Practica #6. Medios de Cultivo y Siembra Bacteriana (

PRACTICA N° 6
Medios de cultivo y
siembra bacteriana
Objetivos:
❖ Conocer las características de un medio de cultivo líquido o

sólido.
❖ Aplicar las técnicas en la preparación de los medios de
cultivo.
❖ Aplicar técnicas para la siembra de microorganismos.
❖ Describir el crecimiento bacteriano

Material
❖ Extracto de carne
❖ Peptona
❖ Cloruro de sodio
❖ Bacto agar
❖ Agar Mac Conkey
❖ Agar TSI
❖ Cultivos bacterianos
❖ Tubos de ensayo
❖ Placas de petri
❖ Matraces de 250 ml
❖ Balanza analítica
❖ Asas bacteriológicas
❖ Agua destilada
❖ Solución de HCl 0.1 N
❖ Solución de NaOH 0.1N
❖ Autoclave

Formula de algunos medios de cultivo
 A. Preparación de Medios de cultivo c) Agar sangre
 a) Caldo nutriente ❖ Licuar 100 ml de agar nutriente estéril en baño de agua

hirviente y dejar enfriar a 45ºC – 50ºC.
❖ Bacto peptona 1.0 gr. ❖ Agregar 5 – 7 ml de sangre desfibrinada o citatada de carnero
o vacuno.
❖ Cloruro de sodio 0.5 gr. ❖ Homogenizar y verter el medio en placas de petri o tubos de
❖ Extracto de carne 0.3 gr.
prueba.
❖ Dejar solidificar.
❖ Agua destilada 100.0 ml Este es un medio enriquecido para el aislamiento de
microorganismos exigentes y para evidenciar la capacidad
 pH: 7.0 – 7.2 hemolítica de estos.
d) Agar chocolate
 b) Agar nutriente
❖ Preparar en un matraz agar sangre y luego llevar a baño de
❖ Caldo nutriente 100.0 ml agua a una temperatura de 80ºC durante 10 minutos,
agitando constantemente hasta que el medio tome el color
❖ Bacto agar 1.5 gr.
chocolate.
 Disolver completamente el agar en baño de agua ❖ Dejar enfriar a 45ºC – 50ºC y luego verter en placas de petri
hirviente. Dejar enfriar a 45ºC – 50ºC y ajustar el pH a estériles.
7.0 – 7.2. ❖ Dejar solidificar.
Preparación
❖ Calibrar la balanza levando a cero.
❖ Pesar los ingredientes de acuerdo a la fórmula y colocarlos en un matraz limpio.
❖ Agregar agua destilada y disolver en baño de agua hirviente.
❖ Enfriar a 45ºC-50ºC y ajustar el pH entre 7.0 – 7.2.
❖ Si el medio está alcalino, ajustar el pH con solución al 0.1N de HCl; si estuviera ácido, ajustar el pH
con NaOH 0.1N.
❖ Taponar el matraz con algodón y cubrir luego con una tapa de papel.
❖ Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121ºC y a 15 libras de presión.
❖ El control de esterilidad se realiza llevando el medio a la estufa de incubación a 37ºC durante 18 –
24 horas.
❖ Observar que el medio se encuentre limpio, libre de gérmenes.

 METODOS DE SIEMBRA BACTERIANA
1. Siembra por diseminación en placas de agar
 Se emplean porque ofrecen mayor área de siembra y permiten diferenciar la

morfología de las colonias que han desarrollado sobre la superficie.
 Tomar una asada de la muestra con el asa de kolle y realizar un estriado muy
junto en el primer tercio de la placa a fin de agotar la muestra y luego continuar
haciendo estrías en forma de zig – zag cada vez más separadas hasta el lado
opuesto de la placa (siembra por agotamiento). También se puede realizar la
siembra utilizando los cuadrantes de la placa, realizando el agotamiento de la
muestra en el primer cuadrante de la placa.
 Luego se llevan las placas a la estufa de incubación durante 18 – 24 horas a

35ºC – 37ºC.
1. Siembra en tubos con agar inclinado.
 Se emplean medios de cultivo inclinado o en pico de flauta contenidos en tubos

de ensayo.
 La siembra se realiza con ayuda de la aguja bacteriológica, realizando una

picadura por el centro del medio hasta el tercio inferior y luego se realiza estrías en
la superficie inclinada.
1. Siembra en medios líquidos

 La siembra se realiza llevando el inoculo o la muestra con el asa de kolle o aguja al medio de
cultivo líquido y se deposita o mezcla. También puede emplearse pipetas estériles para la
siembra.
 LECTURA DE LA SIEMBRA
 1. En medios líquidos: Observar lo siguiente:
• Turbidez: uniforme, en grumos, precipitado.

• Espuma: por la formación de burbujas.
• Película: se forma en la superficie del medio.
 2. En medios sólidos: Las primeras colonias aparecen alrededor de 16-18 horas de incubación
y es el mejor momento de observa lo siguiente:
• Tamaño: Medir el diámetro de las colonias expresando en mm.

• Forma: Pueden ser puntiformes, en roseta, fusiformes, ameboideas etc.
• Bordes: Enteros, ondulados, lobulados, dentados, filamentoso, etc.
• Superficie: Lisa, rugosa, mucoide, granular, etc.
Tipos de colonia de algunos microorganismos
 Colonias de Staphylococcus aureus Colonias de Streptococcus pyogenes

 Colonias de Bacillus anthracis
 Colonia de Escherichia coli Colonias de Klebsiella pneumoniae
 Crecimiento en medio líquido
Cuestionario
1. Como se definen los medios de cultivo?

2. Que sustratos debe contener un medio de cultivo para el
crecimiento de las bacterias?
3. Que función cumplen el cloruro de sodio o las sales de fosfato en
los medios de cultivo?
4. Describa las características de crecimiento en medio sólido y
líquido de 5 especies bacterianas diferentes

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PRACTICA N° 6

❖ Conocer las características de un medio de cultivo líquido o

❖ Describir el crecimiento bacteriano

❖ Agar Mac Conkey

❖ Solución de HCl 0.1 N

❖ Solución de NaOH 0.1N

 a) Caldo nutriente ❖ Licuar 100 ml de agar nutriente estéril en baño de agua

1. Siembra por diseminación en placas de agar

 Se emplean porque ofrecen mayor área de siembra y permiten diferenciar la

 Luego se llevan las placas a la estufa de incubación durante 18 – 24 horas a

1. Siembra en tubos con agar inclinado.

 Se emplean medios de cultivo inclinado o en pico de flauta contenidos en tubos

 La siembra se realiza con ayuda de la aguja bacteriológica, realizando una

 1. En medios líquidos: Observar lo siguiente:

• Turbidez: uniforme, en grumos, precipitado.

• Tamaño: Medir el diámetro de las colonias expresando en mm.

1. Como se definen los medios de cultivo?

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