el Spectronic 20.

Objetivos

El objeto del trabajo práctico es permitir que el alumno se familiarice con el espectrofotómetro, su manejo
y funcionamiento.

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Procedimiento. Operación y respuesta del espectrofotómetro

Conectar y encender el equipo, girar la perilla de control de amplificación (frontal izquierda) hasta que la
aguja alcance el 0% de T y dejar calentar el instrumento durante 20 minutos; luego llevarlo a 0 si fuera
necesario.

Siempre que se ajuste el instrumento cerrar la tapa del portacubetas, para evitar cualquier posible entrada
de luz.

Colocar aproximadamente 3 ml de agua destilada en una cubeta limpia (recordar las reglas sobre el
manejo de las cubetas). Girar en sentido contrario al de las agujas del reloj la perilla de control de luz (frontal
derecha) a una posición tal que disminuya la cantidad de luz que pasa al fototubo. Insertar la cubeta llena de
agua en el portacubetas y alinear la línea índice exactamente. Colocar el dial de longitudes de onda en 510 nm.
Rotar la perilla de control de luz hasta que la aguja registre cerca de 90% sobre la escala.

Por rotación del dial de longitudes de onda, recorrer el espectro del visible y notar como varía la respuesta
con el cambio de longitudes de onda y registrar aquella longitud de onda a la cual el instrumento tiene la mayor
respuesta (será cercana a 510 nm). Ajustar el control de luz hasta el 100% en esta longitud de onda. Realizar
entonces la curva espectral para la respuesta relativa del espectro fotómetro leyendo %T en la escala. Tomar las
lecturas de %T en las siguientes longitudes de onda: 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 512, 525, 550, 575,
600, 612 y 625 nm.

El espectro visible

Colocar en el portacubetas la cubeta especial para observar el color de la luz que pasa (Fig. 5). Rotar la
cubeta hasta que el camino óptico incida sobre la pendiente de la tiza. Observar y registrar el color del rayo cada
50 nm desde 650 nm hasta 350 nm. Puede ser necesario girar la perilla de control de luz para aumentar o
disminuir la intensidad de la luz, sin que la aguja se vaya de escala.

Ajustar la longitud de onda a 600 nm. Notar que la variación de color a lo largo de la banda de luz. ¿Qué
rango de longitudes de onda comprende la banda de luz?

Ajustar la longitud de onda a 550 nm. Rotar la perilla de control de luz y observar el cambio en la
intensidad de la luz. La cantidad de luz que pasa por la muestra es regulada por una pieza metálica rectangular
(móvil) en la cual se ha practicado una abertura angosta en forma de V. Notar la variación en la intensidad de la
luz a lo largo de la banda, el extremo más lejano de la banda tiene la mayor intensidad.

Figura 5. Cubeta especial para observar el espectro visible.

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Tratamiento de los resultados

Graficar la respuesta relativa del instrumento vs. la longitud de onda, utilizando los datos obtenidos. En el
mismo gráfico trazar una curva representando la respuesta relativa del fototubo en función de la longitud de
onda, utilizando los datos suministrados (ver Fig. 6).

Colocar en el tope del gráfico los colores observados para las distintas longitudes de onda del espectro
visible.

Figura 6. Respuesta relativa del instrumento (círculos azules) y del fototubo del SP20 (cuadrados rojos)
en función de la longitud de onda.

Se observará que las dos curvas trazadas no coinciden. Mientras que la respuesta relativa del fototubo es
mayor hacia la longitud de 400 nm, la respuesta relativa del instrumento a esa longitud de onda es baja. El
espectrofotómetro registra una respuesta relativa mucho mayor a 525 nm que la que podría esperarse de una
consideración de la respuesta del fototubo sólo. La diferencia proviene en su mayor parte de la fuente de luz. La
fotocélula responde altamente en los 400 nm pero la fuente de luz es tan débil para emitir luz de 400 nm, que
la respuesta neta del instrumento a esa longitud de onda es pobre.

De las dos curvas trazadas, calcular la intensidad relativa de la emisión de la lámpara del
espectrofotómetro (más un pequeño factor atribuido a la parte óptica) en el rango del visible del espectro de la
siguiente manera: para cada longitud de onda estudiada, dividir la respuesta relativa total por la respuesta
relativa del fototubo. Esto da una serie de números que indican esencialmente la intensidad relativa de la
lámpara a varias longitudes de onda. El mayor de los números es n. Para convertir estos números relativos a una
escala donde el máximo sea 100, multiplicar cada número por el factor 100/n. Así:

Intensidad relativa de la lámpara (IRL) = Respuesta relativa del instrumento

El valor exacto obtenido para una longitud de onda determinada no es importante; lo importante es saber
cómo varía este valor al pasar de una longitud de onda a otra. Finalmente, con los resultados obtenidos trazar
una curva en la misma gráfica anterior representando IRL en función de la longitud de onda (Fig. 7).

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 Figura 7. Respuesta relativa del instrumento (círculos azules), del fototubo del SP20 (cuadrados rojos)
e intensidad relativa de la lámpara (IRL, triángulos verdes) en función de la longitud de onda.

Bibliografía:

- Reilly, C. N., Sawyer, D. T., Experiments for Instrumental Methods, McGraw-Hill, 1961.
- Ewing, G. W., Instrumental Methods for Chemical Analysis, McGraw-Hill, 1975.
- Willard, H. H., Merritt L. L., Dean, J. A., y Settle, F. A., Instrumental Methods of Analysis. Wadsworth Publishing Co., 1988.