Este documento describe el procedimiento para extraer ADN a partir de saliva. La extracción implica romper las membranas celulares y nucleares con un detergente para liberar el ADN, aislarlo con una solución salina y precipitarlo con alcohol absoluto frío para recuperarlo. El objetivo es obtener ADN de buena calidad de manera sencilla y rápida para su uso en técnicas de biología molecular.
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Este documento describe el procedimiento para extraer ADN a partir de saliva. La extracción implica romper las membranas celulares y nucleares con un detergente para liberar el ADN, aislarlo con una solución salina y precipitarlo con alcohol absoluto frío para recuperarlo. El objetivo es obtener ADN de buena calidad de manera sencilla y rápida para su uso en técnicas de biología molecular.
Este documento describe el procedimiento para extraer ADN a partir de saliva. La extracción implica romper las membranas celulares y nucleares con un detergente para liberar el ADN, aislarlo con una solución salina y precipitarlo con alcohol absoluto frío para recuperarlo. El objetivo es obtener ADN de buena calidad de manera sencilla y rápida para su uso en técnicas de biología molecular.
Este documento describe el procedimiento para extraer ADN a partir de saliva. La extracción implica romper las membranas celulares y nucleares con un detergente para liberar el ADN, aislarlo con una solución salina y precipitarlo con alcohol absoluto frío para recuperarlo. El objetivo es obtener ADN de buena calidad de manera sencilla y rápida para su uso en técnicas de biología molecular.
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Práctica: Extracción de ADN a partir de la saliva
I. Introducción El ácido desoxirribonucleico es un tipo de ácido nucleico, una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus. Esta macromolécula es la responsable de su transmisión hereditaria. Muchas de las técnicas de biología molecular incluyen algún tipo de manipulación del material genético. Actualmente, se puede obtener suficiente ADN y de buena calidad de manera sencilla y en poco tiempo.
II. Fundamento Práctico
La extracción de ADN desde una célula requiere una serie de etapas básicas. En primeramente se debe romper la pared celular (en caso de que la presenten), luego la membrana plasmática, para finalmente acceder al núcleo celular. A continuación, también se debe fragmentar la membrana nuclear para liberar al ADN, protegerlo de enzimas que puedan degradarlo, y aislarlo por precipitación en alcohol.
En nuestro trabajo práctico de laboratorio, la extracción de ADN comenzará por lisar
las células contenidas en la saliva mediante el uso de un detergente que romperá a la membrana celular y nuclear, liberando el contenido molecular hacia el agua, en ese momento, el agua tendrá disuelto ADN y todo un surtido de restos moleculares tales como: ARN, hidratos de carbón, proteínas y otras sustancias en menor proporción. El agregado de los iones salinos (NaCl) será atraído por las cargas negativas del ADN, permitiendo una mejor disolución de esta macromolécula. Sólo queda extraer el ADN de esa mezcla acuosa para lo cual se utilizará alcohol.
III. Material Y Método
Materiales:
Vaso de precipitado Vaso de plástico Pipetas Pasteur Varilla de vidrio Tubos de ensayo o tubos Eppendorf Agua destilada Etanol absoluto Hielo Cloruro de sodio Detergente liquido para trastes
Procedimiento:
Tomar 25 ml de agua destilada y se colocan en un vaso, con esta agua se enjuaga
la boca por un minuto y transferirlo al vaso de precipitado, posteriormente se lleva a cabo una precipitación salina con una solución de cloruro de sodio al 6% y se añaden 25 ml de esta solución al vaso donde se encuentra la muestra y se mezclan, después se añaden 25 ml de una solución de detergente liquido al 25%, se agrega lentamente al vaso con la muestra, posteriormente se mezcla de nuevo cuidando de no hacer burbujas. El detergente rompe las membranas de la célula y hace que se libere el ADN. Después se añaden 25 ml de etanol absoluto frio (El etanol tiene que estar enfriado en hielo) se añade lentamente haciendo que resbale por las paredes del vaso ( se formará una interfase) se deja reposar por unos 5 minutos o hasta que veamos a formación de algunos hilillos por la acción precipitante del etanol, el cual desnaturaliza al ADN. Una vez formados los hilillos los pasamos a un tubo de ensayo o un tubo Eppendorf. Se recupera el ADN por medio de una pipeta Pasteur y se transfiere al tubo de ensayo o Eppendorf que contiene previamente etanol absoluto. Se puede guardar el ADN en el refrigerador para que se conserve.
Nota: Pensar que controles pueden realizarse.
IV. Resultados V. Discusión VI. Conclusión
ACTIVIDADES: 1.- ¿Qué finalidad tiene el exponer las células a un detergente fuerte? 2.- Realiza un dibujo de la acción del detergente sobre las células. 3.- Investiga y explica brevemente en qué consiste la electroforesis.
Bibliografía
1. https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk
2. https://www.youtube.com/watch?v=_Q6XscxRoSk 3. Marcos-Merino JM, Esteban Gallego R, y Gómez Ochoa de Alda J. Extracción de ADN con material cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos (2019). Didáctica de la Química, 30 (1): 58-68.
4. Nelson DL, Cox MM, Lehninger Principles of Biochemistry. 5º Edición Worth
