Hernández Valiente, Rodrigo Andrés.

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Guía para discusión N°3: Cinética Enzimática
1. Defina Enzima, Holoenzima, Metaloenzima, Coenzima,
cofactor, sustrato, cosustrato y sitio activo.
Enzima:
Son catalizadores proteicos, formadas por largas cadenas de aminoácidos
Holoenzima:
Se refiere a la enzima activa con su componente no proteico.
Metaloenzima:
Es una enzima que contiene como parte esencial de su estructura un átomo de
metal.
Coenzimas:
Son pequeñas moléculas que sirven como transbordadores reciclables que
transportan sustratos de un punto a otro dentro de la célula
Cofactor:
Son sustancias de bajo peso molecular que pueden asociarse de manera directa
con la enzima.
Sustrato:
Se une al sitio activo de la enzima, y se forma un complejo enzima-sustrato, el
sustrato por acción de la enzima es transformado en producto y es liberado del
sitio activo, quedando libre para recibir otro sustrato.
Cosustratos:
Se disocian de la enzima en un estado alterado. Si la coenzima está asociada
permanentemente con la enzima y vuelve a su forma original, se denomina grupo
prostético
Sitio activo contiene cadenas laterales de aminoácidos que participan en la unión
del sustrato y la catálisis
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2. Cuáles la naturaleza química de las enzimas.

Casi todas las enzimas son proteínas, las excepciones notables son los RNA
ribosomales y un puñado de moléculas de RNA con actividad de endonucleasa
conocidas en conjunto como riboenzimas.
Las enzimas son proteínas globulares, cuya estructura tridimensional presenta una
zona llamada sitio activo, donde se unen a su sustrato:
El sitio activo de cada enzima tiene forma y distribución de cargas eléctricas
distintas, que se complementan con las del sustrato, esto le da la especificidad al
complejo enzima-sustrato: Algunas enzimas son proteínas simples formadas
exclusivamente de aminoácidos y otras proteínas conjugadas. Su actividad
depende, además de su estructura proteica, de otras estructuras no proteicas
denominadas cofactores. El complejo proteína-cofactor se llama holoenzima;
cuando el cofactor se separa, la proteína restante es inactiva y se denomina
Apoenzima.
Composición química de los enzimas:
Cofactor: Grupo que activa a la enzima que no es proteico, como iones
inorgánicos, hierro, magneios, manganeso y zinc
Coenzima: Iones metálicos, equivalentes al grupo prostético. Son portadores
transitorios de átomos o grupos funcionales
Grupo Prostético: Cuando la coenzima forma enlaces covalentes o se une
fuertemente con la enzima proteica
Halo enzima: Cuando la enzima catalítica se encuentra junto con la coenzima
Apoproteína o Apoenzima: La parte proteica de la halo enzima

3. Mencionar la clasificación Internacional de las Enzimas.

Oxidoreductasas:
Catalizan oxidaciones y reducciones.
Transferasas:
Catalizan la transferencia de porciones, como grupos glucosilo, metilo o fosforilo
Hidrolasas:

Catalizan reacciones de hidrólisis.

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Liasas:
Catalizan la división de C-C,C-O,C-N y otros enlaces covalentes mediante la
eliminación de átomo dejando dobles enlaces.
Isomerasas:
Catalizan cambios geométricos o estructurales dentro de una molécula.
Ligasas:
Catalizan la unión de dos moléculas en reacciones acopladas hidrolisis de ATP.

4. Relacionar las clases de enzimas con las coenzimas

características de ellas.

 Oxidorreductasas:
Catalizan reacciones de oxido-reducción, las que implican la ganancia (o
reducción) o pérdida de electrones (u oxidación). Las más importantes son las
deshidrogenasas y las oxidasas, estas enzimas utilizan, según sea el caso NAD +
o NADP+ como coenzima. Las coenzimas NAD+ y NADP+ contienen
nicotinamida: dependiendo del requerimiento de coenzima, la reacción que
catalizan se resume de la siguiente manera:
 Sustrato reducido + NAD+ sustrato oxidado + NADH + H+
 Sustrato reducido + NADPH+ sustrato oxidado + NADPH + H+

 Transferasas:
Se encargan de transferir grupos de átomos de un sustrato a otro. Estos
grupos son: Aminos, carboxilos, carbonilos, metilo, acilo, glicosilo (favorecen la
unión entre glúcidos) para la síntesis de Oligosacáridos, fosforilo.
Las coenzimas utilizadas son el tetrahidrofolato (FH4) la coenzima A (CoA)
para la transferencia de grupos acilo (-Co-CH3) y el fosfato de piridoxal (PPal).
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 Hidrolasas:

Rompen enlaces por adición de agua. Actúan sobre los enlaces de:
• Carbono- Oxigeno.
• Carbono-Nitrogeno.
• Carbono- Azufre.
• Oxígeno-Fósforo.
Siempre agregan una molécula de agua (H2O) al enlace indicado.

 Liasas.:
Se dedican a romper enlaces, por un proceso que no es el agregado de agua.

 Isomerasas:
Los isómeros son compuestos químicos que poseen la misma fórmula molecular,
es decir, la misma cantidad de átomos asociados entre sí, pero distribuidos en el
espacio de manera diferente. Estas enzimas inter convierten isómeros de
cualquier tipo.
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 Ligasas:
Ligan átomos de: Carbono (C), oxigeno (O), nitrógeno(N) y azufre (S) u otros, y
forman diferentes enlaces, unen moléculas utilizando la energía química que
provee el ATP (adenosintrifosfato) que se suele transformar en ADP (adenosin di
fosfato + Ácido fosfórico (Pi)).
Cofactor: Las Ligasas requieren ATP, que aporta la energía necesaria para la
formación del enlace.

5. Analizar la participación de las coenzimas en el proceso de las

reacciones enzimáticas.
Las coenzimas funcionan como reactivos de transferencia de grupos. Que
transportan muchos sustratos desde el lugar donde se generan hasta el
punto donde se utilizan. Las reacciones de transferencia de un grupo
funcional se dan desde una molécula donadora hasta una molécula
aceptora, por lo general involucra una coenzima, ya sea como aceptor
último o como acarreador intermedio del grupo. La asociación con la
coenzima también estabiliza a los sustratos, como átomos de hidrogeno o
iones hidruro que son inestables en el medio acuso de la célula.
Algunos grupos químicos que son transportados por las coenzimas son los
grupos metilos (folatos), grupos acilos (coenzima A) y Oligosacáridos
(dilicol).

6. Presentar ejemplos de reacciones entre sustratos y enzimas

específicas.
Las enzimas digestivas son aquellas que permiten la absorción de los nutrientes
presentes en los alimentos por medio de la ruptura de los polímeros presentes en
los alimentos. Las enzimas digestivas permiten la asimilación de los nutrientes y
por lo tanto son fundamentales para el proceso digestivo en su totalidad.
 Lipasas:
Son las que digieren las grasas descomponiéndolas en ácidos grasos.
 Proteasas:
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Rompen los enlaces péptidos de las proteínas.
 Amilasas:
Degradan los almidones y los azúcares complejos de la dieta.
 Ptialina:
Es una enzima presente en la saliva que actúa en medio básico hasta que se
inactiva cuando el alimento ha llegado al estómago.

7. Explicar la cinética enzimática vs. Termodinámica.

Cinética enzimática estudia la velocidad en que son catalizadas las
reacciones químicas por las enzimas. El estudio de la cinética de una
enzima permite explicar las detalles de su mecanismo catalítico, su papel
en el metabolismo, como es controlada su actividad en la célula y como
puede ser inhibida su actividad por fármacos o venenos o potenciada por
otro tipo de moléculas.
La cinética enzimática aplicada facilita la identificación, caracterización y
elucidación del modo de acción de fármacos que inhiben de manera
selectiva enzimas específicas, también desempeña un papel fundamental
en el análisis y la optimización del metabolismo de fármacos, un
determinante clave de la eficacia de los fármacos.

8. Explicar la unión Enzima-Sustrato.

En una reacción catalizada por la enzima, la enzima se une a la sustrato (uno de

los reactivos) para formar un complejo. La formación del complejo conduce a la
formación de las especies del estado de transición, que forma entonces el
producto. La naturaleza de los estados de transición en reacciones enzimáticas es
un gran campo de la investigación en sí misma, pero algunas afirmaciones
generales que se puede hacer sobre el tema. Un sustrato se une, generalmente
por interacciones no covalentes, a una pequeña porción de la enzima llamada sitio
activo, con frecuencia situado en una hendidura o grieta en la proteína y que
consiste en ciertos aminoácidos que son esenciales para la actividad enzimática.
Emil Fisher propuso que las enzimas y sus sustratos interactúan para formar un
complejo de enzima-sustrato cuya estabilidad térmica fue mayor que la de la
enzima en si este conocimiento impacto de manera profunda sobre la
comprensión tanto de la naturaleza química como de la conducta cinética de la
catálisis enzimática. Fisher razono que la especificad en extremo alta con la cual
las enzimas distinguen sus sustratos cuando están formados un complejo de ES
era análoga a la manera en la cual una cerradura mecánica distingue la llave
apropiada, la analogía para las enzimas es que la cerradura está formada por una
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hendidura o bolsa en la superficie de la proteína que forma parte de una región
llamada sitio activo
Si bien el “modelo de cerradura y llave” de fisherpermitio comprender la
especifidad extrema de interacciones entre enzima y sustrato, la rigidez implícita
del sitio activo de la enzima no explico los cambios dinámicos que acompañan la
unión de sustrato y la catálisis. Esta desventaja fue abordada por el modelo de
adaptación inducida de Daniel Koshland, que declara que cuando los sustratos se
aproximan y se unen a una enzima, inducen a un cambio conformacional, una
modificación análoga a colocar una mano (sustrato) dentro de un guante (enzima).
Un corolario es que la enzima induce cambios reciprocos en sus sustratos y
aprovecha la energía de unión para facilitar la transformación de sustratos en
productos.

9. Explicar la ecuación de Michaelis –Menten y las

conclusiones más importantes sobre la cinética.

La ecuación de Michaelis-Menten La ecuación de Michaelis-Menten ilustra

en términos matemáticos la relación entre la velocidad de reacción inicial vi
y la concentración de sustrato [S]
Vo = Vmax [S]
Km + [S]
Donde: Vo= Velocidad inicial de la reacción
Vmax= Velocidad máxima
Km= Constante de Michaelis= (K-1 + K2)/K1
[S]= Concentración de sustrato

Conclusiones importantes sobre la cinética de Michaelis- Menten:

 Km:
Km, que es la constate de Michaelis, es característica de una enzima y su
sustrato particular, y refleja la afinidad de la enzima por ese sustrato. Km es
numéricamente igual a la concentración de sustrato con la que la velocidad de
la reacción es igual a ½ de la Vmax. Km no varía con la concentración de la
enzima.
 Km pequeña:
La Km numéricamente pequeña (baja) refleja una afinidad elevada de la enzima
por el sustrato, porque se requiere concentración baja de este último para
semisaturar la enzima, esto es, llegar a una velocidad que equivale a ½ la Vmax.
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 Km grande:
El Km numéricamente grande (elevado) refleja una afinidad baja de la
enzima por el sustrato porque se requiere una concentración elevada de
este último para semi saturar la enzima.

 Relación de la velocidad con la concentración de la enzima:

La velocidad de la reacción es directamente proporcional a la concentración
de la enzima a todas las concentraciones del sustrato. Por ejemplo, si se
reduce a la mitad la concentración de la enzima, la velocidad inicial de la
reacción (Vo), así como la Vmax se reducen a la mitad de los valores
originales.

 Orden de la reacción:
Cuando [S] es mucho menor que Km, la velocidad de la reacción es
aproximadamente proporcional a la concentración del sustrato. Se dice en
consecuencia que la velocidad de la reacción es de primer orden con
respecto al sustrato. Cuando [S] es mucho mayor que Km, la velocidad es
constante e igual a Vmax. Por este motivo, la velocidad de la reacción es
independiente de la concentración de sustrato, y se dice que es de orden
cero con respecto a la concentración del sustrato.

10. Explicar los factores que afectan a la velocidad de la

reacción: concentración de substrato, pH, temperatura,
inhibidores de la actividad enzimática.

 Concentración de sustrato:
En lo que sigue, las reacciones enzimáticas se tratan como si sólo tuvieran
un sustrato único y un producto único. Para enzimas con múltiples
sustratos, los principios que se comentan a continuación se aplican con
igual validez. Más aún, al emplear condiciones de seudoprimer orden
(véase antes), los científicos pueden estudiar la dependencia del índice de
reacción en un reactivo individual por medio de la selección apropiada de
sustratos fijos y variables. En otras palabras, en condiciones de
seudoprimer orden, la conducta de una enzima con múltiples sustratos
imitará a la de una que cuenta sólo con un solo sustrato.
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 PH:
Por su característica proteica, muchas enzimas por el pH de dónde se
encuentran pueden cambiar desde un estado ionizado es decir con carga a
uno no ionizado o sea sin carga afectando así la actividad biológica de las
mismas cada enzima posee un pH característico donde poder realizar su
función o sea el pH óptimo cualquier variación del mismo puede afectar la
acción enzimática y así afectar la velocidad de las reacciones químicas.

 Temperatura:
El aumento de la temperatura incrementa el índice de reacciones tanto no
catalizadas como catalizadas por enzima al aumentar la energía cinética y
la frecuencia de choque de las moléculas que están reaccionando. Sin
embargo, la energía calorífica también aumenta la energía cinética de la
enzima hasta un punto que excede la barrera de energía para alterar las
interacciones no covalentes que mantienen su estructura tridimensional. La
cadena polipeptídica empieza entonces a desdoblarse, o desnaturalizarse,
con una pérdida acompañante de la actividad catalítica

 Inhibidores de la actividad enzimática:

Cualquier sustancia que pueda disminuir la velocidad de una reacción

catalizada por enzimas se denomina inhibidor.

11. Graficar y explicar los factores que afectan a la velocidad de

la reacción según los datos obtenidos en su laboratorio.

12. Definir que es un inhibidor.

Un inhibidor, como su nombre indica, es una sustancia que interfiere con la acción
de una enzima y ralentiza la velocidad de una reacción. Una buena cantidad de
información sobre las reacciones enzimáticas se puede obtener mediante la
observación de los cambios en la reacción causada por la presencia de
inhibidores. Inhibidores pueden afectar a una reacción enzimática de dos
maneras. Un inhibidor reversible se puede unir a la enzima y posteriormente ser
liberado, dejando la enzima en su estado original. Un inhibidor irreversible
reacciona con la enzima para producir una proteína que no es enzimáticamente
activa y de la que la enzima original no puede ser regenerada.
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Los dos tipos de inhibición reversible más frecuentes son la inhibición
competitiva y la no competitiva.

13. Explicar cómo se produce la inhibición de las enzimas

(competitiva y no competitiva).

Existen dos clases principales de inhibidores reversibles se pueden distinguir

sobre la base de los sitios en la enzima a la que se unen:
Una clase consiste de compuestos muy similares en estructura al sustrato: en este
caso, el inhibidor se puede unir al sitio activo y bloquear el acceso del sustrato al
mismo. Este modo de acción se llama inhibición competitiva porque el inhibidor
compite con el sustrato por el sitio activo de la enzima.

Otra clase importante de inhibidores reversibles: incluye cualquier inhibidor que se

une a la enzima en un sitio distinto del sitio activo y, como resultado de la unión,
provoca un cambio en la estructura de la enzima, especialmente alrededor del sitio
activo. El sustrato es todavía capaz de unirse al sitio activo, pero la enzima no
puede catalizar la reacción cuando el inhibidor se une a ella. Este modo de acción
se llama inhibición no competitiva.
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14. Como son controladas las enzimas alostericas.

Las enzimas alostéricas están reguladas por moléculas denominadas efectores
que se unen de manera no covalente a un sitio distinto del sitio activo. Estas
enzimas casi siempre están compuestas por múltiples subunidades, y el sitio
regulador (alostérico) al que se une el efector es distinto del sitio de unión al
sustrato y puede localizarse en una subunidad que por si misma no es catalitica.
Los efectores que inhiben la actividad enzimática se denominan efectores
negativos, mientras que aquellos que aumentan la actividad enzimática se
denominan efectores positivos. Los etectores positivos y los negativos pueden
influir en la afinidad de la enzima por el sustrato (Ks), pueden modificar la actividad
catalitica máxima de la enzima (Vmax).

15. Definir enzimas funcionales y no funcionales.

Las enzimas plasmáticas son de dos tipos: un tipo está presente en su más alta
concentración, es específico del plasma, y tiene un papel funcional en éste, son,
por tanto enzimas plasmáticas funcionales; el otro tipo se encuentra presente
normalmente a niveles muy bajos y no llevan a cabo función alguna conocida en la
sangre, son las enzimas plasmáticas no funcionales.
Por la tanto se pueden definir los dos tipos de enzimas plasmáticas como:

 Enzimas Plasmáticas Funcionales:

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Enzimas que siempre están presenten en circulación y desempeñan un papel
fisiológico en las sangre y por lo tanto son especificas. en las enzimas plasmáticas
funcionales se incluyen las enzimas asociadas con la coagulación de la sangre (ej.
Trombina), disolución del coagulo de fibrina (plasmina).
 Enzimas Plasmáticas No funcionales:
Enzimas que realizan funciones fisiológicas desconocidas en la sangre, las
enzimas no funcionales surgen de la destrucción rutinaria normal de eritrocitos,
leucocitos y otras células con daño tisular o necrosis como resultado de una
enfermedad.

16. Explicar el papel de las enzimas en el diagnóstico

clínico y dar ejemplo de ellas.

En muchas enfermedades aumenta la transferencia enzimática desde las células

del órgano debido a una mayor permeabilidad de la membrana celular o a la
descomposición más o menos completa de la estructura de la célula, por lo que
las concentraciones elevadas de las actividades enzimáticas en suero, saliva,
líquido cefalorraquídeo y orina no sólo son indicativas de trastornos, sino que
constituyen, además, una ayuda muy valiosa para el diagnóstico diferencial,
pronóstico y la valoración de la eficacia de la terapéutica utilizada.
 Marcadores hepáticos
 Alaninaaminotranferasa.
 Aspartatoaminotranferasa.
 Deshidrogenasa láctica.
 Fosfatasa alcalina.
 Marcadores pancreáticos
 Exocrinos: amilasa, lipasa, tripsina.
 Endocrinos: cuantificación de anticuerpos séricos contra ácido-glutámico,
descarboxilasa.
 Marcadores cardíacos
 Deshidrogenasa láctica.
 Aspartatoaminotranferasa.
 Creatinfosofocinasa (CK).
 Fracción músculo esquelética de CK.
 Fracción miocardíaca de CK.
 Fracción encefálica e intestinal de CK.
 Troponina y mioglobina.
 Marcadores musculares
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 Creatinfosfocinasa.
 Aldolasa.
 Marcadores óseos.
 Fosfatasa alcalina.
 Isoenzimas de la fosfatasa alcalina.
 Marcadores prostáticos
 Fosfatasa ácida.
 Isoenzima de fosfatasa acida.
 Enzima específica de la próstata.
 Marcadores renales.
 Glutatión-S-
 Transferasa urinaria.
 Marcadores diversos (seudocolinesterasa).

Bibliografía:
 R. Murray, P. Weil. Bioquímica de Harper. 30ª Ed.
México D.F: Mc Graw Hill; 2016. Enzimas: Mecanismos de
acción, Enzimas: Cinética, Enzimas: Regulación de
actividades. Pág.60-96.
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