UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC

DEPARTAMENTO DE CIVIL Y AMBIENTAL

DETERMINACIÓN DE BIOAEROSOLES
Charris-Pabon, L. Gutiérrez-Salcedo, A. Hernández- Henao, J. Jiménez-Negrete, M. Cuello-
Rodelo, J

Laboratorio Control de Emisiones Atmosféricas, Grupo AD, Programa de Ingeniería Ambiental,

Universidad de la Costa

Lcharris13@cuc.edu.co, agutierr18@cuc.edu.co, jhernand64@cuc.edu.co, mjimenez49@cuc.edu.co,

jcuello7@cuc.edu.co

Schneider Ismail Lui

27/Septiembre/2019

RESUMEN

El presente informe redacta el estudio de las partículas atmosféricas en el aire bajo muestras graduadas,
con la finalidad de identificar la concentración de bioaerosoles y los tamaños de las partículas de las
sustancias obtenidas en la cafetería de la Universidad de la Costa CUC, usando como equipo el impactador
de cascada de seis etapas consecutivas, donde se dejó el equipo por un tiempo de monitoreo de cinco
minutos, luego del proceso de incubación por un tiempo de 48 horas, se procedió a realizar el conteo y
identifación de las colonias macroscópica y microscópicamente. en este caso se identificaron seis tipo de
colonias repartidas en las seis etapas de las cajas Petri, teniendo en cuenta que en la etapa tres se tuvo
presencia de hongos, pasando así a la fijación de cada colonia identificada en un porta objetos para tinción
de Gram que ayudo a la identificación de bacterias donde se evidenciaron dos tipos como coco y bacilos,
donde se presenta concentraciones de UFC de 7,069.13 hasta 452,297 UFC/m 3 de bacterias del género
Bacillus Gram positivas en todas las etapas del impactador.

Palabras claves: Bioaerosoles, Impactador de cascada, incubación, partículas, colonias, atmosfera.

ABSTRACT

This report draws the study of atmospheric particles in the air under graduated samples, in order to identify
the concentration of bioaerosols and the particle sizes of substances obtained in the cafeteria of the
University of the Costa CUC, using the six-stage waterfall impactor in a row as a team, where the equipment
was left for a monitoring time of five minutes, after the incubation process for a time of 48 hours, the
macroscopic and microscopic colonyes were counted and identified. in this case, six types of colonies were
identified in the six stages of Petri boxes, considering that in stage three there was presence of fungi, thus
passing to the fixation of each colony identified in an object holder for Gram staining that helped the
identification of bacteria where two types of coconut and bacilli were evident.

Keywords: Bioaerosols, cascade impactor, incubation, particles, colonies, atmosphere.

 - INTRODUCCIÓN. Los impactadores son usados para la caracterización
de partículas de los aerosoles en diversos ambientes,
pueden ser utilizados en estudios sobre los efectos de
Los microorganismos pueden ser transportados la contaminación o del ambiente de trabajo sobre la
rápidamente, en forma de bioaerosoles, la atmósfera salud. Es un instrumento que permite colectar el
no tiene una microbiota autóctona, pero es un medio aerosol de la atmosfera en una muestra adecuada,
para la dispersión de muchos tipos de también clasifica por tamaño a las partículas
microorganismos (esporas, bacterias, virus y contenidas en el aire [CITATION Dan19 \l 9226 ]
hongos), procedentes de otros ambientes. Los El principio del diseño del impactador se basa en que
microorganismos dispersos por el aire producen las partículas con más inercia son menos capaces de
enfermedades en plantas, animales y humanos, seguir con el flujo e impactan la superficie colectora,
causando algunas alteraciones respiratorias, perdidas si cambia rápidamente de dirección, las demás
de grandes cosecha y materiales orgánicos (cuero, partículas permanecen en el fluido hasta que se
textiles, papel) produciendo alteraciones consigue aumentar su inercia. Para el aumento de
[ CITATION MCD02 \l 9226 ]. Los inercia se obtiene incrementando la velocidad lineal
microorganismos son, y siempre han sido, un factor de fluido, lo cual se dispone de una caja perforadora
importante para la salud humana. La vida fue con orificios sobre cada etapa, el diámetro de cada
iniciada en forma de microorganismos y estos han orificio se disminuye a medida que se desciende en
desarrollado una extraordinaria capacidad de las diferentes etapas del impactador [ CITATION
supervivencia que les ha permitido colonizar Mor17 \l 9226 ].
prácticamente cualquier espacio natural de la tierra y
por supuesto, también los entornos artificiales
creados por el ser humano [ CITATION Oma11 \l
9226 ].

El presente informe tiene como objeto determinar la

concentración de bioaerosoles presentes en el aire en
la cafetería de la Universidad de la Costa, CUC
usando el método de impactación de cascada, además
se realiza la identificación de los bioaerosoles, así
como su fuente de emisión.

- MARCO TEÓRICO.

Impactador de cascada.

El aire contiene en suspensión diferentes tipos de Figura 1 Impactador de cascada de seis etapas como
microorganismos, especialmente bacterias y hongos. simulador del sistema respiratorio del ser humano. Fuente:
La presencia de uno u otro tipo depende del origen, (6)
de la dirección e intensidad de las corrientes de aire y
de la supervivencia del microorganismo, pueden ser El impactador cuenta con seis etapas las cuales se
describen a continuación: (Guía laboratorio,
transportados rápidamente, en forma de bioaerosoles.
Las enfermedades transmitidas por el aire, Universidad de la Costa)
producidas por bacterias, virus y hongos, son las Etapa 1: cavidad Nasal (partículas entre 7.0 Micras
respiratorias (neumonía, tosferina, tuberculosis, y de mayor valor)
legionelosis, resfriado, gripe), sistémicas (meningitis,
sarampión, varicela, micosis) y alérgicas Etapa 2: faringe (partículas entre 4.7 Micras y 7.0)
[ CITATION Men69 \l 9226 ].

2
Etapa 3: tráquea y bronquios primarios (partículas que los medios de cultivo e instrumentos que
entre 4.7 Micras y 3.3) se utilicen se encuentren esterilizados.

Etapa 4: bronquios secundarios (partículas entre 3.3 - Que se realicen solo los manipuleos
Micras y 2.1) indispensables.
Etapa 5: bronquios terminales. (Partículas entre 2.1 - Que se trabaje fuera de toda corriente de aire.
Micras y 1.1) De ser posible utilizando un mechero o bien
Etapa 6: alveolos. (Partículas entre 1.1 Micras y 0.6) Flujo laminar.

[CITATION Edu09 \p 2 \l 9226 ]

Bomba de vacío. Caja Petri o Placa de Petri

Las aplicaciones de vacío tanto en la industria como Es un instrumento de laboratorio el cual puede ser de
en los laboratorios de investigación son numerosas y cristal o de plástico, que consta de una base circular,
variadas. y las paredes son de una altura baja
aproximadamente de 1 cm; y una cubierta de la
Una bomba de vacío es un dispositivo empleado para misma forma, pero algo más grande de diámetro para
extraer los gases y sustancias no deseados en un que encaje como una tapa. Los hay de diferentes
proceso, producto o sistema. diámetros, los más utilizados en el laboratorio son los
de 10 cm de diámetro. Se utiliza en los laboratorios
Las bombas de vacío trabajan solamente en un rango principalmente para el cultivo de cristales, en los
de presiones limitado, por ello la evacuación de los laboratorios de biología se utilizan para el cultivo de
sistemas de vacío se realiza en varias etapas, bacterias o microorganismo. (1)
usándose para cada una de ellas una clase de bomba
diferente. Bacterias mesofílicas.

El funcionamiento de una bomba de vacío está Bacteria que descompone la materia orgánica a
caracterizado por su velocidad de bombeo y la temperaturas que oscilan entre 30 y 40 C. El agua es
cantidad de gas evacuado por unidad de tiempo. utilizada como medio de eliminación de excretas y
Toda bomba de vacío tiene una presión mínima de otros desechos; puede también contener
entrada, que es la presión más baja que puede microorganismos patógenos de asiento no
obtenerse, y también un límite superior a la salida o intestinales, por ejemplo, flora de la piel. (2)
presión previa. Si la presión previa aumenta por
encima de este valor, el bombeo cesa. [CITATION Microscopio
POM07 \p 5,6,7 \l 9226 ] Este aparato permite observar lo que es invisible a
Siembra. simple vista. Existen diversos tipos de microscopios,
desde la lupa, formada por una sola lente, hasta el
Sembrar es introducir artificialmente una porción de microscopio electrónico.
muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin
de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y - El microscopio simple o también llamado
multiplicación. lupa, consta de una de sólo una lente
biconvexa o plano- convexa, que
Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a proporciona una amplitud moderada del
una temperatura adecuada para el crecimiento. Para objeto.
llevar a cabo este proceso es necesario aplicar una - Los microscopios de luz, compuestos u
serie de reglas fundamentales, tales como: ópticos, usan lentes, para enfocar y
amplificar los rayos de luz que pasan a través
- Efectuar la siembra asépticamente para evitar de un espécimen o rebotan en él. La
contaminar la muestra, para esto es necesario capacidad de definición de estos

3
 microscopios es de aproximadamente de 1  ASA bacteriológica
micra (una millonésima parte de metro). Este  Mecheros
microscopio es el que utilizamos dentro del
Reactivos:
laboratorio de Biología, en el que más
adelante identificaremos sus partes y
 Lugol violeta
aprenderás como usarlo.
- El microscopio estereoscópico o de  Cristal violeta
disección, es un microscopio compuesto  Aceite de inmersión
doble, en estos aparatos las imágenes  Alcohol acetona
conservan los relieves que pueden observarse
simultáneamente con los dos ojos. El
aumento que se obtiene es relativamente 3.2 Procedimiento.
bajo, sin embargo, pueden realizarse micro
disecciones sobre la platina a la par que la Se escoge un punto estratégico para la toma de
persona se encuentra observando por los muestras, según las indicaciones del profesor. Antes
oculares. de dar inicio a la toma de la primera muestra, es
necesario encender el equipo durante unos minutos
para eliminar la presencia de agua que se encuentre
dentro, ya que esto podría alterar los resultados.
- Los microscopios electrónicos utilizan haces
de electrones en vez de luz. Los electrones se Luego, se procedió a fijar las cajas petri llenas del
enfocan con campos magnéticos, no con medio de cultivo en el equipo, con la precaución
lentes. Cuando un haz de electrones incide necesaria, teniendo en cuenta que deben colocarse de
en el vacío sobre un objeto, las partículas forma correcta, es decir, que queden planos.
incidentes pueden ser absorbidas, Seguidamente, se procede tomar las muestras, este
transmitidas y modificarse de distintas proceso se realiza durante 5 minutos y a una altura de
formas. Algunos tipos de microscopios 1.5 metros del suelo. Se coloca el rotámetro para un
electrónicos pueden distinguir estructuras de caudal de 28,3 L/s.
unos cuantos nanómetros (milmillonésimas
de metro). (3) Seguidamente, se retiraron las muestras, de forma
ordenada, se rotularon, tal como se observa en la
figura 2 y se llevaron a la incubadora por un tiempo
de 72 horas a 37°C.
3. DESARROLLO EXPERIMENTAL

3.1 Materiales, insumos y equipos.

Durante esta experiencia de laboratorio se utilizaron

los siguientes insumos:

 Equipo impactador de cascada

 Bomba de vacío
 Microscopio
Materiales:
Figura 2. Muestras rotuladas. Fuente: Propia.
 Cajas Petri
 Medio de cultivo Pasado el tiempo, se procede a la segunda parte de la
experiencia, que es la caracterización de las muestras
 Portaobjetos de forma macroscópica.
 Guantes
 Tapabocas En la etapa de observación macroscópica; se pudo
observar las características físicas de cada una de las
4
muestras, tales como, el color, el relieve y la forma Figura 4. Tinción de Gram. Fuente. Propia.
como se aprecia en la figura 3, determinando en cuál
de las muestras se repetían dichas características, y Finalmente, se dejan secar las muestras por unos
de esta forma agruparlas y asignarles un código y de minutos, luego, se le agrega a cada muestra una
esta forma realizar la clasificación de cultivos, y la pequeña gota de aceite de inmersión y se trasladan al
determinación del número de colonias existentes en microscopio para analizarlas y observarlas más
cada muestra. detalladamente, y de este modo realizar su
clasificación (Gram + y Gram -) de una manera más
exacta.

ANÁLISIS Y DISCUSIONES

Figura 3. Observación macroscópica de la etapa #1. Para calcular la concentración de UFC se hace uso de
la siguiente ecuación.
Fuente. Propia.

UFC X 1000
Seguidamente, se le dio inicio a la etapa de C UFC = Ec . 1.
observación microscópica, donde con mucha 28,3 X t
precaución, los implementos necesarios y con ayuda
Dónde:
de un asa, se fijó muy ligeramente la muestra de cada
uno de los cultivos clasificados en un portaobjetos, t: Tiempo de monitoreo
para realizar este proceso fue necesario mantener
encendidos todos los mecheros bunsen que se Caudal 28.3 l/s
encuentran en el laboratorio.
UFC: Unidades Formadoras de Colonia.
Posteriormente, se realiza el método de tinción de
gram, el cual consiste en tomar las muestras en los
portaobjetos y agregar 1 gota de Cistral violeta, una En la Tabla 1, se encuentran los datos obtenidos de
gota de Lugol violeta, alcohol acetona y una gota de la concentración de las unidades formadoras de
Safranina como se puede observar en la figura 4, colonias (UFC).
teniendo en cuenta que antes de agregar cada gota se
La 1ra etapa (Y1) nos proporcionó una cantidad de
enjuagan suavemente con un poco de agua,
24 colonias con una concentración de 169,61
esperando un tiempo determinado, a: 1, 1 minuto, 30 UFC/m3, en la 2da etapa (Y2) tiene 64 unidades
segundos y 1 minuto respectivamente. formadoras de colonias y una concentración de
452,29UFC/m3, en la 3ra etapa (Y3) las unidades
formadoras de colonia fueron 9 con una
concentración de 63,604 UFC/m3, Con relación a la
4ta y 5ta etapa se evidencio 1 sola unidad formadora

5
de colonia con una concentración de 7,06 UFC/m 3 y coloración. 3º) Posible contaminación con los
en la 6ta etapa (Y6) se encontró 3 unidades reactivos por en el uso de las pipetas.
formadoras de colonias con concentración de 21,201
UFC/m3. En la Figura 4 se observan escasos Cocos Gram
positivos y estructuras de hongos como son l como
Las características macroscópicas y microscópicas se son las hifas entre los cuales está la (Candida
encuentran en la Tabla 2. (ver Anexos). albicans) que es el único hongo que se puede teñir
con la tinción de Gram, por lo tanto, se consideran
A nivel macroscópico se pudo observar que las Gram positivas, porque retienen el CV-1 tomando un
colonias eran de tamaño entre pequeñas y medianas, color violeta oscuro,
de forma redonda, asimétricas, de color blancuzco, y
amarillo, de textura lisa y sin relieve. A nivel Finalmente, gracias a las concentraciones obtenidas
microscópico, se realiza una breve descripción de lo de UFC de bacterias del género Bacillus, se puede
observado. decir que la calidad del aire es un poco inestable, por
lo cual se pueden llegar a presentar impactos en la
En la Figura 2 se observa una flora mixta, salud de las personas expuestas, ya que estas
constituida por basilos Gram positivos y bacilos bacterias presentan un tamaño entre 4-10 μm,
Gram negativos, los primeros retienen el complejo pudiendo estar localizadas en la cavidad nasal y
CV-1(cristal violeta), y al ser tratados con alcohol faringe del sistema respiratorio.
acetona siguen teñidos de color violeta oscuro, las
bacterias Gram negativas sometidas al mismo
tratamiento, pierden el CV-1 se tiñen de rosado,
porque toman el segundo colorante de contraste, qué
es la safranina. Actualmente se considera que la
diferencia entre bacterias Gram positivas y Gram
negativas radica en la constitución física-química
que tiene la pared celular, la pared de las bacterias
Gram negativas contienen más lípidos y al ser
tratadas con alcohol se le extraen, quedando los
poros grandes y permitiendo la salida del complejo CUESTIONARIO
CV-1.En cambio en las bacterias Gram positivas por
tener bajo contenidos de lípidos los poros resultantes ¿A qué tipo de riesgos están expuestos los seres
son más pequeños alcanzando a impedir la salida del humanos que están en contacto con los
complejo CV-1. Otra explicación similar, está microorganismos encontrados?
relacionado con el peptidoglucano, compuesto que
Las enfermedades víricas transmitidas por el aire por
forma como especie de rejilla y está presente en
las bacterias identificas son: Amigdalitis, faringitis,
mayor cantidad en la pared de las bacterias Gram
bronquitis, escarlatina producida por la especie
positivas. El tratamiento con alcohol acetona causa
Cocos y el Carbunco pulmonar producida por la
una disminución en el diámetro de los poros, pero en
especie de Bacillus. Muchas de las especies de
las Gram negativas por tener menos cantidad de
Bacillus no tienen a causar variedad de
peptidoglucano los poros quedaran lo
enfermedades; Los cocos que pueden causar
suficientemente grandes para permitir la salida del
infecciones en los humanos son los estafilococos, los
CV-1.
estreptococos, los neumococos y los meningococos,
En la Figura 3 se observan cocos y bacilos, los pero muchos agentes externos tienden a generar o
cuales no se pudieron identificar si eran Gram transportar estas enfermedades infecciosas y
positivos o Gram negativos, debido a que existió contagiosas que padecen los animales y pueden
error en el procedimiento de la tinción de Gram, 1º) trasmitirse al ser humano; se identifica que cerca al
Una posible causa pudo ser a la cantidad de colorante área de estudio, la presencia de aves y felinos
que se aplicó en la prueba, esto no permitió la (Gatos), muy posibles portadoras de bacterias
verdadera identificación de la flora encontrada en el [ CITATION Men69 \l 9226 ]
muestreo. 2º) Prolongación en el tiempo de
6
¿Cuáles son las posibles fuentes de estos
contaminantes en el lugar de estudio?

En el sitio de muestreo existían diferentes fuentes

como el polvo procedente de las continuas brisas en
el área, los desechos generados diariamente, debido a
que inciden en descomposición orgánica; otra posible
fuente puede considerarse los seres humanos, debido
a que gran parte de estas bacterias las transportamos
en nuestro cuerpo. Por otro lado, cerca del sitio de
muestreo se encuentra árboles que pueden ser fuentes
de emisión de bacterias y animales.

Proponga una forma de mitigación para este tipo

de contaminantes.

Una mitigación directamente no se podría como tal

por la zona en que fue extraída la muestra (cafetería
principal cuc) ya que es una lugar de espacio abierto,
pero se puede crear un plan para disminuir la
contaminación en ese punto donde fue obtenida la
muestra, esto se puede llevar a cabo motivando e
incentivando a toda la comunidad estudiantil y no
estudiantil que se encuentre en el lugar o en cualquier
punto de la universidad con el fin de que hagan una
buena disposición de los residuos y desechos en los
lugares que le corresponde, no obstante darle un aseo
continuo a cada área esto con la finalidad de una
menor exposición a los biaerosoles.

CONCLUSIONES

Una vez realizada la experiencia de laboratorio de

determinación de bioaerosoles es posible afirmar que
las bacteria encontrada y analizada corresponde al
género bacilos y cocos Gram positivas ,Gram
negativas, estas pueden causar graves daños a la
salud humana como enfermedades de piel e
infecciones internas, por tal motivo podemos
concluir que cuando esta bacteria está en altas
concentraciones en el aire provocara un gran impacto
en la salud de las personas expuestas, ya que por su
tamaño son de fácil inhalación, causando
enfermedades respiratorias y cutáneas.

1. BIBLIOGRAFÍA

7
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 UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC
DEPARTAMENTO DE CIVIL Y AMBIENTAL

ANEXOS

CAFETERIA
CODIGO FORMA RELIEVE TEXTURA COLOR ETAPAS # colonias
Y1 Redondas sin relieve lisa amarilla 1-2-3-5-6 24
Y2 Redondas sin relieve lisa blanca 1-2-3-5 64
Y3 Asimetrica sin relieve lisa blanca 1-3-4-6 9
Y4 Asimetrica con relieve lisa amarilla 1 1
Y5 asimetrica larga sin relieve lisa blanca 2 1
Y6 Redondas sin relieve lisa naranja 3 3
Tabla 3 Caracterización macroscópicas de las bacterias identificadas

Tabla 4 Concentración de las Unidades formadoras de bacterias

UFC
Y1 169,611
Y2 452,297
Y3 63,604
Y4 7,067
Y5 7,067
Y6 21,201

Figura 5 Flora mixta, constituida por basilos Gram positivos y bacilos Gram negativos.
Figura 6 cocos y bacilos, los cuales no se pudieron identificar si eran Gram positivos o Gram
negativos

Figura 7 escasos Cocos Gram positivos y estructuras de hongos

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