Contenido de Polifenoles y Actividad Antioxidante PDF
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Mariela Rincon
Central University of Venezuela
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All content following this page was uploaded by Mariela Rincon on 01 June 2014.
Universidad Central de Venezuela, Facultad de Farmacia, Unidad de Análisis de Alimentos. Caracas, Venezuela
RESUMEN. Los alimentos de origen vegetal en especial las frutas SUMMARY. Polyphenol content and antioxidant activity of
y los vegetales presentes en la dieta de acuerdo a estudios several seeds and nuts. Foods from plant origin not only provide
epidemiológicos realizados, pueden ejercer un efecto protector con- human diet with certain antioxidant vitamins (C, E and β-carotene),
tra algunas enfermedades tales como el cáncer y trastornos but also a complex mixture of polyphenols, with antioxidant activity.
cardiovasculares. Esta propiedad se debe a la presencia de compues- Numerous studies have been focused on the protective and preventing
tos bioactivos con capacidad antioxidante como la vitamina C, E, β- effect of this antioxidant activity on certain degenerative illnesses
caroteno, y una mezcla compleja de compuestos fenólicos. El obje- such as cardiovascular, cancer, and neurological diseases, cataracts
tivo de este trabajo fue estudiar en una serie de productos de origen and oxidative stress dysfunctions. The objective of this work was to
vegetal, la relación entre el contenido de polifenoles totales y la ac- evaluate total polyphenol content and antioxidant activity of several
tividad antioxidante. Los polifenoles fueron determinados luego de seeds, nuts, or grains such as Theobroma cacao, Campsiandra comosa
su extracción en solución metanólica por el método de Folin- Benth (chiga), Sorghum bicolor, L. Moench, Melicoccus bijugatus
Ciocalteau. La actividad antioxidante fue evaluada usando los méto- (genip). Total polyphenol content was assessed by the Folin-
dos del β-caroteno/linoleato, el poder reductor, y la actividad Ciocalteau method and the antioxidant activity by the β.carotene/
antirradical. Los productos estudiados fueron las semillas y/o linoleate, reducing power, and the anti-radical activity methods.
pericarpios de: Theobroma cacao (cacao), Campsiandra comosa Results showed genip pericarp with the lowest polyphenol content
Benth (chiga), Sorghum bicolor, L. Moench (sorgo), Melicoccus (1.40 gGAE/100g), and cacao beans with the highest (6.66 gGAE/
bijugatus (mamón). El pericarpio del mamón presentó el más bajo 100g). Reducing power of cacao beans was also the highest and
contenido de polifenoles (1,40 EAGg/100g) y el cacao el más alto similar to the reducing power of 5,80g ascorbic acid /100g, followed
(6,66 EAGg/100g). El poder reductor del cacao resultó ser el más by Campsiandra comosa. Moreover, Campsiandra comosa and cacao
alto y equivalente al poder reductor de 5,80g de ácido ascórbico / seeds presented an antioxidant activity comparable to that of the
100g, seguido por la chiga. Asimismo, las semillas de chiga y de butylhydroxianisol, a synthetic antioxidant. The highest anti-radical
cacao presentaron una actividad antioxidante, comparable a la del activity was shown by Campsiandra comosa with an EC50 of 2.67 g/
butil hidroxianisol antioxidante sintético. El mayor poder antirradical gDPPH. Total polyphenol content shows a good correlation with
lo presentó la semilla de chiga con un EC50 de 2,67 g/gDPPH. El the antioxidant activity. Moreover, these seeds might have the same
contenido de polifenoles totales se correlaciona bien con la activi- health beneficial effects attributed to other fruits and vegetables.
dad antioxidante; asimismo, estas semillas o granos podrían tener Key words: Polyphenols, antioxidant activity, Theobroma cacao,
los efectos beneficiosos para la salud atribuidos a otras frutas y ve- Melicoccus bijugatus, Campsiandra comosa, Sorghum bicolor .
getales.
Palabras clave: Polifenoles, actividad antioxidante, Theobroma
cacao, Melicoccus bijugatus, Campsiandra comosa, Sorghum
bicolor.
303
304 PADILLA, et al.
La actividad antioxidante, consecuencia de la presencia y Poder reductor. Se determinó por el método de Yen y
estructura química de los polifenoles, ha centrado interés en Duh (7) tomando 1 ml del extracto metanólico, y comparan-
los posibles efectos beneficiosos para la salud de los alimen- do la absorbancia leída contra una curva patrón de ácido
tos y bebidas ricos en polifenoles (2). Los antioxidantes pro- ascórbico, expresando los resultados en equivalentes de áci-
tegen el organismo de los radicales libres, moléculas altamen- do ascórbico (EAAs) g/100g de muestra seca.
te reactivas que pueden daòar el organismo a nivel celular.
Este daòo producido por los radicales libres puede aumentar Método de decoloración del â-caroteno: La actividad
el riesgo al desarrollo de cáncer, enfermedades antioxidante de los extractos fue evaluada por medio del sis-
cardiovasculares y otras enfermedades degenerativas. Los tema modelo del â-caroteno-linoleato (8) modificado en el
antioxidantes desactivan los radicales libres, minimizando el sentido que se utiliza el mismo extracto metanólico y no se
daòo y protegiendo el organismo de este tipo de enfermeda- realiza una extracción de las muestras con etanol. 1ml de una
des. Esto ha traído interés en los antioxidantes presentes de solución de â-caroteno en cloroformo (0,2 mg/mL) se mez-
forma natural en la dieta humana (3). Todas las semillas utili- cla en un balón aforado de 50ml con 20 mg de ácido linoleico
zadas en el estudio son comestibles, aun en el caso de las se- y 200mg Tween 40. Se evapora el cloroformo con corriente
millas de mamón las cuales son usadas por los indígenas de la de nitrógeno, al residuo se aòaden lentamente con agitación
región del Orinoco (Venezuela y Colombia) en casos de dia- vigorosa, 10 ml de agua destilada y oxigenada por agitación,
rrea en niños y en la forma de harina en la preparación de pan para formar la emulsión, se lleva a volumen con agua destila-
para sustituir el casabe (4). da. Se toman alícuotas de 4ml de la emulsión y se colocan en
El objetivo de este trabajo fue estudiar en una serie de tubos de ensayo que contienen: a) 0,2 ml del extracto
productos de origen vegetal Theobroma cacao, Campsiandra metanólico de la muestra, b) 0,2 ml de una solución de
comosa Benth (chiga), Sorghum bicolor, L. Moench (sorgo), (100ppm) BHA en metanol que se usa como comparación, c)
Melicoccus bijugatus (mamón), el contenido de polifenoles 0,2ml de metanol como control y. d) un blanco con 4 ml de la
totales, su relación con la actividad antioxidante, además de emulsión sin adición de â-caroteno y 0,2 ml de metanol. Se
aportar datos para la ampliación de la tabla de composición leen las absorbancias a 470nm de todos los tubos al tiempo
de alimentos. cero (t=0). Los tubos se cubren con papel de aluminio, se colo-
can en un baño de agua a 500C y se leen las absorbancias cada
MATERIALES Y METODOS 15min hasta desaparición del color del â-caroteno en el tubo
control. La extracción se realiza por duplicado y las lecturas de
Obtención y preparación de las muestras: Las muestras las absorbancias se realizan por triplicado para todos los ensa-
secas de cacao fueron obtenidas en Caucagua, Edo Miranda, yos. Todos los reactivos usados fueron grado analítico.
la chiga en la región del alto Apure, el sorgo variedad Himeca La actividad antioxidante de los extractos se basó en tres
400 donado por la empresa SEMINACA (Palo Negro, Aragua) parámetros diferentes: la actividad antioxidante (AA), la
y el mamón en el mercado en Caracas. Las semillas de mamón relación de la velocidad de oxidación (Ror) y el coeficiente
se liofilizaron. Tanto las semillas de cacao como de mamón se de la actividad antioxidante (CAA).
desgrasaron previamente, a temperatura ambiente con hexano. El índice de actividad antioxidante (AA) fue determinada
Todas las muestras fueron sometidas a molienda y tamizadas como el porcentaje de inhibición relativa al control,
por un tamiz malla 60, y luego se les determinó el contenido
de humedad a1000 C. Aa = [( Rcontrol − Rmuestra ) /( Rcontrol )]100
TABLA 1
Contenido de polifenoles totales y poder reductor de diferentes semillas cultivadas en Venezuela expresados en base seca
M. bijugatus C. comosa
Parámetro S. bicolor T. cacao
(Semilla) (Pericarpio) (Semilla) (Pericarpio)
Polifenoles 3.64±0.19
2,34±0,032 2,94±0,085 1.40±0.053 4,45±0,022 6,66 ±0,044
(EAGg/100g) 6
Poder Reductor 3,67±0,15
0,59±0,025 1,22±0,020 2,02±0,078 3,79±0,053 5,80g±0,084
(EAAsg/100g) 0
Existen una variedad de métodos para la determinación En la Figura 1(A) se puede observar que el pericarpio de
de la actividad antioxidante, entre ellos el método de chiga presenta una actividad antioxidante más alta que el BHA
decoloración del β-caroteno, en el cual se produce la oxidación y la semilla de chiga similar a éste. En la Figura.1 (B) se ob-
del β-caroteno en presencia del ácido linoleico. La Figura 1 serva que la semilla de cacao es la que presenta una actividad
presenta el efecto de los extractos comparados con el BHA antioxidante ligeramente mayor que el BHA. Las harinas del
en los productos estudiados semillas y/o pericarpios de: T. chiga y de cacao presentaron la mayor actividad antioxidante,
cacao (cacao), C. comosa Benth (chiga), S. bicolor, L. Moench. comparable a la del butil hidroxianisol (BHA) antioxidante
(Sorgo), y M. bijugatus (mamón). sintético.
306 PADILLA, et al.
FIGURA 1
Comparación de la actividad antioxidante según el método del β-caroteno/linoleato
0,9 Control
0,8 BHA
0,4
0,3
0,2 (A)
0,1
0
0 20 40 60 80
minutos
0,50
0,45
0,40
0,35
Control
Absorbancia
0,30 BHA
0,25 MAMON PERIC
0,20 MAMON SEM
CACAO
0,15
0,10
(B)
0,05
0,00
0 20 40 60 80 100
minutos
Cuando la capacidad antioxidante Tabla 2 se expresa como ción de la oxidación (AA) mayor coeficiente de actividad
el coeficiente de actividad antioxidante (CAA), el índice de ac- antioxidante (CAA), presentando el cacao y el pericarpio de la
tividad antioxidante (AA) o porcentaje de inhibición de la oxi- chiga valores similares al BHA, antioxidante sintético utili-
dación; se puede observar que a mayor porcentaje de inhibi- zado en la industria de alimentos.
TABLA 2
Capacidad antioxidante de extractos de semillas según el método de
decoloración del â-caroteno
Activ. Antiox.
Muestra Coef.Activ.Antiox.(CAA) Veloc. Oxid. (ROR)
(Aa)
En la Tabla 3 la actividad antirradical de las semillas y actividad antioxidante se expresa como el TEC50, que repre-
granos muestra que de acuerdo con los datos del EC50, que senta el tiempo necesario para alcanzar el equilibrio a la con-
representa la cantidad de antioxidante necesaria para produ- centración de EC50, las semillas de mamón son las que alcan-
cir una reducción del 50% del radical libre presente (DPPH*), zan este 50% de inhibición en el menor tiempo, mientras que
el pericarpio de la chiga presenta la mejor actividad el pericarpio de la chiga es el que obtiene el 50% inhibición
antirradical, mientras que el sorgo tiene la menor actividad, en el mayor tiempo. En cuanto a la eficiencia antirradical
ya que existe una relación inversamente proporcional, a ma- (EA) dato que relaciona el EC50 y el TEC50, las semillas de
yor valor del EC50 menor actividad antirradical (5). Cuando la mamón presentan la más alta eficiencia antirradical.
TABLA 3
Actividad antirradical de diversas semillas y granos por el método del radical libre 1,1-difenil-2-picrilhidracil (DPPH)*
1
Promedio ± desviación estándar
ceso de decoloración por acción sobre los radicales libres que REFERENCIAS
se forman en el sistema (13). El coeficiente de actividad
antioxidante (CAA) aumenta directamente con el aumento del 1. Weisburger JH. Mechanism of action of antioxidants as exem-
valor del índice de actividad antioxidante (AA) o porcentaje plified in vegetables, tomatoes, and tea. Food Chem. Toxicol,
de inhibición de la oxidación. Como se puede observar en la 1999; 37, 943-948.
2. Scalbert A & Williamson G. Dietary intake and bioavailability
Tabla 2 a mayor porcentaje de inhibición de la oxidación ma-
of polyphenols. J Nutr. 2000; 130:2109S-2114S.
yor coeficiente de actividad antioxidante (AA).
3. Vinson JA, Hao Y, Su X & Zubik L. Phenolic antioxidant quan-
En estudio realizado en avellanas (15) se encontró que el tity and quality in foods: vegetables. J Agric Food Chem, 1998;
CAA depende del solvente de extracción obteniendo mejores 46, 3630-3634.
resultados con butanol y metanol. Estos extractos presentaron 4. Bystrom LA, Lewis BA, Brown DL, Rodríguez E, Obendorf
un CAA comparable al de antioxidantes sintéticos BHA y BHT. RL. Characterisation of phenolics by LC–UV/Vis, LC–MS/
El solvente de extracción utilizado en este estudio fue una MS and sugars by GC in Melicoccus bijugatus Jacq. ‘Mont-
solución metanólica y los resultados obtenidos también fueron gomery’ fruits. Food Chem, 2008; 111:1017-1024.
comparables a los del BHA utilizado. Los valores de la relación 5. Sánchez-Moreno C, Larrauri JA, Saura-Calixto F. A procedure
to measure the anti-radical efficiency of polyphenols. J Sci Food
de la velocidad de reacción ROR y de los coeficientes de
Agric. 1998; 78:270-276.
actividad antioxidante (CAA) respaldan el índice de actividad
6. Singleton VL, Orthofer R & Lamuela-Raventos RM. Analysis
antioxidante (AA). Cuando el ROR, que es la medida de la fuerza of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants
antioxidante es mayor de 1, la oxidación se produce más by means of the Folin–Ciocalteu reagent. Meth Enzymol, 1999;
rápidamente en presencia de un inhibidor que en su ausencia 299, 152–178.
(16). Por lo tanto mientras más bajo el ROR mayor el poder 7. Yen GC & Duh PD. Antioxidant properties of methanolic ex-
antioxidante como se puede observar en la Tabla 2. tracts from peanut hulls. JAOCS, 1993; 70:383-386.
Cuando la actividad antioxidante se determina como la 8. Suja KP, Jayalekshmy A, Arumughan C. Antioxidant activity
actividad antirradical utilizando el radical DPPH* (Tabla 3), of sesame cake extract. Food Chem. 2005; 91:213-219.
9. Yu L, Perret J, Davy B, Wilson J and Melby CI. Antioxidant
si se toma en cuenta el TEC50, tiempo que el antioxidante re-
properties of cereal products. 2002. J Food Sci. 67: 2600-2603.
quiere para causar una inhibición de 50% del DPPH*, los va-
10. Garrido I, Monagas M, Gómez-Cordovés C and Bartolomé B.
lores encontrados permiten clasificar los antioxidantes pre- Polyphenols and antioxidant properties of almond skins: In-
sentes en la mayoría de las muestras como “lentos” con ex- fluence of industril processing. 2008. J Food Sci. 73:C106-
cepción del mamón que se clasificaría como intermedio to- C115.
mando en consideración la clasificación propuesta para algu- 11. Villareal-Lozoya JF, Lombardini L, Cisneros-Zeballos L. Phy-
nos compuestos polifenólicos (5). Esta clasificación conside- tochemical constituents and antioxidant capacity of different
ra al BHA, resveratrol y quercetina como antioxidantes lentos pecan [Carya illinoinensis (Wangenh.) K. Koch] cultivars 2007.
pues presentaron TEC50 de 103,85; 60,46 y 63,28 respectiva- Food Chem. 102:1241-1249.
12. Duh PD, Du PC & Yen GC. Action of methanolic extract of
mente. Si se consideran los valores de EA, que relaciona el
mung hulls as inhibitors of lipid peroxidation and non lipid
EC50 y el TEC50, el poder antioxidante en los extractos de ca-
oxidative damage. Food Chem. Toxicol, 1999; 37:1055-1061.
cao, chiga y pericarpio de semillas de mamón se clasificaría 13. Jayaprakasha GK, Singh RP & Sacariah KK. Antioxidant ac-
como alto porque presentan valores de EA entre 5 x 10-3 y 10 x tivity of grape seed (Vitis vinifera) extracts on peroxidation
10-3. models in vitro. Food Chem, 2001; 73,285-290.
De acuerdo a los resultados se puede decir que el contenido 14. Ordoñez AAL, Gómez JD, Vattuone MA, Isla MI. Antioxidant
de polifenoles totales se correlaciona bien con la actividad activities of Sechium edule (Jacq) Swartz extracts. Food Chem,
antioxidante expresada como poder reductor (EAAs g/100g) 2006; 97:452-458.
(Tabla1) y como actividad antioxidante (Aa) (Tabla 2) 15. Moure A, Franco D, Sineiro J, Dominguez H, Nuòez MJ, Lema
JM. Antioxidant activity of extracts from Gevuina avellana
presentando coeficientes de correlación r2 de 0,768 y 0,734
and Rosa rubiginosa defatted seeds. Food Res Intern. 2001;
respectivamente; lo que significa que a mayor presencia de
34:103-109.
polifenoles mayor actividad antioxidante, sin embargo la 16. Marinova EM, Yanishlieva N, Kostova IN. Antioxidative ac-
calificación del poder antioxidante depende del tipo de método tion of the methanolic extract and some hydroxycoumarins of
usado y el parámetro con el cual se mide. Estos resultados Fraxinus ornus bark. Food Chem 1994; 51:125-132.
sugieren que el consumo de estos productos podría tener los
mismos efectos beneficiosos para la salud que han presentado Recibido: 02-07-2008
ciertas frutas y vegetales además de su posible uso como Aceptado: 19-09-2008
materia prima para la obtención de antioxidantes naturales de
utilidad en la industria alimentaria, farmacéutica y cosmética.