Tesis Vargas Munoz
Tesis Vargas Munoz
Tesis Vargas Munoz
DE MÉXICO
BIÓLOGO
PRESENTA:
Directora de Tesis:
Asesora:
A la FES Zaragoza por haberme dado la oportunidad de pertenecer a esta casa de estudios.
A la M. en C. María de Jesús Sánchez Colín† por haberme aceptado como alumno, por todos esos
consejos, su cariño y esa sonrisa con la que siempre nos recibía.
A la M. en C. Patricia Rivera García por aceptar dirigirme, por su paciencia y asesoría en el análisis
estadístico, por los jalones de orejas, discusiones y peleas durante la elaboración de esta tesis.
A Biól. Elvia García Santos por sus consejos y el apoyo brindado en el laboratorio.
A Biól. Angélica Elaine González Schaff por toda su ayuda y apoyo en el laboratorio durante esos
momentos difíciles.
A la Dra. Esther Matiana García Amador por su asesoría en el laboratorio y las correcciones en la
elaboración de este trabajo.
A los M. en C. Ramiro Ríos Gómez y M. en C. Bárbara Susana Lunas Rosales por sus sugerencias y
correcciones en la elaboración de este trabajo.
Al Dr. Arcadio Monroy Ata y a Biól. Yolanda Maribel Flores Estrada por el apoyo y cariño brindado
en el invernadero.
A Biól. Marisela Arteaga Mejía por sus acertados consejos y observaciones que contribuyeron al
enriquecimiento de este trabajo.
A Biól. Azahariel Ramírez García por su ayuda y sugerencias en la redacción de este trabajo.
A la Dra. Irma Gisela Nieto Castañeda, a los Dr. Carlos Castillejos Cruz, Biól. Mariano García Díaz,
Biól. Eduardo Alberto Ehnis Duhne, Biól. Roberto Cristóbal Guzmán por todos esos conocimientos
y enseñanzas que me dieron a lo largo de la carrera.
A mi amigo Marco Antonio Rojas por toda la ayuda brindada en el laboratorio y por esos
momentos de locura en la facultad.
i
Dedicatoria
A mi madre Gonzala Muñoz Godínez una campeona de obstáculos que le puso la vida, por
apoyarme siempre en mis metas, sueños y estudios en todo momento, pero sobre todo por creer
en mí.
A mi hermana Dra. Susana Vargas Muñoz, a su esposo Dr. Rogelio Rodríguez Talavera y a mi
sobrino Rogelio Gabriel Rodríguez Vargas por todo su cariño y apoyo en la culminación de este
trabajo.
A mi hermana Griselda Vargas Muñoz, a mis sobrinos Griselda Argelia, Sayra Atenea y Tristán
Argenis por toda su ayuda y cariño.
A mi hermana: Dora Vargas Muñoz, a su esposo Ernesto Samaniego Cedillo y al Caballero Rojo por
todo su apoyo.
A mis amigos Carlos Francisco Madrigal y Ricardo Rodolfo Rojas Hernández por apoyarme en todas
mis locuras, ayudarme en lo que me he propuesto y demostrarme cada día el término “amistad”.
A mis amigos Raúl Abraham Adon Negrete, José Jacinto Doroteo Carlos (Padawan), Pavel Armando
Covarrubias Pérez, Ángel David Nava Beltrán y Reymon por toda su ayuda y sobre todo por esos
duelos de Mitos y Leyendas en AnimeNote (Kuria’s Castle).
A mi nuevo amigo Alan Acuña quien me dio ánimos para seguir adelante en este trabajo y no sólo
eso también compartimos una afición muy al estilo de Pretty Cure.
ii
Dedication
つきじ まさみ
To 築地昌実様 who from Japan helped me achieve my goals and dreams, by collaborate on the
translations to finish this special page.
セイントセイヤ びしょうじょせんし ま ほ う き し
To series like: 聖闘士星矢、美少女戦士セーラームーン、魔法騎士 レイアース、キャンデ
けんしん めいじけんきゃくろうまんたん こうてつてんし
ィ・キャンディ、ぴたテン、るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚 、鋼鉄天使くるみ、キャプ
つばさ いえ こ ほくと けん
テン 翼 、カードキャプターさくら、家 なき子、アルプスの少女ハイジ、北斗の拳 and あ
iii
Esta dedicatoria especial es para la M. en C. María de Jesús Sánchez Colín† (Mami Chuy), por todo
su cariño, pero sobre todo por haber sido como una madre para todos en el Laboratorio de
Biología de Suelos.
“Recuerda hijo los últimos serán los primeros”, sólo espero haber llevado a buen término la
elaboración de este trabajo y gracias por todo, donde quiera que esté.
iv
はな たび だ みき のこ しあわ うた
花 びらは 旅 立っても 幹 は 残 るよ 幸 せ 歌 うメロディーになろう
たね たく いのち えがお
キラメキを 種 に 托 しては生命 めぐる みんなの笑顔 、みんなのキモチ
ゆう き ひ つ せ ン キ ユ ー フォー オール
勇 気をねギュっとキュっと引き継いだから Thank you f o r a l l 。。。
いま
みんな今 までも、そしてこれからも、ずっとずっとありがとう!!
v
ÍNDICE…………………………………………………………………………………………………………………………………. vi
ÍNDICE DE FIGURAS…………………………………………………………………………………………………………….. ix
ABSTRAC……………………………………………………………………………………………………………………………… 1
RESUMEN……………………………………………………………………………………………………………………………. 2
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………………………………………………….. 3
OBJETIVO GENERAL…………………………………………………………………………………………………………….. 4
OBJETIVOS PARTICULARES………………………………………………………………………………………………….. 4
JUSTIFICACIÓN……………………………………………………………………………………………………………………. 4
HIPÓTESIS……………………………………………………………………………………………………………………………. 4
1.3.-Plomo……………………………………………………………………………………………………….. 6
1.4.-Cadmio……………………………………………………………………………………………………… 7
2.1.-Biorremediación……………………………………………………………………………………….. 9
2.2.-Fitorremediación……………………………………………………………………………………... 10
2.3.-Fitoextracción…………………………………………………………………………………………… 12
2.6.- Girasol………………………………………………………………………………………………………. 14
vi
3.2.-Tipo de micorrizas….……………………………………………………………………………………. 16
3.3.-Micorrizas arbusculares……………………………………………………………….…………….. 16
4.-Método…………………………………………………………………………………………………………………………… 19
5.-Resultados………………………………………………………………………………………………………………………. 20
6.-Discusión………………………………………………………………………………………………………………………… 38
7.-Conclusiones………………………………………………………………………………………………………………….. 42
8.- Bibliografía…………………………………………………………………………………………………………………….. 43
vii
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro 6.- Porcentaje de colonización total de las raíces de girasol (Helianthus annuus L.) 29
a diferentes concentraciones de Pb y Cd
Cuadro 7.- Valores de concentración en raíz de plantas de girasol (Helianthus annuus L.) 30
micorrizado (M) y no micorrizado (N) en suelo contaminado a diferentes concentraciones
de Pb y Cd
viii
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 4.- Montaje de las raíces teñidas para la cuantificación del porcentaje de 23
colonización micorrízica
Figura 13.- Longitud de la raíz de girasol con y sin micorrizas a diferentes concentraciones 37
de Pb.
Figura 14.- Longitud de la raíz de girasol con y sin micorrizas a diferentes concentraciones 37
de Cd
ix
Abstract
Anthropogenic activities such as industry have increased generation of heavy metals, for example
the Pb and Cd to be non-essential elements cause various problems in ecosystems. Currently there
are several biological techniques for the remediation of soils contaminated by heavy metals, such
as phytoextraction, which involves the uptake and accumulation of heavy metals, hydrocarbons
and radioactive elements in the aerial part of the plant. The sunflower (Helianthus annuus) can
accumulate elements (Cr, Pb, Cs and U) in their roots, stems and leaves, also the arbuscular
mycorrhizae like Rhizophagus intraradices provide the plant with the capacity to grow and tolerate
high concentrations of pollutants, play an important role in the remediation of soils contaminated
by heavy metals. In this study we evaluated the capacity for phytoextraction of sunflower
inoculated with Rhizophagus intraradices which were planted in pots with a mixture of soil and
agrolite v / v 1:1, became contaminated artificially with 0, 400, 800 and 1000 mg·kg-1 Pb and 0, 37,
60 and 120 mg·kg-1 Cd. For each treatment were placed 2 seeds per pot with 5 replicates under
greenhouse conditions. Sunflower average germination was 56 to 64% in Pb and a 48 to 60% in Cd,
the percentage of mycorrhizal colonization was 50 to 76% in Cd and a 42 to 60% in Pb. The
concentrations of Pb and Cd in root, aerial part and flower were determined by atomic absorption
spectrophotometer, the results show that the addition of arbuscular mycorrhizae presented
significant statistical differences (α <0.005) regarding treatment of non mycorrhized Pb in different
parts of the plant. In the case of Cd are not presented significant statistical differences for any part
of the plant. These results prove that the sunflower has capacity for phytoextraction of Pb. In
presence of Cd show malformations to flower level, the sunflower seed has the ability to
germinate at high concentrations of Pb and Cd, the addition of arbuscular mycorrhizae is a
biological alternative in the phytoextraction of soils contaminated by Pb.
1
Resumen
2
Introducción
Ante esta problemática existen alternativas biológicas como la fitorremediación que hacen uso de
plantas que tienen la capacidad de tolerar, absorber y acumular a los metales pesados de una
manera no tóxica para la planta en diversas partes de su tejido como raíz, tallo y hoja, como las
plantas hiperacumuladoras que son capaces de absorber de 10 a 100 veces las concentraciones
normales (Kidd y col., 2007).
El uso del girasol como planta fitoextractora en asociación a micorrizas arbusculares es reciente,
diversos autores como Awotoye y col., (2009) y Adewole y col., (2010) han reportado estas
capacidades fitoextractoras principalmente para Pb, sin embargo, para el caso de Cd son escasos
los estudios de fitoextracción que van más enfocados a los efectos tóxicos de Cd en plantas (Jin y
col., 2008).
En el presente trabajo se ha usado el girasol (Helianthus annuus L.) por ser una planta
acumuladora de Pb, por su capacidad de generar gran cantidad de biomasa, se relacionó con
Rizophagus intraradices por su capacidad de absorber y acumular este metal, las diferencias están
presentes en el tratamiento de Pb a nivel de raíz y flor principalmente, en el caso del Cd sólo se
detectaron efectos de alteraciones morfológicas a nivel de flor y las concentraciones de Cd se
observaron más en la raíz y parte aérea de la planta.
3
Objetivo General
Evaluar la capacidad fitoextractora del girasol (Helianthus annuus L.) asociada con micorrizas
arbusculares en un suelo contaminado por Pb y Cd a nivel de invernadero, como una alternativa
para la remediación de suelo contaminado por metales pesados.
Objetivos particulares
Determinar la concentración de Pb y Cd en las distintas partes de la planta (raíz, parte
aérea y flor) por espectrofotometría de absorción atómica.
Evaluar los efectos del Pb y Cd en las distintas partes de la planta.
Cuantificar el % de colonización micorrízica.
Justificación
Existen diversas técnicas para la remediación de suelos contaminados sin embargo, estas alteran
de manera significativa sus características físicas, químicas y biológicas e implican un alto costo
económico. Este trabajo pretende con el uso del girasol (Helianthus annuus L.) utilizar una
alternativa más amigable, económica, para lograr una remediación del suelo de una manera más
ecológica, ya que esta planta tiene un potencial fitorremediador muy alto (hiperacumuladora), su
asociación con micorrizas arbusculares contribuirán a una mayor absorción de Pb y Cd evitando así
la posible lixiviación de estos elementos hacia los mantos freáticos y su posterior ingreso en los
seres vivos.
Hipótesis
El girasol (Helianthus annuus L.) tiene gran capacidad hiperacumuladora en raíces, la inoculación
de estas con micorrizas arbusculares (Rhizophagus intraradices) incrementará su capacidad
fitorremediadora para la absorción de Pb y Cd.
4
Capítulo I
La contaminación del suelo se define como la presencia de uno o más elementos o residuos
tóxicos, que dañan de manera significativa las propiedades físicas, químicas y biológicas del suelo,
los ecosistemas y los organismos que los habitan, de esta manera la contaminación antrópica del
suelo aparece cuando una sustancia está presente a concentración superior a sus niveles
naturales, y tiene un impacto negativo en alguno o todos los constituyentes del mismo (Ortega y
col., 2009).
Wong, (2003) reporta que los suelos contaminados presentan los siguientes efectos:
I) Eliminación de los procesos naturales restauradores del suelo.
II) Disminución en la diversidad de la microfauna del suelo.
III) Reducción de la fertilidad, así como la posible alteración en la composición del cultivo
al entrar en la cadena trófica.
IV) Ausencia inicial de vegetación.
V) Contaminación de sistemas lóticos, lénticos y del manto freático.
Los metales pesados se definen como aquellos elementos químicos que tienen una densidad
mayor o igual a 5 g cm-3 o cuyo número atómico es superior a 20 (excluyendo a los metales
alcalinos y alcalinotérreos). Su presencia en la corteza terrestre es inferior al 0,1% y casi siempre
menor del 0,01% (Navarro y col., 2007).
5
Estos elementos están presentes en el suelo y plantas en bajas concentraciones, algunos de ellos
son esenciales para el desarrollo y crecimiento de los seres vivos pero, también pueden ser tóxicos
si superan cierto umbral, o si se ingieren o inhalan en altas concentraciones durante prolongados
periodos de tiempo, de todos los metales pesados se consideran tóxicos a 17 de ellos por su gran
capacidad de acumulación, estos son: Ag, As, Bi, Cd, Co, Cu, Hg, Ni, Pb, Pd, Pt, Sb, Se, Sn, Te, Tl y Zn
(Galán y Romero, 2008).
El peligro que los metales pesados representan en el suelo es que al ser elementos tóxicos pueden
acumularse e integrarse a la red trófica y a los ciclos biológicos, químicos y geológicos (Balderas y
col., 2003), el daño ocasionado por los metales pesados en los seres vivos van desde afectación al
ADN, mutaciones y efectos cancerígenos (Hooda, 2007). Por ejemplo el envenenamiento por Pb
provoca daño neurológico que ocasiona pérdida de memoria, inteligencia reducida, problemas de
coordinación y de aprendizaje, el Arsénico ocasiona cáncer en la piel, problemas cardiovasculares,
daño renal y neuropatía periférica y el Cd está asociado a diversas enfermedades renales (Prahba y
Loretta, 2007).
1.3.-Plomo
El plomo en forma natural en la corteza terrestre se encuentra como un metal gris azulino, es
empleado en la fabricación de acumuladores, pintura, forros para cables, cerámicas, vidrios
especiales, soldadura, pigmentos y municiones, además es tóxico para la salud, ya que afecta
principalmente el sistema nervioso y es asociado con la depresión de muchas funciones
endocrinas (Rodríguez y col., 2006).
En las plantas los principales síntomas de toxicidad por Pb son: inhibición en el crecimiento de la
raíz, disminución en el crecimiento de la planta y clorosis, en seres humanos al ser ingerido,
inhalado o absorbido en niveles de 10 a 100 μg/dL, resulta tóxico para los sistemas endocrino,
cardiovascular, respiratorio, inmunológico, neurológico y gastrointestinal, así mismo afecta la piel
y los riñones (Alvarado y col., 2011).
6
1.4.-Cadmio
El Cd es un metal que pertenece al grupo IIB de la tabla periódica de los elementos químicos, está
presente en la naturaleza como resultado de erupciones volcánicas, quemas forestales, minería,
fundición de metales, quemas de combustibles fósiles, uso de fertilizantes fosfatados, fabricación
de baterías, pigmentos y plásticos (Pernía y col., 2008).
Diversos factores físicos, químicos y biológicos influyen en la disponibilidad del cadmio para la
planta como son el pH del suelo, la temperatura, la materia orgánica, el agua y el contenido de
arcillas (Christensen y Haung, 1999).
Los efectos tóxicos del Cadmio en las plantas son: interferencia en la entrada, trasporte y uso de
elementos esenciales (Ca, Mg, P y K), estrés hídrico, reduce la absorción de nitratos y clorosis
producto de la deficiencia de Hierro (Rodríguez y col., 2008).
7
Capítulo II
Remediación
La remediación del suelo se define como una serie de técnicas capaces de eliminar, degradar o
contener los contaminantes del suelo. Existen diversos procesos de remediación, que pueden ser
in situ o ex situ, así como tipo de tratamiento para el uso de la tecnología de remediación que
pueden ser de tipo biológico (uso de plantas, hongos, bacterias, nemátodos entre otros), físico,
químico (empleando sus propiedades físicas y químicas para la contención, eliminación o
dispersión del contaminante), térmico (empleando el uso del calor para la degradación y
volatilización de los contaminantes) y de extracción (Volke y Velasco, 2002).
Para emplear una tecnología de remediación de suelos capaz de alterar, remover y eliminar
completamente el material contaminante, dependerá de la naturaleza del contaminante y sus
propiedades físico-químicas (Lenoir y Tornari, 2004).
Las técnicas de remediación de acuerdo a Volke y col., (2005), se dividen en 5 tipos: i) extracción,
ii) químicas, iii) físicas, iv) térmicas, v) biológicas.
i) Técnicas de extracción
Lavado de suelo.- (in situ) desprende y atenúa el contaminante en función de su solubilidad y del
tipo de químico empleado.
Aplicación de Vacío.- (in situ) para destruir compuestos orgánicos y elementos como el mercurio.
8
iii) Técnicas físicas
a.- Contención- Emplean técnicas de cobertura y barrera verticales u horizontales, de este modo el
contaminante no se mezcla con el medio ambiente.
b.- Solidificación- Emplean técnicas como encapsulación de polímeros, mezcla de cemento y
vitrificación logrando precipitar el contaminante mediante el uso de agentes y así disminuir la
solubilidad y el área de contaminación.
El principal problema al emplear estas técnicas son la generación de residuos que pueden producir
nuevos contaminantes al ambiente.
v) Técnicas Biológicas
a) Degradación enzimática.- las enzimas degradan y eliminan las sustancias del sitio contaminado.
b) Remediación microbiana.- Se emplean microorganismos naturales o modificados
genéticamente, en el sitio contaminado.
c) Fitorremediación.- Las plantas restauran los ecosistemas contaminados, debido a la presencia
de especies vegetales que toleran, absorben y acumulan contaminantes en altas concentraciones
(como metales pesados, hidrocarburos, compuestos orgánicos y radiactivos).
2.1.-Biorremediación
La biorremediación es una tecnología biológica que consiste en el uso de bacterias, hongos o
plantas para neutralizar sustancias toxicas, transformándolas en inocuas para el ambiente y la
salud humana, puede clasificarse de acuerdo al organismo que efectué la degradación o
inmovilización del compuesto, siendo las bacterias las más empleadas en dicho proceso, aunque
también se emplean otros organismos como los hongos, algas, cianobacterias para el tratamiento
de compuestos tóxicos en el suelo y el agua tales como: plaguicidas, hidrocarburos, metales
pesados y sustancias radiactivas (González, 2005).
9
A continuación se presenta un cuadro que muestra las ventajas y desventajas que tiene la
fitorremediación.
Ventajas Desventajas
2.2.-Fitorremediación
La fitorremediación es una tecnología biológica que emplea plantas para la remoción, degradación
o inmovilización del contaminante, ubicados en suelos, sedimentos y aguas superficiales o
someras, de esta forma diversas especies se pueden usar para tratar gran cantidad de
contaminantes como los metales pesados, hidrocarburos y elementos radiactivos.
10
Los criterios de selección de la especie para aplicar una de las distintos tipos de fitorremediación
deben tomar en cuenta características tales como: tolerancia al contaminante, tipo de enzimas
degradativas que producen, tipo de crecimiento radicular, potencial de evapotranspiración,
capacidad de bioacumular e inmovilizar el contaminante (Larenas y De Viana, 2005).
Tipos de Fitorremediación
Hong y Cutright, (2001), reportan que dependiendo de la cantidad o nivel de contaminación por
metales pesados se puede aplicar una de las 6 diferentes estrategias de la fitorremediación
basadas en los mecanismos que tienen las plantas para la remoción de contaminantes.
11
2.3.-Fitoextracción
Pero solo puede ser empleada cuando el nivel de contaminante biodisponible es moderadamente
alto y se puede reducir por debajo del valor ambientalmente aceptable, por lo tanto es la mejor
alternativa para la eliminación de metales pesados de modo que no altere la fertilidad y la
estructura del suelo, con la finalidad de hacer esta tecnología más eficaz, las plantas deben extraer
grandes cantidades de metales pesados y producir gran cantidad de biomasa (Gosh y Singh, 2005;
Vashegy y col., 2005).
Así, la fitoextracción se puede repetir hasta que se reduzca la concentración de metales pesados
en el suelo y estén dentro de los límites permisibles, algunas especies de plantas empleadas en
esta biotecnología son: Thlaspi caerulescens (Cd), Brassica juncea, Helianthus annuus, Sesbania
drummondii (Pb), Alyssum murale, Trifolium nigriscens, Psychotria dovarrei, Geissois pruinosa,
Pimelea leptospermoides y Aeollanthus biformifolius (Ni); Sedum alfredii, Viola baoshanensis y
Vertiveria zizanoides (Zn, Cd, Pb); Brassica napus (Cu, Pb, Zn); y Pistia stratiotes (Ag, Cd, Cr, Cu, Hg,
Ni, Pb, Zn) (Delgadillo y col., 2011).
Las plantas han desarrollado mecanismos para extraer, transportar y utilizar los micronutrientes
del suelo, además en la naturaleza existe una gran diversidad de plantas capaces de tolerar,
acumular y extraer altas concentraciones de metales pesados en las distintas partes de sus tejidos,
estabilizándolos mediante la formación de compuestos o acumulándolos en la pared celular y
vacuola, sin presentar efectos tóxicos para la planta (Cutright y col., 2008; Gutiérrez y col., 2011).
12
Este proceso evolutivo de crecer y desarrollarse en ambientes con elevadas concentraciones de
metales pesados le ha permitido a las plantas desarrollar la capacidad de tolerar, esta tolerancia
se clasifica en dos tipos dependiendo de los mecanismos bioquímicos o moleculares que
presenten: la co-tolerancia como resultado de un mecanismo especifico que brinda a la planta
tolerar diversos metales y la tolerancia múltiple que es generada por una serie de mecanismos
independientes para cada metal interactuando de manera conjunta para evitar daño en la planta,
esto ha permitido que las plantas hayan desarrollado tres estrategias básicas para su
establecimiento en suelos contaminados por metales pesados: exclusión, indicación e
hiperacumulación (González y Zapata, 2008).
2.5.-Plantas hiperacumuladoras
El término hiperacumuladora se designa a aquellas plantas capaces de acumular > 1.000 mg·kg-1
de Pb y >100 mg·kg-1 de Cd en materia seca de algún tejido de su biomasa, alcanzado así
concentraciones de metales de 10 a 100 veces las concentraciones normales (Kidd y col., 2007), se
trata de 415 especies incluidas en 45 familias botánicas con capacidad para acumular
selectivamente diferentes metales, en tres tipos de mecanismos fisiológicos: acumulación,
indicación y exclusión, permitiéndole a la planta tolerar altas concentraciones de metales pesados
que serían nocivas para otras especies vegetales (Marrero y col., 2012).
No obstante este tipo de plantas presentan baja tasa de crecimiento, mínima producción de
biomasa y un sistema radicular bajo, debido al costo energético que tiene la planta al acumular
concentraciones de metales en su interior que exceden valores como el 1% de su peso seco
(Llugany y col., 2007).
Plantas como el maíz (Zea maíz), la mostaza (Brassica juncea) y el girasol (Helianthus annuus L.)
muestran gran tolerancia a los sitios contaminados por metales pesados, producen gran cantidad
de biomasa lo que les permite la extracción y acumulación de grandes cantidades de
contaminantes (Angelova y col. 2012).
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2.6.- Girasol
Información Taxonómica
Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Asteridae
Orden: Asterales
Familia: Asteraceae
Género: Helianthus L. 1753
Especie: annuus L. 1753
Descripción técnica
Hojas: En su mayoría alternas, con pecíolos de hasta 20 cm de largo, lámina ovada a triangular-
ovada o anchamente lanceolada, hasta 45 cm de largo y 35 cm de ancho (aunque hay plantas
silvestres por lo común de menos de la mitad de este tamaño), obtusa a acuminada en el ápice,
toscamente aserrada a subentera en el margen, cuneada a acorazonada en la base, por lo común
escábrida (áspera) híspida en ambas caras, trinervada.
Frutos y semillas: Aquenios oblongo ovoides, algo comprimidos, 3,5 a 5.5 (16) mm de largo,
grisáceo, a menudo moteado; vilano de dos escamas lanceoladas, caducas.
14
El cultivo de girasol va enfocado principalmente a la obtención de semillas que se utilizan para la
obtención de aceite vegetal comestible (Luevanos y col., 2010), también para consumo humano y
la obtención de harina para hornear pan, como alimento para aves y ganado, las flores se emplean
para la extracción de un tinte y las plantas se usan como forraje, abono verde o para fines
ornamentales (CFIA, 2005), la superficie cultivada es de aproximadamente 26 millones de
hectáreas con una producción de 28 millones de toneladas (Arshad y col., 2010), en México la
distribución del girasol se registra desde el norte del país hasta la península de Yucatán (Mendoza
y col., 2006).
El girasol ha demostrado ser una planta con un potencial fitoextractor útil en la remediación de
suelos contaminados por Pb, Cr, Cd, Cu y elementos radiactivos (Rodríguez y col., 2006), por su
alta producción de biomasa, ser una planta de rápido crecimiento y presentar capacidad de
tolerar, crecer y absorber los metales pesados en sus raíces (Ullah y col., 2011).
15
Capítulo III
Micorrizas
3.1.-Características de las micorrizas
La asociación simbiótica mutualista de las raíces de las plantas y ciertas especies de hongos del
suelo reciben el nombre de micorrizas. Esto ha sido objeto de diversos estudios llegando a
determinar que estas juegan un papel importante en el crecimiento y desarrollo de las plantas
(Pereira y col., 2001).
Entre los beneficios que aportan las micorrizas están la promoción del crecimiento vegetal y
mejoramiento en la asimilación de nutrimentos, esta interacción planta-hongo ha logrado
desarrollar características de tolerancia en la planta lo que le permite absorber, distribuir y
acumular metales pesados en las raíces y en los brotes, desempeñando un papel importante en
remediación de suelos contaminados por metales pesados (Liao y col., 2003; Sudová y col., 2007).
3.2.-Tipo de micorrizas
3.3.-Micorrizas arbusculares
Las micorrizas arbusculares forman asociaciones mutualistas dadas por cierto tipo de hongos y un
80-95% de las plantas que tienen raíces afines a este tipo de unión (Aguilera y col., 2008). Esta
simbiosis se realiza a nivel de raíz con la colonización intracelular de la corteza por medio de
arbúsculos que son los encargados del intercambio de carbono, fósforo y otros elementos para la
nutrición del hongo y la planta (Cuenca y col., 2007).
16
Asimismo la obtención de nutrimentos es más notoria cuando la planta está bajo condiciones
adversas de crecimiento en suelos contaminados por plomo, gracias a esto las plantas
micorrizadas muestran una mayor captación de metales en la raíz elevando el flujo de estos hacia
la parte aérea de la planta (Aguilera y col., 2007-2008).
Por lo tanto las plantas en asociación con los hongos formadores de micorrizas arbusculares tienen
potencial, para acumular los metales pesados en las raíces y translocarlos a la parte aérea,
favoreciendo de este modo la fitoextracción del metal. Existen diversas especies de hongos
formadores de micorrizas que pueden tolerar y desarrollarse en suelos contaminados por metales
pesados como: Eutrophosphora spp., Gigaspora spp. y Glomus spp. (Batista y Sánchez, 2009).
Las micorrizas arbusculares se reproducen en casi todos los hábitats y climas, incluyendo suelos
contaminados por metales pesados, es en este tipo de suelos que se producen cambios en la
diversidad de las poblaciones de las micorrizas arbusculares, esto es grave debido a la interacción
de las micorrizas arbusculares en el establecimiento de la planta y su supervivencia, así mismo las
altas concentraciones de metales pesados interfieren en los procesos simbióticos de las micorrizas
arbusculares tales como: retraso, reducción e incluso la eliminación de la germinación de esporas,
además de alterar la colonización de las raíces de las plantas (Del Val y col., 1999).
17
De este modo las micorrizas arbusculares como Rhizophagus intraradices han presentado mayor
tolerancia a metales como el Cd y Pb; y en simbiosis con la planta acumula una mayor
concentración de metal en la raíz micorrizada con este hongo (Alvarado y col., 2011), y también
134
esta influencia es notoria en la captación de Cs con girasol, ya que incrementó la captación de
este elemento radiactivo hasta 5 veces (Dubchack y col., 2010). Esta asociación de las plantas con
micorrizas puede ser una alternativa para la remediación de suelos contaminados, ya que
disminuyen el estrés y favorecen el crecimiento de las plantas en suelos contaminados por Pb y Cd
sirviendo así como auxiliares en la restauración de los mismos (Ortiz y col., 2009).
18
Método
El trabajo se desarrolló de acuerdo al siguiente diagrama de flujo
19
Fase de Campo
Las muestras de suelo fueron colectadas en parcelas de San Pedro Nexapa, municipio de
Amecameca, Estado de México. Ubicadas en las coordenadas 19° 04’ 755” Lat. N y 98° 43’ 148”
Long. W a 2768 msnm.
Fase de Laboratorio
El suelo se tamizó con una malla de 2 mm., después se realizó una mezcla con agrolita 1:1, y
posteriormente se esterilizó con vapor en autoclave a 1.2 atm de presión por un periodo de 3
horas, con la finalidad de eliminar patógenos, microorganismos y posibles esporas de micorrizas
nativas.
20
El suelo se contaminó artificialmente con cuatro dosis de Pb: 0 (testigo), 400, 800 y 1000 mg·kg-1
de Pb y cuatro dosis de Cd: 0 (testigo), 37, 60 y 120 mg·kg-1 de Cd. Las dosis de 400 mg·kg-1 de Pb y
37 mg·kg-1 de Cd respectivamente se consideran, de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-
147-SEMARNAT/SSA1-2004, como concentraciones que están en el límite de la contaminación del
suelo por metales pesados para uso agrícola.
21
El trabajo se distribuyó al azar en 80 unidades experimentales, con 8 tratamientos y 5 repeticiones
por cada metal Plomo y Cadmio (fig. 3). En el cuadro 2 se presenta las concentraciones de cada
tratamiento.
Las raíces se cubrieron con HCl al 10% por tres minutos, se eliminó el ácido y sin enjuagar se
procedió a la tinción (acidificación). Los frascos que contienen a las raíces se cubrieron con la
solución colorante (azul tripano 0.05% en lactoglicerol) y se calentaron durante 3 minutos en
horno de microondas (tinción).
22
Para determinar el porcentaje de colonización micorrízica en raíces se procedió a su montaje en
portaobjetos (fig. 4) para su evaluación en un microscopio óptico siguiendo el método de Phillips y
Hayman (1970), posteriormente se colocaron las raíces clareadas y teñidas en cajas Petri con
suficiente lactoglicerol. En un portaobjetos y con agujas de disección, se colocaron 20 segmentos
de aproximadamente 1 cm, paralelamente unos a otros. Sobre las raíces se adicionaron gotas de
lactoglicerol colocando los cubreobjetos, se eliminaron las burbujas y cada laminilla se selló con
esmalte. Para realizar la evaluación se observó al microscopio, se efectuaron tres pasajes
equidistantes por laminilla.
Fig. 4.- Montaje de las raíces teñidas para la cuantificación del porcentaje de colonización micorrízica.
Al revisar un campo óptico donde se encuentra un segmento que contiene hifas, vesículas y/o
arbúsculos, independientemente del porcentaje de micorrización se le da el valor de uno para la
evaluación total y por estructuras.
23
Para determinar las concentraciones de Pb y Cd en hoja, tallo y raíz, se molieron las muestras con
un mortero de porcelana, después se colocaron 0.2 g de muestra en matraces de digestión Micro
Kjeldahl de 50 mL. Se agregaron 10 mL de una mezcla de Ácido Nítrico (HNO 3) y Ácido Perclórico
(HClO4) en una proporción 3:1 v/v, para digerirlos (fig. 5) hasta que finalizó la emisión de gases
blanquecinos, después se filtraron en papel Whatman Núm. 41 y el filtrado se aforó con agua
destilada en un matraz aforado de 50 mL. Las determinaciones de Pb y Cd se hicieron con un
espectrofotómetro de absorción atómica (Ortiz y col., 2009).
Análisis Estadístico
Con los datos obtenidos se realizó un Análisis de Varianza (ANOVA), y posteriormente una
comparación múltiple de medias (Tukey) utilizando el software estadístico STATGRAPHICS
CENTURION XVI, con un nivel de confianza del 95%.
24
Análisis por Espectrometría de Absorción Atómica
Se prepararon soluciones de concentraciones ascendentes 0.0, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2 mg·L -1 de los
elementos Pb y Cd, se empleó una solución estándar de cada metal, la cual se encuentra a una
concentración de 1000 mg·L-1. Con la fórmula C1 V1 = C2 V2 se calculó la cantidad de estándar que
requiere cada punto de la curva.
Pb 217.0 Aire-Acetileno
Cd 228.8 Aire-Acetileno
25
Fig. 6.- Curva patrón de Pb.
26
Resultados
En cuanto a las características físicas tiene un bajo porcentaje de humedad (8.2%), la densidad
aparente (0.70 – 0.96 g/cm3) y la densidad real (1.13 – 2.17 g/cm3) nos indica que son suelos
arenosos volcánicos, la textura dio valores de entre 70-76% de arena, 16-22% de limo y 8-10% de
arcilla dando como resultado un suelo de tipo migajón arenoso.
27
El porcentaje de germinación de las semillas que se inocularon con Rizophagus intraradices sin la
adición de elementos (Pb y Cd) es del 68-72 %, esto es distinto a los tratamientos que estuvieron
expuestos a las diversas concentraciones de Pb donde presentó un porcentaje de germinación del
56-64% y a los tratamientos de Cd donde conforme se incrementó la adición del elemento, el
porcentaje de germinación disminuyó del 60 al 48% (cuadro 5).
0 Pb 68
400 Pb 64
800 Pb 56
1000 Pb 64
0 Cd 72
37 Cd 60
60 Cd 52
120 Cd 48
28
Al ir incrementándose las concentraciones de Pb, tiene un incremento mínimo el porcentaje de
colonización micorrízica, esto puede deberse al efecto inhibitorio que el metal (Pb) ejerció en la
colonización micorrízica de las raíces (cuadro 6).
Cuadro 6.- Porcentaje de colonización total de las raíces de girasol (Helianthus annuus L.) a
diferentes concentraciones de Pb y Cd.
0 Pb 60
400 Pb 42
800 Pb 44
1000 Pb 47
0 Cd 60
37 Cd 72
60 Cd 76
120 Cd 50
29
Concentraciones de Pb y Cd en raíz de girasol micorrizado
En el cuadro 7 se puede observar que la raíz del girasol micorrizado presentó una tendencia a
adsorber mayor nivel de Pb en la raíz, esto fue incrementándose conforme se elevó la
concentración de contaminante (0, 400, 800 y 1000 mg·kg-1 Pb), esto significa que la planta tiene
capacidad fitoextractora de Pb, también la adición de micorrizas arbusculares (Rizophagus
intraradices) mejora la absorción del contaminante en el proceso de fitoextracción, esto permitió
que las plantas de girasol acumularan el Pb dentro de la raíz.
Caso contrario al Cd donde con o sin la adición de micorrizas arbusculares la planta no absorbe
este metal, esto sugiere que el girasol y Rizophagus intraradices presentan cierta tolerancia al Cd,
además de desarrollar más densidad radical en contraste con los girasoles no micorrizados como
se observa en la figura 14.
Cuadro 7.- Valores de concentración en raíz de plantas de girasol (Helianthus annuus L.)
micorrizado (M) y no micorrizado (N) en suelo contaminado a diferentes concentraciones de Pb
y Cd.
0 Cd ND ND ND ND ND ND
30
En la figura 8 y el cuadro 8 se observa que la parte que presentó la mayor cantidad de Pb
acumulado fueron la raíces de girasol micorrizados (1) que presentaron diferencias significativas
(α< 0.005) en contraste con los tratamientos no micorrizados.
31
Concentraciones de Pb y Cd en parte aérea de girasol micorrizado y no micorrizado
Cuadro 9.- Valores de concentración en parte aérea de plantas de girasol (Helianthus annuus
L.) micorrizado (M) y no micorrizado (N) en suelo contaminado a diferentes concentraciones de
Pb y Cd.
0 Cd ND ND ND ND ND ND
37 Cd ND ND 0.0066 ND ND 0.0066
32
En la figura 9 y el cuadro 10 se observa que el girasol sin la adición de micorrizas tiene la menor
concentración de Pb, por lo tanto se puede inferir que la parte aérea de girasol micorrizado lo
absorbe mejor por lo que presenta diferencias estadísticas significativas (α< 0.005), caso contrario
al Cd donde no existieron diferencias estadísticas significativas (α> 0.005) esto debido que la
planta no tiene capacidad de absorber este metal.
33
Concentraciones de Pb y Cd en flor de girasol micorrizado y no micorrizado
En el cuadro 11 se muestra que la flor de girasol micorrizado presentó una tendencia inusual a
acumular el Pb más que las plantas que no estuvieron asociadas a las micorrizas arbusculares, esto
es importante ya que los mecanismos que las plantas tienen para acumular dichos metales son
totalmente distintos, esto sugiere que la adición de Rizophagus intraradices promueve la
translocación de Pb no sólo a la parte aérea de la planta, sino que incluso a la flor.
Cuadro 11.- Valores de concentración en flor de girasol (Helianthus annuus L.) micorrizado (M)
y no micorrizado (N) en suelo contaminado a diferentes concentraciones de Pb y Cd.
0 Cd ND ND ND ND ND ND
34
Se puede observar en la figura 10 y en el cuadro 12, a través del análisis estadístico que las flores
de girasol micorrizadas presentaron diferencias estadísticas significativas (α< 0.005) por acumular
la mayor concentración de Pb, en comparación con los tratamientos no micorrizados, en cambio
los tratamientos de Cd no presentaron diferencias significativas (α> 0.005) esto se puede explicar
debido a que la planta con o sin la adición de Rizophagus intraradices no tiene capacidad de
absorber este metal.
35
Las plantas expuestas al tratamiento de 1000 mg·kg-1 de Pb presentaron síntomas de clorosis,
coloración blanca en los pétalos de las flores y algunas de ellas pétalos apergaminados como se
puede observar en las fotos de la figura (11).
36
Las plantas de girasol sin la adición de Rizophagus intraradices presentaron mínimo crecimiento
radical, esto posiblemente debido a la toxicidad del Pb presente en el suelo, sin embargo la adición
de micorrizas arbusculares reduce la toxicidad a la exposición del Pb en la planta como se puede
observar en la figura 13.
Fig. 13.- Longitud de la raíz de girasol con y sin micorrizas a diferentes concentraciones de Pb.
Los girasoles que crecieron a diferentes concentraciones de Cd presentan mayor densidad radical
en comparación con los tratamientos de Pb (fig. 14), también es notorio que el tratamiento
micorrizado presenta mayor crecimiento radical que el tratamiento no micorrizado, podemos
inferir que Rizophagus intraradices tiene mejor tolerancia al Cd que al Pb.
Fig. 14.- Longitud de la raíz de girasol con y sin micorrizas a diferentes concentraciones de Cd.
37
Discusión
De acuerdo a Kidd y col., (2007) la acidez del suelo es un parámetro que determina la movilidad y
biodisponibilidad de los metales pesados en el suelo, de acuerdo a la Norma Oficial Mexicana
NOM-021-RECNAT-2000 la acidez del suelo fue moderada y el porcentaje de materia orgánica muy
baja, estos factores en conjunto tuvieron efectos en la baja absorción de metales pesados en el
presente trabajo.
Volke y col., (2005) también mencionan que los metales pesados son móviles a un pH bajo, del
mismo modo la actividad y crecimiento de los hongos son afectados por el pH ya que la mayoría
de estos organismos tienen un rango optimo cuando el pH oscila entre 6.5 a 8.5, en el presente
trabajo se obtuvo un pH de 6.34 a 7.15, lo que demuestra que Rizophagus intraradices se
desarrolló en un medio favorable que permitió un porcentaje moderado de colonización
micorrízica para Pb y un porcentaje medio-alto para Cd.
La semilla de girasol tuvo un porcentaje de germinación del 56-64% para los tratamientos
expuestos al Pb y del 48-60% para los tratamientos expuestos al Cd, los resultados demuestran
que la semilla de girasol puede germinar a más altas concentraciones de Pb y Cd que las
establecidas por la Norma Oficial Mexicana NOM-147-SEMARNAT/SSA1-2004, además se observó
un efecto inhibitorio a los 120 mg·kg-1 de Cd, Gutiérrez y col. (2011) atribuyen esto a una serie de
factores que están presentes en el medio donde se desarrollan las semillas.
Con base en estos resultados se puede concluye que existieron diferencias en los porcentajes de
germinación en la semilla de girasol silvestre, además se obtuvo germinación en todas las
concentraciones de Pb y Cd, que fueron más altas que las reportadas por Gutiérrez y col. (2011),
con estos resultados existe evidencia de que la semilla de girasol silvestre puede ser sembrada en
suelos contaminados por metales pesados.
38
El Cd a elevadas concentraciones inhibe el crecimiento del girasol, esto es reportado por Hasan y
col. (2009) quienes explican que también a bajas concentraciones se altera el metabolismo de la
planta, esto se puede constatar con las alteraciones morfológicas en flor en los girasoles que
estuvieron expuestos a este elemento, la adición de micorrizas arbusculares contribuye al
crecimiento radical del girasol expuesto a diferentes concentraciones de Cd, esto es muy distinto a
los tratamientos no micorrizados donde la toxicidad del Cd es más notable, observando un
desarrollo radical bajo y síntomas de clorosis como lo reporta Pernía y col. (2008).
Entre las especies populares para la fitoextracción están el girasol y la mostaza de la india, debido
a su rápido crecimiento, alta biomasa, alta tolerancia y elevada acumulación de metales así como
de otros compuestos orgánicos, en base a esto el departamento del medio ambiente de Canadá ha
desarrollado una base de datos (PHYTOREM) de 775 plantas con capacidad de acumular o
hiperacumular 1 o varios elementos (Hooda, 2007), reportando al girasol como planta
hiperacumuladora para Cd, Cr y Ni (de la Rosa y col., 2008; Turgut y col., 2004) sin embargo en
estos estudios se hizo uso de soluciones quelantes las cuales incrementaron la absorción y
acumulación del Cd.
39
En el presente estudio la adición de micorrizas arbusculares mostró leves mejoras a altas
concentraciones (60 y 120 mg·kg-1) de Cd respectivamente, con base en las condiciones del suelo,
pH moderadamente bajo y mínimo porcentaje de materia orgánica, se puede inferir que esto fue
una limitante en la disponibilidad del Cd para este trabajo.
40
Un caso muy distinto en las muestras de flor donde la adición de Rizophagus intraradices tiene el
efecto en el girasol de incrementar la absorción y posterior translocación mínima de Cd hacia la
flor, dónde es muy diferente al caso no micorrizado que prácticamente el metal no se transloca y
se queda en tallo y raíz, esto posiblemente se deba al efecto que las micorrizas arbusculares tienen
en el suelo, como lo reportado por Rabie (2005), dónde explica que en suelos muy contaminados
las micorrizas arbusculares reducen la concentración de metal para proteger a la planta de la
toxicidad del metal.
41
Conclusiones
El girasol tiene capacidad acumuladora para el Pb, disminuyendo la concentración de este metal
en el suelo.
El girasol presentó capacidad de absorber, translocar y acumular Cd, la mayor acumulación fue a
nivel de flor.
42
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