Lina María Agudelo Escobar

Curso de Biotecnología
Microbiología Industrial y Ambiental
 INTRODUCCIÓN

El objetivo final de un proceso biotecnológico debe ser

conseguir la máxima productividad del mismo, la
optimización del biorreactor y del microorganismo
implicado en el proceso y la obtención del producto
final lo más reproducible posible.

Todos estos objetivos se encuentran asociados al grado de

conocimiento que del proceso biotecnológico se posea. La
adquisición de este conocimiento tiene que conseguirse mediante
la medida, a ser posible en el menor tiempo posible, del mayor
número de variables del sistema.
 Esquema de las posibilidades de
instrumentación en un biorreactor
lavallab.com
lavallab.com
lavallab.com
Requisitos:
La mayor simplicidad posible.

La determinación de la magnitud de la variable en el menor tiempo posible.

La automatización del proceso.

La economía del equipo.

La no alteración del proceso biotecnológico

Características de la instrumentación utilizada en Bioprocesos
Las sondas de instrumentación tienen que:

Poder resistir procesos de esterilización

Tienen que poder ser usadas en medios con turbidez elevada

Ser insensibles a la adsorción de proteínas y al crecimiento celular sobre ellas

Poseer una alta resistencia a fuerzas mecánicas y a posibles erosiones por parte
de partículas sólidas.

Estabilidad (ejemplo: con respecto a la perdida de actividad enzimática)

Especificidad respecto al parámetro que se desea medir

Detección de bajas concentraciones de analitos

Reproducibilidad del análisis

Tiempos de respuesta cortos

Una clasificación de la manera en que se puede realizar la medida de un
proceso biotecnológico es en función de cómo y dónde se realiza ésta:

Medidas en discontinuo (off-line):

Implican la toma de muestra y su posterior tratamiento y análisis

Medidas en línea (on-line):

La instrumentación analítica se encuentra fuera del biorreactor, se necesitará
un equipo de toma de muestras que proporcione una corriente con biomasa, si
se quiere conocer alguna característica celular del cultivo, o libre de la misma
si se quieren analizar sustratos y productos del bioproceso.

Medidas in situ (in-line):

El sensor analítico se encuentra en el interior del biorreactor en contacto
con el medio de cultivo. De esta manera se evitan problemas de retardo o
de representatividad de la muestra.
 Tipo Entrada: J
Tipo Entrada: K

Tipo Entrada: PTC

PT-100
Sondas

El juego de sondas está formado por:

Sonda de temperatura-conductividad
Sonda Flowmeter (flujo vertical)
Sonda caliper (calibrador)
Sonda de resistividad normal corta y larga y potencial
espontáneo
Sonda de inducción
Sonda de rayos gamma natural Las sondas lambda de este tipo se utilizan en
Sonda tomamuestras motores de gasolina dotados de una
regulación lambda de dos puntos. Las sondas
están situadas en el tubo de escape y
Este tipo de equipos se aplica típicamente para detectan simultáneamente el flujo de gases de
prospección geológica y geofísica de recursos escape de todos los cilindros. El modo de
(reconocimiento, investigación y evaluación) y en el funcionar se basa en el principio de la célula
galvánica de concentración de oxígeno en
ámbito de aguas subterráneas (hidrogeología, combinación con un electrólito sólido.
rehabilitación de pozos y protección ambiental).
Sondas de temperatura

La gama de sondas de temperatura se

compone de dos grandes bloques: Las
sondas normalizadas y las sondas a
medida. Las primeras, combinadas con los
accesorios adecuados, permiten dar
solución a la mayoría de problemas de
medida de temperatura. Cuando esto no es
posible, por exigencias técnicas o
comerciales, se puede dar una solución a
cualquier necesidad con una sonda de
temperatura a medida, construida
siguiendo las especificaciones del cliente.
Equipos de tomas de Muestras
Equipos de tomas de muestra directos:

El más utilizado a escala de laboratorio es una bomba peristáltica conectada a un tubo recolector
proveniente del biorreactor, de diámetro lo más pequeño posible para conseguir que el volumen
muerto sea el mínimo. Suele utilizarse para determinar parámetros relacionados con la biomasa
(biomasa total, actividad metabólica, etc.)

Equipos de toma de muestras indirectos:

Se obtiene una muestra del biorreactor libre de biomasa y partículas en
suspensión. Se utilizan para tal fin membranas.
 La elección de un sistema apropiado de toma de muestras para el análisis de un
determinado analito dependerá de:

 las características del medio de fermentación,

 el riesgo de contaminación del bioproceso
 la sensibilidad del microorganismo a limitaciones de oxígeno y fuerzas de
cizallamiento.
Submerged Hollow
Fiber Membrane
Filtration

Millipore Pellicon Ultrafiltration System

Type CUF 5/10/1
The PURON
submerged hollow
fiber modules consist
of numerous long
Submerged fibers that are hollow,
Hollow Fiber like straws. These
Membrane fibers have tiny pores
of approximately 0.05
Filtration µm that act as a
barrier to bacteria and
suspended solids in
wastewater treatment.
Reverse Osmosis Membranes

Hot water sanitizable

elements
- Chlorine resistant NF
elements
- Pre-rinsed ultra pure
water elements
- Custom made elements
for various special Unmatched ultrafiltration.
applications Optimization of both diffusion and
convections with the 30 micron wall
thickness.
Excellent small, middle and large
Reverse Osmosis Membranes are molecule clearances.
used for high and low salinity Consistent high efficiency throughout
brackish water applications and for therapy.
high and low salinity sea water Exceptional biocompatibility
applications.
 •Sensores pH de uso general
Una gran variedad de electrodos de pH de METTLER
TOLEDO THORNTON satisfacen los diversos •Los electrodos de combinación pH/ORP de
requisitos de aplicación del tratamiento de agua pura, METTLER TOLEDO incluyen en una única
desde el tratamiento previo de ósmosis inversa (RO) y sonda compacta funciones de medición y
referencia, además de un compensador de
el ajuste de pH de interpaso, hasta el control de temperatura de respuesta rápida.
reciclado y la neutralización de residuos mediante •Los diseños de los electrodos de referencia
regeneración por desionización (DI). El pHure Sensor™ son resistentes a la contaminación, dilución y
de THORNTON es especialmente adecuado para la desplazamiento, por lo que tienen una larga
medición en RO de baja conductividad y para el control vida útil.
de química de ciclo de centrales de energía. •Los preamplificadores pueden conectarse con
todos los instrumentos multiparámetro y pH de
THORNTON e incluyen aislamiento de
entrada/salida y circuito de medición con puesta
Sensores de pH a tierra para solución diferencial seleccionable
para la protección contra interferencias.
•Diversos alojamientos permiten una instalación
de inserción, lateral y retráctil.

•Mediciones de pH de gran pureza

•El pHure Sensor™de THORNTON

incluye las características anteriores y
un electrolito de gel presurizado para
estabilizar el potencial de
unión/diafragma de referencia entre
muestras de baja conductividad y
soluciones tampón.
•El pHure Sensor™utiliza el circuito de
medición con puesta a tierra para
solución diferencial y un trayecto de flujo
cuidadosamente diseñado en un
alojamiento de acero inoxidable para
lograr una óptima estabilidad.
 Sensores de parámetros Físicos y Químicos
La instrumentación asociada a un biorreactor se basa en la medida de propiedades
físicas y químicas del medio.

Sensores de parámetros físicos:

Los principales parámetros físicos que tienen influencia en el comportamiento

celular y que están disponibles para su monitorización en línea son:

 la temperatura,
la presión,
la potencia y velocidad de agitación,
 la viscosidad,
los caudales de líquidos y gases,
la detección de espumas y
el contenido del reactor (volumétrico o másico)
Sensores de Parámetros Químicos:

Los principales parámetros químicos que tienen influencia en el

comportamiento celular y que están disponibles para su monitorización
en línea son:

pH
pO2
CO2 disuelto
Potencial redox
Análisis de gases de salida

Análisis de las Propiedades Hidrodinámicas:

Permiten determinar la influencia de las variaciones de la biomasa, la morfología

celular y la reología del medio.

Velocidad media
Turbulencia en la fase continua
Distribución de tamaño de burbuja
Velocidad de la fase dispersa
Relación entre el volumen del gas y el volumen total del líquido (hold up)
Mezcla de fases
Transferencia de materia entre fases.
Anemómetros doppler lasser
Análisis de sustratos y productos:

Debido a la gran variedad de sustratos y productos analizados, los equipos

analíticos que se pueden acoplar para la detección de estas sustancias son muy
variados.

Equipos para el análisis se biomasa y características celulares

Métodos espectrofotométricos
Auto analizadores
Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
Cromatografía de gases (GC)
Cromatografía líquida de proteínas (FPLC)
Cromatografías
Análisis por inyección en flujo (FIA)
Análisis inmunológico por inyección en flujo (FIIA)
Biosensores
Análisis de Biomasa y características celulares
Un parámetro básico en los procesos biotecnológicos es la concentración,
estado fisiológico y velocidad de crecimiento celular de los
microorganismos utilizados.
a) Medidas en discontinuo:
 Peso seco
 Técnicas microscópicas
 Contaje de colonias en placas petri

b) Medidas en línea:
Los métodos utilizados se basan en determinaciones ópticas
turbidimétricos
Nefelométricos
Polarográficos
Densitómetros de resonancia acústica
Fibras ópticas
Microfluorimetría
Medidas dieléctricas
Citómetro de flujo
Citometría de flujo
 Biosensores El sensor que mide indirectamente la presencia y
concentración de compuestos químicos por
Es un sensor que detecta detección de productos de una reacción
en tiempo real la catalizada por un material biológico
presencia y concentración (microorganismos, enzimas) incorporado al
de moléculas biológicas instrumento.
en una muestra. Un biosensor consiste en tres
partes: un componente biológico
Características: (tejido, microorganismos, organelas,
receptores celulares, enzimas,
anticuerpos, ácidos nucleicos, etc.);
Sensibilidad un sistema traductor (asociado a los
Selectividad otros dos componentes, que
traduce la respuesta biológica en
Respuesta rápida una señal físico-química) y un
Económicos detector (que capta la señal del
Fácil uso traductor y la procesa).

determinación del antígeno

prostático específico (PSA) y
también para la determinación
de la enfermedad de Chagas
(1) e Helicobacter pylori .

Biosensor electroquímico
de colesterol
Biosensores según el analito a analizar:
Gases:
(O2, CO2), tóxicos (NH3, CL2; CO; H”S; HCN), nerviosos, anestésicos (N2O) e
inflamables (CH4, butano) que pueden encontrarse en muestras líquidas,
fluidos corporales, corrientes gaseosas o muestras atmosféricas.

Iones:
H+, cationes monovalentes (Li+, Na+, K+, NH4+), cationes divalentes (Ca2+,
Mg2+), fosfato, iones de metales pesados (Cu2+, Cd2+, Hg 2+).

Otros metabolitos:
Glucosa, urea, triglicéridos, colesterol, hormonas, esteroides, drogas
terapéuticas, etc. Particularmente útiles en industrias alimentarias, de
fermentaciones, farmacéuticas y agrícolas.

Analitos volátiles:
Sustancias como saborizantes, esencias y feromonas

Microorganismos:
Análisis de bacterias, parásitos y diversos tipos de biomasa, virus
Biosensores según el componente biológico que los forma:

Biocatalíticos:
Uso de enzimas individuales, uso de secuencias de
enzimas, microorganismos y tejidos animales y vegetales.

Inmunosensores:
Anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales,
conjugados enzima/antígeno, anticuerpos marcados.

Quimiorreceptores:
Estructuras enteras, preparaciones con quimiorreceptores.
Postdoctoral fellow Jean-
Francois Masson holds a
microelectrode modified with
a biosensing layer capable of
measuring adenosine
triphosphate (ATP), a chemical
involved in energy transport in
humans. (Georgia Tech Photo:
Gary Meek)
Chlorine Dioxide Sensor
 CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN DE LOS BIOSENSORES
Tipo de Interacción Detección de la interacción

• Biocatalítica. • Directa.
• Bioafinidad. • Indirecta.
Elemento de reconocimiento Sistema de transducción

• Enzima. • Electroquímico.
• Orgánulo, tejido o célula completa. • Óptico
• Receptor biológico. • Piezoeléctrico.
• Anticuerpo. • Térmométrico.
• Ácidos nucleicos. • Nanomecánico.
• Polímeros de impresión molecular (PIM),
• ácidos nucleicos peptídicos (PNA),
• aptámero

Tomado de: Vt aplicaciones de biosensores en la industria agroalimentaria

Clasificación de los Biosensores en función de su transductor
Transductor electroquímico:
Potenciometría
Amperimetría
Conductimetría

Transductor óptico (fibras ópticas):

Absorbancia
Reflectancia
Fluorescencia
Bioluminiscencia
Quimioluminiscencia

Transistor de efecto de campo sensible químicamente ISFET (Ion Sensitive

Field Effect Transitor):
FET-potenciometría
Termistor:
calorimetría
Transductor piezoeléctrico:
Impedancia mecánica y acústica
Sistema de Transducción

El sistema de transducción o transductor es el elemento que convierte

las variaciones de las propiedades físicas o químicas que se
producen por la interacción entre el elemento de reconocimiento y el
analito en una señal que puede ser amplificada, almacenada y
registrada. La señal generada por el transductor en algunos casos no
puede ser interpretada directamente y es necesario la utilización de
un software para su procesamiento.
Transductor Electroquímico

Los transductores electroquímicos transforman la señal que se produce por la

interacción entre el sistema de reconocimiento y el analito a detectar en una señal
eléctrica. Proporcionan información analítica cuantitativa o semicuantitativa
específica. El elemento de reconocimiento biológico y el elemento de transducción
deben estar en contacto.

Se diferencian cuatro tipos de biosensores electroquímicos que son

conductimétricos, potenciométricos, amperométricos e impedimétricos en función
de si detectan cambios en la conductividad, en el potencial, en una corriente
generada o en la impedancia.

En general se utilizan junto con elementos de reconocimiento biocatalíticos ya que

las reacciones enzimáticas generan aparición de sustancias electroactivas, cambios
en el pH o en el potencial, etc.
Transductor Óptico

Los transductores ópticos se basan en la medición de las variaciones que se

producen en las propiedades de la luz como consecuencia de la interacción
física o química entre el analito a detectar y el elemento biológico de
reconocimiento del biosensor. Las bases físicas de este tipo de sensores son
los cambios que ocurren en absorción, fluorescencia, luminiscencia, dispersión
o índice de refracción, cuando la luz se refleja en las superficies de
reconocimiento. El sistema básico de medida consiste en una fuente de luz, el
elemento sensor (donde se encontrarían las moléculas receptoras) y el detector.
Se diferencian métodos de detección directa, sin necesidad de marcaje y
detección indirecta, en la que es necesario utilizar marcaje. Este tipo de
transductores pueden acoplarse a elementos de reconocimiento
biocatalíticos o de bioafinidad.
http://ftp.eia.edu.co/academico/Extension/Memorias/Curso%20sobre%20tran
sductores%20piezoelectricos%20y%20sus%20aplicaciones/Introducci%F3n.
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