DETERMINACIÓN DE Helicobacter pylori IgG por ELISA

INTRODUCCIÓN

Helicobacter pylori tiene una distribución mundial con alta prevalencia. La infección con H. pylori es
una causa bien establecida de úlcera gástrica y duodenal y la infección persistente es un factor de
riesgo de carcinoma y linfoma gástrico. La infección produce niveles aumentados de anticuerpos
específicos de H. pylori de tipo IgG e IgA en suero, pero la determinación de IgM no ha demostrado
su utilidad en el laboratorio clínico. Las pruebas de ELISA son sensibles, específicas y eficaces para
el diagnóstico de pacientes no tratados. La detección de IgA es menos sensible que la detección de
IgG. En personas no tratadas IgG e IgA quedan elevados durante años, pero suelen decrecer los
niveles tras la erradicación, aunque esto no ocurre en todos los casos. Debido al hecho que la
infección es tan prevalente la prueba solo debe aplicarse a individuos con síntomas. La prevalencia
de anticuerpos se incrementa con la edad. Un resultado positivo solo significa que existen
anticuerpos a H. pylori, pero si el individuo no ha sido tratado probablemente indica infección activa.
Un diagnóstico definitivo solo debe realizarse cuando los signos y los síntomas clínicos sean
compatibles.

PREGUNTA PROPÓSITO

Evaluar los riesgos que se presentan en el laboratorio clínico en cada fase de análisis, al realizar una
determinación mediante la técnica de ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA).

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

El inmunoensayo enzimático sobre fase sólida (ELISA) está basado en el principio del sándwich. Los
pocillos están recubiertos con un antígeno. Los anticuerpos específicos de la muestra que se unen a
los pocillos recubiertos con el antígeno son detectados por un conjugado enzimático del segundo
anticuerpo (E-Ab) específico para el antígeno humano IgG. La intensidad del color desarrollado por
la reacción del substrato TMB es proporcional a la cantidad de anticuerpos específicos IgG
detectados. Los resultados de las muestras se pueden determinar directamente usando la curva
estándar.
 RESUMEN

El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas para la detección cualitativa de Helicobacter pylori, es

una prueba de uso cotidiano en los laboratorios clínicos, siendo de gran utilidad para un sinnúmero
de pruebas donde esta opción favorece el diagnostico de distintas enfermedades.
Este tipo de prueba busca desafiar nuestra capacidad como laboratoristas clínicos y en esta práctica
pudimos mejorar las distintas destrezas manuales que la misma conlleva, ya que debemos de
procurar según la técnica, tener a la mano todos los materiales provisto y no provistos listos, y la
agilidad para dispensar en los pocillos microtitulados la muestra y los reactivos, posteriormente
realizar los correctos lavados para eliminar los anticuerpos que no pudieron unirse al antígeno y asi
no exista ningún tipo de interferencias, con el fin de garantizar una correcta lectura de los resultados.
Con dicha práctica se pudo afianzar distintas destrezas que son importante para este tipo de
metodología, como el principio de la técnica como también conocer cómo se genera la reacción
antígeno- anticuerpo, y en base a esto generar un resultado, como la importancia de leer el inserto y
conocer por qué se aplica los distintos reactivos y que acción tiene cada procedimiento sobre la
muestra en la que estamos trabajando.
Es importante tener claro la técnica, porque cada día se vuelve indispensable su utilización en el
laboratorio clínico, en este caso para H. Pylori IgG se debe considerar para ocasiones futuras lo
siguiente:
 Cualquier manipulación inadecuada de las muestras o modificación del procedimiento de
ensayo puede alterar los resultados. Los volúmenes a pipetear, los tiempos de incubación,
las temperaturas y etapas de pretratamientos tienen que ser efectuados estrictamente
siguiendo el inserto.
 Una vez comenzado el ensayo, se deben completar todas las etapas sin interrupción.
Asegúrese de que los reactivos, materiales y dispositivos necesarios estén listos en el
momento adecuado.
 El tiempo de incubación afecta los resultados. Todos los pocillos deben ser manipulados en
el mismo orden y secuencia de tiempo. Para el pipeteo de soluciones en los pocillos se
recomienda una pipeta multicanal.
 El lavado de la placa de microtitulación es un paso importante. Los pocillos
insuficientemente lavados conllevan a resultados erróneos.
Finalmente, la practica se trabajó con suero de 20 pacientes, en la cual los resultados 7 obtuvieron
resultado positivo y 13 negativo según el rango de referencia del inserto, posteriormente se realizó
una interpretación de los resultados favoreciendo nuestro conocimiento adquirido.
 MATERIALES Y REACTIVOS

Para realizar una determinación analítica por la técnica de ELISA, el laboratorio debe prever que los
reactivos, materiales e instrumentos estén listos para su uso. Desde esta perspectiva se realiza el
análisis de la evaluación de riesgo, haciendo énfasis en que la ausencia o funcionamiento errado de
alguno de ellos podría provocar riesgos en la integridad del personal que ejecuta el análisis, y limitar
el desarrollo del procedimiento lo cual se convierte es un factor para generar resultados
inadecuados. En los cuadros que se presentan a continuación se enlistan los materiales, reactivos e
instrumentos necesarios para la determinación en suero de H. pylori IgG, por la técnica ELISA.

Cuadro 1. Lista de reactivos y accesorios contenidos en el Kit de trabajo.

Reactivos Suministrados
Placa de Microtitulación   12 tiras de 8 pocillos rompibles, recubiertos con antígenos de
Helicobacter pylori de aluminio. 
Tampón de dilución de Muestra 1 botella de 100 mL de solución de tampón de fosfato. 
IgG 
    Solución de Parada  1 botella 15 mL de ácido sulfúrico, 0,2 mol /L, listo para ser
utilizados 
      Tampón de lavado (20x 1 botella de 50 mL de una solución de tampón de fosfato 20x,
conc.)  para lavar los pocillos, pH 7,2 ± 0,2. 
        Conjugado   1 botella de 20 mL de conjugado de anticuerpos IgG anti-
humano con peroxidasa.  
     Solución de sustrato de 1 botella de 15 mL. 3,3, 5, 5- tetrametilbenzindina. 
TMB  
                     4 botellas, conteniendo cada una 2 mL de solución. 
  Estándar A:  0 NTU /mL, tapa azul 
  Estándar B: 15 NTU /mL, tapa verde 
                   Calibradores   Estándar C: 75 NTU /mL, tapa amarilla  
Estándar C: 150 NTU /mL, tapa roja  
Accesorios Suministrados
1 lamina autoadhesiva  
1 instrucciones del uso  
1 esquema de la placa  

Cuadro 2. Se enlistan los materiales e instrumentos necesarios para la práctica.

 Materiales e instrumentos necesarios  
 Fotómetro de Placa de Microtitulación con filtros de 450/620 nm 
 Incubadora 37°C  
 Dispositivo de lavado manual o automático de Placa de Microtitulación 
 Micropipetas para uso de (10-1000 uL) 
 Mezcladora Vortex  
 Agua destilada  
 Tubos plásticos desechables 

ESTABILIDAD Y ALMACENAJE

El proveedor recomienda almacenar el kit entre 2 – 8 °C. Además, indica que los reactivos abiertos
son estables hasta la fecha de caducidad indicada. 

Desde el punto de vista de evaluación de riesgos, corresponde analizar que los reactivos a utilizar
deben permanecer a una temperatura de almacenamiento que les proporcione estabilidad y solo
deben ser utilizados hasta la fecha de caducidad indicada, el no cumplir con esas indicaciones es
motivo para su deterioro, y como consecuencia alteración del resultado. En caso de los reactivos
que requieren preparación previa, se debe llevar registro de la fecha en que fue preparado, esto
permite su uso en el tiempo correspondiente.

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS  

En la preparación de los reactivos corresponde evaluar los volúmenes correctos, es fundamental

seguir las indicaciones del inserto y dispensar la proporción indicada de cada reactivo. Otro aspecto
de riesgo a considerar es tomar las precauciones para evitar derrames y ocasionar accidentes, en
caso que esto ocurra tener conocimiento de los protocolos indicados según el caso. Antes de
proceder con el uso de los reactivos, estos deben ser llevados a temperatura ambiente por un
tiempo de 20 a 25 minutos. Los reactivos contenidos en el kit se describen a continuación.

Placa de Microtitulación: Las tiras rompibles están recubiertas con antígeno de Helicobacter pylori.
Inmediatamente después de usar las tiras, las restantes deben sellarse de nuevo en el papel de
aluminio.
Tampón de Lavado: Diluir el tampón de lavado 1 + 19, por ejemplo 10 mL del tampón de lavado
+190 mL de agua destilada. El tampón de lavado diluido es estable durante 5 días a temperatura
ambiente (20 – 25 °C). En caso de aparecer cristales calentar la solución a 37°C, en un baño María.
Mezclar bien antes de la dilución.

Solución de Sustrato de TMB: La solución está lista para uso y debe almacenarse a 2 – 8 °C,
protegida de la luz. La solución debe tener un color ligeramente azul claro. Si es sustrato se
convierte en azul, es posible que haya sido contaminado.
 

EVALUACIÓN DE RIESGO

Para una mejor compresión de los riesgos que se puede presentar en las pruebas de ELISA, las
clasificaremos según las fases analíticas, y estas son:
RIESGOS EN LA FASE PRE-ANALÍTICA

 Uno de los errores más comunes que se ocasionan en esta etapa, es la toma de muestra,
dado que, si el operador no es consciente de los requisitos mínimos que deben tener la
muestras, pueden influir negativamente en los resultados.
 Identificación incorrecta de la muestra, conservación de la muestra, información incompleta
del paciente.
El personal del laboratorio debe tomar las máximas precauciones con la adecuada extracción
sanguínea, la correcta identificación, selección del anticoagulante, pues cada uno tiene sus
indicaciones concretas, de acuerdo con el parámetro que se investiga, la rotulación de los tubos y en
la manipulación de las muestras para evitar inconvenientes y resultados que no concuerden con lo
esperado por el paciente y el médico de asistencia.

RIESGOS EN LA FASE ANALÍTICA

 Un riesgo poco frecuente, pero que influye en el momento del análisis de la prueba, es una
inadecuada ergonomía, dado que se deriva a una postura forzada o incómoda, en la cual el
operador puede manipular erróneamente el proceso de análisis, por ende, se recomienda al
analista ubicarse en una postura cómoda, teniendo de frente siempre la mesa con cada uno
de los materiales que se va a utilizar.
 Se recomienda no hablar al momento de realizar este tipo de pruebas dado que puede
provocar interferencias en los resultados ya que la saliva contiene enzimas y pudiese alterar
el resultado de la prueba.
 Otro riesgo analítico es el cambio de operador al momento de estar realizando la prueba,
dado que al ser bastantes pocillos pueden haber confusiones entre el pocillo que deja cada
operador y el correspondiente a llenado.
  En el momento de preparar la solución de lavado, se debe cumplir con las diluciones
indicadas por el inserto, para no obtener una solución en desproporción de WASH y agua
destilada.
 Se debe tomar en cuenta la temperatura y el tiempo de incubado, dado que, la reacción
antígeno-anticuerpo que ocurre en los pocillos deben similar la temperatura
corporal del paciente.
 Los reactivos deben conservarse cerrados y en un espacio idóneo para evitar
la contaminación del mismo. Como ejemplo tenemos el conjugado, al cual debemos
proteger de la luz dado que le provoca degradación.
 Se debe evitar tocar los pocillos directamente y la parte de inferior de la placa, dado que se
pueden quedar marcas o huellas que interferirán con el haz de luz en el momento de la
lectura en el equipo.

RIESGO EN LA FASE POS-ANALÍTICA

 Antes de emitir un resultado se debe realizar una correcta interpretación de los mismos,
teniendo en consideración la anamnesis del paciente, para analizar si han existido
antecedentes de resultados, si está en tratamiento, o condiciones clínicas de la enfermedad.

TOMA Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA  

Usar muestra de suero o plasma (citrato, heparina) humano. Si el ensayo se realiza dentro de 5 días
después, las muestras pueden ser almacenadas a 2 – 8 °C, en caso contrario deben ser alícuotas y
almacenarlas a (–70... -30 °C). Agitar bien las muestras descongeladas antes de diluirla. Evitar
congelaciones y descongelaciones. No se recomienda la inactivación por calor de las muestras. 

Dilución de las Muestras  

Antes del ensayo, las muestras tienen que ser diluidas en relación 1 + 100 con el tampón de Dilución
de Muestras IgG, por ejemplo, 10 uL de la muestra con 1 mL de tampón de dilución de muestra IgG,
mezclar bien con la mezcladora Vortex.  

PROCEDIMIENTO  
El procedimiento para realizar ELISA manual es complejo, requiere varias etapas, y consta de
tiempos, manejo de temperaturas, protección de luz directa en las reacciones, lavados, dispensar
volúmenes, e incluso la comodidad del operador encargado, todas estas condiciones representan
riesgos que los encargados de un laboratorio clínico deben evaluar y tomar las precauciones
pertinentes.

CONSIDERACIONES PARA EL PROCEDIMIENTO:

Leer cuidadosamente las instrucciones de uso del ensayo antes de realizarlo. Para el buen
funcionamiento de la técnica es necesario seguir las instrucciones. El siguiente procedimiento es
válido solamente para el método manual. Si se realiza el ensayo en los sistemas automáticos de
ELISA es aconsejable elevar el número de lavados de tres hasta cinco veces y el volumen de
Tampón de lavado de 300 uL a 350 uL para excluir efectos de lavado. Antes de comenzar,
especificar exactamente la repartición y posición de las muestras y de los estándares /controles (es
recomendable determinar en duplicado) en el esquema de la placa suministrada. Usar la cantidad
necesaria de tiras o pocillos e insertarlos en el soporte.  
Realizar el ensayo en el orden indicado y sin retraso  
Para cada paso de pipeteado en los estándares /controles y en las muestras, usar siempre puntas
de pipeta de un solo uso. Graduar la incubadora a 37± 1°C. 
1. Pipetear 100 uL de estándares /controles y muestras en los pocillos. Dejar A1 para el
blanco. 
2. Recubrir las tiras con los autoadhesivos suministrados. 
3. Incubar 1h ± 5 min a 37± 1°C. 
4. Después de la incubación, retirar el autoadhesivo, aspirar el líquido de la tira y lavarla tres
veces con 300 uL, del tampón de lavado. Evitar el rebosamiento de los pocillos. El intervalo
entre lavado y aspiración debe ser > 5 segundos. Para sacar el líquido restante de las tiras, es
conveniente sacudirlas sobre papel absorbente.  
Nota: El lavado es muy importante. Un lavado insuficiente provoca una baja precisión y resultados
falsamente elevados.  
5. Pipetear 100 uL de conjugado en cada pocillo con excepción del blanco sustrato A1. 
6. Incubar 30 min a la temperatura ambiente (20 – 25 °C). Evitar la luz solar directa. 
7. Repetir el lavado como en el paso número 4. 
8. Pipetear 100 uL de Solución de sustrato de TMB en todos los pocillos. 
9. Incubar exactamente 15 min en oscuridad a temperatura ambiente (20 – 25 °C). Un color
azul se produce en las muestras positivas debido a la reacción enzimática. 
10. Pipetear en todos los pocillos 100 uL de la Solución de parada en el mismo orden y mismo
intervalo de tiempo como Solución de sustrato de TMB, por lo tanto, un cambio de color azul a
amarillo se produce. 
11. Medir la extinción con 450/620 nm en un periodo de 30 min después de añadir la Solución
de Parada. 
 MEDICIÓN 

Para medir la reacción obtenida se utiliza un espectrofotómetro, en este punto se considera contar
con un equipo funcional que realice la lectura correcta, para aquello a nivel del laboratorio clínico
existen indicaciones contenidas en las normas para la acreditación, que proporcionan información
sobre este parámetro. Un equipo sin mantenimiento o no calibrado arroja resultados errados. En la
práctica realizada no se cuestionó este aspecto. Podríamos mencionar también, que el personal
encargado de manipular el equipo debería conocer cómo hacerlo, para el desarrollo de la práctica se
pudo contar con alguien que tenía la preparación para manejar el espectrofotómetro, en este caso
podemos acotar que se analizó un riesgo y se trabajó en evitarlo. Se presentan a continuación las
indicaciones dispuestas por el fabricante para la medición.

 Ajustar el fotómetro de la Placa de Microtitulación ELISA a cero utilizando el blanco. 

 Si por razones técnicas el fotómetro de Placa de Microtitulación de ELISA no se puede
ajustar a cero utilizando el blanco, el valor de la absorbancia de este debe ser sustraído de los
demás valores de absorbancia medidos, con el fin de obtener resultados fiables.  
 Medir la extinción de todos los pocillos con 450 nm y anotar los resultados de los
estándares/controles y de las muestras en el esquema de la placa. 
 Es aconsejable realizar la medición biocromática a una longitud de onda de referencia de
620 nm. 
 Si se efectuaron análisis en duplicado o multiplicado, hay que calcular al promedio de los
valores de extinción de los pocillos correspondientes.

REPORTE E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Para el reporte e interpretación de los resultados obtenidos se deben considerar los parámetros que
se muestran en el siguiente cuadro:
Cuadro 3. Valores referenciales e interpretación para reporte de H. pylori IgG.

Positivo > 20 NTU/mL Presencia de anticuerpos contra el patógeno.

Zona intermedia 15 – 20 NTU/ mL Los anticuerpos contra el patógeno no fueron

detectables. Es recomendable repetir la prueba con
una muestra fresca. Si está nuevamente en zona
intermedia, será negativo.
Negativo < 15 NTU/mL La muestra no contiene anticuerpos contra el
patógeno.
 DATOS

Para el desarrollo de la práctica de determinación de H. pylori IgG se evaluaron un total de 20

muestras, entre sexo masculino y femenino, de diferentes edades.
Tabla 1. Datos de muestras. Edades y valores de concentración.
N° muestra Sexo Edad Resultado Valores
1 M 85 Positivo 135,054
2 F 19 Positivo >150,00
3 M 31 Negativo 2,070
4 F 54 Negativo 9,112
5 F 29 Positivo 61,757
6 F 47 Negativo 12,691
7 F 30 Negativo 8,661
8 F 23 Negativo 4,583
9 M 20 Negativo 2,650
10 F 56 Negativo 13,746
11 M 86 Positivo 76,953
12 F 50 Negativo 4,901
13 M 52 Positivo 143,786
14 M 38 Negativo 0,386
15 M 50 Negativo 9,495
16 F 27 Positivo 44,110
17 F 63 Negativo 0,709
18 M 10 Positivo 110,093
19 M 44 Negativo 2,502
20 M 27 Negativo 13,200

Gráfico 1. Datos de las muestras. Distribución de edades y valores de concentración.

160
140
120
100
80
60
40
20
0
M F M F F F F F M F M F M M M F F M M M
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Series1 Series2 Series3

De las 20 muestras que se analizaron para presencia de IgG ante H. pylori, 10 son de sexo
masculino y 10 de sexo femenino, con una media de 42 años. Los valores de concentración de IgG
tuvieron una media de 34,55.

Gráfico 2. Resultados.

35%
POSITIVAS
NEGTIVAS
65%

De las 20 muestras analizadas, un total de 7 muestras representando un 35% fueron positivas, mientras que
un 65% representando 13 muestras fueron negativas. Como muestras de interés analizaremos esas 7
muestras positivas.

Gráfico 3. Edad y sexo pacientes positivo.

Edad
100
90
80 85 86
70
60
50 52
40
30
29 27
20
19
10
10
0
M F F M M F M
1 2 5 11 13 16 18

De las 7 muestras que resultaron positivas, 4 fueron hombres representando un 57 % y 3 fueron

mujeres representando un 43%. Observando así una prevalencia mayor en el sexo masculino. En
cuanto a las edades de estos pacientes, podemos observar un rango de 10 hasta 85 años, lo que
nos (1)demuestra que la H. pylori se puede presentar a cualquier edad.
La prevalencia mayor en hombres concuerda con un estudio realizado en Barcelona, donde existió
un predominio en varones (56,9%) respecto a mujeres (48,2%), pero que no concuerda con una
incidencia a más positivos en edades mayores, dado que el 87,5% de sus casos positivos fueron
pacientes de 60-69 años, y en el presente la distribución va a la par entre edades tempranas y
edades avanzadas (1).
Estudios realizados en Madrid siguen esta prevalencia mayoritaria en varones, pero con diferencias
poco significativas, con una prevalencia de 52,1% en hombres y 47,9% en mujeres, y una vez mas la
edad de presentación es mayor en pacientes de edades avanzadas, con un rango entre 60 y 69
años (2).
Faltan aun estudios que permitan establecer claramente la prevalencia de la infección por H. pylori, y
son muchas las razones, dado que no hay incentivo por parte de los investigadores para ir mas a
fondo en estos estudios, la mayoría de personas puede estar en contacto con la bacteria, pero no
presentar sintomatología, se deben tomar muestras más grandes para poder tener resultados más
significativos. Hasta que no se consolide, no se puede decir cual es el sexo mas frecuente, o la
edad, pero si existen estudios que ya definen que hay mayor prevalencia en países en subdesarrollo
y en zonas con escasez de recursos.

CONCLUSIÓN

La prueba de Elisa es una técnica usualmente utilizada por su bajo costo y complejidad, pero
presenta distintivos inconvenientes en cuanto a su sensibilidad y especificidad ya que varían en
función a diferentes factores los antígenos del preparado, las diluciones del suero empleado y el
método considerado de referencia, entonces la prueba tiene consideraciones importantes respecto al
riesgo que genera la misma. La prueba realizada en esta clase al ser un Elisa de tipo manual,
conlleva algunas fuentes de error, desde el no contar con el material necesario, no respetar los
tiempos de incubación ni la cantidad de muestra o reactivo que se deba dispensar en los pocillos
microtitulados, como el no realizar correctamente los lavados, los pocillos insuficientemente lavados
conllevan a resultados erróneos, se recomienda emplear una pipeta multicanal o un sistema
automático de lavado, no deje secar los pocillos entre incubaciones, el lavar debemos corroborar
que todos los pocillos estén completamente llenos con la solución buffer de Lavado y que no haya
residuos en ellos.
Los resultados son válidos solamente si el ensayo ha sido realizado de acuerdo a las instrucciones.
Es importante para minimizar los errores el atenerse a las Prácticas de Buen Laboratorio, es la única
forma de garantizar exámenes de calidad. El resultado de lo aprendido en esta práctica, es la
importancia de evaluar los riesgos que conlleva la prueba, como laboratoristas clínicos somos los
encargados de comprender cada paso a realizar y porque no podemos alterar los mismos, como
llevar la placa a incubar a 37º son el fin de simular la temperatura corporal y que se genera la unión
antígeno-anticuerpo. El ensayo logra cumplir su objetivo, si fuimos cautelosos en minimizar los
riegos que nos acogen y sobre todo la importancia de generar resultados confiables.
 REFERENCIAS

1. J.M. Baena Díez, M. García Lareo, J. Martí Fernández, I. León Marín, D. Muñiz Llama, J. Teruel Gila,
et al. Prevalencia de la infección por Helicobacter pylori en atención primaria: estudio
seroepidemiológico. Originales. 2018; 9:553–8.
2. F. Sánchez Ceballos, C. Taxonera Samsó, M. García Alonso, C. Alba López. Prevalencia de
infección por Helicobacter pylori en población sana Comunidad Madrid. Revista Española de
Enfermedades Digestivas. 2017; 99:497–501 .

ANEXOS
Gráfico 1. Pasos para la preparación de solución del lavado, WASH 20x (50ml) +(950ml) de agua
destilada.
Gráfico 2. Pasos para la dilución de la muestra, (1000µl) DIL + (10µl) muestra, ubicado en sus
respectivos pocillos y homogeneizar.

Gráfico 3. Pasos para la colocación del control/ST (100µl) + la muestra en los pocillos; se debe
sellar la prueba para la incubación a 37°C por 1hora.

Gráfico 4. Se procede a realizar el lavado con 300µl de WASH por pocillo por 3 veces, se coloca el
conjugado (100µl) en cada pocillo menos en el blanco para luego incubar por 30 minutos a
temperatura ambiente. Se debe proteger la muestra de la luz.
Gráfico 5. Se procede a realizar el segundo lavado con 300µl de WASH por pocillo por 3 veces, se
coloca el sustrato (100µl) para luego incubar por 15 minutos a temperatura ambiente. Se debe
proteger la muestra de la luz.

Gráfico 6. Se procede a pipetear el STOP (100µl) y se mezcla para luego proceder a la lectura en el
equipo (espectrofotómetro) obteniendo como resultado, de 20 muestras, 7 resultaron positivas.