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    HONGOS MARÍA BELÉN HUERTAS CHACÓN

    HONGOS

    TINCIÓN AZUL ALGODÓN O AZUL DE LACTOFENOL


     Colocar el material necesario en la campana de seguridad tipo
    2A.
     Seleccionar las colonias para realizar las improntas.
     Cortar segmentos de cinta adhesiva transparente
    aproximadamente de 1 cm2.
     Pegar los segmentos de cinta en un asa.
     Sobre un portaobjeto limpio y seco depositaremos 1 gota de
    azul de lactofenol.
     Con cuidado pasaremos el extremo adhesivo del celo por el
    borde superior de la colonia (pasar por el exterior de la
    colonia).
     Colocar la cinta sobre la gota de azul de algodón.
     Añadiremos una gota de azul sobre el celo.
     Poner sobre la preparación con un cubreobjetos.
     Observaremos al microscopio 40x.

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    TINCIÓN HIDRÓXIDO DE POTASIO (KOH) PARA HONGOS


     Se deposita el material a examinar en un porta.
     se añade una gota de la solución de KOH,
     se mezclan bien
     y se coloca el cubreobjetos.
     Tras un período de tiempo para permitir la clarificación
    de la muestra por el KOH, la preparación se examina a
    x100, x400 ó x1000.

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    TINCIÓN BLANCO DE CALCOFLUOR


     Colocar la muestra en un porta.
     Añadir una gota de calcoflúor.
     Añadir una gota de KOH al 20%.
     Cubrir con un cubre.
     Calentar suavemente el porta.
     Observar al microscopio de fluorescencia a 420 nm a bajo
    aumento (10X y 40X).

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    LAMINOCULTIVO
     Colocamos un portaobjetos limpio y seco en el interior de una
    placa de Petri sin medio de cultivo.
     Con el bisturí cortamos un cuadrado de agar saboureaud.
     Lo colocamos en el portaobjetos.
     Con el asa tomamos una muestra del hongo que vamos a
    estudiar.
     Colocamos el hongo en los bordes del cuadrado de agar que
    hemos colocado sobre el portaobjetos.
     Colocamos el cubreobjetos sobre el cuadrado de agar
    saboureaud inoculado.

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    HONGOS

    FUNGIGRAMA
     Preparar una suspensión según patrón 4 Mac Farland.
     Abrir una ampolla Api Medium de 2 ml
     Impregnar un hisopo estéril en tween 20
     Pasar el hisopo por los bordes del hongo
     Descargar el hisopo en la ampolla Api Medium
     Dejar reposar la suspensión entre 5 y 10 minutos.
     Abrir una nueva ampolla Api Medium de 2 ml
     Preparar en esta nueva ampolla una suspensión según patrón
    de turbidez entre 0.5 – 1 Mac Farland.
     Coger una pipeta Pasteur estéril
     Aspirar 1 ml del sobrenadante de la suspensión 4 MF
     Añadir a la ampolla poco a poco unas gotas de esta
    suspensión hasta logar la turbidez deseada (05 – 1 MF)
     Inocular 3 placas de RPMI en masiva
     Sacar del congelador los E-test de hongos/levaduras
     Colocar 2 tiras de E-test en cada placa.
     Sellar las placas con Parafilm®
     Incubar a 30ºC
     Leer a las 48 horas.

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    TEST DE FILAMENTACIÓN
     En un tubo de hemólisis añadimos 0.5 ml de suero.
     Con un asa estéril tomamos una colonia sospechosa de C.
    albicans.
     Incubamos durante 3 horas en aerobiosis a 37ºC.
     Depositamos una gota de la suspensión en el portaobjetos.
     Cubrimos con cubreobjetos.
     Observamos al microscopio.

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