Lab #10
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Identificación de aminoácidos.
Introducción:
AMINOÁCIDOS
Aminoácidos esenciales
Como los aminoácidos tienen el grupo ácido (–NH3+) y básico (–COO –), son
anfóteros. La forma predominante del aminoácido depende del pH de la solución. En
una solución ácida, el grupo –COO– se trotona y se obtiene el grupo –COOH, y la
molécula tiene una carga total positiva. Si el pH aumenta, el grupo –COOH pierde su
protón aproximadamente a pH= 2. A este punto se lo denomina pKa1, primera constante
de disociación ácida. Si el pH sigue aumentando, el grupo –NH 3+ pierde su protón a un
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pH entre 9 y 10. A este punto se lo denomina pKa2, segunda constante de disociación
ácida. Por enzima de este pH, la molécula tiene una carga total negativa.
Los aminoácidos presentan una carga positiva en medio ácido y carga negativa en
soluciones básicas. Hay un pH intermedio donde las dos formas del aminoácido se
encuentran en la misma proporción, como el zwiterión bipolar con una carga neta de
cero. A ese pH se lo denomina punto isoeléctrico o punto isoelectrónico.
La diferencia en los puntos isoeléctricos se puede utilizar para separar mezclas de
aminoácidos y purificarlos por electroforesis, ya que por lo general, la solubilidad
mínima se presenta en el punto isoeléctrico. También se pueden identificar
aminoácidos, ya que el punto isoeléctrico es característico para cada aminoácido.
La mayor parte de los ácidos α -amino carboxílicos cuando se tratan con una
solucióndiluída de Ninhidrina dan un producto de color azul púrpura. La pirolina,
hidroxiprolina y la asparagina dan soluciones amarillas a anaranjado-pardas. La
reacción se usa no solamente para localizar a los aminoácidos sobre las cromatografías
de papel, sino también para la estimación colorimétrica cuantitativa.
PROTEÍNAS
Clasificación de proteínas:
Las proteínas se agrupan en simples o conjugadas. Las proteínas simples son las
que cunado se hidrolizan sólo dan lugar a aminoácidos. Las proteínas conjugadas están
enlazadas a un grupo postético no proteico como un azúcar, un ácido nucleico, un lípido
o algún otro grupo.
Las proteínas se clasifican como fibrosas o globulares dependiendo de si forman
filamentos largos o se enrollan en si mismas. Las proteínas fibrosas son alargadas,
fuertes y generalmente insolubles en agua, y su función principal es formar las partes
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estructurales del organismo. Las proteínas globulares se encuentran enrolladas, con
formas prácticamente esféricas, y principalmente forman parte de las enzimas, las
hormonas o proteínas de transporte.
Con excepción de la estructura primaria que viene definida por una conectividad
covalente, todos los otros niveles estructurales (secundaria, terciaria y cuaternaria) se
mantienen por solvatación débil y por enlaces de hidrógeno o por interacciones de Van
der Walls. Pequeños cambios en el ambiente que rodean las proteínas pueden producir
un cambio conformacional o químico, originando desnaturalización, esto es, la
modificación de la estructura normal y pérdida de la actividad biológica. Hay muchos
factores que pueden producir la desnaturalización, pero los más comunes son el calor y
el pH.
Cunado se somete una proteína a un pH ácido, algunos de los grupos carboxilos de
las cadenas laterales se protonan y pierden su carga iónica, produciéndose cambios
conformacionales que dan lugar a la desnaturalización. En solución básica, los grupos
amino se desprotonan y, de forma similar, pierden su carga iónica, dando lugar también
a cambios conformacionales y a la desnaturalización.
Cuando el pH es ácido, las proteínas de la leche se desnaturalizan y precipitan. A
este proceso se lo denomina coagulación.
En muchos casos la desnaturalización es irreversible. Tal es el caso de la clara de
huevo: al calentarla coagula, pero si se enfría no recobra su estructura inicial. Sin
embargo, la desnaturalización puede ser reversible si a la proteína solo se la ha sometido
a una desnaturalización suave.
El enlace peptídico
Desarrollo:
REACTIVOS
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PLAN DE TRABAJO
METODOLOGÍA
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Por último se realiza una cromatografía en placa delgada (papel), sembrando las
siguientes proteínas como patrones: Triptófano, Fenilalanina, Alanina y Glicina. Para el
revelado reutiliza la Ninhidrina que otorga diferentes coloraciones dependiendo de que
aminoácido se trate. Por comparación de colores y alturas (que dependen de la polaridad
de la molécula de aminoácido) de la muestra con los patrones se puede estimar que
aminoácidos estaban presentes en la caseína.
RESULTADOS
Cromatografía:
Conclusión:
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Bibliografía:
- L.G. WADE, JR.; “Química Orgánica” Quinta Edición; Ed. Pearson Prentice Hall;
Pág. 1114-1155; 2000.
- BREWSTED, R.: VANDERWERF, C.; Mc EWEN. W.; “Curso práctico de
Química Orgánica”; Editorial Alhambra; Pág. 149-152; 1979.
- NOLLER, C. R.; “Química de los compuestos orgánicos”; Editorial
Ineramericana; Madrid; Pág. 558-585; 1968.
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