LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

TINCIONES Y MEDIOS DE CULTIVOS

Elaborado Por: Julianis E. Sánchez A. 4-804-2186

1. ¿Qué es la tinción de GRAM y que es la Tinción de BAAR? ¿Para qué sirven ambas tinciones?

R//.

Tinción
¿Qué es? ¿Para que sirve? Imagen
Diferencial
-Es un tipo de tinción
-Para determinar el tipo de
diferencial para la
antibiótico, así como su eficacia.
visualización de
El antibiótico de elección ha de
bacterias, sobre todo en
ser capaz de atravesar la pared
muestras clínicas.
bacteriana, en función de si la
-Es una técnica de gran
bacteriana es Gram positiva o
utilidad en
negativa se seleccionará el Gram Positivo
Tinción de bacteriología, ya que
antibiótico más eficaz.
Gram permite diferenciar las
-Se realiza sobre las bacterias
bacterias en Gram
para observarlas mejor bajo el
positivas y Gram
microscopio para conocer la
negativas.
distribución del peptidoglicano
-Se basa en el uso de
de la pared celular que las
un colorante que
envuelve, se tiñen de una forma
permite observar las
u otra. Gram Negativo
bacterias
-Es una técnica de
tinción diferencial
-Esta tinción demuestra la
rápida y económica,
capacidad de ciertas bacterias
usada para la
de resistir a la decoloración por
identificación de
ácidos y alcoholes, lo cual se
microorganismos
correlaciona con su alto
patógenos, como M.
contenido en lípidos en la pared
Tinción de tuberculosis o el género
celular y presencia de ácidos
BAAR Apicomplexa (coccidios
micólicos que aumentan el
intestinales) entre otros.
carácter hidrófobo.
Fue descrita por Color Rojo
-Se utiliza para teñir
primera vez por dos brillante: Bacilos y
micobacterias y otros
médicos alemanes:
microorganismos acido microorganismos
Franz Ziehl, un
resistentes. Alcohol Acido-
bacteriólogo, y Friedrich
Neelsen, un patólogo. Resistentes.

2. ¿Qué estructura celular hace que se diferencien las bacterias Gram negativas y Gram positivas?
R//. La pared celular de las bacterias Gram positivas está formada en un 90% por peptidoglicano,
siendo éste el principal componente que permite diferenciarlas con la pared de las Gram negativas,
pues al teñirlas, es gracias a él, al grosor que éste le proporciona, que se logra mantener la coloración
del cristal violeta en el interior de la célula al teñirla con la tinción Gram.

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 Además del peptidoglicano, ésta se encuentra compuesta de ácidos teicoicos, los cuales están
presentes en pequeñas cantidades. Éstos se presentan embebidos en la pared de la bacteria como
polisacáridos ácidos.
3. Explique los pasos para realizar una tinción de GRAM y una Tinción de BAAR (en orden de tintes y
tiempo)

R//.

Pasos para realizar una tinción de Gram/BAAR

Tinción de Gram Tinción de Baar
No
Pasos Imagen Pasos Imagen
Preparación del
extendido. Tomar
una cantidad
homogénea de
Preparar 2 esputo y extenderla
1
extensiones de un extremo a
otro del
portaobjetos para
lograr una película
homogénea.

El frotis se tiñe
Cubrir la extensión durante unos 5
con cristal violeta y minutos con
2
dejar actuar durante Fucsina fenicada
1 minuto aplicando calor
suave

Lavar con agua, sin

arrastrar la
preparación y
3 Lavar con agua
sacudir para
eliminar el exceso
de agua

Decolorar con
Cubrir la extensión alcohol ácido
con solución de (alcohol etílico 95
4
Lugol y dejar actuar con un 3 de HCl
por 1 minutos concentrado) por 3
minutos

Lavar y teñir
durante 1 minuto
Lavar con agua
5 con azul de
corriente metileno (color de
contraste).

82
 Decolorar con
alcohol acetona
aproximadamente
6 30 segundos Lavar y secar

Observación
Lavar con agua microscópica y
7
corriente lectura de
extendidos

Cubrir la extensión
son safranina y dejar
8 - -
actuar por 30
segundos

Lavar con agua

9 - -
corriente

Secar la preparación
10 al aire y llevarlo al - -
microscopio

4. Menciones las diferentes morfologías que usted puede observar en una tinción de GRAM, bacterias
Gram negativas y Gram positivas (incluya imágenes, dibujos, etc.).

R//.

Cocos
Diplococo
Estreptococos
Estafilococos
Bacilos
Cocobacilos
Estreptococos
Espirilo
Espiroqueta

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5. Explique los criterios para el reporte correcto de una tinción de BAAR

R//. - Observación microscópica: Para lograr un examen microscópico de excelente calidad es preciso
contar con un buen microscopio y un área de observación apropiada.

Ubicar cerca del microscopio todos los elementos que se van a necesitar para la lectura:
- aceite de inmersión
- pañuelos o trozos de papel suave
- el registro del laboratorio
- una lapicera
- una caja para guardar portaobjetos
Depositar una gota de aceite de inmersión (con índice de refracción mayor a 1,5) en un
extremo del frotis, sin tocar el preparado con el gotero
Usando el objetivo de 10x enfocar el extendido evitando la zona donde se depositó el aceite
de inmersión. Explorar el extendido, buscando el material mucoso o mucopurulento.
Cuidadosamente cambiar al objetivo de 100x y mover la platina hasta ubicarlo en la zona del
portaobjeto en la que depositó el aceite de inmersión.
Cuidadosamente ajustar el enfoque fino hasta que las células se vean nítidas
Observar cada campo microscópico en superficie y profundidad, moviendo permanentemente
el micrométrico, antes de desplazarse al campo contiguo.
Seguir un recorrido en líneas rectas, sistemático para recorrer el extendido evitando repetir
la lectura de algunos campos.
Observar la calidad del extendido y de la coloración. Si no fuesen buenas, repetir la
baciloscopia de esa muestra.

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 - Limpieza del microscopio: Al terminar la observación es indispensable limpiar el aceite de
inmersión de los lentes objetivos con papel especial para lentes impregnado con xileno.
- Informe de resultados: La observación microscópica debe establecer en primer lugar, la
presencia de bacilos ácido alcohol resistentes en el frotis y en tal caso, el número promedio
aproximado observado por campo microscópico.

- Registro de resultados: Todos los resultados de los frotis deben anotarse en la libreta de
laboratorio y en la solicitud de examen. La información de la libreta debe incluir: el número de
laboratorio, el nombre del paciente, domicilio, sexo, edad, el nombre del centro de salud, señalar si
se trata de frotis o muestra, tipo y calidad de la muestra, los resultados de la baciloscopía y las
observaciones, si fuera necesario.

85
 6. Investigue los diferentes medios de cultivo selectivos y no selectivos más utilizados en el
laboratorio clínico y señale los componentes de los mismos, su indicador y que tipo de bacterias
es utilizado.

R//. Medios de cultivo Selectivos/No Selectivos

Medios de cultivo Selectivos/No Selectivos

Agar nutritivo

Componentes: Pluripeptona, extracto de carne, cloruro de sodio, agar.

Bacteria: Xanthomonas campestrio

E.M.B agar

Componentes: Peptona, lactosa, sacarosa, fosfato dipotásico, agar,

eosina, azul de metileno.
Indicador: Azul de metileno
Bacterias: Escherichia Coli Y Citrobacter ssp. (brillo metálico), Candida
ssp (rosadas), Acinetobacter ssp (lavanda), ect.

Mac Conkey Agar

Componentes: Peptona, pluripeptona, lactosa, mezcla de sales
biliares, cloruro de sodio, agar, rojo neutro, cristal violeta.
Indicador: Rojo neutro
Bacterias: Escherichia Coli, Klebsiella pneumoniae.

Sal y Manitol Agar

Componente: Extracto de carne, pluripeptona, d-Manitol, Cloruro de

sodio, Agar, Rojo de fenol.
Indicador: Rojo fenol
Bacterias: Estafilococos aureus – epidermis.

Mueller Hinton Agar

Componente: Infusión de carne, peptona ácida de caseína, almidón,

agar.
Bacterias: Pseudomona aeruginosa, Streptococcus pyogenes,
chromobacterium violaceum

Salmonella Shigella Agar Componente: Pluripeptona, extracto de carne, lactosa, mezcla de

sales biliares, citrato de sodio, tiosulfato de sodio, citrato férrico, agar,
verde brillante, rojo neutro.
Indicador: Rojo neutro
Bacterias: Salmonella, Shigella y otros organismos no fermentadores
de lactosa.

86
 7. Menciones 5 tipo de chromoagar que son más utilizados en el laboratorio y que características más
relevantes de cada uno.

R//.

Tipo de Chromoagar Características Imagen

-Particularmente para pacientes

inmunodeprimidos como ancianos,
víctimas de VIH, ect.
-Permite la diferenciación inmediata de
Candida
las distintas especies de Candida por el
color de la colonia.
-Permite la detección simple y poderosa
de cultivos mixtos de levaduras.

-Tiene una especificidad y sensibilidad

inigualables para la detección de S.
Staph aureus aureus
-95,5 Sensibilidad / 99,4
Especificidad.

-Detección de patógenos en el tracto

urinario con E. coli.
Orientation Tiene una aplicación más amplia como
agar nutriente general.
-Sensibilidad por E. Coli 99.3

-Nuevo medio de cultivo fluorogénico,

extremadamente sensible y selectivo,
C. diffic ile diseñado para simplificar y acelerar 24 h
de cultivo.
-95,4 Sensibilidad.

-Se desarrolló con el propósito de facilitar

su detección y mejorar el algoritmo para
Malassezia
diferenciación de las especies más
comunes.

87
8. Menciones 10 normas de bioseguridad que se tienen que realizar en el laboratorio clínico

R//.

✓ Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos personales en
el lugar que se les indique para tal fin.
✓ Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer
completamente cerrada.
✓ Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesión práctica.
✓ Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades programadas, antes de salir
del laboratorio y siempre después de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son
contaminantes.
✓ Trabajar cerca del mesón, adoptando una buena postura y estando físicamente cómodo.
✓ Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en las áreas de
laboratorio.
✓ Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podrían ser fuente de contaminación (por ejemplo,
joyas).
✓ Recoger el cabello largo.
✓ Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar sólo lo indispensable.
✓ No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios, aplicarse
cosméticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área del laboratorio.
9. Mencione 6 criterios para rechazo de muestra.

R//.

Tubos o contenedores de muestras sin identificación.

Indicar el tipo de muestra o procedencia.
No indicar el examen requerido.
Etiquetas defectuosas.
Muestras mal rotuladas cuando:
El nombre y/o apellidos no coincidan con la solicitud de exámenes.
La identificación del tubo no sea legible.

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 Referencias Bibliográficas

Ormaechea, E. (2017). “Tinción de Gram”. Recuperado en https://www.salud.mapfre.es/pruebas-

diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tincion-de-gram/
Florez, A. (2017). “Tinciones de GRAM y ZIEHL NEELSEN”. Recuperado en
https://es.slideshare.net/andresfg94/tinciones-de-gram-y-ziehl-neelsen
Pino, F. (2017). “Las bacterias Gram positivas”. Recuperado en
https://okdiario.com/curiosidades/bacterias-gram-positivas-697551
Romero, T. (2019). “Microbiología General Laboratorio”. Panamá: Unachi
CHROMagar. (2017). “CGROMagar”. Recuperado en
http://www.chromagar.com/images_spaw/LF_EXT_029_SPA_V7.0_ES_Siteweb.pdf?PHPSESS
ID=ad8cadaed8466ee5437349880662e44b
Garcés, A. (2008). “Normas de seguridad en el laboratorio de microbiología”. Recuperado en
http://www.chlaep.org.uy/pdf/normas_de_bioseguridad.pdf
Hospital del Niño. (2017). “Criterios de aceptación Y toma de muestras”. Recuperado en
https://hn.sld.pa/criterios-de-aceptacion-y-toma-de-muestras/
González, L. (2019). “Medio de cultivos”. Panamá: Unachi
Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos (2003). “Manual de Técnicas de Laboratorio
para el Exámen”. Recuperado en
Baciloscópicohttp://www.cenaprece.salud.gob.mx/programas/interior/micobacteriosis/descargas
/pdf/manual_laboratorio_TB.pdf
Organismo Andino de Salud. (2018). “Manual de actualización de la Baciloscopía”. Recuperado de
file:///C:/Users/thoni/Downloads/2019-cde-manual-actualizacion-baciloscopia-comisca.pdf

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