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Diplomado en Ozonoterapia y Factores
de Crecimiento Ozonizados. Doc: CGF Versión: Castellano Fecha: 11 de Feb. al 11 de Abril 2018 info@aepromo.org www.aepromo.org Paginas 1 of 5 info@isco3.org www.isco3.org
PREPARACIÓN DEL CGFO3 Y AISLAMIENTO DE CÉLULAS CD34+. SU
APLICACIÓN EN TRAUMATOLOGÍA
Dra. Adriana Schwartz
Objetivo El propósito de este procedimiento operativo estandarizado (SOP) es describir los procedimientos estandarizados para preparar Concentrados de Factores de Crecimiento (CGF) y Gel de Plasma rico en colágeno para aplicaciones en traumatología. Es importante apuntar que: El INFORME/V1/23052013 Informe de la Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios sobre el uso de Plasma Rico en Plaquetas con fecha de publicación: 23 de mayo de 2013 declara que: “Atendiendo a la composición del plasma rico en plaquetas, el mecanismo de acción postulado así como a sus fines o indicaciones, cabe considerar “la aplicación del PRP como un medicamento de uso humano”.
Introducción Los Concentrados de Factores de Crecimiento es un biomaterial autólogo denominado "segunda generación de concentrado de plaquetas" CGF es una nueva tecnología de centrifugación en gradiente y diferenciada, que hace posible la concentración y extracción de factores de crecimiento tales como: TGF-b1, VEGF y células CD 34+.
Responsabilidades Este SOP debe ser aplicado en un entorno clínico controlado (cámara de flujo laminar o quirófano, solamente por un médico debidamente cualificado, formado y con experiencia para llevar a cabo esta tarea. El material biológico (CGF y gel de plasma), lo puede preparar un profesional calificado en: bioquímica, biología, farmacia clínica o enfermeras, pero la infiltración y aplicación debe realizarse únicamente por un médico entrenado.
Equipamiento
a) Dispositivos e instrumentos médicos
Medifuge Sifradent R (centrifugadora diferencial en gradiente) A.P.A.G. (sistema de formación de gel y activador de colágeno) Generador de Ozono con fuente de oxígeno medicinal Pinza formadora de membrana Gradilla de acero inoxidable para tubos de ensayo Cápsula de Petri (cristal) Pinzas
ADRIANA SCHWARTZ. CLINICA FIORELA. 2015
adriana@aepromo.org Diplomado en Ozonoterapia y Factores de Crecimiento Ozonizados. Doc: CGF Versión: Castellano Fecha: 11 de Feb. al 11 de Abril 2018 info@aepromo.org www.aepromo.org Paginas 2 of 5 info@isco3.org www.isco3.org
Tijeras
b) Fungibles Guantes estériles Gasas estériles Clorhexidina Manguito Vacutainer con palomilla, 21G Paño de mesa estéril Contenedor para desechos biológicos y no biológicos. Tubos de tapa roja, siliconados, esterilizados y al vacío. Tubos de tapa blanca, esterilizados y al vacío. Topes de jeringa esterilizados Jeringas de 20 mL Jeringas de 10 mL Jeringas de 3 mL Jeringas de 1 mL Heparina Sódica 50 UI Cloruro cálcico 10% Llave de tres pasos Spinocan 22G x 3 ½” 0.7 x 88 mm Aguja de carga IM
Preparación CGFO3 Previo a la extracción de sangre, cargar cada tubo (10 mL) de tapa blanca con 30 UI de Heparina Sódica. Extracción de sangre. La cantidad de sangre a extraer será en dependencia de la articulación o zona a tratar. Hombro: 30-40 mL de sangre. Se obtendrán (6-8) mL de CGF. Codo y muñeca: 20 mL de sangre. Se obtendrán 4 mL de CGF Cadera: 50-60 mL de sangre. Se obtendrán (10-12) mL de CGF. Rodilla: 40 mL de sangre. Se obtendrán 8 mL de PRP. 4 mL x rodilla. Paravertebral: (40-60) mL de sangre. Se obtendrán (8-12) mL de PRP. Se infiltra (1- 2) mL por punto. Centrifugar en el concentrador de Factores de Crecimiento, programa CGF. Separación de las fracciones rica y pobre en factores de crecimiento. Ozonizarlo a 40 µg/mL durante 30 s. Se carga el CGF ozonizado en jeringas de 3 cc y se colocan en la APAG bajo el programa de activación de colágeno durante 5 min. Una vez activado el colágeno, se activa con Cloruro Cálcico. Cada 1 mL de CGF se usa 0,05 mL (50 µL) de Cloruro cálcico al 10%. Es decir, por cada 4 mL de plasma
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0,2 mL de Cloruro Cálcico. En su defecto utilizar 0,6 mL de GluCa al 10% cada 4
mL de PRP.
Extracción de las células CD34+
Se extraen de la parte más pegada a la pared del tubo en la porción más próxima al paquete eritrocitario. Se rasca la pared del tubo con el fin de dejar las células en suspensión y proceder inmediatamente a su aspirado. 0.5mL de volumen por tubo. Esta sangre no se anticoagula, no se activa con ClCa y no se ozoniza. Las CD34+ son células muy sensibles, así es que no se tratan con nada. Proceder a mezclar estas células con el CGFO3 preparado. Listo para infiltrar.
PROGRAMA DE CENTRIFUGACIÓN
36 seg de aceleración de 0 a 1800-2700 rpm a RCF 150-600
2 Min 2700 rpm a RCF : 600 4 Min 2400 rpm a RCF : 500 4 Min 2700 rpm a RCF : 600 3 Min 3000 rpm a RCF : 750 36 seg. desaceleración de 3000 a 0 rpm a una RCF : 150
RELATIVE CENTRIFUGAL FORCE « RCF »
RCF =Fc / Fg Fc = Gravity Force Fg = Centrifugal Force
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Papel del anticoagulante. Sobre el rendimiento. Comparativa
Método Anticoagulante Centrifugación Recuento
de plaquetas X 103 /μL RegenLab® Adenosin‐citrate‐dextrose‐ 300 g x 5 min 390.6 (Sweden) acid (ACD‐A). CHU de 180 g x 10 min 447.8 Liège Sodium citrate 3.2% (Belgium) GPS II® Adenosin‐citrate‐dextrose‐ 180 g x 15 min 447.0 (USA) acid (ACD‐A). Curasan® 1000 g x 10 693.8 (Germany) Citrate‐phosphate‐ min dextrose‐adenosine 23 000 g x 15 (CPDA) min Plateltex® 180 g x 10 min 864.6 (Slovakia) Citrate‐phosphate‐ 1000 g x 10 dextrose‐adenosine min (CPDA) Kaux, J. F., Le Goff, C., Seidel, L., Peters, P., Gothot, A., Albert, A. & Crielaard, J. M. (2011) (Comparative study of five techniques of preparation of platelet-rich plasma). Pathol. Biol. Paris 59,157-60
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