Universidad Tecnológica de Tecámac.

División Químico Biológicas.

Materia: Análisis Fisicoquímicos y

Microbiológicos.

Practica 1: Análisis de Agua.

Profesor: Jesús Alarcón Bonilla.

Integrantes:

• Cruz Rivera Zayra Lizbeth

• Daniel Elizalde Lesly Yuritzy
• Mendoza Meléndez Gabriela
• Saucedo Guzmán Félix
• Pérez Victoria Karen
GRUPO: 8IBT2.
 1. Introducción.
El agua es un compuesto muy importante en la vida diaria, se necesita para la
subsistencia de todos los seres vivos, para la mayoría de procesos industriales es el
fluido de trabajo. Por ser el solvente universal es común encontrar en aguas
superficiales y subterráneas un gran número de compuestos que en determinadas
concentraciones pueden ser nocivos para la salud de los consumidores, además,
puede contener microorganismos indeseables. (Tyagi et al., 2013)

Los recursos hídricos desempeñan un papel vital en diversos sectores de la economía,

como la agricultura, la ganadería, actividades industriales, recreación entre otras. La
disponibilidad y calidad del agua, ya sea superficial o subterránea, se ha deteriorado
debido a factores como el aumento de la población, la industrialización, la
urbanización (Tyagi et al., 2013). La calidad del agua es uno de los temas más
importantes en la gestión de los recursos hídricos (Sutadian et al., 2016), su
clasificación basada en el grado de pureza y contaminación data de 1848 y se evalúa
desde las características físicas, químicas y biológicas (Rangeti et al., 2015).

Realizar un análisis del agua es fundamental, debemos comprobar que sea potable
para su consumo, tanto humano o industrial. Y es que el agua se usa en numerosas
actividades de la industria. Se usa tanto para procesos de fabricación, como para
lavado de maquinaria o aseo personal. Sin olvidarnos del importante uso de consumo
humano.

Mediante los análisis bacteriológicos del agua identificamos si el agua puede o no ser
consumida. Estableciendo así si es potable o no.

El agua no debe presentar ningún tipo de riesgo que pueda causar irritación química,
intoxicación o infección microbiológica que sea perjudicial a la salud humana (Vargas,
1996).

Debido a estas condiciones, en el caso de los microorganismos patógenos no existe

un límite inferior tolerable; por lo que el agua destinada al consumo, la preparación de
alimentos y bebidas o la higiene personal no deben contener ningún agente patógeno
para los seres humanos. Esto se puede conseguir seleccionando fuentes de agua de
buena calidad, tratando y descontaminando eficazmente el agua contaminada con
heces de seres humanos o de animales u otras sustancias y protegiéndola para que no
haya contaminación durante la distribución al usuario. (OMS, 1995).

Los microorganismos en general, son encontrados comúnmente en el agua, suelo y

aire. La cantidad de ellos, presentes en cualquiera de estos medios, depende de una
serie de factores tales como: humedad, temperatura y nutrientes. Vargas, 1996).

El peligro más común y difundido, relativo al agua de consumo humano es el de su

contaminación microbiana con aguas servidas y excretas del hombre y de los animales.
Si dicha contaminación es reciente y se hallan microorganismos patógenos, es posible
que dichos microorganismos se encuentren vivos y con capacidad de producir
enfermedad. (Vergaray y Méndez, 1994).

Para controlar los peligros se aplican criterios (guías y estándares) para normar la
calidad de las aguas; éstos establecen requisitos que deben satisfacer las aguas para
que puedan ser destinadas al consumo humano sin que afecten su salud. El
cumplimiento de los requisitos de calidad sanitaria debe reducir en forma significativa
los riesgos de contraer enfermedades infectocontagiosas (OMS, 1995). Sin embargo, si los
requisitos de calidad sanitaria no son los adecuados, carecerán de importancia para
proteger y controlar la calidad del agua y su aplicación no cumplirá con los objetivos
previstos.

La NTN (NORMA TECNICA NACIONAL: NTN 214.003 ITINTEC) establece como

límites permisibles un máximo de 500 Bacterias heterotróficas por mililitro y ausencia
de coliformes totales y coliformes fecales por 100 mililitros. Estos indicadores
bacteriológicos de la calidad del agua no garantizan que esté exenta de riesgo para la
salud, debido a que existen gérmenes que pueden encontrarse en el agua cuando no
se detectan los indicadores mencionados (Vergaray y Méndez, 1994); este hecho se
puede deber a una mayor capacidad de supervivencia de los microorganismos
patógenos a una mayor resistencia a las concentraciones de Cloro libre residual (CLR)
que comúnmente se utiliza para desinfectar al agua o a una interferencia en el
crecimiento de los indicadores.
Existen factores secundarios que permiten el crecimiento de microorganismos en el
agua dentro de los sistemas de distribución y almacenamiento como: cantidad y
tipo de nutrientes, oxígeno, temperatura, pH, concentración de desinfectante y
material de las tuberías (Vargas, 1996).

El objetivo de las normas y estándares es el de controlar la cantidad de un

determinado microorganismo en el agua, siendo este microorganismo la causa de
una enfermedad específica o un indicador de las condiciones dentro de las cuales
se podría transmitir esa enfermedad. (Vargas, 1996).

1. Tabla 1.Parámetros analizados y métodos empleados

 2. Objetivos.
Objetivo general.

• Comparar diversas técnicas analíticas para la realización de pruebas

fisicoquímicas y microbiológicas del agua a partir de varias muestras de agua
potable como referencia de la calidad sanitaria.

Objetivos particulares.

• Investigar la determinación fisicoquímica de la muestra (pH, conductividad

eléctrica y Análisis Volumétrico).
• Realizar una evaluación microbiológica del agua por medio de organismos
indicadores como referencia a través de una investigación de artículos
relacionados con el tema.
 3. Materiales equipos y reactivos.

Materiales Descripción Imagen

Bolsas de Las bolsas con Zipper o de Cierre

polietileno, cierre Hermético, están fabricadas 100% con

polietileno de baja densidad de la más
hermético
alta calidad y son aptas para el
estériles.
almacenamiento de alimentos o
medicamentos.
Cajas Petri. La placa o caja de Petri es un
instrumento de laboratorio que consta de
una base circular y sus paredes son de
una altura baja, aproximadamente de 1
cm.
Tubos de ensaye El tubo de ensayo es un instrumento de

12x150. laboratorio que se utiliza principalmente

como contenedor de líquidos y sólidos a
los cuales se les va a someter a
reacciones químicas u otras pruebas.
Pipetas de 5mL Las pipetas permiten la transferencia de

estériles. un volumen generalmente no mayor a 20

ml de un recipiente a otro de forma
exacta. este permite medir alícuotas de
líquido con bastante precisión. Suelen
ser de vidrio.
Membrana La nitrocelulosa es una matriz de unión

nitrocelulosa de muy popular para el borrón occidental

debido a su gran afinidad con las
0.45um
proteínas y a su compatibilidad con
diversos métodos de detección (por
ejemplo, quimioluminiscencia, cromo
génico, fluorescencia).
Soporte universal. El Soporte Universal es una herramienta
que se utiliza en laboratorio para realizar
montajes con los materiales presentes
en el laboratorio permitiendo obtener
sistemas de medición y
preparar diversos experimentos.
Pinzas para Herramienta de metal que se une al

bureta. soporte universal para

sujetar verticalmente una sola bureta.

Estufa de Para los usos más comunes de

incubación incubación en el laboratorio, donde se

requiere mantener temperaturas
estables y uniformes, alcanza
temperatura pico de 70°C con una
excelente uniformidad de calor, entre
30°C y 50°C.
Potenciómetro Potenciómetro es un sensor utilizado en

para pH el método electroquímico para medir el

pH de una disolución
Centrífuga Es una máquina que pone en rotación
una muestra para/por fuerza centrífuga-
acelerar la decantación o la
sedimentación de sus componentes o
fases (generalmente una sólida y una
líquida) según su densidad.
Espectrofotómetro Es un instrumento con el que se apoya la
espectrofotometría para medir la
cantidad de intensidad de luz absorbida
después de pasar a través de una
solución muestra.
Buffer de pH 4 y 7 Las soluciones tampón, denominadas
también soluciones buffer, son aquellas
que ante la adición de un ácido o base
son capaces de reaccionar oponiendo la
parte de componente básica o ácida para
mantener fijo el pH.
Agar nutritivo Es un medio de cultivo usado
normalmente como rutina para todo tipo
de bacteria. Es muy útil porque
permanece sólido incluso a
relativamente altas temperaturas.
Caldo lactosado Es un medio selectivo recomendado para

verde brillante APHA para el cultivo de coliformes en

agua potable, aguas residuales,
bilis
alimentos y productos lácteos y otros
productos de interés sanitario.
Agar papa- Es el medio más utilizado para el

dextrosa crecimiento de hongos y levaduras que

atacan a las plantas vivas o materia
vegetal muerta en descomposición.
Solución ácido Es un compuesto químico

sulfúrico extremadamente corrosivo cuya fórmula

es H2SO4. Es el compuesto químico que
más se produce en el mundo, por eso se
utiliza como uno de los tantos medidores
de la capacidad industrial de los países.
Solución EDTA Es una sustancia utilizada como agente
quemante que puede crear complejos
con un metal que tenga una estructura de
coordinación octaédrica.
Solución AgNO El nitrato de plata es un sólido cristalino
incoloro. Se disuelve en agua. La
mayoría de los compuestos de plata no
se disuelven en agua. Puede oscurecer
si la luz brilla sobre él. Es un agente
oxidante.
Negro de Es un indicador metalcrómico o

eriocromo complexométrico que forma parte de las

valoraciones complexométricas, por
ejemplo, en el proceso de determinación
de la dureza del agua.
 4. Metodología.
A. Análisis microbiológicos.
A1. Toma de muestra.

Abrir la valvula del grifo de la tarja y dejar salir el agua por 20min.

Abrir el recipiente (tapon de algodon y aluminio) esteril y llenarlo.

Cerrar inmediatamente. el recipiente puede ser sustituido por una bolsa

de cierre hermetico esteril.

Nota: Durante la toma de muestra evitar corrientes de aire.

A2. Recuento de organismos mesofílicos aerobios por la técnica

de vaciado en placa.

Tomar una alicuota de 1mL de muestra en

condiciones esteriles y verterla en caja
petri.

Reportar el recuento de OMA

como UFC/mL.
Verter en condiciones esteriles de 12 a
15mL de Agar nutritivo fundido esteril.

Incubar las placas

Homogenizar la muestra en el hagar invertidas a 37ºc/48hrs. Leer
fundido rotando la caja 6 veces hacia la las UFC a las 24hrs y 48hrs.
derecha e izquierda. Dejar sodificar.
A3. Recuento de hongos y levaduras por la técnica de vaciado en
placa.

Tomar una alicuota de 1mL de la

muestra en condiciones esteriles y
verterla a una caja petri.

Verter en condiciones esteriles de 12 a

Reportar el recuento de
15 mL de agar papa dextrosa fundido
H y L como UFC/mL.
esteril.

Homogenizar la muestra en el hagar Incubar las placas

fundido rotando la caja 6 veces hacia la invertidas a 28ºc/72hrs.
derecha y 6 veces hacia la inquierda . Leer el numero de UFC
Dejar sodificar. a las 48 y 72hrs.

A4. Recuento de organismos coliformes totales por la técnica

numero mas probable.
Tomar en condiciones esteriles una
alicuota de 5mL con pipeta esteril de
la muestra de agua y verterla en cada
tubo de caldo lactosado a doble
concentracion. Homogenizar.

Determinar el NMP
Incubar a 35ºc durante 48hrs. Tomar
de organismos
lecturas a las 24hrs y 48h de
coliformes totales
incubacion.
en la muestra.

Transferir individualmente cada tubo

positivo 2 a 3 asadas del cultivo a un Incubar a 35ªc
tubo de fermentacion con caldo durante 48hrs. Leer
Lactosado Verde Brillante Bilis al 2%. a las 24 y 48h.
Homogenizar.
Nota: si se quiere evaluar organismos coliformes fecales se debe seguir en el mismo
protocolo experimental, cambiando solo la temperatura de incubación de 35º a
42.5ºc.

B. Análisis físicos y químicos.

B1. Determinación de cloro residual.
Nota: Aplicar el ensayo de las fuentes de agua sujetas a la cloración que no han
sido sometidas a la acción de carbón activado.

Efectuar la pruba en un tubo limpio enjuagando varias

veces con el agua a examinar.

A 1-2 ml de la muestra adicionar 2 gotas de

ortotoluidina. Vertir el tubo y comparar el color
desarrollado con la escala colorimetrica de Tylor.

Reportar la concentracion de Cloro

Residual en ppm.
 B2. Color del agua.

Eliminar por Determinar los

centrifugacion el Realizar el
barrido de 400 a valores de %T
exceso de material para cada
de suspension, 700nm con un
incremento de longitud de onda.
vertiendo 10mL de la
muestra en un tubo y 1nm.
centrifugar a
5000rpm/15min.

Verter la muestra
Filtrar con filtrada en la celda
Membrana de del
Nitrocelulosa de espectrofotometro.
0.45um la
alicuota.
Calibrar el
espectrofotometro a
Seleccionar la opcion 100% de
de barrido o trasmitancia (%T)
escaneado en el con agua destilada
espetrofotometro. de 400 a 700nm.
 B3. Determinación de pH
Verter suficiente
Calibrar el volumen de la Sumergir el
potenciometro con muestra de agua electrodo de vidrio
los buffer de en un vaso de en la muestra de
referencia y precipitados de agua sin que toque
enjuagar con agua 125mL, que cubra las paredes del
destilada. el electrodo de vaso.
vidrio.

Enjuagar el electrodo con

Dejar que se estabilice
agua destilada y secar
la lecturfa y registrar el
con papal facial sin tallar
valor correspondiente.
el electrodo.

B.4 Determinación de conductividad del agua.

Seleccionar la escala mas baja

Verter suficiente muestra de
del conductivimetro. Insertar
agua en una probeta de 50mL.
electrodo.

Encender el equipo y moverse

Registrar la lectura
a la escala mas baja donde se
correspondiente.
registra una lectura estable.
 C. Análisis volumétricos.
C1. Volumetría Acido/Base. Alcalinidad Total del agua (en mg/L de
CaCO3)
Si el indicador
fenoftaleina NO
Adicionar 5 gotas de VIRA y se
Tomar con una Fenoftaleina al 1% (
probeta una mantiene incolora
en sol. Alcoholica al la muestra o se
alicuota de 50mL 70%) si la muestra
de la muestra y neutralizo esta de
toma color rosa. rosa a incoloro
verterla en el Titular con acido
matraz con la solucion
sulfurico al 0.02N titulante,
Erlenmeyer de por goteo y en
125mL. adicionar al
agitacion constante. mismo matraz 5
Registrar gasto. gotas de naranja
de metilo al 5%.

Adicoonar por goteo y en

agitacion constante el acido
Realizar calculos sulfurico 0.02N hasta el vire
correspondientes. del indicador de anaranjado
a rojo canela. Registrar
gasto.
C2. Volumetría Complejométrica. Dureza Total del agua (en mg/L
de CaCO3)

Tomar con una

probeta una alícuota Adicionar con Adicionar una pizca
de 50 mL de la mucho CUIDADO 1 de Negro de
muestra y verterla mL de buffer de Eriocromo T.
en el matraz amonio pH 10 para Homogeneizar el
Erlenmeyer de 125 Dureza Total. indicador
mL.

Titular por goteo y en

CALCULOS. Dureza
agitación constante el Acido
Total (mg/L) =
Etilen Diamino Tetraacético
{Gasto * [EDTA] *
0.02M hasta el vire del
Peq CaCO3 / Vol.
indicador de violeta a azul
Alícuota} * 1000
marino. Registrar el gasto.

C3. Volumetría de Precipitación. Cloruros del agua (en mg/L del

ión Cl-1)

Tomar con una probeta

una alícuota de 50 mL de Adicionar 5 gotas de
la muestra y verterla en el Dicromato de Potasio al
matraz Erlenmeyer de 125 5% y homogeneizar.
mL

Titular por goteo en agitación

CÁLCULOS. Cloruros constante con Nitrato de Plata
(mg/L) = {Gasto * [AgNO3] 0.01N hasta vire del indicador
* Peq Cl-1 / Vol. Alícuota} * de amarillo a rojo ladrillo
1000 (precipitado). Registrar el
Gasto.
 5. Resultados.
Debido a la actual situación de la pandemia estos resultados serán en base a artículos
científicos que se relacionan a lo que se verá en la práctica de análisis de agua.

Organismos Mesofílicos Aerobios por vaciado en Placa y Coliformes totales.

De acuerdo con el artículo publicado por la revista de la sociedad venezolana de

microbiología en 2004 en el apartado de los resultados evalúan 14 muestras de agua
potable (93%) donde la marca B presento recuentos microbiológicos de 10 UFC/ml en el
caso de anaerobios mesófilos por el método Petrifilm, mientras que para la marca A todas
las muestras eran al 100% presentaron recuentos mayores a 10 UFC/ml por el mismo
método de siembra.
Con respecto al recuento de los grupos coliformes totales, el 87% de las muestras de la
marca A presentaron recuentos mayores a 10 UFC/ml por el método rápido de siembra
en placas Petrifilm y 53% de la marca B presentaron recuentos fuera de especificaciones.
Para el recuento en profundidad, todas las muestras de la marca presentaron recuentos
mayores a 10 UFC/ml, de coliformes totales, y para la marca B el 80% de las muestras
presentaron recuentos de coliformes fuera de especificaciones (>10 UFC/ml).
Sin embargo, ninguna de las muestras de las marcas A y B presentaron coliformes
fecales. Tanto el método de siembra en profundidad como el método Petrifilm,
presentaron una excelente recuperación microbiológica, no encontrándose diferencias
estadísticamente significativas entre ambos métodos.
 Hongos y levaduras por vaciado en placa.

De acuerdo con el artículo de (Calidad microbiológica del agua de un sistema de lagunas de

estabilización a ser empleada en irrigación, (Botero, L, Zambrano, J. L., Oliveros, C, León, D,
Sarcos, M, & Martínez, M. 2002). Nos dice que, en aguas muy contaminadas, la densidad de
los hongos se ve incrementada, ya que están en relación directa con la materia orgánica
presente, por lo que se han sugerido también como indicadores de contaminación. La técnica
nos dice que fueron cuantificados mediante el empleo de la técnica de vaciado en placas
inoculando 1 ml de las diluciones 10-4, 10-5 y 10-6 de las muestras de E y LF y de las diluciones
10-3, 10-4 y 10-5 de LMI y LMII, en agar conteo, para el estudio de las bacterias y en agar extracto
de malta-extracto de levadura-glucosa para los hongos. Los valores de la media geométrica
obtenidos, se detectaron valores de la media de 2,0 x105 UFP/100ml y 2,10 x105 UFC/ml.

NMP: número más probable; UFC: unidades formadoras de colonia; UFP: unidades formadoras de
placa; E: entrada del sistema; LF: laguna facultativa; LMI: laguna de maduración I; LMII: laguna de
maduración II; Media: media geométrica; Desv. Sta: desviación estándar. Se observa en la tabla 4,
que en la laguna facultativa (LF) fueron removidos más eficientemente los CTT, los hongos, con
porcentajes de 94,25, 94,0 y 90,0.
Los hongos, incluyendo las levaduras, las especies filamentosas y los mohos, están también
ampliamente distribuidos en la naturaleza. Algunas especies presentan características de
patogenicidad y otras son parasitarias, (Botero, 2002). En base a este articulo nos dice que no se
ha logrado establecer un grupo o especie que sirva como indicador adecuado para los diversos
tipos de agua. Los valores de 6,2x102 UFC/ml encontrados en el efluente, significan que es
necesario seguir en el futuro su estudio, ya que los indicadores bacterianos tradicionales no
presentan relación directa con los hongos y se ha reportado en el ambiente la presencia de
especies de hongos de importancia clínica como Aspergillus, Trichophyton y Candida.

Cloro residual por escala colorimétrica.

Tomando como base para nuestros resultados el artículo de desinfección del agua: determinación
colorimétrica del cloro libre y cloro total con DPD (Martínez Guijarro, MR.; Pachés Giner, MAV.
2019). Para esto se desarrollará el método colorimétrico con N, N – dietil - 1,4 - fenilendiamina
(DPD) para la detección de cloro. Mediante un procedimiento experimental se darán a conocer los
resultados.
Nos dice que para la preparación de la muestra se toman 3 muestras de 100 ml (Vo), Si Cl2 > 5
mg/L donde se hacen 100 ml de disolución de muestras (vol. De muestra de disolución V1). Se
determinará la absorbancia de la muestra tratada en espectrofotómetro de lambda = 510 nm por 2
min.
Ion cloruro por volumetría de precipitación.
De acuerdo con la revista revisión experimental del intervalo de pH para la determinación de
cloruros por el método de Mohr (Cury, G. 2006). Por medio de titulaciones potenciométricas a
diferentes pH: 5, 6, 7, 8, 9 y 10, para los cual se midieron 50,00 ml de solución estándar de cloruro
de potasio. Nos dice que se reguló el pH de trabajo con solución diluida de ácido nítrico (para bajar
el pH) o solución diluida de tetraborato de sodio (para subir el pH). Durante las titulaciones
potenciométricas de cloruros se utilizó un pH-Metro Sargent-Welch Modelo LS, con una escala de
pH y de milivoltios. Se empleó como electrodo indicador, un electrodo de plata y como electrodo
de referencia, un electrodo de plata-cloruro de plata. Para regular el pH, se empleó un electrodo
de vidrio combinado (vidrio-calomel).

Se obtuvieron los volúmenes en el punto equivalente aplicando el método de tabulación y la

ecuación para hallar el volumen equivalente, que propone Dick. Los volúmenes equivalentes (VEq.)
calculados a diferentes pH en la Tabla N°4.
En la titulación volumétrica, se midieron también 50,00 ml de solución de cloruros 0,0100 M
empleando 1,0 ml de indicador cromato de potasio al 5 % m/v (2). Estas titulaciones se
efectuaron a los mismos pH en las que se realizaron las titulaciones potenciométricas. Se utilizó
en el blanco para producir un efecto de enmascaramiento similar al del cloruro de plata, tierra
silícea libre de cloruros, en lugar de carbonato de calcio. Los datos están reportados en la Tabla
Nº5.

Color del agua por valores triestimulo.

De acuerdo con el articulo científico sobre la validación de un método para el análisis de color
real en agua (Martínez, Osorio. 2018).
El protocolo de medición nos dice que:
- Se filtraron aproximadamente 100 mL de las muestras o matrices que son usadas en la
validación con un filtro de membrana de 0.45 µm.
- Se midió el pH después de filtrado según el método SM 4500 H+B (APHA, AWWA & WEF,
2012).
- Las muestras altamente coloreadas se diluyeron con agua tipo I y se midió nuevamente el pH
después de la dilución, se tomó en cuenta el factor de dilución multiplicándolo por la absorbancia
al momento de reportar los datos.
- Los primeros 50 mL del filtrado se descartaron para evitar interferencias.
Para poder llevar esto acabo se ubicó la celda a 50 mm en el espectrofotómetro, así como ajustar
la longitud a 436 nm, se utilizó agua tipo I como blanco, se repitió el proceso, pero ahora con
525 y 620 nm. Se realizo un pequeño chequeo al blanco y se registró su absorbancia la cual era
0.001 unidades para cada longitud.
Se muestra el seguimiento de los parámetros de linealidad, límite de cuantificación, repetibilidad,
porcentaje de recuperación y estimación de incertidumbre en la medición.

Aquí nos indica que se evalúan los cambios de absorbancia de dos matrices de agua
provenientes del sector floricultor y así evaluar la estabilidad de estas, se evaluó su respuesta a
una hora de medición de la absorbancia usando la longitud de onda de 436 nm. En el artículo
algunos de los resultados obtenidos para este método son: Análisis de linealidad
Tabla 10. Datos de linealidad del ácido húmico para volumen de dilución 0.25 - 0.5 - 1 - 2 - 5 y
10 ml. Precisión y Exactitud de estándar
Exactitud o Porcentaje de recuperación, basado en la ley de Beer donde se esperaba que la
mezcla de las muestras (matriz) con los estándares de ácido húmico no reaccionaran entre sí
para que la absorbancia total a cualquier longitud de onda fuera la suma de las absorbancias de
los componentes de la mezcla. El criterio de aceptación usado fueron porcentajes de
recuperación entre el 80 y el 110%.
Precisión, en este parámetro se evaluó con 10 réplicas para dos matrices de agua natural,
residual domestica (ARD) y 2 muestras residual no doméstica provenientes del sector floricultor,
una con coloración azul-verdoso (ARnD 1) y la otra de color rojo (ARnD 2), las condiciones de
repetibilidad y precisión son expresadas en términos de coeficientes de variación para observar
la dispersión de datos y con un criterio de aceptación menor al 15%.
nos dice que el valor de la conductividad de una solución dependerá de la temperatura de la
muestra, para que al momento de realizar la medición la temperatura de referencia sea de 25
°C, así como la constante de la celda de 0.469 cm-1 y con una compensación de 1.91%K.

Además de que nos hace hincapié en que la precisión de los conductímetros comerciales se
encuentra entre 0,1 y 1,0 %. Se espera una reproducibilidad de 1 a 2 % después de calibrar el
instrumento. El volumen mínimo para esta determinación es de 50 mL.
Alcalinidad total por volumetría
Se tomará el procedimiento experimental realizado por el trabajo de Determinación alcalinidad
y conductividad determinación alcalinidad y conductividad de agua (Colque, Cortez, Guzmán.
2014).
Procedimiento experimental
Para esto se tuvieron que medir 25 ml de la muestra en un matraz aforado para luego trasvasarlo
a un matraz Erlenmeyer, se continuó añadiendo 15 gotas de fenolftaleína un aprox. De 0.5 ml,
al pintarse se valora con un a solución de H2SO4 0.02 N hasta un cambio de color violeta a
incoloro.
Se registro el volumen de consumo del H2SO4 0.02 N. Si no llega pintarse se añaden 4 gotas
de indicador naranja de Metilo 0.1 ml y valorar con la solución H2SO4 0.02 N hasta el cambio
de color amarillo a amarillo naranja o rojo salmón.
Una vez hecho esto se registra el volumen de consumo de H2SO4 0.02 N para generar los
resultados nos muestran una serie de tablas donde se vacían los datos obtenidos en este
procedimiento experimental.
Dentro de la siguiente tabla nos dice que se permite evaluar con la relación volumétrica del
titulador con el indicador de la fenolftaleína y el naranja de metilo, los componentes parciales de
la alcalinidad o alcalinidad parcial.
Determinación de Dureza total por volumetría complejométrica
Se tomo de referencia el trabajo de Determinación de dureza en agua (Diaz, Santana, Vélez
2019). De acuerdo con este trabajo para el método de volumetría de formación de complejos
(complejometría). Se debe de formar un complejo soluble mediante una reacción de la especie
que se valora como un ion metálico y la solución valorante que constituye al agente
acomplejante. Los resultados cuantitativos de la Dureza Total en las muestras de agua utilizando
el método oficial COVENIN 2408-86 con buffer amonio y con el método COVENIN 2408-86
modificado con buffer borato se muestran en la Tabla Nº21. Durante el desarrollo del ensayo de
la Dureza Total utilizando el buffer borato, la solución analizada mostró un cambio rápido de
color azul y un nítido punto final de la titulación
De acuerdo con los resultados obtenidos en este articulo nos hace la comparativa de prueba de
t-student para las medias de las durezas totales de cada una de las aguas a un nivel de
confidencia p≤ 0,05 al parecer no mostró diferencia estadísticamente significativa en ningún caso
para la determinación empleando el procedimiento de la norma COVENIN 2408-86 con buffer
amonio contra la Norma COVENIN 2408-86 modificada empleando buffer borato. Al comparar la
capacidad buffer de la solución conservada durante 8 meses con una solución fresca de buffer
amonio, el promedio para 5 determinaciones no mostró diferencias estadísticamente significativas
a p≤ 0,05, como se muestra en la tabla N° 22.
 6. Análisis de resultados.

En base a la investigación realizada, se encontró la relación de las técnicas analíticas para el

análisis de agua en artículos científicos, en caso de que los procedimientos y los resultados aquí
mencionados, demanden un conocimiento más profundo, se debe consultar los grandes
compendios que tratan del tema.
La prueba del agua destinada al consumo humano es de fundamental importancia, ya que
permite comprobar la ausencia o presencia de microorganismos o sustancias químicas presentes
en ella, los cuales pueden ser perjudiciales a la salud de las personas, es por eso que se realizan
diversas técnicas analíticas para verificar la presencia de ciertos microrganismos (Silva, 2004).

Los resultados obtenidos en la primera técnica enfocada a los Organismos Mesofílicos Aerobios
y Coliformes totales utilizando el vaciado en Placa nos muestran recuentos microbiológicos en
una muestra de agua B de 10 UFC/ml en el caso de anaerobios mesófilos por el método Petrifilm,
por otro lado nos indica que en la muestra A todas las muestras eran al 100% y presentaron
recuentos mayores a 10 UFC/ml por el mismo método de siembra, según un artículo citado por
la revista venezolana de Silva (2004). En cuanto a la verificación de la presencia de coliformes
totales, de igual manera se tomaron dos muestras, A y B, los cuales indicaron que el 87% de las
muestras de la marca A presentaron recuentos mayores a 10 UFC/ml por el método rápido de
siembra en placas Petrifilm y 53% de la marca B presentaron recuentos fuera de
especificaciones. Para el recuento en profundidad, todas las muestras de la marca A (100%)
presentaron recuentos mayores a 10 UFC/ml, de coliformes totales, y para la marca B el 80% de
las muestras presentaron recuentos de coliformes fuera de especificaciones (>10 UFC/ml). Con
esto podemos darnos cuenta sobre el grado de contaminación en tales muestras de agua ya que
arrojaron un alto porcentaje de microorganismos indicadores de calidad sanitaria, evidenciando
un alto grado de contaminación de las mismas y el peligro para la salud por su consumo.

Otro tipo de organismo presente en el agua son los hongos y levaduras, los cuales pueden ser
identificados mediante la misma técnica ya mencionada anteriormente. Los resultados arrojaron
que, en aguas muy contaminadas, la densidad de los hongos se ve incrementada, ya que están
en relación directa con la materia orgánica presente, por lo que se han sugerido también como
indicadores de contaminación. En los resultados obtenidos en las muestras, se detectaron
valores de la media de 2,0 x105 UFP/100ml y 2,10 x105 UFC/ml. Los valores de 6,2x102 UFC/ml
encontrados en el efluente, significan que es necesario seguir en el futuro su estudio, ya que los
indicadores bacterianos tradicionales no presentan relación directa con los hongos y se ha
reportado en el ambiente la presencia de especies de hongos de importancia clínica como
Aspergillus, Trichophyton y Candida (APHA,1995). Con esto notamos que es evidente la
necesidad del monitoreo periódico de las aguas residuales, con el fin obtener y mantener los
niveles de eficiencia en la remoción de patógenos en concordancia con las regulaciones
establecidas para la calidad microbiológica de las aguas con fines de reúso agrícola.
Esta sugerencia es pertinente debido a la presencia de bacterias potencialmente patógenas en
el efluente final del sistema de lagunas de estabilización.
Pasando a otro tipo de técnicas realizadas al agua, son las pruebas de dosificación en las cuales
podemos encontrar la medición del cloro residual, para la cual se utilizó la escala colorimétrica.
En los artículos se pueden observar que los resultados arrojados por el mismo nos dicen que
existen concentraciones desde cero a 0.02 mg C2/L a un rango de onda de 510 nm, esto en
cuanto al agua contenida en piscinas, por lo que estamos hablando de cantidades para agua de
uso humano. Existen medidas preventivas aplicadas a las piscinas que incluyen el uso de cloro
tales como el Real Decreto (140/2003, de 7 de febrero), en el que se establece un nivel máximo
de cloro libre residual de 1 miligramo por litro, con esto podemos darnos cuenta que el agua
analizada de estas piscinas se encuentra dentro del rango establecido por el decreto.
Confirmando que el agua tiene un nivel de calidad apto para el uso de las personas, sin embargo,
pueden existir factores exteriores que afecten la calidad del agua en general, como pueden ser
las lociones o cremas bloqueadoras utilizadas por aquellas personas que hagan uso de la
piscina, esto afectara el índice de calidad haciendo menos efectivo el sistema de desinfección
del agua, ya que se generan capas de grasa las cuales intervienen con el desinfectante (cloro)
(Martínez, 2019).

Se tomó en cuenta la técnica por volumetría de precipitación para identificar el ion cloruro
presente en el agua. Con esto se obtuvieron resultados de la revista revisión experimental del
intervalo de pH para la determinación de cloruros por el método de Mohr (Cury, G. 2006)

En esta técnica se realizó una revisión experimental del intervalo de pH de titulación, para
determinar iones cloruros en soluciones que contienen 0,0100 M de iones cloruros y iones
plata utilizando el Método de Mohr. Los análisis de resultados, dieron 1,67 % a 1,76 % como
error en las medidas en el intervalo de pH entre 6,0 y 9,0. Sin embargo mejores resultados
pueden ser logrados con un error de 1,50 % en el intervalo de 7,0 a 8,0.

Este Método puede resultar rápido, además de preciso en las determinaciones de cloruros,
sobre todo si se titulan bajo luz amarilla que permite una mejor visualización del punto final
de la titulación (Dick,1979). Los criterios sanitarios de la calidad del agua de consumo humano
están establecidos en el Real Decreto (140/2003). La concentración de cloruros máxima
permisible para aguas de consumo humano es de 250 mg/L. Una muestra que contenga esta
cantidad de cloruros puede tener un sabor salado fácilmente detectable si el anión está
asociado a los cationes sodio o potasio, pero el sabor no es apreciable si la sal disuelta en
agua es cloruro de calcio o magnesio ya que en estos casos el sabor salado no se aprecia
incluso con concentraciones de cloruro de 1 g/L (Cárdenas. 2010).

Para el análisis del color del agua llevada a cabo por medio de los valores triestimulo se
lograron obtener los siguientes resultados; el parámetro se evaluó con 10 réplicas para dos
matrices de agua natural, residual domestica (ARD) y 2 muestras residual no doméstica
provenientes del sector floricultor, una con coloración azul-verdoso (ARnD 1) y la otra de color
rojo (ARnD 2), las condiciones de repetibilidad y precisión son expresadas en términos de
coeficientes de variación para observar la dispersión de datos y con un criterio de aceptación
menor al 15% (Martínez, Osorio. 2018).

En recientes estudios se ha ampliado y reconocido el intervalo visible por el ojo humano a

longitudes de onda entre 310 nm en el ultravioletas hasta 1100 nm en el infrarrojo, pero
dependen mucho de la luminosidad de la fuente “brillo” (Sliney, 2016).

Según los resultados de las longitudes de onda de las muestras analizadas:

La respuesta a una hora de medición de la absorbancia usando la longitud de onda de 436

nm. Como se observa en la Figura 1, se obtuvieron dos perfiles donde la pintura roja resulto
más inestable, evidenciando un cambio de absorbancia de aproximadamente 0.077 unidades
desde el valor más alto hasta el más bajo lo que se refleja en un disminución del coeficiente
de absorción de 1.5 m−1 en 1 hora, con la matriz de color azul-verdoso se observó un
comportamiento más estable en el cual hubo una variación máxima de aproximadamente
0.003 unidades de absorbancia, lo que refleja un cambio en el coeficiente de absorción del
orden de 0.1 m (Martínez, Osorio. 2018). Con esto nos damos cuenta que el tiempo de análisis
es importante para generar resultados confiables, en cuanto al método de color real a 3
longitudes de onda es una ayuda útil y rápida para obtener un indicio de que tipo de
contaminación por color está afectando un cuerpo de agua, ya que usa la relación de los
colores primarios con las respectivas longitudes de onda propuestas (436 nm= amarillo; 525
nm= rojo; 620 nm= azul), esto es de gran utilidad cuando no se cuenta con un equipo que
pueda hacer un barrido en todo el espectro visible o simplemente no se tiene el tiempo
suficiente para hacerlo y se requiere de un dato certero y a tiempo.
La conductividad eléctrica utilizando el conductímetro se dice que dependerá de la
temperatura de la muestra, para que al momento de realizar la medición la temperatura de
referencia sea de 25 °C, así como la constante de la celda de 0.469 cm-1 y con una
compensación de 1.91%K (Sanabria, 2006).

En este artículo se rescataron los resultados obtenidos de muestras de agua de lluvia TI0137,
agua superficial TI207 y agua residual TI0187, los cuales arrojaron que la precisión de los
conductímetros comerciales se encuentra entre 0,1 y 1,0 %, y se espera una reproducibilidad
de 1 a 2 % después de calibrar el instrumento. Con esto se deduce que las aguas tanto de
lluvia como superficiales y residuales cuentan con la menos un porcentaje mínimo de
conductividad eléctrica. La conductividad de una solución se determina por un movimiento
iónico. La temperatura afecta al movimiento iónico, por ello es necesario compensar la
temperatura cuando se realizan mediciones de precisión. Generalmente, para realizar
mediciones comparativas, la temperatura estándar es de 20 ºC o 25º C (Sanabria,2006).

En el análisis de alcalinidad total se utiliza la técnica de volumetría, en esta técnica la medición

de la practica experimental utiliza para la alcalinidad una valoración con cambios de color
provocados por los indicadores fenolftaleína y naranja de metilo junto con un titulante acido
que en este caso fue el ácido sulfúrico. Como se pueden observar en los resultados arrojados
en el artículo

Con esto podemos ver en la tabla 2 que la alcalinidad total del agua hallada en las 3 muestras
nos indica en principio que las tres muestras tienen alcalinidad alta, es decir alta presencia
de sales en su composición, y luego se aprecia que la alcalinidad del agua de grifo y la del
agua comercial esterilizada RIK es alrededor de 10 veces mayor que la del agua comercial.
Las aguas que tienen altos valores de alcalinidad son consideradas indeseables debido a la
dureza excesiva a la elevada concentración de sales de sodio, mientras que las aguas con
valores bajos de alcalinidad son susceptibles a sufrir acidificación (Colque.2015).

Hablando de dureza total, una técnica de determinarla en el agua es mediante la técnica por
volumetría complejo métrica, en este caso de la información rescatada nos ofrece resultados
cuantitativos de la dureza total en las muestras de agua utilizando el método oficial COVENIN
2408-86 con buffer amonio y con el método COVENIN 2408-86 modificado con buffer borato
se muestran en la Tabla Nº3. Durante el desarrollo del ensayo de la dureza total utilizando el
buffer borato, la solución analizada mostró un cambio rápido de color azul y un nítido punto
final de la titulación. La dureza es indeseable en algunos procesos, tales como el lavado
doméstico e industrial, provocando que se consuma más jabón, al producirse sales insolubles
e incrustaciones en los tanques de caldera. En este caso en base a los resultados arrojados
.

La Dureza Total de agua determinada por el método COVENIN 2408-86 modificado utilizando
buffer borato no mostró diferencias estadísticamente significativas (p≤ 0,05) con el método de
referencia COVENIN 2408-86 en todo el rango de Dureza Total evaluado (Diaz, 2019). Según
la clasificación de la Organización Mundial de la Salud (OMS), se define como agua blanda la
que presenta concentraciones inferiores a 60 mg/L de carbonato de calcio (CaCO3),
medianamente dura entre 61 y 120 mg/L, dura entre 121 y 180 mg/L y muy dura aquella con
valores superiores a 180 mg/L. Con esto podemos ver que las muestras del pozo profundo al
acueducto 11 se pueden calificar como aguas duras tomando en cuenta el valor obtenido en
mg/L mientras que el acueducto 12 y el agua envasada pueden clasificarse como aguas
blandas.
 7. Conclusiones.
Las diversas técnicas para el análisis de agua destinada al consumo humano son
de fundamental importancia, ya que permite aferir la ausencia o presencia de
microorganismos o sustancias químicas presentes en ella, los cuales pueden ser
perjudiciales a la salud de las personas.
Las pruebas microbiológicas del agua es proveer subsidio acerca de su potabilidad,
es decir, ausencia de riesgo de ingestión de microorganismos causadores de
enfermedades, mayormente provenientes de la contaminación por excrementos
humanos y de otros animales de sangre caliente. Esencialmente, los análisis físico-
químicos pueden resumirse en la medición del pH y de la tasa de cloro residual a
nivel de los grifos y el hogar. Esto permite garantizar el control de la cloración
realizada a diario en los tanques, los depósitos y los pozos con bomba manual para
mantener el contenido en cloro residual en los grifos entre 0,4 y 0,5 mg/l.
El principal factor de riesgo para numerosas intoxicaciones e infecciones es el
intercambio fisiológico del agua, siempre que ésta se encuentre alterada, mediante
contaminación, en sus parámetros físicos, químicos o biológicos. Dependiendo del
uso que se vaya a hacer, es de máximo interés controlar analíticamente la calidad
del agua. Pequeños cambios en la presencia de algunas sustancias pueden variar
sensiblemente las propiedades del agua, hacerlas inservibles y hasta peligrosas
para la salud.
La técnica de Organismos Mesofílicos Aerobios por Vaciado en Placa nos dice que
el agua destinada al consumo humano puede ser contaminada por las aguas
residuales o por desechos humanos y animales que pueden contener
microorganismos patógenos (principalmente intestinales) como son los causantes
de la tifoidea (Salmonella typhi), la disentería (Shigella dysenterieae) o el cólera
(Vibrio cholerae) entre otros.
La técnica de Hongos y Levaduras por Vaciado en Placa su método se basa en
inocular una cantidad conocida de muestra, en un medio de cultivo selectivo
específico, aprovechando la capacidad de este grupo microbiano de utilizar como
nutrientes a los polisacáridos que contiene el medio. La hidrólisis de estos
compuestos se efectúa por enzimas que poseen estos microorganismos. La
sobrevivencia de los hongos y levaduras a pH ácidos se pone de manifiesto al
inocularlos en el medio de cultivo acidificado a un pH de 3.5. Así mismo, la
acidificación permite la eliminación de la mayoría de las bacterias. Finalmente, las
condiciones de aerobiosis y la incubación a una temperatura de 25 ± 1 ºC da como
resultado el crecimiento de colonias características para este tipo de
microorganismos.
En el proceso de cloración se obtiene dos tipos de cloro residual, el cloro libre
residual, cloro molecular, ácido hipoclorito e ion hipoclorito, y el cloro combinado
residual, monocloramina, dicloramina y tricloramina. El cloro residual combinado se
forma cuando el agua tiene amoníaco y productos orgánicos. Esta forma de cloro
es un agente oxidante más débil y su acción bactericida es más lenta. La
determinación del contenido de cloro residual, tanto libre como combinado, es de
interés y debe hacerse diariamente en las aguas de distribución para consumo
humano. El contenido de cloruros de las aguas naturales es variable y depende
principalmente de la naturaleza de los terrenos atravesados, en cualquier caso, esta
cantidad siempre es menor que la que se encuentra en las aguas residuales, ya que
el cloruro de sodio o sal de mesa (ClNa) es común en la dieta y pasa inalterado a
través del aparato digestivo. El aumento de cloruros en una muestra de agua puede
tener orígenes diversos. Si se trata de una zona costera puede deberse a
infiltraciones de agua del mar, en el caso de una zona árida este aumento se debe
al lavado de los suelos producido por fuertes lluvias y en otros casos puede deberse
a la contaminación del agua por aguas residuales, etc.
La técnica de pH por potenciometría de electrodo de vidrio se comprobó
experimentalmente que, con los dispositivos y los procedimientos de medición
empleados, pueden realizarse la medición potenciométrica de pH de soluciones
líquidas en condiciones de laboratorio. Lo anterior de demuestra por la dependencia
lineal obtenida entre el potencial de la celda electroquímica y los valores de pH en
un rango de 3 a 11.
Debido a que la alcalinidad de muchas aguas superficiales es primariamente una
función del contenido de carbonato, bicarbonato e hidróxido, se toma como un
indicador de la concentración de estos constituyentes. Los valores medidos también
pueden incluir contribuciones de boratos, fosfatos, silicatos, u otras bases que estén
presentes. La alcalinidad superior a las concentraciones de metales alcalinotérreos
es significante para determinar la aptitud de un agua para irrigación. Las mediciones
de alcalinidad se emplean en la interpretación y control de los procesos de
tratamiento de aguas. Las aguas residuales domésticas tienen una alcalinidad
menor, o ligeramente mayor, que la del agua de suministro.
Para la última técnica de la Dureza Total por volumetría complejo métrica se
propone el uso del buffer borato en la determinación de la Dureza Total en agua con
EDTA como alternativa a la solución buffer amonio.
El control de la calidad de las aguas incluye la problemática del muestreo (número
de muestras, frecuencia, lugares de muestreo), la conservación de las muestras, la
selección de los parámetros de control, la elección de los métodos analíticos y el
control de calidad de los análisis.
 8. Cuestionario.
1. Reporte como UFC/ml en Organismos Mesofílicos Aerobios, ppm
(mg/lt) en Cloro residual y NMP/100 ml en Organismos Coliformes
totales y conductividad eléctrica en μS/cm.

ESPECIFICACIÓN. LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE

(mg/L).
Cloro residual libre 0,1

Organismo NMP/100 ML Conductividad eléctrica µS/CM

Coliformes totales UFC/100 mL 100/80 µS/cm
2276/2390

2. ¿Cuál es la función del Verde Brillante y la Bilis en la prueba

confirmativa de Coliformes por NMP?
R= En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para
el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram
negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la
lactosa con producción de ácido y gas.

3. ¿Por qué no se puede dar un número absoluto en la prueba NMP, es

decir a 0 tubos (+) se reporta como menos de 2?
R= Se debe a que cada tubo inoculado en la prueba presuntiva presenta
diluciones correspondientes, lo que reduce significativamente la densidad
bacteriana conforme más alta sea la dilución por lo que el valor de la masa
microbiana entra en función de la cantidad de tubos positivos existentes en
la inoculación obteniendo así un valor aproximado ya establecido en tablas
estadísticas.
4. Explique porque no se debe de vaciar el Agar fundido a más de 40°C.
R= El desempeño del medio de cultivo respecto a la productividad y
selectividad es mucho más consistente cuando se descontamina por
calentamiento a 100°C durante 30 min respecto a la esterilización en
autoclave a 121°C durante 15 minutos.
5. Explique porque se incuban las placas en forma invertida.
R= Se evitan las contaminaciones y que el agua de condensación caiga
sobre el medio.

9. Referencias.
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Terms of Water Quality Index, doi: http://doi.org/10.12691/ajwr-1-3-3,
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