Informe Final

INFORME FINAL
PRÁCTICA DE LABORATORIO № 4 (PBO-1)
DETERMINACIÓN DE INDICADORES CINÉTICOS

ENZIMÁTICOS
NOMBRE Natalia Guerrero MATRÍCULA 100474092

SECCIÓN 11 DÍA Sábado HORA 5pm PROFESOR: Nicolas Vásquez
1. De acuerdo con sus resultados de ensayo de la alfa amilasa en orina a distintos pH.
Tipo de hidrólisis
Buffer 1 pH (3.5) No hubo Hidrolisis
Buffer 2 pH ( 7.0) Hidrolisis Total
Buffer 3 pH (10.5) Hidrolisis parcial
a) ¿Cuál es el pH óptimo de la alfa-amilasa?

pH optimo es 7.0
b) Fundamente su respuesta
Se tuvo como resultado 3 tubos cada uno con colores distintos, donde se vio que el 3.5 presento
una Hidroxis Parcial
2. De acuerdo con sus resultados del ensayo de la alfa - amilasa en orina a distintas
temperaturas
Tipo de hidrólisis
Hielo (0 grados) Hidrolisis Parcial
Ebullición (100) 0 C No Hidrolisis
37 grados 0 C Hidrolisis total
a) ¿Cuál es la temperatura adecuada de la alfa amilasa?

35%
b) Fundamente su respuesta
Las enzimas a temperaturas muy alta se desnaturalizan y pierden su función , las enzimas
humanas suelen perderlo alrededor de los 60 %
3. Según el color, identifique el tipo de hidrólisis y las respectivas concentraciones (1%, 30%,
100%)
Tubo № Tipo de Hidrólisis Concentraciones de la Orina (1%, 30%, 100%)

M- 300 No Hirolisis 1%,
M- 301 Hidrosilis Parcial 30%,
M- 302 Hidrosilis total 100%
a) ¿Cuál es la concentración adecuada de la enzima a la cual logró su máxima actividad?
100% por mayor concentración de la enzima.
b) Justifique su respuesta
Se observo mayor Hidrolisis Total

Nombre: Natalia Guerrero M
Matrícula: 100474092
Sección: 11
Horario: sábados 5pm
Correo electrónico: danielaguerrero433@gmail.com
Práctica No. 4: Determinadores cinéticos enzimáticos

(práctica)
1. ¿Qué son las enzimas? ¿Cuándo fueron descubiertas?
Las enzimas son polímeros biológicos que catalizan las reacciones químicas que hacen
posible la vida.
En 1897 Eduard Buchner comenzó a estudiar la capacidad de los extractos de levadura

para fermentar azúcar a pesar de la ausencia de células vivientes de levadura. Llamó a
la enzima que causa la fermentación de la sacarosa, “zimasa”. En 1907 recibió el Premio
Nobel de Química "por sus investigaciones bioquímicas y el haber descubierto la
fermentación libre de células “
2. ¿Cuáles su función principal y como lo hace?
Su principal función es como catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse

en una reacción, aumentan notablemente su velocidad. En estas reacciones, las
enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se
convierten en moléculas diferentes denominadas productos.
3. Mencione catalizadores biológicos y no biológicos y establezca diferencias.
Se consideran biocatalizadores las enzimas, las hormonas y las vitaminas.
Un catalizador biológico, como puede ser una bacteria, entrega más pureza al realizarse
la reacción, y las enzimas que utiliza se regeneran. En cambio, con el catalizador
químico, el tiempo de vida es corto, puede ser útil, a veces la pureza no es tan elevada
como en el biológico.
4. ¿De qué naturaleza pueden ser las enzimas?
Comúnmente son de naturaleza proteica, pero también de ARN (ver ribozimas). A

su vez, esta presencia depende de la regulación de la expresión génica
correspondiente a la enzima.
5. Mencione la importancia de las enzimas en las reacciones químicas, ¿qué

pasaría si no existiesen las enzimas?
Las enzimas son proteínas que catalizan, es decir que aceleran reacciones
bioquímicas que ocurren de manera natural en todos los organismos vivos. Cada
reacción química en un ser vivo, ya sea unicelular o multicelular, requiere la presencia
de uno o más biocatalizadores
(enzimas), pues si no existieran éstas ocurrirían en desorden total.
6. Hable sobre la especificidad de sustratos.
La especificidad de sustrato es absoluta cuando un enzima sólo puede catalizar la

transformación de una sustancia (en algunos casos sólo puede unirse a uno de los
isómeros D o L de una misma sustancia, pero no a los dos); se habla de especificidad de
grupo cuando una misma enzima puede catalizar la transformación de un grupo de
sustancias que tienen un tipo de enlace determinado (por ejemplo, la α-glucosidasa tiene
acceso a glúcidos con enlace α), o que son portadoras de determinado grupo (las
fosfatasas separan los grupos fosfatos de cualquier tipo de molécula).
Consiste en que una enzima puede actuar sobre un sustrato o un grupo de sustratos
relacionados, pero no sobre otros.
7. Nomenclaturas de las enzimas (diferentes tipos)
Hay varios criterios mediante los cuales se han asignado los nombres de las enzimas:
 Nombres particulares.
Antiguamente, las enzimas recibían nombres particulares, asignados por su

descubridor. Al ir aumentando el número de enzimas conocidos. se hizo
necesaria una nomenclatura sistemática que informara sobre la acción
específica de cada enzima y los sustratos sobre los que actuaba. Nomenclatura
de EnzimasNomenclatura de Enzimas Nombres particulares
 Nombre sistemático.
El nombre sistemático de una enzima consta actualmente de 3 partes:

▪ El sustrato preferente
▪ El tipo de reacción realizado
▪ Terminación "asa”
 Código de la nomenclatura de enzimas (enzyme comission) de la Unión

Internacional de Bioquímica y Biología Molecular (UIBMB).
El nombre de cada enzima puede ser identificado por un código numérico, encabezado
por las letras EC (enzyme commission).
• Seguidas de cuatro números separados por puntos.
8. ¿Cómo se clasifican las enzimas y cuál es el organismo que se encarga de esta

clasificación?
Las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos:
 Oxidorreductasas
 Transferasas
 Hidrolasas
 Liasas
 Isomerasas
 Ligasas
9. Hable sobre la alfa- amilasa (peso molecular, cantidad de aminoácidos,
clasificación, pH óptimo, localizaciones y función) y luego clasifíquela dentro de
los grupos anteriormente mencionados.
La α-amilasa (alfa-amilasa) es una enzima que se encuentra presente en la saliva, en

la secreción pancreática, en la orina y en el suero. Su actividad se puede estimar
midiendo la transformación de su sustrato el almidón.
El rango de peso molecular para las α-amilasas oscila entre 10 y 210 kDa (2).
Cantidad de aminoácidos
Se compone de 496 aminoácidos, se encuentra principalmente en dos iso- formas,

una glucosilada con peso molecular de 62 kDa (kilodaltons) y otra isoforma no
glucosilada con peso molecular de 56 kDa (5,7).
pH óptimo
7.0
Localizaciones y función
No se localiza solamente en la saliva, también se encuentra en el páncreas,

llamándose por tanto “α-amilasa pancreática”. En este lugar la enzima participa en
mayor parte en la digestión de los carbohidratos ingeridos por la dieta.
10. ¿Qué y cuáles son los modelos enzimáticos, que plantea cada uno y quién
los postuló?
Los modelos de acción enzimática son:
1.- Modelo llave-cerradura: supone que la estructura del sustrato y la del sitio activo
son exactamente complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una
cerradura.
2.- Modelo encaje inducido: Estudios posteriores sugirieron que el sitio activo es
mucho más flexible que una cerradura. La interacción física entre las moléculas de
enzima y sustrato produce un cambio en la geometría del centro activo, mediante la
distorsión de las superficies moleculares. Este modelo llamado encaje inducido
impondría cierta tensión a las moléculas reaccionantes, facilitando aún más la
reacción.
11. ¿Qué es la cinética enzimática y por qué es importante?
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.

Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo de la reacción
catalítica y de la especifidad del enzima.
12. Qué es la KM o constante de Michaelis Menten.
Corresponde a la concentración de sustrato con la cual la velocidad de reacción

enzimática alcanza un valor igual a la mitad de la velocidad máxima.
13. ¿Cómo afecta la temperatura a la actividad enzimática? ¿Cómo se

muestra la curva del gráfico?
Los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

químicas: por cada 10ºC de incremento, la velocidad de
reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por
enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser
proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor.
14. ¿Cómo afecta el pH la actividad enzimática? ¿Cómo se muestra la curva

del gráfico?
La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

Desviaciones de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden
afectar drásticamente su actividad.
15. ¿Cómo afecta la concentración de enzimas a la actividad enzimática?
¿cómo se muestra la curva de gráfico?
Aumenta la velocidad de la reacción catalizada. A

concentraciones enzimáticas más altas, más moléculas están
disponibles para unirse al sustrato y catalizar la reacción.
16. ¿Cómo afecta la concentración de sustrato a la actividad enzimática?

¿Cómo se muestra la curva del gráfico?
Si la concentración del sustrato es alta, puede saturar todas las

moléculas de la enzima. Entonces la velocidad de la reacción alcanza
su máximo y la adición de más sustrato no aumenta más la velocidad
de la reacción.
17. Defina:
Saturación enzimática: La reacción química catalizada por una enzima

utiliza la misma cantidad de sustrato y genera la misma cantidad de producto
que una reacción no catalizada. En ese momento se habrá alcanzado el
punto de saturación de la enzima y, aunque se añada más sustrato, no
aumentará más la eficiencia de la misma.
Desnaturalización: Las enzimas se pueden desnaturalizar, es decir su

estructura puede modificarse irreversiblemente como resultado de altas
temperaturas o por el cambio del pH óptimo. Como resultado las enzimas no
realizan catalizaciones, estén insolubles y formen un precipitado.
Enzimática: Perteneciente o relativo a las enzimas.
Apoenzima: La apoenzima es la parte proteica de una enzima, desprovista de

los cofactores o coenzimas que puedan ser necesarios para que la enzima sea
funcionalmente activa.
Holoenzima: es una enzima que está formada por una apoenzima y un

cofactor, que puede ser un ion o una molécula orgánica compleja unida (grupo
prostético) o no (una coenzima). En resumidas cuentas, es una enzima
completa y activada catalíticamente.
Coenzima: son cofactores orgánicos no proteicos, termoestables, que unidos a

una apoenzima constituyen la holoenzima o forma catalíticamente activa de la
enzima. Tienen en general baja masa molecular (al menos comparada con la
apoenzima) y son claves en el mecanismo de catálisis, por ejemplo, aceptando
o donando electrones o grupos funcionales, que transportan de una enzima a
otra.
Cofactor: Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja

masa molecular, necesario para la acción de una enzima. El cofactor se une a
una estructura proteica, denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-
cofactor recibe el nombre de holoenzima
.
18. Mencione vitaminas que actúen como cofactores enzimáticos.
 Vitamina B1 o tiamina: su derivado, el pirofosfato de tiamina es esencial para el

metabolismo energético de los glúcidos.
 Vitamina B2 o riboflavina: sus derivados son nucleótidos Coenzimaticos con
gran poder reductor como el FAD y el FMN.
 Vitamina B3 o niacina: sus derivados son nucleótidos coenzimáticos con gran
poder reductor como el NAD+ o el NADP+.
 Vitamina B5 o ácido pantoténico: su principal derivado es la coenzima A (Co-
A), con gran importancia en diversos procesos metabólicos
19. Mencione minerales que actúen como coenzimas.
Existen otros muchos minerales como el molibdeno, el vanadio, la sílice, el selenio

y el níquel que participan, en mayor o menor medida, en muchos procesos
catalíticos. Medida, en muchos procesos catalíticos.
Los minerales, a su vez, son importantes en su justa dosificación porque una

carencia ocasiona que las enzimas no puedan activarse y ejercer su función
correctamente, pudiendo aparecer enfermedades graves o leves dependiendo de
la importancia de la enzima en la ruta metabólica.
20. ¿Cuál es el tiempo de vida de las enzimas?
Para poder interpretar los tiempos de desaparición de esas actividades enzimáticas aumentadas.
Por ejemplo si estamos frente al aumento plasmático de una enzima de vida media larga, llevará
más tiempo la normalización de sus valores desde el momento de su entrada al plasma. En
cambio, si están aumentado los valores de cierta ez y su vida media es corta, esta se normaliza
más rápidamente.

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PRÁCTICA DE LABORATORIO № 4 (PBO-1)

DETERMINACIÓN DE INDICADORES CINÉTICOS

NOMBRE Natalia Guerrero MATRÍCULA 100474092

a) ¿Cuál es el pH óptimo de la alfa-amilasa?

a) ¿Cuál es la temperatura adecuada de la alfa amilasa?

Tubo № Tipo de Hidrólisis Concentraciones de la Orina (1%, 30%, 100%)

a) ¿Cuál es la concentración adecuada de la enzima a la cual logró su máxima actividad?

100% por mayor concentración de la enzima.

Se observo mayor Hidrolisis Total

Horario: sábados 5pm

Correo electrónico: danielaguerrero433@gmail.com

Práctica No. 4: Determinadores cinéticos enzimáticos

1. ¿Qué son las enzimas? ¿Cuándo fueron descubiertas?

En 1897 Eduard Buchner comenzó a estudiar la capacidad de los extractos de levadura

2. ¿Cuáles su función principal y como lo hace?

Su principal función es como catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse

Se consideran biocatalizadores las enzimas, las hormonas y las vitaminas.

4. ¿De qué naturaleza pueden ser las enzimas?

Comúnmente son de naturaleza proteica, pero también de ARN (ver ribozimas). A

5. Mencione la importancia de las enzimas en las reacciones químicas, ¿qué

6. Hable sobre la especificidad de sustratos.

La especificidad de sustrato es absoluta cuando un enzima sólo puede catalizar la

Antiguamente, las enzimas recibían nombres particulares, asignados por su

El nombre sistemático de una enzima consta actualmente de 3 partes:

 Código de la nomenclatura de enzimas (enzyme comission) de la Unión

• Seguidas de cuatro números separados por puntos.

8. ¿Cómo se clasifican las enzimas y cuál es el organismo que se encarga de esta

Las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos:

La α-amilasa (alfa-amilasa) es una enzima que se encuentra presente en la saliva, en

El rango de peso molecular para las α-amilasas oscila entre 10 y 210 kDa (2).

Se compone de 496 aminoácidos, se encuentra principalmente en dos iso- formas,

No se localiza solamente en la saliva, también se encuentra en el páncreas,

Los modelos de acción enzimática son:

11. ¿Qué es la cinética enzimática y por qué es importante?

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.

12. Qué es la KM o constante de Michaelis Menten.

Corresponde a la concentración de sustrato con la cual la velocidad de reacción

13. ¿Cómo afecta la temperatura a la actividad enzimática? ¿Cómo se

Los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

14. ¿Cómo afecta el pH la actividad enzimática? ¿Cómo se muestra la curva

La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

Aumenta la velocidad de la reacción catalizada. A

16. ¿Cómo afecta la concentración de sustrato a la actividad enzimática?

Si la concentración del sustrato es alta, puede saturar todas las

Saturación enzimática: La reacción química catalizada por una enzima

Desnaturalización: Las enzimas se pueden desnaturalizar, es decir su

Enzimática: Perteneciente o relativo a las enzimas.

Apoenzima: La apoenzima es la parte proteica de una enzima, desprovista de

Holoenzima: es una enzima que está formada por una apoenzima y un

Coenzima: son cofactores orgánicos no proteicos, termoestables, que unidos a

Cofactor: Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja

 Vitamina B1 o tiamina: su derivado, el pirofosfato de tiamina es esencial para el

19. Mencione minerales que actúen como coenzimas.

Existen otros muchos minerales como el molibdeno, el vanadio, la sílice, el selenio

Los minerales, a su vez, son importantes en su justa dosificación porque una

20. ¿Cuál es el tiempo de vida de las enzimas?

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