Rompimiento Celular

Separación y Procesos
Biotecnológicos
Agenda

Membrana celular

Rompimiento no mecánico

Rompimiento mecánico
 Caldo de Fermentación
Con Células
Proteínas
Intracelular Separación de Células

Rompimiento Celular Sin Células

•Células inmovilizadas
•Células retenidas

Separación Material Intracelular

Sobrenadante

Precipitación Ácidos Nucleicos,

Proteasas

Tratamiento de cuerpos incluidos

Concentración

Purificación Alta
Resolución

Permite
Refinamiento •Altos niveles de pureza
•Estabilidad del producto
Agenda

Membrana celular

Rompimiento mecánico

Rompimiento no mecánico
Rompimiento Celular
Métodos Mecánicos

Separación y Procesos
Biotecnológicos
 Métodos Mecánicos
El rompimiento se lleva a cabo por acción mecánica,
pudiendo ser:
• Fricción
• Efecto de la presión
• Colisiones.

Estos métodos incluyen las operaciones unitarias de

ultrasonido, homogenización , molinos de bolas, etc.
Estos métodos resultan ser agresivos con las proteínas de
interés, debido principalmente a la generación de calor.
Adicionalmente, el escalamiento resultan ser un problema
significativo.
 Métodos Mecánicos
Técnicas Principios Stress Costos Ejemplos

Homogeni- Las células son rotas Moderado Moderado Rompimiento de

zador de en un mezclador tejidos y células
cuchillos animales.
Las células son forzadas a Fuerte Moderado Tratamiento a gran
pasar a través de un pequeño
Homogeni- orificio lo que produce que se escala de suspensión
zador alta rompan por el esfuerzo de de células.
corte
presión

Ultrasonifi- Las células son Fuerte Caro/ Rompimiento de

suspensiones de células a
cación quebradas en una Moderado lo menos en pequeña
cavidad ultrasónica escala
Ruptura de microalgas

Molienda Las células son rotas Moderado Barato

por medio de una
molienda con
abrasivos
Molinos de Las células son Fuerte Barato Rompimiento a gran
escala para
bolas trituradas con bodas suspensiones de células
de acero o vidrio y células de plantas
 MÉTODOS MECÁNICOS

Los métodos mecánicos se pueden dividir en dos tipos :

Métodos a pequeña escala son :

•Ultrasonificación
•Molina con abrasivos
•Homogenizadores

Métodos a gran escala

•Homogenizadores a alta presión
•Molinos de bolas

Ambos son operaciones unitarias típicas de la Ingeniería de

Procesos y de la industria de alimentos.
MÉTODOS MECÁNICOS

Pequeña Escala
 Desintegración completa de una célula

Para determinar el contenido de proteínas total de una célula se debe

realizar la desintegración total de ellas, para ello se utiliza la siguiente
metodología:
1. Se adicionan 1 volumen de bolas de vidrio 1-3
4-5
en un ependorf.
2. Se adiciona 1 volumen de las células a
desintegrar (en forma de pasta, previamente
separadas del caldo)
3. Se adiciona 0.5 volumen de buffer, se
puede adicionar algún detergente (SDS,
Triton X-100)
4. Se agitan fuertemente en un vortex, entre 2
y 5 minutos (controlando que no se caliente)
5. Se repite el punto 4 hasta asegurarse que no
se rompen más las células.
6. Se separan los desechos de la solución y se
analiza la concentración de proteínas.
6
100% Rompimiento
 Ultrasonificación

Se utilizan frecuencias de 20 Khz esto produce vibraciones que

provocan el fenómeno de cavitación.
• Se producen zonas de baja presión en el líquido
• El líquido se transforma en gas formándose pequeñas burbujas
• Las burbujas colapsan debido a los cambios de presión.
• Se producen fuertes esfuerzos de corte en el líquido que rompen
las células.

Ultrasonicador
Aplicación en la ruptura de microalgas
 Molienda con abrasivos

Procedimiento:
1. Se utilizan un recipiente donde se agrega algún agente abrasivo, como
bolas de vidrio.
2. El sistema se hace vibrar lo que produce:
• Colisiones de las bolas con la biomasa
• Fuertes esfuerzos de cortes
• Se produce la ruptura de las células.
3. Posteriormente, se separan las bolitas y desechos celulares y se
recupera el sobrenadate.
 Homogenizadores

La idea es generar altos esfuerzos de corte que produzcan la ruptura de

las células. Los altos esfuerzos de corte se pueden obtener por:
1. Embolos
2. Cuchillas
3. Pistones

Émbolos Cuchillas Pistones

MÉTODOS MECÁNICOS

Gran Escala
 MÉTODOS MECÁNICOS

Gran Escala

HOMOGENEIZADORES A ALTA PRESIÓN

 Homogenizadores a alta presión
Son los equipos más ampliamente usado en el rompimiento celular.
Resulta ser un método no selectivo
Se componen de:
• Pistón a alta presión
•Laboratorio 1-2
•Industria
•Válvulas
La suspensión que se procesa se hace pasar varias veces hasta lograr el
nivel de liberación deseado.
 Presión Descripción
Alimentación
0.1-0.5 MPA

Presión
Alimentación Máxima
Compresión
60 MPA
Esquema del homogeneizador
 Mecanismo

Las células se rompen cuando la suspensión pasa a alta presión por la

válvula de descarga. Las células son sometidas a :

• Turbulencia
• Cavitación
• Fuertes esfuerzos de corte

Alimentación

Parámetros de Diseño

1. Presión de operación
2. Diseño de la válvula
3. Localización del Producto
4. Temperatura de operación
5. Número de Pasadas
1.- Presión de operación
Condiciones:
-A mayor presión mayor
liberación de proteínas.

-Siempre se trabaja P
>30 Mpa
-La presión más usada es
55 MPa
 2.- Tipo de Válvula

Las válvulas en forma de Cuchillas provocan mayor

turbulencia, lo que implica mayor Rompimiento
 3.- Localización del Producto

Dependiendo donde se encuentre localizado el producto se

deberán aplicar diferentes condiciones para romper la
célula, por ejemplo:
• Si el producto se encuentra en la membrana, se
debe aplicar un menor esfuerzo.
• Si se encuentra dentro de un organelo, debe ser
mayor esfuerzo.
 4.- Temperatura

La temperatura tiene un doble efecto, dado que ha

mayor temperatura:
• Se reduce la viscosidad, lo cual es positivo para el
proceso
• Pero se puede denaturar el producto

SE DEBE BUSCAR UNA TEMPERATURA OPTIMA

 5.- Número de Pasadas

Proteína Liberada,

Proteína Liberada (%)

R/RM

Número de Pasadas, N

A medida que aumenta el número de pasadas aumenta la proteína

liberada.
 DISEÑO DE UN HOMOGENIZADOR A ALTA PRESION

La cinética de desintegración de las células es de 1ª orden

respecto al número de pasos

Proteína Liberada, R/RM

dR
= k ( RM − R)
dN

R: Producto liberado luego de N pasos.

Número de Pasadas, N

RM: Producto máximo que se podría liberar.

N: Número de pasos
k: Constante cinética f(T,P, tipo de válvula)
Generalmente
k = k* Pa a= 2.9 Levaduras
a= 2.2 E.coli
Integrando N =0 R=0  RM 
N=N R=R ln  = k  N
 RM − R 

 
 1 
ln  = kN
1− R R 
 M 
Recordando que: k = k * Pa

 RM 
ln  = k  N
 RM − R 

La ecuación de Diseño queda de la forma:

RM
ln = k *  Pa  N
RM − R

SE DETERMINA EL NUMERO DE PASADAS PARA UN

NIVEL DE ROMPIMIENTO DADO
EJEMPLO 1
En la recuperación de b-galactosidasa de E.coli, se hace pasar
por un homogenizador de alta presión. La suspensión contiene
47,6 g/l en peso seco. La presión de operación utilizada fue
de 60 MPa.

La cantidad de proteína liberada después de cada paso se

presenta en la siguiente tabla
Paso % Recuperación
1 63,0
2 79,0
5 96,0
10 99,9

a) Estime el valor de la constante cinética de rompimiento.

b) Estime el número de pasos para liberar el 93% de la enzima.
Respuesta:
Datos
N %R 1/(1-(R/RM) ln ()
1 63 2.7 0.994
2 79 4.8 1.561
5 96 25.0 3.219
10 99.9 1000.0 6.908

a) Estime el valor de la constante cinética de rompimiento

 
 1 
ln  = kN
1− R R 
 M 

 
 1 
ln  = 0.6868  N
1− R R 
 M 
b) Estime el número de pasos para liberar el 93% de la enzima.

 
 1 
ln  = 0.6868  N
1− R R 
 M 

Para R/RM = 93% ➔

 1 
ln 
 1   1 − 0 . 93  = 3.06
ln  = 0.6868  N  N =
 1 − 0.93  0.6868
 ESCALAMIENTO

El escalamiento se hace en base al factor “Q” que se

define como:

Porcentaje de Proteína liberada

Q=
Potencia Consumida

La Potencia consumida se determina como:

Potencia = F  P = N  V  P
F: Caudal a tratar
V: Volumen a tratar por pasada
P: Presión
 El porcentaje de proteína liberada se calcula como:

*100 = (1 − e −k P N )*100
R
Porcentaje de Proteína Liberada =
a

RM

Luego

Q=
(1 − e − k P a  N
)*100
F P

Se puede encontrar la presión de operación óptima que

maximiza Q, para un número de pasadas dada:

dQ d 2Q
=0 0
dP dP 2
EJEMPLO 2
Células de Micrococcus son rotas, a 5º C, en un homogenizador
Manton-Gaulin que opera a presiones entre 200 y 550 kgf/cm2.
Se han realizado experimentos en el equipo obteniendo los
diversos porcentajes de liberación de proteínas en función del
número de pasadas.

Tabla Nº2: Porcentaje de Rompimiento de Células

Nº Pasadas Presión
200 300 550
1 5 13.5 42
3 14 33.5 83
5 22 47.5 94.5

Si se necesita liberar el 80% de las células indique :

¿Que condiciones de Operación son más convenientes: trabajar a

una presión de 230 ó 430 (kgf/cm2)? .
 Respuesta:
i) Cálculo de las constante k para cada presión

Presion 200 kgf/cm2 Presion 300 kgf/cm2 Presion 550 kgf/cm2

N % R 1/(1-(R/Rm)) ln() %R 1/(1-(R/Rm)) ln() %R 1/(1-(R/Rm)) ln()
1 5 1,05 0,05 13,5 1,16 0,15 42 1,72 0,54
3 14 1,16 0,15 33,5 1,50 0,41 83 5,88 1,77
5 22 1,28 0,25 47,5 1,90 0,64 94,5 18,18 2,90

 
 
 1 
ln   = k  N = k   P a
N
 1 −  R   
   Rm   
 

Presion k
200 0,0499
300 0,1312
550 0,5818
Respuesta:
ii) Cálculo de las constante k´ y a
Presion k ln k ln (P)
200 0,0499 -3,00 5,30
300 0,1312 -2,03 5,70
550 0,5818 -0,54 6,31

k = k Pa
La pendiente obtenida corresponde a

ln k = ln k  + a ln P
iii) Cálculo N para cada presión

Presión= 230 kgf/cm2 Presión= 430 kgf/cm2

¿Que condiciones de Operación son más convenientes: trabajar a una

presión de 230 ó 430 (kgf/cm2)?
 Calentamiento

Como se señalo el proceso de rompimiento celular se produce por

una entrega de energía al sistema, esto provoca un aumento de la
temperatura el cual se puede determinar mediante la siguiente
relación:

Potencia = F    C p  T = F  P
Donde
: Densidad F: Caudal a tratar
Cp: calor específico P: Presión
T: Aumento de temperatura

P
T =
 Cp
Ejemplo 3
Determine el aumento de temperatura si la presión en
el homogenizado es de 700 bar, la densidad 1100
kg/m3 y el calor específico 4000 J/kg K

P
T =
 Cp
MÉTODOS MECÁNICOS

Gran Escala

MOLINOS DE BOLAS
 Molinos de Bolas
Los molinos de bolas a gran escala constan de:

• una cámara de molienda

• con perlas de vidrio (elemento activo de la molienda)
•un eje giratorio que posee:
• discos
• barras
• anillos
que provocan el movimiento del contenido del molino.
El tipo de agitador está directamente relacionado con el
transporte óptimo de la energía
Esquema de Molinos de Bolas
Los discos, barras o anillos permiten solo el paso de las
células a través de la cámara, no así el de las bolas.

Los molinos de perlas tienen una relación longitud a

diámetro de las cámara de molienda de
1: 2.5 a 1:3.5

Los volúmenes de las cámaras van entre:

• Laboratorio 50 ml
• Industrial 250 lts para flujos de 2000l/h
 Mecanismo

1. Se produce un transporte de energía cinética desde

el agitador a las bolas de vidrio.
2. Se forman diferentes perfiles de velocidad en el
interior de la cámara.
3. Se generan fuertes esfuerzos de corte, junto con el
hecho de aumentar la frecuencia y fuerza de las
colisiones entre las bolitas y las células lo que
provoca la desintegración de éstas.
 Parámetros operacionales
1. Velocidad del agitador
2. Diseño del agitador
3. Velocidad de alimentación de la suspensión
4. Tamaño de bolas de vidrio
5. Carga de bolas
6. Concentración celular
7. Temperatura
8. Tiempo de residencia
 1.- Velocidad del agitador (ū)
La velocidad promedio se define como:

Dm    n
u=
60000
Donde
Dm. Diámetro promedio de los anillos
n: Velocidad de agitación

A medida que: aumenta de la velocidad del agitador:

•Aumenta la fuerza de corte y la frecuencia de colisiones

•Aumenta la temperatura
•Aumenta la erosión de las bolitas
Proteína Liberada (%)

Enzima Liberada (%)

Diferentes tipos de agitador

Velocidad del Agitador

 2.- Diseño del agitador

El tipo de agitador promueve una mezcla del tipo flujo

pistón, pero con una distribución de tiempos de
residencia, lo cual afecta el nivel de ruptura de las
células.

Ejemplo
Anillos Excéntricos Anillos Concéntricos

Dm = 2 e 2
+ d 2

4
 3.- Velocidad de alimentación de la suspensión

La potencia consumida es función de:

• la velocidad de agitación y,
• levemente de la velocidad de alimentación,
por lo cual considerando este punto se recomienda
operar a los flujos más altos posible.
4.- Tamaño de bolitas de vidrio
Dependiendo la escala, el tipo de célula y la
localización del producto de interes se recomiendas
diferentes tamaños de bolitas.
Escala
Laboratorio F: 0.2-1.5 mm
Industrial F: 0.4-1.5 mm

Tipo de célula
Levadura F > 0.5 mm
Bacterias F  0.5 mm

Localización
Espacio periplasmático (más fácil) Mayor Tamaño
Protoplásmatico (más difícil) Más pequeñas
 Eficiencia

Volumen Molino
Razón =
Volumen Bolitas

• Cuando hay un mayor número de bolitas aumenta el

número de colisiones y aumenta la eficiencia, para
poder mantener la “Razón” se debe trabajar con
bolitas más pequeñas.
• Al disminuir el diametro de las bolitas, éstas tienden
a flotar

EXISTE UN DIAMETRO OPTIMO DE BOLITAS QUE

SE DETERMINA EXPERIMENTALEMENTE
 5.- Carga de bolitas
La carga óptima de bolitas dependerá del tipo de
células y del diámetro de éstas.
Nivel de la carga
• Baja provoca baja eficiencia
• Alta provoca un alto consumo de potencia y alta
liberación de calor.
CARGA OPTIMA ENTRE 80-90%
Si F = 0.5 mm 85%
Si F = 1.0 mm 80%
 6.- Concentración de la suspensión celular

El peso húmedo de células óptimo es entre 40-50%.

7.- Efecto de la temperatura

La temperatura facilita el rompimiento pero puede

afectar el producto.
Temperatura óptima entre 5-15ºC, para ello se
requiere de sistemas de enfriamiento
 8.- Tiempo de Residencia

A mayor tiempo de residencia mayor rompimiento

Porcentaje de Proteína Liberada
[%]

Tiempo de residencia [min]

 DISEÑO DE UN MOLINO DE BOLAS

Este tipo de equipos puede operar en forma batch o

continua.

Operación Batch

El grado de rompimiento se mide en forma:

• Directa: Contando células rotas

• Indirecta: Midiendo componentes liberados durante el
rompimiento, por ejemplo
• Proteínas
• Actividad de enzima
 Ecuación de DISEÑO

Al igual que los homogenizadores de alta presión los molinos

de bolas presenta una cinética de rompimiento de 1º orden
respecto al tiempo.

Del balance de masa para la proteína liberada:

dR
Vm  = k ( RM − R )  Vm

Porcentaje de Proteína Liberada [%]

dt

VM: Volumen libre del molino

R: Producto liberado.
RM: Producto máximo que se podría liberar.
t: Tiempo de operación o residencia
Tiempo de residencia [min]

k: Constante cinética [t-1]

f(T,tipo y concentración de células, carga, velocidad
de agitación, diámetro de las bolitas)
 Integrando entre t =0 R =O
 RM 
ln  = k  t
 RM − R 

Porcentaje de Proteína Liberada [%]

 
 1 
ln  = k t
1− R 
R
 M 

En el caso de trabajar evaluando actividad

Integrando entre t=0 A =0
 AM 
ln  = k  t
Tiempo de residencia [min]

 AM − A 
 1 

ln  = k  t  RM 
 1 − A AM  ln  = k  t
 RM − R 
A: Actividad de la enzima liberada
AM: Actividad máxima que se podría liberar.
t: Tiempo de operación o residencia
k: Constante cinética [t-1]
f(T,tipo y concentración de células, carga, velocidad de agitación, diámetro de las
bolitas)
Ejemplo 1:
En un estudio de liberación de proteínas intracelulares en función de la velocidad
de agitación empleando un molino de bolas, con bolas de entre 0,55 y 0,85 mm
de diámetro, utilizando una suspensión celular de una concentración 50% (peso /
volumen), un flujo de alimentación igual a 50 L/h y una carga de alimentación de
85%. Bajo estas condiciones se obtuvieron los siguientes datos:

Velocidad de Agitación Proteína liberada (mg/mL)

(rpm)
1200 15,88
1500 22,35

1750 22,90
2000 22,94
2250 23,00

a) Determine la velocidad de agitación óptima para este agitador.

a) Determine la velocidad de agitación óptima para este agitador.
Ejemplo 2: Propuesto
Seleccionada la velocidad de agitación se varió el diámetro del agitador,
obteniéndose los siguientes datos:

Tiempo de residencia Molino 1 Molina 2

(min) log(Rm/(Rm-R)) log(Rm/(Rm-R))

3 0,037 0,060
5 0,090 0,150

10 0,160 0,225
15 0,225 0,325
20 0,300 0,425

1. Estimar las constantes cinéticas de desintegración para cada tipo de agitador (k)
2. Calcular el tiempo requerido para obtener un 80% de rompimiento para cada
agitador.
1. Estimar las constantes cinéticas de desintegración para cada tipo de agitador (k)

Tiempo de residencia Agitador 1 Agitador 2

(min) log(Rm/(Rm-R)) log(Rm/(Rm-R))

3 0,037 0,060
5 0,090 0,150

10 0,160 0,225
15 0,225 0,325
 RM 
20 0,300 0,425 ln  = k  t
 RM − R 
2.- Calcular el tiempo requerido para obtener un 80% de rompimiento para cada agitador.

 
 RM   1 
ln  = k  t ó ln  = k t
 RM − R  1− R R 
 M 
 Escalamiento
Transferencia de calor
El principal problema es remover la energía , que debe ser disipada.
Toda la energía entregada por los agitadores es transferida al interior del molino
como calor.
Este calor debe ser removido por las paredes.
Así se definió:

Area de transfere ncia de calor   T  L 4

R= = =
Volumen de molino  T  L T
2

4
Donde T: Diametro del Molino
L: Largo del Molino
Esta razón disminuye cuando se aumenta el diámetro
 Escalamiento
Potencia
La potencia entregada se determina como:

Potencia = c    N 3  D 5

Donde : Densidad de la suspensión

N: Velocidad de rotación de los impeler
D: Diámetro del impeler
C: constante
Si se aumenta el diámetro del impeler se aumenta la energía o potencia entregada.
Si el diámetro del molino se duplica el área de transferencia se reduce y no se disipa
toda la energía.
SE DEBEN EVALUAR LAS DIMENSIONES PARA OPTIMIZAR NIVEL DE
ENFRIAMIENTO Y MINIMIZAR EL CONSUMO DE POTENCIA
 Rompimiento Celular

Métodos No- Mecánicos

 Métodos No-mecánicos
Técnicas Principios Stress Costos Ejemplos

Permeabili- Permeabilización de la Suave Caro Tratamiento de M.

pared celular, lo cual
zación produce el rompimiento
lysodeikticus con
Enzimático de la célula lisozima.

Shock Ruptura Osmótica de Suave Barato Ruptura de Células de

la membrana Glóbulos Rojos.
Osmótico
Solubiliza-ción Disolución de la Suave Moderada- Rompimiento de
membrana celular con mente Caro bacterias con SDS.
detergentes

Disolución de Solventes orgánicos que Moderado Barato Rompimiento de

disuelve la pared celular y
Lípidos también la desestabilizan levaduras con
tolueno.

Tratamien-to Solubilización de la Fuerte Barato

membrana por
con álcalis saponificación de los
lípidos
Tratamiento enzimático

Teoría
Existen enzimas que pueden hidrolizar la membrana
celular de microorganismos. Cuando la membrana ha sido
suficientemente permeabilizada, algunos compuestos
intracelulares pueden ser liberados al medio. Una
comparación entre un proceso de rompimiento y otro de
permeabilización.
 Metodología
El modo de acción es muy simple basta con agregárselo a una
suspensión y se produce una reacción muy rápida la cual deteriora la
pared celular. La reacción es selectiva y ataca a determinadas
estructuras de la pared celular como son las glucanasa, mananasas.

Ventajas: Método suave y selectivo escalable

Desventajas: Costo de la enzima lo hace difícil de utilizar a gran

escala.
Microorganismo Enzima Efecto

Bacterias Lisozima Ruptura de los enlaces b-1,4

entre N-acetil murámico y N-
acetil glucosamida
Levaduras Complejo glucanasa- Rompe la capa de glucano y
mananasa de manano

Células de plantas Celulosas y Rompen capa de celulosa y

peptinasas peptino
 Shock Osmótico
Teoría
Resulta ser uno de los métodos más simple:

1. Las células se colocan en una volumen de agua 2 veces

mayor que el volumen de células.
2. Bajo estas condiciones las células se hinchan, debido a
un simple flujo osmótico que se produce debido a que
las células contienen solutos (los causantes del flujo
osmótico de agua al interior de la célula).
3. Las células se hinchan y algunas llegan a reventarse.

La susceptibilidad de las células es relativa y depende

fuertemente de su tipo.
 Shock Osmótico
.

Fáciles Difíciles
Los glóbulos rojos son fáciles de Las células vegetales son muchos
lisar. más difíciles, dado que sus
paredes contienen compuestos que
son impermeables al flujo
osmótico
Los glóbulos rojos son fáciles de lisar.

Las células vegetales son muchos más difíciles, dado que sus
paredes contienen compuestos que son impermeables al flujo
osmótico.

Se puede calcular la presión necesaria para romper células a partir

de la ley van´t Hoof. La cual se deduce desde la condición de
equilibrio :

P = - R*T*c1

Donde
c1 : Concentración de solutos en el interior de la célula.
T: Temperatura
R: Constante de los gases ideales

En el caso de una célula que contiene una concentración de solutos

del orden de 0.2 M, calculando la diferencia de presión alcanzara
valores del orden de -5 atm (dentro mayor presión que afuera).
 Solubilización con detergentes

Teoría
Es uno de los método no-mecánico más
utilizado para el rompimiento de
células.

Los detergentes tienen una zona

hidrofílica y otra hidrofóbica, por esta
razón pueden interactuar tanto con el
agua como con los lípidos.

Su habilidad se basa en la
solubilización de los lípidos de la
pared celular.

Los detergentes más utilizados son de tres tipos:

• Detergente aniónico
• Detergente catiónico
• Detergente no-iónico y polidispersante
 Detergentes aniónicos
Ejemplos
•Dodecil Sulfato de Sodio (SDS) CH3(CH2)11 SO3- Na+
•Sulfonato de Sodio CH3(CH2)9 -Phenyl-SO3- Na+
•Tauroclorato de Sodio

El SDS es uno de los detergentes aniónicos más ampliamente estudiados.

Tauroclorato de Sodio
 Detergentes aniónicos

Entre los materiales aniónicos se encuentran los jabones

(sales de ácidos grasos).

Estos jabones dependen del grupo de ácido carboxílico que

tengan y resultan efectivos a altos pH donde el grupo se
encuentra ionizado. A su vez resultan ineficientes en aguas
duras que contengan iones calcio que pueden reaccionar con
ellos y formar compuestos insolubles.

Las desventajas de los detergentes tradicionales se puede superar si

se reemplazan los grupos carboxilos por grupos sulfatos.

Los sulfatos que contienen grupos fenilos son más efectivos que los
compuestos que contienen grupos alquilos, debido principalmente que
no son fáciles de degradar microbianamente, como son los detergente
utilizados para lavado.
 Detergentes cationicos
Ejemplos
•Bromuro de Cetiltrimetil Amonio (CTAB) CH3(CH2)15 N+ (CH3)3 Br-

Son detergentes más suaves (tipo shampoo), por lo cual se produce

un rompimiento más suave de las células.
 Detergente no-iónicos
Ejemplos
•Triton X-100 C8H17-Phenyl-(OCH2CH2)9.5OH

Son generalmente polímeros solubles en agua, se utilizan en los

detergente para lavar vajilla.

Estos detergente también tienen una parte

hidrofóbica y una hidrofílica, pero la parte
hidrofílica no es ni un sulfato ni un
tetraalquilamonio sino un alcohol.
A bajas concentraciones de detergente no se produce
degradación de los lípidos, pero a alta concentración se
produce una degradación que resulta lineal a la
concentración de detergente, junto a esta variable también
se altera la tensión superficial de la solución.

La relación que se produce entre la solubilización y otros

fenómenos es que el detergente forma micelas, en cuyo
interior se encapsulan los lípidos digeridos (Cabezas
hidrofílicas y colas hidrofóbicas que están en contacto con la
sopa de lípidos).
Procedimiento

1. Se coloca un determinado volumen de detergente concentrado por un

volumen de células. Generalmente la mitad de volumen de detergente
que de volumen de células.
2. El detergente rompe la membrana celular.
3. La suspensión resultante se centrifuga para remover los fragmentos
de células y luego se pasa a través de una columna de adsorción o por
etapas de extracción para aislar el producto.
 Tratamiento con solvente (disolución de lípidos)

Es una técnica la cual no ha sido muy documentada, sólo se

requiere de información experimental.

Una buena forma de seleccionar el solvente es analizar la

volatilidad (desde manuales), este parámetro puede relacionarse
con las interacciones lípido solvente, poniendo atención en el
calor de mezcla.

Solventes con similar solubilidad atacarán los lípidos de forma

similar.

Procedimiento

1. El método consiste en adicionar la suspensión de biomasa

un volumen de tolueno del orden de un 10% de biomasa.
2. El tolueno es absorbido por las células, las cuales se
hinchan y luego explotan.
3. El contenido de las células se libera al medio y luego puede
ser separado.
Existen otros solventes que puede ser utilizados como :

• Benceno (que es cancerigeno y de una alta volatilidad, el

tolueno también es cancerigeno pero de más baja
volatilidad).
• Cumeno
• Clorobenceno
• Xileno
• Octanol (Altos alcoholes)
 Tratamiento alcalino

Es un tratamiento bastante fuerte, no selectivo y barato.

Algún álcalis es agregado a un suspensión de células, el álcalis

reacciona con la pared celular en diversas formas, produciendo la
saponificación de lípidos.

Desventajas : Una alta concentración de álcalis puede hasta

producir la denaturalización de las proteínas (destruyendo el
producto).

Resulta la opción menos utilizada.

Resumiendo

Membrana celular

Rompimiento no mecánico: Agentes Químicos y

Biológicos

Rompimiento mecánico: Efectos de temperatura,

presión y esfuerzo de corte