Guia 3 (1) (2) Tinciones

MICROBIOLOGÍA GENERAL I.
B
PRÁCTICA NÚMERO 3: OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE BACTERIAS PROF: CRISTINA
MARIA VILLA BADILLO
1. OBJETIVOS:
- adquirir destreza en el manejo del microscopio, reconociendo sus partes y función de
cada una.
- aprender a elaborar frotis bacteriano y practicar los distintos métodos de coloración de
bacterias (tinción simple y tinciones diferenciales)
- identificar al microscopio las diferentes formas y agrupaciones (ordenamiento)
bacterianos luego de realizar las correspondientes tinciones
2. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA (VER ANEXO)

La observación al microscopio de las bacterias nos permite diferenciar dos formas básicas
(cocos, bacilos, espirilos); lo cual se facilita con el uso de colorantes, luego de haber fijado
el frotis a observar en la lámina portaobjetos (la fijación puede hacerse con calor o
solventes).
Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante; o compuestas,
cuándo se utilizan dos o más colorantes.
- coloraciones simples: Los colorantes sencillos permiten apreciar la forma, disposición,
y tamaño relativo de las bacterias, pero no muestran detalles finos de la estructura interna.
Es una solución de colorante en alcohol o en agua. Ejemplo: Azul de metileno.
- coloraciones diferenciales:(o por contraste): Se utiliza un colorante primario, luego
se aplica una solución que quita el colorante primario algunas células o estructuras. Se
aplica el colorante secundario o de contraste.
El método permite distinguir las estructuras intracelulares: Ejemplo: Coloración de GRAM
(es una coloración compuesta)
- colorantes ácidos: Tienen los componentes básicos de la célula, ejemplo; la nigrosina
- colorantes básicos: Tienen los componentes ácidos de la célula. Los colorantes
básicos más utilizados son: Azul de metileno, cristal Violeta, safranina, fuschina y verde
de malaquita.
3. MATERIALES Y MÉTODOS
- cultivos bacterianos: Salmonella sp. Morganella sp. Escherichia coli, klebsiella sp,
bacillus thuringiensis, bacillus megatherium, bacillus cereus, staphylococcus aureus y
streptococcus faecalis.
- portaobjetos y cubreobjetos
- microscopio óptico
- asas microbiológicas
- colorantes básicos: Azul de metileno, cristal Violeta, safranina, y verde de malaquita
- lugol, alcohol cetona
- frasco lavador
- solución salina 0,85%
- aceite de inmersión
- papel para lentes (papel de arroz)
- agenda de apuntes (lonchera de trabajo)
4. PROCEDIMIENTO:(VER ANEXO DE LOS PROCEDIMIENTOS DE CADA TINCIÓN)
PARTE A
REALIZACIÓN DEL FROTIS
frotis húmedo (FH) (con solución salina 0.85%), coloque una gota de solución salina
estéril en el portaobjetos, llevé el inoculo a la solución con ayuda de un asa
previamente flameada y extienda el frotis; realice la fijación al color (cerca al mechero)
con el objeto de adherir las células e inactivarlas.
Deje enfriar y procede a realizar la tinción correspondiente.
Frotis seco (FS): tome el inóculo con un escobillón estéril y llévelo al portaobjetos
haciendo un espiral (de adentro hacia afuera), realice fijación al calor y proceda a la
tinción.
TINCIÓN SIMPLE
Luego de realizados los frotis, proceda a teñir con un solo colorante (cristal Violeta, azul
de metileno, safranina), dejé actuar el colorante durante 2 minutos, enjuague con agua
destilada; deje secar y observe en microscopio, objetivo de 100x.
PARTE B (VER PROCEDIMIENTO EN ANEXO)

1. Tinción de Gram
2. Tinción de esporas
3. Tinción de cápsula
5. TRABAJÓ EN PRÁCTICA
De los géneros bacterianos estudiados indiquen mediante una tabla: Caracterización
macroscópica de las colonias, resultados con tinción simple, tinción Gram, tinción de
esporas. Incluya a los esquemas correspondientes.
6. CUESTIONARIO
1. Mediante la descripción del procedimiento de la proporción de Gram y la tinción de

esporas Explica el fundamento de cada una de ella.
2. Dibujo de una endospora bacteriana e indique sus partes. Realice dibujo sobre
ubicación de las endosporas en las células bacterianas y nombre correspondiente.
3. ¿cuál es la utilidad del aceite de inmersión? Cuidados de uso.
4. Establezca mediante un cuadro comparativo, diferencias claras entre bacterias Gram
positivas y Gram negativas (tenga en cuenta la estructura de la pared celular,
morfológica y otras características) incluya el esquema de la pared celular de cada una.
5. Enumere tres razones por las cuales considera importante realizar tinciones de
microbiología
7. Anexos

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1. Mediante la descripción del procedimiento de la proporción de Gram y la tinción de

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