PRACTICA 1 Aplicacion de Gases en Sistemas Bbiologicos

UNALM - FAC.
CS LABORATORIO FISICOQUIMICA I
PRÁCTICA Nº1
APLICACIÓN DE GASES EN SISTEMAS

BIOLOGICOS
I.- OBJETIVOS
Aplicar la ley de los gases, en la manometría a volumen constante.

Determinar el volumen de un gas generado por un sistema biológico a dos
temperaturas.
Calcular la constante de Warburg (K), para el manómetro
II.- FUNDAMENTO TEÓRICO
Algunos de los sustratos y productos del metabolismo de sistemas biológicos son

gases, por ejemplo: oxígeno (O2), dióxido de carbono (CO2), nitrógeno (N2) e
hidrógeno (H2). Por esta implicancia biológica se considera importante tratar sobre
algunas propiedades características del estado gaseoso en medio acuoso, puesto
que la mayoría de las reacciones metabólicas suelen tener lugar en medios
acuosos.
Es muy común en las investigaciones biológicas la medición de volúmenes de gas

a varias temperaturas y presiones durante el desarrollo de procesos industriales,
tales como fermentaciones microbianas. Frecuentemente la producción o
consumo de gases por estos materiales biológicos se estudia a micro escala
usando métodos manométricos, éstos son muy sensitivos y nos permiten seguir el
desarrollo y amplitud de una reacción bioquímica.
Para la medición del consumo o producción de gas por un sistema biológico se
conocen dos métodos manométricos.
 Manometría a presión constante.- Mide un cambio en el volumen de un

gas a presión y temperatura constantes. El manómetro de Haldene-Barcroft
opera bajo este principio, así como también el aparato “volumétrico” de Van
Slyke para análisis de gases.
 Manometría a volumen constante,- Mide un cambio en la presión de un

gas cuyo volumen y temperatura se mantienen constantes. El manómetro
de Warburg, el cual opera bajo este principio es la forma mas usada de
“microrespirómetro”en laboratorios bioquímicos.
El método manométrico que se va a usar en la presente práctica es el de

“manometría a volumen constante”
El manómetro de volumen constante de Warburg, es un tubo capilar,

esencialmente diseñado para medir la producción o consumo de gas, en forma de
U con un depósito de fluido manométrico [generalmente mercurio (Hg)] en su base.
M.Sc. Elsa Huamán Paredes 1

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La rama izquierda del tubo en U esta abierta a la atmósfera, mientras que la rama
derecha se puede cerrar por una válvula de tres salidas. Hacia la parte de arriba
de la rama derecha hay un brazo lateral con un terminal de vidrio esmerilado en el
cual puede encajar un pequeño recipiente manométrico (de alrededor de 25cm 3
de capacidad). Fija detrás del tubo en U hay una escala en milímetros, por lo que
se puede medir con precisión cualquier ascenso o descenso del menisco fluido en
el brazo abierto. El punto cero de esta escala está en la mitad del tubo en U y
antes de tomar cualquier lectura del nivel del menisco en la rama izquierda, el
fluido de la derecha se ajusta siempre a cero. Esto mantiene un volumen
constante de gas (Vg ) en el manómetro y en el recipiente. El valor de V g para
cualquier manómetro y su recipiente viene dado por (Vo – Vf ) donde Vo es el
volumen total encerrado en el recipiente, más el brazo lateral del manómetro, más
la porción de la rama derecha del manómetro entre la válvula y el punto cero de
calibrado, mientras que Vf es igual al volumen de fluido contenido en el recipiente.
Este sistema permitirá medir la producción del gas generado (en nuestro caso,
dióxido de carbono, CO2) producto de la fermentación del microorganismo
utilizado, considerando una distancia "h" que es aquella que recorre el menisco en
una rama del manómetro directamente proporcional al volumen "V" del gas
producido a temperatura y presión estándar (25ºC,1Atm de presión).
V=hK
K, se ha denominado, constante del manómetro, valor que debe ser determinado

para cada sistema (manómetro o respirómetro) y depende de:
 La naturaleza del gas cuya presión parcial cambia en el manómetro y

recipiente.
 La temperatura del experimento.
 El volumen del líquido en el recipiente (Vf).
Si h tiene un valor negativo (o sea, desciende el nivel del fluido manométrico en la

rama izquierda), entonces V tiene también un valor negativo igual al volumen del
gas en mm3 a temperatura y presión estandar "tomado" dentro del recipiente. Si h
tiene un valor positivo, entonces V tiene un valor positivo igual al volumen del gas
en mm3
Luego el valor de la constante esta dado por la siguiente ecuación:
273
Vg Vf
K T
Po

Vg = Volumen del espacio gaseoso disponible en mm3

T = temperatura experimental en grados Kelvin
Vf = Volumen del fluido en el recipiente manométrico a la temperatura T(K)
Po = Presión atmosférica normal, expresada en mm de fluido manométrico.
 = coeficiente de absorción del gas intercambiado en el contenido líquido del
recipiente manométrico a la temperatura T.
Fig . 1 Manómetro de Warburg

Durante la medición, las conexiones externas del recipiente mencionado permanecen cerradas, registrándose
el cambio de presión en el manómetro (por la diferencia en la altura del líquido manométrico en ambas ramas
del manómetro).Ref. Dunn A. Arditti J. 1969.

III.- MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales Cantidad
Manguerita de látex para conexión 2

Pinzas de Mohr 2
Jeringa hipodérmica 1
Vaso de precipitado de 250mL 1
Marcador de vidrio (opcional) 1
Termómetro 1
Baño Maria 1
Varilla de vidrio 1
Regla graduada 1
Manómetro de Warburg (ver Fig. 1) 1
Reactivos
Mercurio 50mL
Microorganismo ( Ejm.Hongo de té u hongo de leche
o levadura, etc.)
Agua destilada 200 mL
Medio de cultivo (leche o agua azucarada) 100 mL
IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 Se arma el equipo como en la figura 1.

 Conectar las mangueritas de látex y las pinzas de Mohr
 Llenar en tubo en U con mercurio.
 Se coloca en el pocillo manométrico el microorganismo con el medio de
cultivo.
 Anotar la temperatura de trabajo.
 Nivelar a cero.
 Tomar el tiempo de inicio.
 Cada 5 minutos evaluar la producción de gas. (Al menos 10 lecturas )
 La reacción que produce gas tiene lugar en el líquido contenido en el
recipiente del manómetro.
 Ajustar a cero para leer el incremento real de presión a volumen constante
 Los cambios de presión en el manómetro se traducen en distancias
recorridas por el fluido en la rama derecha.
 Convertir los mm (distancias resultantes) a mm3 , multiplicando por la
constante.
 Conseguir otros registros a otra temperatura.

V.- CALCULOS Y RESULTADOS
Calcular el valor de la constante (K) para el gas producido.
Graficar la producción del generado a las temperaturas de trabajo en función del

tiempo e interpretar los datos obtenidos.
Expresar sus resultados de acuerdo a la tabla que se presenta.
Presión del laboratorio (mmHg) :................................................................
Temperatura T1 (K) ......................... Temperatura T2 (K) .........................

Tiempo, t Altura ,h Volumen, V= Tiempo, t Altura ,h Volumen, V=
(s) (mm) hK (s) (mm) hK
(mm3) (mm3)
VI.- CONCLUSIONES y SUGERENCIAS
VII.- BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

CUESTIONARIO
1.- Un gas insoluble producido durante fermentación por un cultivo bacteriano, se
recoge sobre agua a 30ºC y 750 mmHg de presión. Si bajo esas condiciones,
ocupa un volumen de 430cm3, calcular el volumen del gas seco a temperatura
y presión estandar. (Presión de vapor del agua a 30ºC es 4,266Kpa; 1mmHg
= 133,32Kpa)
2.- Un recipiente de un manómetro de Warburg con un volumen constante de gas

de 35,0cm3 contiene 10,0cm3 de una suspensión bacteriana. Se incubó a
37ºC realizando un consumo de oxígeno del aire y posteriormente la
producción de nitrógeno a partir de nitrato a 30ºC.( Oxig = 0,024 y Hidr =
0,013 a las temperaturas correspondientes)
Calcular los valores de la constante del manómetro apropiada para cada uno
de estos gases.
3.- Los trabajadores en cámaras submarina necesariamente respiran aire a mayor

presión que la normal. Si ascienden rápidamente a la superficie, el Nitrógeno
disuelto en su sangre a la mayor presión anterior, deja de estar disuelto y
puede causar embolias (burbujas de gas en la sangre), dolores graves y un
malestar general (enfermedad de descompresión). Una ascensión lenta hasta
la superficie, o la utilización de una cámara de descompresión, da tiempo
suficiente para la eliminación gradual de este nitrógeno gaseoso disuelto.
Calcular el volumen aproximado de nitrógeno, que se desprenderá del plasma

sanguíneo de un trabajador submarino cuando se le devuelve a la presión
atmosférica de 101,3 kPa, después de una exposición prolongada a una
presión de aire en exceso debida a 270 metros de agua. ( para el nitrógeno
a la temperatura del cuerpo es 0,012; volumen total de plasma sanguíneo de
un hombre adulto medio es 3,2 dm3; 1m de agua es igual a 9,807 KPa; el aire
contiene 78% de nitrógeno.)
4.- El compartimiento principal del recipiente de un manómetro de Warburg

contenía 0,4 cm3 de ferricianuro potásico 0,1 mol /dm3 , 0,4 cm3 de hidróxido
sódico 4 mol /dm3 y 1,2 cm3 de agua. En el brazo lateral de este recipiente
se puso 0,5 cm3 de una disolución saturada de sulfato de hidracina y 0,5 cm 3
de hidróxido sódico 4 mol/dm3. Después de un equilibrio preliminar a 303 K y
situar el manómetro en posición de recibir los gases, se volcó el contenido del
brazo lateral en el compartimiento principal del recipiente. La reacción acabó
en pocos minutos, cuando la lectura del manómetro había aumentado en 103
mm. En el mismo período la lectura del termo barómetro descendió 2 mm.
Calcular :
a) la constante del manómetro para el nitrógeno a 303 K
b) la constante del manómetro para el dióxido de carbono a 298 K.
(El ferricianuro oxida a la hidracina en disolución alcalina produciendo gas

Nitrógeno:

4[Fe(CN)6]3- + N2H4 N2 + 4H+ + 4[Fe(CN)6]4-
El coeficiente de absorción para el nitrógeno a 303 K es 0,0134, para el dióxido

de carbono a 298 K es 0,759, presión atmosférica estandar 10 000mm de
fluido manométrico.
(Nota: Esta reacción se usa algunas veces para obtener valores aproximados de la constantes
de los manómetros de Warburg)
5.- El aire de los pulmones (aire alveolar) tiene una composición diferente del aire
atmosférico. Por ejemplo, la presión parcial del dióxido de carbono en el aire de
los pulmones es 40 mm Hg. ¿Cuál es el porcentaje de dióxido de carbono
(CO2) en el aire alveolar?
6.- El Oxígeno constituye sólo el 13,6% del aire de los pulmones (aire alveolar)
¿Cuál es la presión parcial de oxígeno en los pulmones?.
7.-Un ser humano será víctima de una toxicidad debida al oxígeno cuando la
presión parcial de este gas alcanza unas 0,8 atm. Si la presión aumenta en 1
atm por cada 10,3 m por debajo de la superficie del agua, ¿ A qué profundidad
el aire respirado producirá toxicidad?.
8.- En la sangre, el dióxido de carbono y el oxigeno se hallan en estado de

soluciones en el agua del plasma y de los glóbulo, y combinados. Calcular la
cantidad de cada gas disuelto a partir de su solubilidad y de su presión
parcial.
Disolución () para el oxigeno en el plasma a 37oC es 0,0014 (mmol/l)torr,
presión parcial en la sangre arterial es 100 torr; para el dióxido de carbono 
es 0,03 (mmol/L)/torr y presión parcial de este gas en l a sangre es de 40 torr.
9.- El gas desprendido por el crecimiento de forma fermentativa de un cultivo

bactriano tiene un volumen de 580 cm 3 medido en el laboratorio a la
temperatura de 17oC. ¿Cuál es el volumen de este gas a la temperatura de
crecimiento de 37 oC (Considérese que los volúmenes del gas se midieron a
presión constante).
10.- En estudios clínicos referentes a mezclas de gases, su composición se

expresa frecuentemente como el tanto por ciento en volumen de la
contribución de cada gas componente, el cual es el porcentaje del volumen
total que ocupa un determinado gas (reducidos todos los volúmenes da t.p.e.
y referidos a gas seco). Por tanto el aire alveolar del pulmón humano contiene
en volumen 80,5% nitrógeno, 14% de oxigeno, 5,5% de dióxido de carbono.
Si la presión el pulmón es de 1,01 x 105 Pa y la presión de vapor del agua es
6,25 x 103 Pa, calcular las presiones parciales ejercidas por estos
constituyentes principales.

s los casos el CO
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Aplicar la ley de los gases, en la manometría a volumen constante.

II.- FUNDAMENTO TEÓRICO

Algunos de los sustratos y productos del metabolismo de sistemas biológicos son

Es muy común en las investigaciones biológicas la medición de volúmenes de gas

 Manometría a presión constante.- Mide un cambio en el volumen de un

 Manometría a volumen constante,- Mide un cambio en la presión de un

El método manométrico que se va a usar en la presente práctica es el de

El manómetro de volumen constante de Warburg, es un tubo capilar,

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K, se ha denominado, constante del manómetro, valor que debe ser determinado

 La naturaleza del gas cuya presión parcial cambia en el manómetro y

Si h tiene un valor negativo (o sea, desciende el nivel del fluido manométrico en la

Luego el valor de la constante esta dado por la siguiente ecuación:

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Vg = Volumen del espacio gaseoso disponible en mm3

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

Manguerita de látex para conexión 2

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

 Se arma el equipo como en la figura 1.

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V.- CALCULOS Y RESULTADOS

Calcular el valor de la constante (K) para el gas producido.

Graficar la producción del generado a las temperaturas de trabajo en función del

Expresar sus resultados de acuerdo a la tabla que se presenta.

Presión del laboratorio (mmHg) :................................................................

Temperatura T1 (K) ......................... Temperatura T2 (K) .........................

VI.- CONCLUSIONES y SUGERENCIAS

VII.- BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

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2.- Un recipiente de un manómetro de Warburg con un volumen constante de gas

3.- Los trabajadores en cámaras submarina necesariamente respiran aire a mayor

Calcular el volumen aproximado de nitrógeno, que se desprenderá del plasma

4.- El compartimiento principal del recipiente de un manómetro de Warburg

(El ferricianuro oxida a la hidracina en disolución alcalina produciendo gas

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4[Fe(CN)6]3- + N2H4 N2 + 4H+ + 4[Fe(CN)6]4-

El coeficiente de absorción para el nitrógeno a 303 K es 0,0134, para el dióxido

8.- En la sangre, el dióxido de carbono y el oxigeno se hallan en estado de

9.- El gas desprendido por el crecimiento de forma fermentativa de un cultivo

10.- En estudios clínicos referentes a mezclas de gases, su composición se

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