Universidad Tecnológica de Santiago

UTESA

Manual de Prácticas de Laboratorio

BIOQUÍMICA II MED 607

Elaborado por:
Profesora Juana Aquino, M.A
Profesor Juan Álvarez, M.A

www.utesa.edu
Santiago de los Caballeros
República Dominicana,
3ra Edición 2020
 INTRODUCCIÓN

En el organismo de los seres vivos ocurren reacciones metabólicas que originan la

vida. La bioquímica es la ciencia que se encarga del aspecto molecular de estos
procesos. En la actualidad la efectividad en la prevención diagnóstico, tratamiento y
estudio de las enfermedades se basan cada día más en los resultados cuali-cuantitativos
de parámetros bioquímicos
Este manual de laboratorio de Bioquímica 11, se divide en tres unidades, consta de
13 prácticas en las cuales se ponen de manifiesto las reacciones químicas que
identifican al elemento presente en la muestra estudiada, en estas reacciones
bioquímicas, la enzima presente en el reactivo reacciona con el sustrato produciéndose
una reacción con presencia de color que podrá ser medido espectrofotométricamente
La concentración de la reacción es directamente proporcional al color de la misma.
El laboratorio de Bioquímica II tiene como objetivo principal determinar mediante la
extracción de fluidos biológicos y posterior análisis, la presencia y cuantificación de un
número creciente de sustancias para el subsecuente diagnóstico de enfermedades. Las
cuantificaciones de los analitos de las prácticas son realizadas mediante el método de
laboratorio de Espectrofotometría, método basado en el uso de la luz para medir
concentraciones de los complejos coloreados que se forman.

Una vez obtenidos los resultados de las prácticas, los estudiantes interpretarán los
valores de los mismos con el interés de asociarlos con las enfermedades que cursan con
alteración de dichos analitos, y que son contempladas en el programa de laboratorio de
Bioquímica II.
Cada práctica consta de un objetivo general y varios objetivos específicos y el
procedimiento para la elaboración de la misma, los materiales y equipos necesarios para
el procedimiento y una hoja de trabajo.
Como estrategia de retroalimentación, Cada práctica es precedida por un
cuestionario relacionado con el tema trabajado en la semana.

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OBJETIVO GENERAL.

 Identificar y cuantificar los diferentes analitos y las funciones que ejercen

durante su intervención en los procesos bioquímicos que ocurren en el
organismo y la relación de los valores con los trastornos metabólicos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Al término de esta asignatura el estudiante estará en capacidad de:

 Reconocer las diferentes metodologías utilizadas en las determinaciones

Bioquímicas.

 Identificar los componentes que intervienen en las reacciones bioquímicas

 Identificar las muestras utilizadas para la cuantificación de los analitos

 Identificar los elementos que componen las muestras

 Establecer la significación clínica de los resultados de las diferentes

determinaciones bioquímicas.

 Relacionar la historia clínica con los datos obtenidos en la cuantificación de

los analitos analizados.

 Analizar los resultados obtenidos en la práctica de laboratorio e integrarlos

con los conceptos adquiridos en la clase teórica.

 Realizar el informe de la práctica de acuerdo a los lineamientos trazados en

el laboratorio.
 UNIDAD I

PRACTICA NO. I. Inducción al Laboratorio.

1.0 Componentes que reportan datos en la evaluación de un paciente.

Objetivo General.
 Conocer los fundamentos teóricos de la evaluación clínica que tienen una
relación directa en los procesos prácticos.
Objetivos Específicos.
 Identificar los componentes relevantes y el porcentaje aportado en la
evaluación del paciente.
 Identificar los factores que influyen en los resultados.
 Reconocer los equipos e instrumentos utilizados para los procedimientos
 Asociar la relación entre los dos sistemas de medidas.

En el manejo de una enfermedad, sobre todo para su diagnóstico se deben de

unificar una serie de datos obtenidos por la clínica, por el laboratorio y/o por el estudio
de imágenes. Cada día se hace más evidente el papel preponderante de la bioquímica
clínica, quien reporta la presencia o cuantificación de analitos presentes en los fluidos
del paciente y que son producto de procesos que se dan en estados de salud o de
enfermedad, necesarios a la hora de realizar un diagnóstico. De hecho, hay
enfermedades que nunca se diagnosticarían sin la ayuda de la bioquímica clínica, donde
además la cuantificación de analitos es clave en un diagnóstico diferencial. .las
principales razones por las que se solicitan las determinaciones analíticas a los
pacientes son:

 Para exámenes de detección y prevención

 Para ayudar a diagnosticar patologías
 Obtener información sobre del estado del paciente
 Programar el tratamiento a seguir,
 Como vigilancia durante el tratamiento.
 Para detectar efectos secundarios.
 1.2 Factores que influyen en los resultados de Laboratorio

Los estudios de laboratorio se inician con la preparación del paciente, continúan

con la obtención de la muestra por estudiar, la práctica del análisis y el informe de los
resultados. Estos deben de ser evaluados antes de enviar al médico. En cada una de los
procesos hay situaciones a considerar como son: ayuno y las dietas previas a la
obtención de las muestras de sangre. Interfieren las siguientes situaciones conocidas
como variabilidad biológica:

La glucosa el triglicérido y el potasio se incrementan luego de ingerir alimentos

El fosforo es lo contrario disminuye luego de ingerir alimentos
Las dietas en base a grasas no saturadas incrementa el colesterol.
Los ayunos prolongados mayores de 48 horas, determinan un aumento de la
bilirrubina del suero al segundo día de iniciado el ayuno.
Las dietas extremadamente ricas en proteínas originan una elevación de la urea en
la sangre y en la orina, así como un aumento de ácido úrico y de amonio en el suero..
El ejercicio incrementa las enzimas de origen muscular.

Los cambios posturales ejercen un efecto apreciable en la concentración de

algunos componentes del plasma. Las proteínas, hormonas y enzimas del suero se
observan de 10 a 15 % más alta en las muestras de sangre obtenidas en bipedestación
(ortostatica, de pies) que en decúbito.

La edad el sexo y la altura sobre el nivel del mar tienen también influencia en los
resultados de algunas pruebas de laboratorio, Varios medicamentos influyen
aumentando o disminuyendo los valores de los resultados de muchas pruebas de
laboratorio por diversos mecanismos. Otros interfieren con el proceso analítico. Los
fármacos que afectan con mayor frecuencia los estudios de laboratorio son los
anticoagulantes, las drogas anticonvulsivas, los antihipertensivos, los antimicrobianos,
los hipoglucemiantes orales, las hormonas y las sustancias psicoactivadoras.
 Pruebas de laboratorio

Son una serie de procedimientos realizados en la sangre y cualquier fluido

biológico con el objetivo de obtener datos sobre el estado de salud del paciente. Estas
pruebas pueden ser relevantes en el diagnóstico, pronóstico o prevención de
enfermedades.

1.3 Identificación, función y manejo de instrumentos y reactivos.

Espectrofotómetro

Función

Equipo utilizado para las determinaciones bioquímicas cuantitativas, el método se

denomina espectrofotometría, que consiste en la medición de la intensidad de la luz de
un intervalo de longitudes de onda del espectro que atraviesa una solución coloreada. La
longitud de onda se define como la distancia entre dos picos adyacentes cuando la luz
recorre su camino de manera ondulatoria. Estas determinan el color de la luz, cada
longitud de onda es una banda en particular del espectro, que corresponde a un color
determinado.
La luz es una energía que se transmite en forma de onda. Los picos reciben el
nombre de máximas, y los valles el nombre de mínimas. La distancia entre dos
máximas o mínimas se llama longitud de onda. La longitud de onda se representa por el
símbolo griego Lambda (ul). La unidad de onda es el nanómetro, (nm).
El espectro luminoso puede ser dividido en tres zonas diferentes: ultravioleta, infrarroja y
visible.
 La zona ultravioleta está compuesta por longitudes de onda
menores de 400 nm y es invisible al ojo humano. La zona
infrarroja incluye longitudes de onda por encima de los 700
nm y es también invisible.
La zona visible por longitudes de onda entre los 400 y 700
nm y el ojo humano distingue sus diferentes colores como
indica la tabla.

Baño de María

Equipo utilizado para incubación de los procesos bioquímicos que requieren de una
temperatura específica para completar la reacción, debe agregársele agua destilada
antes de encenderlo. La temperatura del agua es monitoreada constantemente con un
termómetro.
|

Centrífuga

Equipo utilizado en el proceso de separación de las muestras en bioquímica, a una

velocidad de rotación de cuatro mil revoluciones /min.o mas
Tubo tapa roja sin anticoagulante

Se utiliza en bioquímica II, para depositar la muestra de sangre extraída al paciente, se

lleva a la centrifuga para separar el suero de los hematíes. Algunos vienen con gel
separador.

Tubos de Ensayo

Utensilios donde se desarrollan las reacciones bioquímicas, pueden ser de cristal o de

polipropileno.

Pipetas Automáticas

Se utiliza para medir la cantidad de muestra, que requiere cada técnica en específico, se
miden micro litros o lambdas. Son de diferente capacidad. dependiendo de la necesidad.
Tips o puntas

Utensilios que se colocan en las puntas de las pipetas automáticas para medir los
micros litros o landas requeridos para cada determinación.

Pipetas Serológicas de Cristal

Se utilizan para medir el volumen de reactivo que requiere cada determinación en

específico, son de diferentes volúmenes.

Pipeteador

Instrumento utilizado para la aspiración y posterior medición de los reactivoscon las

pipetas serológica, se coloca en la parte superior de las mismas.

.
 1.4 Fundamentos Teóricos

Fluidos Biológicos utilizados en laboratorio de bioquímica II.

Fluidos biológicos: Son secreciones y líquidos producto de las células de los diferentes
órganos y tejidos depositadas en las cavidades y espacios del organismo. Los fluidos
biológicos de uso más frecuente en el laboratorio de bioquímica son: la sangre, liquido
céfalo raquídeo (LCR), duodenal, amniótico, sinovial, pleural y abdominal; así mismo
jugo gástrico, orina, sudor, entre otros.

Reactivos
Sustancias químicamente puras, con una mezcla de enzimas, antígenos, anticuerpos
que añadidos a la muestra producen una reacción capaz de generar una señal
espectrofotométricamente medible que permite identificar los diferentes analitos presentes
en la muestra.se pueden preparar en el laboratorio o comprar a los suplidores.

 Los análisis cualitativos: Identifican por medios químicos los constituyentes

que se encuentran en una muestra. Solo indican que el elemento está
presente.
 Los análisis cuantitativos: miden la cantidad de un constituyente específico
que se encuentra en una muestra. Estos además de indicar que está
presente indica que cantidad del mismo hay.

1.5 Etapas de los Métodos Analíticos

 Obtención de la muestra
 Separación de la muestra
 Reacción química específica
 Medición del producto de la reacción
 Determinación de los resultados.

Las determinaciones bioquímicas cuantitativas de los componentes de los fluidos

biológicos se fundamentan en: agregar una solución desconocida (muestra) a un
reactivo de composición conocida, lo que dará como resultado una molécula coloreada
por la presencia del elemento específico analizado.

Cumpliéndose así, el principio de la ley de Beer y Lambert. Que establece que la

concentración de la reacción es directamente proporcional al color de la misma.
El color originado en la reacción estará en relación directa con la concentración y el valor
numérico de esta concentración resulta de las lecturas realizadas en el
espectrofotómetro en base a la luz transmitida o Absorbida de la solución coloreada. Esa
luz que incide en esta coloración se propaga en longitud de ondas.

Valores de Referencia

Son los límites de una serie de valores obtenidos en un grupo de individuos en un

estado de salud determinado. También es el valor obtenido por una observación o
medición de un tipo particular de magnitud o de un individuo perteneciente a un grupo de
muestra de referencia, y deben ser calculados para cada población en particular usuaria
de un laboratorio clínico, ya que son dependientes de la genética, la raza, los estilos de
vida y ambientales y en ocasiones, hasta de la edad; además del método analítico con
que son evaluados, y el equipo utilizado.

1.6 Sistema Internacional de Unidades (SI)

El Sistema Internacional de Unidades (SI), también denominado Sistema internacional

de medidas, es el sistema de unidades más extensamente usado. Junto con el antiguo
sistema métrico decimal, que es su antecesor y que se ha mejorado, El SI también es
conocido como sistema métrico especialmente en las naciones en las que aún no se ha
implantado para su uso cotidiano. Fue creado en 1960 por la Conferencia General de
Pesas y Medidas.

Unidades de medidas.

NOMBRE METABOLITO UNIDADES UNIDADES

TRACIONAL INTERNACIONALES (SI)
Glucosa, Fosfato, mmol/L
Colesterol, Urea, mg/dl
Triglicéridos, Ácido Úrico
Creatinina, bilirrubina mg/dl mmol/L
Proteínas g/dl g/l
Calcio mg/dl Moles/L
Aminotransferasa mg/dl U/L
Tabla de conversión

NOMBRE UNIDADES TRACIONAL UNIDADES

METABOLITO INTERNACIONALES
(SI)
Proteínas g/dl g/dl x 10 = g/L
Calcio mg/dl mg/dl = moles / L
4
Cloruros mg/dl mEq/L x1 = miliosmoles /L
o mmol/L
Colesterol mg/dl mg/dl = mmol / L
38.7
Glucosa mg/dl mg/dl = mmol / L
18
Urea mg/dl mg/dl = mmol / L
6
Triglicéridos mg/dl mg/dl x 0.011 = mmol/L
Bilirrubina mg/100ml o mg/dl mg/dl x 17.1 = micromoles/L
umol/L
Creatinina mg/dl mg/dl x 88.4 = umol/L
 PRACTICA NO. II

2.1 CUANTIFICACION DE LA GLUCOSA

Objetivo General.

 Conocer las características generales de los hidratos de carbono y su

metabolismo

Objetivos Específicos.

 Identificar las funciones y enzimas reguladoras de los carbohidratos

 Conocer la fisiopatología del metabolismo de la glucosa.
 La glucosa en el hígado.
 Determinar los niveles de glucosa en una muestra sanguínea
 Identificar las hormonas reguladoras de la glucosa sanguínea.
 Conocer la clasificación de la diabetes.
 Comparar los valores obtenidos con los rangos establecidos.
 Reconocer las pruebas importantes en el control y seguimiento de la
diabetes.
 Relacionar los resultados con las patologías asociadas.

2.2 Fundamentos Teóricos Los Carbohidratos

Son moléculas orgánicas que tiene estructuras de polialcoholes con un grupo

funcional carbonilo, que puede ser un grupo aldehído,(H-C=O) o bien
cetona(=C=O),también conocido como hidratos de carbonos o glúcidos.

Se le atribuyen dos funciones importantes.

1. Función energética, ya que contiene enlaces covalentes de alta energía y función.

La energía se genera cuando son metabolizados por oxidación.
2. Función Estructural: en esta estos forman parte de la pared de las células
vegetales (celulosa) o la cutícula en los artrópodos. Los hidratos de carbono se
clasifican según su complejidad, según las moléculas que lo forman:
 Monosacáridos: Glucosa, fructosa, lactosa.
 Disacáridos: Sacarosa.
 Oligosacáridos o polisacáridos: Glucógeno y celulosa.
 2.3 Enzimas reguladoras de los carbohidratos

El metabolismo de los carbohidratos, especialmente el de la glucosa, comprende

un número de procesos bien articulados entre sí, como la glucólisis (degradación),
glucogénesis, glucogenólisis y gluconeogénesis (Síntesis de glucosa hepática).

Procesos Enzimas actuantes

Glucolisis (degradación) Glucoquinasa, fosfofructoquinasa,piruvato quinasa.
Gluconeogenesis Glucosa -6-fosfato, Fructosa 1,6 bifosfatasa,
fosfoenolpiruvato o carboxiquinasa.

Las enzimas principales que actúan en este proceso son:

 La Amilasa: que descompone el almidón, glucógeno, la dextrina en maltosa.
 La Maltasa: convierte la azúcar de malta o maltosa en glucosa.
 La sacarosa: Rompe la azúcar de caña o sacarosa en glucosa y fructosa
 La Lactosa: descompone la azúcar de la leche o lactosa en glucosa y galactosa.
 La fructosa y la glucosa no son transformadas por las enzimas por lo que son
absorbidas junto a la galactosa a través de los capilares del intestino, las que
luego son conducidas al hígado y se transforman en glucosa.

2.4 Fisiopatología del metabolismo de la glucosa.

La acción de las hormonas Insulina, y el glucagón son las responsables de mantener el

equilibrio de la glucosa sanguínea
La insulina disminuye los niveles de glucosa y el glucagón eleva los niveles de glucosa.
La glucosa es metabolizada por las células convirtiéndola en energía útil.
La insulina es la responsable de transportar la glucosa al organismo, para que sea
absorbida y pase a la sangre, y se distribuya por todo el cuerpo y que esta penetre
finalmente al interior de la célula. El aumento de la glucosa en la sangre produce la
secreción de la insulina por las células β del páncreas. La insulina facilita la expresión de
receptores glucose transporter type 4 (GLUT-4) en los tejidos, la GLUT-4 es una
proteína transportadora de glucosa, que está regulada por la insulina, localizada en los
adipocitos, el musculo esquelético y en el miocardio, que son los responsables de captar
e incorporar la glucosa, para que cuando esta esté dentro de la célula de este modo
ingresar a la ruta metabólica oportunamente.
El glucagón es la hormona secretada por las células α(alfa) del páncreas respondiendo a
la hipoglucemia, elevando la glicemia mediante la estimulación de la gluconeogenolisis
hepática y la gluconeogenesis a partir de sustrato no glúcidico (aminoácido).la
hipoglucemia y la hiperglucemia se presenta cuando se pierde la homeostasis de la
glucosa

La glucosa en el hígado.

Mantener el equilibrio en la concentración sérica de la glucosa, es la principal función del

hígado. Este proceso mediado por la propia concentración de glucosa y por las
hormonas glucagón, epinefrina e insulina, consiste en almacenar o liberar la glucosa que
excede, la interconversión al metabolito de los carbohidratos Estos dos procesos
(almacenar o liberar) se llevan a cabo mediante la glucosa-6-fosfato (G6P). El hígado
incorpora y transforma el G6P cuando se elevan los niveles de glucosa en sangre, para
almacenarla posteriormente en forma de glucógeno (que es una de las reservas
energéticas de los animales). El glucógeno almacenado, solo puede mantener las
necesidades de glucosa aproximadamente por 6 horas. Este proceso es catalizado por
la glucocinasa, que a diferencia de la hexocinasa, no es inhibida por G6P. Los
hepatocitos, a diferencia de las células musculares y adipocitos, son permeables a la
glucosa, lo cual facilita sus tareas y por tanto la insulina no tiene efecto en la
incorporación de glucosa en este órgano. Cuando la concentración de glucosa en sangre
es normal, la velocidad de fosforilación de la glucosa en hígado es más o menos
proporcional a la concentración de glucosa en sangre. Además de la glucosa, la dieta
contiene otros azúcares como son: fructosa, galactosa y manosa, las cuales son también
convertidas a G6P en este órgano.

En el hígado, el destino de la G6P puede ser diferente, según los requerimientos

del cuerpo, en general, la G6P puede:
 Transformarse en glucosa
 Almacenarse en forma de glucógeno.
 Transformarse en Ac-CoA.
 Degradarse por la vía de las pentosas.

2.5 La Diabetes Mellitus.

Es una metabolopatía crónica consecuente de la deficiencia absoluta o relativa de

la insulina. Las causas pueden ser que el páncreas no produce insulina o que las células
del organismo no responden normalmente a la insulina circulante lo que dificulta la
entrada de glucosa a la célula, lo que provoca un aumento de su concentración en
sangre y una depleción intracelular, situación está que obliga a que la célula active rutas
alternativas de obtención de energía como son: la lipolisis, cuerpos cetónicos, ect. La
hiperglucemia crónica que se produce en la DM. Tiene un efecto toxico que deteriora los
diferentes órganos y sistemas y ocasiona complicaciones macro vasculares y micro
vasculares que incrementan los daños en varios órganos como son: riñones, ojos,
corazón, nervios periféricos etc.

En la actualidad la DM se clasifica en diabetes tipo 1.que se manifiesta con un

déficit total de insulina puede ser autoinmune IA (anticuerpos antiinsulinico) o idiopática
IB, Diabetes tipo II: esta presenta resistencia a la insulina o defecto en la secreción

Otros tipos de Diabetes

La diabetes autoinmune latente del adulto (LADA) es una forma lenta y progresiva,
caracterizada por la positividad de auto anticuerpos asociados con la diabetes y la
necesidad de requerimientos de insulina.
Diabetes tipo MODY (La diabetes tipo MODY recibe su nombre por la abreviatura
de la frase, en inglés, Maturity Onset Diabetes of the Young (diabetes de la edad madura
que se presenta en el joven). Como su nombre indica, se trata de un tipo de diabetes
que en principio se parecería más a la tipo 2, cuyo inicio típico es en la madurez, en que
puede controlarse sin necesidad de insulina, pero con una edad precoz de presentación,
por debajo de los 25 años. Conviene destacar que no es la misma situación que se ha
observado en los últimos años de aparición de diabetes tipo 2 en población infantil
debido a la obesidad, que se está viendo recientemente en relación a la dieta
inadecuada y la falta de ejercicio físico de los niños con un estilo de vida “occidental”.
Los pacientes con diabetes tipo MODY, por el contrario, no tienen por qué ser obesos).

La diabetes mellitus podría presentarse los síntomas y signos siguientes:

 Polidipsia
 Poliuria
 Polifagia
 Pérdida de peso repentina
 Lentitud en la curación de heridas
 Infecciones recurrentes
 Visión borrosa
 Cansancio extremo/falta de energía

Según la Asociación Americana de Diabetes,(ADA), con la que coinciden las

respectivas asociaciones de los países de Europa y Asia, los niveles de referencia de la
glucosa, son los siguientes:
 2.6 Valores de Referencia de Glicemia según ADA

Glicemia en ayunas Glicemia Diagnostico

(Basal) Postprandial
≤99 ‘o ‹100 mg/dl ≤99 ‘o ‹100 mg/dl Tolerancia normal a la
glucosa
100 a 125mg/dl 100-199 mg/dl Alteración de la glucosa (Pre
diabetes)
≥126mg/dl ≥200 mg/dl Diabetes Mellitus
≤45 mg/dl en hombres Hipoglucemia
≤40 mg/dl en mujeres
≤35 mg/dl en niños
O disminución drástica
de la mitad de los niveles
de glicemia

2.7 Curva de tolerancia oral de la glucosa

 La prueba de Curva de tolerancia oral a la glucosa, se le hace a los pacientes con

diagnóstico de pre diabetes. Son utilizadas para investigar los trastornos
metabólicos de los Carbohidratos, es decir, para evaluar la capacidad metabólica
del organismo frente a un estímulo de carbohidratos.

 Se les toma una muestra de sangre en ayunas, luego se les suministra vía
oral 50 a 75 gr de glucosa. Luego de la carga se le toma una muestra de sangre
a los 30, 60, 120 y algunos hasta 180m minutos. al mismo tiempo se le mide los
niveles de glucosa en la orina (glucosuria)
.
 CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
PACIENTE NORMOGLICEMICO PACIENTE DIABÉTICO
140 350

120 300

100 250

80 200

60 150

40 100

20 50

0 0
basal 60 minutos 120 minutos 180 minutos basal 60 minutos 120 minutos 180 minutos

CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

PACIENTE DIABÉTICO
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
basal 60 minutos 120 minutos 180 minutos
9
 2.8 Pruebas analíticas importantes en el control y seguimiento de la diabetes.

Diabetes Gestacional:

La diabetes mellitus gestacional (DMG) es una forma de diabetes mellitus inducida

por el embarazo. No se conoce una causa específica de este tipo de enfermedad pero
se cree que las hormonas del embarazo reducen la capacidad que tiene el cuerpo de
utilizar y responder a la acción de la insulina, y tiene como resultado un alto nivel de
glucosa en la sangre (hiperglucemia).

El Test de Sullivan o Test de tolerancia a la glucosa en Diabetes Gestacional:

Es una prueba destinada a valorar los niveles de glucosa en sangre, para

diagnosticar los casos de diabetes gestacional en la semana 24 y 28 de gestación. La
glucosa en sangre debe ser menor a 140mg/dl. Si los resultados ofrecieran unas cifras
iguales o mayores a 140 mg/dl se puede sospechar una intolerancia a los hidratos de
carbono o una diabetes gestacional.

Niveles de glucosa en sangre Diagnostico

Menos de 140mg/dl Tolerancia normal
Mayor de 140mg/dl Diabetes gestacional

Umbral renal de la glucosa en sangre

Cuando la glicemia sobrepasa el umbral renal, de 160 a 180mg/dl, esta aparece en

orina, aunque algunos pacientes con niveles menores a estos en sangre pueden tener
presencia de glucosa en orina, glucosuria, cuerpos cetónicos en orina (aumentan debido
al catabolismo de ácidos grasos por la ausencia de glucosa en los tejidos)

Complicaciones

Dentro de las complicaciones que desarrollan los que padecen esta enfermedad,
están: Retinopatía, Neuropatía, Angiopatía y Nefropatía diabética. Demás está decir, que
estas complicaciones no se dan de manera aguda sino que se dan producto de estados
de hiperglucemia durante un tiempo largo.

9
Hemoglobina Glicosilada

La hemoglobina glicosilada mide el porcentaje de hemoglobina A que está unido a

azucares. Se expresa como HbA1C, Los resultados representan un índice muy objetivo
de los niveles medios de la glicemia en los últimos tres meses (ciclo vital de la
hemoglobina) lo que la convierte en la prueba ideal para seguir la evolución a largo plazo
en los pacientes diabéticos tipo 1 y 2. Los resultados se expresan como un porcentaje
de la hemoglobina total. Los valores de referencia son de 4-6 %.Los métodos de
laboratorio más empleados para su determinación son la cromatografía, la turbidimetría
y los inmunoensayos

Valores de referencia

Glucosa post Pandríal.

Es la glucosa medida en la sangre dos horas después de ingerir alimentos

Insulinemia

Estudios han demostrado que antes que se dé la hiperglucemia en el diabético, se

da la hiperinsulinemia esta ocurre como un intento de compensar la resistencia a la
insulina. De ahí, un aumento de insulina en sangre habla ya de una alteración en el
metabolismo de la glucosa que llevara como consecuencia a diabetes mellitus.
 La hipoglucemia

Se presenta cuando los valores están por debajo de 45 mg/dl en ayunas.se

manifiesta con síntomas como: letárgicas, confusión perdida del conocimiento, si ese
descenso se produce brusco, provoca la estimulación de la secreción de adrenalina, lo
que origina otros síntomas como son: Sudoración y taquicardia, que puede llevar al
coma o la muerte, las causas pueden ser diversas al igual que las edades. Como:
 Niños bajo peso y prematuros, muchas casos son transitorios y
multifactorial.
 Hiper insulinismo

Hipopituitarismo, o error innato del metabolismo.

En niños mayores y adultos jóvenes: administración de insulina sintética
 Tumores secretores de insulina
 Hipoglucemia reactiva idiopática
 El síndrome post pandrial
 La enfermedad de Addison
 La septicemia

En adultos mayores:
 Acciones farmacológicas (hipoglucemiante e insulina)
 Incidencia de tumores que producen insulina
 Fármacosβ-bloqueadores, como el etanol, cirugía intestinal, insuficiencia
suprarrenal, hipopituitarismo, trastornos inmunológicos.
 2.9 Proceso para la Determinación de La Glucosa Sérica

Principio

La glucosa oxidasa convierte la glucosa en peróxido de hidrógeno y ácido D-

glucónico. La peroxidasa cataliza la oxidación del peróxido de hidrógeno a 4-
amenofenazona con la subsecuente unión con el p hidroxibencensulfonato. El producto
final es un colorante hidroquinoleína el cuál absorbe a 500 nm. La intensidad del color es
directamente proporcional a la concentración de la glucosa.

Fundamento del Método La glucosa presente en la muestra origina, según las

reacciones acopladas descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica
por espectrofotometría
1. Glucosa + ½ O2 + H2O Glucónico + H2O2 2 H2O2 + 4 – Aminoantipirina + Fenol
Quinonaimina + 4 H2O

Composición.
Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, fenol 5 mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL,
peroxidasa> 1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L, pH 7,5 S.

Patrón de Glucosa/Urea/Creatinina.
Glucosa 100 mg/dL (5,55 mmol/L), urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL.

Conservación: Conservar a 2-8ºC.

El Reactivo y el Patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la

etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su
uso.
Indicaciones de deterioro:

Reactivo: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior a

0,150 a 500 nm (cubeta de 1 cm).

− Patrón: Presencia de partículas o turbidez.

Preparación de los reactivos: Tanto el Reactivo como el Patrón están listos para su
uso.
Métodos para la determinación de la glucosa en sangre.

Los métodos modernos son enzimáticos y varían en cuanto a las enzimas

utilizadas. Estos pueden ser automáticos o manuales. Las enzimas utilizadas pueden
ser: hexoquinasa, glucosa-oxidasa, glucosa-deshidrogenasa.

Recolección de la muestra
Se recomienda el suero libre de hemólisis. Se puede usar plasma heparinizado,
con EDTA, citrato u oxalato. (Anticoagulantes)
Los niveles de glucosa disminuyen en sangre completa a un promedio de 7% por
hora.
Materiales a utilizar en esta práctica
 Pipeteador
 Pipeta automática para la muestra
 Pipeta serológica de cristal 5ml para el reactivo
 Gradillas
 Espectrofotómetro
 Baño de maría a 37ºC.

Condiciones de reacción

Longitud de onda 500 nm

Selección de filtros 480-500 nm
Tipo de reacción punto final
Tiempo y temperatura de reacción 5 min. A 37º c
Normal bajo 70mg/dl
Normal alto 110 mg /dl
Valor de calibrador o estándar 100 mg/dl

Procedimiento manual

Obtención de la muestra.
Extraer 5ml de sangre, depositarla en un tubo de tapa roja sin anticoagulante,
mezclar suavemente 3 a 5 veces, dejar en reposo 10 minutos, luego centrifugar por 5
minutos a 4000 rpm. Hasta que libere el suero. Separe el suero de las células rojas en
un tubo de ensayo de cristal o polipropileno 12x75.
Procedimiento analítico

Pipetear en los respectivos tubos de ensayos de cristal o polipropileno. Sueros y

reactivos según el orden establecido
Blanco Patrón o Muestra
estándar
H2O 10 ul -
Muestra(suero) -- - 10 ul
Solución patrón 10 ul
Reactivo de 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml
glucosa
Homogenizar y llevar a baño de maría a 37 gra dos de temperatura por 5
minutos. Luego de retirar del baño de maría, programar el
espectrofotómetro y leer a longitud de onda de 525 nm
 Informe de la Practica de la Glucosa
Determinación Fecha

Método

Enzimas que intervienen en la reacción

Tipo de Muestra Concentración del estándar

Fundamento del
método

Reporte de Lecturas en Absorbancia

Blanco Estándar o Patrón Muestra

Cálculos de la concentración de la Muestra.

Concentración de la Muestra
Diagnostico

Patologías relacionadas :

La concentración del estándar = 100mg/dl

Valores de Referencia
Suero y plasma
 Neonato, prematuro 25-80 mg/dL = 1,39-4,44 mmol/L
 Neonato, a término 30-90 mg/dL = 1,67-5,00 mmol/L
 Niños, adultos 70-105 mg/dL = 3,89-5,83 mmol/L

Firma del Docente.-------------------------------------

Fecha.-----------------------------------------
 PRACTICA NO.3 DETERMINACIÓN DE LOS LÍPIDOS.

Objetivo General.
Conocer las características generales la composición y el metabolismo de
los Lípidos.

Objetivos específicos.
Identificar Tipos de ácidos grasos según la saturación de los átomos de
carbono.
Identificar las enzimas reguladoras
Conocer la función de los lípidos en el organismo
Cuantificar los niveles de colesterol en sangre
Cuantificar los niveles de triglicéridos en sangre.
identificar las funciones y tipos de lipoproteínas
Relacionar los resultados con las patologías asociadas.
Conocer las pruebas de laboratorio útiles en el monitoreo de los lípidos.

3.1 Fundamentos Teóricos de los lípidos

Bajo este término se agrupan un conjunto de compuestos constituidos por carbono,

hidrogeno y oxígeno, en forma de cadenas hidrocarbonadas alifáticas o aromáticas
insolubles en agua. Hidrocarburos alifáticos, formados por cadenas de átomos de
carbono en las que no hay estructuras. En general son Hidrocarburos de cadena abierta
o cíclica. Hidrocarburos aromáticos, constituyen un grupo especial de compuestos
cíclicos que contienen en general anillos de seis eslabones en los cuales alternan
enlaces sencillos y dobles. Solo están constituidos por carbono e hidrógenos.

Es en forma de triglicéridos que están la gran mayoría de los lípidos de la dieta,

que son esteres del glicerol con tres ácidos grasos de cuya naturaleza (Saturados, mono
insaturados, o poliinsaturados) depende que los lípidos que los contiene sean más o
menos cardio saludables. El colesterol es de origen graso animal, lo recomendable es
que las grasas de la dieta aporten diarias 25 al 30 % de las necesidades energéticas, de
estos el 10 % debe ser saturadas, de 5 a 10 % mono insaturadas y un 5 a 10 % poli
insaturadas. Existen dos ácidos grasos esenciales que son: linoleico y el linolenico, se
denominan así porque no pueden ser sintetizados en el organismo aun que son
necesarios para su correcto funcionamiento, la ausencia de estos produce el síndrome
de Burr.

3.2 Clasificación de ácidos grasos según la saturación de los átomos de

carbono.

Descripción y efecto sobre los Lípidos.

Ácidos grasos

Los enlaces de átomos de carbono libres saturados

completamente de hidrógenos.
Saturados.
En lácteos, carnes, aceite de coco, palma
Producen incremento de colesterol total y LDL
Presencia de un doble enlace entre dos carbono
Mono insaturados Su representante es el ácido oleico( presente en el
oliva)
Efecto hipocolesterolemico (reduce LDL e incrementan
HDL)
Existen dos dobles enlaces o mas
Son los ácidos grasos esenciales linoleico (omega 3 y
linolenico omega 6 (aceite de girasol, maíz, frutos
Poli insaturados secos, pescado azul)
Reducen la concentración de colesterol y triglicéridos

3.3 Funciones Principales de los lípidos

Los lípidos tienen función estructurar: en las membranas celulares o el tejido

nervioso función metabólica: formando parte de las hormonas, vitaminas y cofactores,
pero su principal función de los lípidos es energética
Son moléculas hidrófobas y no pueden circular libremente en el plasma ,por lo que
han de hacerlo unidas a una serie de proteínas llamadas apoproteinas, que forman
macro complejos de naturaleza lipoproteica o lipoproteínas que suelen clasificarse en
función de su densidad, además de las lipoproteínas clásicas, los niveles de
lipoproteínas se han relacionado con problemas cardiovasculares .esta lipoproteína está
formada por una partícula de baja densidad o LDL, rica en colesterol,unida por un
puente disulfuro a una glucoproteína similar al plasminógeno. Su gran contenido de
colesterol y su depósito en las placas de ateroma promueven la inflamación la oxidación
y además interfiere con el sistema de la coagulación porque inhibe la fibrinólisis. Por lo
tanto, constituye un factor de riego independiente de los niveles de LDL, para el
desarrollo de enfermedad cardiovascular, así como de trombosis o enfermedad vascular
periférica

Lípidos Funciones

En la dieta
Transporte y absorción de las vitaminas liposolubles
A,D,E,Y K
Proporcionan propiedades organolépticas
En el organismo.
Triglicéridos Proporciona una gran cantidad de energía
Aportan los ácidos -
linolenico
Condicionan la estructura de las membranas
celulares.
Formación de las membranas celulares
Emulsión de lípidos para favorecer su absorción
Fosfolípidos Las vainas de mielina de los axones neuronales
contiene lípidos complejos.(esfingomilelinas,
cerebrosidos y sulfatidos)

Formación de membranas celulares

Formación de ácidos biliares, hormonas esteroideas
Colesterol (adrenales, sexuales y algunas placentarias y
vitamina D
 3.4 Clasificación de Lipoproteínas
Lipoproteínas Funciones
Partículas muy grandes, producidas por el intestino con un
Quilomicrones componente de triglicéridos muy alto de origen exógeno, con
un componente proteico muy bajo, por lo que tiene muy baja
densidad.
Transportan principalmente triglicérido y colesterol y vitaminas
liposolubles desde el intestino delgado a otros tejidos.
Lipoproteínas de muy baja densidad. Son ricas en triglicéridos,
de origen endógeno en menor grado.
VLDL Compuestas de triglicéridos y colesterol. Trasporta triglicéridos
sintetizados en el hígado a otros tejidos. Al depositar los
triglicéridos, queda una lipoproteína pobre en triglicéridos
enriquecida en colesterol LDL.
Lipoproteínas de baja densidad, representa el 50% de la masa
LDL. total de lipoproteínas y son mucho más pequeñas.
Su principal componente es el colesterol representa el 50% de
la masa del LDL. Aproximadamente el 25% son proteínas.. Son
las principales lipoproteínas aterogenas del plasma.
Transportan exceso de colesterol desde las células de todo el
HDL. organismo al hígado para ser eliminado con la bilis en heces.

3.5 Síntesis de lípidos

El colesterol es un lípido que tiene como fuente exógena la ingesta de alimentos de

origen animal, mientras que la fuente endógena es el Acetil CoA que se origina de los
carbohidratos principalmente, y en menor grado de algunos aminoácidos. El principal
órgano productor de colesterol es el hígado quien produce el 80% de todo el colesterol.
La enzima hidroxi-3-metil-glutaril coenzima A reductasa (HMG-CoAreductasa) es la
principal enzima regulador de la vía de síntesis del colesterol. Al igual que otras muchos
enzimas, ésta intercambia sus estados inactivo o activo por fosforilación /
desfosforilación reversible, dependiendo su nivel de actividad del grado de fosforilación.
La HMG-CoAReductasa, es la que se inhibe por los fármacos hipolipemiantes como las
estatinas.
 3.6 Perfil Lipídico

Se utiliza este término para agrupar una serie de pruebas utilizadas para evaluar el
metabolismo de los lípidos, éstas son las siguientes:

1. Lípidos Totales
2. Colesterol Total
3. Triglicéridos;'
4. LipoproteínasHDL, LDL,VLDL

3.7 Valores de Referencia, según la Asociación Americana de Diabetes, ADA

Lipoproteínas o Lípidos Transporte Valores de Referencia

VLDL Triglicéridos
Triglicéridos* <150 mg/dl
LDL * Colesterol del hígado a los <100 mg/dl
tejidos
HDL Colesterol de los tejidos al >40 mg/dl en hombres y
hígado >50 mg/dl en mujeres
Colesterol Total <200 mg/dl

* Si hay enfermedades cardiacas y vasculares, el nivel deseado es menor de 70 mg/dl.

Como las LDL están asociadas con la aterosclerosis, estas deben de tomarse en
cuenta a la hora de calcular el riesgo aterosclerótico del paciente.

Cálculos para el factor de riesgos

1.
2. Colesterol total/ HDL. Su valor de referencia debe ser menor a 5.
3. Colesterol total/ triglicéridos. Su valor de referencia debe ser entre 0.95 y 1.30.

Los aumentos de lípidos en sangre se denominan Dislipidemias, muchas de ellas de

origen hereditario, que según Fredrickson, se clasifican de la siguiente manera:
 3.8 Clasificación de las Dislipidemias, según Fredrickson

Hiperlipo- Defecto Lipoproteína elevada Tratamiento

Proteinemia
Deficiencia
Tipo I delipoproteinlipasa (LP Quilomicrones La dieta
L) oApoC2 alterado

Deficiencia LDL Resina de intercambio,

Tipo IIa de LDL receptor estatina, vitamina B3
Deficiencia de LDL Estatina, vitamina B3,
Tipo IIb receptor e incremento LDL y VLDL fibratos
de Apo B
Defecto en la síntesis Fibratos, estatinas
Tipo III de Apo E2 IDL
Producción Fibratos, vitamina B3,
Tipo IV incrementada de VLDL estatinas
VLDL y deficiencia de
eliminación
Producción vitamina B3, Fibratos
Tipo V incrementada de VLDL y Quilomicrones
VLDL y deficiencia
de LDL
 3.9 Los Triglicéridos.

Proceso para la determinación de triglicéridos

Los triglicéridos son esteres de glicerol y ácidos grasos que provienen de la dieta o son
sintetizados principalmente en el hígado. Los triglicéridos se transportan en el plasma en
las lipoproteínas y son utilizados por el tejido adiposo, músculo y otros. Su principal
función es suministrar energía a la célula. Las concentraciones elevadas de triglicéridos
en suero pueden ser debidas a alteraciones hepatobiliares, diabetes mellitus, nefrosis,
hipotiroidismo, alcoholismo, hiperlipoproteinemia familiar IV y V y otras

Principio de la reacción

Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan glicerol y ácidos grasos
libres. El glicerol es fosforilado por glicerol fosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP en
presencia de glicerol quinasa (GK) para producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adenosina-5-
difosfato (ADP). El G3Pes entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP) y
peróxido deshidrogeno (H2O2) por GPO.Al final, el peróxido de hidrogeno (H2O2)
reacciona con 4-aminofenazona(4-AF) y p-clorofenol, reacción catalizada por la
peroxidasa (POD) dando una coloración rosado.

Los triglicéridos presentes en la muestra originan un complejo coloreado que se

cuantifica por espectrofotometría. La intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de Triglicéridos presentes en la muestra ensayada.

COMPOSICIÓN del. Reactivo: Pipes 45 mmol/L, 4 - clorofenol 6 mmol/L, cloruro

magnésico 5 mmol/L, lipasa > 100 U/mL, glicerol quinasa > 1,5 U/mL, glicerol-3-fosfato
oxidasa > 4 U/mL, peroxidasa> 0,8 U/mL, 4-aminoantipirina 0,75 mmol/L, ATP 0,9
mmol/L, pH 7,0.

S. Patrón de Triglicéridos: Glicerol equivalente a trioleina 200 mg/dL (2,26 mmol/L).

Patrón primario acuoso.

Muestras

Suero o plasma. Estable 5 días a 2-8°C.

Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro, no interfieren.
Dejar atemperar el reactivo durante unos minutos a temperatura ambiente.
Procedimiento de la práctica.

Extraer 5ml de sangre, depositarla en un tubo de tapa roja sin anticoagulante

mezclar de tres a cuatro veces, dejar en reposo 10 minutos, luego centrifugar por 5
minutos a 4000 rpm. Hasta que libere el suero. Separe el suero de las células.
Pipetear en los respectivos tubos de ensayos de cristal o polipropileno. Sueros y
reactivos según el orden establecido

Pipetear en Tubos de Ensayo

Blanco Estándar Muestra

H2O 10 ul - -
Solución Estándar - 10 ul -
Suero Muestra 10 ul

Reactivo de triglicéridos 1.0 ml 1.0 ml 1.0ml

Agitar bien e incubar los tubos durante 15 minutos a temperatura ambiente
ó durante 5 minutos a 37°C.

Llevar al Espectro Fotómetro y leer en Longitud de onda 500 nm.

 Informe de la Practica
Determinación Fecha

Método
Enzimas que intervienen en la reacción

Tipo de Muestra Concentración del estándar

Fundamento del
método

Reporte de Lecturas en Absorbancia

Blanco Estándar o Patrón Muestra

Cálculos

Concentración de la Muestra
Diagnostico

Patologías relacionadas
 Valores de Referencia Triglicéridos
Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos
por el US National Institutes of Health
. Hasta 150 mg/dL Bajo
150-199 mg/dL Dudoso
200-499 mg/dL Alto
> 500 mg/dL Muy alto

Firma del Docente.-------------------------------------

Fecha.-----------------------------------------
 3.10 Proceso para la determinación de Colesterol

Determinación Cuantitativa del Colesterol.

Fundamento del método. Principio de la Reacción.

Características Diagnósticas
El colesterol es un esteroide de alto peso molecular que contiene una estructura
ciclo pentano fenantreno. El colesterol de la dieta se absorbe parcialmente y también se
sintetiza en el hígado y otros tejidos. El colesterol se transporta en el plasma en las
lipoproteínas. Se excreta a la bilis como tal o tras su transformación en ácidos biliares.
Las concentraciones elevadas de colesterol se asocian con un riesgo progresivamente
creciente de ateroesclerosis y enfermedad de las arterias coronarias

Significado Clínico
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo.
El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las
membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del colesterol es
una de las herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de las
lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo
cardiovascular.

Composición A.

Reactivo.
Pipes 35 mmol/L, colato sódico 0,5 mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterasa>
0,2 U/mL, colesterol oxidasa > 0,1 U/mL, peroxidasa> 0,8 U/mL, 4-aminoantipirina 0,5
mmol/L, pH 7,0.
S. Patrón de Colesterol. Colesterol 200 mg/dL (5,18 mmol/L). Patrón primario
acuoso.
Conservación
Conservar a 2-8ºC. El Reactivo y el Patrón son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la
contaminación durante su uso.
Procedimiento de Colesterol

MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar.

El colesterol en suero o plasma es estable 7 días a 2-8ºC. Pueden utilizarse como
anticoagulantes la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro.
Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente

Extracción de la muestra.

Extraer 5ml de sangre venosa, depositar en un tubo de toma de muestra tapa roja sin
anticoagulante, mezclar de tres a cinco veces, dejar en reposo por 15 minutos hasta
que retraiga el coagulo y libere suero, luego llevar a la centrifuga a 4000 mil revoluciones
por 5 minutos, luego separe el suero en un tubo de ensayo.

Pipetear en los respectivos tubos de ensayos de cristal o polipropileno. Sueros y

reactivos según el orden establecido

. Blanco reactivo Patrón o Muestra

Estándar

H2O destilada 20 ul
Solución Estándar -- 20 ul --
Suero Muestra -- -- 20 ul
Reactivo colesterol 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar: Incubar en baño de maría a 37 o C por 5 minutos, luego leer en

espectrofotómetro a 520 nm.

Color es estable como mínimo 60 minutos.

 Informe de la Practica
Determinación Fecha
Método
Enzimas que intervienen en la reacción

Tipo de Muestra Concentración del estándar

Fundamento del
método

Reporte de Lecturas en Absorbancia

Blanco Estándar o Patrón Muestra

Cálculos

Concentración de la Muestra

Diagnostico

Patologías relacionadas
Valores de Referencia.

Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US

Nacional Cholesterol Education Program y también aceptados en otros países para la
evaluación del riesgo de enfermedad de las arterias coronarias.

Hasta 200 mg/dl=5.2-6.24mmol/ Optimo

200-239 mg/dl=5.2-6.21mmol/L Moderado
Mayor a 240mg/dl=>6.24mmol/L Elevado

Colesterol LDL.
Su estimación se realiza por la fórmula de Friedewald.

Firma del Docente---------------------------------------

Fecha--------------------------------------------------