1. LABORATORIO 1.

MANEJO DEL MICROSCOPIO: MICROSCOPIA

2. OBJETIVOS

- Reconocer las partes y el correcto uso y funcionamiento del microscopio óptico.

- Identificar la importancia del microscopio óptico como herramienta de trabajo en
el campo de la biología.
- Adquirir destreza en la preparación de muestras sencillas y en el uso de los
conceptos básicos usados en microscopia.

3. MARCO TEORICO

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que no se pueden ver a

simple vista. Además, sirve para hacer mediciones, estimar el tamaño de una población
de microorganismos, estudiar estructuras celulares en general, hacer estudios
morfológicos y fisiológicos de células y tejidos. El nombre deriva etimológicamente de
dos raíces griegas: mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa observar.

En biología su uso es inevitable ya que precisamente el objeto de estudio de esta área

de la biología es la célula, entidad de tamaño minúsculo, imposible de ver a simple vista.
El microscopio ha permitido estudiar a la célula a nivel morfológico y fisiológico.
Actualmente se encuentran muchos tipos distintos de microscopios, cada uno fabricado
con propósitos especiales, empleados en situaciones especiales. Hoy en día es el
microscopio electrónico el que mayor poder de amplificación y resolución ofrece; sin
embargo, es el microscopio de luz el más empleado en los laboratorios, tanto por su
bajo costo como por su uso corriente.

3.1. PARTES DEL MICROSCOPIO

Existen distintos modelos de microscopio que se adaptan a diferentes aplicaciones.

Todos ellos constan de dos partes: el Sistema óptico y de iluminación y el Sistema
mecánico (Figura 1).

Figura 1. Partes del microscopio óptico.

3.1.1. Sistema Óptico y de Iluminación

Ocular: Llamado así por ser la lente sobre la que se aplica el ojo del observador. Tiene
como misión aumentar la imagen producida por el objetivo. Su aumento viene señalado
por una cifra y el signo X (5X, 10X, 20X, etc.). Además aparece el valor del número del
campo que normalmente es 18 mm. (Figura 2.)

Figura 2. Oculares de microscopio óptico.

Objetivo: es la lente que se encuentra sobre el objeto (muestra) a observar. Es el

elemento óptico más importante, puesto que es el que produce la imagen aumentada
del objeto. Los aumentos de los objetivos vienen indicados sobre los mismos, 4 (anillo
rojo), 10 (anillo amarillo), 40 (anillo celeste) y 100 (anillo blanco). En cada objetivo está
indicado: el poder de aumento, la apertura numérica (AN), el grosor permitido del
cubreobjetos en mm x 10-1 y la longitud mecánica del tubo que generalmente es de 160
mm (Figura 3).
Importante: el objetivo de 100 no permite el uso de cubreobjetos y solo se utiliza
inmerso en el aceite de inmersión. El profesor le indicará como usar este aceite y la
forma segura de limpiar el lente.

Figura 3. Objetivo de 60X.

Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la muestra.

Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador

3.1.2. Sistema Mecánico

Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
Platina: Placa cuadrada o circular en la que se apoya la preparación a observar. Dispone
de unas pinzas que permiten sujetar la muestra. La platina se halla perforada en el
centro para dejar paso a los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz
Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o binocular
Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
Tornillos de Enfoque: Macrométrico que aproxima o aleja el enfoque y Micrométrico
que consigue el enfoque correcto.

3.2. MANTENIMIENTO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO.

1. Debe trasladarlo agarrándolo siempre por el brazo con una mano y apoyando la
base del microscopio sobre la otra mano. Así evitará que las lentes, tubo y espejo
puedan salirse de su sitio.
2. Antes de usar debe revisar si el microscopio está en buen estado, asegurándose que
encienda, que ninguna parte este suelta y que esté limpio. Si algo no está bien debe
comunicarlo al profesor y/o al auxiliar de laboratorio.
3. Bajo ninguna circunstancia debe sacar los objetivos del revólver.
4. Todas las partes movibles del microscopio funcionan suave y fácilmente. Si esto no
ocurre comuníqueselo de inmediato a su profesor y/o auxiliar de laboratorio. No
forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
5. El cambio de objetivo se hace girando el revólver desde la base estriada y dirigiendo
siempre la mirada a la muestra para prevenir el roce de la lente con la muestra.
6. Nunca debe tocar con los dedos la superficie de las lentes.
7. La limpieza de las lentes sólo debe hacerse con gasa y solución limpiadora especial;
cualquier otro material puede dejarle pelusas o producir rayas en los vidrios.
8. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en
el objetivo, como se describió en el punto anterior.
9. La platina también debe mantenerse seca y limpia. Si por cualquier circunstancia se
moja, séquela de inmediato con un paño limpio o papel absorbente suavemente.
10. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la práctica y al
acabar la práctica encargar al auxiliar de laboratorio el ajuste y revisión general de
los mismos.
11. Apagar mientras no se esté utilizando.

3.2.1. Cuidados

En la observación

1. Colocar el microscopio en una mesa fija, de modo tal que pueda sentarse con
comodidad para ver el ocular sin apoyarse.
2. No cambiar de objetivos mientras se está mirando por el microscopio. Puede
golpear el portaobjeto y romperlo o romper el objetivo.
3. El objeto a observar debe estar muy bien iluminado.
4. Colocar el portaobjeto sobre la platina de manera tal que la parte que se quiera
observar se encuentre bajo la lente. Fijar siempre el portaobjeto con las pinzas.
 5. El cambio de objetivo se hace girando el revólver desde la base estriada y dirigiendo
siempre la mirada a la muestra para prevenir el roce de la lente con la muestra.

Al finalizar el trabajo

1. Bajar la muestra.
2. Colocar el objetivo de menor aumento (4X) en posición de observación y bajar
completamente la platina.
3. Limpiar con papel absorbente la platina y limpiar los objetivos con gasa y solución
limpiadora especial.
4. Bajar la intensidad de luz de la lámpara. Apagar el microscopio y desenchufarlo.
Dejar enfriar el bombillo antes de transportarlo a la sala de microscopios.

3.3. MANEJO DEL MICROSCOPIO: OBSERVACIÓN

3.3.1. Observación en 4X y 10X

1. Conecte el microscopio y asegúrese que enciende.

2. Con ayuda del tornillo macrométrico baje suavemente la platina hasta el tope.
3. Mover el revólver desde la base estriada y coloque el objetivo de menos aumento
(4X) en posición para observar.
4. Coloque sobre la platina la muestra y sujétela con las pinzas.
5. Encienda y regule la intensidad de la luz, usando el condensador y abra
completamente el diafragma y mire por el ocular hasta lograr que el campo esté
brillante y uniformemente iluminado.
6. Mientras observa por los oculares, suba lentamente la platina con el tornillo
macrométrico hasta que aparezca la imagen. Ajuste la claridad y nitidez de la imagen
con el tornillo micrométrico.
7. Para cambiar el objetivo al de 10X, mueva el revolver desde la base estriada hasta
que el siguiente objetivo llegue a su tope. Ajuste la claridad y nitidez de la imagen con
el tornillo micrométrico.

3.3.2. Observación en 40X

8. Para cambiar el objetivo al de 40X, baje un poco la platina y mueva el revolver desde
la base estriada hasta que el siguiente objetivo llegue a su tope.
9. Suba de manera suave y con extremo cuidado la platina con el tornillo macrométrico
hasta que aparezca la imagen. Ajuste la claridad y nitidez de la imagen, con el tornillo
micrométrico. Ajuste la iluminación de la muestra.

Importante: en la observación con el objetivo de 40X se debe tener cuidado en no subir

completamente la platina, ya que esto haría que la muestra y el objetivo chocaran,
causando rompimiento de la muestra y/o el objetivo. La distancia de que debe haber
entre el objetivo y la muestra para poder observar bien la muestra es de tan solo
milímetros (ver figura 4).
3.3.3. Observación en 100X

10. Para utilizar el objetivo de 100X, debe bajar un poco la platina. Luego gire el revólver
y deje despejada la muestra.
11. Sin objetivo puesto, coloque una gota de aceite de inmersión en la mitad de la
muestra y gire el revólver hasta que el objetivo de 100X llegue al tope.
12. Suba la platina con mucho cuidado hasta que el objetivo toque la gota de aceite.
Focalice la imagen y ajuste la nitidez con el tornillo micrométrico. Ajuste la
iluminación de la muestra.
13. Al finalizar la observación baje la platina y retire la preparación. Limpie el objetivo de
100X con gasa y solución limpiadora especial.

Importante: el aceite de inmersión no dificulta la observación de la muestra si usted

desea volver a cambiar de objetivos. En el caso del objetivo de 40X, se debe tener cuidado
porque al estar muy cerca de la muestra se puede engrasar, por lo que si esto pasa se
debe limpiar también.

Tenga en cuenta que al enfocar con los objetivos de 4X y 10X la distancia entre el objetivo
y la muestra es mayor si se compara con la distancia entre estos mismos al enfocar con
el objetivo de 40x y 100X, como se muestra en la figura 4.

Figura 4. Observe que la distancia de trabajo (A), diámetro del campo (B), la distancia entre la
muestra y el lente (C) y el tamaño de la muestra (D), disminuyen con el aumento de los
objetivos.

3.4. ANALISIS DE ALGUNOS CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA

3.4.1. Poder de aumento del microscopio

Es la capacidad que posee el microscopio de multiplicar el tamaño del objeto que se

observa. El poder de aumento está dado por el producto entre los aumentos
proporcionados por el ocular (10X) y el objetivo que se utilicen, como se expresa en la
siguiente formula:
 PA = Aumento del objetivo * Aumento del ocular

Nota: la “X” de los aumentos significa “veces”.

3.4.2. Diámetro del campo visual

Es el área circular que se observa al mirar por los oculares. Está dado por la división del
número del campo del ocular (18 mm) entre el aumento del objetivo que se está
utilizando, como se expresa en la siguiente formula:

Фd = Número del Campo Ocular / Aumento del Objetivo

Aunque siempre el campo visual se vea del mismo tamaño, en realidad este cambia
según el objetivo que se observe. Así, a mayor aumento del objetivo, el diámetro del
campo será menor, en consecuencia el área del campo que se observa será menor.
Teniendo en cuenta el diámetro del campo visual se puede hallar el Área del campo
visual, de la siguiente manera:

A = π * d2 / 2

La relación que existe entre el aumento de del objetivo, el diámetro y el área del campo
visual se puede observar en la figura 5.

Figura 5. Relación entre el aumento del objetivo, el diámetro del campo visual (rojo) y el área
del campo visual. A mayor aumento del objetivo, menores serán el diámetro y el área.

Conociendo el diámetro del campo visual, puede calcularse fácilmente el tamaño de una
célula o de un cristal de sal, el grosor de un cabello o la longitud de un protozoario
utilizando la siguiente ecuación:

Tamaño de células = Фd / # de células observadas

3.4.3. Poder de Resolución

Se define como capacidad de un objetivo de poder distinguir la distancia mínima que

existe entre dos puntos que a simple vista parecen uno solo. La calidad de una imagen,
en la que se observe la claridad, nitidez y la riqueza de detalles, depende del poder de
resolución del objetivo (figura 6). El poder de resolución (PR) de un objetivo depende de
la longitud de onda (λ) del rayo luminoso utilizado y la apertura numérica (AN) del
sistema óptico del objetivo, que se representa en la siguiente formula:

PR = λ / 2 AN

Nota: Tenga en cuenta que la luz del bombillo del microscopio tiene una longitud de
onda de aproximadamente 640 nm.

Apertura numérica (AN): Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder
captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales está constituido el
objeto que se observa. Esta capacidad se traduce en el poder del microscopio de formar
imágenes que muestren al observador una serie de detalles del objeto que se está
examinando. Cuanto mayor sea la apertura numérica de un objetivo, éste tendrá una
mayor capacidad de mostrar detalles finos en la imagen que forma.

Figura 6. Imagen que representa el poder de resolución de un microscopio. A) Objeto; B)

Objetivo 4X; C) Objetivo 10X, D) Objetivo 40X y E) Objetivo 100X.

4. UNIDADES DE MEDIDA EMPLEADAS EN MICROSCOPIA

De acuerdo con los conceptos básicos de microscopia anteriormente vistos, las unidades
de medida que se utilizan normalmente son el milímetro (mm), el micrómetro (µm) y el
nanómetro (nm).

MEDIDA EQUIVALENCIA
1 mm 1000 µm
1 µm 0.001 mm
1 µm 1000 nm
0.001 µm
1 nm
1X10-6 mm
5. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS

Microscopio Aceite de inmersión
* Portaobjetos y cubreobjetos
* Servilletas o papel absorbente
* Hilos de colores
* Goteros
* Tijeras
* Cabello humano
* Granos de polen (flores con anteras
maduras)
* Papel periódico
* Calculadora
Nota: Los materiales que aparecen con asterisco (*) deben ser aportados por los
estudiantes.

6. PROCEDIMIENTO

6.1. CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA

Complete la siguiente tabla teniendo en cuenta los conceptos básicos de microscopias

anteriormente vistos. Utilice las formulas anteriormente vistas, realice cada
procedimiento y emplee bien las unidades de medida.

DIAMETRO AREA DEL

PODER DE PODER DE
OBJETIVO DEL CAMPO CAMPO
AUMENTO RESOLUCION
VISUAL VISUAL
4X
10X
40X
100X
Teniendo en cuenta las unidades de medidas y sus equivalencias responda:

¿Cuántos µm caben en 20 mm? ______________

¿Cuántas veces es menor 1 µm que 1 mm? ______________
¿Cuántos µm hay en 0.1 mm? ______________
¿Cuántas veces mayor es 0.647 mm que 1 µm? ______________
¿Si se supone que el diámetro de un grano de polen es de 0.05 mm, cuantos cabrán en
2600 µm, en 10 mm y en 150 nm?
_______________________________________________________________________
Ordene los microorganismos A, B y C en orden ascendente según su tamaño:
A: 130 µm; B: 0.006 mm; C: 54000 nm.
Para facilitar el cálculo, convierta todos los valores a una misma unidad y luego
ordénelos.
_______________________________________________________________________
6.2. PREPARACIÓN DE UNA MUESTRA EN FRESCO (PLACA HÚMEDA)

1. Con un gotero coloque una gota de agua en el centro del portaobjetos y después
coloque en ella una tira de hilo de color de aproximadamente 0.5 cm de largo. Cubra
la muestra con un cubreobjetos. Para cubrir, coloque el cubreobjetos en un ángulo
de 45o con relación al portaobjetos y déjelo caer suavemente, así se evita la
formación de burbujas que puedan dificultar la observación.
2. Si queda exceso de agua en la muestra después de cubrirla, séquela con papel
absorbente, al igual si el portaobjetos se moja por debajo, ya que la humedad pega
la placa a la platina impidiendo el desplazamiento de la misma.

Nota: las muestras húmedas no siempre se preparan con agua, en algunos casos se
utilizan otras sustancias como colorantes o soluciones adecuadas, dependiendo del
material a observar.

6.3. OBSERVACION DE UNA MUESTRA

Recuerde que de la forma como usted utilice el microscopio depende del éxito de sus
observaciones. Para la correcta observación de una muestra tenga en cuenta lo que se
menciona a continuación y la información expuesta en el numeral 3.3.

Colocación de la muestra: coloque sobre la platina la placa con el hilo que preparó
anteriormente y fíjela utilizando las pinzas que tiene el microscopio. Centre la muestra
en el orificio de la platina con las perillas del carro.

Iluminación del campo visual: después de colocar el objetivo de 4X en posición para

observar, abra lentamente el diafragma haciendo coincidir la apertura numérica del
objetivo (en este caso 0.10) con el mismo valor en la escala de la apertura del diafragma.
Suba hasta el tope la platina con el tornillo macrométrico. Puede regular la intensidad
lumínica utilizando la perilla del voltaje.
Uso de los objetivos: siempre que se observa una muestra se inicia con el objetivo de
menor aumento (4X), esto con el fin de obtener un buen enfoque. Para observar la parte
que se desea se debe centrar en el campo visual y se utilizan los objetivos de mayor
aumento (10X, 40X y 100X). Al cambiar de objetivos se debe ajustar la iluminación con
la escala de las aperturas numéricas como se hizo en el punto anterior. Recuerde que
para cambiar de objetivos, se mueve el revolver desde la base estriada, hasta sentir el
tope de los objetivos. Para ajustar la nitidez de la imagen utilice el tornillo micrométrico.

Obtención de la imagen: mueva los oculares para ajustar la visión a su distancia

interpupilar. Mirando por los oculares, aleje o acerque la platina con el tornillo
macrométrico hasta que aparezca la imagen y con el tornillo micrométrico ajuste la
nitidez de la imagen.

Resultado de la observación: después de cada observación siempre realice un esquema

y/o haga un registro fotográfico, siempre enmarcados en círculo. Al presentar los
resultados, cada registro o esquema debe tener indicado la siguiente información: tipo
de muestra, tipo de preparación, aumento del objetivo empleado y una breve
descripción de lo que se observa. Además, usando flechas indique los nombres de las
estructuras que se identifican.

Nota: tenga en cuenta que al enfocar con los objetivos de 4X y 10X la distancia entre el
objetivo y la preparación es mayor si se compara con la distancia entre estos mismos al
enfocar con el objetivo de 40x y 100X.

Teniendo en cuenta lo anterior, realice lo siguiente:

Después de observar la muestra del hilo con el objetivo de 4X, cambie a los objetivos de
10X y 40X respectivamente. Haga un esquema y/o registro fotográfico de cada una de
estas observaciones. Repita el mismo procedimiento con el cabello humano y lo granos
de polen. Compárelas entre sí y responda:

¿Qué relación encuentra entre sus tamaños? __________________________________

¿A qué se deben estas diferencias? __________________________________________

Repita el mismo procedimiento pero ahora con una letra asimétrica (no utilice letras
como O, X, S, ni letras mayúsculas como I, H, N y Z). Ponga la letra en la platina en
posición norma de lectura y realice los enfoques en 4X, 10X y 40X. Realice los esquemas
correspondientes y responda:

¿Cómo se ve la letra con relación a la posición de la letra en el portaobjetos? __________

Al observar en 10X y en 40X ¿Qué proporción aproximada de la letra puede ver con
relación a la obtenida con el objetivo de 4X? ___________________________________

Empleando cualquiera de las muestras, enfoque en 10X y sin dejar de mirar por los
oculares, desplace el carro hacia la derecha, luego hacia la izquierda, luego hacia
adelante y luego hacia atrás y responda:
Al hacer cada movimiento ¿en qué dirección se desplaza la imagen?
Derecha: __________________________ Izquierda: ___________________________
Adelante: __________________________ Atrás: ______________________________

Nota: deseche los portaobjetos y cubreobjetos rotos en el guardián. Como no se

empleó ningún colorante, puede lavar y reutilizar los portaobjetos y cubreobjetos
utilizados en esta clase. Tenga en cuenta que cada material tiene su propio recipiente
de desecho.

7. NIVEL DE RIESGO: 1 (riesgo bajo)

8. BIBLIOGRAFIA

Bernal, M. 2015. Prácticas de Laboratorio: Microscopia. Universidad Nacional de

Colombia, Facultad De Medicina. Consultado: 22 de Diciembre de 2015.
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Constantino, E., Santiago, M., Meza A., Albores, V. y Estrada, A. 2012. Manual de
Prácticas De Biología I. Colegio de Estudios Científicos y Tecnológicos del Estado
de Chiapas. CECyTECH. Pág. 18 - 25.
Cuervo, R., Gómez, R. y Narváez, M. 2010. Manual de prácticas de laboratorio - Biología.
Universidad de San Buenaventura Cali. Colombia. Pág. 37 - 41.
Curtis, H., Barnes, S., Massarini, A. y Schnek, A. 2008. Biología. 7a edición. Editorial
medica panamericana. Pág. 118 - 145.
Chataing, B. y Nieves, E. 2009. Manual de laboratorio de biología. Universidad de Los
Andes. Venezuela. Pág. 23 - 30.
Manjarrés, J. y Rodríguez, S. 2012. Manual de prácticas de laboratorio de biología.
Unidades Tecnológicas de Santander. Colombia. Pág. 40 - 51.
Montalvo, C. 2010. Microscopía. Universidad Nacional Autónoma de México.
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Ortega, L., Carrasco, C., Echeverry, G., Osorio, A. y Rico, S. 2012. Manual de laboratorio
de biología general. Universidad de Pamplona. Colombia. Pág. 8 - 19.
Solomon, E., Berg, L. y Martin, D. 2013. Biología. 9º Edición. Mcgraw-Hill /
Interamericana de México. Pág. 76 - 79.

9. ANEXOS: FUNDAMENTACIÓN

1. Consulte los principios físicos de la microscopia de luz.

2. Consulte qué otros tipos de microscopios existen.
3. ¿Cómo es la relación que hay entre la distancia de trabajo, es decir la distancia que
existe entre la muestra y los objetivos del microscopio óptico?
4. Al desplazar el portaobjetos y observar al mismo tiempo por los oculares, ¿en qué
sentido se mueve la imagen al utilizar los diferentes tornillos? ¿Cómo explica esto
desde el punto de vista de la óptica?