Evolución en Acción

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Evolución en acción
.
Matías Glaubrecht
Editor
En cooperación con Harald Schneider
Evolución en acción
Casos de estudio en Radiación Adaptativa,
Especiación y el Origen de la Biodiversidad
Volumen especial con origen en aportes al Programa Prioritario SPP 1127

“Radiaciones: Orígenes de la Diversidad Biológica”de la Deutsche
Forschungsgemeinschaft
Dr. Matthias Glaubrecht Museum
für Naturkunde Berlin Leibnitz
Institute for Research in Evolution
and Biodiversity at the Humboldt
University
Invalidenstraße 43
10115 Berlín
Alemania
matthias.glaubrecht@mfn-berlin.de
En cooperación con
Dr.Harald Schneider
Departamento de Botánica
Museo de Historia Natural
Londres
ISBN 978-3-642-12424-2 e-ISBN 978-3-642-12425-9

DOI 10.1007/978-3-642-12425-9
Springer Heidelberg Dordrecht Londres Nueva York
Número de control de la Biblioteca del Congreso: 2010930166
# Springer-Verlag Berlín Heidelberg 2010

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Ilustración de portada:
Arriba:Montículo típico de especies de termitas (Macrotermes michaelseni)en Kajiado, Kenia (de Marten et
al., este volumen; fotografía: Manfred Kaib).
Izquierda:tomates silvestres (Solanumsecta.Lycopersicon): S. chilensede la población de Moquegua, Perú (de
Stephan & Städler, este volumen; fotografía: Gabriel Clostre).
Medio:Especies de gasterópodos de agua dulce nuevas y no descritas hasta ahoratilomelaniadel lago Poso
en Sulawesi, Indonesia (de Rintelen et al., este volumen; fotografía: Chris Lukhaup).
Bien:OrquídeaOphrys esfegodescon machos pseudocopuladores del polinizadorandrena nigroaenea
(de Ayasse et al., este volumen; fotografía: Manfred Ayasse).
Diseño de portada:WMXDesign GmbH, Heidelberg, Alemania
Impreso en papel libre de ácido
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Prefacio
Radiaciones o evolución en acción
Acabamos de celebrar el “Año Darwin” con el doble aniversario de su 200 cumpleaños y 150
años de su obra maestra, “Sobre el origen de las especies por medio de la selección natural”.
En este trabajo, Darwin estableció la evidencia fáctica de la evolución biológica, que las
especies cambian con el tiempo y que nuevos organismos surgen de la división de formas
ancestrales en dos o más especies descendientes. Sin embargo, sobre todo, Darwin
proporcionó los mecanismos al argumentar de manera convincente que es por selección
natural, así como por selección sexual (como agregó más tarde), que los organismos se
adaptan a su entorno. Los numerosos descubrimientos desde entonces han confirmado y
fortalecido esencialmente las tesis centrales de Darwin, con evidencia más reciente, por
ejemplo, de la genética molecular, que revela las relaciones evolutivas de todas las formas de
vida a través de una historia compartida de descendencia de un ancestro común. También
hemos recorrido un largo camino para comprender progresivamente más sobre cómo se
originan realmente las nuevas especies, es decir, sobre la especiación que seguía siendo de
Darwin.misterio de misterios”,como se señala en uno de sus primeros cuadernos de
transmutación. Dado que la especiación es el mecanismo subyacente de las radiaciones, es la
causa última de la diversidad biológica de la vida que nos rodea.
Como hemos aprendido, a más tardar durante la celebración del año pasado de
Charles Darwin y su descubrimiento de la evolución, no fueron solo los objetos naturales
inmediatos del “del beagle”circunnavegación del globo 1831–1836 que Darwin observó,
recopiló e informó sobre lo que le proporcionó evidencia básica para la evolución
orgánica. Aún más importante fue su segundo y más largo viaje de descubrimiento
después de su regreso a Inglaterra, cuando Darwin desarrolló su “teoría con la que
trabajar”,como escribió una vez, después de pensar en el paradigma maltusiano de la
enorme fertilidad de los organismos que superaba la capacidad de los recursos
disponibles. Fue solo a través de este segundo viaje durante más de dos décadas, desde
principios de 1837 hasta su publicación trascendental en 1859, cuando Darwin con
paciencia y dedicación justificó su teoría, que realmente completó la "Revolución
Copernicana" en biología. De esa manera finalmente trajo “el origen y las adaptaciones
de los organismos en su profusión y maravillosa variación al ámbito de la ciencia”, como
señalaron recientemente Ayala y Avise (Proc Natl Acad Sci USA, 106 (2009): 2475–2476).
v
vi Prefacio
En todo el mundo, en 2009 hemos conmemorado dos siglos de Darwin

con numerosos coloquios, conferencias, festivales de recolección de nubes
y exhibiciones en museos, y con nuevos libros y artículos de investigación
en revistas. Los trabajos de investigación compilados en el presente
volumen también revelan algunos de los muchos aspectos del amplio
espectro de enfoques actuales en la investigación evolutiva, siguiendo en
gran medida los pasos de Darwin. En muchos sentidos, todavía hoy nos
relacionamos con la plétora de observaciones y notas que Darwin hizo
hace más de un siglo. Por otro lado, tenemos el privilegio de utilizar
técnicas modernas, por ejemplo, de la biología molecular y de la filogenia
sistemática,
Sin duda, la contribución de Charles Darwin a nuestra comprensión del origen de la
biodiversidad no puede subestimarse, ya que una transición muy natural conducirá del
Año Darwin al 2010 como el Año de la Biodiversidad y la Conservación. Este libro es una
contribución a ambas celebraciones, con los estudios y casos modelo presentados que
muestran el progreso y la dinámica de la investigación basada en las teorías
darwinianas, además de arrojar luz sobre las implicaciones en el contexto de las crisis de
biodiversidad actuales. La gran importancia de las radiaciones adaptativas (y no
adaptativas) para la biodiversidad está ampliamente aceptada, pero nuestra
comprensión de los procesos y mecanismos involucrados aún es limitada, y las
generalizaciones deben basarse en la acumulación de más evidencia de estudios de
casos adicionales. Nuestros casos modelo, en la mayoría de los casos, necesitan ser
conservados,
Los estudios presentados en este volumen son aquellos estudios de casos que se necesitan con
urgencia y se centran en una variedad de organismos y diferentes aspectos de las radiaciones. Como
casos de estudio en evolución, también están aprovechando los avances de la biología molecular y la
bioinformática, dos áreas que han revolucionado la biología moderna. Los resultados científicos
presentados en este documento son excelentes ejemplos no solo de la evolución en acción, sino
también de la investigación activa sobre los procesos evolutivos y su resultado más aparente, a
saber. la biodiversidad que queremos conservar para el disfrute de las generaciones futuras.
Este volumen tiene como objetivo reunir los resultados inmediatos de los estudios y
proyectos realizados dentro de un programa prioritario financiado por la Deutsche
Forschungsgemeinschaft (DFG) de 2002 a 2008 (ver más sobre esto en el siguiente capítulo
introductorio de Bill Martin). Aquí, las ideas de 25 grupos de investigación con un total de 109
colaboradores se organizan en tres partes: la primera parte (1) se ocupa de los enfoques en
botánica (8 artículos), la segunda parte (2) de las interacciones planta-huésped (4 papers), y la
tercera parte (3) con enfoques en zoología (13 papers); todo resumiendo los avances que
hemos hecho hasta ahora.
Se pidió a los autores que presentaran su investigación con rigor científico, aunque no
necesariamente en la forma habitual de un artículo de investigación, pero si fuera posible
como una revisión más legible. De esa manera, esperamos no escribir tanto solo para los
pocos otros expertos en nuestro campo inmediato de experiencia (ya seaSolanumgenética,
Crematogasterhormigas en malasiomacarangaplantas, otilomelaniacaracoles en los lagos de
Sulawesi), pero para un público más amplio. Al mismo tiempo, esperamos presentar
Prefacio viii
aquí una encuesta ilustrada con colores de la investigación actual en biología evolutiva en
Alemania. Estos artículos o capítulos, aunque todos fueron escritos de forma independiente,
se agrupan aquí de acuerdo con sus temas principales, sus hipótesis probadas y sus
principales hallazgos e implicaciones. Por supuesto, también son posibles otras disposiciones;
sin embargo, la presente compilación sigue un diseño inherente sugerido por su contenido
que describiré brevemente aquí.
Comenzando con casos modelo para radiaciones en helechos en Madagascar (Schneider et al.),
en plantas en islas macaronésicas (Thiv et al.) yHordeoen las Américas (Blattner et al.), un tema
principal subyacente en este libro será la cuestión de las fuerzas impulsoras responsables de la
evolución de las especies. Esto se discute, por ejemplo, para innovaciones clave para helechos
(Schneider et al.), el sistema de apareamiento enCapsella (Paetsch et al.) y, en particular, por factores
ecológicos, siendo este último el principal factor recurrente en el enfoque de muchos de los artículos
compilados aquí, como la especiación impulsada por los polinizadores en las orquídeas (Ayasse et
al.). La sección de botánica concluye con dos artículos que analizan la genética de poblaciones y la
diversidad genética en plantas utilizadas para la alimentación humana, como los tomates (Stephan et
al.) y el trigo y la cebada (Kilian et al.).
En la parte II, cuatro artículos analizan los estudios de casos de interacciones huésped-planta
como un caso especial de evolución biótica, buscando principios generales que se apliquen a
aquellos animales que viven directamente sobre, dentro o con plantas y viceversa. El artículo de
Weising et al. discutemacarangaespeciación, el artículo de Feldhaar et al. sobre la especiación en
Crematogasterañade la perspectiva de la hormiga a la historia. Otro interesante estudio de caso
sobre plantas proviene de la plétora de formas en las rosas silvestres que interactúan con hongos e
insectos (Kohnen et al.), mientras que Johanneson et al. seguir las huellas de la especiación en las
moscas tefrítidas que habitan en las plantas.
La Parte III sobre los enfoques zoológicos comienza con el examen de las radiaciones
nuevamente y algunos de los factores clave propuestos responsables de la diversificación y la
especiación, ejemplificados por la incorporación de unidades fotosintéticas en las babosas
marinas (Wägele et al.), por el papel de las propiedades cuticulares en el crecimiento de
hongos termitas (Marten et al.), y por las propiedades diferenciales del órgano eléctrico en
peces africanos que promueven la especiación ecológica (Tiedemann et al.). Con eso, uno de
los temas principales de los estudios modernos de especiación está emergiendo una vez más,
a saber. probar la contribución de los factores ecológicos frente a los geográficos, como
también se investigó en el artículo de Schubart et al. sobre la naturaleza adaptativa de una
radiación de cangrejos de agua dulce en Jamaica. Los tres artículos siguientes analizan más
específicamente el componente espacial de la especiación,Larúscomplejo de gaviotas (Liebers-
Helbig et al.), ranas de agua en el Mediterráneo oriental (Plötner et al.), y hasta ahora especies
crípticas en CórcegaLimaxbabosas (Nitz et al.). Además del último artículo que también se
ocupa predominantemente de las características y propiedades reproductivas, dos capítulos
más examinan el papel de la selección sexual en la especiación, como lo ilustran Sauer y
Hausdorf, y Mayer et al., para los caracoles terrestres de Creta. para la comunicación acústica
de saltamontes, tanto en su forma de probar o proporcionar evidencia de radiaciones no
ecológicas. Herder y Schliewen examinan más a fondo la posibilidad de especiación simpátrica
para los peces lacustres en los lagos de las islas indonesias de Sulawesi. Estoy convencido de
que estos lagos de las tierras altas centrales nos brindan un "laboratorio natural" muy
adecuado para los estudios de especiación, incluso potencialmente
viii Prefacio
más adecuado que otros sistemas de lagos antiguos, para probar el papel diferencial de la
alopatría frente a la simpatría, con un conjunto de factores geográficos y ecológicos
discernibles, como se muestra, por ejemplo, en nuestro propio estudio de la endémica
tilomelania gasterópodos (Rintelen et al.). En el artículo posterior de Köhler et al., examinamos
más a fondo estos temas para otro grupo de caracoles límnicos estrechamente relacionado;
sin embargo, esta vez no para un entorno lacustre sino ribereño. Finalmente, la sección
zoológica se complementa con otro estudio sobre caracoles límnicos (un grupo de
invertebrados obviamente en camino de ser reconocido como un sistema modelo emergente
en biología evolutiva), con Wilke et al. investigando, esta vez explícitamente, la posibilidad de
radiaciones no adaptativas.
Como es evidente a partir de la compilación presente en este libro, todavía estamos lejos
de poder brindar una visión equilibrada sobre la radiación y la especiación, ya que ni siquiera
estamos cerca de analizar de manera integral los principales organismos, regiones o factores
involucrados. Si bien algunos taxones se examinan aquí muy a fondo, otros faltan por
completo. Sin embargo, discutimos algunos de los factores más destacados y destacamos
futuras vías de investigación. En cualquier caso, estoy convencido de que todos estos
documentos presentados aquí muestran, en una variedad de formas, la evolución en acción.
Como autores de estos documentos, así como participantes del programa prioritario de la
DFG, estamos en gran deuda con los organizadores, Klaus Bachmann y William Martin,
quienes proporcionaron un importante impulso para sintetizar nuestro trabajo. Estamos
agradecidos por el apoyo financiero de la DFG y el apoyo continuo de su representante,
Roswitha Schönwitz, así como también agradecemos a los miembros de la junta de revisión
por las muchas sugerencias y debates estimulantes durante estos seis emocionantes y
exitosos años de investigación, y a los revisores de los 25 artículos publicados aquí por sus
comentarios y críticas constructivas.
Quisiera agradecer a Harald Schneider, quien ayudó durante el proceso de revisión
con el manejo de los artículos botánicos y de interacción planta-huésped, a Bill Martin
por establecer contacto con Springer, Heidelberg y Sabine Schwarz y a Anette Lindqvist
de su oficina editorial de Ciencias de la Vida por su apoyo. y ayudar durante todo el
proceso de edición de este volumen.
Berlina Matías Glaubrecht

febrero de 2010
Introducción al Programa Prioritario “Radiaciones:
Orígenes de la Diversidad Biológica”
Este libro es el resultado de un programa de investigación específico, un programa prioritario,

que fue financiado por la Fundación Alemana de Investigación (DFG) durante el período
2002-2007 titulado “Radiaciones: Orígenes de la Diversidad Biológica” (programa prioritario
SPP 1127). El programa fue un impulso histórico para los estudios en ecología y evolución a
nivel de especies en Europa Central, y reunió a un amplio espectro de biólogos evolutivos,
unidos por una única pregunta apremiante sobre las fuerzas impulsoras detrás de la
diversificación de especies.
Esta es una buena oportunidad para responder una pregunta que me han hecho muchas
veces: ¿cómo nació el programa SPP 1127? Junto a la reunión anual de la Sociedad Botánica
Alemana de 2000 en Jena, los funcionarios y representantes de la DFG invitaron a un grupo de
unos 20 científicos de botánica, zoología, microbiología y ecología a una sesión de intercambio
de ideas de un día sobre evolución y sistemática, con el objetivo de identificar algunas de las
grandes cuestiones pendientes en la materia, cuya solución generaría avances sustanciales en
nuestra comprensión de la biodiversidad. También tenía que ser algo que albergara interés y
potencial de investigación para aquellos en los campos de plantas, animales y microbios.
Nuestros cerebros en una tormenta, y con las llamas de la discusión furiosas, buscamos en
nuestra materia gris, hora tras hora, temas genuinamente originales. científicamente de valor
excepcional y, al mismo tiempo, de un atractivo lo suficientemente amplio como para atraer el
interés de químicos y físicos, por ejemplo, para que tenga una importancia obvia más allá de
una audiencia especializada. Las buenas ideas son baratas. necesitábamos unexcelenteidea. A
media tarde, las cosas empezaron a verse bastante sombrías, al igual que muchas caras
alrededor de la mesa, y habíamos llegado al punto en que estábamos discutiendo con
entusiasmo en su mayoría genuino cosas como "La recolonización posglacial de Europa", que
es sin duda de gran interés, especialmente para aquellos de nosotros que vivimos en Europa
Central, pero tal vez no sea el tema evolutivo más grande jamás identificado.
Justo cuando parecía que no quedaban grandes preguntas o identificables de otro modo en
nuestras mentes barridas por la tormenta sobre la evolución a nivel de especie, las aguas se
separaron. Uno de los botánicos más destacados del mundo, Friedrich Ehrendorfer, abrió la sesión
de la tarde con las memorables y retumbantes palabras “¡Radiaciones! Si queremos entender
ix
X Introducción al Programa Prioritario “Radiaciones: Orígenes de la Diversidad Biológica”
el origen de las especies, tenemos que mirar hacia dónde avanza la evolución a su mayor ritmo”. Todos reconocimos de
inmediato que acababa de nacer una gran idea y, a partir de ahí, la lluvia de ideas fue cuesta abajo con el objetivo de formular
una propuesta de investigación a la DFG con el objetivo de investigar el impacto evolutivo de las radiaciones, o la evolución en
acción. , como lo hemos llamado aquí en este libro. Ese procedimiento implicó invitar a varias docenas de científicos
potencialmente interesados a un coloquio para tener presentaciones breves y discutir más a fondo el tema de las radiaciones,
lo cual hicimos; somos Konrad Bachmann, director del Instituto de Genética de Plantas e Investigación de Plantas de Cultivo en
Gatersleben, Alemania, y yo mismo. Esa reunión llevó el ya considerable nivel de impulso a un punto en el que la gente de
repente esperaba que Konrad y yo escribiéramos una propuesta, como si hubiéramos firmado un contrato que decía que no
teníamos suficiente trabajo en nuestras manos y buscábamos desesperadamente más. . Fue en ese momento que seguí
escuchando cosas como “escribes muy bien” de todos en ese círculo, que ahora entiendo que es un tipo especial de democracia
conocida en la mayoría de los países con el nombre de “mobbing”. Solo ahora me doy cuenta de que ni antes ni después nadie
había comentado directamente sobre mis habilidades de escritura. que ahora entiendo que es un tipo especial de democracia
había comentado directamente sobre mis habilidades de escritura. que ahora entiendo que es un tipo especial de democracia
había comentado directamente sobre mis habilidades de escritura.
Debido a que el tema de las radiaciones es bastante amplio, la propuesta del programa prioritario (SPP) que improvisamos
Konrad y yo contenía algunos subtemas para ayudar a mantener enfocados los esfuerzos de investigación. Estos subtemas
fueron (1) el papel del sistema reproductivo en la especiación, (2) la separación espacial y la especiación alopátrica, (3) el papel
de los caracteres clave en las radiaciones adaptativas y (4) las radiaciones acopladas, donde dos o más grupos parecen ser
coespecie. Resulta que la propuesta del SPP fue muy popular entre los órganos decisorios de la DFG, que destinaron sumas
bastante generosas para el estudio de la biodiversidad a nivel de especies sobre la base de nuestro documento. Posteriormente,
la propuesta del SPP también fue popular entre el campo en general, ya que una avalancha de destacadas propuestas de
investigación individuales llegó a la primera ronda. Durante los seis años que duró el programa prioritario SPP 1127, la DFG
destinó más de ocho millones de euros para financiar 102 propuestas de investigación de dos años dirigidas a la biodiversidad a
nivel de especie. Esa inversión sustancial en ciencia básica generará beneficios a largo plazo en nuestra comprensión de la
diversidad biológica y el papel de los procesos de especiación radiativa en sus orígenes. Este volumen resume algunos de los
avances que surgieron de los proyectos que fueron financiados durante el programa prioritario. Espero que los lectores lo
encuentren informativo y atractivo. Este volumen resume algunos de los avances que surgieron de los proyectos que fueron
financiados durante el programa prioritario. Espero que los lectores lo encuentren informativo y atractivo. Este volumen resume
algunos de los avances que surgieron de los proyectos que fueron financiados durante el programa prioritario. Espero que los
lectores lo encuentren informativo y atractivo.
En el transcurso de SPP 1127, celebramos tres coloquios exitosos, organizados por Konrad
y yo, y un taller muy exitoso sobre métodos de genética de poblaciones, amablemente
organizado y dirigido por Wolfgang Stephan y Thomas Städler del Instituto de Biología
Evolutiva de la Universidad Ludwig Maximillian. en Munich. Alrededor de SPP 1127 surgieron
diversas actividades nacionales e internacionales en el campo de la investigación de la
biodiversidad (una muy destacada fue la Red de Radiaciones de Especies de Plantas de Nueva
Zelanda organizada por Pete Lockhart de la Universidad de Massey, con la que se
materializaron varios niveles de interacción e intercambio), para lo cual están agradecidos
Todos los asociados con SPP 1127 le deben un agradecimiento especial al comité
directivo del programa, quien nos brindó buenos consejos y asistencia a lo largo del
camino. El comité directivo fue, en orden alfabético, Alfried Vogel (Historia Natural
Introducción al Programa Prioritario “Radiaciones: Orígenes de la Diversidad Biológica” xi
Museum, Londres), Ian Baldwin (Instituto Max Planck de Ecología Química, Jena),
Spencer Barrett (Universidad de Toronto), David Penny (Universidad de Massey,
Nueva Zelanda), Edmund Gittenberger (Museo Nacional de Historia Natural,
Leiden, Países Bajos) , Scott Hodges (Universidad de California en Santa Bárbara),
Johannes Vogel (Museo de Historia Natural, Londres), Dick Olmstead (Universidad
de Washington) y Wolfgang Wägele (Museo Zoológico König, Bonn). Su tiempo y
sus esfuerzos para ayudarnos a aprovechar al máximo nuestras oportunidades de
investigación son muy apreciados. Gracias también a Harald Schneider y Matthias
Glaubrecht, quienes se encargaron de editar este volumen.
Todos los participantes en SPP 1127 le debemos a la Fundación Alemana de Investigación y
en particular a Roswitha Schönwitz, nuestra oficial de programa responsable que nos mantuvo
en el camino de principio a fin, una enorme ronda de agradecimiento especial por ayudar a
que el programa se materializara. También le debemos una ronda de agradecimiento
igualmente especial a Friedrich Ehrendorfer de la Universidad de Viena por mantener la
claridad mental mientras el resto de nuestros cerebros se desvanecían, y por abordar el tema
de las radiaciones.
Düsseldorf Guillermo Martín

junio de 2009
.
Contenido
Parte I - Enfoques en Botánica
Radiaciones rápidas y neoendemismo en Madagascar

Hotspot de biodiversidad. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Harald Schneider, Thomas Janssen, Nadia Byrstiakova, Jochen Heinrichs, Sabine Hennequin y
France Rakotondrainibe
Radiación rápida en el género CebadaHordeo (poáceas)

Durante el Pleistoceno en las Américas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
Frank R. Blattner, Thekla Pleines y Sabine S. Jakob
Estudio de la radiación adaptativa a nivel molecular: un caso

Estudio en la Macaronésica Crassulaceae-Sempervivoideae. . . . . . . . . . . . . . . 35
Mike Thiv, Korinna Esfeld y Marcus Koch
Innovaciones clave frente a oportunidades clave: identificación de las causas

de Radiaciones Rápidas en Helechos 61
Derivados. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Harald Schneider, Hans-Peter
Kreier, Thomas Janssen, Elisabeth Otto, Haiko Muth y Jochen Heinrichs
Evolución del Sistema de Apareamiento en el Género

Capsella ( 77
Brassicáceas). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Melanie
Paetsch, Sara Mayland-Quellhorst, Herbert Hurka y Barbara Neuffer
Especiación impulsada por polinizadores en orquídeas sexualmente engañosas

del géneroOphrys. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101
Manfred Ayasse, Julia Gögler y Johannes Stökl
XIII
xiv Contenido
Genética de la población de la especiación e inferencia demográfica bajo la

subdivisión de la población: conocimientos de los estudios
sobre tomates silvestres (Solanumsecta.Lycopersicon). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 119
Wolfgang Stephan y Thomas Stadler
Diversidad genética, evolución y domesticación del trigo

y Cebada en el Creciente Fértil. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 137
Benjamin Kilian, William Martin y Francesco Salamini
Parte II - Interacción Planta Huésped
Mecanismos de especiación en las hormigas-plantas del sudeste asiático

del géneroMacarango (Euforbiáceas). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169
Kurt Weising, Daniela Guicking, Christina Fey-Wagner, Tim Kröger-Kilian, Tina
Wöhrmann, Wiebke Dorstewitz, Gudrun Bänfer, Ute Moog, Miriam Vogel,
Christina Baier, Frank R. Blattner y Brigitte Fiala
Especiación en Obligatoriamente Asociado a PlantasCrematogasterHormigas: la

distribución del host en lugar de la adaptación hacia hosts específicos impulsa el
proceso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Heike 193
Feldhaar, Jürgen Gadau y Brigitte Fiala
Radiación, diversidad biológica e interacciones huésped-parásito

en Rosas silvestres, hongos e insectos de la 215
roya. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Annette Kohnen, Roland Brandl,
Roman Fricke, Friederike Gallenmüller, Katrin Klinge, Ines Köhnen, Wolfgang
Maier, Franz Oberwinkler, Christiane Ritz, Thomas Speck, Günter Theissen, Teja
Tscharntke, Andrea Vaupel y Volker Wissemann
Especiación a través del uso diferencial de hospedante-planta en el Tephritid

VolarTefritis conura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Jes 239
Johannesen, Thorsten Diegisser y Alfred Seitz{
Parte III - Enfoques en Zoología
Las babosas de energía solar (Opisthobranchia, Gastropoda, Mollusca):

Incorporación de unidades fotosintéticas: un personaje clave
¿Mejorar la radiación? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 263
Heike Wägele, Michael J. Raupach, Ingo Burghardt, Yvonne Grzymbowski y Katharina
Händeler
Contenido XV
¿Están los hidrocarburos cuticulares involucrados en la especiación de

termitas productoras de hongos (Isoptera: Macrotermitinae)? Andreas ............. 283
Marten, Manfred Kaib y Roland Brandl
La divergencia de descarga de órganos eléctricos promueve la

especiación ecológica en los débiles africanos simpátricos
Pescado eléctrico (Campylomormyrus). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 307
Ralph Tiedemann, Philine GD Feulner y Frank Kirschbaum
Diversificación fenotípica y genotípica en curso en cangrejos de agua dulce

irradiados adaptativamente de Jamaica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323
Christoph D. Schubart, Tobias Weil, Jesper T. Stenderup, Keith A. Crandall y Tobias
Santl
El complejo de la gaviota argéntea (Larus argentatus - fuscus - cachinnans) como

grupo modelo para radiaciones recientes de vertebrados holárticos. . . . . . . . . . 351
Dorit Liebers-Helbig, Viviane Sternkopf, Andreas J. Helbig{ y Peter de Knijff
Divergencia genética y evolución del aislamiento reproductivo

en Ranas de agua del Mediterráneo oriental. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 373
Jörg
Plötner, Thomas Uzzell, Peter Beerli, Çiğdem Akın, C. Can Bilgin, Cornelia Haefeli, Torsten
Ohst, Frank Köhler, Robert Schreiber, Gaston-Denis Guex, Spartak N. Litvinchuk, Rob
Westaway, Heinz-Ulrich Reyer, Nicolas Pruvost y Hansjürg Hotz
Inferir corso múltipleLimax (Pulmonata: Limacidae)

Radiaciones: un enfoque combinado utilizando la morfología
y Moléculas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405
Barbara Nitz, Gerhard Falkner y Gerhard Haszprunar
Paleogeografía o selección sexual: ¿Qué factores promovieron las radiaciones del

caracol terrestre de Creta? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Jan Sauer 437
y Bernhard Hausdorf
¿Radiaciones no ecológicas en saltamontes que se comunican

acústicamente? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 451
...
Frieder Mayer, Dirk Berger, Brigitte Gottsberger y Wolfram Schulze
Más allá de la especiación simpátrica: la radiación de Sailfin Silverside

Peces en los lagos Malili (Sulawesi) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 465
Fabian Herder y Ulrich K. Schliewen
xvi Contenido
Las bandadas de especies de gasterópodos vivíparos de agua dulcetilomelania

(Mollusca: Cerithioidea: Pachychilidae) en los antiguos lagos de Sulawesi, Indonesia:
el papel de la geografía, la morfología trófica y el color como fuerzas impulsoras en
la radiación adaptativa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thomas von 485
Rintelen, Kristina von Rintelen y Matthias Glaubrecht
Especiación y radiación en un río: evaluación de la diferenciación morfológica

y genética en una bandada de especies de gasterópodos vivíparos
(Cerithioidea: Pachychilidae) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Frank 513
Köhler, Somsak Panha y Matthias Glaubrecht
El lado descuidado de la moneda: radiaciones no adaptativas

en caracoles de primavera (porthinella 551
spp.). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thomas Wilke, Mandy Benke,
Martin Brandle, Christian Albrecht y Jean-Michel Bichain
índice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .579
Colaboradores
cristiano albrechtDepartamento de Ecología Animal y Sistemática, Universidad

Justus Liebig, Giessen, Alemania
Çiğdem AkınLaboratorio de Biodiversidad y Conservación, Departamento de Biología,

Universidad Técnica de Medio Oriente, 06531 Ankara, Turquía
manfred ayasseInstituto de Ecología Experimental, Universidad de Ulm, Albert-

Einstein-Allee 11, 89069 Ulm, Alemania, manfred.ay.asse@uni-ulm.de
Gudrun BanferSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109 Kassel,

Alemania
cristinabaierInstituto Leibniz de Genética Vegetal y Ciencia de Cultivos (IPK), 06466

Gatersleben, Alemania
Pedro BeerliDepartamento de Computación Científica, Universidad Estatal de Florida,

Tallahassee, FL 32306-4120, EE. UU.
MandyBenkeDepartamento de Ecología Animal y Sistemática, Universidad Justus

Liebig, Giessen, Alemania
dirkbergerColecciones de Historia Natural Senckenberg Dresden, Museo de

Zoología, Königsbrücker Landstraße 159, 01109 Dresden, Alemania,
dirk.berger@senckenberg.de
Jean-Michel BichainMuséum National d'Histoire Naturelle, París, Francia
C. Can BilginLaboratorio de Biodiversidad y Conservación, Departamento de Biología,

Universidad Técnica de Medio Oriente, 06531 Ankara, Turquía
xvii
xviii Colaboradores
Frank R. BlattnerInstituto Leibniz de Genética Vegetal e Investigación de Cultivos (IPK),

Corrensstraße 3, 06466 Gatersleben, Alemania, blattner@ipk-gatersleben.de
Martín BrandleDepartamento de Ecología, Universidad Philipps Marburg, Marburg,

Alemania
roland brandlEcología Animal, Departamento de Ecología, Facultad de Biología,

Universidad de Marburg, Karl-von-Frisch Str. 8, 35032 Marburgo, Alemania,
brandlr@staff.uni-marburg.de
Ingo BurghardtInstituto Australiano de Ciencias Marinas, PMB No. 3 Townsville

QLD 4810 Australia y Universidad de Tecnología de Sydney, Grupo de Cambio
Climático, PO Box 123 Sydney, NSW 2007, Australia
Nadia ByrstiakovaDepartamento de Ciencias de las Plantas, Universidad de Cambridge,

Cambridge, CB2 3EA, Reino Unido y Departamento de Botánica, Museo de Historia Natural,
Londres, SW7 5BD, Reino Unido
Keith A. CrandallDepartamento de Biología, Universidad Brigham Young, Provo, UT

84602-5255, EE. UU.
Thorsten DiegisserInstitut für Zoologie, Abteilung Ökologie, Universität Mainz,

Saarstrasse 21, 55099 Mainz, Alemania
Wiebke DorstewitzSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109

Kassel, Alemania
Korinna EsfeldStaatliches Museum für Naturkunde Stuttgart, Rosenstein 1,

70191 Stuttgart, Alemania y Universidad de Berna, Altenbergrain 21, CH-3013
Berna, Suiza, korinna.esfeld@ips.unibe.ch
Gerhard FalknerStaatliches Museum für Naturkunde Stuttgart, Rosenstein 1, 70191

Stuttgart, Alemania y Département Systématique et Evolution. UMS Taxonomie et
collections, Muséum National d'Histoire Naturelle París, 55 rue de Buffon, F-75005
París, Francia, Falkner@malaco.de
Heike FeldhaarFisiología del Comportamiento y Sociobiología (Zoología II), Biocenter,

Am Hubland, Universidad de Würzburg, 97074 Würzburg, Alemania y Biología del
Comportamiento, Universidad de Osnabrück, Barbarastr. 11, 49076 Osnabrück,
Alemania, feldhaar@biologie.uni.osnabrueck.de
Cristina Fey-WagnerSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109

Kassel, Alemania
Colaboradores xix
Philine GD FeulnerUnidad de Biología Evolutiva/Zoología Sistemática, Instituto de

Bioquímica y Biología, Universidad de Potsdam, 14476 Potsdam, Alemania y Grupo
de Bioinformática Evolutiva, Westfälische-Wilhelms-Universität Münster, Instituto
para la Evolución y la Biodiversidad, Hüfferstrasse 1, 48149 Münster, Alemania, p .
feulner@uni-muenster.de
Brigitte FialaEcología Animal y Biología Tropical (Zoología III), Biocenter, Am

Hubland, Universidad de Würzburg, 97074 Würzburg, Alemania
romano frickePhilipps-Universität Marburg, Marburg, Alemania
Jürgen GadauFisiología y Sociobiología del Comportamiento (Zoología II), Biocenter, Am

Hubland, University of Würzburg, 97074 Würzburg, Alemania y Facultad de Ciencias de
la Vida, Universidad Estatal de Arizona, PO Box 874501, Tempe, AZ 85287- 4501 EE. UU.
Friederike GallenmüllerAbert-Ludwigs-Universität-Freiburg, Freiburg, Alemania
Matías GlaubrechtMuseum für Naturkunde Berlin, Leibniz Institute for Research in

Evolution and Biodiversity at the Humboldt University, Invalidenstraße 43, 10115
Berlín, Alemania, matthias.glaubrecht@mfn-berlin.de
julia goglerInstituto de Ecología Experimental, Universidad de Ulm, Albert-

Einstein-Allee 11, 89069 Ulm, Alemania, julia.goegler@uni-ulm.de
Brigitte GottsbergerDepartamento de Ecología de la Población, Universidad de Viena,

Rennweg 14, A-1030 Viena, Austria, brigitte.gottsberger@univie.ac.at
Yvonne GrzymbowskiZoologisches Forschungsmuseum Alexander Koenig,

Bonn, Alemania
Gastón-Denis GuexZoologisches Institut, Universität Zürich-Irchel,

Winterthurerstrasse 190, CH-8057 Zúrich, Suiza
DanielaGuickingSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109 Kassel,

Alemania
Cornelia HaefeliZoologisches Institut, Universität Zürich-Irchel,

Winterthurerstrasse 190, 8057 Zúrich, Suiza
katharina handelerZoologisches Forschungsmuseum Alexander Koenig, Bonn,

Alemania
XX Colaboradores
Bernhard HausdorfMuseo Zoológico, Universidad de Hamburgo, Martin-Luther-

King-Platz 3, 20146 Hamburgo, Alemania, hausdorf@zoologie.uni-hamburg.de
Gerhard HaszprunarZoologische Staatssammlung München, Münchhausenstr. 21,

81247 München, Alemania, haszi@zsm.mwn.de
jochen heinrichsAlbrecht-von-Haller Institut für Pflanzenwissenschaften, Georg-

August Universität Goettingen, Göttingen, Alemania y FU Berlin, Institut fuer
Biologie, Angewandte Genetik, 14195 Berlín, Alemania
Andreas J. Helbig ({)Vogelwarte Hiddensee, Universidad de Greifswald, Alemania
Sabine HennequinDepartamento de Botánica, Museo de Historia Natural, Londres SW7 5BD,

Reino Unido
herder fabiánSektion Ichthyologie, Zoologisches ForschungsmuseumAlexander Koenig,

Adenauerallee 160, 53113, Bonn, Alemania y Departamento de lctiología, Colección
Estatal de Zoología de Baviera (ZSM), Münchhausenstr 21, 81247 München, Alemania,
f.herder.zfmk@uni-bonn.de
Hansjürg HotzZoologisches Institut, Universität Zürich-Irchel,

Herbert HurkaDepartamento de Botánica, Universidad de Osnabrück, Barbarastraße 11,

49076 Osnabrück, Alemania
Sabine S. JakobInstituto Leibniz de Genética Vegetal e Investigación de Cultivos (IPK),

Corrensstraße 3, 06466 Gatersleben, Alemania
Tomas JanssenInstituto Albrecht-von-Haller de Ciencias Vegetales, Universidad

Georg-August, 37073 Göttingen, Alemania y Jardín Botánico Nacional de Bélgica,
Dominio Bouchout, Nieuwelaan 38, 1860 Meise, Bélgica
jes johannesenInstitut für Zoologie, Abteilung Ökologie, Universität Mainz,

Saarstrasse 21, 55099 Mainz, Alemania, jesjo@uni-mainz.de
Manfredo KaibDepartamento de Fisiología Animal, Facultad de Biología,

Universidad de Bayreuth, Universitätsstr. 30 , 95440 Bayreuth, Alemania,
manfred.kaib@uni-bayreuth.de
Benjamín KilianInstituto de Botánica III, Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf,

Universitätsstrasse 1, 40225 Düsseldorf, Alemania y Leibniz Institute of Plant
Genetics and Crop Plant Research (IPK), Genebank/ Genome Diversity,
Corrensstrasse 3, 06466 Gatersleben, Alemania, kilian@ ipk- Gatersleben.de
Colaboradores xxx
franco kirschbaumInstituto de Ciencias Animales, Universidad Humboldt, Berlín,

Alemania e Instituto Leibniz de Ecología de Agua Dulce y Pesca Interior, Berlín,
Alemania
Katrin KlingeGeorg-August Universität Göttingen, Göttingen, Alemania
Pedro de KnijffDepartamento de Genética Humana, Centro Médico de la

Universidad de Leiden, PO Box 9600, 2300 RC Leiden, Países Bajos, knijff@lumc.nl
marcus kochInstituto Heidelberg de Ciencias Vegetales, Universidad de Heidelberg,

Im Neuenheimer Feld 345m, 69120 Heidelberg, Alemania,
mkoch@hip.uniheidelberg.de
Frank KöhlerMuseum für Naturkunde Berlin, Invalidenstraße 43, 10115 Berlin,

Alemania y Australian Museum, 6 College Street, Sydney, NSW 2010 Australia,
frank.koehler@austmus.gov.au
ines köhnenFriedrich Schiller Universität Jena, Jena, Alemania
Annette KohnenPhilipps-Universität Marburg, Marburg, Alemania
Hans Peter KreierAlbrecht-von-Haller Institut für Pflanzenwissenschaften, Georg-

August Universität Goettingen, Göttingen, Alemania, y FU Berlin, Institut fuer
Biologie, Angewandte Genetik, 14195 Berlín, Alemania
Tim Kröger-KilianSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109

Kassel, Alemania
Dorit Liebers-HelbigDeutsches Meeresmuseum, Katharinenberg 14-20, 18439

Stralsund, Alemania, dorit.liebers@meeresmuseum.de
Spartak N. LitvinchukInstituto de Citología, Academia Rusa de Ciencias,

Tikhoretsky prospekt 4, 194064 San Petersburgo, Rusia
Wolfgang MaierRuhr-Universität Bochum, Bochum, Alemania
Andreas MartenEcología Animal, Departamento de Ecología, Facultad de Biología,

Universidad de Marburg, Karl-von-Frisch Str. 8, 35032 Marburgo, Alemania
Guillermo MartínInstituto de Botánica III, Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf,

Universitätsstrasse 1, 40225 Düsseldorf, Alemania, W.Martin@uni-duesseldorf.de
Frieder MayerMuseum für Naturkunde Berlin, Leibniz Institute for Research on

Evolution and Biodiversity at the Humboldt University Berlin, Invalidenstraße 43,
10115 Berlin, Germany, frieder.mayer@mfn-berlin.de
XXII Colaboradores
Sara Mayland-QuellhorstDepartamento de Botánica, Universidad de Osnabrück,

Barbarastraße 11, 49076 Osnabrück, Alemania
Ute MoogSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109 Kassel,

Alemania
haiko muthAlbrecht-von-Haller Institut für Pflanzenwissenschaften, Georg-August

Universität Goettingen, Göttingen, Alemania y FU Berlin, Institut fuer Biologe,
Angewandte Genetik, 14195 Berlín, Alemania
Bárbara NeufferDepartamento de Botánica, Universidad de Osnabrück, Barbarastraße

11, 49076 Osnabrück, Alemania
Bárbara NitzZoologischeStaatssammlungMünchen,Münchhausenstr. 21,D-81247

München, Alemania e Instituto de Epidemiología, Centro Helmholtz München,
Centro Alemán de Investigación para la Salud Ambiental, München/Neuherberg,
Alemania, Barbara.Nitz@zsm.mwn.de
Franz OberwinklerEberhard Karls Universität Tübingen, Tübingen, Alemania
Torsten OhstMuseum für Naturkunde Berlin, Leibniz Institute for Research on

10115 Berlin, Alemania
Isabel OttoAlbrecht-von-Haller Institut für Pflanzenwissenschaften, Georg-August

Universität Goettingen, Göttingen, Alemania y FU Berlin, Institut fuer Biologie,
Angewandte Genetik, 14195 Berlín, Alemania
Melanie PaetschDepartamento de Botánica, Universidad de Osnabrueck, Barbarastraße

11, 49076 Osnabrueck, Alemania, Melanie.Paetsch@biologie.uni-osnabrueck.de
Somsak PanhaDepartamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de

Chulalongkorn, Bangkok, 10330 Tailandia, somsak_panha@yahoo.com
Thekla PleinesInstituto Leibniz de Genética Vegetal e Investigación de Cultivos (IPK),

Corrensstraße 3, 06466 Gatersleben, Alemania
Jörg PlötnerMuseum für Naturkunde Berlin, Leibniz Institute for Research on

10115 Berlin, Alemania, joerg.plotner@mfn-berlin.de
Nicolás PruvostInstitut für Evolutionsbiologie und Umweltwissenschaften,

Universität Zürich-Irchel, Winterthurerstrasse 190, 8057 Zúrich, Suiza
Colaboradores XXIII
FranciaRakotondrainibeMuseo Nacional de Historia Natural, Dpto. Systematique et

Evolution, UMR-CNRS 5202, CP 29, 75231 París, Cedex 05, Francia
Michael J. RaupachZoologisches Forschungsmuseum Alexander Koenig, Bonn,

Alemania
Heinz Ulrich ReyerZoologisches Institut, Universität Zürich-Irchel,

Kristina von RintelenMuseum für Naturkunde, Leibniz-Institut für Evolutionund

Biodiversitätsforschung an der Humboldt-Universität zu Berlin, Invalidenstraße 43,
10115 Berlín, Alemania
Thomas von RintelenMuseum für Naturkunde, Leibniz-Institut für Evolutionund

Biodiversitätsforschung an der Humboldt-Universität zu Berlin, Invalidenstraße 43,
10115 Berlín, Alemania
cristiane ritzJustus-Liebig-Universität Giessen, Giessen, Alemania
francesco salaminiDepartamento de Fitomejoramiento y Genética, Instituto Max

Planck para la Investigación de Fitomejoramiento, Carl-von-Linné-Weg 10, 50829
Köln, Alemania y Fondazione Parco Tecnologico Padano, Via Einstein – Localita
Cascina Codazza, 26900 Lodi, Italia
Tobias SantlBiologie 1, Institut für Zoologie, Universität Regensburg, 93040

Regensburg, Alemania
Jan SauerMuseo Zoológico, Universidad de Hamburgo, Martin-Luther-King-Platz 3,

20146 Hamburgo, Alemania, ja_sa@web.de
Ulrich K SchliewenDepartamento de Ictiología, Colección Estatal de Zoología de

Baviera (ZSM), Münchhausenstr. 21, 81247 München, Alemania, schliewen@zsm.
mwn.de
Harald SchneiderInstituto Albrecht-von-Haller de Ciencias de las Plantas, Universidad Georg-

August, 37073 Göttingen, Alemania y Departamento de Botánica, Museo de Historia Natural,
Londres, SW7 5BD, Reino Unido, h.schneider@nhm.ac.uk
Roberto SchreiberMuseum für Naturkunde Berlin, Leibniz Institute for Research on

10115 Berlin, Alemania
Christoph D SchubartBiologie 1, Institut für Zoologie, Universität Regensburg,

93040 Regensburg, Alemania, christoph.schubart@biologie.uni-regensburg.de
XXIV Colaboradores
Wolfram SchulzeFisiología animal, Universidad de Bayreuth, Universitätsstraße 30,

95440 Bayreuth, Alemania, wschulze@biologie.uni-erlangen.de
Alfredo Seitz ({)Institut für Zoologie, Abteilung Ökologie, Universität Mainz,

Saarstrasse 21, 55099 Mainz, Alemania
mota de thomasAbert-Ludwigs-Universität-Freiburg, Freiburg, Alemania
Thomas StadlerGenética Ecológica de Plantas, ETH Zurich, Instituto de Biología

Integrativa, Universitätstrasse 16, 8092 Zurich, Suiza, thomas.staedler@env. ethz.ch
Jesper T. StenderupBiologie 1, Institut für Zoologie, Universität Regensburg, 93040

Regensburg, Alemania y Museo de Historia Natural de Dinamarca, Universidad de
Copenhague, 1350 København, Dinamarca
wolfgang stephanDepartamento de Biología II, Sección de Biología Evolutiva,

Universidad de Munich (LMU), Grosshaderner Strasse 2, 82152 Planegg-
Martinsried, Alemania, stephan@bio.lmu.de
Viviane SternkopfDeutsches Meeresmuseum, Katharinenberg 14-20, 18439

Stralsund, Alemania
johannes stöklInstituto de Ecología Experimental, Universidad de Ulm, Albert-

Einstein-Allee 11, 89069 Ulm, Alemania e Institut für Zoologie, AG Chemische
Ökologie, Universität Regensburg, Universitätsstraße 31, 93053 Regensburg,
Alemania, johannes.stoekl@biologie.uni-regensburg . Delaware
Günter TheissenFriedrich Schiller Universität Jena, Jena, Alemania
Mike ThivStaatliches Museum für Naturkunde Stuttgart, Rosenstein 1, 70191

Stuttgart, Alemania, mike.thiv@smns-bw.de
Ralph TiedemannUnidad de Biología Evolutiva/Zoología Sistemática, Instituto de

Bioquímica y Biología, Universidad de Potsdam, Karl-Liebknecht-Strasse 24-25,
Haus 26, 14476 Potsdam, Alemania, Tiedeman@uni-potsdam.de
Teja TscharntkeGeorg-August Universität Göttingen, Göttingen, Alemania
Tomas UzzellLaboratorio de Sistemática Molecular y Ecología, Academia de

Ciencias Naturales, 1900 BF Parkway, Filadelfia, PA 19103, EE. UU.
Andrea VaupelPhilipps-Universität Marburg, Marburg, Alemania

Colaboradores xiv
miriam vogelUniversidad de Sistemática Molecular de Plantas de Kassel, 34109 Kassel,

Alemania
Heike WageleZoologisches Forschungsmuseum Alexander Koenig, Bonn, Alemania,

hwaegele@evolution.uni-bonn.de
Tobias WeilBiologie 1, Institut für Zoologie, Universität Regensburg, 93040

Regensburg, Alemania
kurt weisingPlant Molecular Systematics, Universidad de Kassel, 34109 Kassel,

Alemania, weising@uni-kassel.de
robar oesteFacultad de Matemáticas, Informática y Tecnología, The Open University,

Abbots Hill, Gateshead NE 83DF, Reino Unido e IRES, Universidad de Newcastle,
Newcastle-upon-Tyne, NE1 7RU, Reino Unido
Tomas WilkeDepartamento de Ecología Animal y Sistemática, Arbeitsgruppe

Tierökologie, Universidad Justus Liebig, Heinrich-Buff-Ring 26-32, 35392 Gießen,
Alemania, tom.wilke@allzool.bio.uni-giessen.de
Volker WissemannJustus-Liebig-Universität Giessen, Institut für Allgemeine Botanik

& Pflanzenphysiologie, AG Spezielle Botanik, Heinrich-Buff-Ring 38, 35390 Giessen,
Alemania, volker.wissemann@bot1.bio.uni-giessen.de
Tina WohrmannSistemática Molecular de Plantas, Universidad de Kassel, 34109

Kassel, Alemania
Parte I
Enfoques en Botánica
Radiaciones rápidas y neoendemismo en el punto
crítico de biodiversidad de Madagascar
Harald Schneider, Thomas Janssen, Nadia Byrstiakova, Jochen Heinrichs,

Sabine Hennequin y France Rakotondrainibe
AbstractoEste estudio registró evidencia de tres radiaciones rápidas independientes de helechos

arborescentes escamosos en Madagascar. Estas tres radiaciones ocurrieron a fines del Cenozoico y
probablemente fueron provocadas por las fluctuaciones del clima global. Es el primer informe de
este tipo de relaciones de diversidad de helechos en el centro de biodiversidad de Madagascar y el
cambio climático, pero es consistente con informes similares para otros linajes ricos en especies en
los megadiversos hábitats de la selva tropical de Madagascar. Finalmente, generamos un escenario
biogeográfico que describe el origen de los tres clados malgaches de helechos arborescentes
escamosos. También encontramos evidencia de pérdida de rango como resultado de la
deforestación en tiempos históricos. El sistema presentado es un excelente ejemplo de la
contribución de las radiaciones rápidas a la biodiversidad altamente amenazada de Madagascar y las
islas adyacentes.
H. Schneider (*)
Departamento de Botánica, Museo de Historia Natural, Londres SW7 5BD, Reino Unido Instituto Albrecht-
von-Haller de Ciencias Vegetales, Universidad Georg-August, 37073 Göttingen, Alemania
correo electrónico: h.schneider@nhm.ac.uk
T. Janssen
Instituto Albrecht-von-Haller de Ciencias Vegetales, Universidad Georg-August, 37073 Göttingen,
Alemania
Jardín Botánico Nacional de Bélgica, Dominio Bouchout, Nieuwelaan 38, 1860 Meise, Bélgica
N. Byrstiakova
Departamento de Botánica, Museo de Historia Natural, Londres SW7 5BD, Reino Unido
Departamento de Ciencias Vegetales, Universidad de Cambridge, Cambridge CB2 3EA, Reino Unido
J.Heinrichs
Instituto Albrecht-von-Haller de Ciencias Vegetales, Universidad Georg-August, 37073 Göttingen,
Alemania
S. Hennequín
Departamento de Botánica, Museo de Historia Natural, Londres SW7 5BD, Reino Unido
F. Rakotondrainibe
Dpto. Systematique et Evolution, Museo Nacional de Historia Natural, UMR-CNRS 5202, CP 29, 75231
París, Cedex 05, Francia
M. Glaubrecht (ed.),evolución en acción, 3

DOI 10.1007/978-3-642-12425-9_1, # Springer-Verlag Berlín Heidelberg 2010
4 H. Schneider et al.
1 Introducción
Las radiaciones adaptativas son ampliamente aceptadas como uno de los principales procesos
en la acumulación de biodiversidad en las islas oceánicas, como lo ilustran ejemplos clásicos
como los pinzones de Darwin en las islas Galágagos y las espadas plateadas de Hawai
(Schluter2000; Gavrilets y Losos2009; Losos y Ricklefs2009). El aislamiento geográfico, que
restringe la colonización de estas islas por nuevos taxones o genotipos, aumenta las
oportunidades para que los colonizadores exitosos no solo ocupen su nicho preferido, sino
también para adaptarse a los nichos actualmente desocupados mediante la transformación de
sus preferencias de nicho. Islas aisladas, por ejemplo, islas oceánicas como Hawai y
Galápagos, brindan nuevas oportunidades ecológicas para los pocos colonizadores exitosos.
Por lo tanto, son de especial interés para los biólogos evolutivos porque permiten el estudio
de los procesos evolutivos en un marco macroecológico/macroevolutivo bien definido. Los
pocos colonizadores exitosos pueden ser los fundadores de nuevos linajes por una rápida
diversificación y/o por la evolución de rasgos que sus ancestros en el continente no explotaron
como resultado de la competencia de parientes cercanos. Un ejemplo clásico es la madera de
la isla. Aunque las radiaciones adaptativas están bien estudiadas para varios archipiélagos
insulares como Hawai, Galápagos y las islas Canarias, su importancia para el centro de
biodiversidad de Madagascar es menos conocida. La región de Madagascar está compuesta
por los fragmentos continentales de Madagascar y las Seychelles más las cadenas de islas
volcánicas de las Comoras y las Mascarenas (Vences et al.2009). La región, pero especialmente
el propio Madagascar, es famosa por su biodiversidad única y está clasificada como uno de los
puntos críticos de biodiversidad más importantes del mundo en función de la riqueza de
especies y el número de especies endémicas (Myers et al.2000; Kier et al.2009; Lagabrielle et
al.2009). Estudios evolutivos recientes establecieron a Madagascar como una de las
principales regiones modelo para la comprensión de la acumulación de altas tasas de
endemismo por la combinación de la rareza de los eventos de colonización, las radiaciones
adaptativas y las fluctuaciones climáticas (Vences et al. 2009).
Las islas oceánicas Mascareñas, ubicadas en el Océano Índico occidental, tienen una
importancia similar con respecto a nuestra comprensión de los procesos evolutivos y la
conservación de su biodiversidad única (Kier et al. 2009; Lagabrielle et al. 2009). Las dos
islas principales, Mauricio y Reunión, proporcionan un laboratorio natural único para el
estudio de los procesos evolutivos. Comparten muchas características, como el clima
general, la distancia promedio a la siguiente masa terrestre más grande y su origen
como islas volcánicas, pero difieren profundamente entre sí en su edad y diversidad de
hábitat actual (Tabla1).
Desafortunadamente, esta diversidad única del centro de biodiversidad de Madagascar
está altamente amenazada y es imperativo establecer estrategias de conservación efectivas
(Allnut et al.2008; Kremen et al.2008; Lagabrielle et al.2009; Vences et al.2009). Para hacerlo,
necesitamos con urgencia una evaluación mucho más completa de la biodiversidad de la
región, especialmente considerando el impacto potencial del calentamiento global del clima.
Los grupos ricos en especies son un desafío particular para la conservación porque pueden
estar formados por radiaciones adaptativas y/o rápidas, y la
Radiaciones rápidas y neoendemismo en el punto crítico de biodiversidad de Madagascar 5
tabla 1Descripción general de la diversidad taxonómica de los helechos arborescentes escamosos en el

punto crítico de biodiversidad de Madagascar (TSnúmero total de especies,TTnúmero total de taxones;ES
porcentaje de taxones endémicos) y diversidad física como clasificación de las islas, sustrato principal, edad
de las islas y tamaño de la(s) isla(s). Estas islas se clasifican como fragmentos continentales (CF) o islas
oceánicas (OC). La edad máxima proximal de la isla se da en base a la evidencia más antigua de la formación
de la isla como resultado de la actividad volcánica en el caso de islas oceánicas o evidencia de la separación
de otros continentes en el caso de fragmentos continentales. AFR indica la edad de la separación de África,
IND la edad de la separación de la India. Las Comoras más Mayotte incluyen varias islas de diferentes edades
con una edad máxima de 15 millones de años para la isla más antigua existente del grupo.
TS TT ES (%) Origen Sustrato principal Edad Tamaño Km2
Comoras incl. Mayotte 3 4 25 OI Volcánico <15 2,236

Madagascar 47 63 96 FC Granítico - 130 AFR 587,040
- 88 IND.
Mauricio 4 5 60 OI Volánico - 7.8 1,860
Reunión 4 4 50 OI Volcánico - 2.1 2,512
Seychelles 1 1 100 FC Granítico - 75 AF 455
la diferenciación morfológica puede ser a menudo críptica. Por lo tanto, la evaluación de esta
megadiversidad utilizando enfoques taxonómicos tradicionales puede haber subestimado enormemente el
número de especies y, por lo tanto, engañado a las actividades de conservación (Andreone et al.,2008; Vieites
et al.2009).
Estudios recientes sobre linajes que incluyen muchos endémicos malgaches han
encontrado evidencia de colonización repetida de África en el Terciario con eventos de
radiación posteriores (Douady et al.2002; Yoder et al.1996,2003; Yoder y Yang 2004;
Raselimananana et al.2009; Tsy et al.2009). Se han informado mecanismos opuestos, fuera de
las migraciones de Madagascar, para algunos linajes como los camaleones (Raxworthy et al.
2002). Otros estudios encontraron evidencia de supervivencia a largo plazo y eventos de
especiación recientes a lo largo de gradientes ecológicos y/o en respuesta a fluctuaciones
climáticas terciarias y cuaternarias (Raxworthy et al.2003; Townsend et al.2009; Vences et al.
2009). Por lo tanto, es probable que la diversidad actual de Madagascar y las islas adyacentes
sea el resultado de una combinación única de factores, como el aislamiento desde la ruptura
con India que permitió la acumulación lenta de biodiversidad, la colonización por taxones
africanos con radiaciones adaptativas posteriores y especies rotación como resultado de las
fluctuaciones climáticas en los últimos 10 millones de años.
Las ciencias evolutivas se basan principalmente en la investigación inductiva (Losos y Ricklefs
2009). Las conclusiones generales, como la importancia de la radiación adaptativa, requieren la
acumulación de estudios de casos que exploren la evidencia utilizando enfoques analíticos
alternativos y una amplia gama de taxones. Hasta ahora, los helechos han sido ampliamente
ignorados en los estudios sobre radiación adaptativa, especialmente en Madagascar. Hasta 2005, ni
un solo estudio se centró en el origen de la diversidad de helechos de la región de Madagascar. Este
estudio actual fue diseñado para superar esta deficiencia en nuestro conocimiento actual del origen
de la diversidad de helechos de la región de Madagascar. Los helechos malgaches comprenden más
de 500 especies de las cuales más del 20% son probablemente endémicas de la región (Tabla1;
Jansen et al.2008).
2 Enfoque de investigación
2.1 Taxonomía
Al evaluar la diversidad de especies de helechos arborescentes escamosos en la región de

Madagascar, la cuenta taxonómica se generó mediante un extenso trabajo de campo y un estudio
exhaustivo de los especímenes de herbario depositados en las principales colecciones de herbarios
de la región de Madagascar. El trabajo de campo incluyó una extensa visita de recolección en
Madagascar, pero también visitas a las Comoras, Mascarenes, Seychelles y Tanzania por parte de TJ
y/o FRTJ. También visitaron Sri Lanka para estudiar los helechos arborescentes escamosos de esa isla
porque se sugirieron relaciones entre los helechos arborescentes escamosos de Madagascar y
Ceilán. por Holttum (1981).
2.2 Filogenia
Al reconstruir las relaciones filogenéticas de los helechos arborescentes escamosos que se

encuentran en la región de Madagascar, se deben abordar dos preguntas clave. Primero,
necesitábamos establecer evidencia de clados que se diversificaron en la región de
Madagascar y, segundo, queríamos determinar las relaciones de los helechos arborescentes
escamosos de Madagascar con parientes que se encuentran en otras partes del mundo.
Aprovechamos el estudio de Korall et al. (2007) quienes establecieron un marco filogenético
para estos helechos usando un muestreo mundial representativo. El estudio de Korall et al. (
2007) se basa en secuencias de ADN de cinco regiones del genoma plástido, por ejemplo,rbcL,
rbcL-accDespaciador intergénico,rbcL-atpBespaciador intergénico,trnG-trnRregión, y latrnL-
trnF región. Las mismas regiones fueron secuencias para 51 muestras de helechos
arborescentes escamosos que se encuentran en el área de Madagascar, incluidas las
Seychelles y las Mascareñas (Janssen et al.2008). El muestreo cubre más del 70% de la
diversidad taxonómica del área. También se incluyeron tres especies endémicas de Sri Lanka
para poder probar la hipótesis de Holttum mencionada anteriormente. El muestreo incluye al
menos un solo espécimen para casi todos los taxones reconocidos en la revisión taxonómica
basada en la morfología. Estas nuevas secuencias se combinaron con los datos de secuencia
utilizados previamente por Korall et al. (2007) y la alineación ajustada manualmente. El
alineamiento de secuencias se empleó para reconstruir la filogenia utilizando procedimientos
analíticos filogenéticos estándar que incluyen máxima parsimonia, máxima verosimilitud e
inferencia bayesiana de filogenia (ver Janssen et al.2008).
2.3 Marcadores nucleares
Las secuencias de la región del genoma nuclear se utilizaron para explorar las relaciones reveladas
por las secuencias del genoma de plástidos. Los genomas plástidos generalmente se heredan
maternalmente en helechos (Gastony y Yatskievych1992; Vogel et al.1998) y no nos permiten

reconocer la introgresión y la hibridación sin considerar otras pruebas. Tanto la hibridación
como la introgresión pueden identificarse por la incongruencia entre las hipótesis
filogenéticas obtenidas por marcadores de herencia potencialmente biparental, como las
secuencias del genoma nuclear. Varios marcadores nucleares, por ejemplo,brechaCp, LFY,y
pgiC,fueron probados originalmente para la consistencia y la calidad de los productos de
secuencia. Las regiones probadas inicialmente se han estudiado previamente para otros
linajes de helechos (Schuettpelz et al.2008; Pastor et al.2008). No obtuvimos productos de PCR
consistentemente buenos debrechaCpypgiCpero hizo deLFY.El LFYLos cebadores utilizados
fueron diseñados por A. Driskoll (http://www.uvm.edu/%7Ebarring/barrprotos.html) y
empleado por primera vez para helechos arborescentes escamosos (SH, comunicación
personal). La filogenia del intrón 2 de la copia única.LFYse reconstruyó utilizando los mismos
análisis filogenéticos que para la filogenia de los plástidos. Ambas filogenias se compararon
visualmente por incongruencia.
2.4 Establecimiento de hipótesis biogeográficas
Los rangos de distribución ancestral se estimaron utilizando diferentes enfoques que

aprovechan el marco filogenético generado al maximizar la reconstrucción del área
ancestral utilizando la máxima parsimonia o la máxima verosimilitud. Además, se
realizaron análisis DIVA y Bayesiano-DIVA (Ronquist1997; Nylander et al.2008). Los
análisis DIVA se basan en un modelo explícito de historia biogeográfica al considerar la
dispersión y la vicarianza como los dos procesos principales, mientras que los análisis
DIVA bayesianos no se basan en un solo árbol óptimo sino que tienen en cuenta la
incertidumbre filogenética. Los rangos de especies se clasificaron en cinco clases,
porque solo estamos interesados en el origen global de los helechos arborescentes
escamosos que se encuentran en la región de Madagascar. Las clases son “Neotropical”
para especies que se encuentran en América del Sur, América Central y el Caribe, “Asia a
Australasia” para especies que se encuentran en Asia continental, Sri Lanka, a lo largo de
Malasia hasta Australia y Nueva Zelanda, y “África” para especies que se encuentran en
África continental. Las especies que se encuentran en las Comoras, Madagascar,
Mascarenes y Seychelles se dividieron en dos clases. Un grupo incluye solo las especies
malgaches,
2.5 Estimaciones de tiempo de divergencia
Para reconstruir el marco de tiempo de la divergencia de los helechos arborescentes escamosos

malgaches, los tiempos de divergencia se estimaron utilizando la restricción de variación de la
secuencia de ADN por evidencia fósil. Utilizamos diferentes enfoques para estimar los tiempos de
divergencia utilizando los paquetes de software r8s (Sanderson 2002) y BEAST (Drummond y
Rambaut 2007). Los análisis que supusieron un reloj molecular relajado nos proporcionaron los
resultados más convincentes (Janssen et al.2008).
2.6 Modelado de nicho
Para explorar la evolución del nicho climático utilizando modelos de rango de distribución, los datos
de distribución se utilizan para estimar las preferencias de nicho climático de cada especie y sus
respectivos grupos de especies relacionadas, por ejemplo, todos los helechos arborescentes
escamosos de Madagascar (ver Janssen et al.2008). Este enfoque se utilizó para reconstruir el nicho
climático fundamental y, posteriormente, para estimar el rango de distribución fundamental de estos
taxones en las condiciones climáticas actuales, pero también con diferentes regímenes de humedad
y temperatura, como los escenarios que predicen el clima malgache en el último mínimo glacial
(LGM, 18). BYA).
3 resultados
3.1 Revisión taxonómica
La revisión de los helechos arborescentes escamosos de la región de Madagascar resultó en la

descripción de 12 nuevas especies para Madagascar y 1 nueva especie para Mauricio (Janssen
y Rakotondrainibe2006,2007,2008). Además, ahora se reconocen varias variedades nuevas
(Fig.1). El número combinado de nuevas especies y nuevas variedades resultó en un aumento
sustancial (>25%) del número conocido de helechos arborescentes escamosos que se
encuentran en la región de Madagascar: 24 para Madagascar y 2 para Mauricio (Tabla1).
3.2 Filogenia del helecho arborescente escamoso
Las especies de helechos arborescentes escamosos de la región de Madagascar pertenecen a tres

clados que corresponden a grupos morfológicamente distintos. El primer clado incluye especies sin
indusia y está anidado dentro delgimnosferaclado. El segundo clado incluye especies indusio- nadas
con hojas tripinadas, mientras que el tercer clado consta de especies indusio- nas con hojas
bipinnadas (Fig.1). Estos dos clados están anidados dentro delTambiénphilaclado pero no
estrechamente relacionados entre sí (Fig.2). Estos tres clados incluyen especies exclusivamente que
se encuentran en la región de Madagascar o también especies africanas además de las especies de
Madagascar. El clado hermano de dos de los tres clados se encuentra en África, mientras que el
taxón hermano de un clado se encuentra en el Neotrópico, especialmente en el Caribe. Las especies
de Ceilán forman un clado anidado dentroTambiénphilapero no estrechamente relacionado con
ninguna de las especies de Madagascar (Fig.2).
3.3 Radiaciones de helechos arborescentes escamosos en Madagascar
La estimación del tiempo de divergencia recuperó evidencia de tres radiaciones rápidas de helechos
arborescentes escamosos en la región de Madagascar, una para cada clado. Nuestros análisis no sugirieron
Figura 1Introducción a los tres clados de helechos arborescentes escamosos que se encuentran en
Madagascar y la región adyacente. El hábito de un representante típico se da para cada clado más imágenes
del ápice del brote de dos representantes adicionales. Elmapasdescriba la distribución de cada clado,
incluido el número de taxones en las Seychelles, las Comoras, las Mascareñas y Madagascar. La primera
número corresponde al número total de especies mientras que elnúmero entre paréntesiscorresponde al
número total de taxones (especies y variaciones).EnojadoMadagascar,mascotaMascareñas
Figura 2Cronograma simplificado de los helechos arborescentes con los rangos de distribución indicados en
base a Janssen et al. (2008). Se da una escala de tiempo simplificada en elabajode la figuraPensilvania
paleoceno, OEEoceno,OLOligoceno,MIMioceno,ESPlioceno. Elcolorde los clados corresponde a los rangos de
distribución dados en elcolumna derecha. ENOJADOMadagascar,MASMascareñas.Estrellasindican una
secuencia de dispersión seguida de eventos de vicariancia. Elcolorindica la ocurrencia de cada clado:azul
brillanteAsia a Australasia más algunas especies en el Neotrópico,azul oscuroneotrópico, verdeAsia a
Austasia,naranjaMadagascar y regiones adyacentes,rojoÁfrica. El gráfico de estimación de temperatura
global se basa en Haq et al. (1987) e indica las fluctuaciones. Elbarra gris indica el período en el que se inician
las tres radiaciones de helecho arborescente escamoso malgache
la colonización exitosa de Madagascar como desencadenante de las radiaciones debido al

período de tiempo recuperado de la posible colonización más temprana y el inicio de las
radiaciones observadas. El inicio temporal de las tres radiaciones cae en el Plioceno o el
Pleistoceno más antiguo (Janssen et al.2008). Este período de tiempo se caracteriza por fuertes
fluctuaciones climáticas con una tendencia general a climas globales más fríos. Varios otros
estudios han encontrado evidencia de una coincidencia similar de radiaciones rápidas o
eventos de divergencia similares en linajes que son ricos en especies en Madagascar. De
acuerdo con otros autores, sospechamos que la fluctuación climática del Terciario tardío es la
causa principal de la diversidad única de la selva tropical malgache (Fig.2).
3.4 Comparación de la distribución de corriente y la distribución

fundamental
La distribución actual se estimó trazando las ocurrencias de especímenes de herbario y nuestra

propia observación de campo en el mapa de Madagascar (Fig.3a). La distribución actual está
íntimamente ligada a la preservación de las selvas tropicales. La diversidad de especies es
especialmente alta en áreas que se sabe que están bien recolectadas y, por lo tanto, la falta de
registros puede reflejar en cierta medida las actividades de recolección limitadas en muchas áreas de
Madagascar. Sin embargo, la estimación de la distribución fundamental de los helechos
arborescentes en Madagascar indicó un rango de distribución mucho más amplio que el indicado
por la distribución observada (Fig.3b). La fuerte diferencia entre la distribución prevista y observada
indica una pérdida significativa de hábitats en tiempos históricos. La razón probable es la
deforestación de grandes áreas de Madagascar desde que llegaron los primeros colonos humanos.
La estrecha correlación entre la distribución de helechos arborescentes escamosos y la presencia de
selvas tropicales sugiere que estas especies serán excelentes indicadores en los estudios de
conservación centrados en los hábitats de las selvas tropicales. Los helechos arborescentes se
detectan fácilmente, pero la identificación de especies es difícil para los no expertos. Un aspecto
interesante de los helechos arborescentes escamosos de Madagascar es su adaptación a climas más
estacionales en comparación con otros helechos arborescentes escamosos (Fig.3c) (Janssen et al.
2008; Bystriakova et al., en preparación). Los tres linajes malgaches de helechos arborescentes
escamosos muestran el mismo cambio notable en sus preferencias de nicho climático. Sin embargo,
actualmente carecemos de suficientes observaciones para establecer una hipótesis que describa la
diferenciación ecológica entre las especies malgaches con la excepción de las especies que se
encuentran en las islas Mascareñas.
3.5 Helechos arborescentes escamosos en las Islas Mascareñas
Las dos islas principales de la isla de Mascarene, Reunión y Mauricio, albergan números
de especies similares (ver Tabla1), pero el patrón se vuelve considerablemente más
complejo si se tienen en cuenta las relaciones filogenéticas. Una de las cuatro especies
en cada isla es la invasoraCyathea (Sphaeropteris) cooperieso es
a b
Tsaratanana
Marojejs
1–2
3–4
5–6
Manongarivo
7–8
9–10
11–12
13–14
Anjanaharibe
15–16
Masoala
> 16
Lago Alaotra
región
Región de Andasibe
C
Ranomafana
5
Andringitra
lvohibe 4
Andohahela 2
1
OMI1 eje 1
0 1 2 3 4 5
OMI eje 2
Fig. 3Distribución geográfica de los helechos arborescentes escamosos en Madagascar. (a)Distribución

actual en Madagascar basada en colecciones de herbario y observaciones de campo. Elverde sombreado
corresponden a áreas forestales bien conservadas. El código de color indica el número de registros para
cada cuadrícula (consulte, para obtener información adicional, Janssen y Rakotondrainibe2008). (b)Rango de
distribución fundamental de helechos arborescentes escamosos en Madagascar y Comoras como se predijo
en nuestros análisis de modelado de nicho (Bystriakova, sin publicar). (C)Ordenación de las preferencias de
nicho climático de los helechos arborescentes (Janssen et al.2008; Bystriakova et al., en preparación).
cuadrados anaranjadosindican especies de Madagascar, mientras que los otros colores indican: Africano (
rojo),Neotropical (azul),y asiático/austalasiano (verde)especies. Las especies de Madagascar muestran
preferencias climáticas muy similares y son distintas de las especies no malgaches con la excepción de las
especies africanas (Bystriakova et al., en preparación).
una amenaza potencial para la diversidad de helechos arborescentes nativos en los hábitats de las
tierras bajas. Este taxón generalmente se encuentra en hábitats fuertemente influenciados por
actividades humanas. Las otras especies son endémicas de las Mascareñas. En Reunión, una de las
tres especies autóctonas, Cyathea (Alsophila) borbonicavariedadborbónica,pertenece al clado
bipinnado, los otros dos al clado tripinnado. Estas dos especies hermanas,C. (Alsophila) excelsa
yC. (Alsophila) glauca,muestran diferenciación ecológica. El primero ocurre de 200 a 1700 m,

mientras que el segundo ocurre de 1300 a 2000 m. Cyathea excelsatambién se encuentra en
Mauricio, mientras queC. glaucano se conoce desde allí, lo que es de esperar dado que el
punto más alto de Mauricio está por debajo de los 1.000 m. Sin embargo, nuestros datos
actuales no nos permiten explorar la hipótesis de queC. glauca tiene su origen en Reunión.C.
excelsayC. glaucapuede haber sido separado en Mauricio y colonizado de forma
independiente Mauricio.C. glaucapuede haberse extinguido en Mauricio como resultado de la
costumbre. Mauricio fue una vez más como Reunión hoy como resultado del vulcanismo
activo, como se observa en Reunión. El paisaje actual de Mauricio es principalmente el
resultado de la erosión desde el final de la fase activa del vulcanismo. Se encontró un patrón
muy diferente enC. (Alsophila) borbónica,que incluye solo una variedad en las selvas tropicales
de las tierras bajas de Reunión, pero dos variantes distintivas en Mauricio. La diversidad de
raros taxones locales endémicos de Mauricio se incrementa aún más por Cyathea (Alsophila)
grandgaudianaque combina las hojas bipinnadas con la aparición de esporangios abortados.
Este personaje también es conocido por el tripinnato
C. sobresale,pero no se sabe si la combinación de caracteres indica hibridación entre helechos
arborescentes escamosos bipinnados y tripinnados en Mauricio. La evidencia actual es
insuficiente para explorar la fragmentación como la causa del establecimiento de las especies
endémicas de Mauricio.
4 perspectivas
Nuestro estudio informa el primer ejemplo completo de una radiación de helecho en Madagascar.
Recientemente, también se ha sugerido un segundo ejemplo para el géneroElaphoglossum (Vasco et
al.2009), pero este ejemplo todavía necesita un análisis biogeográfico más rígido. Estudios similares
sobre otros linajes de helechos serán de gran interés porque no todos los linajes pueden mostrar
una radiación en Madagascar, sino que pueden proporcionar mejores conocimientos sobre el
intercambio de diversidad de plantas entre Madagascar y otras áreas como África y Asia. Hasta el
momento, no tenemos ninguna indicación de una especie de helecho que se encuentre en
Madagascar que remonte su separación de sus parientes a la época de Gondwana. En contraste, los
helechos se unen a los linajes que contienen señales del importante impacto de las radiaciones del
Cenozoico tardío en la diversificación de los taxones de la selva tropical en Madagascar.
Los helechos arborescentes se encuentran principalmente en las partes tropicales húmedas de

Madagascar y son fáciles de detectar y registrar. Por lo tanto, son extremadamente adecuados para
evaluar la existencia de parches de selva tropical relativamente intactos, pero la identificación de las
especies requiere experiencia. Cada vez está más claro que la biodiversidad de Madagascar solo
puede protegerse en algunas áreas seleccionadas (Kremen et al.2008), y la presencia de helechos
arborescentes escamosos puede ser un buen criterio para los hábitats de selva tropical.
El bajo nivel de diferenciación genética en el genoma de los plástidos limita el estudio de los
procesos evolutivos, especialmente la diferenciación ecológica entre las especies de helechos
arborescentes escamosos. Los estudios futuros deberán centrarse en el establecimiento de más
marcadores variables tales como polimorfismos de un solo nucleótido (SNP). La inversión en este tipo de
marcadores se verá bien recompensada porque los helechos arborescentes escamosos de Madagascar
ofrecen oportunidades únicas para estudiar aspectos ecológicos y genéticos de la especiación de helechos/
plantas en los trópicos, pero también para comprender los procesos de radiaciones rápidas.
AgradecimientosEste proyecto fue apoyado por Deutsche Forschungsgemeinschaft (SCHN758/2-1)

como parte de Schwerpunkt Radiationen y por National Geographic Society (7702-4). Estamos muy
agradecidos a los colaboradores, que apoyaron nuestro trabajo de campo o proporcionaron material
para la secuenciación, y a los curadores de varios herbarios, que nos permitieron acceder a sus
colecciones.
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Radiación rápida en el género CebadaHordeo
(Poaceae) Durante el Pleistoceno en las Américas
Frank R. Blattner, Thekla Pleines y Sabine S. Jakob
AbstractoSe encontró evidencia de una rápida radiación del género gramíneasHordeoen las Américas
durante los últimos 2 millones de años, acumulando 23 especies en América del Sur y del Norte, mientras
que sólo 10Hordeoespecies se encuentran en otras regiones del mundo. Las diferencias en la riqueza de
especies son causadas por distintos mecanismos evolutivos en las Américas y Eurasia, como se recupera
mediante la integración de análisis filogenéticos y filogeográficos con modelos de nichos ecológicos. La
región de Eurasia se caracteriza principalmente por una pérdida de biodiversidad durante las glaciaciones
del Pleistoceno, mientras que en las Américas tuvo lugar una intensa especiación durante este período de
tiempo. Por lo tanto, la especiación en Eurasia se vio afectada principalmente por cuellos de botella
genéticos severos, probablemente debido a que las pequeñas poblaciones sobrevivieron en los refugios de
la edad de hielo, mientras que tales restricciones en los grupos de especies del Nuevo Mundo parecen
menos pronunciadas. Particularmente en el sur de la Patagonia, la especiación se debió a múltiples
subdivisiones geográficas de poblaciones relativamente grandes durante el último millón de años. sin una
reducción medible de la diversidad genética o el tamaño de la población. Esto, junto con la colonización a
larga distancia de áreas remotas, fue la causa principal de la diversidad de especies en el Nuevo Mundo.
1. Introducción
Hordeocomprende unas 33 especies y pertenece junto con otros cereales, como el trigo y el
centeno, y varias gramíneas forrajeras importantes, a la tribu de las gramíneas Triticeae.
Hordeo se caracteriza por tres espiguillas de una sola flor (trillizos) en cada nudo del raquis de
la inflorescencia, las laterales a menudo estériles o solo presentes rudimentariamente. La
especie económicamente más importante del género es la cebada,H. vulgare,que se utiliza
para alimentar al ganado, como harina en el consumo humano, y malteada para cerveza y
FR Blattner (*), T. Pleines y SS Jakob

Instituto Leibniz de Genética Vegetal e Investigación de Cultivos (IPK), Corrensstraße 3, 06466 Gatersleben,
Alemania
correo electrónico: blattner@ipk-gatersleben.de

18 FR Blattner et al.
Figura 1Ejemplos deHordeoespecies. Deizquierdaaderecha: H. marinumdel suroeste de Europa,

H. brachyantherumdel oeste de América del Norte, inflorescencias florecientes deH. patagonicum,y
H. comosumdel sur de América del Sur
producción de whisky.Hordeolas especies se distribuyen naturalmente por todo el hemisferio

norte, en Sudáfrica y en el sur de América del Sur. Con 16 especies nativas, esta última región
es también el principal centro de diversidad de especies (von Bothmer et al.1995). La especie
casi siempre se encuentra en hábitats abiertos (Fig.1), a menudo en vegetación esteparia o de
pradera, a lo largo de arroyos y acequias, muchas en suelos con influencia salina y, en la
actualidad, también en hábitats perturbados a lo largo de calles y canales de riego dentro de
sus áreas de distribución natural. Algunas especies como la cebada de pared (H. murinum) y
cebada de mar (H. marinumyH. gussoneanum)se han introducido casi en todo el mundo en
regiones templadas y secas, y ahora se encuentran como malas hierbas en hábitats agrícolas y
alterados. Varios tratamientos taxonómicos deHordeoexistir. Las opiniones más extremas son
las de Dewey (1984) y amor (1984) quien dividió al grupo enHordeos.str., que consta devulgare
ovulgareyH. bulbosum, mientras que todas las demás especies se incluyeron en el género
Criterio.Este concepto de delimitación genérica no fue generalmente aceptado, y von Bothmer
et al. (1995) en su última revisión del género mantuvieron la circunscripción tradicional como
un solo género.
La delimitación infragenérica también ha cambiado varias veces durante las últimas

décadas, involucrando criterios como el ciclo de vida o la longitud de la arista (Nevski
1941). Von Bothmer y Jacobsen (1985) reconoció cuatro secciones,Hordeum, Anisolepis,
Stenostachys,yCriterio.Estas secciones se mantuvieron en la revisión del género de 1995,
aunque los datos citogenéticos no apoyaron completamente esta clasificación y los
autores afirmaron que podría ser artificial (von Bothmer et al.,1995). Petersen y Seberg (
2003) propusieron un nuevo tratamiento seccional del género basado en análisis
filogenéticos de datos de ADN nuclear y de cloroplasto de una sola copia. Delimitaron
cuatro secciones diferentes de von Bothmer et al. (1995):Hordeo, Sibirica, Stenostachys,y
Criterio.Aunque se basa en una interpretación filogenética de los datos de la secuencia
de ADN, esta nueva clasificación también contradecía los resultados citogenéticos
anteriores, ejemplificados por la definición de los llamadosgenomasenHordeo y otros
taxones de Triticeae. Dentrohordeo,Se han descrito cuatro genomas,
Radiación rápida en el género CebadaHordeo (Poaceae) Durante el Pleistoceno 19
2x 4x 6x
H. intercede
H. euclastón H. depresión
H. pusillum H. arizonicum ( )
H. erectifolium
C Argentina-Perú
H. stenostachys H. procerum
S patagonia
América del norte H. cordobense H.fuegianum H. parodii
C y E de Asia H. muticum H. tetraploídio
Sudáfrica H. pubiflorum
Oeste de Eurasia
H. patagonicum
H. Lechleri
H. comosum H. guatemalense
H. flexuosum
H. chilense H.jubagirar
especies extintas H. brachyantherem H. brachyantherum
H. californicum H. capense
I H. roshevitzii H. secalinum
H. brevisubulatum H. brevisubulatum H. brevisubulatum
H. bogdanii
H. marinum
Xa H. gussoneanum H. gussoneanum
especies extintas
especies extintas H. murinum lep. H. murinum lep.
xu H. murinum glauc. H. murinum mur.
H. bulbosum H. bulbosum
H vulgare
12 10 8 6 4 2 0
millones de años antes del presente
Figura 2Esquema que representa nuestra comprensión actual de las relaciones filogenéticas entre Hordeoespecies
(modificado de Blattner2009). Se deriva de análisis de secuencias de datos ITS de ADNr nuclear para todas las
especies (Blattner2004), ITS, DMC1 y EF-G para taxones diploides (Blattner 2006), huellas dactilares AFLP para las
especies americanas diploides estrechamente relacionadas (Pleines y Blattner 2008), y para algunos grupos de
especies también cloroplastotrnSecuencias LF (Jakob y Blattner2006). Los diploides (2-) se dibujan directamente en las
ramas del árbol filogenético, mientras que los poliploides (4-, 6-) se asignan en elbien. Líneasconectar los nombres de
los taxones con sus respectivas especies parentales (en parte putativas).Líneas puntedasindican incertidumbres
topológicas.Balasdetrás de los nombres de los taxones se marcan los taxones anuales.Letrasa lo largo de las ramas
del árbol denominan la distribución de los genomas de Triticeae dentro del género. Mientras que para las especies
diploides se realizaron estimaciones de las edades de los clados, no se realizaron tales análisis para las poliploides. La
existencia de especies extintas podría deducirse de las secuencias, que están presentes en los taxones poliploides,
pero no se encuentran en ninguna especie diploide existente.
llamadoH, yo, Xa,yXu (Linde-Laursen et al.1992; Wang et al.1996; Blatner, 2009). La

distribución de los genomas entreHordeoespecie se da en la Fig.2. Aunque el concepto de
genoma se usa ampliamente en plantas cultivadas y sus parientes silvestres, se debate el valor
sistemático de la similitud cromosómica (p. ej., Petersen y Seberg2003), ya que no está claro
cómo la cantidad de emparejamiento de cromosomas meióticos en híbridos interespecíficos,
que se utiliza para definir genomas, está conectada con las relaciones filogenéticas.
Se han realizado varios intentos para aclarar la filogenia deHordeo especies, ya que la cebada es
un cultivo importante a escala mundial y sus parientes silvestres tienen potencial como recursos
genéticos para la mejora de cultivos. Sin embargo, la mayoría de los análisis adolecieron de un
muestreo taxonómico a menudo arbitrario o de deficiencias metodológicas. Por lo tanto,
sorprendentemente se han realizado pocos estudios filogenéticos con una muestra taxonómica
completa o al menos representativa. Estudios con mayor número de especies o
incluyendo al menos todas las especies diploides han sido publicados por Doebley et al. (1992),
Komatsuda et al. (1999), Nishikawa et al. (2002) y Petersen y Seberg (2003, 2004). Los resultados
fueron contradictorios, en parte debido a inconsistencias entre el cloroplasto y las filogenias
nucleares, y en parte causado por diferencias en el muestreo de taxones. Además, todos los estudios
revelaron una resolución deficiente de los taxones del género del Nuevo Mundo estrechamente
relacionados.
La especiación, la separación de un grupo filogenéticamente coherente de individuos en dos linajes que evolucionan
independientemente, es la principal fuerza impulsora de la biodiversidad. Desde una perspectiva geográfica, tres entornos principales
pueden dar lugar a la especiación. Estos son: (1) especiación en alopatría, lo que significa que los individuos de una especie se separan
geográficamente y luego evolucionan en dos linajes diferentes, ya que el flujo de genes entre poblaciones hermanas está ausente debido a la
barrera geográfica; (2) parapatría, lo que significa que una pequeña población periférica evoluciona hacia un linaje diferente, lo que a
menudo implica un flujo de genes restringido entre la población principal del centro y el aislado periférico; y aunque estos procesos
probablemente estén involucrados en la mayoría de los eventos de especiación, la ocurrencia de (3) la especiación simpátrica aún está en
debate, ya que en este caso ninguna barrera geográfica reduce el flujo de genes entre los linajes diferenciadores. Como el flujo de genes
generalmente contrarresta la diversificación y la recombinación genética derrite las combinaciones de alelos que diversifican, la selección
fuerte contra el entrecruzamiento tiene que mantener grupos de genes separados desde una etapa muy temprana de diversificación para
llegar a especies separadas en un entorno simpátrico. Por lo tanto, la especiación simpátrica se puede postular principalmente en situaciones
como las que se encuentran en lagos o en islas pequeñas donde las barreras geográficas son menos probables (Coyne y Orr La selección
fuerte contra el mestizaje tiene que mantener reservas genéticas separadas desde una etapa muy temprana de diversificación para llegar a
especies separadas en un entorno simpátrico. Por lo tanto, la especiación simpátrica se puede postular principalmente en situaciones como
las que se encuentran en lagos o en islas pequeñas donde las barreras geográficas son menos probables (Coyne y Orr La selección fuerte
contra el mestizaje tiene que mantener reservas genéticas separadas desde una etapa muy temprana de diversificación para llegar a
especies separadas en un entorno simpátrico. Por lo tanto, la especiación simpátrica se puede postular principalmente en situaciones como
las que se encuentran en lagos o en islas pequeñas donde las barreras geográficas son menos probables (Coyne y Orr 2004). De lo contrario,
la especiación alopátrica que involucra barreras geográficas es la hipótesis nula preferida, particularmente cuando se tienen en cuenta los
cambios climáticos durante los últimos 2 millones de años (ma), cuando las oscilaciones de temperatura del Pleistoceno dieron como
resultado cambios en el rango y, a menudo, forzaron a las especies a refugios aislados de la edad de hielo. La principal excepción a la rareza
general de la especiación simpátrica se produce casi únicamente en las plantas, donde la poliploidización, es decir, la duplicación del número
de cromosomas, es bastante frecuente mientras que parece comparativamente rara en los animales. Los cambios en el número de
cromosomas dan como resultado un aislamiento reproductivo inmediato y, por lo tanto, permiten la diferenciación de dos linajes en la misma
área sin flujo de genes.
1.1 Marco de los Estudios, Preguntas a Responder
Inicialmente, el elevado número deHordeoespecies en América del Sur en comparación con otras
áreas del mundo permitieron dos hipótesis que explican esta observación: (1) el género se presentó
durante más tiempo en América del Sur y, por lo tanto, tuvo más tiempo para desarrollar la
diversidad de especies en esta región, o (2) las tasas de especiación aumentaron en comparación con
otras áreas despuésHordeollegó a América del Sur. Esta segunda hipótesis era mucho más probable
dado que la mayoría de los géneros estrechamente relacionados de Triticeae se encuentran en el
hemisferio norte, particularmente en el oeste de Asia, lo que hace que el origen sudamericano del
género sea muy improbable. Asimismo, la ligera
diferencias morfológicas entre varios de los sudamericanosHordeoespecie podría indicar una

edad relativamente joven de este grupo. Por lo tanto, asumimos una radiación rápida en curso
de América del SurHordeotaxones en comparación con grupos de especies de otras áreas del
mundo. Las causas supuestas de una rápida radiación podrían ser (1) la diferenciación
ecológica de los taxones que llenan diferentes nichos abiertos después de una llegada inicial a
esta área, o (2) varias divisiones alopátricas de poblaciones que dan como resultado una
multitud de especies separadas geográficamente. Claras diferencias ecológicas entre las
especies con respecto a las condiciones del suelo y el clima, junto con la ocurrencia a menudo
simpátrica de especies dentro de un área determinada, podrían respaldar un escenario de
especiación ecológica en América del Sur (Coyne y Orr2004; Jacob et al.2009). Como la
especiación aparentemente aumentada en América del Sur también podría ser causada por
tasas de extinción más altas en áreas del hemisferio norte, comparamos el Viejo y el Nuevo
Mundo. Hordeogrupos en un contexto filogenético para estimar las tasas de especiación en
diferentes áreas del mundo. Para comprender las posibles razones de los cambios en las tasas
de especiación o extinción y correlacionarlos con los cambios climáticos o geológicos, también
parecía aconsejable asignar edades próximas a los grupos de especies dentro del género.
Además, la ocurrencia deHordeoespecies en todos los continentes excepto Australasia
también exige la comprensión de la biogeografía histórica, es decir, cuándo y desde dónde
fueron colonizadas las diferentes regiones de la tierra.
El estudio de los procesos de especiación primero necesita un marco filogenético sólido.
Por lo tanto, se llevaron a cabo varios enfoques de análisis que incluían la secuenciación de
loci nucleares y un análisis de polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFLP;
Vos et al.1995) para las especies estrechamente relacionadas del Nuevo Mundo. Además, se
realizaron análisis de la diversidad de cloroplastos para comprender la naturaleza de las
inconsistencias entre las filogenias nucleares y plástidas y para reconstruir la historia evolutiva
(filogeografía) de poblaciones, especies y grupos de especies dentro del género. Para
comprender las diferencias ecológicas entre las especies, también llevamos a cabo
experimentos de cultivo en invernaderos y utilizamos modelos de nichos climáticos
potenciales de las especies para detectar cambios de nicho entre taxones estrechamente
relacionados y probables refugios de especies del Pleistoceno.
2 Materiales y métodos empleados
En nuestros análisis moleculares de la evolución de las especies dentro del génerohordeo,

generalmente tratamos de incluir una multitud de individuos por especie en los análisis filogenéticos
para tener en cuenta la variación intraespecífica. Por lo tanto, transferimos esquemas de muestreo
normalmente utilizados en análisis genéticos y filogeográficos de poblaciones a la filogenética.
Siempre que fue posible, incluimos material recolectado directamente de poblaciones silvestres.
Como hasta ahora no hemos podido cubrir toda el área de distribución del género con salidas de
campo, complementamos nuestraHordeorecolección por materiales de depósitos de germoplasma
(bancos de genes) y en parte también herbarios. El material de la semilla se germinó, se cultivó en
invernaderos, se determinó taxonómicamente y los niveles de ploidía se determinaron mediante
análisis de citometría de flujo de los tamaños del genoma.
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Esto era necesario, comoHordeolas especies no siempre son fáciles de distinguir, y los materiales de los
bancos de genes o los jardines botánicos a menudo resultaron tener nombres incorrectos. Además, en
varias especies se presentan citotipos con diferentes niveles de ploidía. Los tamaños del genoma son en su
mayoría identificadores confiables de afiliación de especies enHordeo (Jacob et al. 2004), por lo que el
conocimiento del origen geográfico de los materiales junto con el tamaño del genoma proporciona en la
mayoría de los casos información suficiente para verificar las determinaciones de especies.
Para llegar a una filogenia robusta de la especie, se utilizó la región ITS del ADN ribosómico
nuclear para reconstruir las relaciones filogenéticas entre todas las especies.Hordeo especies
más varios grupos externos de Triticeae,bromo,yBraquipodio (Blattner 2004). Como en la
mayoría de los diploidesHordeoestán presentes dos grupos de 45S rDNA ubicados en dos
cromosomas diferentes (Taketa et al.1999,2001) y la mayoría de los taxones poliploides se
originaron a partir de la alopoliploidización, se utilizó una secuenciación extensa de
amplicones ITS clonados para determinar la naturaleza de las regiones ITS presentes en
individuos de la mayoría de las especies. Para todos los diploides y algunos poliploides.Hordeo
especies, los datos de ITS también se combinaron con datos de secuencia de dos genes de
copia única nuclear (Blattner2006): ADNc meiótico interrumpido (DMC1; Petersen y Seberg
2004) y el factor de elongación gamma (EF-G; Komatsuda et al.1999) que mejoró el soporte
estadístico de las ramas basales en comparación con el análisis de solo la región ITS. Sin
embargo, no proporcionó una mejor resolución de las relaciones entre los taxones
americanos. Por lo tanto, realizamos además un análisis filogenético basado en datos de AFLP
(Vos et al.1995) de los diploides de las Américas (Pleines y Blattner2008) para definir grupos de
especies particularmente dentro de los miembros sudamericanos del género. El rDNA ITS
nuclear y el conjunto de datos que combina tres loci nucleares también se utilizaron para
datar los puntos de ramificación dentro de la filogenia del género. Como punto de calibración,
se utilizó la división entre cebada y trigo hace aproximadamente 13 millones (mya) (Gaut 2002)
en un enfoque de verosimilitud penalizada conR8S(Sanderson2002) para estimar edades dentro
deHordeo.
La biogeografía histórica deHordeose infirió del árbol filogenético derivado de la
combinación de los loci nucleares, las estimaciones de las edades de los clados y la
distribución geográfica de las especies. La edad del grupo corona deHordeo (12 ma) y
los subgrupos relevantes (4–6 ma) permitieron suponer que los continentes estaban en
sus posiciones actuales y que los puentes terrestres relevantes como Beringia y América
Central estaban casi o ya en su lugar en el momento del origen de los taxones (Blattner
2006).
Los cloroplastos, que se supone que se heredan por vía materna en los pastos,
proporcionan herramientas para analizar las historias de las especies. Se distribuyen solo por
semillas y tienen un genoma efectivamente haploide y, por lo tanto, un tamaño de población
efectivo más pequeño que los genes nucleares. Esto evita problemas con la recombinación
alélica y da como resultado principalmente datos estructurados geográficamente más claros
en comparación con los marcadores nucleares (Pleines et al.2009). Usamos datos de
cloroplastos para analizar especies o grupos de especies para llegar a hipótesis filogeográficas
de estos taxones. Para comprender el patrón general de distribución de alelos de cloroplasto
entre especies, inicialmente analizamos el cloroplastotrnL-trnRegión F (trnLF) en 875
individuos que cubren todos los taxones deHordeo (Jacob y Blattner2006).TrnLF consta de dos
exones y el intrón en eltrngen L, el espaciador intergénico entre este gen ytrnF, y eltrngen F
sí mismo. Los genes del ARN de transferencia (ARNt) están altamente conservados entre las plantas y, por lo
tanto, son adecuados como sitios de unión de cebadores de PCR, mientras que las secuencias de intrones y
espaciadores consisten en tramos variables de ADN, lo que proporciona diferencias de secuencia útiles en
análisis filogenéticos y genéticos de poblaciones (Shaw et al.2007).
Para los análisis filogenéticos de datos nucleares, utilizamos algoritmos de análisis
fenéticos, cladísticos y basados en modelos implementados enPAUP* 4(Swofford2002) y
MRBAYES3.1 (Ronquist y Huelsenbeck2003), lo que resultó en árboles únicos o múltiples. El apoyo
estadístico de los grupos taxonómicos se evaluó mediante análisis de arranque (en análisis de
parsimonia y unión de vecinos) y probabilidades posteriores a partir de la inferencia bayesiana. Para
los datos de cloroplastos, también utilizamos un enfoque de red (Posada y Crandall2001), como
estructura de datos deltrnLa región LF demostró no ser similar a un árbol. Por lo tanto, la
reconstrucción de la genealogía de un alelo o haplotipo proporcionó una mejor representación de las
relaciones entre estos haplotipos que todos los algoritmos basados en árboles (Jakob y Blattner
2006). Las genealogías de haplotipos también se utilizaron en estudios de especies individuales o
grupos de especies. En estos casos, se aumentó el número de individuos incluidos para obtener una
buena representación de las distribuciones geográficas de las especies. En algunos de estos estudios
más detallados, se incluyeron no solo lostrnregión LF, sino que también secuenció partes muy
variables del genoma del cloroplasto (Jakob et al.2007; Jacob y Blattner2010). Estos consistían en
estructuras repetitivas ricas en AT o microsatélites repetidos de mononucleótidos, en su mayoría
tramos poli-A/T. La inclusión de microsatélites dio como resultado relaciones mejor resueltas entre
los haplotipos de cloroplastos dentro de grupos taxonómicos estrechos, pero en taxones
relacionados más distantes, la homoplasia fue bastante alta. Para superar este problema,
inventamos un procedimiento de dos pasos para la construcción de redes, en el que se construyó
una red troncal sobre la base de la variación de secuencia en las partes de evolución lenta de los loci
analizados, y se crearon subhaplotipos de estos haplotipos troncales teniendo en cuenta la variación
en los loci de microsatélites (B€Anfer et al.2006; Jacob et al.2007).
Para comprender la configuración geográfica de los procesos de especiación, utilizamos análisis

filogeográficos. La filogeografía como disciplina distinta surgió a fines de la década de 1980 y
combina conceptos microevolutivos, es decir, genética de poblaciones, y macroevolutivos, es decir,
filogenética y sistemática, con la distribución de la variación genética en el espacio y el tiempo (Avise
et al.1987; Avise2000). A diferencia de la genética de poblaciones, que explica la distribución de alelos
principalmente por el flujo de genes, la filogeografía busca explícitamente determinar los procesos
históricos que dieron forma a la distribución actual de la variación genética. Así, la variación genética
dentro de una especie se organiza en una genealogía y se superpone a la distribución geográfica de
los alelos de la región marcadora en estudio (Avise1989). Luego, el análisis interpreta los patrones de
congruencia o incongruencia entre la distribución geográfica existente de los alelos y sus relaciones
genealógicas en el contexto de diferentes procesos recientes e históricos que influyen en la
estructuración de la diversidad genética dentro y entre las poblaciones, es decir, barreras
geográficas, eventos de dispersión, cambios en el tamaño de la población. y el flujo de genes. Dado
que los alelos del cloroplasto pueden persistir a través de múltiples eventos de especiación, es decir,
sin alcanzar la monofilia recíproca durante mucho tiempo, se pueden encontrar alelos idénticos en
varios taxones estrechamente relacionados (Jakob y Blattner2006). Esto puede resultar en
interpretaciones incorrectas del eje de tiempo y patrones geográficos si solo
se analizan las especies. Para evitar tales errores, analizamos en parte grupos completos
de especies juntos, si se caracterizan por compartir haplotipos de cloroplastos (Jakob et
al.2007,2009).
Para ilustrar las diferencias generales en la evolución de las especies enHordeo
entre Eurasia y las Américas, aquí revisamos tres estudios, que tratan de (1) la
H. marinumgrupo de especies del Mediterráneo y regiones adyacentes, (2) los parientes
norteamericanos deH. californicum,y (3) un grupo de patagónicos del surHordeo
especies. En todos los casos, realizamos análisis filogeográficos detallados, en parte
junto con el modelado de nichos climáticos de la especie. Finalmente, discutiremos
nuestra comprensión actual de los procesos de especiación en el género y su relevancia
general para la biología evolutiva.
3. Resultados y discusión
3.1 Filogenia deHordeo
Con base en varios enfoques de análisis, nuestra comprensión actual de las relaciones entre especies
dentro deHordeose da en la Fig.2. De acuerdo con trabajos citogenéticos anteriores y en contraste
con algunos otros estudios filogenéticos, los cuatro grupos del genoma en Hordeodemostrado ser
monofilético. La división basal enHordeose estimó que data de hace 12 ma y separó elHyXu-especies
genómicas de taxones pertenecientes al IyXa-grupos del genoma. Dentro deH, Xa,yXu-grupos del
genoma sólo se producen cinco especies existentes, mientras que la mayoría deHordeoespecies
pertenecen a la I-grupo del genoma (26 especies). Este último se segregó hace aproximadamente 5
millones de años en dos linajes geográficamente definidos, de los cuales uno consta de todos los
taxones asiáticos diploides y el otro comprende todas las especies americanas. Dentro de este último
grupo, la mayoría de las especies no tienen más de 1 o 2 millones de años. Si bien esta separación es
bastante clara para los taxones diploides, existen varios alopoliploides que se combinanIgenomas de
taxones asiáticos y americanos (p. ej., tetraploidesH. brachyantherum, H. jubatum,yH. guatemalense,
o hexaploide
H. arizonicumyH. lechleri).Alopoliloides que involucran dos genomas diferentes. (IyXa)
son menos frecuentes y restringidas a tetraploidesH. secalinumy su taxón hijoH.
capense,así como hexaploideH. brachyantherumque se originó en tiempos históricos en
un área restringida de California a través de la hibridación de tetraploides nativosH.
brachyantherumcon diploide introducidoH. gussoneanum.No se conocen taxones
naturales que combinen laHoxugenoma o uno de estos con otros genomas de Triticeae,
mientras que elIEl genoma también se puede encontrar en géneros alopoliploides como
ElimoyElitrigia (Dewey1984, Mason-jugador2001).
La hipótesis filogenética (Fig.2) muestra que ninguna de las clasificaciones
infragenéricas hasta ahora propuestas deHordeo (por ejemplo, Nevski1941; Von
Bothmer y Jacobsen1985; Petersen y Seberg2003) se sustenta en las unidades
monofiléticas descubiertas, y también en la división del género enHordeoycriterio,
como propone Dewey (1984) y amor (1984), haríaCriterioparafilético. Así, nuestro
los resultados filogenéticos apoyan el concepto de un solo géneroHordeo (Von Bothmer et al.
1995). Para llegar a una coincidencia más estrecha entre las relaciones filogenéticas y las
unidades taxonómicas infragenéricas, se propuso una nueva clasificación del género (Blattner
2009) subdividirHordeoen subgéneroHordeocon seccionesHordeo (H-taxones del genoma) y
Tricostaquias (Xu-genoma taxonómico) y subgénerohordeastro que consta de secciones
Marina (Xa-taxones del genoma),Estenostachys (I-taxones del genoma) y Nodosa (
combinación de alopoliploidesIyXagenomas).
3.2 Biogeografía
La filogenia datada del género (Fig.2) proporciona evidencia de que los linajes más antiguos dentro
de los existentesHordeoestán todos restringidos al oeste de Eurasia, mientras que los clados de Asia
Central y América son más jóvenes. El escenario (Fig.3) para la biogeografía histórica del género
(Blattner2006) supone, por tanto, el origen deHordeoen algún lugar del oeste de Eurasia, tal vez en el
suroeste de Asia. Sin embargo, no es posible precisar el área exacta de origen, ya que los cambios
climáticos durante los últimos 12 millones pueden haber resultado en cambios en el rango de
distribución de las especies. Esta área está de acuerdo con la distribución de la mayoría de los otros
géneros de Triticeae, que también se encuentran principalmente en Eurasia central. De esta antigua
zona,Hordeoemigró en dirección occidental hacia la cuenca del Mediterráneo y también hacia el este
hacia Asia Central. El linaje en esta última área pertenece alI-taxones del genoma y es muy
probablemente hermano de todos los del Nuevo Mundo
VII/<4 VII/<4
IV/5
IV/5
III/4
X/<2
VI XI/<2 II/6
VI/1
IX/<1
XII/0.4
VII/1
V/4 – 2
IX viii XII
VI VII X
V IV tercero
Yo
V/2
Fig. 3Escenario biogeográfico histórico deHordeotrazado en el mapa de distribución de existentes Hordeoespecies.

Sombreadode las áreas refleja el número de especies en las respectivas regiones.numeros romanos negrosse
refieren a eventos de distribución y colonización en las partes diploides del árbol filogenético como se muestra en la
insertar,mientras que los eventos de distribución en el nivel poliploide se indicaron ennúmeros romanos grises.
Númerosdetrás de labarrasproporcione las edades aproximadas de los eventos de colonización en millones de años.
Figura modificada de Blattner (2006)
especies del género. Por lo tanto, es posible una colonización de las Américas desde Asia a través de
Beringia dado que el clima de la latitud norte durante el intervalo de tiempo relevante de
aproximadamente 5 millones de años era adecuado para taxones templados. de america del norte
Hordeo llegó a América del Sur entre 4 y 2 millones de años, muy probablemente a través de una
dispersión de larga distancia entre el oeste de América del Norte y el actual Chile. Además, se
infirieron otras dispersiones a larga distancia. Así, América del Norte fue colonizada dos veces,
independientemente de América del Sur (resultando enH. intercedeyH. pusillum) y una vez más
desde el este de Asia (H. jubatum),América del Sur una vez más desde América del Norte (H. lechleri),
Europa, ya sea de América del Sur o Asia Central (H. secalinum),y Sudáfrica de Europa (H. capense).La
mayoría de estas rutas de dispersión coinciden con las rutas migratorias de las aves, que a menudo
se encuentran en las acequias deHordeohábitats (Blattner2006). Así, suponemos que las semillas
pegadas a las patas o picos de las aves migratorias por el barro húmedo (Darwin1859) participaron
en la colonización a larga distancia enHordeo.Aunque inferimos hasta ocho dispersiones
intercontinentales de larga distancia involucradas en la configuración del área de distribución
existente dehordeo, las especies dentro de un área determinada están más estrechamente
relacionadas entre sí en comparación con las especies que se encuentran en otras regiones, además
de las dos especies de América del Norte anidadas dentro del grupo de especies de América del Sur.
Esto significa que las colonizaciones de áreas distantes siguen siendo eventos raros en el género y no
borran la correlación filogenético-geográfica general.
3.3 Tasas de especiación
Análisis filogenéticos y biogeográficos deHordeoreveló que las especies del Nuevo Mundo y en
particular las especies de América del Sur se originaron recientemente, principalmente
durante los últimos 2 millones de años. Esto confirmó nuestra hipótesis inicial de una
radiación joven y rápida en este continente que conduce al alto número de especies
existentes, a diferencia de una ocurrencia antigua del género en ese continente como
asumieron Baum y Johnson (2003). En contraste con América del Sur, inferimos en Eurasia solo
un evento de especiación a nivel diploide durante este período de tiempo (H. gussoneanum–H.
marino).Una comparación de las tasas de diversificación neta promedio para diploides de
ambas áreas resultó en 0.42 (-0.11) especiesmien las Américas en comparación con 0,11 (-0,03)
especiesmien Eurasia (Jakob y Blattner2006). Esta tasa es bastante alta, particularmente porque
ni siquiera incluye la especiación a nivel poliploide, y para las Américas está cerca de las tasas
de diversificación máximas continentales (Baldwin y Sanderson1998). Sin embargo, el cálculo
de la diversificación neta no pudo responder finalmente a nuestras preguntas sobre si las
tasas de especiación son excepcionalmente altas en América del Sur o si la especiación está
ocurriendo a un ritmo normal.Hordeum-ritmo específico allí, mientras que Eurasia se
caracteriza por altas tasas de extinción que resultan en una diversificación neta mucho más
baja. Para responder a esta pregunta, utilizamos un enfoque derivado de la distribución de
alelos faltantes en una genealogía de cloroplastos del género.
3.4 Genealogía de cloroplastosHordeo
Identificar las razones de los resultados no concluyentes de filogenias de cloroplastos

anteriores en el género de las gramíneasHordeoy para obtener información sobre la
demografía de la población, establecimos una genealogía de haplotipos de cloroplastos
mediante la secuenciación de lostrnregión LF en 875 individuos, cubriendo las 33 especies del
género (Jakob y Blattner2006). Nuestro análisis resultó en 88 haplotipos de cloroplastos. Sus
relaciones se dan en la genealogía que se muestra en la Fig.4. La red revela una estructura
geográfica clara, con linajes de cloroplastos distribuidos principalmente en el Viejo Mundo o el
Nuevo Mundo, todos convergentes en el haplotipo central HT1. En el Nuevo Mundo, la
principal división es entre los haplotipos norteamericanos y sudamericanos, estos últimos
subdivididos en un grupo del norte (Chile, Argentina central, Uruguay y el norte de los Andes)
y un grupo del sur (sur de la Patagonia y los Andes) con un linaje exclusivo de cloroplastos. a
este grupo sureño.
Una diferencia pronunciada entre Eurasia y las Américas es la falta de intermedios (38 en el
Viejo Mundo frente a 9 en el Nuevo Mundo). Una segunda diferencia notable entre estas áreas
se refiere al número de haplotipos por especie y al número de haplotipos compartidos entre
diferentes especies. La mayoría de las especies en el Viejo Mundo poseen solo una pequeña
cantidad de haplotipos, en algunos casos incluso se encontró un solo haplotipo. La
coalescencia de estos haplotipos es superficial y convergen relativamente temprano en su
último ancestro común. En el Nuevo Mundo, encontramos hasta 18 haplotipos de cloroplastos
diferentes dentro de especies del sur de la Patagonia con coalescencias bastante profundas.
Además, hasta seis especies comparten
50ste ste 37 sujetador sostén sujetador 35

27bul bul30
49 36 34
ste jub 26 28 29 18
51 41 33 bul bul bul mar
48 sostén sostén
antes de jub 32
tet 17
67 40 lec jub vul 25
53 52 31 mar
79 78 corazón chí 47 Ari sostén
palmadita palmadita
66 38 sostén
4 7
70 69 chípus 39
77
sostén 3 bre
86 pub corazón
com 64 dep bre bre
80 71palmadita
sostén
24 15
pub 81
sesenta y cinco
pub pub Gua
42
palmadita
87 pub pub com
68 46
palmadita sostén
63 Pro
palmadita segundo
par 1
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76 archivo
2
75 En t
dieciséis
14
palmadita
palmadita palmadita
pub com dep
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palmadita
palmadita
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palmadita
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Oeste de Eurasia
tet com tet 8
pub
lec palmadita lec sostén6
74 60 62 20 mar
Sudáfrica tet palmadita
palmadita
gus2 mar
82 pub mudo
73 72 44 22 19
54
C y E de Asia euc
bre bre
rosa mar
palmadita
com 55 mudo
5 10 21
américa del norte 59 palmadita
pub 45 bre
América del Sur: grupo del norte 57 euc
pantano
11
com58 56 Gus
6
América del Sur: grupo del sur 423 12 4/6
muerte muerte 13
2
Figura 4Genealogía de haplotipos de cloroplastosHordeobasado en un análisis de red de parsimonia

estadística de secuencias de latrnRegión LF de 875 individuos que cubren todosHordeoespecies. Los
nombres de las especies se abrevian con los tres primeros caracteres del epíteto de la especie. La red se
caracteriza por una gran cantidad de haplotipos intermedios faltantes (puntos negros)en la parte
euroasiática, y muchos haplotipos compartidos entre hasta seis especies en la parte del Nuevo Mundo.
Figura modificada de Jakob y Blattner (2006)
haplotipos individuales. En Eurasia, los intermedios faltantes y la mayoría de los tipos de cloroplastos
específicos de especies indican una pérdida de diversidad genética de gran alcance, probablemente causada
por cuellos de botella genéticos repetidos para las poblaciones en esta área. Además, en el grupo de
especies del norte de América del Sur, los linajes de haplotipos de cloroplastos específicos de especie indican
cuellos de botella genéticos, aunque probablemente menos severos que en Eurasia (Jakob et al. 2010). Los
patrones encontrados en el sur de la Patagonia son consistentes con tamaños de población estables a largo
plazo y grandes poblaciones involucradas en eventos de especiación. Explicamos estas diferencias con
historias del Pleistoceno bastante diferentes de América del Sur y Eurasia, y también dentro del sur de
América del Sur. Si bien las cadenas montañosas que se extienden de este a oeste y el mar Mediterráneo
impidieron que las especies euroasiáticas migraran a los refugios del sur, tales barreras no estaban
presentes en las Américas. Por lo tanto, las especies podrían cambiar con las condiciones climáticas
cambiantes a hábitats adecuados. Esto resultó en bajas tasas de extinción de especies en el Nuevo Mundo,
mientras que la extinción fue bastante alta en Eurasia.
3.5 El euroasiáticoHordeum marinoComplejo de especies
ElH. marinumEl grupo consta de dos especies de pastos anuales de los prados o pantanos
salinos de Eurasia occidental. Los dos taxones se dividieron en el Pleistoceno hace unos 2
millones de años (Blattner2006).Hordeum marinoy el citotipo diploide deH. gussoneanum
coexisten en toda la cuenca mediterránea, mientras que el citotipo tetraploide de
H. gussoneanumse superpone con su progenitor diploide geográficamente solo en el extremo
este del Mediterráneo, extendiéndose desde allí hacia el este hasta Asia. Utilizando secuencias
de cloroplastos de latrnregión LF y seis loci de microsatélites de cloroplastos, modelos
predictivos ecológicos basados en datos climáticos y la distribución geográfica actual de las
dos especies, analizamos procesos de diferenciación en el
H. marinumgrupo (Jakob et al.2007).
Los datos de cloroplastos indicaron claras diferencias en la historia de ambas especies.
Curiosamente, ambas especies poseen linajes de cloroplastos muy distintos (Fig.4), con
H. gussoneanumrevelando haplotipos de cloroplastos, que de otro modo están extintos en Eurasia
pero han sobrevivido en el Nuevo Mundo (Jakob y Blattner2006). Los análisis filogeográficos y
genéticos de poblaciones mostraron claramente que las dos especies diploides se originaron
alopátricamente dentro de diferentes refugios pequeños y aislados de la edad de hielo. Para
H. marinum,encontramos una subdivisión entre poblaciones genéticamente bastante
variables de la Península Ibérica y poblaciones más uniformes del resto del Mediterráneo.
Como explicación, asumimos la fragmentación del Pleistoceno de una población extendida
anterior y la supervivencia en un refugio del sur de la Península Ibérica y del sur del
Mediterráneo central, donde las temperaturas también eran adecuadas para la especie
durante los ciclos fríos del Pleistoceno.
La variación del cloroplasto estuvo completamente ausente dentro de los citotipos deH.
gussoneanum,indicando un cuello de botella genético severo y reciente. Debido a esta falta de
variación de cloroplastos, solo la combinación de modelos de hábitat ecológico con análisis de
datos moleculares permitió sacar conclusiones sobre la historia de este taxón. Las áreas de
distribución de los dos citotipos deH. gussoneanumse superponen hoy en partes de
Turquía, donde probablemente se originó el poliploide. Posteriormente, experimentó un

cambio ecológico pronunciado, en comparación con su progenitor diploide, lo que le permitió
colonizar hábitats montañosos del interior entre la cuenca del Mediterráneo y Afganistán.
3.6 norteamericanoH. californicumGrupo
Análisis del grupo norteamericano de diploides.H. californicumy tres taxones tetraploides que
poseen haplotipos de cloroplastos relacionados en elHordeogenealogía de cloroplastos (Jakob
y Blattner2006) muestran que la diversidad genética es alta en comparación conH. marinum,
particularmente en los taxones poliploides.Hordeum californicumy
H. depresiónambos están hoy principalmente restringidos a California y poseen haplotipos muy
similares.Hordeum brachyantherumyH. jubatum,por otro lado, muestran un rango de distribución
más amplio y también diversos haplotipos de cloroplastos. Muchos haplotipos se comparten entre
estos dos taxones, incluso entre individuos que no se encuentran en la misma área (Pleines y
Blattner, sin publicar). Las razones de la alta diversidad de haplotipos podrían ser los múltiples
orígenes de los poliploides, cada vez que se introducen diferentes tipos de cloroplastos maternos, o
el flujo de genes extendido entre poliploides y taxones diploides más antiguos, lo que enriquece la
diversidad de cloroplastos en los poliploides.Hordeum jubatumprobablemente sobrevivió a la última
edad de hielo en un refugio del norte en Beringia, como se puede deducir de la alta diversidad de
cloroplastos en Alaska. Se encontró un patrón diferente enH. brachyantherumdonde asumimos la
supervivencia de poblaciones extendidas al sur de los escudos de hielo de América del Norte en
California y las regiones costeras de la Columbia Británica y Terranova (Pleines y Blattner, sin
publicar).
En América del Norte, el número de haplotipos faltantes es tan bajo como en América del Sur, lo
que indica que no hay restricciones genéticas severas durante los ciclos fríos de la edad de hielo.
Contrariamente a la situación en Europa,HordeoLas especies en América del Norte probablemente
estuvieron geográficamente extendidas durante el Pleistoceno. Esto puede deberse a que hay menos
cadenas montañosas orientadas de este a oeste que dificultan la migración, lo que a menudo se usa
para explicar la mayor biodiversidad existente en América del Norte en comparación con Europa
(Thingsgaard2001). Sin embargo, esto no es válido para el único diploide de este grupo de especies,
que hoy se encuentra en poblaciones relativamente pequeñas en California. Esta diferencia entre los
taxones diploides y poliploides de este grupo también puede indicar una amplitud ecológica más
amplia de este último, lo que resulta en menos restricciones geográficas por el cambio climático.
3.7 Especies de la Patagonia Austral
En la enorme estepa de las llanuras patagónicas y los Andes adyacentes del sur de América del Sur
prospera un grupo de tres diploides distribuidos simpátricamente.Hordeoespecies (H. comosum, H.
pubiflorum,yH. patagonicum),que se originó durante los últimos 1,3 ma a partir de un progenitor
común. Para este grupo, llevamos a cabo estudios de genética de poblaciones.
y análisis filogeográficos basados en secuencias del cloroplastotrnRegión LF de 922 individuos

(Jakob et al.2009). Encontramos una gran cantidad de haplotipos de cloroplastos más antiguos
compartidos entre estas especies. Además, los haplotipos interiores están muy extendidos
geográficamente, mientras que los haplotipos de punta jóvenes son en su mayoría específicos de
especies y restringidos localmente (Fig.4). Casi no se detectaron haplotipos faltantes, en gran
contraste con las especies euroasiáticas. Los patrones de cloroplastos encontrados en la Patagonia
Hordeolas especies apuntan a la especiación a través de la vicarianza, donde grandes poblaciones se
separaron pero no indicaron cuellos de botella poblacionales típicos de la especiación en
aislamientos periféricos o debido a eventos fundadores. La combinación de muchos haplotipos
compartidos junto con el bajo número de haplotipos intermedios faltantes es además compatible
con un tamaño de población efectivo en constante crecimiento en todas las especies, lo que resulta
en la preservación de casi todos los tipos de cloroplastos que surgen recientemente (Avise2000) y el
mantenimiento de polimorfismos antiguos compartidos.
El análisis de la distribución de la diversidad genética dentro y entre las especies infirió un
origen deH. comosumen los Andes centrales argentinos, mientrasH. patagonicumyH.
pubiflorumSe originó en el sur de la Patagonia. La ocurrencia existente deH. comosumen el
sur de la patagonia yH. pubiflorumhacia el norte a lo largo de los Andes argentinos fue
causado por la migración recíproca posterior al origen de la especie.
Sorprendentemente, los datos moleculares no proporcionaron evidencia de cuellos de botella
genéticos del Pleistoceno ni evidencia de cambios de rango hacia el norte durante el último máximo
glacial y la recolonización de los hábitats del sur después, como se supone comúnmente para las
especies de tierras bajas del hemisferio sur. Más bien, nuestros datos moleculares indicaron la
supervivencia in situ de grandes poblaciones deHordeoespecies dentro de sus rangos de distribución
existentes, incluso en el extremo sur de la Patagonia y Tierra del Fuego. El modelo de nicho
ecoclimático utilizado para reconstruir la distribución potencial de la especie en el Pleistoceno hace
unos 21.000 años durante el último máximo glacial muestra que las condiciones climáticas fueron
suficientes para que la especie sobreviviera a los ciclos fríos del Pleistoceno en la propia Patagonia
sin restricciones geográficas significativas. Los datos moleculares junto con el modelado de nicho
ecológico indican áreas de distribución geográfica estable de la especie durante al menos el
Holoceno. como elHordeoLas especies son taxones característicos de diferentes hábitats de estepa,
especulamos que la estepa patagónica podría ser una unidad de vegetación antigua que se presenta
desde hace hasta 4,5 millones de años en el sur de América del Sur.
4. Conclusiones
Análisis filogenéticos anteriores enHordeoencontraron relaciones de especies diferentes y en parte

contradictorias al analizar el cloroplasto y los loci nucleares. Para explicar estas diferencias, llevamos
a cabo un análisis genealógico de alelos de cloroplastos en 875 individuos que cubren todos los
Hordeoespecies. Este análisis reveló una clasificación de linaje incompleta de gran alcance en los
taxones del género del Nuevo Mundo debido a que los alelos del cloroplasto sobrevivieron a varios
eventos de especiación durante hasta 4 millones. Estos alelos compartidos junto con varios alelos
distintos que ocurren dentro de una sola especie hacen que la
el resultado de las relaciones entre especies es casi arbitrario cuando solo uno o unos pocos
individuos por especie se incluyen en el análisis filogenético. Los largos tiempos de supervivencia de
los alelos de los cloroplastos haploides podrían implicar que el tiempo para alcanzar la monofilia
recíproca podría ser incluso mayor en los alelos nucleares diploides, lo que hace que los loci de copia
única también sean posiblemente problemáticos para los análisis filogenéticos enHordeo.Además,
en los análisis filogeográficos, parece aconsejable incluir no solo individuos de la especie en estudio,
sino también una muestra representativa de taxones estrechamente relacionados. De nuestra
experiencia con especies estrechamente relacionadas de géneros de otras familias de plantas (alio,
azafrán,yhipérico),predecimos que el fenómeno de los alelos de cloroplastos compartidos no se
limita aHordeopero se puede encontrar en la mayoría de los otros grupos de plantas.
Nuestros datos respaldan altas tasas de especiación en el Nuevo Mundo y particularmente
en América del Sur, lo que implica un tamaño de población efectivo en constante crecimiento
en esta área. Por otro lado,Hordeoen Eurasia claramente sufrió una extinción de largo
alcance, borrando poblaciones y muy probablemente también muchas especies (Jakob y
Blattner2009), lo que da como resultado un bajo número de especies existentes y también una
diversidad de cloroplastos relativamente baja. En la medida en que esto se puede inferir de la
diversidad genética aún existente, la especiación tuvo lugar principalmente en pequeñas
poblaciones en refugios del Pleistoceno geográficamente separados. Otros procesos
implicados en la especiación enHordeo son múltiples dispersiones intercontinentales de larga
distancia, que resultan en un aislamiento reproductivo inmediato entre la fuente y la
población recién fundada (Pleines y Blattner2008). Incluso en el sur de América del Sur, donde
la especiación ecológica nos parecía posible, nuestros análisis resultaron hasta ahora solo en
la inferencia de la especiación alopátrica a través de eventos de vicarianza. Así, aunque
muchosHordeo las especies ocurren hoy en simpatría, la especiación simpátrica parece muy
rara en el género. Esto respalda la opinión de que la especiación simpátrica solo puede ocurrir
en casos muy excepcionales, mientras que normalmente las barreras geográficas están
involucradas en los eventos de especiación. En el futuro, queremos entender cómo estos que
ocurren simpátricamente y aún se pueden cruzarHordeolas especies previenen la hibridación
cuando ocurren muy cerca y analizan los procesos de especiación en los taxones poliploides.
Expresiones de gratitudAgradecemos a M. Arriaga y R. Gomez (Museo de Historia Natural “Bernado

Rivadavia, Buenos Aires) por su gentil ayuda en la organización del trabajo de campo en la Patagonia, P.
Cichero (APN, Buenos Aires) por los permisos de investigación en parques nacionales argentinos, muchos
amigos, colegas y bancos de genes para materiales vegetales, y la Deutsche Forschungsgemeinschaft por su
apoyo financiero en el marco de SPP 1127.
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Estudio de la radiación adaptativa a nivel
molecular: un estudio de caso en la macaronésica
Crassulaceae-Sempervivoideae
Mike Thiv, Korinna Esfeld y Marcus Koch
AbstractoLas islas oceánicas albergan con frecuencia ejemplos destacados de

radiaciones vegetales. Aquí, investigamos la macaronésica Crassulaceae-
Sempervivoideae (MCS), incluidos los génerosAichryson, MonanthesyAeonio.Este clado
rico en especies muestra una gran variedad de características morfológicas y ecológicas
y, por lo tanto, a menudo se lo considera una radiación adaptativa. Sin embargo,
demostramos un claro aumento en la tasa de especiación solo en el grupo de la copa de
Aeonio. Analizando los homólogos de los genes candidatos seleccionados,APETALA1,
APETALA3 yPEPC (gen de la fosfoenolpiruvato carboxilasa), reveló que un aumento de la
cladogénesis es paralelo a un mayor número de copias parálogas encontradas para
todos estos genes enAeonio.Estos podrían ser el resultado de duplicaciones de genes o
poliploidización temprana. El número de mutaciones no sinónimas supera las
sustituciones sinónimas entre secuencias de MCS, lo que indica tasas evolutivas
aceleradas. Este fue el más alto enAPETALA1seguido porAPETALA3y PEPC.Concluimos
que el aislamiento reproductivo pero también, en menor medida, la adaptación
fisiológica y la hibridación fueron los principales desencadenantes de la evolución de
este grupo.
M. Thiv (*)
Museo Staatliches f€ur Naturkunde Stuttgart, Rosenstein 1, 70191 Stuttgart, Alemania Correo
electrónico: mike.thiv@smns-bw.de
K. Esfeld
Museo Staatliches f€ur Naturkunde Stuttgart, Rosenstein 1, 70191 Stuttgart, Alemania
Universidad de Berna, Altenbergrain 21, 3013 Berna, Suiza
M. Koch
Instituto Heidelberg de Ciencias Vegetales, Universidad de Heidelberg, Im Neuenheimer Feld 345m,
69120 Heidelberg, Alemania

36 M. Thiv et al.
1 Introducción
1.1 Especiación y Radiación Adaptativa
Los factores primarios que impulsan la evolución aún son ampliamente desconocidos y son de
gran interés en la investigación biológica actual. En general, se acepta que la divergencia
genética entre poblaciones segregantes, la poliploidía y/o la hibridación pueden dar lugar a la
formación de nuevas especies (Futuyma2009). Poniendo esto en una perspectiva más
específica, varios estudios han intentado especificar los genes que pueden estar involucrados
en la especiación de las plantas (por ejemplo, White y Doebley1998; Haag y cierto2001;
Barrera et al.2003). Se ha conjeturado que los cambios en los genes reguladores, más que la
diversificación acumulativa en los genes estructurales, son los responsables de la variación
morfológica interespecífica (King y Wilson1975). Los estudios de desarrollo molecular
respaldan esta teoría al indicar el gran impacto de las mutaciones en genes reguladores clave
(por ejemplo, Purugganan1998). Por ejemplo, se ha demostrado que los factores de
transcripción de la inflorescencia son responsables de muchas diferencias morfológicas entre
el maíz y el teosinte (White y Doebley1998; Haag y cierto2001). Además, una comparación
entre genes expresados en botones florales deArabidopsis thalianay
A. lirataindicaron que los genes reguladores muestran mayores tasas evolutivas (Barrier et al.
2003).
Los clados de organismos altamente diversificados suelen denominarse radiaciones
adaptativas, definidas como la ocurrencia de un estallido de especiación y una rápida
evolución fenotípica en condiciones de gran oportunidad ecológica (sensu Schluter1998). Este
tipo de especies radiantes se encuentran principalmente en las islas. Varios de estos grupos
de islas han sido estudiados intensamente (por ejemplo, Givnish1998; Schluter2000;
Archipiélago hawaiano: Wagner y Funk1995; balduino1997; Jordán et al.2003; Islas Canarias:
Kim et al.2008; cf. Reyes-Betancort et al.2008). Sin embargo, estos estudios no distinguieron
los genes de función reguladora de aquellos que evolucionan de manera neutral y, por lo
tanto, simplemente se usaron como marcadores para reconstrucciones filogenéticas. Por el
contrario, otro estudio, que trata sobre genes de codificación nuclear, mostró una aceleración
en la tasa de mutación de los genes reguladores en comparación con un gen estructural
fotosintético en las espadas plateadas hawaianas radiadas adaptativamente (Asteraceae;
Barrier et al. 2001). Nuestro estudio se centra en un ejemplo clásico de radiación adaptativa, la
Macaronésica Crassulaceae-Sempervivoideae (MCS), y nuestro objetivo es explicar los
procesos de especiación a la luz de la evolución de los genes nucleares.
1.2 Radiaciones insulares y macaronésicas

Crassulaceae-Sempervivoideae
Los organismos insulares oceánicos pueden reflejar un escenario evolutivo diferente al de sus
contrapartes continentales. Las Islas Canarias son conocidas por ejemplos espectaculares de
Estudiando la Radiación Adaptativa a Nivel Molecular 37
Radiaciones de especies en varios grupos de plantas con flores. Junto conEquium

(Boraginaceae; Böhle et al.1996),argirantemo (asteráceas; Francisco-Ortega et al.
1996,1997),Sonchus (asteráceas; Kim et al.1996), los MCS son un ejemplo clásico de
radiación adaptativa (Lems1960; Voggenreiter1974; Kullmil novecientos ochenta y
dos; Lösch 1990). Este grupo comprende los génerosAeonio (incluidoGreenovia; -44
especies), Monanthes (-13 spp.) yAichryson (-13 especies; Liu1989; Mort et al.2002;
Fairfield et al.2004). Su taxonomía se comprende relativamente bien, a excepción
de algunos taxones, p.Monanthesspp. (lemas1960; bramwell1968; Liu1989; Nyffeler
1995; Hohenester y Welss1993) y se ha investigado la filogenia (Mes1995; Mes y 't
Hart1996; Mes et al.1997; Jorgensen y Frydenberg 1999; Mort et al.2002; Fairfield et
al.2004). En consecuencia, la hermana del grupo de islas esSedumsecta.
Monanthoideaconsistente exclusivamente enS. jaccardianum, S. surculosumyS.
modestum (Higo.1) que ocurren en el continente del norte de África (Uhl1961; mes
1995).
En comparación con más de 70 especies de MCS, el bajo número de taxones en la
secta. Monanthoidea –suponiendo tasas de extinción iguales, sugiere que este clado no
experimentó una gran radiación. Reconstrucciones filogenéticas basadas en la región
ITS ribosómica nuclear y varios marcadores de cloroplasto (Mes1995; Mort et al. 2002;
propios datos) junto con la alta variación morfológica y ecológica se interpretaron como
evidencia adicional de una radiación adaptativa dentro de los MCS en relación con sus
parientes más cercanos,Sedumsecta.Monanthoidea.Aunque las relaciones
interespecíficas exactas dentro deAeonioa menudo quedan sin resolver o tienen un
soporte débil, la imagen general se muestra mediante datos genéticos nucleares y de
plástidos. Respectivamente,Aichrysones el género más basal en el MCS y hermano de
Aeonio y la perenneMonanthesespecies (Mes1995; Mort et al.2002). La posición de la
anualMonanthes ictérica,sin embargo, permaneció poco claro, mostrando afinidades
más cercanas conMonanthesoAichryson (Mes et al.1997; Nyffeler1995; Mort et al.2002).
El MCS tiene su centro de diversidad y distribución en las Islas Canarias, sin embargo,
también se encuentran algunos taxones en las Islas de Cabo Verde (1 sp.), Madeira (2 spp.), en
Marruecos (1 sp.), o E África/Arabia (2 spp.; Liu1989; Hohenester y Welss1993; mes1995;
Jorgensen y Frydenberg1999). Estas ocurrencias se consideran el resultado de eventos
secundarios recientes de dispersión a larga distancia (Mes et al. 1996; Mort et al.2002).
Especies deAeonio, MonanthesyAichrysongeneralmente están restringidas a requisitos
especiales de hábitat (Hohenester y Welss1993; Jorgensen y Frydenberg1999). Según
Hohenester y Welss (1993), se encuentran principalmente en “comunidades vegetales de lava
y roca macaronésicas” desde el nivel del mar hasta los 1.700 m de altitud. Estos hábitats se
encuentran en una gran variedad de tipos de vegetación (por ejemplo, bosques de laurisilva y
pino) y se distinguen por diferentes regímenes de lluvia, temperatura, luz y edáfico (Liu1989;
Lösch1990). Además, se ha demostrado que las Macaronésicas Sempervivoideae están
específicamente adaptadas fisiológicamente a estos hábitats (Lösch y Kappen1981; Lösch1990;
Pilon-Smits et al.1992; Mort et al.2007). Al mismo tiempo. las Sempervivoideae macaronésicas
muestran muchas variaciones en la flor (p. ej., merosidad de los órganos, longitud de los
pétalos, color), inflorescencia (p. ej., ramificación, forma) y morfología de la forma de
crecimiento (p. ej., características del ciclo vital,
38 M. Thiv et al.
18 19 20 21
13 14 15 dieciséis 17
11 12
Aeonio
9 10
Monanthes
C b
a
Aichryson
Macaronesia Monanthes
> 70 spp. ictérica
6
7
4 5 3
noroeste de África
3 spp.
1 2
Sedumsecta.Monanthoidea
Figura 1Las relaciones filogenéticas simplificadas de Macaronesian Crassulaceae-Sempervivoideae

(MCS), grupo hermano deSedumsecta.Monanthoidea (1.–3.), derivado de datos de cloroplasto y nrITS
(ver Fig.2, cf. Mort et al.2002) mostrando la diversidad morfológica y ecológica de los miembros
representativos. (1)Sedum jaccardianum*, (2)S. surculosum*, (3)S. modestum*, (4)Aichryson
parlatorei, (5)Ai. punctatum, (6)Ai. laxum*, (7)Monanthes ictérica*, (8)M. silensis, (9)M. laxiflora, (10)M.
anagensis*, (11)Aeonium volkeri, (12)A. canariense*, (13)A. saundersii*, (14)
A. urbicum, (15)A. holochrysum, (dieciséis)A. sedifolium, (17)A. cuneatum*, (18)A. aureum*, (19)A. smithii*, (
20)A. spathulatum, (21)A. pseudourbicum.En todas las cifras:A. = Aeonium, M. = MonanthesyAi. = Aichryson.
Los genes candidatos se secuenciaron para taxones con un asterisco. Hábitats de MCS: (a) rocas al nivel del
mar conA. sedifolium, (b) techos conA. urbicum, (c) bosques de laurisilva, (d) Pinus canariensisbosque a
mayor altura. Todas las fotos M. Thiv excepto 3. R. Harling SMNS
hábitos; Liu1989; Hohenester y Welss1993; Higo.1). Esta diversidad ha sido objeto de

varias consideraciones sobre el origen, las correlaciones con la ecología y la evolución de
estos rasgos (Lems1960; Pilon-Smits et al.1992; Mes y 't Hart1996; Jorgensen y
Frydenberg1999; Jorgensen y Olesen2000; Jorgensen y Olesen 2001; Mort et al.2002,
2007). Sobre la base de esta evidencia, hasta el presente, la MCS ha sido ampliamente
considerada como un ejemplo de radiación adaptativa (Lems1960; Voggenreiter1974;
mes1995).
1.3 Genes candidatos
Los segmentos de ADN que evolucionan de forma neutra, como el ADN del cloroplasto, a
menudo no pueden rastrear la evolución de radiaciones rápidas (adaptativas) (por ejemplo,
revisado por Baldwin et al.1998). Por el contrario, puede ser más prometedor analizar genes
que se supone que están involucrados en un rasgo particular en el que las especies difieren
entre sí y que podrían haber sufrido un cambio drástico. El gran desafío es detectar esos
genes entre la gran cantidad de genes en una planta, por ejemplo, >25,000 genes en
Arabidopsis (Iniciativa del genoma de Arabidopsis2000). Si no se dispone de datos genómicos
para un taxón especial, se puede deducir la función de un gen a partir de otros organismos
estrechamente relacionados. En nuestro proyecto analizamos tres genes nucleares que
sospechamos que están implicados en las características del fenotipo entre MCS. Dentro de la
radiación adaptativa, se encuentra una alta variación de morfología floral/inflorescencia.
Además, la colonización de una amplia gama de hábitats caracterizados por diferentes
regímenes de humedad está relacionada con diferentes actividades CAM de MCS (ver Fig.1).
Por lo tanto, los homólogos de los genes que afectan la morfología de las flores y las
inflorescencias (APETALA1 = AP1, APETALA3 = AP3)fueron seleccionados, y un gen que codifica
para la fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) que es importante para el sistema de agua de la
planta (ver Secc.2.1).
En este estudio, presentamos un análisis sobre la evolución de estos genes
candidatos y discutimos los posibles factores que impulsaron la evolución de la MCS.
Abordamos las siguientes preguntas. (1) ¿Son los MCS una radiación adaptativa (sensu
Schluter1998)?. (2) ¿Pueden detectarse copias ortólogas y parálogas funcionales
diferentes o posibles en estos genes? (3) ¿Reflejan los genes candidatos las relaciones
filogenéticas inferidas a partir de marcadores genéticos ampliamente utilizados (nrITS;
Figs.1y2)? (4) ¿Cuál es el impacto relativo de estos genes de codificación nuclear en
términos de regímenes de selección? Y (5) ¿qué podría haber desencadenado la
evolución del MCS?
2 Material y Métodos
Los principales puntos de la metodología se resumen aquí. Para una descripción detallada,
consulte Esfeld (2009) y Thiv et al. (en la preparación de).
40 M. Thiv et al.
2.1 Selección de la Comisión de Estudio
2.1.1 ITSnr
Todas las secuencias disponibles de Mort et al. (2002) repuestos con nuevos datos se usaron para un
análisis filogenético utilizando la inferencia bayesiana (Fig.2). Con base en el árbol de consenso
resultante, se produjo un árbol ultramétrico usando r8s (Sanderson2004). Basado en este árbol, un
gráfico de linaje logarítmico a través del tiempo (LTT) (Fig.2) fue creado manualmente.
2.1.2 Genes candidatos
En este estudio se incluyeron un total de 17 taxones. La selección representa 12 especies

de MCS (8 especies deAeonio,2 deAichrysony 2 deMonanthes),las tres especies del grupo
hermano deSedumsecta.Monanthoideay dos taxones externos deSedum. Las especies
muestreadas representan todos los principales clados de MCS según Mort et al. (2002) y,
al mismo tiempo, mostrar la variación morfológica y ecológica de este grupo (Fig.1). Los
datos de comprobantes y secuencias se dan en Esfeld (2009) y (Thiv et al., en
preparación).
2.2 Selección de genes candidatos
2.2.1 Genes reguladores
Se ha planteado la hipótesis de que los genes reguladores que codifican factores transcripcionales están
fuertemente involucrados en la diversificación de las plantas. Los genes homeóticos de la caja MADS
pertenecen a este grupo. En el modelo general ABCDE (Theißen2001; Erbar2007), cada clase controla la
identidad de ciertos órganos florales en las eudicotiledóneas. Los genes de clase A afectan a los sépalos y
pétalos, los genes de clase B a los pétalos y estambres, los genes de clase C a los estambres, carpelos y
óvulos, los genes de clase D solo a los óvulos y los genes de clase E afectan a todos los órganos florales.
APETALA1 (AP1)es un gen de caja MADS homeótico de clase A. Paraarabidopsis,se
podría demostrar queAP1también tiene un impacto en el número de ramas de
inflorescencia y el tiempo de floración (Mandel y Yanofsky1995).
APETALA3 (AP3)pertenece a los genes de la caja MADS homeiótica floral de clase B que
definen la identidad del órgano y la posición de los pétalos y estambres (Weigel1998). En
arabidopsis,Se planteó la hipótesis de que un sitio QTL para el tamaño de los pétalos y los
estambres estaba localizado en una región que incluyeAP3 (Juenger et al.2000).
2.2.2 Gen estructural
La PEP carboxilasa se expresa ampliamente en la mayoría de los tejidos vegetales. PEPC cataliza la
fijación de CO2para producir oxalacetato. Desempeña un papel clave en la fijación primaria de CO2en
CAM xerofítica y C4plantas y tiene una función anaplerótica en muchas células
(Chollet et al.1996). También se pudo demostrar que PEPC se expresa en un nivel más
alto en situaciones de estrés hídrico deKalanchoe blossfeldiana,un pariente cercano de
MCS (Gehrig et al.1995). Lösch y Kappen proporcionan más evidencia de un vínculo
entre PEPC y la adaptación ecológica (1981), Lösch (1990), Pilon-Smits et al. (1992) y Mort
et al. (2007), quienes encontraron actividades CAM divergentes para varias especies de
MCS.
2.3 Trabajo de laboratorio
Se recolectó tejido floral fresco desde etapas tempranas hasta maduras de MCS seleccionado
y se usó para la extracción de ARN y la amplificación de ADNc. PCR usando diferentes
degenerados PEPC, AP1,AP3Se realizaron cebadores (Kramer et al.1998; Barrera et al.2003; litt
e irlandés2003; Gehrig et al.1995; Esfeld2009; Thiv et al., en preparación). Sobre la base de
estas secuencias, se crearon cebadores específicos que produjeron una amplificación basada
en el ADN genómico, seguida de la clonación y secuenciación de al menos cinco copias por
clon (Mort y Crawford2004). Los exones e intrones se determinaron por comparación con
fragmentos de ADNc. Solo se consideraron regiones de exón únicas sin codones de parada
para los análisis. Para más detalles, véase Esfeld (2009).
Nuestro objetivo era completar la secuenciación de los tres genes candidatos para nuestra
selección de taxones. A pesar de varios intentos, algunas accesiones no han tenido éxito, p.
Aichrysonno se pudo secuenciar paraAP1.
2.4 Análisis de datos
2.4.1 Análisis filogenéticos
La inferencia bayesiana de la filogenia utilizando todos los conjuntos de datos se exploró utilizando
MrBayes v3.1.2 (Huelsenbeck y Ronquist2006). Los modelos fueron seleccionados por AIC en
Modeltest 3.7. (Posada y Crandall1998). Las descripciones detalladas de las opciones utilizadas para
los análisis se dan en Esfeld (2009).
Valores Ka/Ks
Para probar el régimen de selección a nivel molecular, se comparan las tasas de

sustituciones sinónimas y no sinónimas (Nei y Kumar2000). Mientras que las
mutaciones no sinónimas producen un cambio en los aminoácidos, una mutación
sinónima en la tercera posición intercambiable de un codón deja el aminoácido
inalterado. La tasa relativa de sustitución no sinónima y sinónima se calcula como
el número de sustituciones sinónimas por sitio sinónimo (Ks) y el número de
sustituciones no sinónimas por sitio no sinónimo (Ka) para un par de secuencias
(Nei y Gojobori1986; Nei y Kumar2000; Hurst2002). Así, el cociente
42 M. Thiv et al.
Ka/Ks por sitio, también llamadoovalor, es un indicador del régimen de selección a nivel
molecular. En el caso de evolución neutra, se espera un valor igualado de Ka/Ks -1, la selección
purificadora daría un valor de Ka/Ks <1 y la selección positiva (selección diversificadora) daría
como resultado Ka/Ks >1 (Nei y Kumar2000). Los valores de Ka/Ks de los genes antes
mencionados se calcularon de acuerdo con el método de Nei y Gojobori (1986) con corrección
de Jukes-Cantor y eliminación completa de lagunas implementada en MEGA versión 4 (Tamura
et al.2007). Los errores estándar se obtuvieron mediante un procedimiento de arranque (1000
repeticiones). Calculamos los valores de Ka/Ks para los grupos que encontramos en los tres
genes candidatos. Los valores medios y las desviaciones estándar para las secuencias
correspondientes se dan en las Figs.3–5. La comparación de las diferencias significativas de los
valores de Ka/Ks se realizó utilizando untprueba.
2.4.2 Citas
Datación Molecular
Para lograr una estimación aproximada de cuándo ocurrieron los eventos de cladogénesis en
MCS, se utilizó la divergencia molecular de nrITS. La evolución similar a un reloj se probó
utilizando una prueba de razón de verosimilitud (LR) (Felsenstein1981; Sanderson1998; Nei y
Kumar2000). Al igual que varios otros estudios recientes (Richardson et al.2001; Bossuyt y
Milinkovitch 2001; Cooper et al.2001), se utilizó una fecha de calibración geológica para las
estimaciones de datación molecular. Excepto por los taxones terminales que probablemente
sean el resultado de una dispersión reciente, la compleja estructura biogeográfica de MCS no
nos permitió atribuir una sola isla a un clado endémico apropiado. En cambio, fijamos la edad
de Fuerteventura en 20,7 millones de años (Carracedo1994) como la isla canaria más antigua,
y como el límite superior para la edad posible del nodo principal de la radiación de la isla.
Aunque somos conscientes de que este único punto de calibración no es preciso y, además, la
edad real del taxón puede estar subestimada en determinadas condiciones (Heads2005), las
estimaciones de edad de muchas otras plantas canarias (Böhle et al.1996; Kim et al.1996) son
mucho más jóvenes que la edad geológica del archipiélago y están de acuerdo con nuestros
resultados. Aplicamos el método de datación bayesiano (Thorne et al.1998; Thorne y Kishino
2002) siguiendo a Rutschmann (2004) y Thiv et al. (2006) utilizando baseml (PAML, Yang1997),
estbranches (Thorne et al.1998) y multidivtime (Kishino et al.2001; Thorne y Kishino2002).
3.1 ¿Son los MCS el resultado de una radiación adaptativa?
La definición de "radiaciones adaptativas" plantea varios problemas. Primero, es difícil

cuantificar clados ricos en especies versus grupos hermanos pobres en especies. En
segundo lugar, la medición y evaluación de la diversidad morfológica y ecológica.
requieren la recopilación de grandes cantidades de datos. Estos puntos hacen inviable

probar este fenómeno (Schluter1998). Al mismo tiempo, el grado de “adaptación” de
ciertas características es difícil de probar, como se ilustró previamente en el MCS
(Jorgensen y Frydenberg1999; Jorgensen y Olesen2001). Al comparar la variación
fenotípica entre MCS y su hermana continental del género Sedumse encuentra una alta
diversificación en el grupo de islas (Fig.1). En primer lugar, en cuanto a caracteres
vegetativos como hábitos y formas de vida, los taxones insulares comprenden anuales (
Aichryson, Monanthes ictérica),leñoso perenne (Aeonium, Aichryson tortuosum, Ai.
Bethencourtianum)y herbáceas monocárpicas perennes o de vida corta (Monanthes,
Aeonium)plantas con diferentes niveles de sistemas de ramificación (por ejemplo, Liu
1989; Jorgensen y Olesen2000; Mort et al.2002; Fairfield et al.2004). En segundo lugar,
esta plasticidad se encuentra en los caracteres florales que afectan los rasgos
reproductivos. Sus flores son coripétalas y actinomorfas mostrando los rasgos típicos de
las Crassulaceae. Varían principalmente en la merosidad de las flores (5- a poliméricas),
tamaño, color y glándulas nectaríferas que nacen en la base de los carpelos. Esta gran
variedad floral, sin embargo, también se encuentra enSedumsecta.Monanthoidea.
Aunque comprende sólo tres especies, su morfología floral varía de 6 a 10 meros,
amarillo,Aichryson-como flores (S. modestum, S. jaccardianum) aMonanthes-como flores
con nectarios enS.surculosum (Maire1976), que es una de las razones por las que
Nyffeler (1995) colocó este taxón enMonanthes. Sedum modesto es una planta anual
mientras queS. jaccardianumyS.surculosumson hierbas perennes (Maire1976). Las
diferencias en el espacio ecológico son algo difíciles de evaluar. Como se ha descrito, los
hábitats de MCS varían en las Islas Canarias desde el nivel del mar hasta la vegetación
del bosque de pinos.Monanthoidea'Los miembros de s también muestran un ancho
ecológico considerable al crecer en vegetaciones rocosas en el noroeste de África que
van desde montano (piedra caliza:S. modestum, S. jaccardianum)a grandes alturas
alpinas (silicato:S.surculosum).Podemos resumir que existen diferencias en la variación
morfológica y el espacio ecológico entre MCS y su hermana continental, pero
claramente aún quedan muchas observaciones por hacer.
La simple comparación de los números de especies de MCS y su hermana puede no ser
suficiente para identificarlos como un ejemplo de un grupo de especies de radiación
adaptativa. Para definir el gradiente de especificación, utilizamos un gráfico de linaje a través
del tiempo (LTT) basado en la filogenia de MCS que incluye todas las secuencias nrITS
disponibles. No es sorprendente que las relaciones filogenéticas concuerden con
investigaciones anteriores (Mes et al.1996; Jorgensen y Frydenberg,1999; Mort et al. 2002). Sin
embargo, surgieron algunos aspectos nuevos. Además de estos estudios,Aeonium cuneatumy
A. smithiihan sido incluidos. Este último es claramente parte del "clado 2" en Mort et al. (2002);
posiblemente en la base de este clado de taxones en su mayoría de flores amarillas. En
nuestro análisis, la relación deAeonium cuneatumdentro del género no está resuelto, pero se
basa en evidencia morfológica (Liu1989), es probable que sea parte de la Sección Patinaria (Liu
1989) o “clado 1” (Mort et al.2002) junto con especies conocidas comoA. canarienseoA.
tabuliforme.Nuestra selección de taxones representa un muestreo de especies bastante
completo (Fig.2; 81% del grupo MCS). Varias especies excluidas comoAeonium sedifoliumo
Monanthesespecies o posibles híbridos deAeonio (cf. Bañares1986,1990) es poco probable
que sean de origen temprano y por lo tanto
44 M. Thiv et al.
1.00 A. volkeri
a 0.90
A. mascaense
A. lancerottense
A. undulatum
0,95 A. holocriso
A. vestitum
0.82 A. percarneum
1.00 A. percarneum
A. korneliuslemsii
A. gorgoneo
0.89 A. leucoblepharum
A. rubrolineato
A. Simsii
A. balsamiferum
0.94 A. decoro
A. castello-paivae
A. urbicum
A. noble
A. davidbramwellii
0.91 A. haworthii
0.78 A. espátulatum
A. gomerense
A. ciliatum
0,63 A. hierrense
A. pseudourbicum
A. glutinoso
A. glandulosum
A. viscatum
A. aizoon
0.70 1.00 aureum
0.52 aureum
Aeonio A. diplociclum
1.00
A. saundersii
A. smithii
A. palmense
A. tabuliforme
0,94 A. subplano
A. canariense
A. virginum
1.00 A. cuneatum
0.99 A. goochiae
A. Lindleyi
M. mínimos
1.00 M. adenoscepes
Monanthes
0.74 M. anagensis
1.00 M. laxiflora
1.00 1.00 M. brachycaulon
1.00 M. amydros
M. subcrassicaulis
M. ictérica
1 0.98 Ai. paquicaulón
1.00 1.00 Ai. porfirogenetos
0,68 Ai. punctatum
Aichryson
1.00 0.57 Ai. laxum
Ai. palmense
Ai. tortuoso
S. jaccardianum
1.00 S. jaccardianum
1.00
S.surculosum
S. modestum
1.00 S. caeruleum
S. pubescens
b 100
10
1
100
Figura 2 (a)Secuencias nrITS del árbol de consenso bayesiano ultramétrico de MCS producidas usando r8s. (b) Gráfica de linaje/
tiempo relativo basada en estos datos. Para estimaciones de fechas, consulte la secc.3.3
no obstaculice nuestras conclusiones. Por el contrario, suponiendo una edad joven, el

aumento de la tasa de especiación estaría bastante subestimado. Aplicando un marco
temporal máximo de 20,7 millones de años, la edad de la isla canaria más antigua,
Fuerteventura, MCS posiblemente evolucionó en torno a los 1,50 millones de años (DE = 1,76;
intervalo de confianza: 0,05-6,47). Estas estimaciones son más recientes que las de Kim et al. (
2008) quien sugirió un origen mioceno del grupo. Esta divergencia podría deberse al uso de
diferentes métodos, por ejemplo, el uso de un conjunto de datos combinados de nrITS y
cpDNA y diferentes puntos de calibración de Kim et al. (2008). Independientemente de una
edad precisa de MCS entre el Pleistoceno Inferior y el Mioceno, llama la atención, sin embargo,
notar un claro aumento de la diversificación en la corona deAeonio (Higo.2), un nodo que data
de hace 1,05 millones de años (DE = 1,26; intervalo de confianza: 0,04-4,58) en nuestro estudio.
Por supuesto, parece posible una mayor tasa de extinción en la fase inicial de la colonización
de la isla. Aún así, uno esperaría algunos sobrevivientes en la base de MCS, tal vez Monanthes
ictérica,Por ejemplo. Suponiendo tasas de extinción iguales a lo largo del tiempo, esto
indicaría una tasa de especiación constante independiente del evento de colonización de la
isla, según nuestra datación de 1,50 a 1,05 millones de años. Por lo tanto, el estallido de la
especiación obviamente ocurrió en una etapa posterior (ca. 0,5 millones más tarde) con la
diversificación deAeonio (cf. Kim et al.2008).
A partir de estos puntos discutidos, concluimos que el MCS probablemente no puede
considerarse como el resultado de una radiación adaptativa en el sentido estricto de Schluter (
1998), pero básicamente forman una radiación más joven deAeoniodentro de todo el linaje de
la isla (cf. Jorgensen y Frydenberg1999). Esto deja la pregunta principal de por qué tal
aumento en la diversificación de linajes se encuentra enAeonio.Tal desencadenante de la
evolución puede ser causado por factores internos o externos, o una combinación de ambos.
A continuación, nos centramos en la evolución de los genes nucleares para contribuir a las
soluciones de esta hipótesis.
3.2 Evolución de genes
3.2.1 Copias ortólogas/parálogas
Las copias de genes ortólogos son el resultado de un evento de especiación. Por el contrario, las
duplicaciones de genes dentro de una especie conducen a copias parálogas. Las duplicaciones de
genes pueden ser una fuente primaria de materia prima para el origen de novedades evolutivas
como nuevos patrones de función y expresión de genes (Lynch y Conery2000). Dado que los genes
duplicados a menudo adquieren funciones nuevas y diferentes, idealmente estas funciones de los
genes se estudian mediante un enfoque experimental que muestra el impacto de este gen en el
fenotipo (Theißen2002).
En los tres genes candidatos seleccionados, se encontraron diferentes copias de genes. Para la
interpretación de las copias de genes, utilizamos los árboles de consenso bayesianos y los
comparamos con los árboles nrITS como filogenias inferidas de forma independiente, y realizamos
búsquedas explosivas de las secuencias (Genbank NCBI) para las posibles funciones de estas copias.
En total, intentamos secuenciar al menos cinco copias por accesión (Mort
46 M. Thiv et al.
y Crawford2004). Aquí, sin embargo, mostramos los análisis de conjuntos de datos reducidos y
modificados con un solo representante de cada grupo de copias de genes de las especies estudiadas.
Estos análisis pueden mostrar topologías ligeramente diferentes a las que incluyen todos los datos
(cf. Esfeld2009). Existe una probabilidad relativamente alta de que la mayoría de las copias de una
especie fueran el objetivo de este enfoque. Aún así, parece posible que ocasionalmente algunos
pequeños clados de copias parálogas de, por ejemplo,AP1,puede representar copias
submuestreadas de una familia multigénica más grande. Por el momento, hasta que haya más
evidencia disponible, interpretamos nuestros grupos de genes como pertenecientes exclusivamente
a ciertos taxones. Los datos presentados incluyen copias deMonanthesyAichryson,que sólo se
encontraron en algunos clados.
PEPC:La reconstrucción del árbol (Fig.3) muestra varios clados dePEPCsecuencias que
indican que hay varias copias presentes en las Crassulaceae. En la base, un largo grupo de
ramas deSedum pubescens (243, 1c43) yS.surculosum (34341) se encuentra. Otros ejemplares
de la misma especie (S. pubescens343,S.surculosum2c4391) conectarse a un grupo central de
Sedum Monanthoideay MCS. El patrón es relativamente complejo cuando varias copias de
Aeonioentremezclarse con secuencias deMonanthes yAichryson.Reconocimos al menos tres
copias principales dentro de la radiación de la isla como se deduce deA. nobleindicado como
A, B y C en la Fig.3, mientras que las copias marcadas como A y B posiblemente pueden
interpretarse cada una como un solo grupo ortólogo como se indica en un análisis que incluyó
todas las copias (Thiv et al., en preparación). No obstante, las relaciones "filogenéticas" de alto
nivel inferidas dePEPC contradecir los patrones nrITS como nuestroPEPCdatos sugieren
relaciones más cercanas entreMonanthesyAichrysonen los clados A y C. Este es otro ejemplo
en el que los árboles de genes probablemente no reflejan la filogenia (Fortune et al.2007).
Dentro del grupo A,Aichryson pachycaulonyMonanthes anagensisse agrupan, y curiosamente
ambos crecen en bosques de laurisilva compartiendo también un carácter ecológico. Hasta
ahora excluimos una convergencia funcional porque al menosA. pachycauloncomparte una
copia de las copias C. Las relaciones interespecíficas deAeonio,especialmente del clado C,
como se infiere dePEPC,no coinciden con la filogenia nrITS. En contraste con el conocimiento
actual, todos los taxones de flores amarillas (A. saundersii, A. smithii, A. aureum) se pueden
encontrar en un solo grupo. En otra parte del árbol,Aeonium cuneatumyA. canariensecaen en
el mismo clado, aunque conAeonium rubrolineatumque hasta ahora siempre ha estado
excluida de dicha agrupación (Liu 1989; Mort et al.2002).
Los datos indican que los grupos son copias de genes diferentes en lugar de reflejar
la filogenia estricta. Partes del patrón complejo encontrado paraPEPCpuede explicarse
por varias funciones de las diferentes copias. Según los resultados de la búsqueda
BLAST, los clados basales deSedum surculosumyS. pubescenslo más probable es que
ejecute la función de la isoforma 4 de PEPC, como enLupino. Sedum surculosum2c4391 y
S. caeruleumestaban más cerca dePEPCisoforma 2 deKalanchoe.De lo contrario,
probablemente secuenciamosPEPCisoforma 1 para el gran resto de todos los MCS ySedum
Monanthoidea. Suponiendo que hay tres copias principales dePEPCisoforma 1 dentro de la
MCS, nos queda la pregunta de cómo evolucionaron. Debido a que los clados A y C incluyen
secuencias de los tres géneros de MCS, probablemente representan copias que evolucionaron
en una etapa temprana en el MCS después de la separación deSedumsecta. Monanthoidea.
Podrían haberse perdido enMonanthesyAichrysono
0.84 A. cuneatum401
PEPC
0.84 A. rubrolineato432
0.70 A. canariense411
0.84 A. noble36222
A. canariense41321
0.84
A. saundersii372
0,95 C0,108 (0,053)
0.84 A. smithii321
0.99
aureum391
1.00 A. goochiae501
Ai. laxum461
1.00
0.85 Ai. paquicaulón311T
1.00
1.00 M. ictérica475
A. cuneatum402
B0.091
0,61 A. noble361
A. noble362
0,60
0.86 A. smithii324
A. rubrolineato43322 A0,122 (0,112)
0,92
aureum39122
Ai. paquicaulón315T
1.00
0.98 M. anagensis301T
1.00 Sedum jaccardianum511

1.00 Sedum jaccardianum515 0,050 (0,021)
0,92
Sedum surculosum44342
0,92
0,95 Sedum caeruleum422
Sedum surculosum2c4391
0.054
1.00 Sedum pubescens343
0.96 Sedum pubescens1c43

1.00 Sedum surculosum34341
Sedum pubescens243
Kalanchoe gracilis 0,033 (0,017)
Pinnata de Kalanchoe
0.1
Fig. 3Árbol de consenso bayesiano de secuencias de exones del gen PEPC de MCS. Las probabilidades
posteriores se dan en los nodos.Capitalesmarcar posibles grupos de copias de genes. Los grupos A y B se
definieron en base a grupos de un análisis más grande que arrojó topologías ligeramente diferentes (no se
muestra). Números en cursivaindicar los valores Ka/Ks medios de los clados correspondientes y losnúmeros
entre paréntesissu desviación estándar
48 M. Thiv et al.
ganado exclusivamente enAeonio.De momento, preferimos esta última alternativa, ya

que parece más parsimonioso que se haya ganado una vez, que perdido dos veces.
AP3:En el árbol bayesiano (Fig.4), el grupo continental,Sedumsecta.monanthoidea,
está representado por un grupo ortólogo conS. jaccardianumestando anidado en
S.surculosum.Para este linaje, las búsquedas BLAST indicaron las mayores similitudes con AP3-
como genes deKalanchoe.
El grupo de islas consta de dos clados principales bien sustentados (Fig.4). Un
posibleDEFICIENCIAS (DEF)-como linaje (clado A en la Fig.4) perteneciente
exclusivamente aAeonioes hermano del cladoAP3-como secuencias deAeonio,
Monanthes yAichryson (clado B en la Fig.4). Mientras que las relaciones en el clado
A entre Aeonioespecies parecen difíciles de interpretar, el patrón del clado B es en
gran medida consistente con la filogenia nrITS, dondeAichrysones basal a
Monanthesy Aeonio.En el clado B,AichrysonyMonanthes ictéricase encuentran en
una posición basal, seguidos deMonanthes anagensisyAeonio.Como en elPEPC
árbol, Aeonium saundersii, A. smithii,yaureumagruparse. Estrechas relaciones
entreAeonium canarienseyA. cuneatumtambién se revelan, adicionalmente en el
clado A, apoyando los datos morfológicos ya mencionados. La posición especial de
Monanthes ictérica,aquí hermana deAichryson pachycaulon, también se ve. En el
clado B, cada especie posee una copia ortóloga. Como enPEPC, aDEF-como grupo
de genes atribuidos exclusivamente aAeoniofue encontrado. Una vez más, estos
genes podrían haber evolucionado enAeonioo se perdieron enMonanthesy
Aichryson.Bajo la regla de la parsimonia, es concebible que la duplicación de un
gen diera lugar aDEF-como genes enAeonio.
AP1:El patrón más complejo se encontró paraAP1 (Higo.5). Al enraizar el árbol
consedum caeruleum,un grupo deSedum Monanthoideay se detectaron varios
clados de copias parálogas de MCS. Definimos el primer grupo A, formado por
Aeonium goochiae23637 yaureum1b3637, debido al hecho de que ambos se
agrupan como el clado más basal en un análisis más amplio (no se muestra). Se
encontró la misma topología general siAP1Se añadieron secuencias de otras
rósidas (por ejemplo, Citrus) (no mostradas). El segundo clado B consta sólo deA.
smithii23637 yA. saundersii33637 estar cerca deSedumsecta.Monanthoidea.El
tercer grupo, clado C, también comprende exclusivamente secuencias deAeonio.En
el clado D, secuencias deMonanthesyAeoniopuede ser encontrado. Los patrones
dentro de estos grupos no permiten conclusiones filogenéticas debido a la falta de
resolución o también es posible que haya pocos genes que se agrupen. Como el
ilustrado paraAP3yPEPC,nos vemos obligados a interpretar los clados AC como
novedades paraAeonio.
Patrón general
En todos los genes candidatos, se encontró un mayor número de copias exclusivamente para Aeonio.Como
se ha descrito, es más probable que las ganancias individuales de estas copias enAeonio están presentes, en
lugar de que exactamente las mismas copias hayan desaparecido independientemente en ambos
A. canariense304b
AP3 0.99
A. cuneatum225
0,94
A. rubrolineato26534
A. noble222
1.00
A. saundersii301
0.80
0.86 A. smithii224
0,95
B 0,316 (0,212)
aureum302b
0.88
A. goochiae26534
1.00 M. anagensis314bT
M. ictérica303
0.98
1.00 Ai. paquicaulón3026134T
Ai. laxum263
0.97
A. canariense26534
1.00
0.99 A. cuneatum26634
aureum262 A 0,254 (0,225)

1.00
0.78 A. rubrolineato261
A. smithii226
Sedum jaccardianum3
1.00
0.56 0.94 Sedum surculosum1
0,084 (0,028)
0.97 Sedum modesto10
Sedum caeruleum60 6
0.061
Sedum pubescens3
Sedum pubescens8
Kalanchoe
0.1 DQ479358
Figura 4Árbol de consenso bayesiano deAP3-como secuencias de exones de MCS. Las probabilidades
posteriores se dan en los nodos.Capitalesmarcar posibles grupos de copias de genes. Número detrás
Kalanchoees su EMBL no.Números en cursivaindicar los valores Ka/Ks medios de los clados correspondientes
y los números entre paréntesissu desviación estándar
50 M. Thiv et al.
AP1 1.00 A. canariense43039
0.52 A. noble13637
A. cuneatum22223
aureum2b3637
1.00
D
A. rubrolineato23039
0.368
0.84 A. saundersii13039 (0.177)
A. smithii53637
1.00 A. goochiae42223
M. anagensisT13637
M. ictérica1
0.93 aureum3b3637
0,94
A. smithii2a2539 C
0.90
A. cuneatum23637 0.311
1.00 (0.111)
A. canariense2b3637
0.84 A. noble1b3637
1.00 Sedum jaccardianum1

0,589 (0,687) 1.00 Sedum surculosum3
0.83 Sedum modesto1
1.00 A. smithii23637
B0.885
A. saundersii33637
1.00
A. goochiae23637
A0.861
aureum1b3637
1.00 Sedum caeruleum1

0.271
Sedum caeruleum4
0.01
Figura 5Árbol de consenso bayesiano deAP1-como secuencias de exones de MCS. Las probabilidades posteriores se
dan en los nodos.Capitalesmarcar posibles grupos de copias de genes. El grupo A se definió en base a un análisis más
amplio (no mostrado).Números en cursivaindicar los valores Ka/Ks medios de los clados correspondientes y los
números entre paréntesissu desviación estándar
AichrysonyMonanthesen momentos separados, como se indica en la evidencia nrITS. La capacidad

general de crear varias copias de genes en nuestro grupo de estudio ya está indicada por el hecho de
que ninguno de nuestros genes candidatos es estrictamente un gen de una sola copia. Como
aceptamos que ocurrieron múltiples duplicaciones de genes en tres genes nucleares en

Aeonio,que, sin embargo, no se refleja en el orden filogenético exacto de nuestros árboles,
nos deja con la pregunta de cómo ocurrió esto. Las duplicaciones de genes pueden ser el
resultado de recombinaciones homólogas anómalas, retrotransposiciones o duplicaciones de
un cromosoma o genoma completo (Zhang2003). Actualmente, no hay indicios de que el gen
PEPC,AP3yAP1se encuentran en el mismo cromosoma. En este caso, las duplicaciones de
genes podrían haber sido causadas por un evento de duplicación de un solo cromosoma. Aún
así, hay varios argumentos en contra de tal hipótesis. La poliploidía se encuentra enAichryson,
MonanthesyAeonio (Uhl1961; Liu1989) y los dos últimos géneros comparten el número de
bases cromosómicas deX¼18. Los casos de aneuploidía, que posiblemente indican
duplicaciones de un solo cromosoma, solo se han notificado para Aichryson (Uhl1961). Como
esperamos duplicaciones de genes al comienzo de la evolución de Aeonio,el número general
de cromosomas de 2n¼36 y 2n¼72 en este género hacen improbable un escenario de
múltiples duplicaciones de un solo cromosoma. Hasta el momento, no hay evidencia de
retrotransposones como la falta de intrones o tractos poli A en el MCS. En la actualidad, cruce
desigual enAeonioconducir a tándems de genes puede ser la mejor explicación alternativa de
por qué hay una mayor tasa de duplicaciones de genes. Además de importantes conteos de
cromosomas por Uhl (1961) y Liu (1989), todavía faltan estudios cariológicos detallados sobre
el emparejamiento de cromosomas. Esta puede ser una tarea prometedora para el futuro.
Oh, no (1970) y recientemente Zhang (2003) destacaron la importancia de la duplicación de genes

como factor evolutivo, mecanismo que se observa con mayor frecuencia en plantas que en animales
(Li1997; por ejemplo, Aagaard et al.2005). Nuestros datos respaldan este punto de vista y muestran
que las duplicaciones de genes probablemente estén relacionadas con un aumento de la especiación
en el MCS.
Aunque el aumento del número de copias enAeoniose interpreta mejor como resultado de
duplicaciones de genes bajo el criterio de parsimonia, consideramos una explicación alternativa.
También podrían representar copias restantes de un evento de poliploidía inicial en el MCS, mientras
que otros se sometieron a silenciamiento génico. Por un lado, tal escenario está respaldado por
números de bases cromosómicas mucho más altos en el grupo de islas en comparación con sus
hermanas del continente, pero por otro lado, es menos parsimonioso. Hasta que haya más datos
disponibles, ninguna de estas explicaciones es concluyente.
3.2.2 Importancia filogenética
En todos los genes candidatos, se detectaron varias copias de genes parálogos. En

muchos casos, existen diferencias notables en sus patrones filogenéticos entre sí, pero a
menudo también difieren del árbol nrITS. Considerando esto último como una
reconstrucción filogenética inferida de manera independiente y relevante, asumimos
que las mutaciones en las regiones codificantes de estos genes candidatos a menudo se
superponen a su señal filogenética. Las discrepancias entre los tres genes pueden
deberse en parte a la amplificación incompleta de todas las copias en todos los taxones,
p.AP1secuencias para Aichryson.Aún así, hay congruencias entrePEPCyAP3datos que
arrojan los mismos clados. Además, hay una señal filogenética enAP3-como secuencias
(clado B) que reflejan relativamente bien la historia evolutiva de MCS.
52 M. Thiv et al.
En consecuencia, nuestros datos pueden contribuir a una mejor comprensión sistemática

de este grupo. La monofilia deSedumsecta.Monanthoideaes corroborado por genes
candidatos;AP3yAP1secuencias deS. jaccardianumtodavía aparecen anidados dentro de los de
S.surculosum.Tal parafilia también parece posible a la luz de las relaciones no resueltas
entre tres accesiones en el árbol nrITS. La posición aberrante deMonanthes ictéricaha
sido discutido intensamente en el pasado (Nyffeler1995; Mes et al.1997; Mort et al.2002)
cambiando entreMonanthesyAichryson.Nuestros resultados apuntan hacia relaciones
cercanas conAichrysonen vez deMonanthesrepresentado por
M. anagensiscomo también lo sugieren Mes et al. (1997) y Mort et al. (2002) basado en datos de
morfología, RAPD y cpDNA. El uso de genes candidatos para la reconstrucción filogenética está
respaldado por partes de nuestros datos. Los estudios futuros deberían ampliar la selección de
taxones, especialmente paraAP3,para posiblemente resolver estos problemas filogenéticos.
3.2.3 Tasas de evolución de los genes candidatos
La proporción de sustituciones no sinónimas por sitio no sinónimo (Ka) y sustituciones

sinónimas por sitio sinónimo (Ks) puede brindar una estimación de la tasa de evolución
de un gen al indicar el régimen de selección (Nei y Kumar2000). Una tasa relativamente
más alta de mutaciones no sinónimas, expresadas en Ka/Ks, puede conducir a un
cambio en el fenotipo que indica una selección positiva (Nei y Kumar2000).
El patrón de distribución general de las tasas evolutivas en los distintos linajes en
MCS parece complejo. Al comparar las secuencias de ADN de la radiación de la isla en
relación con sus contrapartes continentales, se pueden observar valores medios mucho
más altos de MCS paraAP3yPEPC.Estas diferencias son significativas según tpruebas (
pag <0,05). ParaPEPC,no se encuentran diferencias extremas entre los valores de Ka/Ks
de los clados A-C. ParaAP3,elAeonioel clado A específico muestra valores más bajos que
el clado B. Esto argumenta a favor de un efecto de ambos genes en la evolución de todo
el grupo de islas que no parece estar restringido aAeoniosolo. Sin más estudios
experimentales, sin embargo, solo es posible conjeturar sobre la sub o
neofuncionalización de esas copias (Zhang2003). Bastante sorprendentes son los
patrones enAP1.Los valores más altos se encuentran para algunosAeoniosecuencias de
los grupos A y B. El grupo continental deSedum Monanthoideamuestra valores Ka/Ks
más bajos que estos clados, pero más altos que los de los clados C y D. Hay ejemplos en
los que diferentes copias ejecutan funciones variables. En orquídeas, múltiples
duplicaciones de genes dieron lugar a copias que adoptaron diferentes funciones en la
organización floral (Mondragón-Palomino y Theißen2008). En nuestro caso, parece
posible que las numerosas copias deAeonium-AP1se puede dividir en conservadores
(clados C y D), que es probable que hayan conservado más o menos sus funciones
originales, y los clados A y B que asumieron otras funciones. Al mismo tiempo,
tengamos en cuenta que la no funcionalización y la formación de pseudogenes de estas
secuencias no pueden excluirse por completo. Derivado de la variación morfológica y
fenológica en Aeonioy los efectos de AP1 enArabidopsis (Mandel y Yanofsky,1995), esos
ejemplares posiblemente estén involucrados en la ramificación de la inflorescencia y el
tiempo de floración. Se necesitan más estudios para resolver esto.
tabla 1Resultados detprueba que indica diferencias significativas en los valores de Ka/Ks entre estas copias (véanse
las Figs.3–5).letras detráslos genes se refieren a los grupos en las Figs.3–5
PEPC-A PEPC-C AP1-C AP1-D AP3-A

PEPC-C 0.642
AP1-C 0.001 0.000
AP1-D 0.000 0.000 0.204
AP3-A 0.113 0.072 0.482 0.157
AP3-B 0.000 0.000 0.900 0.165 0.423
Los patrones complejos se reflejan cuando se comparan los valores de Ka/Ks usando unt
prueba entre las copias del gen dePEPC, AP1yAP3 (Mesa1). Hay una diferencia significativa en
los valores Ka/Ks dePEPCen comparación con los genes reguladoresAP1yAP3. Esto es
congruente con la amplia observación de que los genes reguladores (AP3, AP1) evolucionar
más rápido que los genes estructurales (PEPC;blanco y doebley1998; Haag y cierto2001;
Barrera et al.2001,2003). En comparación con la relación Ka/Ks media estimada entre los
genes de Brassicaceae de 0,14 (Tiffin y Hahn2002), nuestros valores se elevan. Nuestros genes
reguladores analizados contribuyen a los complejos de factores de transcripción tetraméricos
de las proteínas de la caja MADS que controlan otros genes (Theißen y Saedler 2001). Por lo
tanto, un aumento en la relación Ka/Ks deAP1yAP3no es sorprendente Por el contrario, no se
encontraron diferencias significativas portanálisis de prueba entre los genes reguladoresAP1y
AP3y entre las dos copias A y C dePEPC (ver tabla1para detalles).
3.3 Evolución de MCS
Usando nuestros resultados y datos de la literatura, intentamos reconstruir la historia

evolutiva de MCS. Nos enfocamos en los aspectos espaciales y temporales y en los modos de
especiación.
Inferir de las relaciones cercanas aSedum Monanthoidea,El noroeste de África
probablemente se puede considerar como el punto de origen de la radiación de la isla
macaronésica (Uhl1961; mes1995; Mort et al.2002). Esto está de acuerdo con las
supuestas afinidades mediterráneas de muchas otras plantas canarias como, por
ejemplo,argirantemo (asteráceas; Francisco-Ortega et al. 1997),Sonchus (asteráceas; Kim
et al.1996),sideritis (lamiáceas; Barber et al.2002) yIxanto (gentianáceas; Thiv et al.1999).
Inferir de las posiciones basales deSedum modesto dentroMonanthoideayAichryson
dentro de MCS, tal antepasado podría haber sido una planta de roca anual con una baja
cantidad de pétalos amarillos. En Canarias, el MCS sufrió la mayor radiación. En
contraste con los puntos de vista anteriores (Lems1960; bramwell1976), las ocurrencias
fuera de este archipiélago, por ejemplo, Marruecos, África Oriental y Arabia) pueden
interpretarse claramente como secundarias (Mes et al.1996; Mort et al.2002).
54 M. Thiv et al.
En general, los modos de especiación entre MCS no reflejan patrones uniformes y varios
mecanismos de especiación parecen estar activos. La especiación alopátrica se puede inferir
fácilmente a partir de patrones filogenéticos (Johannesson2001). En el caso de que especies
estrechamente relacionadas ocurran exclusivamente en islas individuales, es probable que el
flujo de genes se vea obstaculizado o interrumpido. A veces se puede suponer una vicarianza
ecológica donde los taxones habitan espacios ecológicos similares en varias islas, como en el
caso de Mort's et al. (2002) “clado 1” deAeonio,en gran parte correspondiente a la Secc.
Patinaria (Liu1989). Aquí, todas las especies suelen crecer en laderas hasta los 1.000 m de
altitud (Liu 1989):A. canarienseyA. tabuliformeen Tenerife,A. virginumen Gran Canaria,
A. subplanoen La Gomera, yA. palmenseen La Palma y Hierro. En contraste con la
vicarianza ecológica, puede haber solo unos pocos casos en los que se produjo una
radiación en diferentes nichos en una sola isla (Jorgensen y Frydenberg1999). Según
Mort et al. (2002),Aeonium haworthii (noroeste de tenerife,Visnea-Dracaenacinturón,
bosques de laurisilva),A. urbicum (E Tenerife, en parte bosques de laurisilva) y
A. pseudourbicum (S Tenerife, arbusto suculento) forman un clado moderadamente
soportado y todas las especies crecen en diferentes partes de Tenerife, principalmente en
diferentes hábitats. Si este patrón no se debe a la historia geológica de Tenerife, que
antiguamente constaba de tres islas segregadas (Anchochea et al.1990; Confiable et al.2005), y
dada la filogenia correcta, este grupo puede ser un ejemplo de irradiación hacia diferentes
hábitats.
Aunque nuestro enfoque de datación molecular puede sufrir una calibración imprecisa, la
colonización de las Islas Canarias puede haber ocurrido en el Mioceno Superior-Plioceno-
Pleistoceno entre 0,05 y 6,47 millones de años o quizás incluso antes (Kim et al. 2008, véase la
secc.3.1). Estos periodos se caracterizan por elevadas actividades volcánicas y levantamientos
en las Islas Canarias (cf. Lösch1990; Carracedo1994; Confiable et al. 2005). Esto podría haber
llevado a la formación de muchos nichos ecológicos nuevos que podrían ser colonizados por
MCS. Como Lösch (1990) y Mort et al. (2007) mostraron, existen adaptaciones fisiológicas
específicas de MCS a sus hábitats. El metabolismo del carbono varía entre los tipos fuertes de
CAM a C3plantas. De nuestros genes candidatos,PEPCes el más involucrado en tales
actividades. Como se describió anteriormente, las mayores tasas de evolución dePEPCs en la
radiación de la isla puede apoyar la adaptación fisiológica significativa en el MCS.
La mayor tasa de evolución se encontró enAP1.Como se ha señalado, este gen podría tener un
efecto sobre el tiempo de floración. Este resultado puede explicar nuestra observación de que las
actividades florales temporales de especies simpátricas deAeonioa menudo solo se superponen
durante un período muy corto (Esfeld et al.2009). Además, diferentes sistemas de recompensas en
Aeonio,que ofrecen polen y/o néctar, probablemente tengan un impacto en el comportamiento del
polinizador y conduzcan a tasas de transferencia de polen intraespecíficas mucho más altas que
interespecíficas (Esfeld et al.2009). Según estos resultados, esto sugiere que el aislamiento
reproductivo puede ser un factor desencadenante importante de la evolución de la SQM. Al mismo
tiempo, la separación genética está lejos de ser completa. Por lo tanto, esto no entra en conflicto con
la observación de muchos híbridos naturales (y artificiales) basados en evidencia morfológica
(Praeger1932; Liu1989), pero puede incluso explicar este fenómeno. Estos híbridos pueden
convertirse en linajes evolutivos estables como lo han sugerido Jorgensen y Frydenberg (1999),
Jorgensen y Olesen (2001) y Mort et al.
(2002) que encontró inconsistencias entre los datos de ADN nuclear y plástido. Por lo tanto,
notamos que el MCS se une a varias otras radiaciones insulares donde la hibridación es un
importante factor impulsor evolutivo (Seehausen2004).
4 Resumen
En conclusión, la evolución del MCS probablemente fue promovida por factores externos e internos.
La disponibilidad de nuevos nichos formados por actividades volcánicas probablemente encontró la
oportunidad de adaptación fisiológica. Nuestros resultados indican que las duplicaciones de genes
nucleares pueden estar correlacionadas con un aumento en la tasa de especiación. La tasa de
sustitución acelerada deAP1puede explicar los cambios fenotípicos que pueden causar el aislamiento
reproductivo. Aún así, las débiles barreras genéticas permiten que la hibridación sea un fenómeno
común. Además de esto, la poliploidía es otro mecanismo evolutivo que también ocurre en la SQM,
pero no es tan frecuente como los otros factores.
Podríamos demostrar que el análisis de genes candidatos ha contribuido a una mejor
comprensión de la evolución de la diversidad en el MCS. Los experimentos que prueban los
efectos en el fenotipo de estos genes en estos taxones aún están pendientes. En el futuro, se
deberían investigar otros genes nucleares. De especial interés serían los genes implicados en
la plasticidad de la forma de crecimiento. En el caso de que se pudieran encontrar más
duplicaciones de genes paraAeonio,los estudios citológicos podrían proporcionar una visión
más profunda de estos mecanismos. Otra tarea futura extremadamente prometedora sería el
análisis de vínculos y correlaciones entre datos morfológicos, ecológicos y moleculares.
Expresiones de gratitudAgradecemos cordialmente a nuestros colaboradores; sin sus aportes este

proyecto no hubiera podido ser implementado. Agradecemos a Peter Linder, Philip Moline, Rolf
Rutishauser (Zurich), Timo vd Niet (Pietermaritzburg, RSA), Joachim Thiede (Hamburg), Mark Mort
(Kansas), Kerstin Neumann (Gatersleben) y Ulrich Kull por su precioso impacto teórico. (Stuttgart).
Además, agradecemos a Rainer Lösch (D€usseldorf), Urs Eggli (Zurich), Ray Stephenson
(Northumberland), Stephen Jury (Reading) y Joël Lodé (Cuevas del Almanzora) por su acceso al
material vegetal, Herbert Hohmann (Tenerife) por su ayuda en Tenerife, Timo vd Niet, Aelys
Humphrys, Valentin Grob, Philip Moline, Chloë Galley, Frédérique Pasquer (todo Zurich), el
laboratorio de Martin Blum (Hohenheim) por su valiosa ayuda de laboratorio y Maia Gurushidze
(Gatersleben) por su ayuda con r8s. Ingrid Jordon-Thaden ayudó con aportes editoriales y muchas
sugerencias útiles para mejorar el manuscrito. En particular, agradecemos a Frank Blattner
(Gatersleben) y a la ETX (Gatersleben) por su gran apoyo en muchos aspectos, al Cabildo Insular
(Tenerife) por el permiso para recopilar y realizar el trabajo de campo y a la DFG por la financiación
de este proyecto a MT (Th 830 /2-2).
Referencias
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Innovaciones clave versus oportunidades clave:
identificación de causas de radiaciones rápidas en
helechos derivados
Harald Schneider, Hans-Peter Kreier, Thomas Janssen, Elisabeth Otto,

Haiko Muth y Jochen Heinrichs
1. Introducción
Las radiaciones biológicas, por ejemplo, las radiaciones adaptativas y las radiaciones rápidas, son
ampliamente aceptadas como uno de los principales eventos que contribuyen a la diversificación del
árbol de la vida, pero muchos aspectos de estos eventos son poco conocidos (Schluter2000; Gavrilets
y Losos2009). Los ejemplos clásicos de radiaciones biológicas son las radiaciones adaptativas, en las
que un linaje ocupa una variedad de nichos diversificándose en un tiempo relativamente corto hasta
que se llenan todos los nichos. Sin embargo, no todas las radiaciones cumplen necesariamente este
patrón y se consideran ampliamente escenarios alternativos, como las radiaciones rápidas. Un revés
importante es la falta de una definición generalmente aceptada de radiaciones biológicas (Schluter
2000). Sin embargo, los estudios empíricos sobre la frecuencia y la contribución de la radiación
necesitan conceptos y criterios teóricos concisos, como el aumento temporal de la tasa de
diversificación o el número absoluto de especies para definir las radiaciones biológicas (Schluter2000
; Gavrilets y Losos2009). Por lo tanto, nuestro conocimiento está limitado tanto por la disparidad de
los conceptos aplicados como por la cantidad limitada de estudios que analizan la evidencia de
tantos linajes de organismos como sea posible. Por lo tanto, es imposible estimar cuantitativamente
la contribución de las radiaciones a la diversidad de la vida en la tierra hoy. Un estudio reciente sobre
101 filogenias descubrió evidencia para una hipótesis que explica la acumulación constante de
biodiversidad a través de eventos raros de especiación única en lugar de radiaciones de especies
(Venditti et al.2010).
H. Schneider (*)
Departamento de Botánica, Museo de Historia Natural, Londres, Reino Unido
Instituto Albrecht-von-Haller f€ur Pflanzenwissenschaften, Universidad Georg-August€en
Goettingen, Göttingen, Alemania
correo electrónico: h.schneider@nhm.ac.uk
H.-P. Kreier, T. Janssen, E. Otto, H. Muth y J. Heinrichs

Instituto Albrecht-von-Haller f€ur Pflanzenwissenschaften, Universidad Georg-August€en
Goettingen, Göttingen, Alemania
FU Berlín, Institut fuer Biologie, Angewandte Genetik 14195, Berlín, Alemania

La mayoría de los estudios sobre radiaciones se centran en linajes seleccionados, y el número de

informes positivos puede exagerar su contribución a la diversidad de la vida (Schluter2000; Gavrilets
y Losos2009) porque muchos linajes nunca fueron estudiados por la existencia de radiaciones,
especialmente aquellos linajes que carecen de evidencia de radiaciones. Para superar estas
limitaciones de nuestro conocimiento, necesitamos estudios que evalúen varios linajes de
organismos en busca de evidencia sobre la ocurrencia de radiaciones. Aquí, presentamos un enfoque
de investigación filogenética para explorar la frecuencia de las radiaciones en un linaje rico en
especies de plantas terrestres. Es probable que tales estudios descubran muchos más ejemplos de
radiaciones de los que se reconocen actualmente. Además de identificar las supuestas radiaciones,
también podemos abordar la cuestión de qué desencadena las radiaciones, ya sean innovaciones
clave u oportunidades clave, como la colonización de islas oceánicas, en un enfoque más integral que
el de unos pocos estudios de casos seleccionados (Hodges y Arnold1995; Schluter2000). Sin
embargo, este tipo de estudio requiere una definición operativa de las radiaciones. Para lograr esto,
usamos aquí una definición más restrictiva que se puede implementar fácilmente en los
procedimientos de prueba. El enfoque elegido simplifica el patrón de acumulación de diversidad en
un linaje seleccionado como creado por una acumulación constante de diversidad a lo largo del
tiempo o como un patrón puntuado con un período corto de mayor diversificación seguido de un
período de disminución de la diversificación (Hodges y Arnold1995; Schluter2000; Ree2005). Este
enfoque modela más o menos la situación de una radiación rápida o una radiación adaptativa con
una cantidad creciente de nichos llenos. Es posible que esta definición restrictiva no cubra todos los
patrones evolutivos que actualmente se consideran una radiación. Sin embargo, las ventajas de la
definición restrictiva superan esta limitación. A continuación, usamos esta definición para identificar
eventos de radiación y determinar su desencadenante.
2 Identificación de evidencia de radiaciones biológicas
Según la definición aplicada, la acumulación de diversidad de especies por radiaciones puede

separarse de la acumulación de diversidad de especies por eventos de especiación distribuidos
aleatoriamente en la filogenia de un linaje. En este último caso, la tasa de diversificación será más o
menos constante, mientras que las radiaciones rápidas se caracterizan por un aumento repentino de
la tasa de diversificación seguido de una disminución de esta tasa. La tasa de diversificación es una
combinación de la tasa de especiación, la cantidad de eventos de especiación en un período de
tiempo determinado, y la tasa de extinción, la cantidad de eventos de extinción en un período de
tiempo determinado, como resultado de una tasa de extinción decreciente o una tasa de especiación
aumentada. . El cambio de la tasa de diversificación puede ser el resultado de un cambio de la tasa
de especiación o de la tasa de extinción. Se ha discutido la contribución de ambos para los eventos
de radiación. Un evento de radiación puede ser causado por una tasa de especiación aumentada y
una tasa de extinción constante, pero también puede ser el resultado de una tasa de extinción
disminuida y una tasa de especiación constante (Rabosky y Lovette 2008). La estadística subyacente
permite la prueba de significación del patrón, y se han desarrollado varios métodos para explorar la
evidencia de cambios en las tasas de diversificación a lo largo del tiempo (Nee et al.1994; Pybus y
Harvey2000; Rabosky2006).
Innovaciones clave frente a oportunidades clave 63
Los métodos filogenéticos para detectar la variación de las tasas de diversificación se

pueden dividir en procedimientos que utilizan información temporal, como estimaciones de
tiempo de divergencia o métodos de árbol completo que utilizan el desequilibrio de los
árboles filogenéticos. El último enfoque se implementa en el software SYMMÁRBOL (Chan y
Moore2002). Los enfoques no temporales son particularmente poderosos para obtener una
hipótesis de trabajo que puede ser explorada posteriormente utilizando marcos temporales.
El enfoque temporal más utilizado es la generación de linaje a través de parcelas de tiempo
(LTTP). El número de linajes se representa frente a una escala de tiempo para visualizar la
acumulación de diversidad a lo largo del tiempo. Un gran paso adelante fue la introducción de
las estadísticas gamma (Pybus y Harvey2000). Estas estadísticas se utilizan para determinar la
importancia de los cambios en las tasas. En los últimos años, se han establecido procesos
analíticos avanzados que permiten análisis exhaustivos de los cambios en las tasas de
diversificación en la historia filogenética de los linajes (Rabosky2006; Purvis et al.2009; Ricklefs
2009). Aquí, usamos LASER (análisis de probabilidad de tasas de especiación y extinción),
desarrollado por Rabosky (2006), en combinación con APE (Paradis et al.2004) y apTreeShape
(Bortolussi et al.2006). Este enfoque basado en la máxima verosimilitud determina los cambios
temporales en la tasa de diversificación en función de un proceso de nacimiento-muerte (Nee
et al.1994). Usamos tasas de especiación estimadas para clados usando los cálculos
desarrollados tasas de diversificación absoluta (Ricklefs2009).
Para poder abordar estos análisis, se requieren hipótesis filogenéticas robustas. Se
obtienen generando datos de secuencia de las regiones del genoma de los plástidos,
como las regiones codificantesrbcLyrps4,la región espaciadora intergénica (IGS)rps4-
trnSIGS, y eltrnL-trnFregión que incluye latrnLintrón y el trnL-trnFIGS para los linajes
estudiados. Es importante considerar un muestreo que incluya la mayor cantidad
posible de especies existentes porque un muestreo incompleto puede generar
resultados engañosos. Los datos de secuencia se utilizan para reconstruir la filogenia
utilizando la máxima verosimilitud (Schmidt y von Haeseler2009), máxima parsimonia
(Swofford y Sullivan2009), o inferencia bayesiana de filogenia (Ronquist et al.2009). Estas
hipótesis proporcionan información sobre las relaciones de los taxones y las distancias
filogenéticas entre los taxones. Estos últimos se transforman en distancias temporales
mediante análisis que utilizan modelos de reloj molecular relajados que permiten
cambios específicos de linajes en la tasa de evolución molecular como se implementa en
r8s 1.71 (Sanderson2006) y BESTIA 1.5.3. (Drummond y Rambaut2007). El programa
BEAST genera cronogramas utilizando una inferencia bayesiana de filogenia bajo un
modelo de evolución molecular y un modelo Yule de diversificación. Los análisis BEAST
tienen en cuenta la incertidumbre filogenética de forma predeterminada, mientras que
en r8s, el análisis de la incertidumbre debe abordarse mediante análisis de arranque.
Estimaciones para la separación de Davalliaceae y Polypodiacae (Schneider et al.,2004a,b
; Schuettpelz y Pryer2009) se utilizan para calibrar los cronogramas generados. Estas
calibraciones se utilizan como calibraciones de punto fijo en análisis con r8s o como
intervalos de calibración con distribución lognormal en análisis BEAST. Se eligió el uso de
estimaciones de tiempo de divergencia para superar el problema del registro fósil muy
limitado de estos helechos (van Uffelen1991). Sin embargo, las hipótesis temporales
generadas son consistentes con el registro fósil conocido.
3 Determinación del papel de las innovaciones clave y/o las

oportunidades clave
El primer paso es la identificación de posibles innovaciones clave y/u oportunidades clave. Esta
parte del estudio requiere un amplio conocimiento sobre la morfología, rangos de distribución
y preferencias ecológicas del linaje investigado. El producto de esta investigación inicial es una
matriz en la que se puntúa la distribución de un carácter o las ocurrencias geográficas para
cada taxón. El segundo paso involucra la reconstrucción del estado de carácter ancestral o
rangos de distribución ancestral. Las aplicaciones empleadas difieren entre innovaciones clave
y oportunidades clave. Las innovaciones clave generalmente se califican como estados de
caracteres discretos y se reconstruyen utilizando parsimonia máxima, máxima verosimilitud,
reconstrucción de estados de caracteres bayesianos y trazado de estados de caracteres
estocásticos implementados en software como Mesquite 2.72 (Maddison and Maddison2009).
El trazado estocástico del estado del carácter es especialmente poderoso, porque los linajes
con innovaciones clave a menudo están aislados de sus parientes durante mucho tiempo y,
por lo tanto, se sientan en una rama larga. Este abordaje se realizó con Mesquite y con
SIMMAP (Bollback2006). Las oportunidades clave requieren un enfoque diferente, porque
implica la reconstrucción de rangos de distribución ancestrales. Se han propuesto varios
métodos para llevar a cabo este tipo de reconstrucción (Clark et al.2008). Algunos de estos
métodos emplean la reconstrucción de máxima parsimonia en la que los rangos de
distribución se gestionan de la misma manera que para las reconstrucciones de estado de
caracteres ancestrales. Sin embargo, se espera que los modelos basados en procesos
generen reconstrucciones más precisas al diferenciar entre los tres procesos principales:
extinción local, dispersión y vicariancia. DIVA (análisis de dispersión-vicarianza; Ronquist1997)
es uno de los enfoques más poderosos a pesar de que este tipo de análisis tiene problemas
con algunos de los supuestos. También usamos DIVA (Ronquist,1997) y análisis Bayesiano
DIVA (Nylander et al.2008). Este enfoque tiene en cuenta la incertidumbre filogenética
mediante la reconstrucción de la distribución ancestral de un grupo de hipótesis filogenéticas
generadas en una inferencia bayesiana, que muestrea árboles de probabilidades similares. El
tercer paso incluye la exploración de evidencia sobre la coincidencia de cambios en la tasa de
diversificación y la innovación clave/oportunidad clave. Esta identificación se puede realizar
visualmente utilizando la distribución temporal del LTTP y la ocurrencia temporal de la
innovación clave/oportunidad clave. El modelo BiSSE (Maddison et al.2007) proporciona una
estimación más robusta para determinar la correlación de la evolución del carácter y las tasas
de diversificación de un linaje. El modelo y su aplicación están implementados en Mesquite.
El enfoque descrito funciona bien siempre que la diversidad existente haya sido suficientemente
muestreada, el árbol filogenético esté completamente resuelto y la hipótesis filogenética sea sólida.
Otro problema es a menudo nuestro conocimiento limitado sobre algunos caracteres
potencialmente importantes, por ejemplo, rasgos fisiológicos, porque las observaciones solo existen
para un pequeño porcentaje de los taxones estudiados. Los resultados engañosos pueden deberse a
las frecuentes extinciones y al cambio de diversidad en la historia del linaje. Los modelos mejorados
pueden ser capaces de superar este problema. Una limitación importante similar es el modelo de
Innovaciones clave frente a oportunidades clave sesenta y cinco
innovación de personajes. Este es particularmente el caso cuando el linaje que experimenta un

aumento de diversificación está anidado en una rama larga. Por lo tanto, no podemos inferir si la
innovación del personaje desencadena directamente el cambio de la tasa de diversificación o si se
trata de un lapso de tiempo. Una última cuestión a plantear es el problema de las radiaciones
superpuestas. Dos radiaciones del mismo linaje pueden superponerse y oscurecer el verdadero
patrón de diversificación. En tal caso, las pruebas empleadas pueden rechazar la evidencia de
radiaciones porque el patrón generado puede no ser distinguible de una distribución aleatoria de
eventos de especiación en el tiempo.
4 Estudios de caso en las epífitas Polypodiaceae
Todos los análisis se realizaron en un linaje de helechos derivados. Las Polypodiaceae

(Schneider et al.2004a,b). El linaje incluye más de 1200 especies y solo otra familia de helechos
puede comprender más especies (Smith et al.2006b). La familia muestra una distribución
mundial pero la mayoría de las especies están restringidas a las regiones climáticas tropicales.
El crecimiento epífito parece ser la estrategia de vida ancestral en la familia, pero en varios
clados ocurren cambios en las preferencias ecológicas, principalmente hacia hábitos saxícolas
y reofitos. En algunas especies, un hábito saxícola reemplazó al hábito epífito, pero algunas
especies se han adaptado a hábitats reofitos. El linaje Polypodiaceae se encuentra entre los
linajes de helechos más jóvenes con una edad de aproximadamente 20 a 50 millones de años
hasta la actualidad para la división más basal dentro de la familia, como lo indican las
estimaciones de tiempo de divergencia (Schneider et al.2004a; Schuettpelz y Pryer2009). La
filogenia del linaje se estudió extensamente en los últimos años, y los datos de secuencia de
regiones de ADN del genoma pasado comorbcLahora están disponibles para más de 600 de
aproximadamente 1200 especies (p. ej., Ranker et al. 2004; Schneider et al.2004b,2006a,b,2008
; Janssen y Schneider2005; Kreier y Schneider2006a,b; Smith et al.,2006b; Jansen et al.2007;
Kreier et al.2007, 2008a,b; Salino et al.2008; Otto et al.2009; Wang et al.2010a,b). Podría
decirse que la familia es la más estudiada entre las familias de helechos ricas en especies, y los
datos de secuencia de ADN están disponibles para más de 500 especies. Se obtuvo una visión
global de la filogenia del linaje mediante un análisis filogenético de unrbcL conjunto de datos
que incluye la familia hermana Davalliaceae (48 especies) y la familia Oleandraceae (2
especies), esta última como grupo externo, y más de 554 especies de Polypodiaceae (Fig.1). En
general, la filogenia está bien resuelta y los valores de soporte (los valores altos posteriores y
de arranque se indican con ***), pero los nodos más profundos de los clados centrales de
Polypodiacae (números 1 a 3) carecen de soporte y las relaciones entre estos nodos no están
claros Las ramas que conectan estos nodos son extremadamente cortas, lo que indica una
rápida radiación inicial del núcleo Polypodiaceae. Esta hipótesis también es congruente con el
cronograma que se muestra en la Fig.2, que se basa en una estimación del tiempo de
divergencia del linaje. De acuerdo con nuestros resultados, el núcleo Polypodiaceae (nodo 1)
experimentó una rápida diversificación alrededor de los 25 millones de años.
El linaje establecido en este período incluye más del 95% de la diversidad de las
Polypodiaceae. Los linajes resultantes se distribuyen principalmente en el
***
gramítidos
*** nifidio
*** Microgramacentro *
*** Campiloneuro *
*** M. percusagramo.
*** Serpocaulón
2
Pleurosoriopsis
*** polipodio *
Polypodium chrysolepis
norte
***
pleopeltis
***
Pecluma + Flebodio
***
Lecanopteroides
***
*** M. membranaceumgramo.
***
*** lepisoroides
AV2
***
1 ***
*** ***
Núcleo de microsoroides
***
*** goniofleboides
Sinammia Thylacopteris
AV1
*** Selligueoides *
*** norte
*** Drynarioids
***
*** Platicerioides *
EP
*** loxogrammoides
*** davalliaceae
*** Oleandreaceae
Figura 1Filogenia de Polypodiaceae, incluida la familia hermana Davalliaceae y, como grupo externo,
las Oleandreaceae que, a su vez, son hermanas del clado Davalliaceae-Polypodiaceae. La hipótesis
filogenética mostrada se basa en los análisis derbcLsecuencias de más de 600 especies de
Neotrópicos o Paleotrópicos. Los gramítidos son la única excepción porque este grupo muy
diverso comprende un número similar de especies neotropicales y paleotropicales. Sin
embargo, las especies paleotropicales se originan a partir de gramítidos neotropicales (Ranker
et al.2004) y, por lo tanto, la anidación de los grammitidos en un clado principalmente
neotropical es consistente con la hipótesis de una segregación en linajes principalmente
neotropicales y principalmente paleotropicales. La exploración de las causas putativas de esta
rápida diversificación no encontró ningún candidato bien fundamentado para una innovación
clave. El único candidato es la apomorfia de láminas foliares con nervaduras anastomosadas
con nervaduras libres en las areolas. Sin embargo, este carácter se pierde en los gramítidos.
La alternativa es una correlación con una oportunidad clave. El Oligoceno (23,5-33,7 millones
de años) se caracteriza por climas globales fríos que contrastan con los climas cálidos del
Eoceno (38,7-53 millones de años). Sin embargo, la transición del Oligoceno al Mioceno (5.30–
23.5 Ma) muestra un calentamiento global (Zachus et al. 2001; Mosburger et al.2005) que
pueden haber ofrecido a las plantas tropicales la oportunidad de expandir sus rangos y quizás
también a las radiaciones adaptativas rápidas. Esta hipótesis está actualmente bajo
investigación.
No se puede proporcionar aquí un análisis detallado de todos los linajes de Polypodiaceae
porque ocupará demasiado espacio. En cambio, se discutirán dos ejemplos de innovaciones
clave como ejemplos.
5 innovaciones clave: hormigas y helechos
El primer ejemplo se refiere al mutualismo de hormigas helecho que se encuentra en el

género Malesian Lecanopteris (Haufler et al.2003) que anida dentro de los helechos
microsoroid (Schneider et al.2004b; Kreier et al.2008b). El helecho proporciona vivienda ya sea
<
Figura 1 (continuado)polipodiáceas.La parsimonia máxima, la máxima verosimilitud y la inferencia bayesiana
de la filogenia recuperaron topologías casi idénticas con la excepción de algunos nodos sin soporte.
triangulosrepresentan los principales linajes con el tamaño de latriángulocorrespondiente al número
aproximado de diversidad de especies de cada linaje. Elcolorde cadatriánguloindica su rango de distribución:
azulpaleotropical,marróntemplado norte,verdepantropical con origen en el Neotrópico,naranjasur de
América del Sur,rojoNeotrópicos con algunas ocurrencias de especies en África y el sur de la India,Violeta
paleotropical con algunas ocurrencias en el Neotrópico. El longitud de la ramaindica la distancia genética
entre el clado. Nodos subrayados concuadrados marronesSon relaciones poco o nada sustentadas. Los
nodos se indican con los números 1¼núcleo Polypodiaceae, 2¼Polypodiaceae neotropicales más grammitids.
Otras abreviaturas y símbolos por encima o por debajo de las ramas: *** fuertemente respaldado con
valores de arranque del 100 % y valor posterior depag -0.95,AV1innovación de venación regularmente
anatomizada (el dibujo indica el patrón de las venas),AV2innovación de venación regularmente
anastomosada con venas libres (el dibujo indica el patrón de las venas),EPtransición a hábito epífito,óvalos
verdesaparición de clorofila (verde)esporas de monolete,círculos verdesaparición de clorofila (verde)esporas
triletas, las estrella dobleaparición de pelos de estela,óvalos marronesocurrencia de recolectores de basura,
óvalos negros concírculos blancosaparición de estructuras de rizoma colonizadas por hormigas,norte
ocurrencia regular de nectarios en la hoja madura
Grammitidos
2 Serpocaulón
campiloneurona
nifidio
polipodioSL
Pleurosoriopsis
Micrograma
flebodio
Pecluma
sinamia
pleopeltis
Microsoroides
1
lepisoroides
Lecanopteroides
gonioflebioSL
Thylacopteris
pirrosia
Platicerio
selligueoides
Drynaroids
loxogrammoides
davalliaceae
aleandráceas
60.0 50.0 40,0 30.0 20.0 10.0 0.0
Figura 2Cronograma de las Polypodiaceae. Las estimaciones de divergencia se realizaron utilizando el mismo
conjunto de datos anterior con algunos cambios en el muestreo de lepisoroides. Los análisis se realizaron
utilizando BEAST con el GTRþmodelo invgamma para evolución de secuencias (parámetros estimados
durante los análisis), reloj molecular relajado lognormal y proceso de diversificación de Yule.barras azulesen
los nodos indican el intervalo de confianza de las edades de los nodos.colores de triangulosson los mismos
que en la Fig.1. ElCuadrado azulindica el Oligoceno, una fase de climas globales relativamente fríos en
contraste con los climas globales generalmente cálidos del Eoceno y el Mioceno
100% W Malesia +
Lecanoperis deparioides
LTT Filipinas
Lecanoperis carnosa Célebes
Lecanoperis celebica Célebes
Lecanoperis spinosa Célebes

10%
Lecanoperis balgooyi Célebes
4,3 millones de años 0 millones
Lecanoperis luzensis Filipinas
carcasa interna Lecanoperis pumila Oeste de Malasia
mutualismo de hormigas
Lecanoperis crustáceo Oeste de Malasia
Lecanoperis lomarioides Filipinas +

Célebes
Lecanoperis sinuosa malasia
Lecanoperis mirabilis Nueva Guinea
4,36 millones de años (7,37-3,59 millones de años)
Frontera Plioceno-Pleistoceno
Fig. 3Diversificación del género hormiga-helechoLecanopteris.Estimaciones de cronograma utilizando BEAST y

parámetros del modelo como en la Fig.2.barras grisesindique los intervalos de confianza para cada nodo. El Linea
discontinuaindica el límite entre el Plioceno y el Pleistoceno en 1,75 millones de años. Elcolordelsucursalesmuestra la
reconstrucción más parsimoniosa de la evolución de la latencia de las hormigas en este género de helechos. El
ancestro común deLecanopterisy su género hermano carecía de los mutualismos hormiga-helecho (líneas negras),
naranjaindica alojamiento externo,verdevivienda interna. Elbrillantea sombreado oscuroindica las tres estructuras de
advertencia diferentes en los rizomas.línea discontinua de color indica incertidumbre sobre el momento de la
innovación entre la separación del taxón hermano sin el carácter y la separación de los primeros clados con este
carácter. La distribución de cada especie se da en elbien.Elinsertarsobre elarriba a la izquierdamuestra el gráfico de
linaje a través del tiempo (LTTP) que representa el porcentaje de linajes frente al tiempo desde 4,3 millones de años
hasta la actualidad. El color del gráfico corresponde a los estados de carácter de los clados más avanzados presentes
en el intervalo de tiempo dado
dentro de los rizomas en forma de cuevas o debajo de un rizoma aplanado. A cambio, el helecho
epífito tiene acceso a una nueva fuente de nitrógeno y fosfato (Gay1993). Nuestras estimaciones de
tiempo de divergencia del conjunto de datos indican una evolución lenta y gradual del mutualismo
desde aproximadamente 4,36 millones de años en adelante. La vivienda interna evolucionó en un
período de -4,36 Ma a -2,1 Ma. La reconstrucción del carácter ancestral no permite una estimación
más precisa. Sin embargo, el establecimiento del modelo de alojamiento interno no desencadena el
estallido de especiación alrededor de 1,75 millones de años (Fig.3). Por lo tanto, necesitamos
considerar otras explicaciones para el aumento reciente de la riqueza de especies en Lecanopteris.La
prueba BiSSE no encontró ninguna evidencia significativa de una correlación entre el mutualismo
hormiga-helecho o la vivienda interna y los cambios en las tasas de diversificación de Lecanopteris.
Cuatro de las 11 especies son endémicas de Sulawesi, y los estudios futuros deben inferir la
posibilidad de fluctuaciones climáticas como desencadenantes del aumento de la especiación similar
a las hipótesis sobre la divergencia explosiva de los helechos arborescentes escamosos en
Madagascar (Janssen et al.2008).
6 Innovaciones clave y oportunidades clave
Recolección de hojarasca y la colonización de Nueva Guinea por helechos drynarioid.

Los helechos drynarioid son un pequeño linaje aislado que es hermano de los helechos
selligueid (Figs.1y2). Muchas especies de helechos drynarioid muestran estructuras de hojas
adaptadas para recolectar hojarasca. El acceso a los nutrientes es una limitación importante
para las plantas epífitas, y la recolección de basura es un enfoque (ver también mutualismo de
hormigas) para obtener una ventaja en la lucha por la vida (Janssen y Schneider2005). La
reconstrucción del carácter ancestral recuperó la presencia de estructuras para la recolección
de basura como ancestrales (Fig.4a) pero los recolectores de hojarasca se pierden tres veces
en la filogenia de los helechos drynarioides (Christiopterisy dos veces enAgalomorfa).Las
estimaciones de tiempo de divergencia recuperaron evidencia de una rápida radiación inicial
de drynarioid que probablemente esté relacionada con la innovación de los recolectores de
hojarasca. Esta hipótesis fue apoyada por los análisis del modelo BiSSE. Sin embargo,
encontramos evidencia de una segunda radiación en elAglaomorfaclado. Esta radiación no
está correlacionada con los cambios de los recolectores de hojarasca (ver Janssen y Schneider
2005). el derivadoAglaomorfaclado (ver Fig.4b) muestra una distribución principal en el centro
y este de Malesia. Varias especies son endémicas de Filipinas o Nueva Guinea. La región de
Malesia es relativamente joven y se formó por la colisión del cratón australiano y el sudeste
asiático alrededor de 10 millones de años (Hall2002). Las estimaciones de tiempo para la
divergencia de losagalomorfaclado se encuentran dentro de los tiempos previstos de la
formación de los Alpes de Nueva Guinea y las montañas de las Filipinas a finales del Mioceno y
el Plioceno (1,75-11 millones de años). Un estudio actual con un muestreo mejorado respalda
las hipótesis de dos radiaciones de helechos drynarioid, una que coincide con la innovación de
los recolectores de basura y la segunda que coincide con la colonización del este de Malesia.
7 perspectivas
El estudio encontró evidencia de radiaciones rápidas para los drynarioids y el núcleo

Polypodiaceae. No se encontró evidencia de radiaciones rápidas para varios clados que se
estudiaron en detalle, por ejemplo, lepisoroides, loxogrammoidsn, microsoroides y el
Platicerio/Pirrosiagrupo (Kreier y Schneider2006a,b; Kreier et al.2008b; Wang et al.2010a,b).
Además, no se encontraron pruebas en elpleopeltisclado (Otto et al.2009). Los gramítidos, el
clado más rico en especies con más de 500 especies, muestran una mayor tasa de
diversificación y probablemente representan una radiación adaptativa. Sin embargo, el
muestreo actual (Ranker et al.2004; y este análisis) es insuficiente para explorar la hipótesis.
En resumen, las radiaciones adaptativas son probablemente el proceso menos común de
acumulación de biodiversidad de estas plantas y la mayoría puede explicarse probablemente
por el ensamblaje a través de eventos de especiación raros.
Solo se recuperaron dos ejemplos de innovaciones clave convincentes. Primero, la innovación de
los recolectores de basura puede haber desencadenado la diversificación inicial de los helechos
drynarioid. Sin embargo, una innovación similar de los recolectores de basura resultó en una
Selliguea hellwegii
selliguea enervis
Selliguea heterocarpa
Selliguea latericia
Selliguea feei
selligueoides Selliguea lanceolata
Selliguea plantaginea
Gymnogrammitis dareiformis
Phymatopteris laciniata
Arthromeris wallichii
Arthromeris lehmannii
Drynaria bonii
Drynaria descensa
corriente continua Drynaria sparsisora
Drynaria quercifolia
Drynaria rigidula
Drynaria mollis
Drynaria propinqua
Aglaomorpha hiernonymi
Aglaomorpha parkinsonii
Aglaomorpha pilosa
Aglaomorpha drynarioides
Aglaomorpha novoguineensis
Aglaomorpha cornucopia
AD especificación de Aglaomorpha.
Aglaomorpha brilla
Aglaomorpha heraclea
?? AG
Aglaomorpha acuminata
Drynarioids Aglaomorpha coronans
Aglamorpha meyeniana
Drynaria roosei
CH
Christiopteris sagitta
Drynaria volkensii
ANUNCIO
Drynaria willdenowii
Drynaria volkensii
Drynaria bonii
Drynaria descensa
California Drynaria sparsisora
CA-MA Drynaria quercifolia
CA-MA
Drynaria rigidula
Drynaria mollis
Drynaria propinqua
NG Aglaomorpha hiernonymi
California NP Aglaomorpha parkinsonii
Aglaomorpha pilosa
Aglaomorpha drynarioides
Pi NP Aglaomorpha novoguineensis
California
Aglaomorpha cornucopia
California especificación de Aglaomorpha.
Pi Pi Aglaomorpha brilla
Aglaomorpha heraclea
?? Pi
California
Aglaomorpha acuminata
Drynarioids Aglaomorpha coronans
Aglamorpha meyeniana
Drynaria roosei
Christiopteris sagitta
CA-PI Drynaria volkensii
SOY Drynaria willdenowii
Drynaria volkensii
Figura 4Diversificación de los helechos drynarioid. Estimaciones de cronograma utilizando BEAST y parámetros del
modelo como en la Fig.2. La radiación drynarioide se remonta a unos 14 millones de años. (a)La evolución del carácter
de los recolectores de basura.Azulla hojarasca recolectada es una hoja colectora de humus especializada,verde El
recolector de hojarasca es la parte basal de una hoja fotosintética,negrola hojarasca está ausente.ANUNCIOAfro-
Drynaria,AGaglaomorfa,CHchristiopteris,corriente continuaNúcleo de Drynaria,ADGrado Drynaria-Aglaomorpha.
Estrellasindicar radiaciones. (b)Rangos de distribución ancestral estimados usando DIVA.SOY Afromadagascar,
Californiaasia continental,MAMÁmalesia occidental,NGNueva Guinea,Pifilipinas,NP Filipinas/Nueva Guinea.Ramas
grisesindicar taxones generalizados
patrón de acumulación gradual en el géneroPlaticerio.El segundo candidato, la

innovación de las esporas clorofílicas puede haber desencadenado la radiación
grammitid. Las esporas clorofílicas (verdes) tienen cloroplastos diferenciados en las
esporas dispersas, mientras que las esporas de helecho generalmente se dispersan con
proplastidos. Los cloroplastos diferenciados indican la falta de una fase de latencia. Aún
no está claro por qué esto es una ventaja para los grammitidos, aunque aquí podemos
especular sobre la adaptación a hábitats sin potencial para formar bancos de esporas.
Las cortezas de los árboles en los bosques tropicales húmedos son un sustrato muy
poco probable que permita la formación de bancos de esporas. En cambio, están
densamente cubiertos de hepáticas y es probable que los gametofitos de helecho
crezcan en estas esteras de hepáticas. Los grammitidos a menudo se encuentran en
este tipo de hábitats, pero otros helechos sin esporas clorofílicas se encuentran en el
mismo hábitat. Además,
Encontramos algunas pruebas de oportunidades clave que desencadenan radiaciones. Ya
se ha mencionado la radiación del núcleo Polypodiaceae. El segundo ejemplo ya mencionado
es el géneroAglaomorfa.El tercer ejemplo es el género NeotropicalSerpocaulón (Smith et al.
2006b; Kreier et al.2008a). La diversificación de este género probablemente esté relacionada
con el surgimiento de las cadenas montañosas más altas de los Andes desde Bolivia hasta
Colombia (Kreier et al.2008a). Previamente se propuso una hipótesis similar para el clado de
helechos neotropicales que comprende los géneroseriosoroy jamesonia (Sánchez-Baracaldo
2004).
En conclusión, nuestro estudio encontró alguna evidencia de radiaciones rápidas en helechos,
pero el proceso dominante de acumulación de diversidad de especies probablemente sea similar a
un modelo de eventos de especiación raros que no están relacionados en el tiempo (Venditti et al.
2010). Se producen explosiones de especiación provocadas por innovaciones u oportunidades
únicas, pero pueden contribuir con menos del 20% a la diversidad general de especies de
Polypodiaceae. También encontramos alguna evidencia del impacto de las fluctuaciones climáticas
en la diversidad de helechos, pero esto necesita más investigación.
AgradecimientosEste proyecto fue apoyado financieramente por Deutsche Forschungsgemeinschaft (SCHN

758/2-1, SCHN 758/2-2) bajo el Schwerpunk SPP 1127. Estamos en deuda con todos los colegas que hicieron
el material accesible para nosotros, especialmente Alan Smith, Michael Kessler, Masahiro Kato, Chie
Tsutsumi, Peter Hovenkamp. También agradecemos a los curadores y al personal de varios herbarios y
jardines botánicos por su apoyo.
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cuatro regiones de ADN de plástidos. Bot J Linn Soc 162:28–38
Zachus J, Pagani M, Solan K, Thomas E, Billups K (2001) Tendencias, ritmos y aberraciones en
clima global 65 MA al presente. Ciencia 292: 686–693
Evolución del Sistema de Apareamiento en el Género
Capsella (brasicáceas)
Melanie Paetsch, Sara Mayland-Quellhorst, Herbert Hurka

y Barbara Neuffer
AbstractoSe cree que los cambios en el sistema de apareamiento son una de las principales
fuerzas impulsoras en la evolución de las plantas. La fertilización cruzada proporciona una
recombinación genética; la autofecundación permite la dispersión autónoma. el género
Capsellacomprende una de las malezas colonizadoras más exitosas del mundo y es un nuevo
objeto prometedor en el estudio de la evolución del sistema de autoincompatibilidad (SI) en
poblaciones naturales. El objetivo del estudio fue obtener una idea de la dinámica del sistema
SI en el géneroCapsellaen general mediante el empleo de pruebas moleculares. Queríamos
entender cómo se produjo la transición de la autoincompatibilidad a la autocompatibilidad,
que neutralizó la restricción local de las especies SI ancestrales Capsella grandiflora,fue
logrado. Aquí, presentamos implicaciones para un notable grado de flexibilidad de los
sistemas de apareamiento heredados enCapsellaque permiten que estas plantas combinen las
ventajas del cruce y la autofecundación. Discutimos las consecuencias de nuestros hallazgos
para el proceso de especiación en este género.
1. Introducción
La evolución de las flores hermafroditas en las primeras angiospermas exigió el desarrollo

simultáneo de mecanismos que evitaran los efectos negativos de la consanguinidad. Por lo
tanto, se cree que las angiospermas desarrollaron una multitud de mecanismos tempranos en
su historia para evitar la fertilización de óvulos con polen de la misma flor o planta (Weller et
al.1995). Las estructuras morfológicas que promueven la exogamia se basan en la separación
temporal y/o espacial del estado de madurez de los géneros. En casi la mitad de las
angiospermas, la autofecundación se previene con mayor eficacia mediante las acciones del
sistema de autoincompatibilidad (SI),
M. Paetsch (*), S. Mayland-Quellhorst, H. Hurka y B. Neuffer

Departamento de Botánica, Universidad de Osnabrueck, Barbarastraße 11, 49076 Osnabrueck, Alemania Correo
electrónico: Melanie.Paetsch@biologie.uni-osnabrueck.de

78 M.Paetsch et al.
que es descrito por Darwin (1862) como “uno de los hechos más sorprendentes que he
observado”. Casa Blanca (1950) afirmó que la evolución de los mecanismos SI puede haber
jugado un papel importante en la diversificación y el éxito de las angiospermas. Sin embargo,
muchos géneros incluyen tanto especies cruzadas como autofecundadas. Por lo tanto, se
debe suponer que la transición de la autoincompatibilidad ancestral (SI) a la
autocompatibilidad (SC) ocurrió con frecuencia y de forma independiente. Se estima que
aproximadamente el 30% de las angiospermas son predominantemente autofecundantes (M€
desconcertante1956; Stebbins1956) por lo que debemos concluir que, en algunos casos, las
ventajas obtenidas por la autofertilización superan las desventajas, como la depresión
endogámica y la falta de recombinación de genes. Debido a la seguridad del conjunto de
semillas, las combinaciones de genes que resulten exitosas asegurarán la continuidad y los
genes se fijarán. La fijación de variantes puede tener una ventaja adaptativa local. Shimizu et
al. (2005) asumió que “las adaptaciones posteriores en la morfología floral correlacionadas con
la evolución de la autopolinización pueden evolucionar rápidamente después de la pérdida de
la autoincompatibilidad”. Un ejemplo clásico de la rápida diversificación inducida por la
autofecundación son las “microespecies” delErófila vernacomplejo (Brassicaceae; Winge1940;
Rico1991). Por lo tanto, además de la hibridación y la poliploidización, se cree que los cambios
en el sistema de apareamiento son una de las principales fuerzas impulsoras en la evolución
de las Brassicaceae (Hurka et al. 2005)
1.1 El sistema de apareamiento en Brassicaceae Genera
La familia Brassicaceae se convirtió en un modelo para los estudios del sistema SI esporofítico
(Fig.1), que actualmente se entiende mejor enbrasicáceas (por ejemplo, Takayama e Isogai
2005) y, más recientemente, en elArabidopsisespecies (Charlesworth et al.2000; Kusaba et al.
2001; Mable et al.2005; Bechsgaard et al.2006). Los genes responsables del reconocimiento y
rechazo del polen propio se encuentran en laS-lugar. Tres
SLG RCS SRK
S-dominio dominio quinasa

(exón1) transmembrana (exones 3 - 7)
dominio
determinante masculino
expresado en anteras
determinante femenino
expresado en estigmas
Figura 1modelo de labrasicáceasS-locus. Designación, estructura y disposición deS-genes locus en Brassica.Las

regiones hipervariables se muestran mediantecajas negras; cajas punteadasmarcar el péptido señal escindible, las
posiciones de los 12 residuos de cisteína conservados característicos se indican mediantelineas negras Posición
aproximada de los cebadores utilizados en este estudio para amplificar laS-dominio enCapsellaespecie se indica
parcialmente porflechas rojas
Evolución del Sistema de Apareamiento en el GéneroCapsella (brasicáceas) 79
genes altamente polimórficos están involucrados en la respuesta SI:SLGoS-glicoproteína locus

(Nasrallah et al.1985),SRKoS-locus receptor quinasa (Stein et al.1991), yRCS/SP11oS-locus rico
en cisteína (Schopfer et al.1999; Suzuki et al.1999). Los genes están estrechamente vinculados
y se comportan como un solo locus mendeliano, mostrando múltiples versiones alélicas,
denominadasS-haplotipos (Nasrallah y Nasrallah1993). Se cree que la respuesta SI ocurre
cuando el estigma y el polen comparten al menos un alelo. En el modelo actual de la
respuesta SI, el componente de polenRCSinteractúa con el dominio extracelular deSRK
proteína en el estigma. La unión de las dos proteínas inicia una cascada de señalización que
conduce a la inhibición del polen propio al evitar la hidratación y el desarrollo posterior del
tubo polínico (p. ej., Takayama e Isogai2005). Se ha demostrado queSLGno es esencial para la
reacción SI, pero se cree que desempeña un papel en la estabilización del activoS-complejo
receptor (Dixit et al. 2000) y puede haber evolucionado a través de la duplicación parcial deSRK
(Nasrala1994). SRKySLGpertenecen a la gran familia deS-genes, a laS-familia de genes de
dominio o genes de quinasas similares a receptores, respectivamente (Walker1994). Los
miembros de esta familia comparten la estructura que se muestra en la Fig.1. Enbrasicáceas,la
mayoría de las sustituciones no sinónimas se agrupan en tres regiones hipervariables que se
cree que están involucradas en la determinación de la especificidad del alelo y, por lo tanto,
podrían ser un factor importante en la generación de nuevosS-haplotipos (Miege et al.2001).
SRKse sabe que se expresa en las células papilares del estigma 1 o 2 días antes de la apertura
de la flor (Nasrallah et al.1988).
la ausencia de unSLG-como gen enArabidopsis liratasugiere que los antepasados S-el

complejo locus de las crucíferas constaba únicamente de los dos genes determinantes
de la especificidad SRKyRCS (Kusaba et al.2001; Fobis-Loisy et al.2004). Enarabidopsis,los
sitios variables no se concentran en tres regiones hipervariables (HV) distintas como en
brasicáceas y el género relacionadorapano (Sakamoto et al.1998; Lim et al.2002), pero se
distribuyen más uniformemente en todo elS-secuencia de dominio (Schierup et al.2001).
ElSRK-alelos debrasicáceasyrapanose subdividen claramente en dos clases, que
representan dominante y recesivoS-alelos (Chen y Nasrallah1990; Kusaba et al.1997; Lim
et al.2002), mientras que las poblaciones naturales deA. lirataSe ha demostrado que
exhiben relaciones de dominancia más complejas (Mable et al.2003; Prigoda et al. 2005).
Además, la localización cromosómica delS-locus difiere entre los géneros de
Brassicaceae. Enbrasicáceas,elS-locus se encuentra en una región que corresponde a un
segmento deArabidopsis thalianacromosoma I (Conner et al.1998), Mientras en
A. liratala posición de laS-el lugar corresponde aa. thalianacromosoma IV (Kusaba
et al.2001). A partir de esto, se ha supuesto que laS-locus fue translocado en su
totalidad entre dos ubicaciones genómicas distantes (Kusaba et al.2001).
1.2 El géneroCapsellaes un pariente silvestre de la planta modelo

Arabidopsis
el géneroCapsellacomprende tres especies, dos diploides y una tetraploide. el

diploideC. grandiflora (Fauché & Chamb.) Boiss. representa la obligación ancestral
80 M.Paetsch et al.
especies exogámicas de las queCapsella rubéolaReuter (2x) yC. bursa-pastoris (L.)

Medicina. (4x) originado (Hurka y Neuffer1997).C. grandiflorase encuentra solo en el
oeste de Grecia y, rara vez, en el norte de Italia. EnCapsella rubéola,el sistema SI se
rompió dando como resultado una especie predominantemente autofecundante sin
cambios en el nivel de ploidía. La ruptura del sistema SI enCapsellacoincide con la
capacidad colonizadora y un rango de distribución más amplio (Fig.2).C. rubéolaha
colonizado las regiones climáticas mediterráneas (Hurka y Neuffer1997) y muestra una
diferenciación ecotípica con respecto a caracteres tales como el inicio de la floración,
tipos postrados versus erectos y otras características (Neuffer y Eschner1995; Neuffer y
Albers 1996). La planta más exitosa con la mayor capacidad de colonización en todos los
hábitats hechos por el hombre, excepto en los trópicos húmedos, es la tetraploide.C.
bursa-pastoris, que se ha adaptado a una amplia gama de hábitats y exhibe notable
plasticidad fenotípica (Hurka y Neuffer1997; Hintz et al.2006). La extensa conservación
del genoma entre losArabidopsisespecies yC. rubéola (Acarkan et al. 2000; Boivin et al.
2004; Koch y Kiefer2005) permite suponer que el S-lugar enCapsellatambién pueden ser
comparables en ambos géneros. Como la investigación del SI presentó una oportunidad
insuficiente para comparar los hallazgos en elArabidopsisespecie a un género
estrechamente relacionado, elCapsellaespecies recibieron atención especial. Así, los
estudios sobre laCapsellasistema de apareamiento han puesto de relieve recientemente
(Paetsch et al.2006; Nasrallah et al.2007; Foxe et al.2009). Hasta la fecha, al menos 51 S-
Se han identificado secuencias de alelos enC. grandiflora (Bechsgaard y Schierup;
Paetsch y Neuffer, datos no publicados).
1.3 La dinámica del sistema de apareamiento proporciona un potencial de

adaptación
Mutaciones en elSRKgen como una fuente para la ruptura del sistema SI se detectaron en
ambos géneros modelobrasicáceas (Goring et al.1993) yArabidopsis (Kusaba et al.2001). Las
mutaciones afectan la funcionalidad deS-genes directamente. Una forma más sutil de influir
en la estrategia de apareamiento es la capacidad de variar cuantitativamente la fuerza de la
respuesta SI. Por ejemplo, en algunas especies autoincompatibles, las flores más viejas
tienden a perder su capacidad de rechazar el polen propio. Esta observación ha sido
denominada "fertilidad de fin de estación" (Straub1958) y también se conoce como una
variante de pseudo-autocompatibilidad. Recientemente, Liu et al. (2007) logró identificar un
modificador críptico que causa este fenómeno enA. thaliana.Varios estudios recientes sobre
las variaciones en la fuerza de la respuesta SI proporcionan evidencia de que el sistema SI
tiene rasgos menos rígidos que los predichos por el modelo predominante (Mable et al.2003,
2005; Mena-Ali y Stephenson2007; Liu et al.2007; Busch y Schoen2008). Esto puede explicarse
a través de la existencia de un elemento latente de autofecundación en otras especies SI
(Levin1996; Brenan et al.2005). Por otra parte, en la predominantemente autofecundanteC.
bursa-pastoris,Se han observado tasas de entrecruzamiento de hasta el 20% (Hurka y Neuffer
1997). Fobis-Loisy et al. (2004) denominado
1cm
Capsella grandiflora Capsella rubéola

2x; norte = 8 2x; norte = 8
Evolución del Sistema de Apareamiento en el GéneroCapsella (brasicáceas)
auto-incompatible (SI) autocompatible (SC)
Figura 2Ocurrencia y morfología floral de diploides.Capsella-especies. Distribución de especies cruzadas ancestralesCapsella grandifloraestá restringida a los Balcanes
occidentales, la especie altamente autofecundanteCapsella rubéolaha colonizado todo el mundo en climas mediterráneos
81
82 M.Paetsch et al.
esta es la "naturaleza de etiqueta de los sistemas SI". Sobre este trasfondo,Capsellaparece ser
un nuevo objeto prometedor y contribuirá a nuestra comprensión de la evolución del sistema
SI en poblaciones naturales, proporcionando así información sobre los procesos generales de
especiación en Brassicaceae.
2. Materiales y métodos
2.1 Material Vegetal
El material vegetal utilizado se recolectó individualmente de poblaciones silvestres de

diferentes procedencias en todo el rango de distribución de laCapsellaespecies (Capsella
Colección de semillas, Universidad de Osnabrueck; Mesa1). Entre 5 y 30 individuos de
cada población fueron criados en invernaderos.
2.2 Identificación deS-alelos enC. grandiflorayC. rubéola
2.2.1 Extracción de ADN; PCR y Clonación
El ADN se extrajo de 0,5 a 1,0 g de material foliar utilizando un protocolo CTAB

(Doyle and Doyle1987, mod.) o el kit NucleoSpin Plant II (Macherey-Nagel). Para
amplificación por PCR, cebadoresSLGf (50-AGAACCTATGCATGGGTTGC-30) ySLGr (50
-ATCTGACATAAAGATCTTGACC-30) (Charlesworth et al.2000) que se basaron en
Brassica S-secuencias de genes de dominio y se sabe que amplifican, entre otros, el
S-dominio deSRKenA. lirata.Después de la electroforesis de los productos de PCR
en gel de agarosa al 1% a 120 V, las bandas se tiñeron con bromuro de etidio y
tabla 1Material vegetal

Poblacióna Procedencia Coordenadas
Capsella grandiflora
900 GR: Korfu: Acharavi 39-470N, 19-480mi 39-39
923 GR: W-Peloponeso: Vrosina GR: 0norte, 20-310mi 39-400
924 W-Peloponeso: Botzaras GR: W- norte, 20-350mi 39-460
926 Peloponeso: Votonosi GR: W- norte, 21-070mi 39-460
927 Peloponeso: Metsovo GR: W- norte, 21-100mi 39-460
934 Peloponeso: Metsovo norte, 21-100mi
Capsella rubéola
774 I: Monte Gargano 41-500norte, 16-000mi
1,241 ES: Sierra de Guadalupe P: 39-270norte, 5-190W 38
1,249 Sintra cerca de Lisboa -240norte, 7-23028-400
1,504 ES: Canarias: La Palma norte, 17-520W
aCifras de población segúnCapsellaBanco de semillas (Universidad de Osnabrueck)

examinada bajo luz ultravioleta. Los fragmentos de PCR del tamaño esperado (aproximadamente 1
kb) se clonaron en el vector pCR 2.1 utilizando el kit de clonación TA (Invitrogen). Luego, se
seleccionaron de 10 a 50 clones separados por individuo y los plásmidos se aislaron utilizando
NucleoSpin.®Kit de plásmidos (Macherey-Nagel).
2.2.2 PCR-RFLP
Los fragmentos de PCR se cortaron del vector a través de una digestión de restricción con EcoRI. Las
bandas resultantes se extrajeron de un gel de agarosa y se volvieron a amplificar (ver Secc.2.2.1).
Posteriormente, las siguientes endonucleasas de restricción se probaron si habían cortado los
fragmentos aislados en unS-patrón específico de alelo:aluminioI;apoI;mboI;NdeI;PstI; RsaI;TaqaI;Xba
I. La fragmentación se visualizó mediante electroforesis en gel de agarosa. Todas las endonucleasas
de restricción se adquirieron de NEB (New England Biolabs) y se trataron como se recomienda.
2.2.3 Secuenciación y análisis de secuencias
Los plásmidos se secuenciaron en ambas direcciones utilizando cebadores M13 universales.

Para evitar errores que puedan haber ocurrido durante el procesamiento y la secuenciación
de la PCR, se obtuvieron tres clones independientes del mismo individuo que parecía contener
SRKSe secuenciaron los fragmentos de PCR candidatos. Para la secuenciación del ADN se
utilizó un secuenciador automático ABI 377 (Big Dye; Applied Biosystems). Las secuencias
resultantes se alinearon con las publicadas.SRK/SLGsecuencias debrasicáceasespecies,
Raphanus sativus, A. lyrata,yA. thaliana SRKpseudogen según lo indicado por las búsquedas
BLAST. Un segundo miembro de laS-familia de genes,ARCA3 deArabidopsis especies, que
revelaron similitudes conCapsellaLas secuencias en las búsquedas BLAST se incluyeron en la
alineación (Tabla2). Las secuencias se alinearon usando BioEdit 5.0.9
Tabla 2Números de accesión de BrassicaceaeS-genes utilizados en los análisis

Especies Número de acceso de Genbank
brasicáceas X79431, AB054815, AB326959 (SLG); X79432,

AB054710, AB054718 (SRKclase I) Y18259, Y18260,
AB211197, AB211198 (SRKclase II) AB009677,
rapano AB009681, AB009684 (SLG);
AB114846 AB114847, AB114849, AB114850, AB114852, AB114853
(SRK)
Arabidopsis lirata AB052755, AB052756, AF328990, AF328992, AF328994, AF328996-
AF328998, AY186766- AY186768, AY186770, AY186777,
DQ520281- DQ520285 (SRK) NM118257 (CSRK); NM118258
Arabidopsis thaliana (ARCA3) DQ534551 (ARCA3)
Capsella rubéola
Capsella grandiflora DQ530637-DQ530642, EF530735, FJ613330-FJ3333 (SRK);
DQ534558 (ARCA3)
84 M.Paetsch et al.
(Sala1999), los análisis filogenéticos y de distancia se realizaron con los programas MEGA 2.1
(Kumar et al.2001) y MrBayes 3.1.2 (Huelsenbeck y Ronquist2003). El soporte para los nodos en
el árbol se evaluó mediante arranque (1000 repeticiones). Se obtuvo información sobre la
estructura de las secuencias a través de la traducción del ADN a secuencias de aminoácidos. El
comienzo del codón deCapsellasecuencias se establece en analogía con el conocidoSRK
secuencias utilizadas en el alineamiento.
2.3 Cribado de BAC-Clones: Identificación deS-lugar en

C. rubéola
Una biblioteca BAC deC. rubéolafue proporcionado amablemente por J. Kroyman (MPI
Jena). La biblioteca fue examinada por J. Kroymann con sondas de laSRK S-dominio de
C. grandiflorayARCA3S-dominio deC. rubéola,diseñado sobre la base de nuestra información de
secuencia. Se han puesto a nuestra disposición cuatro clones de BAC que han mostrado señales
positivas de hibridación. Los clones fueron digeridos con la enzima de restricción Hind III y
fraccionados mediante electroforesis en gel de agarosa. Los fragmentos de ADN se transfirieron a
una membrana de nailon mediante transferencia de Southern. Para el procedimiento de hibridación
se utilizaron sondas marcadas con digoxigenina (PCR DIG Labeling Mix; Roche Diagnostics) de las
regiones mencionadas anteriormente. Las señales de hibridación se detectaron usando anticuerpos
anti-dig conjugados con fosfatasa alcalina. La visualización se llevó a cabo colorimétricamente
utilizando un protocolo BCIP/NBT. Los fragmentos positivos que hibridaron con nuestras sondas se
extrajeron de un gel de agarosa y se subclonaron en el vector pGem3Z (Promega). Después de la
transformación (E. coliTOP10; Invitrogen), se seleccionaron y digirieron hasta 50 clones por
fragmento con enzimas de restricción para probar el éxito de la clonación y revelar el tamaño de los
insertos.
2.3.1 Análisis del inserto BAC: Primer Walking
Las señales de hibridación marcaron un fragmento de -5 kb de un clon BAC como un

punto de partida prometedor para el análisis del clon BAC. Se usaron los cebadores
universales T7 y SP6 (Promega) para secuenciar el fragmento. Las secuencias resultantes
se alinearon con las regiones correspondientes del genoma deA. thaliana (EXPLOSIÓN).
En base a esta información de secuencia, se diseñó un cebador directo para secuenciar
el fragmento de 5 kb paso a paso en su totalidad. Este cebador tiene la secuencia 50
-GAG GAA CAC AAG TCT TCG ATC-30.
2.4 Experimentos cruzados
2.4.1 Experimento de Cruzamiento I: Cruzamiento Intraespecífico
Treinta individuos deC. grandiflorapoblación 934 (Cuadro1, Secta.2.1) fueron criados en

invernaderos. Para evitar polinizaciones descontroladas, las plantas se cubrieron con permeables
bolsas de plástico antes de la floración. Los individuos se polinizaron recíprocamente entre sí y

se autopolinizaron. Cada cruce se repitió tres veces. El éxito de los cruces y la calidad del
conjunto de semillas se evaluó mediante la medición de parámetros de aptitud, como las
dimensiones de la fruta y el recuento de semillas. La medición se realizó utilizando un
microscopio estereoscópico con la cámara DFC 280 y el programa IM50 (Leica, Alemania). Los
cruces fueron acompañados de genotipificación para identificar losS-composición alélica de
cada individuo. El genotipado se llevó a cabo como se describe en2.2.
2.4.2 Experimento de Cruce II: Cruce Interespecífico
Para probar la hipótesis de Riley (1932,1936) que enCapsellaSC sería dominante

sobre SI, investigamos la segregación de la generación F2 de un cruce
interespecífico entreC. grandiflorayC. rubéola.Cruces interespecíficos entre
C. grandiflora (Estallido. 926, Mesa1, Secta.2.1.1) yC. rubéola (Estallido. 1.504, Tabla1,
Secta.2.1.1) se había realizado anteriormente (Hurka y Neuffer, inédito). Se criaron seis
individuos de la progenie F1, que parecían ser casi totalmente autocompatibles. Se
sembró el material de semilla F2 y se criaron 16 individuos F2 por individuo F1. Para
evitar polinizaciones descontroladas, las plantas se cubrieron con bolsas de plástico
permeables antes de la floración. La polinización con polen propio se efectuó frotando
cuidadosamente las inflorescencias dentro de sus bolsas de plástico. Se documentó la
segregación de fenotipos en las progenies F2 con respecto al estado de compatibilidad,
así como al tamaño de flores y frutos. La progenie F2 de un individuo se sometió a
estudios comparativos del crecimiento del tubo polínico. Unas 50 flores por individuo F2
se tiñeron con azul de anilina decolorado, siguiendo el método de Kho y Baër (1968). Los
portaobjetos se examinaron bajo el microscopio de fluorescencia “Axioskop 20” (Zeiss,
Alemania) y el desarrollo de los tubos polínicos se documentó fotográficamente con la
cámara RT Power Supply-SPOT y el programa SPOT RT 3.0, SPOT Advanced (Zeiss,
Alemania).
3 resultados
3.1 Identificación deS-Alelos
PutativoSRK-alelos enC. grandiflorafueron identificados como se describió previamente

(Paetsch et al.2006). La evidencia de la identidad de las secuencias se obtuvo a través de la
revelación de similitudes en la secuencia y la estructura de los anuncios publicados.S-genes de
otros taxones de Brassicaceae. Las secuencias muestran los 12 residuos de cisteína
conservados que son característicos deS-genes de dominio Se hizo evidente que los sitios
variables no estaban concentrados en tres regiones HV distintas, similar a la situación en
Arabidopsis especies (Schierup et al.2001). Los análisis de divergencia de secuencia revelaron
un alto polimorfismo entreCapsella S-alelos, como se esperaba para los genes implicados en
86 M.Paetsch et al.
procesos de reconocimiento. Las distancias medias por pares de los grupos

taxonómicos (44 taxones; 769 sitios) son 0,14–0,20 paraRaphanus/Brassica SRK/SLG-
alelos y 0.27–0.30 para Arabidopsis/Capsella SRK-alelos La estrecha relación entre
Capsellay Arabidopsis S-alelos se refleja a través del agrupamiento mixto en el análisis
filogenético (Fig.3). Hasta la fecha, 18S-alelos deC. grandifloraha sido publicado
0.1 AthARK3
CruARK3
CruARK3
1.00 CgrARK3
1.00 CgrARK3
AlySRKb
CgrSRK02
alysrka
1.00 1.00 CgrSRK07
1.00 AlySRK05
0,53 1.00 AthSRK
0.77 alysrk16
1.00 AlySRK19
CgrSRK05
0.98 1.00 alysrk08
1.00 alysrk06
0.75
CgrSRK34
AlySRK14
0.72
alysrk18
1.00
1.00 0.99 CgrSRK04
AlySRK03
1.00 0.86
alySRK30
1.00 CgrSRK01
1.00 CgrSRK06
alysrk22
AlySRK01
1.00 CgrSRK03
AlySRK11
0.88 alysrk23
1.00 0.96 AlySRK04
alysrk09
bolSRK15
1.00
BrSRK44
1.00
1.00 bolSRK05
0,94 BrSRK40
CgrSRK35
AlySRK10
0,95 0.75 RsaSRK01
RsaSRK08
1.00 BrSLG55
1.00
1.00 RsaSLG01
1.00 CgrSRK47
RsaSLG07
0,67 BrSLG52
0.73
1.00 RsaSRK06
0.70 RsaSLG05
0.99
bolSRK39
0.99 bolSRK16
RsaSRK02
0.82
RsaSRK18
BolSLG03
0,68 1.00
bolSRK03
0,55 RsaSRK19
0.99
CgrSRK36
Fig. 3Filograma de Brassicaceae S-Genes. Relaciones filogenéticas entreS-genes de taxones de Brassicaceae.

El árbol de consenso de la regla de la mayoría bayesiana del 50 % se muestra con valores de probabilidad
posteriores medios (credibilidades del clado)en ramas El árbol estaba enraizado conARCA3 deArabidopsis y
Capsella. S-alelos deC. grandiflora (letras en negrita)se agrupan en su mayor parte entre los de
A. lirata,sino una clara separación de los linajesBrassica/RáfanoyArabidopsis/Capsella se volvió
borroso debido a ejemplos de transgéneroS-polimorfismo alelo (cf. Tabla3)
(Paetsch et al.2006; Nasrallah et al.2007; Guo et al.2009; este estudio). EnA. lirata,
Prigoda et al. (2005) definieron cuatro clases de dominancia. Clase A 1–3S-Se demostró
que los alelos son dominantes sobre la clase BS-alelos, salvo una sola excepción, AlySRK
01, que es recesivo a todos los demásS-alelos pero es el más comúnS-alelo en las
poblaciones examinadas hasta ahora. Curiosamente, el análisis de las distancias de
nucleótidos por pares entreS-alelos deArabidopsisyCapsellareveló queAlySRK01 yCgrSRK
03 exhiben una divergencia de secuencia muy baja de solo el 9% (Paetsch et al. 2006).
No se observa una divergencia tan baja entreAlySRK-alelos ni entreCgrSRK-alelosC.
grandiflora S-los alelos se agrupan en cada una de estas clases de dominancia. Y aunque
el análisis de laCgr S-el estado de dominancia de los alelos aún está pendiente,
concluimos de estos hallazgos que tanto elS-El polimorfismo de los alelos y la
subdivisión en clases de dominancia son anteriores a la separación de los géneros.
ArabidopsisyCapsella.MayoríaSRK-los alelos de ambos géneros están claramente
separados debrasicáceasyRaphanus S-genes, mientras queCgrSRK36 yCgrSRK47 son
muy similares aS-genes de losBrassica/Ráfanolinaje. Otros casos de niveles
notablemente bajosS-La diversidad de secuencias de alelos entre miembros de
diferentes géneros ha sido reportada recientemente (Nasrallah et al.2007; Ed et al.2009)
y se han integrado en el árbol NJ. Mesa3resume estos ejemplos de transgénero S-
polimorfismo alelo con respecto a la divergencia de secuencia (p-distancias).
3.1.1S-PCR-RFLP específico de alelo
PCR-RFLP ha demostrado ser un método simple para diferenciar rápidamente entre S-alelos y
la identificación de nuevosS-alelos (Brace et al.1994; Lim et al.2002). Para establecer el método
enCapsella,Se probaron varias enzimas de restricción. Digeridos individuales con enzimas de
restricciónapoyo yTaqame encontraron para cortarS-alelos en un patrón característico, que se
muestra de manera ejemplar paraS-alelos 1-5 en la Fig.4. Estas enzimas también son
adecuadas para la diferenciación entre otrasCapsella S-alelos (datos no mostrados).
3.2 Cribado de BAC-Clones: Identificación deS-Locus Genes en

C. rubéola
3.2.1 Identificación deC. rubéolaFragmento BAC de 5 kb a través de la comparación

cona. thaliana
Restricción de resúmenes deC. rubéolaLos clones BAC y los análisis de transferencia Southern
conducen a la identificación de un fragmento de restricción de -5 kb que se hibridó con sondas
marcadas con DIG delSRK/ARK3S-dominio de laCapsellaespecies. El inserto se secuenció
parcialmente usando la técnica de caminata con cebador. Las búsquedas BLAST revelaron
altas homologías conArabidopsis S-genes Una alineación cona. thalianagenómico
88
Tabla 3transgéneroS-polimorfismo alelo

AlySRK01 CgrSRK03 AlySRKa CgrSRK07 RsaSRK19 CgrSRK36 RsaSRK02 CgrSRK47 BolSRK05
CgrSRK03 0.08 – – – – – – – –
AlySRKa 0.29 0.31 – – – – – – –
CgrSRK07 0.30 0.32 0.15 – – – – – –
RsaSRK19 0.30 0.31 0.30 0.31 – – – – –
CgrSRK36 0.32 0.33 0.32 0.31 0.09 – – – –
RsaSRK02 0.29 0.31 0.31 0.30 0.09 0.10 – – –
CgrSRK47 0.33 0.34 0.35 0.35 0.18 0.19 0.17 – –
BolSRK05 0.31 0.30 0.33 0.33 0.28 0.29 0.28 0.30 –
AlySRK09 0.26 0.27 0.30 0.30 0.26 0.26 0.25 0.28 0.20
aEjemplos de divergencia de secuencia baja entreS-alelos de diferentes géneros de Brassicaceae en negrita
bdistancias por pares; 801 pb
M.Paetsch et al.
Figura 4PCR-RFLP específico del

alelo S. Enzimas de restricción ApoI
apoyo yTaqayo cortoCapsella S-alelos TaqαI
grandiflora S-alelos S-alelos
CgrSRK01-05 en 2314523145
patrón característico
1500 pb
600 pb
100 pb
El ADN mostró que el inserto de -5 kb deC. rubéolacorresponde a laS-región que contiene

locus deA. thaliana,principalmente al gen At4g21380 (ARCA3) que flanquea directamente el
SRKpseudogen enA. thaliana.De los estudios comparativos de mapeo de Koch y Kiefer (2005),
es posible deducir que laS-lugar en elArabidopsisespecie se encuentra entre los marcadores
60 y 61 (Fig.5). Estos marcadores abarcan la región entre At4g27070 (marcador 60: TSB2) y
At4g12480 (marcador 61:CH 42) (números de marcadores de Kuittinen et al.2004). EnA. lirata,
la región entre estos marcadores se encuentra en el grupo de enlace 7, y enC. rubéola,esta
región se encuentra en su totalidad en
C. rubéolagrupo de enlace G. Por lo tanto, concluimos que la posición delS-lugar en
Capsellacorresponde a la deA. thaliana,donde se encuentra en el cromosoma IV.
3.3 Relaciones de frecuencia y dominancia deS-alelo
3.3.1 Experimento de Cruzamiento I: Cruzamiento Intraespecífico
Cruces intraespecíficos extensos dentro de una población natural deC. grandiflora se

realizaron con el fin de buscar másS-alelos, para determinarS-frecuencias alélicas y revelar
relaciones de dominancia. Cada combinación de padres fue polinizada recíprocamente
(repetida tres veces), incluyendo la autopolinización de cada individuo. Se documentó el hábito
fenotípico, se recolectó material de semillas de F1 y se analizaron los parámetros de fertilidad
(tamaño del fruto, número de semillas por fruto; Fig.6) para estimar la calidad de la
compatibilidad. Las plantas progenitoras se genotipificaron como se describió anteriormente
(Sect.2.1.2). Los análisis finales comprenden 18 individuos, en los que logramos identificar al
menos a unoS-alelo Para la correlación de cruces con genotipos, ver Fig.6. SI en esta población
particular parecía funcionar con un número muy bajo de diferentesS-alelos, a pesar de que no
tuvimos éxito en
90 M.Paetsch et al.
C. rubéola
LG G
a. thaliana
Cr IV
A. lirata
LG 7
Figura 5mapa del genoma deArabidopsisespecies yC. rubéola (Koch y Kiefer2005, modificación.).
Marcos rojosmostrar la región entre los marcadores 60 y 61, que contiene elS-lugar enArabidopsis
especie y que corresponde en su totalidad al grupo de ligamiento G deC. rubéola
amplificando ambosS-alelos en todos los individuos. CincoS-Los alelos han sido identificados
hasta ahora:SRK01 (2x),SRK03 (4x),SRK05 (1 vez),SRK06 (9x),SRK34 (8x). Otro resultado
interesante de este estudio fue que algunos individuos produjeron semillas cuando se
autopolinizaron manualmente (pseudoautocompatibilidad).
3.3.2 Experimento de Cruce II: Cruce Interespecífico
Ninguna de las seis progenies F2 segregó claramente 3:1 para la dominancia de SC.
Toda la progenie F2 segregó significativamente 1:2:1 (w2-probado) que muestra una alta
proporción de fenotipos intermedios inusuales (Fig.7). Así, en poblaciones naturales del
Capsellaespecies, la hipótesis de Riley (1932;1936; Secta.2.4.2) no pudo ser
fundamentada. Dentro de los intermedios se observaron dos formas de aparición: los
a
materno 2-1 2–3 2–4 3–1 3–2 3–3 9–1 9–3 12–3 13-1 14–3 15–3 19-1 25–4 26–1 28–1 32–1 32-2
individual
alelo 1 SRK06 SRK01 SRK03 SRK06 SRK03 SRK06 SRK03 SRK34 SRK34 SRK34 SRK03 SRK06 SRK34 SRK06 SRK06 SRK34 SRK01 SRK06
paternal
alelo 2 n.fn.fn.fn.f nf n.fn.f n.fn.f SRK06 nf SRK05 SRK06 SRK34 SRK34 nf nf SRK34
individual
2-1 SRK06 nf ––– –––+++ +++++++++ ++++++ #+++#++++ –––––++++++++++#–– nf
2–3 SRK01 nf ––– – – – nf – – 0 –– ––– ––– ––– +++–– + – ∼0 +++ ∼∼∼ ++++++––0 +++
2–4 SRK03 nf +++ +++––– +++++++++++++++ –––++++++––– nf ∼## + + + – 0# + + + + + +

3–1 SRK06 nf ++ –––+++ – – – # + nf +++ ++ + + + # 0# +#+ ––– ++++++–––#+# #+++++
3–2 SRK03 nf +++ – – – 0++ +++0+++––0+++ ++++++ ––+–––#++ ++++++ ++ +## +
3–3 SRK06 nf ++ –––+++ + + + 0+0 ––– +++ +++ nf – – # + + + 0∼∼ +++ ∼∼∼ 0++ –## + + + 0++
9–1 SRK03 nf +++ –+0+++ ++–––+++–––––+ ++ +++–++–––++++++ 00– +++ ##++++
9–3 SRK34 nf +++ – 0# + + + ++++++–––++++++ +++––# –– – ∼∼ ++++++++++++ ++++++
12–3 SRK34 nf +++ –– +++ +++++++++ ++++++ nf 0+# – – – 00∼ ++++++–++ – 00 ++++++
13-1 SRK34 SRK06 nf ––––#+ #––+++++ +#++++ +++ ––– ++ ∼∼∼ –++ ++0 –––+++ #++++
14–3 SRK03 nf +++ +#+++ +x ++++++ nf +++ ––– +++ nf – ∼∼ +++ #+# –+++++++++++
15–3 SRK06 SRK05 nf – ––– – ––0– –0 ––0 –– nf nf ––– –– ––– nf ––– – ##nf
19-1 SRK34 SRK06 +++ +++ +++ ++++++#–# ++++++ +++##++++ ∼∼– nf ++++++–## ++#+++
25–4 SRK06 SRK34 +++ –––+++ ++++++–––+++#++ ++++++–++––– ++ ––– +++ ++ #+#+++
26–1 SRK06 SRK34 #–– +++ +++ ––0 +++ ## ++ +++ + + + – – – 0++ –– # + + # # # – – 0 +++ ++++++
28–1 SRK34 nf +++ – +++ 0#0 +++ –––++++++ +++++#–++–––+#– + + + + + + nf ##+++
32–1 SRK01 nf ––– –––#++ + + + nf +++++++++ ++++++–––– ∼0 +++ +++ +++ +++ nf + – #
32-2 SRK06 SRK34 +++ +++ +++ ++++++++# ++++++ ++++++ –– ––0 ++++++ ––0+++ + + nf
b
1.
Evolución del Sistema de Apareamiento en el GéneroCapsella (brasicáceas)
1=2,94mm
1=1,33mm
2.
1
2
1=2,45mm
+ 0,# ~,–
1,1 = 4,42 mm 2. 3. 1=1=1,30mm
Figura 6Experimento de cruce intraespecífico dentro de un naturalCapsella grandiflorapoblación. dieciocho individuos deCapsella grandifloranúmero de población 934 se cruzaron
recíprocamente entre sí tres veces. (a)IndividualS-la composición alélica se determinó en la medida de lo posible (recuadros de colores). (b)El éxito y la calidad de los cruces entre socios se
evalúa a través de los parámetros del conjunto de semillas y las dimensiones de la fruta (+ compatible; o, #, x parcialmente compatible; -, - incompatible. Los datos faltantes están marcados
91
con "nf”Llama la atención no sólo la inesperada alta proporción de cruces compatibles, sino también el bajo número de variosS-alelos que ocurren en altas frecuencias
92 M.Paetsch et al.
a b C d
SCSC SISC SISC SISI
Figura 7Experimento de cruce interespecífico entreC. grandifloraXC. rubéola.La progenie F2 segregó

fenotípicamente 1:2:1 con (a)autocompatible, SCSC homocigoto, (b)y (C)intermedio, heterocigoto
SISC, (d)fenotipos homocigóticos SISI autoincompatibles. Hipotético S-Los genotipos de los híbridos
F2 se dedujeron del hábito fenotípico y la capacidad de establecer semillas autónomas.
las que tenían más frutos estériles que fértiles, y las que tenían más frutos fértiles que
estériles. Para analizar el proceso básico dentro del estigma y los óvulos, realizamos un
examen histológico del crecimiento del tubo polínico dentro del gineceo mediante
microscopía de fluorescencia. En comparación conC. rubéola,todos los individuos F2 muestran
signos de interferencia en el desarrollo del tubo polínico, es decir, en la guía del tubo polínico.
Los tubos polínicos parecen estar enrollados después de salir de la región del estilete y se
enrollan alrededor de los tallos de los óvulos antes de que entren en el micrópilo (Fig.8). Este
fenómeno se acumula en los fenotipos intermedios y podría servir como explicación de la
fecundación irregular de óvulos que provoca la aparición intermedia. Otra observación
notable de este estudio fue que al menos se desarrolló un tubo polínico en cada individuo F2.
4. Discusión
El proyecto descrito aquí fue el primer estudio que abordó el sistema SI en el

géneroCapsellaa nivel molecular. Debido a la estrecha relación entre Capsellay la
planta modeloarabidopsis,nuestros estudios contribuyeron fundamentalmente a la
comprensión de la evolución de laS-locus en Brassicaceae. Evidencia inicial para la
identificación de supuestosS-alelos enCapsellaha sido ganado
Figura 8Crecimiento del tubo a

polnico despus de auto-auto-
polinización en híbridos F2
interespecíficos. Crecimiento Ov
normal del tubo polínico en (a)
Capsella rubéolay guiado
imperfecto del tubo polínico en (
b) Híbrido F2 interespecífico
entreC. grandifloraX Mi
C. rubéola. Ovóvulo,Mi
micropilo,puntotubo de polen
punto
punto
Mi
Ov
de similitudes en secuencia y estructura de Brassicaceae publicadasS-genes (Paetsch et

al.2006). el putativoCapsella S-Los alelos exhiben los elementos característicos deS-locus
receptor quinasa proteínas, y se agrupan, en su mayor parte, entre los deA. lirata.Se
pensaba que los sistemas SI de Brassicaceae evolucionaban de manera diferente en al
menos dos linajes: el linaje Brassiceae que incluye especies de los génerosbrasicáceasy
rapano,y un linaje que contiene especies del género Arabidopsis.Nuestros resultados en
CapsellaLa investigación de SI proporciona una indicación decisiva que confirma la
existencia de dos linajes diferentes (Paetsch et al.2006). Se ha revelado que la ubicación
cromosómica delS-lugar,S-composición génica (presumiblemente carente de laSLG),yS-
polimorfismo alelo es muy similar en los génerosCapsellayArabidopsis.Además, estos
géneros parecen compartir antiguasS-alelos. Sobre la base de la identidad de secuencia
extensiva, es posible que el
C. grandiflora SRK03 y elA. lyrata SRK01 puede haber descendido de un haplotipo
ancestral que existía antes de la divergencia deCapsellayArabidopsis (Paetsch et al.
2006). Los estudios de Nasrallah et al. (2007) sobre la baja diversidad genética y la
estructura genética común deS-genes enC. grandiflora SRK07 y
A. lirata Sun haplotipo subrayaba esta interpretación. Aún más emocionante es el
descubrimiento de queC. grandiflora SRK36 ySRK47 son muy similares aSRK-alelos de
R. sativus.Pueden representar un ancestro común de los linajes debrasicáceas/
94 M.Paetsch et al.
rapanoyArabidopsis/Capsella.Recientemente, Edh et al. (2009) concluyó de la similitud

entreAlySRK09 ybrasicáceasclase IIS-alelos que polimorfismos transgenéricos en elSRK
existen genes, que abarcan los linajes deArabidopsisy Brassica.Todos estos ejemplos de
transgéneroS-polimorfismo alelo (Tabla3) socavan la clara separación actual de los
linajesBrassica/RáfanoyArabidopsis/Capsella,indicando que el polimorfismo deS-los
haplotipos pueden incluso haber sido anteriores a la división de los linajes. Este
escenario está respaldado por los hallazgos de Charlesworth et al. (2006) que encontró
evidencia para el mantenimiento deS-haplotipos durante largos períodos evolutivos
como resultado putativo de la supresión extrema de la recombinación en la región que
contiene el locus S.
4.1 La ubicación cromosómica delCapsella S-El lugar geométrico es

similar aArabidopsis
Logramos identificar un fragmento de restricción de unC. rubéolaClon de BAC que muy

probablemente contiene partes delS-locus, es decir, la región que corresponde a la S-
locus genes At4g21390 a At4g21380 (¼ARCA3) ena. thalianacromosoma IV y
A. lirataLG 7. Considerando la extensa conservación del genoma entrea. thaliana
cromosoma IV yC. rubéolagrupo de ligamiento G (Koch y Kiefer2005) así como la
supresión de la recombinación en elS-locus (Kamau y Charlesworth2005; Charlesworth
et al.2006), nuestros hallazgos permiten una determinación aproximada de la posición
cromosómica deS-genes locus enC. rubéola.Si elCapsella S-locus eran más similares a la
de laBrassica/Ráfanolinaje, las secuencias obtenidas del fragmento BAC deben
corresponder aa. thalianacromosoma I (Conner et al.1998). Como este no es el caso,
concluimos que la ubicación cromosómica delS-lugar enCapsella es similar a la que hay
enArabidopsis.Esta suposición fue confirmada recientemente por estudios de Nasrallah
et al. (2007), quienes mostraron una organización genómica similar entre dos haplotipos
deA. liratayC. grandiflora.Revelaron un posicionamiento y espaciamiento similares deS-
genes enC. grandiflora S7 haplotipo (es decir,S-genesCgrSRK07 y CgrSCR07) y elA. lirata
Sun haplotipo (Kusaba et al.2001). Nuestros hallazgos no pudieron desentrañar de
manera concluyente la cuestión de si el evento de translocación ocurrió en el linaje de
brasicáceaso el dearabidopsis,pero muestran que la posición cromosómica delS-lugar en
Arabidopsisno se limita al géneroArabidopsis solo. Esto puede respaldar la opinión
prevaleciente de que es más probable que el evento de translocación haya ocurrido en
elbrasicáceasque contiene linaje, y que elArabidopsis S-locus representa la condición
ancestral (Kusaba et al.2001; Ed et al.2009).
4.2 Poblaciones naturales deCapsellaExhibir estrategias de apareamiento

flexibles
Realizamos cruces inter e intraespecíficos dentro y entreCapsella especies

para determinar el número y la frecuencia deS-alelos en un natural
población, con el fin de comprender mejor las relaciones de dominancia deS-alelos, y

probar la hipótesis de si SC es dominante sobre SI. La existencia de un alelo SC que es
dominante sobre los alelos SI fue postulada por Riley (1932,1936, véase la secc.2.4.2).
Para probar esta hipótesis, realizamos cruces interespecíficos entre individuos deC.
rubéola (SC) yC. grandiflora (SI) de poblaciones naturales. Se cultivaron seis plantas
híbridas F1 y todas mostraron autofecundación autónoma con un conjunto de semillas
casi completo. Las semillas F1 se usaron para criar individuos de la progenie F2. Se
esperaba que las plantas F2 segregaran 3:1 por autocompatibilidad si las suposiciones
de Riley eran correctas. Como este no fue el caso, concluimos que la hipótesis de que SC
es simplemente dominante sobre SI no ha sido corroborada en nuestros estudios, lo
que contrasta con otros informes (Nasrallah et al.2007). La falta de armonía genética
entre los genomas de las especies, que se hizo evidente en la interferencia de la guía del
tubo polínico, impide una interpretación clara de los resultados de la segregación. Sin
embargo, una de las observaciones más interesantes de este estudio es que al menos
un tubo polínico se desarrolló con éxito en cada individuo F2. Incluso aquellos individuos
que presumiblemente eran homocigotos para SI (Fig.7d) no pudo evitar que los granos
de polen germinaran en todos los casos. Explicamos este fenómeno suponiendo
fenotipos SI "fuertes" y "débiles", según el únicoS-alelo portado por los híbridos F2. Estos
fenotipos se observan en general en la naturaleza.C. grandiflorapoblaciones, donde la
hibridación entre las especies simpátricas ocurre en general (observación personal de
los autores). La fertilización irregular de los óvulos en los híbridos F2 muestra que la
respuesta SI se pasa por alto ocasionalmente. El estudio de Foxe et al. (2009) implica que
la división entre estosCapsellalas especies habían sido un evento bastante joven; su
estimación de divergencia para la separación de la autofecundaciónC. rubéoladel cruce
C. grandifloraes de 18.500 años. Aquí, la ruptura del sistema SI parece causar
directamente la especiación. Por lo tanto, es probable que se establezcan barreras
reproductivas entre las especies, pero no condujeron a la prevención completa de la
hibridación entre especies diploides.Capsellaespecies.
En un experimento de cruce intraespecífico dentro de un naturalC. grandiflorapoblación, el

genotipado proporciona evidencia de que SI en esta población en particular funciona con un
número bajo de variosS-alelos (cincoS-alelos identificados hasta ahora). Además, observamos
que más cruces resultaron en producción de semillas de lo que cabría esperar cuando pocasS-
los alelos aparecen a altas frecuencias. Compartir al menos un alelo entre dos compañeros de
cruce no garantiza la activación de la respuesta SI, lo que contrasta con el género modelo
Brassica.A partir de esto, asumimos relaciones de dominancia complejas con pocosS-alelos
que ocurren en altas frecuencias, y una alta proporción de más o menos recesivosS-alelos en
Capsella.Nuestros hallazgos están en concordancia con otros estudios en poblaciones
silvestres de géneros con SI esporofítica (Mable et al.2003,2005; Brenan et al.2003,2005).
Números bajos de S-Se ha demostrado que los alelos en las poblaciones naturales son
suficientes para mantener las poblaciones de las especies autoincompatibles.Senecio
squalidusL. (Asteraceae) (Brennan et al.2003). ExtrañoS-los alelos tendrían ventajas de
apareamiento, ya que los alelos de autoincompatibilidad subyacen a la selección negativa
dependiente de la frecuencia (Schierup y Vekemans2008).
96 M.Paetsch et al.
4.3 Consecuencias evolutivas de las estrategias de apareamiento flexible
El resultado general de los experimentos de cruzamiento es el hallazgo de que el sistema de

apareamiento en las poblaciones naturales deCapsellareacciona mucho más flexiblemente de
lo previsto por el sistema modeloBrassica.Esto debe suponerse a partir de la alta proporción
deducida de recesivosS-alelos o "débiles"S-alelos, cuya respuesta SI es menos fuerte.
Acumulación de recesivoS-los alelos pueden conducir al debilitamiento de la respuesta SI
hasta e incluyendo la ocurrencia de la autofecundación. Del experimento de cruzamiento
intraespecífico e interespecífico, concluimos que el cruce predominantementeC. grandiflora
exhibe pseudo-autocompatibilidad, que se considera una estrategia de apareamiento mixto
(p. ej., Sherman-Broyles y Nasrallah2008). La evolución de la pseudoautocompatibilidad o
autocompatibilidad es una medida para asegurar el éxito reproductivo en caso de que una
población disminuya debido a un cuello de botella (Levin 1996; Busch y Schoen2008). La
flexibilidad, al ser inherente a laCapsellasistema de apareamiento en general, también puede
reflejarse en el hallazgo de que las barreras reproductivas en híbridos interespecíficos de
Capsellaestán incompletos. Recientemente, Slotte et al. (2008) encontró evidencia de
hibridación e introgresión después de la poliploidización en el predominantemente
autofecundaciónCapsella bursa-pastoris.Concluyen que el flujo de genes entre
C. rubéolayC. bursa-pastorispodría haber contribuido a la gran variabilidad genética enC.
bursa-pastoris.El mantenimiento del cruzamiento intraespecífico hasta cierto punto, y con ello
la seguridad de la recombinación genética, facilitaría la diferenciación ecotípica, que se cree
que ha ocurrido recientemente con respecto al tiempo de floración enCapsella (Ceplitis et al.
2005). El potencial para adaptar la estrategia de apareamiento predominante a la
disponibilidad de compañeros o polinizadores capacita una reacción flexible a los cambios en
el medio ambiente que necesariamente sería un desencadenante importante en la
especiación posterior. Cheptou et al. (2002) informó sobre la descomposición parcial de SI y la
posterior recuperación total de SI durante la historia de colonización deCrepis santa (
asteráceas). Resumiendo los hallazgos de nuestros estudios SI iniciales, asumimos que en las
poblaciones naturales del géneroCapsellala transición de SI a SC no conduce inevitablemente
a un "callejón sin salida evolutivo", y es probable que la flexibilidad del sistema de
apareamiento haya desempeñado o siga desempeñando un papel importante en los procesos
de especiación del género.
5 Resumen
Nuestros estudios contribuyeron a la comprensión de la evolución de laS-locus en

poblaciones naturales en general, ya que la investigación de Brassicaceae SI carecía de
un género con el que comparar los resultados obtenidos del género modeloArabidopsis.
Datos moleculares de laCapsella S-locus llenó este vacío y corroboró la suposición de
que el sistema SI en Brassicaceae evoluciona de manera diferente en al menos dos
linajes, uno que contieneBrassica/Ráfanoy el otro contieneArabidopsis/Capsella.Esto
debe concluirse a partir de los hallazgos de estrechas similitudes conArabidopsisespecie
en lugar del género modelo.brasicáceascon respecto a la ubicación cromosómica,
estructura de laS-lugar,S-polimorfismo de alelos e interacciones de dominancia entreS-alelos

Además, el hallazgo de transespecíficos y transgenéricos S-polimorfismos de alelos entre
ambos linajes subraya la antigüedad y conservación de laS-región que contiene locus. El
CapsellaEl sistema de apareamiento parece brindar oportunidades para el apareamiento
mixto, combinando las ventajas de ambos y asegurando el establecimiento de semillas a
través de la autofecundación, así como la recombinación del genoma a través del
mantenimiento del cruzamiento e hibridación. Esto es especialmente cierto para los
autoincompatibles.C grandiflora,que exhibe pseudo-auto-compatibilidad, y para el poliploide
predominantemente autofecundanteC. bursa-pastorismostrando una notable variabilidad
fenotípica y genotípica.
Expresiones de gratitudLos autores agradecen a J.€Urge a Kroymann para seleccionar y proporcionar

C. rubéola clones de BAC y Deborah Charlesworth, Marcus A. Koch, Walter Bleeker y Pieternella
C.Luttikhuizen para discusiones útiles. Agradecemos a Ulrike Coja por la asistencia técnica, a Lucille
Schmieding por la edición del idioma (inglés) y a las estudiantes asistentes Sylvia Holdt y Sonja
Bicker, quienes contribuyeron con valiosos resultados, y a Andre Lipski, quien hizo posible el uso del
microscopio de fluorescencia. Además, reconocemos la ayuda del equipo del Jardín Botánico de
Osnabrueck y agradecemos a la DFG por el apoyo financiero.
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Especiación impulsada por polinizadores en
orquídeas sexualmente engañosas del géneroOfris
Manfred Ayasse, Julia Gögler y Johannes Stökl
AbstractoOfrislas orquídeas imitan a las hembras de sus especies polinizadoras para atraer insectos machos
para la polinización. El aislamiento reproductivo se basa en la atracción específica de machos de una sola
especie polinizadora, generalmente abejas, al imitar la feromona sexual específica de la especie hembra. Las
orquídeas sexualmente engañosas son candidatas ideales para los estudios de especiación simpátrica,
porque los rasgos adaptativos clave, como el olor que atrae a los polinizadores, están asociados con su éxito
reproductivo y con el aislamiento previo al apareamiento.
Hemos investigado procesos de especiación ecológica mediante experimentos de
comportamiento y análisis químicos, electrofisiológicos y genéticos de población. Mostramos que los
cambios menores en los ramos de olores florales podrían ser la fuerza impulsora de los cambios de
polinizadores y los eventos de especiación. Los nuevos polinizadores actúan como una barrera de
aislamiento hacia otras especies simpátricas. La hibridación ocurre debido a los ramos de olores
similares de las especies y la superposición de los períodos de floración. La especiación híbrida
también puede conducir al desplazamiento de especies por parte de la población híbrida, si su éxito
reproductivo es mayor que el de las especies parentales.
1. Introducción
Las orquídeas incluyen más de 20.000 especies y comprenden una de las familias más grandes
del reino vegetal (Dressler1993). Su notable variación de forma floral y su diversidad en los
sistemas de polinización siempre han interesado a los biólogos evolutivos.
M. Ayasse (*) y J. Gögler

Instituto de Ecología Experimental, Universidad de Ulm, Albert-Einstein-Allee 11, 89069 Ulm,
Alemania
correo electrónico: manfred.ayasse@uni-ulm.de
J. Stokl
Instituto de Ecología Experimental, Universidad de Ulm, Albert-instein-llee 11, 89069 Ulm,
Alemania
Instituto f€ur Zoologie, AG Chemische Ökologie, Universidad€en Ratisbona, Universidad€atsstraße
31, 93053 Ratisbona, Alemania

102 M. Ayasse et al.
(Darwin1885). Las flores no gratificantes están muy extendidas entre las Orchidaceae,
con un tercio de las especies empleando engaños en lugar de recompensas de comida
para atraer a los polinizadores (Pijil y Dodson1966; vestidor1981; ackerman1986). El gran
número de especies engañosas sugiere un papel importante del engaño floral y la
especialización en la diversificación de especies (Cozzolino y Widmer2005; pero ver
Armbruster y Muchhala2009; Schiestl y Schl€útero2009).
En este estudio, hemos investigado y discutido la forma en que los cambios en los aromas
florales que son responsables de la atracción de polinizadores y el aislamiento de especies podrían
ser la fuerza impulsora de los cambios de polinizadores y la especiación ecológica enOfris orquideas
Esta revisión está lejos de ser completa, ya que hemos optado por centrarnos predominantemente
en las orquídeas sexualmente engañosas del géneroOphrys.El papel del aroma floral en la
especiación de orquídeas sexualmente engañosas de Australia ha sido revisado en un artículo
reciente (Whitehead y Peakall2009).
1.1 Engaño sexual
Se cree que la polinización por engaño sexual es el mecanismo más notable de

polinización exclusivo de Orchidaceae y ha evolucionado de forma independiente en
Europa, Australia, Sudáfrica y América del Sur (Dafni1984; ackerman1986; Nilsson 1992;
Jersakova et al.2006). El engaño sexual se encuentra en Europa en el género Ofris (
Delforge2006).Ophrys flLas flores imitan a los insectos hembra en forma, color y olor
para atraer a los machos para la polinización (Kullenberg1961; Kullenberg y Bergström
1973; Higo.1). Los polinizadores son principalmente himenópteros acuulados, pero
también escarabajos y dípteros (Kullenberg1961; paulo2006).
Los insectos machos son atraídos a la orquídea por semioquímicos volátiles y señales visuales. A
corta distancia, las señales químicas de las flores provocan el comportamiento sexual en los machos,
que intentan copular con el labelo de la flor. En todas las especies investigadas hasta ahora, los
intentos de cópula de los machos solo pueden ser provocados por un olor que es idéntico al del
Figura 1Ophrys esfegodes (cabeza polinizada) (izquierda)yO. lupercalis (abdomen-polinizado) (bien,

Foto: HF Paulus) con machos pseudocopulantes deandrena nigroaenea
Especiación impulsada por polinizadores en orquídeas sexualmente engañosas del géneroOfris 103
feromona sexual femenina de la especie polinizadora (Schiestl et al.1999,2000; Ayase et

al.2003; ayasse2006; Stokl et al.2007,2008), las señales visuales parecen ser menos
importantes. Los análisis químicos han demostrado queOphrys flLas flores producen
mezclas específicas de especies complejas de más de 100 compuestos (Borg-Karlson
1990; Ayase et al.2000,2003; Stokl et al.2005,2007,2008). Sin embargo, los bioensayos
con compuestos sintéticos han demostrado que no todos los compuestos tienen una
función en la atracción de polinizadores (revisado en Ayasse2006).
Enandrena-polinizadoOfrisespecies, una mezcla compleja de hidrocarburos
saturados e insaturados puede definir la atracción de polinizadores (Schiestl et al.1999;
Stokl et al.2005,2007,2008). Las especies simpátricas son atraídas por diferentes mezclas
de los mismos hidrocarburos (Schiestl y Ayasse2002). Además, tanto los parientes
cercanos como los lejanosOfrisespecies polinizadas por la misma especie deandreña
utilizan los mismos compuestos en una combinación muy similar para la atracción de
polinizadores (Stökl et al.2005). Esto indica la evolución convergente de los olores que
atraen a los polinizadores enOfrisespecies.
1.2 Polinización Especializada y Aislamiento Floral
El engaño sexual impone una fuerte especialización en las orquídeas, ya que las feromonas de
los insectos son generalmente muy específicas de la especie (Ayasse et al.2001). MayoríaOfris
son visitadas y polinizadas por machos de una sola especie polinizadora (Kullenberg 1961;
Paulus y Gack1990). Se observa una especificidad de especie similar en los géneros de
orquídeas australianas.Caladenia (Stoutamire1983) yQuiloglotis (Cenador1996) y sus
polinizadores. El altamente específicoOphrys–la relación polinizador representa el principal
mecanismo de aislamiento reproductivo entre los a menudo cruzablesOfris especies
(Ehrendorfer1980; Paulus y Gack1990; Schiestl y Ayasse2002; paulo2006), y el olor específico
de la especie es el principal responsable del aislamiento previo al apareamiento (Schiestl y
Ayasse2002; Schiestl2005; Stokl et al.2005; ayasse2006). En algunos casos, las diferentes
ubicaciones de los polinios en el macho proporcionan un mecanismo mecánico de aislamiento
entre simpátricosOfrisespecies con el mismo polinizador (Fig.1). Mientras tanto, se ha
informado de un ejemplo de aislamiento posterior al apareamiento (Scopece et al.2007), que
se cree que se adquiere secundariamente como un subproducto de la divergencia genética
(Dobzhansky1937; mayo1970).
1.3 Especiación
el géneroOfrisha irradiado extensamente por toda la región mediterránea (Delforge2006) y ahora

abarca más de 200 especies. A menudo se ha citado como un sistema modelo adecuado para
estudiar eventos de especiación por cambio de polinizador. EnOphrys, FloridaLas visitas posteriores a
menudo son raras y breves (Ayasse et al.2000) y la selección negativa dependiente de la frecuencia
en respuesta al aprendizaje del olor puede favorecer la variabilidad
de las señales de olor que atraen a los polinizadores dentro de las poblaciones de orquídeas
(Ayasse et al. 2000; Gigord et al.2001). Los cambios de olor como resultado de la deriva
genética o la presión selectiva de los polinizadores, la selección negativa dependiente de la
frecuencia o la hibridación pueden ser las fuerzas impulsoras de la especiación. Variación de
olor y la atracción de un nuevo polinizador por un grupo deOfrislos individuos de una
población pueden, en principio, proporcionar un factor de aislamiento inmediato, y la
especiación puede ocurrir rápidamente en simpatía y como un evento de especiación derivado
del progenitor en el que la especie progenitora permanece completamente inalterada
(Rieseberg y Brouillet).1994; Schl€útero2006; Schl€uter y harris2006; Cozzolino y Scopece2008
). Debido a la selección del nuevo polinizador, tales plantas podrían adaptarse a un nuevo
nicho ecológico y una nueva especie podría evolucionar (Johnson2007). Enandrena-polinizado
Ofrisespecies que atraen a sus polinizadores con varias mezclas de los mismos compuestos,
pequeños cambios en los ramos de olor de alcanos y alquenos resultan en la atracción de un
polinizador diferente (Schiestl y Ayasse2002; ayasse2006; Stokl et al.2008,2009).
Se cree que la especiación híbrida es un mecanismo importante para la especiación en
muchas plantas (Ehrendorfer1980; Barton2001; Seehausen2004; Rieseberg y Willis2007) y
también se ha sugerido enOfrispor las siguientes razones. Primero, el género contiene
muchas especies estrechamente relacionadas que son simpátricas en gran medida (Delforge
2006). En segundo lugar, el número de cromosomas de todas las especies es el mismo y los
híbridos son fértiles (homodiploidía; Ehrendorfer1980). La especiación híbrida es concebible
en dosOfristaxones que ocurren en simpatría y atraen al mismo polinizador (Ayasse2006). La
formación de híbridos enOfrispueden estabilizarse, proporcionando así el potencial para la
especiación, ya que la atracción de un nuevo polinizador por parte de los híbridos actúa como
una barrera de aislamiento previo al apareamiento. Así, el olor que producen las plantas
híbridas es fundamental para el aislamiento reproductivo de los híbridos.
A pesar de la atracción selectiva de los polinizadores, se produce polinización falsa y
ocasionalmente se pueden encontrar híbridos (Stebbins y Ferlan1956; Danesch et al.
1975; Ehrendorfer1980). Para varias especies, comoO. bertoloniformis, O. biancae, O.
sitiacaoO. normanii,Se ha propuesto un origen hibridógeno basado en la intermediación
floral entre especies parentales putativas (Stebbins y Ferlan1956; Paulus y Gack1995;
Delforge2006). Estudios recientes han sugerido el flujo de genes a través de los límites
de las especies en especies simpátricas delO. esfegodesgrupo (Soliva y Widmer2003;
Mant et al.2005) y elO fuscagrupo (Stökl et al.2008,2009).
El control genético de los caracteres morfológicos es desconocido y, a menudo, el
reconocimiento de los diferentes híbridos, como F1 o híbridos de generaciones posteriores,
retrocruzamientos e individuos introgresados, se vuelve difícil (Rossi et al.1992). Además,
distinguir entre híbridos morfológicos entre dos padres putativos que ya se superponen en su
morfología (Bateman et al.1997) es a menudo imposible. Por lo tanto, un enfoque más
poderoso para la delimitación de especies y taxones intraespecíficos es combinar datos
moleculares y estudios morfométricos (revisado en Bateman2001).
Las orquídeas sexualmente engañosas son candidatas ideales para estudios de radiación y
especiación simpátrica, porque los rasgos adaptativos clave, como el olor que atrae a los
polinizadores, están asociados con su éxito reproductivo y también con el aislamiento previo al
apareamiento. La presencia de muchas especies simpátricas con bajos niveles de morfología
diferencias (Paulo2001), diferencias en el olor (Stökl et al.2005) y diferencias

moleculares (Soliva et al.2001; Soliva y Widmer2003; Mant et al.2005) entre
especies sugieren una rápida radiación adaptativa.
A continuación, presentamos tres estudios de caso en los que hemos investigado la
variación en los rasgos florales y la variación genotípica en híbridos y especies parentales de
Ofrisen Cerdeña y Mallorca. Con base en los datos disponibles sobre la variación
intraespecífica e interespecífica de los volátiles florales que atraen a los polinizadores (Schiestl
y Ayasse2002; Stokl et al.2005), planteamos la hipótesis de los siguientes escenarios evolutivos
para eventos de especiación enOfris (Higo.2).
dos hipotéticosOfrislas especies ocurren en simpatría y atraen a sus polinizadores con
diferentes ramilletes de los mismos compuestos químicos (Fig.2a). Los cambios de olor como
resultado de la deriva genética o la selección negativa dependiente de la frecuencia podrían
dar como resultado un olor mutante de la especie 1 que produce un ramo de olor ligeramente
diferente que se parece más al ramo de olor de la segunda especie (Fig.2a) y que así atraería a
ambos polinizadores de la especie parental.
Escenario 1: los híbridos resultantes pueden producir ramilletes de olores intermedios de
los mismos compuestos. En este caso, se puede esperar la atracción continua de ambos
polinizadores, la formación de nuevas generaciones híbridas y la introgresión (Fig.2b, estudio
de caso 1).
Escenario 2: El híbrido puede reemplazar una o ambas especies parentales (Stökl et al.
2008; estudio de caso 1) si su éxito reproductivo es mayor que en la especie parental.
Escenario 3: El híbrido puede atraer a una nueva especie polinizadora (Pollinator 3) si el
olor, por casualidad, se parece a la feromona sexual de una nueva especie polinizadora
(Vereecken2008). Si el nuevo polinizador no es atraído por los otros polinizadores disponibles,
puede ocurrir la especiación (Fig.2b).
Escenario 4: El mutante podría ser atractivo para una nueva especie de polinizador
(Polinizador 4; estudio de caso 2 y 3) y, nuevamente, si el nuevo polinizador no es atraído por
los otros polinizadores disponibles, puede ocurrir especiación (Fig.2b).
a b Polinizador 4
Polinizador 1 Polinizador 1
De los padres
especie 1 mutante De los padres
mutante
especie 1
compuesto A Híbrido
compuesto B
compuesto C Polinizador 2 Polinizador 2
De los padres
especie 2 De los padres
especie 2
Polinizador 3
Figura 2Escenario evolutivo para eventos de especiación enOfrisorquideas Las flechas indican la atracción de
polinizadores, antes de la hibridación (azul)y después de la hibridación (rojo)
Escenario 5: el híbrido podría no atraer a ninguno de los polinizadores disponibles si el olor

de los híbridos difiere demasiado de sus polinizadores originales y no atrae a un nuevo
polinizador. En este caso, los híbridos desaparecerán. Este escenario probablemente sucedió a
menudo durante la evolución deOfrisorquideas
2 Estudio de caso 1: especiación híbrida y distinción de

especies en Cerdeña
Ophrys lupercalisDevillers-Terschuren & Devillers yO. iricolorLos desfontaines son dos

especies delO. fusca–O. luteagrupo y son polinizados porandrena nigroaeneaKirby 1802
ya.morioBrullé 1832, respectivamente. Paulus y Gack (1995) informaron híbridos
putativos deO. lupercalisyO. iricoloren Cerdeña; estos fueron atractivos para ambas
especies de polinizadores. Sus flores también mostraron una morfología floral
intermedia. AmbosO. lupercalisyO. iricolorestán muy extendidas en el Mediterráneo; sin
embargo, solo se han descrito híbridos en las poblaciones del Mediterráneo occidental
en Cerdeña, Túnez y Malta. Algunos autores consideran la forma sarda deO. iricolor
como una especie distinta (O. eleonoraeDevillers-Terschuren & Devillers; Devillers y
Devillers-Terschuren 1994), mientras que otros la consideran una subespecie geográfica
(O. iricolorsubesp.maximoTerracciano; Paulus y Gack 1995). En esta publicación,
usaremos el nombreO. iricolor.
En experimentos conductuales de campo en los que ofrecimos flores de ambas
especies y plantas híbridas a los machos deA. nigroaeneayA.morio,encontramos que el
36% de las flores intermedias eran atractivas para cada uno de los polinizadores y el 28%
eran atractivas para ambas especies (Stökl et al.2008). Además, las flores que
presentaban la morfología floral típica deO. lupercalisoO. iricoloreran atractivos para los
"falsos" polinizadores. Esto plantea dudas con respecto a la hipótesis del completo
aislamiento reproductivo deOfrisespecies por atracción selectiva de una sola especie
polinizadora, como proponen Paulus y Gack (1990).
La atracción del polinizador no legítimo debería ser más probable si las especies de
polinizadores involucradas están estrechamente relacionadas y poseen una feromona sexual
femenina similar. En el siguiente paso, por lo tanto, recolectamos extractos solventes de flores
y los usamos para análisis electrofisiológicos (GC-EAD) y químicos (cromatografía de gases y
espectroscopia de masas). Al acoplar la electroantenografía con la cromatografía de gases
(GC-EAD), se pueden identificar aquellos compuestos en una mezcla de olores que pueden ser
percibidos por la antena de la abeja. En un estudio anterior, este método ha demostrado que
A. nigroaenealos machos pueden percibir y son atraídos por los hidrocarburos saturados e
insaturados (Schiestl et al.1999). Los mismos compuestos también dan reacciones en la antena
dea.moriohombres (Stökl et al.2007). Por lo tanto, ambas especies de orquídeas producen los
mismos compuestos químicos en su olor floral. La atracción específica solo se logra mediante
diferentes mezclas de los mismos compuestos.
En tal caso, un ligero cambio en la cantidad producida de los mismos compuestos de olor puede
resultar en la atracción de una especie de polinizador diferente. Para probar esta hipótesis,
Fig. 3Gráficos de dispersión de análisis de función discriminante de hidrocarburos activos GC-EAD en

el olor floral de laOphrys flFlores (de Stökl et al.2008). (a)Las muestras se agruparon porOfrisespecie
(f1:w2¼97.5,d.f.¼8,pag <0,001; f2:w2¼3.1,d.f.¼3,PAG¼0,379). (b)Las muestras se agruparon por su
atractivo para los polinizadores (f1:w2¼40.3,d.f.¼8,pag <0,001; f2:w2¼1.8,d.f.¼4, PAG¼0.618)
comparamos los ramos de flores que atraen polinizadores de flores de ambas especies y
también de flores con morfología intermedia (híbridos). Los análisis mostraron una separación
limitada de los olores deO. lupercalisyO. iricolorcon una ligera superposición entre especies
(Stökl et al.2008). Las flores con morfología de flor intermedia no formaron un grupo separado
sino que en su mayoría se colocaron conO. iricolor (Higo.3a). Esta separación incompleta de
los olores florales entre especies está en congruencia con la atracción observada de las
especies de polinizadores "falsos" en los experimentos de comportamiento. Para responder a
la pregunta "¿Cuándo es atractiva una flor para ambas especies de polinizadores?",
comparamos las muestras según su atractivo para los polinizadores, no según las especies de
orquídeas (Fig.3b). Los olores de las flores atraen a cualquieraA. nigroaeneaoa.morioestaban
bien separados. Sorprendentemente, las flores atractivas para ambas especies no eran
intermedias entre los otros dos grupos ni formaban un tercer grupo distinto. Por lo tanto, no
pudimos explicar en detalle la atracción de los polinizadores. Obviamente, otros factores
además del olor floral, como la edad y la motivación de los machos, pueden influir en el
comportamiento de los machos.
Una superposición en las dos especies, por lo que los individuos híbridos no podían
separarse deO. iricolor,también se obtuvo en un análisis de 17 caracteres morfológicos
de flores (Stökl et al.2008). Por lo tanto, utilizamos herramientas genéticas (AFLP) para
identificar especímenes híbridos y evaluar la tasa de hibridación entre las especies. Los
resultados confirmaron la ruptura del aislamiento reproductivo entre especies (Fig.4)
como se esperaba de los eventos de polinización cruzada observados (Stökl et al. 2008).
Se produce una transición casi completa entre las dos especies. Esto indica no solo
hibridación sino también un alto número de retrocruces de híbridos y especies.
Figura 4Índices híbridos paraO. lupercalis, O. iricolory sus híbridos (de Stökl et al.2008). Los índices
varían de 0¼O. iricolora 1¼O. lupercalis.Las barras dan un intervalo de confianza del 95 %
Los datos de AFLP (Fig.4) también muestran que la mayoría de las plantas intermedias son
más similares aO. iricolorque aO. lupercalis (Stokl et al.2008). Esto sugiere queO. iricolor casi
ha sido reemplazada por unaO. iricolor x lupercalispoblación híbrida en Cerdeña. Según datos
de la AFLP, “puro”O. lupercalistodavía se puede encontrar. La competencia por los
polinizadores y el mayor número de individuos híbridos hacen que los eventos de polinización
entre individuos puros deO. lupercalisimprobable y raro. Eventualmente,
O. lupercalistambién podría ser completamente desplazado por laO. iricolor - lupercalis
población híbrida en Cerdeña.
3 Estudio de caso 2: Selección y especiación impulsadas por

polinizadores enOphrys lupercalis, Ophrys bilunulatayOphrys
fabrella en mallorca
Tres especies deOfrispolinizado por tres especies deandreñaocurren

simpátricamente en Mallorca (Delforge2006).Ophrys lupercalisDevillers-Terschuren
& Devillers, que está ampliamente distribuida en el Mediterráneo central y
occidental, es polinizada porA. nigroaeneaKirby1802.Ophrys bilunulataRisso es
polinizado porA. flavipes Panzer 1799 y tiene un área de distribución similar aO.
lupercalis.La tercera especie,O. fabrellaPaulus y Ayasse, que es polinizada pora.
fabrellaPérez 1903, es un endemismo de Baleares.
Las tres especies florecen simpátricamente y consecutivamente en Mallorca. El período de
floración deO. bilunulatase superpone con los períodos de floración de ambos
O. lupercalisyO. fabrella.Análisis previos han demostrado queO. lupercalis yO. bilunulata
producir diferentes ramilletes del mismo conjunto de hidrocarburos para atraer a sus
polinizadores,A. nigroaeneayA. flavipes,respectivamente (Schiestl y Ayasse2002; Stokl et
al.2005). Los períodos de floración superpuestos y una similitud en los olores que atraen
a los polinizadores en al menos dos de las tres especies, a saber.Ophrys lupercalisyO.
bilunulata (Schiestl y Ayasse2002), hacen de este sistema un candidato ideal para
estudiar hibridación y especiación.
Por tanto, analizamos el sistema de polinización de las especies mallorquinas con los
mismos métodos que habíamos utilizado en el estudio de las especies sardas. Primero,
realizamos análisis GC-EAD conO. fabrellaolor usando las antenas de
a. fabrellamachos; dichos análisis no se habían realizado previamente. Los resultados
mostraron que los hidrocarburos y algunos no hidrocarburos emitieron señales EAD en
las antenas dea. fabrellamachos La mayoría de esos compuestos también son activos en
EAD en hombres deA. nigroaenea, A. flavipesyA. morio (Schiestl et al.1999; Schiestl y
Ayasse2002; Stokl et al.2005,2007).
Una comparación de los volátiles florales activos GC-EAD en un análisis funcional
discriminante mostró un ramo de olor distinto para las tres especies, pero con una
superposición en los ramos de olor (Stökl et al.2009; Higo.5a). Desafortunadamente, debido a
las malas condiciones climáticas, no pudimos realizar experimentos de atracción cruzada con
las especies mallorquinas como lo hicimos en Cerdeña. Sólo pudimos probar flores de
O. bilunulatapor su atractivo paraA. flavipes.Flores de todos los lugares dentro del espacio de
olor deO. bilunulataeran atractivos para los hombres deA. flavipes.Incluso las flores con un
aroma de las áreas superpuestas conO. lupercalisyO. fabrella atrajo a los machos deA. flavipes
(Higo.5b). Por tanto, suponemos, aunque no lo hayamos observado directamente, la atracción
cruzada de polinizadores y, en consecuencia, la hibridación e introgresión entre especies que
hemos encontrado en los análisis genéticos.
Sorprendentemente, y contrario al análisis del olor, no pudimos encontrar un
genotipo distinto deO. bilunulataen el análisis genético mediante el uso de AFLP (Fig.6).
La mayoría de las plantas tenían el genotipo deO. lupercaliso el genotipo deO. fabrella.
Esto contrasta fuertemente con el olor floral distintivo y la morfología de las flores de
O. bilunulataque hemos encontrado.
Figura 5Gráficos de dispersión de análisis de función discriminante de hidrocarburos activos GC-EAD

en el olor floral deOphrys lupercalis, O. bilunulatayO. fabrella (de Stökl et al.2009) (f1: 77,6 %, w2¼
535.9,d.f.¼15,pag <0,001; f2: 19,2%,w2¼169.8,d.f.¼8,pag <0,001). (a)Muestras agrupadas por
especies. (b)Flores deO. bilunulataatractivo para los machos marcados deA. flavipes
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 Algaida CA CF C CPW CPNCPS Mir S'Aranjassa SoSe C'an Picafort Sur S'Aranj. Algaida Andratx C PM S S'Aracco SV
O.bilunulata o.fabrella O.lupercalis
Intermedio
Figura 6Resultado del análisis de estructura (de Stökl et al.2009). Las barras apiladas muestran la
probabilidad de que cada plantaO. lupercalis, O. bilunulatayO. fabrellaprocedente de una de las tres
supuestas especies (barras azules O. lupercalis, barras amarillas O. bilunulata,ybarras rojas O.
fabrella).Las muestras se ordenan por especie y población.Californiacala agulla,FCcala figuera,C
Capdella,CPWCan Picafort Oeste,NPCCan Picafort Norte,CPSCan Picafort Sur,MirMirador,SoSeHijo
Severa, PMPlayas de Mallorca,SSa Grembla,SVSon Viguet.piso intermedioFlores con una morfología
floral intermedia entreO. bilunulatayO. lupercalis
A partir de los datos genéticos, no podemos decir si la situación actual resulta de la fusión
o divergencia de especies. De hecho, los datos se pueden interpretar de dos maneras
diferentes. En primer lugar, la hibridación entre las especies es atribuible a los ramos de
olores similares de las especies y al solapamiento de los períodos de floración. Los distintos
fenotipos de la especie se mantienen mediante la selección de los polinizadores. Si la
hibridación no es completamente compensada por la presión selectiva de los polinizadores,
una especie finalmente desplazará a la otra. En segundo lugar, el proceso de especiación
todavía está en marcha, por lo que una especie se está separando de la otra. La selección por
parte de los polinizadores podría crear diferencias en el ramo de olores que aún no están
representadas en la estructura genética.
En el caso deO. lupercalisyO. bilunulata,puede excluirse un proceso de especiación que se está
produciendo actualmente, ya que ambas especies no solo se encuentran en Mallorca, sino que
también están muy extendidas por todo el Mediterráneo (Delforge2006).O. lupercalises poco
probable que se haya separado deO. bilunulataen Mallorca con este proceso de especiación dando
como resultado la misma morfología floral y el mismo olor floral que en las poblaciones deO.
lupercalisen otra parte.
En el caso deO. bilunulatayO. fabrella,ambas explicaciones son plausibles.
O. fabrellaes endémica de las Islas Baleares (Delforge2006) y, por lo tanto, lo más probable es
que se separen de uno de los otrosOfrisespecies que coexisten en las Islas Baleares. La
taxonomía clásica basada en caracteres florales la ubica cerca deO. bilunulata (Paulus y
Ayasse, inédito). Además, el resultado de nuestro análisis de los no hidrocarburos sugiere una
relación más estrecha conO. bilunulataque aO. lupercalis (Stökl et al.2009). Así consideramos
queO. fabrellaha evolucionado, posiblemente incluso simpátricamente, desde la floración
tardíaO. bilunulataplantas reclutando un nuevo polinizador, A.Fabrella.La división en dos
especies está casi completa en el fenotipo del olor, pero no se ha completado a nivel genético,
y es probable que los retrocruzamientos contribuyan al flujo de genes en curso. Sin embargo,
no podemos excluir queO. fabrella ha evolucionado de manera diferente y ahora se hibrida
conO. bilunulata.
4 Estudio de caso 3: Especiación y origen evolutivo de dos

especies endémicas simpátricas,O. chestermanii yO.
normanii,en Cerdeña
O. normaniiMadera yO. chestermaniiGölz y Reinhard ocurren en simpatría, son

endémicas de Cerdeña (Baumann et al.1995; Paulus y Gack1995) y son polinizados
por machos de la especie de abejorro parásito socialbombus vestalis Geoffroy
1785, que elimina los polinios en ambas especies con la cabeza. Esto contrasta con
la situación en otras especies simpátricas deOfriscon el mismo polinizador donde el
aislamiento reproductivo está asegurado por una barrera mecánica atribuible a la
diferente ubicación de los polinios en el cuerpo del polinizador (Agren et al. 1984;
Paulus y Gack1990).
El origen de la especie deO. normaniiyO. chestermanii,como su atribución taxonómica, es
controversial. Con base en las similitudes morfológicas en los rasgos de las flores,
O. chestermaniise ha atribuido a laO. bornmuellerigrupo (Delforge2006), que
también está representada en Cerdeña por otra especie endémica,O. annae
Devillers-Terschuren & Devillers. En cambio, según la morfología de la flor,
O. tenthrediniferaWilldenow, que está muy extendido en la cuenca del Mediterráneo, se
considera una especie estrechamente relacionada conO. normanii (Paulus y Gack1995).
O. tenthrediniferaes común en Cerdeña, donde su polinizador local esEucera nigrilabris
Lepeletier 1841 según lo informado por Paulus y Gack (1995).
Con base en los rasgos morfológicos de las flores,O. normaniise ha sugerido que es
un híbrido de primera generación entreO. chestermaniiyO. tenthredinifera (Madera
1983; Bauman et al.1995). Sin embargo,O. normaniilas poblaciones son abundantes en
comparación con las especies progenitoras. Por lo tanto, Paulus y Gack (1995) han
propuesto queO. normaniies una especie hibridógena o se deriva directamente deO.
tenthredinifera.
Investigar el origen evolutivo deO. normaniiyO. chestermanii,realizamos pruebas de
comportamiento con maniquíes inodoros deB. Vestalishembras que habían sido impregnadas
con extractos de labelo de los tresOfrisespecies.O. chestermanii yO. normaniiextractos fueron
muy atractivos para los machos deB. Vestalis, mientrasO. tenthrediniferaLas muestras rara vez
provocaron cópulas en los machos (Gögler et al.2009). Dado que los eventos
pseudocopulatorios son necesarios para eliminar los polinios y transferirlos a otra flor, y dado
que una baja tasa de polinización es generalmente la regla enOfris (Ayase et al.2000), la
probabilidad de polinización cruzada entre
O. chestermaniiyO. tenthrediniferapor machos deB. Vestalises bajo y, en consecuencia,
también lo es la oportunidad de hibridar. Además, las pruebas de polinizadores realizadas por
Paulus y Gack (1995) han demostrado queO. chestermaniino es atractivo para los hombres de
Eucera nigrilabris.Estos hallazgos rechazan rotundamente la hipótesis de que
O. normaniies un híbrido actual.
En otra serie de pruebas de experimentos de comportamiento con fracciones polares y no
polares deO. normaniiyO. chestermaniiLos extractos de labelo, los alcoholes, los ésteres y los ácidos
grasos, es decir, los compuestos polares, han resultado desempeñar un papel importante en la
atracción deB. Vestalishombres (Gögler et al.2008). Un análisis de conglomerados realizado
con compuestos polares activos GC-EAD ha demostrado que ambas especies atraen
polinizadores masculinos con los mismos ramos de olor (Gögler et al.2009).O. tenthredinifera
produce los mismos compuestos pero difiere de estas dos especies en la composición del
compuesto de olor (Fig.7).La ausencia de atractivo deO. tenthrediniferaa
B. Vestalismachos se basa en las diferentes cantidades relativas de los mismos compuestos. Hasta la
fecha, rara vez se ha identificado que los compuestos polares desempeñen un papel enOfris
atracción de polinizadores (Ayasse et al.2003) y, en las especies más investigadas, se ha informado
que los hidrocarburos estimulan el comportamiento de apareamiento de los machos (Schiestl et al.
2000; Stokl et al.2005,2007; Vereecken et al.2007).
Un estudio anterior (Stökl et al.2005) compararon los compuestos florales de varios
andreñaespecies polinizadas deOfrisy descubrió que la similitud de los ramos de olor de los
volátiles florales sin función en la atracción de polinizadores refleja la relación filogenética de
las especies. Por lo tanto, realizamos un análisis de conglomerados con compuestos florales
no involucrados en la atracción de polinizadores. Los resultados mostraron claramente una
alta similitud en las proporciones relativas de volátiles entreO. normanii yO. tenthredinifera,
mientrasO. chestermaniiyO. normaniimuy diferente (Fig.7). Este resultado argumenta en
contra de la idea de un origen hibridogénico deO. normanii y se correlaciona bien con los
resultados recogidos en el análisis genético de poblaciones con marcadores AFLP. DesdeO.
chestermaniifue descrita originalmente como una subespecie de
O. holoserica (Golz y Reinhard1990), hemos incluido, en nuestros análisis genéticos, muestras
deO. annae,la segregación de Cerdeña de la generalizadaO. holoserica. Similitud genética en
un análisis de conglomerados basado en un análisis de coordenadas principales
Figura 7Análisis de función discriminante de (a)Compuestos polares activos de EAD y (b)compuestos

no activos (de Gögler et al.2009). El DFA realizado con compuestos polares activos EAD (a) muestra
una superposición entreO. chestermaniiyO. normanii,mientrasO. tenthrediniferase separa de estas
dos especies. Las dos primeras funciones explicaron el 76,7% y el 23,3% de la varianza total (f1:w2¼
89.022,d.f.¼8,pag <0,001; f2:w2¼24.784,d.f.¼3,pag <0,001). En un DFA con compuestos no activos (b)
la primera función, que explica el 93,7% de la varianza, separa
O. chestermaniideO. normaniiyO. tenthredinifera (f1:w2¼325.497,d.f.¼18,pag <0,001; f2:
w2¼68.056,d.f.¼8,pag <0.001)
realizado con datos AFLP (Fig.8) indica una estrecha relación entre
O. normaniiyO. tenthrediniferay una clara separación deO. chestermanii yO. annae.
Un análisis filogenético realizado con dos regiones de plástidos diferentes ha
confirmado los patrones de parentesco genético recopilados con marcadores AFLP
(Gögler et al.2009).
Con respecto al origen evolutivo deO. normaniiyO. chestermanii,nuestros resultados de
experimentos de comportamiento y de análisis químicos y genéticos han demostrado que
ambas especies evolucionaron independientemente de dos ancestros diferentes y
convergieron en el mismo polinizador al producir los mismos ramos de olor de compuestos
polares. La génesis deO.normaniidesde elO. tenthrediniferaclado, como el deO. chestermanii
desde elO. annae-O. holoricaclado, podría haber sido el resultado de cambios locales en los
ramos de olores que causaron la atracción de un nuevo polinizador disponible localmente,
comoB. vestalis.Este cambio de polinizador actúa como una barrera de aislamiento hacia los
miembros relacionados del mismo clado (O. tenthredinifera yO. annae–O. holoserica,
respectivamente) y ha ocurrido en Cerdeña donde
O. normaniiyO. chestermaniirepresentan especies endémicas. El cambio climático podría
haber causado cambios en los períodos de floración y actividad de los machos del nuevo
polinizador en Cerdeña y puede haber sido la razón de la atracción de un nuevo
polinizador.
A pesar de compartir polinizadores, ocurrencia simpátrica y períodos de floración
superpuestos, no tenemos indicaciones de flujo de genes entre estas dos especies (Gögler
Figura 8Análisis de coordenadas principal realizado con las dos primeras coordenadas basado en
datos AFLP (de Gögler et al.2009). La coordenada 1 separaO. chestermaniiyO. annaedeO. normanii y
O. tenthredinifera.Las dos primeras coordenadas explican el 37,05% y el 9,91% de la varianza
et al.2009). Estudios adicionales sobre las barreras antes y después del apareamiento podrían
revelar los mecanismos de esas barreras que impiden por completo el desarrollo de híbridos
entreO. chestermaniiyO. normanii.
5. Conclusiones
En el género de orquídeas sexualmente engañosoOphrys, FloridaEl olor oral es un factor

clave en la atracción de los polinizadores y, al mismo tiempo, representa una barrera de
aislamiento precigótica entre las especies simpátricas (Kullenberg1961; Paulus y Gack
1990; Scopece et al.2007). La combinación de experimentos de comportamiento y
análisis químicos, electrofisiológicos y genéticos de población que hemos utilizado ha
proporcionado una serie adecuada de métodos para describir el papel de la variación
del olor en el aislamiento de especies, la especiación ecológica e incluso la distinción de
especies.
Nuestras investigaciones han demostrado que los cambios menores en los aromas florales
pueden ser la fuerza impulsora de los cambios de polinizadores y los eventos de especiación. Los
datos comparativos de nuestros estudios en Cerdeña y Mallorca han demostrado que los machos de
todas las especies deandreñaque hemos estudiado se sienten atraídos porOphrys flores por el
mismo conjunto de hidrocarburos (Schiestl et al.1999; Schiestl y Ayasse2002; Stokl et al. 2007,2008,
2009) que involucra varios alquenos que se cree que tienen una función clave en la atracción de
polinizadores enandrena-polinizadoOfrisespecies (Schiestl y Cozzolino2008). Esta especificidad
basada en el ramo de la atracción de polinizadores fue y es una condición previa importante para los
procesos de especiación, incluida la especiación híbrida en elOphrys fusca‐luteagrupo de especies
(Stökl et al.2008,2009). Sin embargo, la especiación híbrida también puede conducir al
desplazamiento de especies por parte de la población híbrida (Stökl et al.2008).
EnOfrisy otras orquídeas sexualmente engañosas, la adaptación a un nuevo nicho de polinizador,

principalmente mediada por la variación del aroma floral, puede causar directamente el aislamiento
por selección disruptiva (Waser y Campbell2004). En el sistema de polinización altamente específico,
se ha demostrado que los polinizadores aprenden y evitan las flores (Ayasse et al.2000) o lugares con
flores (Peakall1990). Por lo tanto, las plantas individuales pueden competir por los machos
polinizadores, con una selección dependiente de baja frecuencia que posiblemente evite esta
habituación y brinde una ventaja a los fenotipos de olores raros que, en combinación con otros
factores ecológicos, como un cambio en el período de actividad de los polinizadores potenciales,
podrían reclutar nuevos polinizadores.
Si las diferencias florales que afectan la atracción de polinizadores y provocan el aislamiento previo al
apareamiento entre pares de especies están controladas por uno o unos pocos loci de rasgos cuantitativos
principales, las nuevas especies pueden evolucionar rápidamente (Coyne y Orr2004). EnOfrisespecies que
atraen a sus polinizadores con una mezcla de hidrocarburos, los alquenos con ciertas posiciones de doble
enlace son cruciales en la atracción de polinizadores específicos y el aislamiento de especies (Mant et al.2005
). Los genes que influyen en la biosíntesis de un conjunto de desaturasas pueden estar involucrados en la
regulación de rasgos importantes para el aislamiento mediado por polinizadores (Schl€uter y Schiestl2008).
En estudios futuros, se deben investigar las bases moleculares de los rasgos que atraen a
los polinizadores y se deben identificar los genes candidatos que subyacen al aislamiento
floral. el investigadoOfrislas especies que usan hidrocarburos para atraer polinizadores han
sido bien estudiadas y son candidatas para este tipo de análisis. Sin embargo, no debemos
sacar conclusiones generales basándonos únicamente en este grupo deOfris especie y
también debe investigar otras especies comoO. normaniiyO. chestermanii,en el que los
productos químicos distintos de los hidrocarburos desempeñan un papel en la atracción de
polinizadores y en el que, por lo tanto, se puede esperar un mecanismo diferente de variación
del olor y cambio de polinizador (Gögler et al.2009). Por ejemploO. holoserica,una de las
especies raras que atrae a dos polinizadores diferentes, la abeja de cuernos largosEucera
longicornisy el escarabajoPhyllopherta horticola,podría estar en camino de cambiar su
polinizador. En esta especie, se podría producir un cambio de polinizador cambiando la
biosíntesis de compuestos cualitativamente diferentes en lugar de cambiar los patrones de los
mismos compuestos. MayoríaOfrisespecies producen cientos de compuestos químicos (Borg-
Karlson1990; Erdmann1996) y, por lo tanto, tienen el potencial evolutivo para cambiar de
polinizadores, si es necesario.
AgradecimientosAgradecemos a Pierluigi Cortis, Claudia Gack, Cesario Giotta, Manfred Kalteisen,

Hannes Paulus, Marcello Piccitto y Antonio Scrugli por ayudarnos a recolectar material vegetal.
También agradecemos a Walther Vogel y G.€unter Assum, Instituto de Genética Humana,
Universidad de Ulm, Philipp M. Schl€uter y Tod F. Stuessy, Departamento de Botánica Sistemática y
Evolutiva, Universidad de Viena y Salvatore Cozzolino, Departamento de Biología Estructural y
Funcional, Universidad de Nápoles por su generoso apoyo y colaboración en el análisis genético. Se
agradece a Wittko Francke, Dirk Erdmann, Claudia Schulz y Robert Twele, Instituto de Química
Orgánica de la Universidad de Hamburgo, por la elucidación de la estructura y la síntesis de
compuestos químicos. Julia Gögler recibió el apoyo de FAZIT-Stiftung. El apoyo financiero fue
proporcionado por el programa prioritario SPP 1127 (AY12/1-1, AY12/1-2) de la DFG.
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Genética de la población de la especiación e
inferencia demográfica bajo la subdivisión de la
población: conocimientos de estudios sobre tomates
silvestres (Solanumsecta.Lycopersicon)
Wolfgang Stephan y Thomas St.€adler
AbstractoLos estudios de secuenciación multilocus que evalúan patrones de polimorfismo de

nucleótidos dentro y entre especies estrechamente relacionadas brindan información valiosa
sobre los procesos evolutivos involucrados en la divergencia de especies. Hemos empleado el
marco analítico de la genética de poblaciones divergentes para probar modelos de
especiación en dos especies de tomates silvestres (cladoLycopersicon).Sin embargo, todas las
implementaciones actuales de modelos de divergencia asumen panmixia dentro de especies
ancestrales y existentes, lo que introduce sesgos de magnitud potencialmente grande, según
el esquema de muestreo empleado en los estudios empíricos. Además, nuestras simulaciones
coalescentes de muestras de poblaciones en expansión subdivididas confirman que, excepto a
tasas de migración muy altas, el muestreo de poblaciones locales no es equivalente al
muestreo de poblaciones panmícticas, con implicaciones para estudios que abarcan desde
drosófilaa humanos. Dentro de las limitaciones impuestas por las complejidades del proceso
de coalescencia en poblaciones subdivididas que no se tienen en cuenta en los modelos de
divergencia actuales, encontramos evidencia de especiación reciente (-0,55 millones de años)
de las dos especies de tomates silvestres, que con base en patrones de desequilibrio de
ligamiento ha ocurrido bajo el flujo de genes residuales.
W. Stephan (*)
Departamento de Biología II, Sección de Biología Evolutiva, Universidad de Munich (LMU),
Grosshaderner Strasse 2, 82152 Planegg-Martinsried, Alemania
correo electrónico: stephan@bio.lmu.de
calle t€adler
ETH Zurich, Instituto de Biología Integrativa, Genética Ecológica de Plantas, Universidad€atstrasse
16, 8092 Zúrich, Suiza
correo electrónico: thomas.staedler@env.ethz.ch

120 W. Stephan y T. St.€adler
1 Introducción
Los mecanismos de divergencia de especies han sido polémicos durante mucho tiempo. La
importancia del aislamiento geográfico para facilitar la divergencia evolutiva como
consecuencia de la mutación y la deriva genética (o, además, la diferenciación adaptativa) se
reconoció pronto, y el proceso de especiación alopátrica no genera controversia en términos
teóricos (Coyne y Orr2004, y referencias en el mismo). Sin embargo, si el flujo génico residual
caracterizó la divergencia de las especies incipientes, los modos otrodebe invocarse la
especiación alopátrica estricta, y esto invariablemente requiere la selección natural como uno
de los factores que subyacen a la divergencia de las especies. En principio, la divergencia bajo
el flujo de genes residuales puede proceder en simpatría o en condiciones parapátricas, es
decir, las poblaciones geográficamente adyacentes pueden estar sujetas a una selección
direccional que les confiere incidentalmente aislamiento reproductivo (Endler1977; Turelli et
al.2001). Un período inicial de divergencia en la alopatría puede preceder al contacto
posterior, lo que permite el flujo de genes y, por lo tanto, posiblemente la selección directa de
barreras interpoblacionales más fuertes ("refuerzo" del aislamiento reproductivo; Rice y
Hostert1993; Coyne y Orr2004). Algunos investigadores postulan que la hibridación
interespecífica y el flujo de genes posteriores a la divergencia después del contacto secundario
pueden promover nuevas combinaciones de genes ventajosas en poblaciones de ascendencia
mixta, lo que tal vez contribuya a la divergencia adaptativa y la especiación (p. ej., Seehausen
2004; Mazo2005; arnold2006).
Las secuencias de ADN multilocus recolectadas dentro y entre especies estrechamente
relacionadas son útiles para caracterizar el proceso de especiación, ya que contienen una gran
cantidad de información histórico-demográfica y son particularmente informativas cuando se
consideran en el marco de los modelos genealógicos. Como una extensión de los
procedimientos de genética de poblaciones a nivel de especie, el marco analítico de la
genética de poblaciones de divergencia (DPG) abarca modelos basados en coalescencia para
inferir atributos históricos de divergencia de linaje de un ancestro común (p. ej., Wakeley y Hey
1997; Wang et al.1997; Kliman et al.2000). El enfoque DPG se adapta a la naturaleza
estocástica de la clasificación de linajes y, por lo tanto, a la segregación (que disminuye
gradualmente) del polimorfismo ancestral compartido en las especies descendientes, a
medida que se diferencian más a través de la deriva genética y la acumulación de nuevas
mutaciones. Una restricción notable de incluso los procedimientos de inferencia
matemáticamente más sofisticados implementados en los programas DPG actuales (Nielsen y
Wakeley2001; hola y nielsen2004,2007) es la suposición de apareamiento aleatorio dentro de
las especies ancestrales y descendientes (existentes), es decir, el fenómeno posiblemente
importante de la subdivisión de la población es virtualmente ignorado.
En nuestro programa de investigación, aplicamos el enfoque DPG a los tomates silvestres,
un pequeño clado monofilético dentro del gran géneroSolano (solanáceas). Dependiendo de
las definiciones taxonómicas, consta de 9 a 13 especies (Spooner et al.2005; Peralta et al. 2008
), de las cuales la única especie cultivada esS.lycopersicum.El rango geográfico de los tomates
silvestres se extiende desde el centro de Ecuador hasta el norte de Chile, principalmente a lo
largo de las laderas occidentales de los Andes y la región costera del noroeste de América del
Sur (Moyle2008). Aunque el clado tomate es relativamente pequeño, abarca un
Genética de poblaciones de la especiación e inferencia demográfica 121
amplia gama de gradientes climáticos, biogeográficos y ambientales, que van desde los
desiertos templados hasta las selvas tropicales húmedas. Cada especie parece mostrar un
patrón característico de distribución geográfica dentro de esta variación ambiental (Rick1979).
Se han identificado muchos rasgos que son supuestas respuestas adaptativas al medio
ambiente, lo que sugiere que las condiciones ecológicas abióticas juegan un papel importante
en la evolución y especiación de estas especies (Nakazato et al.2008; moyle 2008). Como
consecuencia, las especies de tomate silvestre exhiben una gran variación morfológica,
fisiológica, de historia de vida y de sistema de apareamiento.
Aunque las especies de tomate existentes son fenotípicamente distintas, la evidencia molecular
sugiere que son relativamente jóvenes. Estudios previos de tomates silvestres usando una variedad
de marcadores moleculares generalmente han encontrado bajos niveles de diferenciación entre
especies (p. ej., Stephan y Langley1998; Baudry et al.2001), lo que implica una divergencia bastante
reciente del clado del tomate. En particular, nuestro primer estudio integral de ADN multilocus de
tres especies autoincompatibles demostró patrones de variación (incluido un gran número de
polimorfismos compartidos además de diferencias fijas) que sugirieron la idoneidad de este clado
como modelo de especiación de plantas bajo el marco DPG (St.€Adler et al.2005). Sin embargo, este
estudio tuvo la limitación de que solo se utilizaron muestras de población local única por especie,
ignorando así posibles complicaciones debido a la subdivisión de la población. La subestructura de la
población y sus implicaciones para la inferencia histórica y demográfica se convirtieron en un foco
importante de nuestra investigación posterior sobre los tomates silvestres, lo que requirió la
consideración de esquemas de muestreo y sus consecuencias genealógicas. Además de revelar más
detalles del proceso de especiación, esta línea de trabajo ha proporcionado conocimientos de
importancia general para muchos estudios evolutivos y de genética de poblaciones que hasta ahora
se han basado en la suposición poco realista del apareamiento aleatorio dentro de las especies.
2.1 Muestreo de población y loci secuenciados
Para el estudio más detallado de la especiación en el clado del tomate hasta la fecha, nos
concentramos en dos especies autoincompatibles que están muy estrechamente relacionadas:
la ampliamente distribuida Solanum peruvianumy la especie de tomate más austral,S. chilense
(Higo.1; Calle€Adler et al.2005,2008). Las dos especies morfológicamente diferenciadas tienen
áreas de distribución parcialmente superpuestas en las áridas regiones costeras del sur de
Perú y el norte de Chile, al oeste de la división continental (Rick1979,1986; moyle2008).
Recientemente se propuso reconocer cuatro especies en lo que tradicionalmente se
consideraba polimórfico.S. peruvianum (Spooner et al.2005; Peralta et al.2008). De acuerdo
con esta proposición, nuestro muestreo de tres poblaciones naturales en el centro y sur de
Perú (ver más abajo) abarcaría tanto la nueva entidadS. corneliomulleriy
S. peruvianumen sentido estricto. Sin embargo, no parece haber ni datos moleculares ni
resultados cruzados que validen la división propuesta deS. corneliomulleri deS. peruvianums.
calle; por lo tanto, tratamos todas nuestras nuevas muestras comoS. peruvianum.
Figura 1Detalles de unS. peruvianumplanta de la población de Canta (a,arriba),contrastado con un

S. chilenseplanta de la población Moquegua (b,abajo).Nótese el cono curvo de la antera y el tallo más peludo
enS. peruvianumversus el cono recto de la antera y la forma de crecimiento erecto enS. chilense. El hábitat
de la población de Canta es mésico mientras que el de la población de Moquegua es extremadamente árido;
fotografías digitales de Gabriel Clostre
No hay evidencia publicada de hibridación interespecífica entreS. chilense yS. peruvianumen

sus hábitats naturales, en concordancia con fuertes barreras poscigóticas descubiertas en
estudios experimentales de cruzamiento (Rick y Lamm1955; Almiar 1979). Sin embargo, la
cantidad limitada de datos moleculares disponibles para las poblaciones naturales no descarta
niveles bajos o moderados no detectados de hibridación interespecífica.
Seis de las ocho poblaciones utilizadas en nuestro estudio fueron muestreadas
en el sur y centro de Perú en mayo de 2004 (Fig.2): elS. chilenselas muestras son de
Quicacha, Moquegua y Tacna (norte a sur), y las deS. peruvianumde Canta, Nazca y
Arequipa. Para las otras dos poblaciones, el material vegetal se obtuvo del Tomato
Genetics Resource Center de la Universidad de California Davis (S. chilense de
Antofagasta, Chile, yS. peruvianumde Tarapacá, Chile). A excepción de la población
de Canta (S. peruvianum)y la población de Antofagasta
Figura 2Rangos geográficos deS. peruvianum (gris oscuro)yS. chilense (cruzado)y ubicaciones aproximadas
de las poblaciones muestreadas.S. peruvianumpoblaciones de sur a norte (diamantes blancos):Tarapacá,
Arequipa, Nazca, Canta;S. chilensepoblaciones de sur a norte (puntos negros):Antofagasta, Tacna,
Moquegua, Quicacha. Tenga en cuenta la región de simpatía en el extremo norte de Chile y el sur de Perú. el
anteriorS. peruvianumsensu lato se extiende hasta el norte de Perú, pero la mayoría de las poblaciones al
norte de ca. 9–10-La latitud S ahora se consideran especies separadas
S. arcano.Reimpreso, con autorización, de St.€Adler et al. (2008); derechos de autor en poder de la Sociedad de
Genética de América
(S. chilense),todas las muestras son de regiones de simpatía con las otras especies, aunque
esto puede no ser cierto a escala local. La población de Canta, sin embargo, está muy al norte
de laS. chilenserango de especies, y la población de Antofagasta está muy al sur de laS.
peruvianumdistribución. Nuestro muestreo de varias poblaciones genuinas representa una de
las dos principales estrategias de muestreo que se han defendido (en su mayoría) con
diferentes propósitos, pero sostenemos que las consecuencias y limitaciones de un esquema
de muestreo dado no se han entendido lo suficiente (ver más abajo).
Secuenciamos un subconjunto de los loci utilizados en nuestras encuestas iniciales (St€
Adler et al.2005; Roselio et al.2005); CT066, CT093, CT166, CT179, CT198, CT208, CT251 y CT268
son ocho marcadores anónimos de cDNA de copia única mapeados. Sin embargo,
encontramos evidencia de evolución no neutral en el locus CT208 donde se detectó un patrón
clinal de variación enS. chilense,posiblemente reflejando un barrido selectivo incompleto
(Arunyawat et al.2007). Debido a que la inclusión de loci bajo selección positiva puede inducir a
error a la inferencia histórica, nuestros análisis DPG abarcan solo los siete loci restantes que
no muestran desviaciones obvias de las expectativas neutrales. Los datos de la secuencia
nuclear se obtuvieron de 5 a 7 plantas por población (10 a 14 alelos completamente resueltos),
y la longitud de la secuencia concatenada en los ocho loci es de aproximadamente 10,3 kb por
"alelo". Todos los procedimientos de laboratorio y métodos de población.
Los análisis de datos genéticos se proporcionan en detalle en otro lugar (Arunyawat et al.2007; Calle€
Adler et al.2008).
2.2 El modelo de especiación de aislamiento
Para analizar principalmente los aspectos demográficos de la divergencia del linaje de una
población ancestral común, usamos específicamente el modelo de especiación de aislamiento
de Wakeley y Hey (1997), en adelante llamado modelo WH (Fig.3). Este modelo simple de
especiación alopátrica asume que una especie panmíctica ancestral dio lugar a dos especies
existentes en el momentoten el pasado (t¼2Utah,dóndetes el número de generaciones desde
la especiación ytula tasa de mutación por generación por región genómica total secuenciada).
La especie ancestral se caracteriza por el parámetro de mutación poblacionalyAy las dos
especies existentes por los parámetrosy1yy2, respectivamente. Los parámetros de mutación de
la población están dados cada uno por 4nortemitu,dóndenortemi
denota el tamaño efectivo de la población. Por lo tanto, se supone que el tamaño efectivo de la
población es constante dentro de las especies, pero se permite que cambie en el momento de la
especiación. El modelo asume además una evolución neutral de los polimorfismos moleculares y
ningún flujo de genes posterior a la divergencia inicial de especies. Como lo muestran Wakeley y Hey
(1997), las expectativas de las cantidades observablesSx1,Sx2,Ss, ySF(polimorfismos exclusivos para las
especies 1 y 2, polimorfismos compartidos y diferencias fijas, respectivamente) son funciones de los
cuatro parámetros del modelo. Por lo tanto, al equiparar las observaciones con las expectativas, su
algoritmo basado en momentos produce estimaciones de parámetros a partir de datos de múltiples
locus, y la bondad de ajuste con el modelo se evalúa a través de simulaciones coalescentes que
implementan las tasas de recombinación específicas de locus estimadas a partir de los datos
empíricos (ver St.€Adler et al.2008).
La mayoría de las aplicaciones actuales del enfoque DPG ahora usan los modelos de
"aislamiento con migración" más ricos en parámetros (IM e IMa; Hey y Nielsen2004,2007) que
incorporan el flujo génico interespecífico bidireccional como parámetros a estimar
Fig. 3Esquema del modelo de aislamiento Wakeley-Hey de divergencia de especies. Dos especies
descendientes divergen de un ancestro común en el momentoten el pasado, sin suponer un flujo de genes
entre poblaciones desde el inicio de la divergencia. Los parámetros de mutación de la población (y1,y2,yA,
respectivamente) deberían reflejar principalmente las diferencias en el tamaño efectivo de la población a
largo plazo entre las especies, ytse estiman a partir de datos de secuencias multilocus (ver texto). La
posibilidad de introgresión se indica mediante “¿metro?".Modificado después de Wakeley y Hey (1997)
de los datos de la secuencia multilocus, en lugar de asumir la divergencia en completo

aislamiento. Sin embargo, los algoritmos IM/IMa comparten la característica indeseable de no
poder acomodar datos recombinados dentro de loci; abundante evidencia de altos niveles de
recombinación en la historia de nuestras secuencias de tomate silvestre (Arunyawat et al.2007;
Calle€Adler et al.2008) nos ha llevado a "preferir" el modelo WH como nuestro marco analítico,
en lugar de limitar los análisis de datos de secuencia a tramos cortos de bloques
aparentemente no recombinantes.
2.3 Esquemas de muestreo, subdivisión de la población y extensiones

de rango
Motivados por nuestro hallazgo de que los espectros de frecuencia del sitio (SFS) de las
mutaciones segregantes están sistemáticamente sesgados hacia variantes de baja frecuencia
en muestras "agrupadas" en comparación con los promedios de muestras de población local
(denominado "efecto de agrupación"); Arunyawat et al.2007), iniciamos una serie de
simulaciones coalescentes diseñadas para evaluar el impacto de diferentes esquemas de
muestreo en el SFS bajo la subdivisión de la población y la expansión histórica de la población
total. Una muestra agrupada se refiere a todas las secuencias obtenidas de la misma especie
tratada como una sola entidad, en lugar de (en nuestro caso) cuatro muestras de población
separadas que representan muestras "locales". En consecuencia, el muestreo de varias
poblaciones por especie permite contrastar las características promedio de las muestras
locales y las de la muestra agrupada. El tercer esquema de muestreo ("disperso") se refiere a
secuencias únicas obtenidas de cada uno de los muchos demos y se sabe que produce
genealogías con propiedades similares a las de las poblaciones panmícticas (Wakeley1999,
2001; Wakeley y Aliacar2001). El efecto de agrupación parece estar generalizado en diversos
taxones, habiéndose encontrado en humanos (Ptak y Przeworski2002),drosófila (Piscina y
Aquadro2006), y varias especies de plantas (Ingvarsson2005; Arunyawat et al.2007; Möller et
al.2007); sin embargo, no se ha logrado una comprensión y un consenso genuinos en cuanto a
los procesos evolutivos subyacentes.
Debido a que interpretamos la observación común de tasas de Tajima más bajas/más negativas (
1989)Dvalores para muestras agrupadas, en comparación con muestras locales, como firmas
genealógicas de expansiones de población (Arunyawat et al.2007), nuestras simulaciones
coalescentes se centraron en el establecimiento de la estructura de la población algún tiempo ten el
pasado (es decir, antes del tiempotla población era panmíctica) con un aumento concomitante en el
tamaño total de la población. Este esquema debería ser plausible bajo la expansión del rango, como
lo ejemplifica la migración fuera de África por parte de humanos yDrosophila melanogaster,y la
subsiguiente colonización de áreas expansivas, o poblaciones de zonas templadas que se expanden
desde refugios glaciares, o después de un evento de especiación como el inferido para las dos
especies de tomates silvestres,S. peruvianumy
S. chilense.En concreto, utilizamos una versión modificada del programa de simulación
coalescente ms (Hudson2002) para simular muestras tanto en el modelo de isla como en la
estructura espacial bidimensional de trampolín, generalmente con 100 subpoblaciones
locales. Estas simulaciones abarcaron una amplia gama de tasas de migración entre
subpoblaciones, el momento del inicio de la estructura de la población y la expansión

simultánea, y la magnitud de la expansión general. Las muestras de tamaño 20 se
distribuyeron en 20 subpoblaciones elegidas al azar (muestreo "disperso"), cuatro
subpoblaciones (muestreo "agrupado") o se tomaron de una sola subpoblación
(muestreo "local"). Calculamos estadísticas de resumen promedio basadas en el SFS
(Tajima's Dy Fu y LiD)y evaluó el impacto conjunto de los esquemas de muestreo
simulados y la historia demográfica en estas estadísticas. Más detalles técnicos de estas
simulaciones se describen en St.€Adler et al. (2009).
3.1 Estimación de parámetros del modelo WH y el impacto de la

subdivisión de la población
Cuando todas las secuencias obtenidas paraS. peruvianumse comparan con todosS.
chilense secuencias (es decir, utilizando los datos agrupados para cada especie),
ninguno de los loci exhibe diferencias interespecíficas fijas, lo que atestigua su nivel muy
bajo de divergencia molecular. Esto, sin embargo, presenta problemas para el algoritmo
WH porque tanto las diferencias fijas como los polimorfismos compartidos son
necesarios para la estimación robusta de parámetros y las pruebas de bondad de ajuste
a través de simulaciones coalescentes. Para mejorar esta situación, contrastamos las
nueve combinaciones de pares interespecíficos de poblaciones de alta diversidad, así
como tres muestras agrupadas no arbitrarias (no más de dos muestras locales por
especie) que contenían altas proporciones (>85 %) de la especie en general diversidad de
nucleótidos y un mínimo de dos diferencias fijas. Dos características de los datos
multilocus caracterizan todas estas comparaciones de población interespecíficas:
A través de todas estas comparaciones interespecíficas (ya sea que se basen en poblaciones
individuales o muestras agrupadas), las estimaciones del tamaño de la población ancestral (yA) son
comparables a los de laS. chilensemuestras (y2), mientras que el tamaño efectivo deS. peruvianum (y1
) se estima que es aproximadamente el doble de grande. Como es habitual en otros estudios de este
tipo, las estimaciones de los parámetros WH tienen amplios intervalos de confianza. Un resultado
notable es que las estimaciones de tiempo de divergencia implican una divergencia muy reciente de
un ancestro común, en el rango de 0,22 a 0,40 unidades (¼S. peruvianum nortemigeneraciones).
Aunque las historias genealógicas de nuestras muestras violan la suposición del modelo de panmixia
dentro de la especie, las simulaciones coalescentes que implementan los niveles de recombinación
estimados no rechazaron el modelo simple de aislamiento de WH. Al resumir estos contrastes entre
los datos observados y las expectativas bajo el modelo WH, es evidente que nuestros datos se
ajustan sorprendentemente bien al modelo, lo que se debe principalmente a la distribución bastante
uniforme de las clases de sitios polimórficos en los loci (St.€Adler et al.2008).
Porque se ha sugerido un enfoque alternativo para estimar el tamaño de las especies
ancestrales y el tiempo de divergencia escalado para casos de divergencia muy reciente.
(es decir, falta de diferencias interespecíficas fijas; Wakeley y Hey1997), también calculamos el
número mínimo y promedio de diferencias de secuencia interespecíficas por pares, min (kyo) y
d12, respectivamente. A partir de los datos sumados sobre todos los loci, obtuvimos
estimaciones deyA¼91.7 yt¼51. Esta estimación alternativa deyAestá muy cerca de las
estimaciones convencionales de WH, mientras que la estimación alternativa det representa un
aumento de aproximadamente el doble sobre la mayoría de las estimaciones convencionales
de WH (St€Adler et al.2008). Por lo tanto, usando la estimación de la tasa de mutación neutral
de 5.1 10–9por sitio por año (Roselius et al.2005), el tiempo de divergencia de las dos especies
es probable -0,55 millones de años.
Una evaluación de estudios multilocus utilizando el enfoque WH sugiere que solo una
introgresión muy reciente o actual puede permitir el rechazo formal del modelo de aislamiento, lo
que hace que esta sea una prueba muy conservadora. Por ejemplo, varios estudios de DPG
multilocus pudieron rechazar el modelo de aislamiento debido a las grandes diferencias en los
patrones de polimorfismos compartidos y las diferencias fijas entre los loci, una firma atribuida al
flujo de genes interespecíficos reciente en algunas regiones del genoma, pero no en todas (p. ej.,
Machado et al.2002; Ramos-Onsins et al.2004). Sin embargo, a menos que los estudios multilocus
incluyan ambos tipos de loci, las proporciones similares de las categorías de sitios observadas en
todos los loci pueden indicar un buen ajuste del modelo de aislamiento, incluso bajo la
posdivergencia o el flujo génico interespecífico reciente en todos los loci, lo que enfatiza la
naturaleza muy conservadora de los criterios de bondad de ajuste. Como se señaló anteriormente,
las estimaciones demográficas bajo el modelo de aislamiento de WH implican una expansión
modesta de la población (o rango) paraS. peruvianumy un tamaño efectivo paraS. chilensesimilar a la
de la especie ancestral. Sin embargo, como discutimos a continuación, es probable que estas
estimaciones de la historia demográfica de WH estén sesgadas, ya que otros aspectos de los datos
multilocus brindan evidencia clara de la expansión de la población en ambos taxones. Estos sesgos
pueden ser causados conjuntamente por propiedades particulares de nuestro conjunto de datos
(falta de diferencias fijas) y las complejidades del proceso coalescente en poblaciones subdivididas
que no se tienen en cuenta en las implementaciones DPG actuales.
Wakeley (1999,2000,2001) introdujo la distinción entre la fase de “dispersión” y la de
“recolección” del proceso coalescente en poblaciones subdivididas. La breve fase de dispersión
rastrea la genealogía de una muestra local hasta que todos los linajes restantes (mirando
hacia atrás en el tiempo) se ubican en diferentes demes y se caracteriza por eventos locales de
fusión y migración a diferentes demes. La escala de tiempo de la fase de recolección
subsiguiente, mucho más larga, depende de la tasa de migración entre los demos y el número
y tamaño de los demos en la población total, en el sentido de que los linajes ancestrales solo
pueden unirse cuando ocupan el mismo demos. Debido a que solo las muestras dispersas
recolectadas bajo una estructura espacial de equilibrio de isla finita o de trampolín
bidimensional poseen propiedades genealógicas similares a las de las poblaciones
panmícticas (Wakeley2000,2001; Wakeley y Aliacar 2001; De y Durret2007), los estudios
empíricos que emplean otros que no sean un muestreo realmente disperso deben considerar
los efectos de la fase de dispersión que se manifestarían como desviaciones de la panmixia.
Nuestras muestras locales de alta diversidad contienen proporciones significativas de la

diversidad de nucleótidos de toda la especie (tres de cuatro muestras en ambosS. peruvianumyS.
chilense con >80% de diversidad de nucleótidos en toda la especiepag;Arunyawat et al.2007),
lo que sugiere que los eventos coalescentes locales durante la fase de dispersión son bastante
raros. Sin embargo, las muestras de la población local contienen proporciones sustanciales de
variantes de baja frecuencia "privadas" (en su mayoría singletons) que apenas contribuyen a la
diversidad de nucleótidos pero alimentan un gran aumento en el número de sitios de
segregación en las muestras agrupadas. En otras palabras, elyestimador que se basa en el
número de sitios segregantes (Watterson1975) aumenta notablemente al agrupar mientras
quepagsolo aumenta marginalmente. Las características reflejan la menor proporción
promedio de ramas externas en las genealogías de un solo demo y explican por qué TajimaD
tiende a ser más bajo/más negativo para las muestras agrupadas. Por lo tanto, existe
evidencia en nuestros datos de tomates silvestres de los efectos esperados de (1) subestimar
la diversidad dentro de las especies utilizando muestras de un solo demo, así como (2)
subestimar la divergencia entre especies al considerar muestras dispersas (Wakeley2000);
ambos son consecuencias de la distribución de la diversidad dentro y entre los demos locales
bajo la subdivisión de la población y el tamaño efectivo de la población generalmente más alto
en toda la especie bajo bajas tasas de migración (Wakeley2001; Pannell2003).
Previamente argumentamos que nuestras observaciones de tasas de Tajima significativamente
negativas Dy/o de Fu y Li (1993)DLos valores en muestras agrupadas solo pueden explicarse por la
expansión demográfica/de rango en ambas especies (Arunyawat et al.2007). Cuando el muestreo ha
sido local, se espera que las firmas de una expansión en toda la especie sean evidentes solo bajo
altas tasas de flujo de genes (Ray et al.2003); El uso de muestras de población agrupadas mejoraría la
detectabilidad de tales cambios demográficos históricos aproximadamente como una función de la
cantidad de demos sobre los cuales se distribuye la muestra total (St.€Adler et al.2009). Esto se deriva
de los principios genealógicos discutidos anteriormente, es decir, con niveles decrecientes de flujo de
genes, las genealogías de muestras locales se distorsionan debido a eventos coalescentes de fase de
dispersión que dan como resultado ramas externas cortas, mientras que la agrupación tiene efectos
equivalentes a agregar migrantes, es decir, individuos no relacionados. produciendo genealogías de
muestra con ramas externas más largas (Ray et al. 2003; De y Durret2007; Arunyawat et al.2007).
Claramente, las estimaciones de WH para ambas especies existentes (y1yy2) no reflejan la

marcada expansión inferida de otras características de los datos (ver arriba). Asumiendo que
el tiempo de expansión de ambas especies refleja su tiempo de especiación, parte de la
explicación podría ser que, dadas las bajas estimaciones deyo,no hay tanta información sobre
las especies descendientes en los datos como sobre su ancestro común, a diferencia de
tiempos de divergencia mucho más largos (Wakeley y Hey1997). Las inferencias demográficas
discrepantes también pueden explicarse en parte por nuestros hallazgos de simulación, ya
que el modelo WH trata cualquier muestra empírica como una de una población panmíctica y,
por lo tanto, solo capta señales atenuadas de expansión en muestras locales o agrupadas, lo
que lleva a estimaciones más pequeñas de una expansión. factor (ver más abajo; St€Adler et
al.2009). Otro factor que podría decirse que contribuye a subestimary1yy2en nuestros análisis
WH es la falta de diferencias fijas de nucleótidos en muchas comparaciones de muestras
agrupadas; esta falta de diferencias fijas también impidió la evaluación sistemática de
muestras multidema generadas aleatoriamente que, de otro modo, podrían haber mejorado
algunos de los sesgos inducidos por el muestreo.
Si bien esta restricción particular no se esperaría en las comparaciones de especies más
divergentes, incluso las muestras dispersas obtenidas de especies subdivididas no
satisfacer la suposición crítica de panmixia que subyace en todos los algoritmos DPG actuales,
como tiempo de divergenciatse espera que sea sistemáticamente subestimado. Estas
advertencias parecen subestimadas en los estudios empíricos; estudios de plantas recientes
utilizando el MIMAR (Becquet y Przeworski2007), WH o los modelos de divergencia IM/IMa
normalmente prestan poca atención a las consecuencias del diseño de muestreo y tienden a
interpretar las estimaciones de los parámetros inferidos al pie de la letra (p. ej., Zhang y Ge
2007; Slotte et al.2008; Estrasburgo y Rieseberg2008; Foxe et al.2009). Claramente, existe la
necesidad de modelos de especiación más realistas que tengan en cuenta explícitamente la
subdivisión de la población al extraer señales de la historia demográfica de las especies a
partir de datos de secuencia.
3.2 Evaluación del flujo génico posterior a la divergencia por

desequilibrio de ligamiento (LD)
Además de reflejar mutaciones verdaderamente ancestrales como se prevé en el modelo de

aislamiento, los polimorfismos compartidos entre taxones recientemente divergentes pueden surgir
a través de la introgresión posterior a la divergencia de especies, un proceso biológicamente
plausible bajo la especiación parapátrica o por contacto secundario después de alguna divergencia
en la alopatría. Machado et al. (2002) introdujeron una prueba de flujo de genes posterior a la
divergencia basada en patrones de LD entre sitios de segregación. En un escenario de flujo de genes,
la LD entre pares de polimorfismos compartidos en la especie receptora debería tender a ser positiva
(es decir, preponderancia de asociaciones SNP ancestrales-ancestrales y/o derivadas), y la LD entre
pares de sitios donde un miembro es un polimorfismo compartido y el otro exclusivo deberían
tender a ser negativos (es decir, preponderancia de asociaciones de SNP derivadas de ancestros).
Ambos efectos esperados pueden verse como consecuencia de un tiempo insuficiente para que la
recombinación erosione el LD (dado que la introgresión ocurrió después de la separación inicial de
las especies) en comparación con la situación en la que los polimorfismos compartidos representan
mutaciones verdaderamente ancestrales, es decir, aquellas que preceden a la especiación.
Al aplicar esta prueba usando simulaciones coalescentes bajo los parámetros de tiempo de divergencia y
demográficos de WH inferidos, encontramos que el locus CT066 exhibe valores de LD significativamente
altos para todas las comparaciones de muestras individuales y agrupadas entre ambas especies, y el locus
CT166 muestra valores de LD significativos o casi significativos para varios de los contrastes, lo que refleja un
LD más fuerte para un subconjunto de LD intragénico de lo esperado en condiciones de modelo de
aislamiento (St€Adler et al.2008). Estos resultados sugieren un flujo de genes interespecífico bidireccional
después de la divergencia inicial de las especies, mientras que no hay evidencia convincente de tal escenario
en los otros loci. Estas simulaciones coalescentes se ejecutaron con lo que probablemente son
subestimaciones del verdadero tiempo de divergencia, lo que hace que esta prueba sea conservadora, pero
los efectos en LD de expansiones demográficas más drásticas que las simuladas son más difíciles de
predecir. Además, nuestros resultados aparentemente incongruentes (fracaso en el rechazo de la
especiación por aislamiento debido al buen ajuste de la distribución multilocus de las cuatro clases de sitios
de segregación versus evidencia de flujo de genes posterior a la divergencia basado en patrones de
distribución intragénica)
LD) son fácilmente reconciliables, dado el comportamiento muy conservador de las pruebas de
bondad de ajuste y los diferentes aspectos de los datos considerados por cada enfoque.
Una segunda forma más cualitativa de detectar posibles rastros de introgresión pasada o
presente busca diferencias en la proporción de polimorfismos compartidos entre todos los sitios de
segregación entre las comparaciones de muestras interespecíficas alopátricas y simpátricas.
Nuestros datos indican que los polimorfismos compartidos generalmente están geográficamente
extendidos en ambas especies (mientras que muchos polimorfismos exclusivos están
geográficamente restringidos y en general son raros) y tienden a ocurrir en números equivalentes en
comparaciones alopátricas, lo que es inconsistente con las expectativas bajo una introgresión muy
reciente. Además, las señales genealógicas reveladas por la prueba basada en LD no se restringen a
regiones de simpatía actual, como contrastes interespecíficos que involucran a la Canta alopátrica (S.
peruvianum)y Antofagasta (S. chilense)las poblaciones también muestran evidencia de flujo de genes
posterior a la divergencia. Estas firmas geográficamente dispersas del flujo de genes posteriores a la
divergencia son consistentes con la introgresión y la posterior propagación a través de gran parte de
los rangos de las especies, ya sea a través de expansiones de rango posteriores a la especiación o
flujo de genes intraespecíficos (St.€Adler et al.2008). A diferencia de otros estudios DPG a gran escala
que encontraron el intercambio de haplotipos completos entre especies con rangos parcialmente
superpuestos (por ejemplo, Machado et al.2002; Ramos-Onsins et al.2004), nuestra evidencia de
introgresión es más sutil y más difícil de descubrir. Las implicaciones de haber encontrado evidencia
para un modelo de especiación de divergencia con flujo de genes son, quizás, también más
interesantes que para las especies que continúan intercambiando genes; para una discusión de los
patrones geográficos de aislamiento reproductivo entre estas especies y sus probables
implicaciones, ver St.€Adler et al. (2005,2008).
3.3 Espectros de frecuencias de sitio en muestras de poblaciones

subdivididas sin equilibrio
Usando simulaciones coalescentes, evaluamos tres esquemas de muestreo de secuencias

extraídas de poblaciones subdivididas en expansión bajo diferentes niveles de migración entre
demos locales; los tres esquemas de muestreo tienen ejemplos correspondientes en estudios
empíricos de diversidad de secuencias de ADN diseñados para inferir aspectos de la historia
demográfica y la selección natural a partir de estadísticas resumidas de SFS y/o patrones de
LD. Excepto por tasas de migración muy bajas (<0,5–1 inmigrantes por generación), estas
simulaciones confirmaron nuestra predicción cualitativa anterior de que se espera que la
combinación de varias muestras locales aumente la proporción de polimorfismos de baja
frecuencia en comparación con las muestras locales y que, por lo tanto, las muestras
combinadas se caracterizan por SFS que son intermedios (cuantificados por estadísticas como
Tajima'sDy Fu y LiD)entre las de muestras locales y dispersas (Arunyawat et al.2007; Calle€
Adler et al.2009). Esto se debe a que, en función de los niveles decrecientes de flujo de genes,
las muestras locales exhiben los efectos distorsionadores de los eventos coalescentes de fase
de dispersión, es decir, sus genealogías tienen longitudes de rama externa más bajas; este
efecto afecta en menor medida a las muestras agrupadas, dependiendo de la composición
exacta de dichas muestras.
Encontramos efectos del esquema de muestreo en genealogías de muestra hasta tasas de

migración muy altas, especialmente bajo fuertes expansiones en toda la especie. En otras
palabras, incluso con altas tasas de migración (por ejemplo, 25 inmigrantes por generación),
las muestras locales pueden no reflejar adecuadamente la demografía de toda la especie.
Nuestras simulaciones predicen un efecto de agrupación en una amplia gama de tasas de
migración, lo que implica una forma de probar la hipótesis nula de panmixia, es decir, que las
genealogías de las muestras locales son indistinguibles de las de las muestras dispersas. Entre
los pocos estudios publicados que han realizado análisis separados de muestras de población
local y la muestra agrupada que consta de varias muestras locales, Pool y Aquadro (2006)
demostró el efecto de agrupación en subsaharianosDrosophila melanogaster,al igual que
varios estudios en plantas (Ingvarsson2005; Arunyawat et al.2007; Möller et al. 2007) y
humanos (p. ej., Ptak y Przeworski2002). En todos estos casos, el SFS de las muestras
agrupadas se caracterizó por un exceso de variantes de baja frecuencia, lo que resultó en
(más) valores negativos de Tajima.Dvalores. Siempre que se tengan en cuenta las posibles
contribuciones de la selección purificadora al SFS, los resultados de nuestra simulación
respaldan la interpretación de que solo las expansiones globales y no los efectos de la
subdivisión de la población per se pueden generar una tasa de Tajima sustancialmente
negativa.Dvalores en muestras agrupadas (St€Adler et al.2009).
Puede parecer sorprendente observar el efecto de agrupación incluso en especies muy
móviles comoDrosophila melanogaster,proporcionando así una evidencia clara de las
desviaciones de panmixia en niveles aparentemente bajos de diferenciación de la población,
por ejemplo, según lo cuantificado porFCALLE. La impresión de bajos niveles de subestructura
de la población, sin embargo, proviene en gran medida de la interpretación clásica deFCALLE
como medida de diferenciación. Ya hemos explicado anteriormente cómo la "dinámica"
contrastante de la segregación de sitios por un lado y la diversidad de nucleótidos por otro
lado en muestras locales versus agrupadas puede explicar el efecto de la agrupación en el SFS
bajo niveles aparentemente bajos de subdivisión de la población. Además, esto también
destaca los peligros inherentes de equiparar bajosFCALLEestimaciones con niveles
intrascendentes de subdivisión de la población.
En el marco del modelo de alelos infinitos, Jost (2008) argumentó recientemente que FCALLE
no es una medida apropiada de diferenciación y señaló conceptos erróneos matemáticos que
subyacen al enfoque estándar. En particular, identificó la partición aditiva clásica de la
heterocigosidad total en heterocigosidad media dentro de la subpoblación y un componente
entre subpoblaciones como errónea, porque las dos últimas cantidades no son realmente
independientes sino que están relacionadas a través de una partición incompleta (Jost2008).
Debido a que los resultados clásicos sobre el número absoluto de migrantes por generación
necesarios para evitar una diferenciación significativa entre demos locales en los modelos de
isla finita y trampolín (por ejemplo, nm >1) se basan en la interpretación deFCALLEcomo medida
de diferenciación, Jost (2008) llegó a la conclusión de que tales “reglas empíricas” deben
considerarse inválidas. Aunque no evaluó formalmente el modelo de evolución secuencial de
sitios infinitos, esta conclusión va de la mano con nuestras interpretaciones anteriores. Incluso
con tasas de migración de moderadas a altas en nuestras simulaciones, los efectos marcados
del esquema de muestreo en el SFS no se limitaron a poblaciones en expansión, sino que
también se encontraron para poblaciones subdivididas en equilibrio demográfico. Resultados
similares fueron
obtenido previamente por De y Durrett (2007) para poblaciones en equilibrio e,

implícitamente, por Ray et al. (2003) para poblaciones en expansión.
Los conjuntos de datos genéticos de población a gran escala se evalúan
comúnmente en el marco de poblaciones panmícticas que experimentan
cambios temporales en el tamaño de la población (para referencias, consulte
St.€Adler et al.2009). Nuestros resultados sugieren que un enfoque más
apropiado reconocería explícitamente la naturaleza subdividida de estas
especies, lo que requeriría prestar especial atención a los esquemas de
muestreo y sus consecuencias genealógicas. Especialmente si el muestreo es
de una población local, como ha sido el caso a menudo, es inapropiado
comparar los patrones de diversidad con las expectativas bajo las condiciones
clásicas de equilibrio neutral incorporadas en las pruebas de “neutralidad”
comúnmente utilizadas. El enfoque tradicional sobre los cambios en el tamaño
de la población a lo largo del tiempo para explicar las propiedades de las
muestras locales/regionales debe cuestionarse, especialmente en sistemas
con niveles moderados a altos de flujo de genes donde las genealogías de las
muestras no son monofiléticas a nivel regional sino más bien incrustadas en
genealogías de toda la especie.2001; Wakeley y Aliacar2001; Ray et al.2003;
excofre2004).
Guiados por nociones de la importancia especial de la estructura de la población y el
potencial de adaptación local en las plantas, varios estudios recientes han enfatizado la
necesidad de incluir muestras genuinas de la población local, en lugar de depender
exclusivamente de muestras dispersas (Wright y Gaut2005; Möller et al.2007; Ross-Ibarra et al.
2008). Si bien estamos de acuerdo en que el muestreo local tiene un mérito particular para
estudiar las firmas de la adaptación local, los resultados de nuestra simulación advierten
contra el análisis ingenuo de tales muestras locales, es decir, en el marco convencional de las
poblaciones panmícticas. En principio, el muestreo de varios demos locales ofrece la
oportunidad de contrastar empíricamente las propiedades de las muestras locales con las de
la muestra agrupada, de manera análoga a dos de nuestros tres esquemas de muestreo de
simulación. Como mínimo, este ejercicio tiene el potencial de inferir características generales
de la historia demográfica de toda la especie a pesar de los sesgos inherentes a las muestras
locales. También mitigaría en parte la inferencia de firmas falsas de selección natural a partir
de niveles y patrones de polimorfismo de nucleótidos, o de la extensión de la estructura del
haplotipo (para ejemplos, véase De y Durrett2007). Sin embargo, solo la estructura
genealógica de muestras dispersas es comparable a la de una población panmíctica
escurridiza con un historial demográfico idéntico (p. ej., expansión de toda la especie),
mientras que tales muestras impiden encontrar evidencia molecular de adaptación local.
4 Resumen
Para obtener una imagen más completa sobre la divergencia de especies en el clado de tomate, que
es considerablemente más antiguo que el tiempo de división estimado deS. chilensey
S. peruvianum,hemos muestreado y analizado otras dos especies autoincompatibles
(S. arcanoyS. habrochaites).Dado que estas especies pueden estar relacionadas más lejanamente con
S. peruvianumyS. chilense,esto nos permitirá estudiar los patrones de divergencia en el clado tomate
de una manera bastante completa. De las especies autoincompatibles, sóloS.pennellii (relacionado
cercanamente aS. habrochaites)yS. huaylasense (anteriormente parte deS. peruvianum)entonces no
son considerados. Además, los datos de secuencia que están actualmente disponibles y los que
estarán disponibles en el futuro cercano solo pueden analizarse de manera integral si se desarrollan
nuevos procedimientos de estimación que tengan en cuenta explícitamente la subdivisión de la
población tanto en las especies existentes como en las ancestrales. Para manejar la complejidad de
los datos, los métodos bayesianos aproximados parecen ser los más prometedores (para un ejemplo
reciente que implementa supuestos de panmixia, consulte Ross-Ibarra et al.2009). Finalmente, una
conclusión general de nuestros análisis es que los esquemas de muestreo pueden influir en las
firmas genealógicas en los datos de secuencia incluso bajo altos niveles de migración. Dada la
suposición panmixia de los algoritmos DPG actuales, se deduce que, para obtener estimaciones más
sólidas de la demografía histórica de las especies, es necesario recopilar datos de muestras dispersas
geográficamente. Con este fin, actualmente estamos recopilando datos de secuencias de un gran
número de poblaciones por especie.
Expresiones de gratitudAgradecemos a nuestros actuales y pasados estudiantes de posgrado y técnicos por

sus valiosas contribuciones a estos estudios: U. Arunyawat, G. Feldmaier-Fuchs, H. Lainer, T. Marczewski, C.
Merino y K. Roselius. Los análisis coalescentes se beneficiaron de las contribuciones de B. Haubold, S.
Mousset, P. Pfaffelhuber y A. Tellier. Nuestro trabajo de campo en Perú fue facilitado en gran medida por el
apoyo administrativo y logístico de A. Cano y G. Clostre; los permisos para muestrear y exportar material
foliar a Alemania fueron otorgados por el PerúInstituto Nacional de Recursos Naturales (INRENA).
Finalmente, estamos agradecidos a la generosa financiación de la investigación de laDeutsche
Forschungsgemeinschafta lo largo de la duración del SPP-1127 "Radiaciones - Orígenes de la diversidad
biológica" (otorgaciones Ste 325/5-1 a 325-3).
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Diversidad genética, evolución y domesticación
del trigo y la cebada en el Creciente Fértil
Benjamin Kilian, William Martin y Francesco Salamini
AbstractoHace unos 12.000 años, los humanos comenzaron la transición de la recolección de

cazadores a una sociedad sedentaria basada en la agricultura. Desde sus orígenes en el
Creciente Fértil, la agricultura se expandió por Europa, Asia y África, junto con varias plantas y
animales domesticados. Aún se debate dónde, cómo y por qué se originó la agricultura. Se ha
avanzado en la comprensión de la domesticación de plantas en los últimos años. El enfoque
para comprender la domesticación de los cereales que hemos adoptado en los últimos años
ha implicado, en lo principal, la siguiente estrategia de cinco puntas: (1) el uso de colecciones
completas de germoplasma que cubran toda el área de distribución de cada especie y la
recolección de nuevo germoplasma para cereales silvestres de sus hábitats primarios en la
naturaleza; (2) la comparación de muchas accesiones silvestres y domesticadas para cada
especie; (3) la identificación del progenitor silvestre en el acervo genético silvestre ya través de
la comparación de la similitud genética entre muchos loci con descendientes domesticados; (4)
el uso de técnicas de huellas dactilares moleculares en
B.Kilian (*)
Instituto de Botánica III, Universidad Heinrich-Heine€en D€usseldorf, universidad€atsstrasse 1,
40225 D€üsseldorf, Alemania
Departamento de Fitomejoramiento y Genética, Instituto Max Planck para la Investigación de
Fitomejoramiento, Carl-von-Linné-Weg 10, 50829 Köln, Alemania
Instituto Leibniz de Genética Vegetal e Investigación de Plantas de Cultivos (IPK), Banco de genes/Diversidad del
genoma, Corrensstrasse 3, 06466 Gatersleben, Alemania
correo electrónico: kilian@ipk-gatersleben.de
W. Martin
Instituto de Botánica III, Universidad Heinrich-Heine€en D€usseldorf, universidad€atsstrasse 1,
40225 D€üsseldorf, Alemania
F. Salamini
Fondazione Parco Tecnologico Padano, Via Einstein – Localita Cascina Codazza, 26900 Lodi,
Italia
Departamento de Fitomejoramiento y Genética, Instituto Max Planck para la Investigación de
Fitomejoramiento, Carl-von-Linné-Weg 10, 50829 Köln, Alemania

138 B.Kilian et al.
muchos loci para comparar cereales silvestres y domesticados; (5) la identificación y clonación
de genes implicados en la domesticación. Ese trabajo ha proporcionado algunas ideas sobre el
proceso de domesticación, ideas que, ubicadas en el contexto arqueológico de la historia
humana en el Creciente Fértil, brindan información sobre lo que estaban haciendo los
humanos mientras se producía la domesticación. Este capítulo revisa los desarrollos recientes
en nuestra comprensión de la historia de la domesticación del trigo y la cebada en el Creciente
Fértil, eventos que forjaron los cimientos de nuestra cultura europea actual.
Durante SPP 1127: Alcance de este Estudio.

El objetivo principal del estudio durante SPP1127 fue investigar y comparar la diversidad
de nucleótidos entre el trigo y la cebada silvestres y domesticados utilizando grandes
colecciones de germoplasma y diferentes marcadores moleculares para obtener nuevos
conocimientos y contribuir a la discusión en curso sobre el origen de la agricultura y la
domesticación de plantas en la Media Luna Fértil.
Palabras claveDiversidad genética - Evolución - Domesticación - Trigo - Cebada -

Creciente Fértil
1. Introducción
Los cereales proporcionan más del 50% de la producción agrícola mundial y son importantes recursos
renovables para alimentos, piensos y materiales industriales (http://faostat.fao.org). La tribu Triticeae dentro
de la subfamilia Pooideae de la familia de las gramíneas Poaceae incluye los géneros de cultivoTriticum (
trigo),Hordeo (cebada) yescala (centeno). El trigo es el principal cereal de las regiones templadas y el
alimento básico de alrededor del 40% de la población mundial. A nivel mundial, el trigo es el segundo cultivo
más cultivado, recientemente reemplazado por el maíz, mientras que la cebada ocupa el cuarto lugar
después del maíz, el trigo y el arroz (http://faostat.fao.org). El trigo y la cebada son los cultivos básicos más
importantes de Europa y de la parte occidental de Asia. El trigo se utiliza principalmente para hacer pan (
Triticum aestivum, hexaploide) y pasta (Triticum duro,tetraploide), la cebada como forraje y para la
elaboración de cerveza, mientras que el centeno se utiliza para pan y forraje. La historia humana está
estrechamente relacionada con estos tres cultivos básicos, porque el trigo y la cebada (y posiblemente
también el centeno) pertenecen a los cultivos fundadores del Neolítico sobre los que se construyó la
agricultura occidental.
2 Orígenes de las plantas cultivadas y la agricultura: una

breve reseña histórica
El origen de las plantas cultivadas y su domesticación han sido de relevante

interés a partir de los ensayos de Alexander von Humboldt (Essai sur la
géographie des plantes,Humboldt von1806; Fiedler y Leitner2000), Charles
Diversidad genética, evolución y domesticación del trigo y la cebada 139
Darwin (El origen de las especies,Darwin1859yLa variación de animales y

plantas bajo domesticación,Darwin1868) y Alfonso de Candolle (Origine de
plantes cultivées,Candolle de1883; Damania1998).
En 1926, Nikolay Ivanovich Vavilov publicó su libroCentros de origen de las plantas
cultivadas (vavilov1926). Vavilov señaló que “toda la diversidad varietal y racial de los
cultivos de campo y hortalizas se concentra en los distritos montañosos”. Vavilov
resumió todo su trabajo sobre la diversidad en 1935 enLa base fitogeográfica del
fitomejoramientoen el que describe ocho centros, incluido un centro mediterráneo
donde se originaron trigos, cebadas, verduras y frutas (Vavilov1992; halcones1998). Dos
años más tarde, el arqueólogo y filósofo Vere Gordon Childe presentó su “Teoría del
Oasis” que proponía que la agricultura comenzó en el Cercano Oriente cuando el clima
cambió al final del último período glacial, proceso que denominó “Revolución
Neolítica” (Childe1928,1936; harris1998). El trabajo posterior de Robert Braidwood, quien
excavó Jarmo (Braidwood y Braidwood1950) y Cayón€u (Braidwood et al.1969) condujo a
la sugerencia de que la agricultura comenzó en los “flancos montañosos de la 'Media
Luna Fértil' de Breasted” (Braidwood y Braidwood1950; Madera trenzada1972;
Braidwood, et al.1983). El término “Creciente Fértil” (Fig.1) proviene a su vez de James
Henry Breasted (Breasted1938; Madera trenzada1972). La evidencia arqueológica, sin
embargo, solo cuenta una parte de la historia sobre la domesticación, y las
contribuciones de la (arqueo-)botánica y la genética han enriquecido significativamente
nuestra comprensión de los orígenes de la agricultura (Harlan y Zohary1966; Harlan1971
, 1975,1995; Hillman y Davies1990; Nesbitt1995,2002; Nesbitt y Samuel 1996; Willcox
1996,2005; Zohary1999; montañés2000; Tanno y Willcox2006).
Durante más de dos décadas, el uso de marcadores moleculares ha brindado nueva información
sobre la diversidad genética de plantas cultivadas en relación con sus parientes silvestres, centros de
domesticación, marco temporal del proceso de domesticación y características específicas.
Figura 1Media Luna Fértil y “área central” de domesticación de plantas dentro de la Media Luna Fértil.
El Creciente Fértil se indica con unlínea rojay el "área central" se muestra con unlínea azul. KK
Cordillera de Karacadag en el sureste de Turquía
140 B.Kilian et al.
alelos que soportan rasgos domesticados. La conexión entre los marcadores moleculares y la
geografía de la domesticación se arraigó en el artículo de Heun et al. (1997), quienes
encontraron que, sobre la base de los marcadores AFLP (polimorfismo de longitud de
fragmento amplificado), los parientes silvestres más cercanos de la escanda silvestre
domesticada (Triticum monococcum, diploide) ocurren en un área muy restringida dentro de
la cordillera de Karacadag en el sureste de Turquía (Fig.1). A partir de eso, concluyeron, no sin
razón, que esto representa el sitio donde los humanos domesticaron por primera vez a la
einkorne. Siguieron contribuciones importantes usando diferentes marcadores moleculares
para otras especies: cebada (Badr, et al.2000; Kilian et al.2006; Morell y Clegg2007); einkorn
(Kilian et al. 2007b); Emmer (Ozkan et al.2002,2005; Mori et al.2003; Luo et al.2007); maíz
(Wright et al.2005); arroz (Londo et al.2006), y sorgo (Hamblin et al.2006).
3 Evolución y Domesticación deTriticeae
La evidencia arqueológica documenta la ocurrencia de restos vegetales en diferentes sitios de

excavación, en diferentes capas estratigráficas que fueron analizadas y fechadas por
radiocarbono (Hillman2000), de la que surge una imagen generalmente consistente que indica
que la agricultura occidental se originó en el Creciente Fértil después de la última edad de
hielo, en el Neolítico Precerámico (PPN) cerámico de hace aproximadamente 12,000 a 9,500
años (Zohary y Hopf2000; Nesbitt2002; Salamini et al.2002). Ahora se sostiene ampliamente
que la agricultura del Creciente Fértil se originó en un “área central” en el sureste de Turquía
hasta el norte de Siria (Fig.1), donde la distribución de las formas silvestres (Fig.2) están
molecular y citológicamente estrechamente relacionados con los cultivos fundadores (Tabla1)
(Lev-Yadun et al.2000; Abo et al.2006). A partir de ahí, la agricultura se extendió por todo
Figura 2Einkorn salvaje, emmer salvaje yAegilopsespecies en su hábitat natural dentro de la cordillera de
Karacadag. Fotografía tomada por H. Özkan a principios de julio de 2004
tabla 1Los cultivos fundadores de la agricultura neolítica y sus progenitores silvestres

Nombre progenitor salvaje forma domesticada
Trigo escandaa Triticum boeoticum T. monococcum
trigo esmeraldab Triticum dicoccoides T. dicoccon
Centeno Secale vavilovii S. cereales
Cebada Hordeo espontáneo vulgare
Lenteja Lente oriental L. culinaris
Guisante pisum humile P. sativum
Garbanzo Cicer reticulatum C. arietinum
arveja amarga vicia ervilia V. ervilía
Linaza Linum bienne L.usitatissimum
aTodavía no está claro siTriticum urartutambién se recolectó, debido a que las semillas deT. urartuy
T. boeoticumno se puede distinguir
bLa evidencia apoya que salvajeTriticum araraticumfue el progenitor deT. timopheevii,pero
distinguiendo restos vegetales de silvestresT. dicoccoidesde los de salvajeT. araraticum,así los
dos domesticados, es casi imposible
Europa, Asia y África (Ammerman y Cavalli-Sforza1984; Nesbitt2002). El proceso de

domesticación duró varios siglos en la región (Tanno y Willcox 2006), siempre
precedida por el cultivo de poblaciones silvestres antes de la domesticación (Weiss
et al.2006; Willcox et al.2008).
Los parientes silvestres difieren de sus descendientes de cultivo (Tabla1) en varias características
fenotípicas (Fig.3), denominados colectivamente como el “síndrome de domesticación” (Hammer1984
; Salamini et al.2002; Kilian et al.2009). El más importante Triticeaelos rasgos modificados durante la
domesticación fueron el estado de trilla libre y el raquis quebradizo. Trilla libre significa que las
semillas se sueltan del raquis al momento de la trilla, y raquis quebradizo significa que la
inflorescencia seca (cogollo) no se desarticula en la madurez (Fig.3). Las modificaciones adicionales
que tuvieron lugar durante la domesticación y el cultivo posterior se relacionaron con el tamaño de
la semilla (semillas más grandes en formas domesticadas), el tipo de fila del grano (más filas en
algunas especies domesticadas), la altura de la planta, la dureza del grano, el macollamiento, la
latencia de la semilla, el fotoperíodo, la vernalización y la fecha del espigamiento. . Además, la
expansión de los cereales domesticados fuera del Creciente Fértil requirió la adaptación a nuevos
entornos respaldados por alelos favorables recién surgidos en loci genéticos críticos (para obtener
más información, consulte Salamini et al. 2002; Kilian et al.2009).
Los cereales silvestres y domesticados a menudo se designan como especies

separadas, aunque esto es tanto por conveniencia, porque sus descendientes cruzados
suelen ser fértiles. Sin embargo, es común referirse a ellos, al menos cuando se
describen eventos arqueológicos y genéticos, como si fueran especies diferentes, una
formalidad que simplifica la discusión de temas relacionados con la domesticación. A lo
largo de los años, los genetistas desarrollaron clasificaciones taxonómicas. Para el trigo,
Dorofeev y sus colegas completaron la última revisión integral y sistemática en 1979. En
este capítulo, la nomenclatura y la fórmula del genoma dadas paraTriticumpor Dorofeev
et al. (1979) y elAegilopsnomenclatura basada en van Slageren (1994) se sigue
principalmente. En general, el Zohary y Hopf (2000) se acepta la clasificación, con
algunas modificaciones cuando sea necesario (Tabla2).
142 B.Kilian et al.
Fig. 3Diferencias morfológicas entre el trigo escanda salvaje y el domesticado. Ejemplos de espiga de trigo
escanda silvestre dehiscente (a),espiguilla de escanda silvestre (b),detalle de espiguilla de escanda salvaje
con cicatriz de abscisión salvaje suave (C)y semillas de escanda silvestre (d).Oreja domesticada indehiscente (
mi),espiguilla domesticada (F),detalle de espiguilla domesticada con ruptura irregular (gramo)y semillas
domesticadas (h).Esta figura fue amablemente preparada por S. Kilian
La evidencia arqueológica indica que los restos de plantas de nueve especies

domesticadas muy a menudo aparecen juntos en sitios y momentos comunes. Por lo
tanto, se supone que estas especies han sido domesticadas juntas como un “paquete
fundador” (Lev-Yadun et al.2000). Las especies silvestres y domesticadas del paquete
fundador del Neolítico se muestran en la Tabla1.
Tabla 2Tabla de clasificación comparativa paraTriticum (modificado dehttp://www.k-state.edu./wgrc).

Se incluyen las fórmulas genómicas tradicionales
genoma Dorofeev et al. Clave Mac (1988) van slageren (1994) kimber y sears
(1979) (1987)
Atu T. urartu T. urartu T. urartu T. monococcum
Ab T. boeoticum T. monococcumssp. T. monococcumssp. T. monococcum
boeótico aegilopoides
Ab T. monococcum T. monococcumssp. T. monococcumssp. T. monococcum
monococo monococo
Ab T. sinskajae
AB T. aethiopicum
AB carthlicum T. turgidumssp. T. turgidumssp. T. turgidum
carthlicum carthlicum
AB T. dicoccoides T. turgidumssp. T. turgidumssp. T. turgidum
dicoccoides dicoccoides
AB T. dicoccon T. turgidumssp. T. turgidumssp. T. turgidum
dicoco dicoco
AB T. duro T. turgidumssp. T. turgidumssp.trigo duro T. turgidum
turgidumconversión
trigo duro
AB T. ispahanicum
AB T. jakubzineri
AB T. karamyschevii T. turgidumssp. T. turgidumssp.
georgicum paleocolchicum
AB T. polonicum T. turgidumssp. T. turgidumssp. T. turgidum
polonico polonico
AB T. turanicum T. turgidumssp. T. turgidumssp.
turgidumconversión turanicum
turanicum
AB T. turgidum T. turgidumssp. T. turgidumssp. T. turgidum
turgidumconversión turgidum
turgidum
AG T. araraticum T. timopheeviissp. T. timopheeviissp. T. timopheevii
armeniacum armeniacum
AG T. militinae
AG T. timopheevii T. timopheeviissp. T. timopheeviissp. T. timopheevii
timopheevii timopheevii
ABD T. aestivum T. aestivumssp. T. aestivumssp. T. aestivum
aestivum aestivum
ABD T. compacto T. aestivumssp. T. aestivumssp. T. aestivum
compacto compacto
ABD T. macha T. aestivumssp. T. aestivumssp. T. aestivum
macha macha
ABD T. petropavlovskyi
ABD T. espelta T. aestivumssp. T. aestivumssp. T. aestivum
espelta espelta
ABD T. sphaerococcum T. aestivumssp. T. aestivumssp. T. aestivum
esferococo esferococo
ABD T. vavilovii T. aestivum
AAG T. zhukovskyi T. zhukovskyi T. zhukovskyi T. zhukovskyi
144 B.Kilian et al.
Los resultados moleculares, principalmente relacionados con las medidas de similitud genética
de todo el genoma, también han rastreado los orígenes de los cereales domesticados hasta las
poblaciones silvestres de pastos que todavía están presentes en el Creciente Fértil (Heun et al.1997;
Ozkan et al. 2005; Luo et al.2007; Kilian et al.2007b), consistente con la evidencia arqueológica
independiente.
3.1 Evolución y domesticación del trigo
Los estudios de la evolución del trigo han atraído gran atención en los últimos 100 años.
Sakamura (1918), Saxo y Saxo (1924), y Kihara (1924) utilizaron métodos citogenéticos y
reconocieron que las especies de trigo se dividen en tres grupos según su nivel de ploidía: (1)
diploide 2n¼14¼trigo escanda; (2) tetraploide 4n¼28¼trigos de emmer; (3) hexaploide 6n¼42
¼trigos panificables. Esos estudios citogenéticos condujeron a las distinciones genómicas A, B,
D, G, S, etc., que todavía se utilizan hoy en día en la investigación del trigo. De manera
importante y única entre los cereales, el trigo harinero hexaploide no tiene un progenitor
silvestre hexaploide directo. Posee tres juegos de cromosomas homeólogos, designados como
BBAtuAtuDD, cuyos orígenes tienen diferentes grados de certeza. El superíndice “u” en la AtuLa
designación del genoma indica que el genoma A es del tipo que se encuentra enTriticum
urartu.
Los cromosomas D provienen de diploides salvajes.Aegilops tauschiia través de aloploidización
con el BBA salvajetuAtutetraploideT. dicoccoides (Kihara1944). La Atuy los cromosomas B se derivan de
la hibridación entre los cromosomas A salvajestuAtudiploideT. urartu y un donante de genoma salvaje
diploide B (Dvorak et al.1993; Kilian et al.2007a), frecuentemente reportada como perteneciente a la
SitopsisSección deAegilops,que incluye cinco especies. Brandolini et al. (2006) cuantificaron las
relaciones genéticas entre los genomas A de los trigos mediante la toma de huellas dactilares AFLP.
Siete combinaciones de cebadores AFLP produjeron 239 bandas específicas del genoma A para el
análisis. Los resultados indican que: (1) elT. urartuEl genoma está más estrechamente relacionado
con los genomas A de los trigos poliploides que con el genoma de la einkorn (T. boeoticum/T.
monococo); (2)T. dicoccony
T. duroagruparse apoyando un origen común; (3) grupo intermedio de espeltas
descascaradas hexaploides entre trigos tetraploides y hexaploides; (4) GGAtuAtulos trigos
se agrupan lejos de los trigos diploides y poliploides; y (5) elT. urartu El genoma está
aproximadamente un 20% más estrechamente relacionado con los genomas A de los
trigos con poliploidía que con elT. boeoticum/T. monococogenomaT. timopheeviies
equidistante de los deT. urartuyT. monococcum.
El tetraploide BBAtuAtuy GGAtuAtutrigos se originaron a través de eventos de
alopoliploidización independientes entre dos pastos diploides silvestres. Fuerte evidencia
apunta al cruzamiento salvajeAe. espeltoides (SS) (o un genotipo similar) como progenitor
femenino de trigos tetraploides y de trigos silvestresT. urartu (AtuAtu) como el progenitor
masculino (Dvorak y Zhang1990; Huang et al.2002; Zhang et al.2002; Kilian et al. 2007a). Kilian
et al. (2007a) utilizó un enfoque de tres niveles. Usando 70 loci de polimorfismo de longitud de
fragmento amplificado (AFLP), tomaron muestras de diversidad molecular entre 480 líneas de
trigo de sus hábitats naturales que abarcan todo el genoma S Aegilops,los supuestos
progenitores de los genomas B y G del trigo. Cincuenta y nueveAegilops
representantes de la diversidad del genoma S se compararon en 375 loci AFLP con

diploides, tetraploides y 11 nulli-tetrasómicosT. aestivumLíneas de aneuploides de
primavera china: 6 nulliB–tetraD (N1BT1D, N2BT2D, N3BT3D, N4BT4D, N5BT5D, N6BT6D)
y 5 nulliB–tetraA (N1BT1A, N2BT2A, N3BT3A, N5BT5A, N7BT7A) (Sears1954). Las líneas
nulli-tetrasómicas son cepas genéticas aneuploides que utilizan la capacidad de
compensación de los cromosomas homólogos. Por ejemplo, N1BT1D indica líneas nulli-
tetrasómicas a las que les falta un par de cromosomas 1B que se reemplaza por un par
adicional de cromosomas 1D. Los marcadores específicos del genoma B permitieron fijar
el origen del genoma B en los cromosomas S deAe. espeltoides, mientras que excluye
otros linajes.
La naturaleza extranjerizante deAe. espeltoidesinfluye en su diversidad molecular y
se relaciona con las inferencias de los orígenes del genoma B y G. Haplotipos en loci
nucleares y de cloroplastosACC1, G6PDH, GPT, PGK1, Q, VRN1,yndhFpara -70Aegilops y
Triticum(0,73 Mb secuenciados) revelan los genomas B y G de trigos poliploides como
muestras únicas deAe. espeltoidesdiversidad de haplotipos. Estos han sido secuestrados
por la BBAtuAtuT. dicoccoidesy GGAtuAtuT. araraticumlinajes durante sus orígenes
independientes. La hibridación que generó el BBAtuAtu
Los trigos pueden haber tenido lugar entre 0,25 y 1,3 millones de años según algunas
estimaciones (Mori et al.1995; Huang et al.2002; Dvorak y Akhunov2005), mientras que el
evento que condujo a la GGAtuAtulos trigos probablemente ocurrieron más tarde (Huang et al.
2002). Las relaciones evolutivas claramente reticuladas entre trigos con diferentes niveles de
ploidía que se remontan a eventos de hibridación se muestran en la Fig.4. Las morfologías de
las inflorescencias correspondientes se muestran en la Fig.5.
Figura 4Descripción general de la evolución y los eventos del trigo. Esta figura ha sido publicada
originalmente en Kilian et al. (2007a) (SI). Publicado con permiso de Oxford University Press
146 B.Kilian et al.
Figura 5Espigas de especies de trigo yAegilopsespecies involucradas en la evolución del trigo. Trigo:
diploide silvestre (T. urartu; T. boeoticum),diploide domesticado (T. monococcum; T. monococcum
aegilopoides,la forma salvaje deT. monococcumse muestra en ellado derechoentreT. boeoticumy
T. monococcum),tetraploide salvaje (T. dicoccoides; T. araraticum),tetraploide domesticado (T.
dicoccon; T. durum; T. timopheevii),hexaploide domesticado (T. spelta, T. aestivum)y Aegilops (Ae.
speltoides; Ae. tauschii).Véase también la fig.4
3.1.1 Trigos diploides
Dos diploides salvajesTriticumSe reconocen especies:T. boeoticum (AbAb) y

T. urartu (AtuAtu). Están separados por barreras que se cruzan (Johnson y Dahliwal 1976),
difieren en la morfología de las plantas (Gandilian1972; Dorofeev et al.1979) y en loci de
marcadores bioquímicos y moleculares (Johnson1975; Dvorak et al.1998a; Kilian et al.
2007b). El trigo escanda diploideT. monococcumfue uno de los primeros cultivos
domesticados en el Creciente Fértil a partir del progenitor salvajeT. boeoticum. La
domesticación se ha ubicado en el área geográfica del volcán Karacadag.
Figura 6Enormes rodales de trigo

escanda silvestre (T. boeoticum)
en la cordillera de Karacadag.
Foto tomada por
H. Özkan a principios de julio de 2004
cadena montañosa en el sureste de Turquía (Heun et al.1997; Higo.6). Los primeros

registros arqueológicos de einkorn domesticados se describen en Abu Hureyra
(Hillman et al.1989), Cayón€u (van Zeist y de Roller1991-1992) y Nevali Cori
(Pasternak1998). Einkorn era el cultivo básico de las poblaciones sumerias y se ha
encontrado en las capas excavadas de Troya (Nesbitt y Samuel1996).
Hoy en día, Einkorn es un cultivo relicto con solo una importancia económica marginal. Durante los
últimos 5000 años, la einkorn fue abandonada en gran medida y reemplazada por trigos tetraploides y
hexaploides, que ofrecen mayores rendimientos. Esta circunstancia es de particular importancia y hace que
einkorn sea un sistema modelo sobresaliente para investigar la historia de la domesticación de cultivos con
herramientas genéticas, en el sentido de que el germoplasma de einkorn domesticado carece de cuellos de
botella de mejoramiento modernos. El término “cuellos de botella en el mejoramiento” se refiere a la
circunstancia de que la mayoría de las variedades modernas de cereales son el producto de intensos
esfuerzos de mejoramiento, particularmente durante los últimos 100 años. Debido a que el einkorn nunca
estuvo sujeto a tales programas de reproducción, Kilian et al. (2007b) razonó que un muestreo extensivo de
diversidad genética entre accesiones silvestres y domesticadas debería discriminar entre diferentes hipótesis
de domesticación de cereales, brindando información sobre la domesticación neolítica de este cereal que no
se ve empañada por cuellos de botella de reproducción que ocurrieron en los últimos 100 años (la
“revolución verde”). ”).
En ese estudio, Kilian et al. (2007b) investigó la variación de nucleótidos en 18 loci de 92
líneas domesticadas de einkorn en comparación con 321 líneas de poblaciones silvestres. De
ese estudio surgieron varias ideas sobre la historia de la domesticación. Una de las ideas más
importantes fue que la escanda salvaje no es realmente un único y homogéneo
148 B.Kilian et al.
Figura 7Grupos de orejas de einkorn. Einkorn salvaje (T. boeoticum)Los grupos se muestran en laabajo:
(carreraa,carrerab,carreragramo),Einkorn domesticado (T. monococcum)y su forma salvajeT. monococcum
aegilopoidesse muestran en elparte superior
población, la escanda silvestre más bien pasó por un proceso natural de diferenciación
genética antes de la domesticación, lo que resultó en tres distintosT. boeoticumcarreras
(Fig.7). Estas tres razas, que designamosun, b,ygramo,son genéticamente distintos tanto
al nivel de sus haplotipos en los 18 loci estudiados como al nivel de sus huellas dactilares
AFLP, pero son morfológicamente indistinguibles, o casi (Fig.7). Una de esas carreras,
carrera salvajeb,es genéticamente mucho más similar al einkorn domesticado, por lo
tanto, es la raza, o genotipo, que fue explotada por los humanos durante la
domesticación. Carrerabocurre solo en las montañas Karacadag y Kartal-Karadag. En
este sentido, los hallazgos son consistentes con los de Heun et al. (1997), pero los
amplían significativamente y abren nuevas perspectivas sobre el proceso de
domesticación.
Una segunda gran sorpresa en los hallazgos de Kilian et al. (2007b) fue que se encontró
que la diversidad de nucleótidos y haplotipos en la escanda domesticada era mayor
que en elbcarrera. diversidad de nucleótidos,pag,representa la divergencia de secuencia promedio

entre todas las secuencias homólogas entre todos los individuos en un conjunto dado para
comparación. A menudo se usa para inferir la presencia de cuellos de botella en poblaciones pasadas
en estudios de genética de domesticación, porque cuando una población pasa por un cuello de
botella, la diversidad alélica en la población disminuye, ypagpor lo tanto, se espera que sea pequeño.
Varios estudios de la literatura han reportado evidencia que sugiere que la diversidad de nucleótidos
se reduce en los cereales domesticados, de donde surge el concepto de cuellos de botella de
domesticación (Dubcovsky y Dvorak2007). Sin embargo, dos puntos son críticos aquí. En primer
lugar, la mayoría de los estudios de domesticación de cereales implicaron el análisis de líneas
altamente endogámicas: ¿cómo inferir la presencia de un cuello de botella de domesticación antiguo
si el cuello de botella real ocurrió durante la reproducción en los últimos 100 años? Este problema se
cierne sobre el concepto de cuello de botella de domesticación en los estudios de domesticación de
cereales. En segundo lugar, fue aún más sorprendente que, cuando buscamos evidencia de un cuello
de botella reproductivo en la escanda silvestre domesticada, un caso raro de un cereal en el que no
ha habido cuellos de botella reproductivos recientes, descubrimos que no hubo reducción de la
diversidad de nucleótidos. en absoluto (Tabla3). La ausencia de un cuello de botella de domesticación
contrasta con las conclusiones de los estudios de domesticación en especies cultivadas intensamente
criadas, donde los reclamos de cuellos de botella de domesticación son comunes. En la naturaleza,
raza salvajebse ha muestreado solo en el "área central" de desarrollo agrícola en el sureste de
Turquía (Lev-Yadun et al.2000; Bar Yosef2002; Lichter2007), donde todavía crecen los parientes
silvestres más cercanos de la escanda, la escanda, la cebada, el centeno, el garbanzo y la lenteja
(Ladizinsky1985; Salamini et al.2002; Ozkan et al.2005; Abo et al.2006). Informes arqueológicos
detallados de Hillman (2000), Willcox (2005), Weiss et al. (2006), y Willcox et al. (2008) describen cómo
el cultivo previo a la domesticación de cereales (silvestres) se prolongó durante siglos en la región y
cómo fue seguido por cultivos graduales (Kislev2002) y múltiples (Gebel2004) apariciones de
fenotipos domesticados. La genética y la cultura.
Tabla 3Diversidad de haplotipos y nucleótidos en líneas silvestres y domesticadas. Véase Kilian et al. (2007b)
para más explicaciones
d
Especie/ssp/raza nortea Hb alta definiciónC pag
nened pag
sil d ynene ysil
d
T. boeoticum (salvaje) 321 114 0.380 4.73 8.51 3.45 4.29

carreraa 230 77 0.242 3.48 6.37 2.72 3.23
carreragramo 49 75 0.362 4.59 7.81 4.20 5.27
carrerab 42 43 0.260 1.56 2.70 2.05 2.15
T. monococcum (domesticar) 84 61 0.278 2.97 5.44 2.45 2.89
T m aegilopoides (salvaje) 8 35 0.353 3.75 6.35 3.45 3.42
T. urartu (grupo externo) 39 35 0.276 0,53 0,92 0,66 0.96
alta definiciónDiversidad de haplotipos para especies autofecundantes (Nei1987);pagnenenúmero medio de diferencias
de nucleótidos por sitio entre dos secuencias calculado sobre el número total de sitios polimórficos; pagsilnúmero
promedio de diferencias de nucleótidos por sitio entre dos secuencias calculadas en los sitios silenciosos (posiciones
sinónimas y no codificantes);yneneEstimador de Waterson por sitio calculado sobre el número total de sitios
polimórficos;ysilEstimador de Waterson por sitio calculado en sitios silenciosos
a Número de líneas
bNúmero de haplotipos encontrados (sitios vacíos y el locus Lr10 excluido)
CEstimación imparcial de Nei de la diversidad de haplotipos para especies consanguíneas (Nei1987)
d Valores de diversidad de nucleótidos Pi (pag)y el estimador de Waterson (y)se dan 103
150 B.Kilian et al.
Los mecanismos que subyacen a la aparición de esos fenotipos son preguntas

pendientes (Diamond y Belwood2003).
Si los eventos de domesticación geográficamente distintos implicaran cada uno un
muestreo aleatorio de genotipos locales, y si las poblaciones locales pueden identificarse con
base en marcadores moleculares, las líneas domesticadas deberían rastrearse hasta
diferentes localidades a lo largo del rango del progenitor silvestre (Jones2004). Esto no se
observa para einkorn: la raza salvajeb descrito en Kilian et al. (2007b) parece ser la hermana
de la escanda domesticada en ausencia de una reducción evidente de la variación genética.
Esto puede ser acomodado por un modelo de domesticación que hemos llamado el modelo
"específico disperso" (Fig.8). En esencia, en este nuevo escenario, una sociedad sedentaria
asociada a la cultura natufiense del Mesolítico (12.500-9.500 a. C.) en el Levante (Bar-Yosef
2002) primero cosechado y luego cultivadobraza población(es) de escanda silvestre, que
probablemente se distribuyó a los asentamientos humanos locales en el “área central”. Aquí,
en estos asentamientos humanos, se han seleccionado rasgos favorables de labraza a lo largo
de los siglos y labla raza se adaptó a las necesidades humanas. Todavía no está claro cuánta
mezcla se produjo con otras razas salvajes de einkorn. En una fase posterior de la expansión
agrícola, labcarrera fue transferida a otros lugares fuera del
Figura 8El modelo específico disperso para la domesticación de einkorn. Los sitios arqueológicos
seleccionados se indican encursiva.El Creciente Fértil se indica con unlinea punteada .WEinkorn
salvaje (bcarrera); Despinilla domesticada. Esta figura ha sido publicada originalmente en Kilian et al.
(2007b) (publicado con permiso de Oxford University Press)
“área central”, posiblemente ya en un estado de domesticación naciente. El transporte podría haber

involucrado agricultores migratorios (Nadel2002; Renfrew2002) o intercambio de semillas por otros
bienes, ya que no todos los suelos del Creciente Fértil estaban adaptados al cultivo de cereales
(Willcox2005).
En cuanto a Einkorn, en varias áreas, variantes de la salvajebraza emergió con rasgos
domesticados comunes. Estos eventos de domesticación ocurrieron en varios lugares dentro
del "área central". Estos eventos de domesticación estaban conectados entre sí debido a la
mismabmaterial de semilla de la raza utilizada y debido a la misma cultura humana, y un
cuello de botella genético habría ocurrido en cada asentamiento humano domesticador. Sin
embargo, los eventos de domesticación en numerosas aldeas habrían permitido que las líneas
recién domesticadas integraran un arsenal completo de haplotipos salvajes; en esencia, los
cuellos de botella de la domesticación en varios asentamientos humanos a partir de la misma
reserva genética de la naturalezabraza no habría resultado en ningún cuello de botella de
domesticación. En este escenario, las especificidades aún mantenidas a nivel molecular de la
naturalezab raza hacen posible asignar la adopción de los salvajesbcarrera hacia el área
central de Karacadag, mientras que la extracción múltiple de líneas domesticadas delb
población ha conservado su gran variación genética.
Esta hipótesis da cuenta de nuestros datos moleculares y se adapta a los resultados de las
excavaciones arqueológicas: las herramientas para moler semillas están presentes en la mayoría de
los sitios del Creciente Fértil mucho antes que los grandes restos de semillas de trigo escanda
domesticado (Bar-Yosef2002), apoyando la opinión de que los humanos en la región estaban
familiarizados con la cosecha de semillas silvestres tanto en hábitats naturales como en campos
cultivados (Weiss et al.2006; Lichter2007).
Se han llevado a cabo más estudios sobre el trigo escanda durante el proyecto
SPP127.
Einkorn se cultiva hoy en día en una escala muy pequeña como alimento para aves y cerdos en
algunos pueblos montañosos de Italia, España y Turquía (Nesbitt y Samuel1996; Perrino et al.1996).
Este trigo ha sido redescubierto como fuente de variación genética para el mejoramiento del trigo y,
en cierta medida, es utilizado por la industria alimentaria en Europa. Un ejemplo es un estudio
reciente sobre la variación natural y la identificación del contenido de microelementos en semillas de
trigo escanda (Ozkan et al.2007). Las deficiencias de micronutrientes en los seres humanos son
problemas comunes, especialmente en los países en desarrollo. Entre las deficiencias de
micronutrientes, las deficiencias de zinc (Zn) y hierro (Fe) son particularmente importantes y afectan
severamente la salud de los humanos. Una de las principales razones de la aparición generalizada de
carencias de micronutrientes en los seres humanos es el elevado y monótono consumo de alimentos
a base de cereales con un contenido muy bajo de micronutrientes. Un aumento en la concentración
de Zn y Fe en el grano es, por lo tanto, un área de investigación de alta prioridad. La explotación de la
gran variación genética de Zn y Fe existente en el germoplasma de cereales es un enfoque
importante para minimizar el alcance de las deficiencias de Zn y Fe en los países en desarrollo. En el
presente estudio, la variación del contenido de semillas de micronutrientes (Zn, Fe, Mn y Cu) en 54
accesiones de trigo einkorn (T. monococcum)fue probado. Además, una población de mapeo que
comprende 168 líneas endogámicas recombinantes también ha sido probada para la variación de
micronutrientes de semillas y analizada para la identificación de QTL asociados con el contenido de
micronutrientes. Los resultados obtenidos mostraron una gran variación genotípica en
micronutrientes
152 B.Kilian et al.
contenido. En el cromosoma 5 se observó un QTL principal, común a los cuatro

microelementos y que explica del 10 al 30% de la variación.
El trigo es el alimento básico para alrededor del 40% de la población mundial. Sin embargo, la
enfermedad celíaca (EC) es una afección inflamatoria caracterizada por lesiones en el revestimiento
del intestino delgado por exposición al gluten de trigo, cebada y centeno. La prevalencia de EC entre
los caucásicos está en el rango de 1:100 a 300 (Wieser y Koehler2008). La implicación del gluten en el
síndrome de EC ha sido estudiada en detalle en el trigo harinero, donde se ha definido un conjunto
de péptidos “tóxicos” e “inmunogénicos”. Para las especies diploides de trigo, la información sobre
los epítopos de CD es escasa. En un artículo reciente, Vaccino et al. (2009) han adoptado, por lo tanto,
un enfoque genómico para comprender el peligro potencial de EC que representan las proteínas de
almacenamiento en el trigo diploide, y secuenciaron un número suficientemente grande de clones
de ADNc relacionados con genes de proteínas de almacenamiento deT. monococcum.Se encontraron
cuatro péptidos tóxicos de buena fe y 13 péptidos inmunogénicos. Se demostró que todas las clases
de proteínas de almacenamiento contienen secuencias dañinas. La principal conclusión es que la
einkorn tiene todo el potencial para inducir el síndrome de CD, como ya es evidente para los trigos
poliploides. Además, una descripción completa del arsenal de genes de proteínas de
almacenamiento enT. monococcum se presentó, incluida una secuencia de tipo x de HMW de
longitud completa y una secuencia de tipo y de HMW parcial. La información derivada de ese estudio
argumenta fuertemente en contra del enfoque de mejoramiento de especies de trigo bajas en
secuencias nocivas para pacientes con CD al eliminar los epítopos inmunogénicos o tóxicos de su
arsenal de proteínas de almacenamiento; de hecho, parece difícilmente factible crear nuevos
genotipos que carezcan de los 17 péptidos dañinos pertenecientes a diferentes loci. En consecuencia,
el silenciamiento, mediante mutagénesis dirigida, de los genes que dan lugar a secuencias
inmunoestimuladoras (Vader et al.2003) también parece poco realista.
El segundo diploide salvajeTriticumespecies,T. urartu (AtuAtu), ocurre en rocas

basálticas en algunas partes de la Media Luna Fértil (Zohary y Hopf2000). La especie
nunca fue domesticada, pero desempeñó un papel fundamental en la evolución del
trigo.T. urartu donó el genoma A a todos los trigos tetraploides y hexaploides (Dvorak et
al.1993; Brandolini et al.2006; Kilian et al.2007a; Higo.4).
3.1.2 Trigos tetraploides
Se conocen dos especies silvestres de trigo tetraploide,T. dicoccoidesyT. araraticum. Son

similares en morfología, pero diferentes en su constitución genómica:
T. dicoccoides,tiene la fórmula genómica BBAtuAtuyT. araraticumGGAtuAtu
(Zohary y Hopf2000).T. dicoccoides,o emmer silvestre, pertenece a los primeros cereales
domesticados por el hombre en el Creciente Fértil y en su forma domesticada se le
conoce comoT. dicoccon (emmer, BBAtuAtu). Este paso de domesticación proporcionó la
clave para la evolución posterior del trigo harinero (Fig.4). La emmer salvaje fue
descubierta por primera vez en la naturaleza en 1906 en el este de Galilea, Israel, por
Aaron Aaronsohn (Aaronsohn y Schweinfurth1906). Sus estudios de distribución
geográfica y requisitos ecológicos contribuyeron en gran medida a nuestra comprensión
actual de la distribución, diversidad y domesticación del trigo emmer. Esmeralda salvaje
hoy en día tiene un rango de distribución más restringido que la escanda silvestre y se
reconoce hoy en día en el Creciente Fértil occidental, la parte central del sureste de
Turquía y las áreas montañosas en el este de Irak y el oeste de Irán. Recientemente,
Özkan et al. revisaron varias cuestiones relacionadas con la geografía y la domesticación
del trigo escanda silvestre. (2010). Los autores consideraron los datos moleculares y
arqueológicos publicados y volvieron a analizar los datos de Ozkan et al. (2005). La
emmer salvaje probablemente fue domesticada en el sureste de Turquía (Ozkan et al.
2002,2005, 2009; Mori et al.2003; Luo et al.2007). Una reconsideración de la geografía de
domesticación de los trigos tetraploides ha sido considerada por Ozkan et al. (2005) y
por Luo et al. (2007). El análisis filogenético indica que dos razas diferentes de
T. dicoccoidesexisten, el occidental, que coloniza Israel, Siria, Líbano y Jordania, y el
centro-oriental, que ha sido muestreado con frecuencia en Turquía y rara vez en
Irak e Irán. Es la raza centro-oriental la que ha desempeñado el papel de
progenitor del germoplasma domesticado. Esto está respaldado por los resultados
de las colecciones de Ozkan et al. (2002), Mori et al. (2003), y Luo et al. (2007). Sin
embargo, aparece un desacuerdo a escala geográfica local: los datos de ADN del
cloroplasto indican las montañas Kartal en el límite occidental del "área
central" (Abbo et al.2006), mientras que las huellas dactilares de AFLP apuntan a la
cordillera de Karacadag como el sitio putativo de domesticación del trigo
tetraploide. Desde esta área, emmer se expandió por Asia, Europa y África
(Dubcovsky y Dvorak2007). La expansión hacia el sudoeste de emmer domesticado
generó simpatía con las poblaciones del sur deT. dicoccoidesy el surgimiento de un
centro de diversidad secundario (Luo et al.2007). A esto le siguió la subdivisión de
la esmeralda domesticada en subpoblaciones del norte y del sur. La expansión
noreste permitió atender la distribución deAe. tauschiiy, por lo tanto, la aparición
de hexaploideT. aestivum.La evidencia genética sugiere que la síntesis del trigo
hexaploide tuvo lugar dentro del corredor desde Armenia hasta la costa suroeste
del Mar Caspio (Dvorak et al. 1998b). Con base en la diversidad del genoma D, se ha
estimado que la síntesis del trigo hexaploide ocurrió al menos dos veces (Dvorak et
al.1998b; giles y marrón2006).
Sobre la base de una estimación directa de la tasa de mutación para loci de microsatélites y
loci candidatos resecuenciados, Thuillet et al. (2002,2005) y Haudry et al. (2007) han discutido
la ocurrencia de cuellos de botella durante la domesticación y mejoramiento del trigo
tetraploide. Se informa una disminución continua de los tamaños efectivos de población, lo
que indica la acción de cuellos de botella severos, asociados en particular a la reproducción.
Sin embargo, Thuillet et al. (2005) informaron que el cuello de botella de la domesticación era
relativamente bajo, lo que en términos de heterocigosidad de Nei corresponde a la presencia
del 95% de la diversidad en domesticadoT. dicocconcomparado con salvajeT. dicoccoides (pero
el 63,2% del tamaño efectivo de la población se ha perdido del trigo emmer salvaje al
domesticado). Esta situación es notablemente similar a la reportada para einkorn por Kilian et
al. (2007b). Por otro lado, se informan pérdidas importantes de diversidad de nucleótidos en
21 loci de las comparaciones de líneas domesticadas deT. dicoccon yT. durocon lo salvajeT.
dicoccoides (Haudry et al.2007). Sin embargo, en este experimento, es difícil separar los
cuellos de botella recientes de la pérdida de diversidad debida únicamente a la domesticación.
154 B.Kilian et al.
Varios BBA tetraploides cultivadostuAtulos trigos se derivaron más tarde del

emmer domesticado:T. carthlicum (trigo persa),T. polonicum (trigo polaco),
T. ispahanicum, T. turanicum (trigo de Jurasán), yT. turgidum (Inglés o trigo desmochado).
Triticum dicoconera el cultivo favorito para hacer pan en el antiguo Egipto. Al igual que la
einkorn, el cultivo de trigo emmer ha disminuido en la actualidad y solo se puede encontrar en
algunas comunidades agrícolas tradicionales, principalmente en Rusia y Etiopía. Algo más
tarde,T. duro (macarrones o trigo duro) también se originó a partir de
T. dicoccon (Damania1998; Salamini et al.2002; Ozkan et al.2005,2009), pero existen diferentes
opiniones sobre este punto (Haudry et al.2007). Este trigo desnudo se cultiva ampliamente hoy
en día para la producción de pasta.
En la parte oriental del Creciente Fértil, el trigo tetraploide silvestreT. araraticum
(Emmer salvaje ararata o armenio) sustitutosT. dicoccoides (Johnson1975; Zohary y
Hopf2000). MientrasT. dicoccoidesse cruza fácilmente con trigos tetraploides
cultivados,T. araraticumno lo hace, muy probablemente debido a diferencias
relevantes en el genoma, como la existencia de varias translocaciones entre los
cromosomas B y G (Feldman1966).Triticum araraticumtambién fue domesticado,
pero su forma cultivada,T. timopheevii (GGAtuAtu; trigo de Timopheev), se ha
encontrado sólo en el oeste de Georgia junto con el trigo hexaploideT. zhukovskyi
(GGAtuAtuAmetroAmetro; trigo de Zhukovskyi) (Dorofeev et al.1979). Se especula que,
cuando el cultivo de emmer se extendió a Transcaucasia, las poblaciones locales de
T. araraticumfueron colonizando, como maleza, los campos de escarpa y,
al incorporarse al ciclo agrícola de cosecha y siembra, se domesticaron
(Nesbitt y Samuel1996).
3.1.3 Trigos hexaploides: trigo harinero
Económicamente, el trigo más importante esT. aestivumo trigo harinero (BBAtuAtuDD). El

trigo harinero es un cultivo templado que crece desde 67 N en Noruega, Finlandia y
Rusia hasta 45 S en Argentina.Triticum aestivumcomprende una serie de formas de trilla
libre tales comoT. compacto (trigo club),T. sphaerococcum (enano indio o trigo tiro),T.
petropavlovskyi (arroz trigo), yT. tibetanum (trigo tibetano). Se descascaran otras
formas:T. espelta (dinkel o espelta grande),T. macha, T. vavilovii,yT. yunnanense (Dvorak
et al.1998a). Nunca se ha encontrado trigo hexaploide silvestre, solo una forma de
maleza semi-silvestre de trigo hexaploide descascarillado y quebradizo,T. tibetanum,ha
sido descubierto en el Tíbet (Shao et al.1983). Se acepta queT. aestivumse originó a
partir de un cruce entre emmer tetraploide de casco domesticadoT. dicoccon (o el trigo
duro que se trilla librementeT. duro,o la trilla libre
T. parvicoccum)y la hierba de cabraAegilops tauschii (DD) (Kihara1944; McFadden y Sears
1946; Kerber1964; Kislev1980; Dvorak et al.1998a; Matsuoka y Nasuda2004). Este cruce
debería haber tenido lugar después de que el cultivo de trigo duro o emmer se
extendiera hacia el este desde el Creciente Fértil hacia el área de distribución natural de
Ae. tauschii.La cruz ocurrió muy probablemente al sur o al oeste del Mar Caspio hace
unos 8.000 años (Nesbitt y Samuel1996; Salamini et al.2002; giles y marrón2006).
Aegilops tauschiiabarca varias variedades morfológicas que
se agrupan aproximadamente enAe. tauschiissp.tauschiiyAe. tauschiissp.estrangulada (Kihara

et al.1965; Jaaska1995; Dvorak et al.1998a). Varios estudios muestran que Ae. tauschiissp.
estranguladaproporcionó el genoma D del trigo (al menos dos veces), pero también se han
discutido las contribuciones de ambas subespecies (Nishikawa et al. 1980; Jaaska1981; Dvorak
et al.1998b; Talbert et al.1998). Si solo unos pocos Ae. tauschiiLos genotipos participaron en el
origen deT. aestivum,esta poliploidización debería haber ido acompañada de una reducción
de la diversidad (Haudry et al.2007). Sin embargo, las altas tasas de mutación, junto con los
efectos amortiguadores causados por la poliploidía, deberían permitir que el trigo
hexaploide mejore la diversidad (Dubcovsky y Dvorak2007).
Una cuestión importante aún sin resolver es el origen del trigo hexaploide descascarillado.
T. espeltao escrito (McFadden y Sears1946; Kuckuck y Schiemann1957; Cuckuck1959;
Nishikawa et al.1980; Dvorak et al.1998a; Salamini et al.2002; Blatter et al.2004). Se conocen
dos tipos de deletreos: los deletreos asiáticos y europeos. SiT. espeltaEl origen es monofilético
o polifilético todavía está abierto a debate (Nesbitt y Samuel1996; Dvorak y Luo2001; Blatter et
al.2004). Los datos genéticos sugieren que los trigos hexaploides descascarillados son más
primitivos que las formas de trilla libre. Sin embargo, esta hipótesis no está respaldada por
hallazgos arqueológicos porque las formas de trilla libre ocurrieron antes que las
descascarilladas. El trigo descascarillado apareció en Europa central a principios de la Edad del
Bronce (resumido en Nesbitt2002) y restos de 7.000 años de antigüedad se encuentran en el
norte de Irak (Kislev1984). Trigo de trilla, por su parte, se ha encontrado en Can Hassan III con
una antigüedad de 8.500 años (Hillman 1978) y en el Cafér Höy€uk que data de hace
8000-9000 años (resumido en Salamini et al.2002). El origen del trigo hexaploide descascarado
sigue siendo controvertido.
3.2 Evolución y domesticación de la cebada
Ordeum vulgare (cebada) fue domesticado a partir de su progenitor salvajeH.

espontaneo.Al igual que los trigos, la cebada pertenece a los cultivos más antiguos e
importantes del Creciente Fértil (Takahashi1955; Jaaska1998; Zohary y Hopf2000; Badr et
al. 2000; Bothmer von et al.2003; Pourkheirandish y Komatsuda2007). Las variedades de
cebada son de dos hileras o de seis hileras, según el tipo de mazorca. La especie es más
tolerante a la sequía y mucho más tolerante a la sal que el trigo. El cultivo fue muy
importante en algunas regiones del Creciente Fértil, el cultivo principal en Mesopotamia
y un cereal primario en el antiguo Egipto (Harlan1995).
Se han encontrado granos de cebada silvestre en varios sitios preagrícolas del Neolítico
anterior a la cerámica. La evidencia más temprana es de Ohalo II, ubicado en la costa del Mar
de Galilea, donde se encontraron grandes cantidades de restos silvestres de 21,000 años de
antigüedad (Kislev et al.1992). Esto respalda la conclusión de que la cebada silvestre se ha
recolectado de la naturaleza mucho antes de la domesticación. Los primeros restos
carbonizados de cebada domesticada son del tipo de dos hileras (van Zeist1970; Hillman et al.
1989), pero los tipos de seis hileras ya aparecen en Ain Ghazal hace unos 9000-8500 años
(Rollefson et al.1985; Willcox1998). La cebada domesticada luego se extendió con
156 B.Kilian et al.
otros cultivos a través del Mediterráneo hacia Europa y África, y hacia el este a través de
Irán y Afganistán hacia India y China.
cebada silvestreH. espontaneotiene una distribución más amplia que cualquier trigo
silvestre. Está presente en todo el Creciente Fértil porque la especie es colonizadora de
hábitats agrícolas alterados. La especie se encuentra en el Mediterráneo oriental y Asia
occidental y llega a Turkmenia y Afganistán en el este (Harlan y Zohary1966). Algunas
poblaciones de cebada silvestre también se encuentran en hábitats secundarios como
Marruecos y Abisinia.
Se han invertido estudios considerables para estudiar la diversidad de la cebada e
identificar la región de domesticación de la cebada. Badr et al. (2000) informaron
originalmente la naturaleza monofilética de la domesticación de la cebada basándose en
frecuencias alélicas en 400 loci polimórficos AFLP estudiados en 317 líneas silvestres y 57
domesticadas. Las poblaciones silvestres de Israel-Jordania eran más similares que cualquier
otra al acervo genético domesticado. Los resultados apoyaron la hipótesis de que el área de
Israel-Jordania era la región en la que se cultivó la cebada. Además, el alelo diagnóstico I del
gen homeoboxBKn-3 [Anudado-1-como-homeobox (Knox)clase de gen], que rara vez, pero
casi exclusivamente, se encuentra en IsraelH. espontaneo,fue omnipresente en las variedades
locales occidentales y en las variedades cultivadas modernas. En las variedades locales del
Himalaya y la India, laBKn-3prevalece el alelo IIIa, lo que indica que se ha producido una
sustitución alélica durante la migración de la cebada desde el Creciente Fértil hacia el sur de
Asia. Por lo tanto, el Himalaya puede considerarse una región de diversificación de cebada
domesticada. Otros informes apuntan a más sitios de domesticación y a diferentes orígenes
(Schiemann1939; Åberg1940; Bekelé1983; Molina-Cano et al.1987; Zohary y Hopf2000; Molina-
Cano et al.2005; Morell y Clegg2007; Orabi et al.2007; Azhaguvel y Komatsuda2007; Saisho y
Purugganan2007). Allaby y Brown (2003,2004) cuestionaron el uso de marcadores AFLP en
estudios filogenéticos que abordan la domesticación de cultivos. Posteriormente, Salamini et
al. (2004) citó varias docenas de artículos que abordaron correctamente los problemas de
domesticación basados en marcadores AFLP.
Los estudios basados en marcadores moleculares que comparan la cebada silvestre con la
domesticada han demostrado que se ha perdido una gran cantidad de diversidad de nucleótidos en
las variedades domesticadas actuales (Russell et al.2004; Caldwell et al.2006; Kilian et al.2006; Morell
y Clegg2007). Kilian et al. (2006) determinado, para una muestra representativa de 20 cebadas
domesticadas (vulgare)lineas y 25 comodinesH. espontaneo líneas, los haplotipos en siete loci –Adh2,
Adh3, Amy1, Dhn9, GAPDH, PEPC,y DE CERA.El número de haplotipos, la diversidad de nucleótidos
promedio,pag,y el theta de Watterson en sitios silenciosos se redujo en líneas domesticadas. dos
lugares,amy1yPEPC, eran monomórficos en líneas domesticadas, mientras queamy1yGAPDHprodujo
valores significativos de Tajima's D cuando se consideraron todas las líneas domesticadas y
silvestres. EnGAPDH,pagfue ligeramente mayor en las formas domesticadas que en las silvestres,
debido a los haplotipos divergentes de alta frecuencia; para los seis loci restantes, el 87% de la
diversidad de nucleótidos se ha perdido en las formas domesticadas. Los cuellos de botella que
actúan sobre los loci que evolucionan de forma neutral, ya sea durante el proceso de domesticación
o durante la reproducción posterior, o ambos, son suficientes para explicar la diversidad reducida y
los resultados de la prueba de Tajima, sin necesidad de evocar la selección en estos loci.
Se demostró que las variedades domesticadas consideradas, aunque todas las muestras se
encontraban entre las que se cultivan actualmente en Turquía, comparten la misma variabilidad
molecular y morfológica que muestras más grandes de genotipos de cebada, lo que indica que las
conclusiones reportadas son de valor general para este cultivo.
Datos recientes han concordado con la conclusión de que los genotipos de dos y seis
hileras pueden tener orígenes diferentes e independientes (Zohary y Hopf2000; Kilian et al.
2006; Komatsuda et al.2007). Sin embargo, estos nuevos hallazgos están de acuerdo con el
área previamente inferida de domesticación de cebada en el valle del Jordán (Badr et al.2000).
Los nuevos datos abren la posibilidad de que la domesticación de la cebada haya ocurrido de
forma independiente en ocasiones separadas. Esta conclusión no sería consistente con las
conclusiones de Badr et al. (2000), pero se ve favorecido por otros autores, entre ellos Molina-
Cano et al. (2005), Kolodinska Brantestam et al. (2004), Casas et al. (2005), Tanno y Takeda (
2004); Komatsuda et al. (2004), Taketa et al. (2004), y Komatsuda et al. (2004). Sin embargo, el
asunto particular relacionado con los orígenes únicos versus múltiples de la cebada se
complica por el hecho de que: (1) múltiples introgresiones independientes de genes de
parientes silvestres a variedades cultivadas pueden imitar múltiples eventos de domesticación
(Badr et al.2000; Kanazin et al.2002; Abdel-Ghani et al.2004); y (2) la división de genotipos
domesticados en dos grupos alternativos basados en mazorcas de dos o seis hileras,
cariópside sin cáscara o desnuda, variedades occidentales u orientales y la fragilidad del
raquis podría haber seguido el proceso de domesticación, en lugar de ser coetáneo con él .
4 Conclusiones y Consideraciones Finales
La evidencia arqueológica y genética indica que la agricultura occidental comenzó en el

Creciente Fértil hace unos 12.000 años (Zohary y Hopf2000; Kilian et al.2009). La opinión actual
es que el proceso de domesticación de los cultivos fue lento, abarcó varios siglos e implicó
repetidos eventos de domesticación (Tanno y Willcox 2006). Las poblaciones locales de trigo
silvestre fueron domesticadas en un “área central” del Creciente Fértil y luego se dispersaron
gradualmente por toda la región (Abbo et al.2006). Casi todos los modelos de domesticación
actuales predicen una reducción en la diversidad genética en formas domesticadas en
comparación con sus progenitores salvajes (Doebley et al. 2006). Sin embargo, el trabajo
reciente de Kilian et al. (2007b) con trigo escanda salvaje y domesticado no muestra una
reducción de la diversidad que pudiera atribuirse al proceso de domesticación, lo que plantea
la cuestión de si la inferencia anterior de "cuellos de botella de domesticación" en otros
cereales podría ser en realidad cuellos de botella de reproducción.
Las claves para obtener conocimientos más profundos sobre la domesticación de plantas son
varias. En primer lugar, se necesitan colecciones de referencia de germoplasma integrales que
cubran toda el área de distribución de cada especie, lo que significa que los hábitats naturales de los
progenitores silvestres en todo el Creciente Fértil deben muestrearse más a fondo. Los estudios de la
genética de la domesticación deben abarcar muchas accesiones silvestres y domesticadas para cada
especie, de lo contrario, los efectos del muestreo pueden sesgar gravemente los resultados. Si el
objetivo es identificar a los parientes más cercanos entre los progenitores silvestres, el
158 B.Kilian et al.
la diversidad y, en el caso de la escanda, la estructura genética previamente no reconocida del

acervo genético silvestre debe evaluarse con precisión. Con la nueva generación de
tecnologías de secuenciación de alto rendimiento en la mano (Goldberg et al.2006; Mimbre et
al.2006), cabe esperar que se acelere el ritmo de progreso. Desde una perspectiva más
práctica, es necesario desarrollar continuamente nuevos recursos genómicos para el
fitomejoramiento futuro, y también es necesario aislar genes importantes desde el punto de
vista agronómico de las reservas genéticas silvestres, y está claro que tales actividades
implicarán consorcios internacionales. Se necesita una mejora continua de los métodos
analíticos que aborden los problemas de domesticación basados en modelos matemáticos y
estadísticos (Pluzhnikov y Donnelly1996; Thuillet et al.2005; Haudry et al.2007; Allaby et al.
2008), así como otras campañas de excavación en diferentes sitios arqueológicos del Creciente
Fértil, como Göbekli Tepe o Jerf el Ahmar (Schmidt2001; Neef 2003; Schmidt2006; Willcox et al.
2008). En un futuro no muy lejano, podemos esperar nuevos conocimientos sobre cómo los
humanos realizaron el experimento de reproducción más importante de la historia 10
milenios antes del descubrimiento de la genética.
Expresiones de gratitudAgradecemos a Sigi Effgen, Isabell Fuchs, Jutta Sch€utze, Charlotte Bulich y Marianne
Haberscheid por su excelente asistencia técnica y Margit Pasemann, Birgit Thron, Marianne Limpert, Elke
Bohlscheid y Katiuscia Ceron por su apoyo administrativo durante los últimos años. Agradecemos a las
instalaciones de secuencia MPIZ (ADIS) encabezadas por Bernd Weisshaar. Agradecemos a Maarten
Koornneef, George Coupland, Moshe Feldman, Andrea Brandolini, Klaus Schmidt (DAI) y Andreas Graner por
sus valiosas sugerencias. Esta investigación fue apoyada por la Deutsche Forschungsgemeinschaft SPP 1127.
Lista de nuestras publicaciones resultantes del SPP 1127
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Cuantificación de relaciones genéticas entre genomas A de trigos. Genoma 49:
297–305
Conferencias invitadas y datos presentados del SPP 1127
05/2003 Bad Honnef, DFG SPP1127 “Radiaciones: orígenes de la diversidad biológica”

09/2003 Wernigerode, DFG SPP1127 “Radiaciones: orígenes de la diversidad biológica” Bad
05/2004 Honnef, DFG SPP1127 “Radiaciones: orígenes de la diversidad biológica”
07/2005 Universidad de Cukurova, Adana, Turquía
08/2005 Universidad Estatal de Udmurtia, Izhevsk, Rusia
09/2005 Bad Honnef, DFG SPP1127 “Radiaciones: orígenes de la diversidad biológica” MPIZ
09/2005 Colonia
10/2006 5. Reuniones europeas de genómica vegetal, Venecia, Italia
08/2007 MPIZ Colonia
11/2007 IPK Gatersleben
01/2008 Universidad Kassel
04/2008 Systematics 2008, Göttingen, dos charlas
06/2008 Bad Honnef, DFG SPP1127 “Radiaciones: orígenes de la diversidad biológica”
06/2008 Conferencia EPSO 2008, Toulon, Francia
09/2008 Harlan II (Biodiversidad en la agricultura: domesticación, evolución y sostenibilidad)
Universidad de California, Davis, EE. UU.
10/2008 GPZ Göttingen (Sociedad Alemana de Fitomejoramiento), Kurt-von-R€Simposio de umker
10/2008 Universidad de Halle, Departamento de Botánica
Conferencias asistidas y datos presentados del SPP 1127
10/2006 5. GEM de plantas Venecia, Italia Conferencia

04/2007 Aaronsohn-ITMI, Tiberíades, Israel Systematics
04/2008 2008, Göttingen, Alemania Conferencia EPSO 2008,
06/2008 Toulon, Francia Harlan II, EE. UU. Davis, California,
09/2008 EE. UU.
10/2008 Simposio GPZ “Biodiversidad en la Producción Vegetal” (Sociedad Alemana de
Cría), Göttingen, Alemania
160 B.Kilian et al.
Colaboraciones Frutas del SPP 1127
Ozkan H,Departamento de Cultivos de Campo, Universidad de Cukurova, Adana, Turquía

Coupland G y von Korff M,Instituto Max Planck para la Investigación de Fitomejoramiento,
Colonia, Alemania
pillén k,Departamento de Fitomejoramiento, Universidad Martin Luther Halle-Wittenberg,
Halle, Alemania
Brandolini A.yvacuna p,CRA-Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura,
S. Angelo Lodigiano, Italia
david j,DIAPC Montpellier Supagro, Francia
Badaeva E.yKonovalov F,Instituto NI Vavilov de Genética General, Moscú,
Rusia
Blattner F.yjakob s,IPK Gatersleben
Walter A,Grupo Regional sobre el Clima, Centro de Ciencias de la Tierra, Universidad de Göteborg,
Suecia
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Parte II
Interacción huésped-planta
Mecanismos de especiación en plantas-hormigas del
género del sudeste asiáticomacaranga
(Euphorbiaceae)
Kurt Weising, Daniela Guicking, Christina Fey-Wagner, Tim Kröger-Kilian, Tina

Wöhrmann, Wiebke Dorstewitz, Gudrun B.€Anfer, Ute Moog, Miriam Vogel,
Christina Baier, Frank R. Blattner y Brigitte Fiala
AbstractoEl género paleotrópicoMacarango (Euphorbiaceae) es un excelente sistema modelo para

analizar los procesos coevolutivos asociados con el mirmecofitismo, una interacción mutualista entre
plantas y hormigas. Plantas de hormigas comomacaranga proporcionan espacio para anidar y
alimentar a sus compañeros, mientras que las hormigas protegen las plantas de herbívoros y
competidores como las lianas. Usamos evidencia basada en el genoma para investigar los
mecanismos de especiación enmacarangahormigas y su coevolución con hormigas del género
Crematogaster.Nuestro trabajo anterior había demostrado que myrmecophyticmacarangalas
especies muestran poca diferenciación genética, lo que sugiere una radiación adaptativa.
Presumimos que la simbiosis obligatoria con las hormigas puede reducir el flujo de genes entre las
poblaciones de plantas, lo que eventualmente mejorará la especiación alopátrica. Para probar esta
hipótesis, verificamos la monofilia de los linajes de plantas investigados mediante análisis
filogenéticos, reconstruimos redes de parsimonia basadas en la variación del ADN del cloroplasto
(cpDNA) y evaluamos los parámetros genéticos de la población utilizando microsatélites nucleares y
haplotipos de cpDNA. Nuestros datos proporcionaron evidencia de eventos vicariantes, así como de
hibridación e introgresión de cpDNA entre especies estrechamente relacionadas.macarangaespecies.
El grado de diferenciación de la población dentro de las especies mirmecófitas frente a las no
mirmecófitas demostró estar en un rango similar, lo que indica que nuestra hipótesis de trabajo de
especiación alopátrica mejorada en las mirmecófitas no puede sostenerse con la presente evidencia.
Sin embargo, las interacciones mutualistas demacarangay las hormigas asociadas pueden ser una
innovación clave que abrió una zona de adaptación supuestamente explotada por la divergencia de
macaranga.
K. Weising (*), D. Guicking, C. Fey-Wagner, T. Kröger-Kilian, T. Wöhrmann, W. Dorstewitz,

GB€anfer, U. Moog y M. Vogel
Plant Molecular Systematics, Universidad de Kassel, 34109 Kassel, Alemania Correo
electrónico: weising@uni-kassel.de
C. Baier y FR Blattner
Instituto Leibniz de Genética Vegetal y Ciencia de Cultivos (IPK), 06466 Gatersleben, Alemania
B. Fiala
Ecología Animal y Biología Tropical (Zoología III), Biocenter, Universidad de W€urzburgo, 97074 W€
Urzburgo, Alemania

170 K.Weising et al.
1 Introducción
1.1 Coevolución en asociaciones mutualistas: un desafío para

la biología evolutiva
Uno de los objetivos fundamentales de la biología evolutiva es una comprensión más

profunda de los factores que determinan la diversidad de los organismos. La hipótesis
ecológica de la especiación es que el aislamiento reproductivo finalmente evoluciona como
consecuencia de la selección divergente de rasgos entre ambientes (Schluter2000). Las
interacciones ecológicas entre especies son particularmente relevantes a este respecto
(Rundle y Nosil2005), y bien podría pertenecer a las principales fuerzas impulsoras de la
diversificación y especialización entre organismos. Las asociaciones mutualistas y simbióticas
se han considerado factores importantes para la creación de biodiversidad, especialmente en
los trópicos (Schemske2002). Sin embargo, con algunas excepciones recientes (p. ej., Elias et
al. 2008), la dinámica coevolutiva de las interacciones mutualistas ha recibido
comparativamente poca atención y sigue siendo poco explorada (Herre et al.1999; heil y
mckey2003).
Los sistemas en los que los grupos de especies coevolucionan a menudo son complicados, pero
tienen la ventaja inherente de que se pueden probar simultáneamente múltiples mecanismos de
especiación relacionados. Un sistema adecuado para este tipo de estudios está formado por las
denominadas mirmecófitas, es decir, plantas que son habitadas permanente y regularmente por
hormigas (Davidson y McKey1993; Jolivet1996). Las relaciones hormiga-planta mirmecófitas son
constituyentes comunes de los ecosistemas de los bosques tropicales y, por lo general, son
mutualistas.
1.2 Radiación en ambos lados de una interacción mirmecofítica:

laMacaranga-CrematogasterSistema
El sistema de hormigas y plantas más prominente en el sureste de Asia consiste en el gran género
Macarango (Euphorbiaceae) y sus múltiples asociaciones con hormigas del géneroCrematogastery
Camponoto (Fiala et al.1989,1999; davies2001). macarangacomprende alrededor de 280 especies con
un rango que se extiende desde África occidental hacia el este hasta las islas del Pacífico sur
(Whitmore1975,mil novecientos ochenta y dos,2008).macaranga Las especies son árboles o arbustos
dioicos con hojas grandes y, a menudo, estípulas conspicuas (Fig.1a–d). Muchos de ellos son árboles
pioneros de rápido crecimiento. Las inflorescencias consisten en numerosas flores pequeñas y
discretas que comúnmente son visitadas por trips, que parecen ser los principales polinizadores
(Moog et al.2002; Moog2002; Higo.1g). Los frutos son cápsulas (Fig.1e) que dehiscen en la madurez,
exponiendo semillas ariladas pequeñas y a menudo coloridas consumidas por aves y pequeños
mamíferos que presumiblemente actúan como agentes de dispersión primarios.
Mecanismos de especiación en las hormigas-plantas del sudeste asiático 171
a b
mi
F
gramo
Figura 1 (a)hábito deM. pearsonii. (b)hojas peltadas deM. gigantea. (C)Plántula deM. hypoleuca en la etapa de
colonización. (d)estipulaciones deM. indistinta. (mi)Cápsulas dehiscentes deM. hypoleuca exposición de
semillas ariladas. (F)mirmecodomatium deM. pearsoniimostrando hormigas obreras, larvas y cóccidos
simbióticos. (gramo)Parte de la inflorescencia femenina deM. hullettiicon trips
Dentromacaranga,Existe un amplio espectro de diferentes mutualismos entre hormigas y plantas. Mientras que
el néctar extrafloral y/o los cuerpos alimenticios ricos en nutrientes producidos por especies no mirmecófitas atraen a
varias hormigas oportunistas, las mirmecófitas obligadas también ofrecen espacio de anidación (llamado domatia)
para hormigas asociadas específicas que viven exclusivamente en estas plantas.
(Fiala y Maschwitz)1991,1992a,b; Higo.1f). En las mirmecófitas obligadas, las hormigas también

cosechan melaza producida por cochinillas que se mantienen dentro de los entrenudos (Heckroth et
al.1998; Higo.1f). A cambio de la provisión de alimentos y sitios de anidación, las hormigas
compañeras protegen eficazmente a sus plantas hospedantes contra el daño de los herbívoros, la
competencia de las trepadoras (Fiala et al.1989), y aparentemente también contra la infección por
hongos (Heil et al.1999,2001a). Los experimentos a largo plazo en condiciones de campo han
demostrado que obligarmacarangalos mirmecófitos no sobreviven en ausencia de su pareja (Heil et
al.2001b). Además, nunca se han encontrado hormigas compañeras específicas anidando fuera de
sus plantas, lo que sugiere que ambas compañeras dependen mucho una de la otra.
Con unos 30 mirmecófitos obligados,macarangaes el único género en el paleotrópico que
exhibe una radiación sustancial de hormiga-plantas (Whitmore1975; davies2001). Los árboles
filogenéticos basados en análisis de secuencias del espaciador transcrito interno (ITS) del
ADN ribosómico nuclear mostraron que los mirmecófitos se limitan principalmente a dos
clados, que corresponden a seccionespaquistemony pruinosas,respectivamente (Blattner et al.
2001; Davis et al.2001). Solo unos pocos miembros de estas secciones no están habitados por
hormigas. Los árboles ITS también mostraron una buena congruencia con los árboles basados
en datos morfológicos (Davies et al.2001). Una característica llamativa del conjunto de datos
ITS fue la alta similitud de secuencia entremacarangaespecies, especialmente dentro de la
secciónPaquistemón.Esta estrecha relación genética contrastaba fuertemente con las
marcadas diferencias ecológicas y morfológicas entre los miembros de estas secciones. Por lo
tanto, planteamos la hipótesis de que la falta de diferenciación genética podría ser
consecuencia de una radiación rápida y relativamente reciente demacarangaen hábitats
pioneros.
En menor escala, la radiación también ha ocurrido en el lado de las hormigas, donde al
menos ocho (morfo)especies distintas decrematogaster,subgénerodecacrema,se descubrió
que colonizabanmacarangamirmecófitos (Fiala et al.1999; Feldhaar et al., este volumen).
Además, uno noDecacremahormiga y tres especies deCamponotoestán involucrados
(Maschwitz et al.1996,2004). ObligarmacarangaLas mirmecófitas y sus hormigas compañeras
están restringidas a las selvas tropicales estacionales y siempre húmedas de la península de
Malaca, Sumatra y Borneo (Fig.2). Debido a la continua disminución de los bosques primarios
en estas regiones, bosques mirmecófitos y no mirmecófitos.macarangalos pioneros ahora
dominan con frecuencia el paisaje a lo largo de los caminos, ymacarangase ha convertido en
uno de los géneros de árboles más abundantes en las áreas explotadas.
Los diversos tipos de interacción hormiga-planta en elmacarangaEl complejo y la radiación de
ambos socios ofrecen un sistema modelo excepcional para estudiar la evolución del mirmecofitismo
y la especiación en interacciones mutualistas. En nuestro trabajo anterior que se remonta a
principios de la década de 1990, recopilamos datos detallados sobre los rasgos de las plantas que
presumiblemente son adaptativos con respecto a la asociación de hormigas. Estos incluyen, por
ejemplo, los números relativos y los contenidos químicos de los cuerpos de los alimentos (Heil et al.
1997,1998; Fiala y Maschwitz1992b), las características de los nectarios extraflorales y domatia (Fiala
y Maschwitz1991;1992a), cubierta de cera de las plantas (Federle et al.1997), y la aparición de zonas
delgadas preformadas del tallo (prostomas) que facilitan el establecimiento de colonias de hormigas
(Federle et al.2001). Muchos de estos rasgos muestran diferencias interespecíficas que son
coherentes con su uso diferencial por parte de las hormigas y, por lo tanto, podrían apuntar a
diferentes presiones selectivas ejercidas por las hormigas.
95° 100° 105° 110° 115°

10° 10°
Sabah 5° 5°
malayo Brunéi
al
ng ntr
Península
Ra a ce
o
Sarawak
ñ
Este
nta
Kalimantán
Mo
0° 0°
Sumatra Borneo
pruinosas
M. gigantea
M. Pruinosa
Java M.hosei
M. pearsonii
M. pubérula
100° 105° 110° 115°
95° 100° 105° 110° 115° 95° 100° 105° 110° 115°
10° 10° 10°
5° 5° 5° 5°
0° 0° 0° 0°
paquistemon,
bancana-group
M. griffithiana
5° 5°
m. motleyana
M. glandibracteolata
m bancana
paquistemon, M. hulletil
grupo hipoleuca M. indistinta
M. hypoleuca M.angulata
m.beccariana
100° 105° 110° 115°
M. depresa 100° 105° 110° 115°
Figura 2Patrones de distribución demacarangaespecie de secciónpruinosasy de labancanay

hipoleucagrupos de secciónpaquistemon,analizada en el presente estudio. Las localidades se dibujan
de acuerdo con la información de Davies (2001), el Herbario Nacional de los Países Bajos, Leiden, y
observaciones propias
(ver Feldhaar et al., este volumen). El grado de especificidad de la colonización no es

absoluto y varía entre especies de ambos lados (Fiala et al.1999). La pregunta es si estas
asociaciones fueron recíprocamente adaptativas o simplemente abrieron un nuevo
entorno para ambos socios en el que era posible una radiación.
1.3 Objetivos de nuestro estudio
Para arrojar luz sobre la evolución de laMacaranga-Crematogastersistema e investigar si

y cómo las hormigas asociadas podrían haber promovido la especiación en su
macarangaplantas hospederas, iniciamos una serie de estudios filogenéticos,
filogeográficos y de genética de poblaciones en ambos lados de la interacción. Nos
enfocamos en tres temas principales:
1. Para verificar la monofilia de los grupos radiantes, nuestro primer objetivo fue reconstruir
filogenias moleculares confiables para plantas y hormigas. Estos ya están disponibles.
Insecto.2, describimos cómo los árboles moleculares nos permitieron definir los grupos de
especies relevantes para estudios más detallados, y cómo las filogenias nos permitieron
comparar los patrones de la historia evolutiva de ambos socios. En particular, nuestro objetivo
era resolver la cuestión de si la interacción entre las hormigas y las plantas puede explicarse
mejor mediante una coespeciación estricta o mediante la coadaptación y los frecuentes cambios
de huésped.
2. La hibridación entre especies estrechamente relacionadas es común en las plantas y tuvo que ser
considerada como un posible mecanismo de especiación. La evidencia de nuestros análisis
preliminares sugirió que estrechamente relacionadosmacarangalas especies están conectadas
por el flujo de genes (Vogel et al.2003). Por lo tanto, nuestro objetivo fue evaluar con más detalle
qué roles podrían haber jugado la hibridación y la evolución reticulada durante la evolución de
macaranga.Los resultados de estos estudios se resumen en la Secc.3.
3. Una pregunta principal de nuestro estudio indagó sobre las influencias recíprocas que las
hormigas y las plantas pueden ejercer sobre la evolución de sus respectivas parejas. ¿Podrían las
hormigas impulsar la diversificación de los rasgos de las plantas mediante la selección disruptiva
de los rasgos adaptativos? ¿O las hormigas ejercen un impacto negativo en la capacidad de
dispersión de sus plantas anfitrionas, debido a la necesidad de encontrarse con los socios
apropiados en un nuevo sitio de colonización? Insecto.4, resumimos cómo se probaron estas
hipótesis mediante análisis genéticos comparativos de mirmecofíticos y no mirmecófitos.
macaranga especies.
2 ¿Qué nos dice la filogenia sobre el

Macaranga-Crematogaster¿Co-evolución?
2.1 Monofilia demacarangaSecciones y Grupos

Subseccionales con Myrmecophytes
Un requisito previo importante para comprender la historia evolutiva de cualquier mutualismo

es la disponibilidad de filogenias sólidas de los organismos que interactúan. Como primer
paso para evaluar la coevolución de hormigas y plantas en elMacaranga-Crematogaster
sistema, nuestro objetivo era establecer una filogenia sólida demacarangamyrmecophytes y
sus parientes más cercanos. Por lo tanto, complementamos nuestros árboles ITS anteriores
(Blattner et al.2001) con análisis de polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados
(AFLP; B€Anfer et al.2004) y redes de secuencias de ADN de cloroplasto no codificante (Vogel
et al.2003; B€Anfer et al.2006). Nuestros socios de cooperación en la Universidad de W han
realizado un trabajo filogenético complementario en el lado de las hormigas.€Urzburg
(Feldhaar et al.2003a; y ver Feldhaar et al., este volumen).
Se logró un patrón general de relaciones similar al del análisis ITS, pero con una
resolución mucho mejor en un estudio AFLP (B€Anfer et al.2004; Higo.3), que apoyó con
fuerza la monofilia de cada una de las seccionespaquistemon yPruinosae.Además, se
identificaron cuatro grupos bien definidos y claramente monofiléticos.
Fig. 3Árbol de unión de vecinos de 108macarangaespecímenes basados en 426 posiciones de banda

obtenidas con ocho combinaciones de pares de cebadores AFLP. El Nei y el Li (1979) índice de similitud se
utilizó para generar la matriz de distancia subyacente.Númerossobre elsucursalesrepresentan los valores de
arranque obtenidos de 1000 repeticiones. Los especímenes mirmecófitos están indicados porsombreado
negrodel barra verticalhaciabiendel dendrograma. La presencia frente a la ausencia de cera superficial se
indica mediantenegroversussímbolos blancos.Figura adoptada de B€Anfer et al. (2004), con permiso
resuelto dentro de la secciónpaquistemon,al que nos referimos como elbancana,

kingii, hipoleucaypunticuladagrupos, respectivamente (B€Anfer et al.2004; Higo.3).
Dentro de la secciónpruinosas,el no mirmecofitoM. giganteaera hermana de un
clado que contenía los myrmecophytesM. pruinosa, M. hosei, M. rufescens, M.
pearsonii,yM. pubérula (Higo.3). La monofilia de secciónWinklerianae, incluyendo
sólo dos especies mirmecófitas,Winkleriy la rara y estrecha endémicaM.winkleriella,
permaneció ambiguo en todos los estudios (ver también Kulju et al. 2007). Redes
de parsimonia estadística de haplotipos de cloroplastos (Vogel et al. 2003; B€Anfer
et al.2006), que se discuten en detalle en la Secc.3, también admitió límites
seccionales y grupos subseccionales dentroPaquistemón.
Nuestros análisis filogenéticos proporcionaron buena evidencia de que el mirmecofitismo
evolucionó al menos dos veces, y presumiblemente incluso con más frecuencia enMacarango (
véase también Davies2001). Un origen independiente probablemente esté asociado con la
sección Winklerianae,una segunda con secciónpruinosas,un tercero conM. puncticulata de
secciónpaquistemon,y al menos un origen más dentro del resto de la sección rica en especies
paquistemon,donde el mirmecofitismo también parece haberse invertido una o varias veces.
Cada uno de estos linajes exhibe un conjunto característico de rasgos morfológicos
relacionados con el mirmecofitismo (Fiala y Maschwitz 1992a,b; Federle et al.1997,2001; Heil et
al.1997,1998; Feldhaar et al.2003b), y cada linaje también se caracteriza por un conjunto más o
menos específico de hormigas compañeras (Fiala et al.1999; Feldhaar et al. 2003b; vea abajo).
Por ejemplo, en especies habitadas por hormigas de la secciónpaquistemon,los tallos de las
plántulas se hinchan a unos 10 cm de altura y la médula se degrada automáticamente,
mientras que las especies mirmecófitas de sección pruinosastienen tallos sólidos que se
vuelven huecos a través de la excavación de las hormigas cuando alcanzan los 75 cm de altura.
2.2 La coadaptación y el cambio de anfitrión son determinantes

principales de laMacaranga-Crematogasterco-evolución
El resultado general de estudios anteriores sobre varias asociaciones entre hormigas y plantas es
que los mutualismos similares a menudo evolucionan de manera independiente, y que el cambio de
huésped dentro de los sistemas mutualistas establecidos es más común que la coespeciación
(Davidson y McKey).1993; Ayala et al.1996; Chenuil y McKey1996; Brouat et al. 2001). Aparentemente,
la misma situación se aplica a laMacaranga-Crematogaster sistema también. Una comparación
directa reveló que las filogenias de las plantas y las hormigas no son del todo congruentes entre sí, lo
que sugiere fuertemente un escenario de cambio de huésped, es decir, la colonización repetida de
plantas que comparten caracteres similares relacionados con las hormigas por parte de hormigas
preadaptadas (Feldhaar et al.2003a,b; véase también Quek et al.2004). Este tema es tratado en
detalle por Feldhaar et al. (este volumen). Por lo tanto, si bien es probable que sea demasiado pronto
para un concepto generalizado, parece que la coevolución en los sistemas mirmecófitos se produjo
predominantemente por un cambio de huésped facilitado debido al ajuste ecológico de los socios
preadaptados, en lugar de la coespeciación y la descendencia común.
3 ¿Qué roles jugaron la hibridación y la evolución

reticulada durante la evolución de¿Macaranga?
3.1 Primeras indicaciones de flujo génico interespecífico enmacaranga
Si la hibridación interespecífica es un mecanismo importante que genera diversidad biológica

ha sido durante mucho tiempo un tema de controversia. Recientemente, Seehausen (2004)
abogó por un papel de la hibridación en las radiaciones adaptativas. La falta de diferenciación
genética entre especies estrechamente relacionadas dentro de la secciónpaquistemony, en
menor medida, también dentro de la secciónpruinosascomo lo revelan nuestros estudios
filogenéticos sugirieron que los procesos de especiación en myrmecophyticmacaranga
ocurrido recientemente. Esta observación planteó dos preguntas: (1) Están estrechamente
relacionadasmacarangaespecies todavía conectadas por el flujo de genes? (2) ¿Ha jugado un
papel la evolución reticular en la evolución de¿Macaranga?
En experimentos preliminares, encontramos que los haplotipos de cloroplastos a veces se
compartían entremacarangaespecies que crecen en la misma región geográfica (Vogel et al.
2003). Este fue principalmente el caso en elbancanagrupo de sección paquistemon,donde las
especies también parecían estar genéticamente más estrechamente relacionadas (Blattner et
al.2001). Se ha detectado una asociación de haplotipos de cloroplastos con regiones
circunscritas geográficamente en lugar de límites taxonómicos en muchos otros taxones de
plantas (por ejemplo, McKinnon et al.2001), incluyendo géneros de árboles tropicales como
litocarpo (Cañón y Manos2003). Dichos patrones generalmente se explican por una
clasificación de linaje incompleta o, más frecuentemente, por la "captura de cloroplastos"
como consecuencia de la hibridación interespecífica y el retrocruzamiento sucesivo de un
híbrido primario con el padre del polen. Concluimos de nuestros primeros experimentos que
las unidades del flujo de genes del cloroplasto pueden exceder los límites de las especies en
macaranga, y que sería necesario un muestreo taxonómico más denso, así como un muestreo
más completo de las poblaciones, para descubrir la estructura filogeográfica de especies
estrechamente relacionadas (ver también Jakob y Blattner2006).
3.2 Desarrollo de marcadores para analizar los límites de las

especies y el flujo de genes entremacarangaEspecies
Para investigar el papel que puede haber jugado el flujo de genes interespecíficos en la
evolución de myrmecophyticmacaranga,iniciamos un análisis comparativo filogeográfico y de
genética poblacional basado en cloroplastos y marcadores nucleares (ver Schaal et al.1998).
Para el análisis filogeográfico, adoptamos con éxito el enfoque de "cebador de microsatélites
de cloroplasto de consenso" (ccmp) de Weising y Gardner (1999), y también secuenció elatpB-
glóbulos rojosEspaciador L (Vogel et al.2003; B€Anfer et al.2006). La variación en los loci diana
se identificó mediante secuenciación o mediante análisis de secuenciación de un solo
nucleótido (SNS), con detalles proporcionados en Guicking et al. (2008). Los haplotipos de
cloroplastos se definieron a partir de la información combinada en varios
loci, y se utiliza para construir redes de parsimonia estadística en un procedimiento de dos pasos
(para más detalles, consulte B€Anfer et al.2006). Para los análisis genéticos de población, se
desarrollaron 16 marcadores de microsatélites nucleares altamente polimórficos a partir de cinco
macaranga especies (Guicking et al.2006; Baier et al.2009). La mayoría de estos marcadores
mostraron una buena transferibilidad entre especies y demostraron ser herramientas útiles para los
análisis genéticos de poblaciones en más de unmacarangaespecies.
3.3 Evidencia de introgresión y clasificación de linaje incompleto

entremacarangahormiga-plantas
Para definir las entidades taxonómicas entre las que puede ocurrir la introgresión, y para
crear una guía para estudiar especies individuales o grupos de especies estrechamente
relacionados, primero examinamos la diversidad haplotípica en los tresmacarangasecciones
que albergan mirmecófitos (B€Anfer et al.2006). En el análisis se incluyeron 143 individuos
pertenecientes a 41 especies que cubrían todos los principales linajes evolutivos dentro de
macarangaseccionesPachystemon, Pruinosae,yWinklerianae.Se obtuvieron un total de 88
haplotipos de cloroplastos y se usaron para construir una genealogía de cloroplastos
extendida. En la red mostrada en la Fig.4, las tres secciones están bien separadas entre sí, así
como de los grupos externos. Dentro de la secciónpaquistemon,dos de los cuatro grupos de
especies definidos por nuestro estudio AFLP anterior (es decir, elreyiigrupo y elhipoleuca
grupo; B€Anfer et al.2004; ver figura3) también formó distintas ramas en la red cpDNA,
mientras que elpunticuladaEl grupo estaba anidado dentro delbancanagrupo.
El resultado más sorprendente de este estudio fue que, en elbancanagrupo, los haplotipos
de cloroplastos a menudo se compartían entre especies, y esas relaciones de haplotipos a
menudo seguían patrones geográficos en lugar de taxonómicos. Por lo tanto, los haplotipos
de cloroplastos en este grupo se dividieron en tres ramas definidas geográficamente,
independientemente de la asignación de especies y el estado de mirmecofitismo. El grupo I
comprendía casi todos los especímenes de Sabah, todas las muestras del grupo II se habían
recolectado en Sarawak, Brunei y Kalimantan Oriental, y el grupo III contenía exclusivamente
material de la Península Malaya (Fig.4). Debido a un número limitado de muestras, no fue
posible decidir si el mismo patrón geográfico también ocurrió en los otros grupos
taxonómicos demacaranga.Por lo tanto, decidimos ampliar nuestro muestreo de la sección
pruinosasy la subsecciónhipoleucagrupo de sección Paquistemón.
En la secciónpruinosas,Se identificaron un total de 49 haplotipos de cloroplastos diferentes

entre 768 especímenes de cinco especies, incluidas muestras del norte y el este de Borneo
(Sabah, Brunei y Kalimantan Oriental), así como de la península de Malaca (Guicking et al.,
presentado para su publicación). Solo ocho haplotipos se compartían entre dos o más
especies y también ocupaban posiciones centrales en la red, lo que sugiere su estado
ancestral. Se encontró un haplotipo particular en todas las especies de la sección menos una, y
probablemente representa la raíz de lapruinosasclado. Contrariamente a la situación en el
bancanagrupo, ninguno de los presumiblemente derivados
Figura 4Red de parsimonia de 88 haplotipos de cloroplastos demacarangaespecies de las secciones

mirmecófitas o grupos de especies, calculadas a partir de la variación de la secuencia de lasatpB-glóbulos
rojosL espaciador intergénico y los loci ccmp2 y ccmp6. Excepto porM. calcicola (cac)yM. winkleriella (wla),las
especies fueron abreviadas por los primeros tres caracteres de sus epítetos de especie. Círculolos tamaños
representan el número de especies que comparten un haplotipo de cloroplasto específico.Números
representan denominaciones arbitrarias de haplotipos de la red troncal (1–44) con extensiones de caracteres
(a–f)lo que indica la subdivisión de haplotipos debido a la variación de longitud en seis loci de microsatélites
y dos indeles.Conexiones grisesentre haplotipos son bucles cerrados inferidos por el programa TCS (Clement
et al.2000), que representan formas menos probables de evolución del cloroplasto. Un asteriscoindica la
posición probable de la raíz de la red. Figura adoptada de B€Anfer et al. (2006), con permiso
los haplotipos ubicados en las posiciones de la punta de la red se compartieron entre las
especies. Tampoco encontramos patrones geográficos de distribución de haplotipos en
este grupo. Un cuadro similar surgió para las dos especies delhipoleucagrupo de sección
paquistemon,donde se encontraron 18 haplotipos de cloroplastos entre 449 muestras
originarias del norte y este de Borneo y de la Península Malaya (Kröger-Kilian2006). Solo
tres haplotipos, presumiblemente ancestrales, fueron compartidos entre las dos
especies.
En conjunto, parece que los haplotipos de cloroplastos en la secciónpruinosasy en el
hipoleucagrupo de secciónpaquistemonson mucho más específicos de especie
que los que están en elbancanagrupo de secciónPaquistemón.Mientras que un patrón de

distribución geográfica de haplotipos como se observa en elbancanaEl grupo puede explicarse
mejor por la hibridación frecuente y la captura de cloroplastos, la clasificación incompleta de
los linajes ancestrales probablemente condujo a haplotipos ancestrales compartidos en la
sección pruinosasy elhipoleucagrupo. Esto significa que los análisis filogeográficos de
haplotipos de cloroplastos en especies individuales son posibles y sencillos en los dos últimos
grupos. Sin embargo, tal enfoque puede producir resultados engañosos en elbancanagrupo
de secciónpaquistemon,donde ocurre un amplio intercambio de haplotipos de cloroplastos.
3.4 Evolución reticular enmacaranga:Hibridación e introgresión

frecuentes, pero poca evidencia de híbridos estables
Para evaluar la importancia relativa de la introgresión y la clasificación de linajes

incompletos y el papel que puede desempeñar la evolución reticulada en los tres grupos
de estudio, también realizamos estudios de genética de poblaciones basados en
marcadores de microsatélites nucleares. Dichos estudios permiten la identificación
directa de híbridos recientes por medio de inferencia bayesiana (ESTRUCTURA; Pritchard et
al.2000). Delbancanagrupo demacaranga secciónpaquistemon,analizamos 761
especímenes de nueve especies y dos morfoespecies no especificadas (Dorstewitz2008).
Para los análisis de genética poblacional de la secciónpruinosasy elhipoleucagrupo, se
incluyeron las mismas muestras que en los estudios filogeográficos. La información
alélica de ocho loci de microsatélites polimórficos se consideró en los análisis de la
subsecciónbancanay hipoleucagrupos; siete loci (seis enM. pearsonii)se incluyeron en el
estudio de la secciónPruinosae.
Se realizaron análisis bayesianos de datos de microsatélites nucleares utilizando el
programaESTRUCTURA,asumiendo un modelo de mezcla sin información previa sobre la
pertenencia a especies, y estableciendo K (el número de grupos) igual al número de
especies consideradas. Los resultados de estos análisis mostraron que la mayoría de las
especies investigadas eran claramente distintas entre sí (Fig.5). Sin embargo,ESTRUCTURA
también identificó varios híbridos recientes en la secciónpruinosasy en elbancanagrupo
de secciónpaquistemon,Considerando que no se encontró evidencia de hibridación
reciente dentro de lahipoleucagrupo. En elbancanagrupo, todos los especímenes
identificados como híbridos porESTRUCTURAtambién compartían caracteres morfológicos
de ambas especies parentales putativas. Hibridación entre las especies mirmecófitas
estrechamente relacionadasM. indistintayM.angulatase observó una sola vez, mientras
que la hibridación entreM. indistintay el no mirmecófito
M. depresaparece ser un fenómeno relativamente frecuente. Se encontraron híbridos
putativos de estas dos especies en varios lugares de Sabah, algunos de ellos en la fruta.
La germinación de las semillas en el invernadero fue exitosa y la generación F1 mostró
la misma morfología intermedia que los árboles progenitores.
A pesar del número mucho menor de haplotipos de cloroplastos compartidos entre
especies en la secciónpruinosasen comparación con elbancanagrupo (ver Secc.3.3), análisis de
a pruinosas
1.00
0.80
0,60
0.40
0.20
0.00
M. gigantea M. pruinosa M. hosei M. pearsonii M. pubérula
norte = 329 norte = 20 norte = 48 norte = 347 norte = 24
b Pachystemon, bancanagrupo
1.00
0.80
0,60
0.40
0.20
0.00
M.angulata m bancana M. depressa M. glandibract. norte M. hullettii M. indistinta
norte = 69 norte = 131 = 49 norte = 72 norte = 84 norte = 212
C Pachystemon, hipoleucagrupo
1.00
0.80
0,60
0.40
0.20
0.00
M. beccariana M. hypoleuca
norte = 75 norte = 377
Figura 5Identificación de híbridos putativos entre especies en la secciónpruinosas,y elbancanay hipoleuca

grupo de secciónpaquistemonutilizando el análisis bayesiano implementado en el programa
ESTRUCTURA2.2 (Pritchard et al.2000). Cada individuo se representa como undelgada línea vertical,que
se divide en segmentos coloreados que indican las fracciones de membresía del individuo en la
especie asumida
Los microsatélites nucleares produjeron una proporción similar de supuestos híbridos (Fig.5).
Hibridación en secciónpruinosasfue particularmente frecuente entreM. gigantea yM. pruinosa,
como también fue sugerido por Davies (2001) basado en observaciones morfológicas. Ambas
especies no son mirmecófitas en Borneo, mientras queM. pruinosaa menudo está habitado
por hormigas fuera de Borneo. También se detectaron híbridos putativos entreM. pearsoniiy
M. pruinosaen Kalimantan Oriental, donde ambas especies se encuentran en simpatría. Un
individuo que era claramenteM. giganteapor criterios morfológicos podría identificarse como
un híbrido entreM. giganteayM. pearsoniipor medios genéticos.
En conjunto, la hibridación entre especies estrechamente relacionadas parece ser bastante

frecuente en elbancanagrupo de secciónpaquistemony en la seccionpruinosas,pero se
encontró poca evidencia de la formación de zonas híbridas estables. Con la excepción de los
presuntos híbridos entreM. indistintayM. depresa,que se encontraron en varios lugares y
produjeron semillas fértiles, no existen más observaciones que apoyen la idea de un papel
importante de la evolución reticulada enmacaranga. Aparentemente, los mecanismos que
mantienen separadas a las especies simpátricas relacionadas hoy en día son bastante
eficientes enmacaranga,a pesar de la presumiblemente baja diferenciación genética entre las
especies. Como posibles candidatos para tales mecanismos, se han sugerido diferentes
polinizadores y tiempos de floración asincrónicos (Moog2002; Moog et al.2002).
En los sistemas mirmecófitos, el resultado de la hibridación también puede verse influido por las
hormigas asociadas. En un estudio reciente del género myrmecophyte africanoleonardoxa,Léotard et
al. (2008) encontraron híbridos F1 fenotípicamente intermedios que tenían domatia poco
desarrollados y no fueron colonizados por las hormigas compañeras. Aparentemente, estos híbridos
presentaron malas adaptaciones ecológicas a las hormigas mutualistas, lo que eventualmente
resultó en la inviabilidad de los híbridos.Macaranga indistintayM.angulatatienen rasgos similares
relacionados con las hormigas y están habitados por las mismasCrematogasterespecies, por lo que
los híbridos entre estas dos especies no deberían representar un problema para las hormigas.
Curiosamente, en el mismo lugar (Poring Hot Springs, Sabah), se encontró una zona híbrida bimodal
entre las dos especies de hormigas que habitaban, las cuales también colonizaron otramacaranga
especies de la secciónPachystemon (M. glandibracteolata). Esto puede indicar un uso bastante
flexible de los recursos de la planta hospedante de estas especies de hormigas (ver Feldhaar et al.,
este volumen).
Los híbridos encontrados entre no myrmecophyticM. depresay los mirmecófitos desarrollaron la
domatia de sus especies progenitoras, y también fueron colonizados, o aparecieron
morfológicamente comoM. depresacon tallos sólidos, y entonces no estaban habitadas por
hormigas. Por lo tanto, las consecuencias de la aptitud paramacarangaNo se pueden descartar
plantas híbridas u hormigas que habitan en híbridos, pero los estudios a largo plazo en el campo que
serían necesarios para lograr resultados concluyentes son difíciles de realizar.
4 ¿Cómo podrían haber influido las hormigas en los procesos de especiación

en sus plantas compañeras?
4.1 La “hipótesis de la especiación alopátrica”: la dispersión efectiva

limitada de semillas podría mejorar la diferenciación genética
en Myrmecophytes
Al pensar en los posibles mecanismos que podrían haber desencadenado la radiación de

myrmecophyticmacaranga,recordamos nuestra observación anterior de que ambos socios,
hormigas y plantas, no maduran sin sus simbiontes específicos (Heil et al.2001b). Por lo tanto,
puede esperarse quemacarangalas semillas que germinen lejos de la próxima fuente de su
hormiga compañera específica tendrán problemas para establecer una nueva población. Este
problema se verá agravado aún más por el sistema de cultivo dioico de las plantas. Por lo
tanto, el requisito obligatorio de un organismo asociado puede reducir la capacidad de
colonización exitosa de nuevas áreas, una característica que ha demostrado ser importante en
otros mutualistas (Pierce1987). Como consecuencia de la limitada capacidad de dispersión
efectiva, las poblaciones que accidentalmente se diseccionaron debido a cambios geográficos
o climáticos podrían quedar fácilmente aisladas genéticamente entre sí. De hecho, los
cambios climáticos ocurrieron en el Cuaternario y causaron importantes cambios en el hábitat
en el sureste de Asia (Whitmore1987). Se supone que la diferenciación ocurre después del
aislamiento genético debido a las diferencias de hábitat que resultan en diferentes fuerzas de
selección en las poblaciones fragmentadas. Así, el obligado
la asociación con hormigas eventualmente podría haber facilitado la especiación alopátrica en sus
plantas asociadas. En una segunda hipótesis, la colonización por hormigas se considera una
innovación clave que abrió una nueva zona adaptativa. Ambos socios pueden verse entonces como
fuerzas bióticas selectivas que actúan una sobre la otra. Entonces esperaríamos que la especiación
también pudiera haber ocurrido simpátricamente a través de una selección disruptiva debida a
factores ecológicos. En algunos casos, los factores abióticos, como la adaptación a las condiciones
edáficas o las altitudes más altas, también podrían haber llevado al aislamiento reproductivo.
En nuestros experimentos, hasta ahora nos hemos centrado en el escenario alopátrico.
Dado que nuestra "hipótesis de especiación alopátrica" era correcta, entonces el flujo de
genes entre las poblaciones de especies mirmecófitas generalmente debería reducirse en
comparación con las especies no mirmecófitas relacionadas, que no dependen de la presencia
de hormigas al establecer un nuevo rodal. En consecuencia, esperaríamos que las especies
mirmecófitas también mostraran una subestructuración de la población más pronunciada en
comparación con las no mirmecófitas. Esta estructuración debe ser medible principalmente en
una gran escala geográfica (especialmente cuando las poblaciones están separadas por
cadenas montañosas), mientras que se espera poca diferenciación donde no existen barreras
geográficas. Además, las diferencias entre los mirmecófitos y los no mirmecófitos deberían ser
mucho más pronunciadas a nivel del ADN del cloroplasto, porque solo se espera que el flujo
de genes mediado por semillas sea influenciado por la hormiga compañera. En principio, esta
predicción puede probarse mediante un análisis genético poblacional comparativo en
mirmecofitos versus no mirmecofitos.macarangaespecies. Como los resultados obtenidos al
analizar una sola especie de cada tipo no pueden generalizarse fácilmente, es necesario
estudiar varios pares de especies, donde cada par debe pertenecer al mismo clado
filogenético. Óptimamente, las especies que se compararán también deberían mostrar
preferencias ecológicas, distribución y patrones de historia de vida similares. Sin embargo,
estos requisitos son difíciles de cumplir.
4.2 Estructura de la población de mirmecofíticos versus no

mirmecófitosmacarangaEspecies: No hay apoyo para la
“hipótesis de la especiación alopátrica”
Para probar nuestra hipótesis, analizamos la estructura genética intraespecífica de varias

especies de la secciónpruinosas,y de los dosbancanayhipoleucagrupo de secciónpaquistemon,
basado en distribuciones de frecuencia de alelos de microsatélites nucleares y haplotipos de
cloroplastos (para más detalles, consulte la leyenda de la Tabla1). Para caracterizar aún más la
diferenciación intraespecífica, los datos de microsatélites nucleares también se analizaron
mediante un enfoque de asignación bayesiana implementado en el programa.
ESTRUCTURA2.2 (Pritchard et al.2000), suponiendo un modelo de mezcla.
Secciónpruinosasparece ser el sistema modelo más adecuado para un análisis comparativo
de mirmecófitos y no mirmecófitos. En esta sección, el abundante y ampliamente distribuido
non-myrmecophyteM. giganteaes hermana de un conjunto de varios myrmecophytes (ver B€
Anfer et al. 2004; Higo.3). Estos últimos muestran rangos más restringidos, que a menudo son
parapátricos (Fig.2). Tal situación estaría perfectamente explicada por
tabla 1Compilación de phiCALLEvalores calculados a partir de un análisis de varianza molecular (AMOVA) de datos de haplotipos de cloroplastos y microsatélites
184
nucleares, respectivamente, que indican la estructura de la población en mirmecofíticos versus no mirmecófitosmacarangaespecies de seccionespaquistemony
Pruinosae. Los cálculos se realizaron con el programaARLEQUÍN3.11 (Excoffier et al.2005).C.CrematogasterPMPenínsula de Malasia,SSumatra,SBborde del sur,EK
Kalimantán Oriental,SudoesteSarawak,hermanoBrunéi,SbSabah (al este de Crocker Range),RCGama Crocker. Los orígenes de las poblaciones muestreadas se
muestran enatrevido. Ind. N:número total de individuos analizados,N pop.:número de poblaciones consideradas para AMOVA;escala regional:incluidotodo
poblaciones (connorte >5) muestreado de toda la región de Malesia con;escala local:incluyendo sólo poblaciones (connorte >5) del este de Sabah; ***pag <0.001
mirmecófito Socios de hormigas Distribución Hábitat Ind. N. pop N. FiCALLE FiCALLE pop N. FiCALLE(Carolina del Norte) FiCALLE(cp)
(Carolina del Norte) (cp)
Escala regional escala local
Secciónpruinosas
M. gigantea No No mirmecófito PM,S, SB,EK, tierras bajas 329 20 0.160*** 0,704*** 6 0,063*** 0.462***
Sw,Br,Sb
M. pruinosa No si msp. 2, msp.1 PM,S,SB,EK, SW tierras bajas 20 2 0,203*** 0,674***
M.hosei Sí msp. 2, msp.1 PM,S, SB,EK, tierras bajas 48 5 0.158*** 0.391***
Sudoeste,hermano
M. pearsonii Sí msp. 2, msp. 1 EK,Sb tierras bajas 347 15 0.082*** 0.561*** 11 0.037*** 0,506***
M. pubérula Sí msp. 2, msp. 1 RC altitudinal 24 2 0.090*** 0.724***
SecciónPachystemon, hipoleuca-grupo
M. hypoleuca Sí C. decamera, PM,S, SB,EK, tierras bajas 377 19 0.109*** 0.563*** 8 0.031*** 0.521***
msp. 1,7,9 Sudoeste,Br,Sb
M. beccariana Sí C. decamera SB,EK,Sudoeste, tierras bajas 72 6 0.145*** 0.519***

Br,Sb
SecciónPachystemon, bancana-grupo
M. griffithiana Sí msp., 1, msp. 5 PM,S tierras bajas 31 3 0.091*** n/A
m. motleyana Sí msp. 1,7 SB,EK,Sudoeste,Sb tierras bajas 96 10 0.173*** n/A 6 0.173***
M. glandibracteolata Sí C. captiosa, EK,Sb tierras bajas 72 5 0.075*** n/A 5 0.075***
msp. 10, 1, 7
m bancana Sí C. captiosa,msp. 3 PM,S,EK, Sw,hermano tierras bajas 131 10 0.079*** n/A
M. hullettii Sí msp. 3,captiosa PM,S, SB,EK, tierras bajas 84 3 0.145*** n/A
Sudoeste,hermano
M. indistinta Sí X captiosa, Sb tierras bajas 171 10 0.058*** n/A 10 0.058***

msp. 10, 1
M.angulata Sí msp. 10, RC altitudinal 69 5 0.134*** n/A
C. captiosa, 7
M. depresa No No mirmecófito S, SB, EK, Sw,Sb tierras bajas 49 4 0.125*** n/A 4 0.125***
K.Weising et al.
la hipótesis de la especiación alopátrica anterior. Sin embargo, nuestros análisis revelaron un

número similar de haplotipos de cloroplastos y niveles comparativos de diversidad genética en
M. giganteayM. pearsonii (y otros tres myrmecophytes muestreados de manera menos
exhaustiva; Guicking et al., presentado para su publicación). Del mismo modo, Phi basado en
microsatélites nuclearesCALLElos valores entre poblaciones fueron del mismo orden de
magnitud en todas las especies de la secciónpruinosaso fueron aún menores en mirmecófitos
(Tabla1). Por lo tanto, contrariamente a nuestras expectativas, las especies mirmecófitas no
mostraron una estructura de población más fuerte que las especies no mirmecófitas, ni a
escala regional ni local (considerando solo las poblaciones del este de Sabah, una región que
no está dividida por barreras geográficas conspicuas) . De hecho, el único ejemplo en el que el
myrmecophyticM. pearsoniimostraron niveles ligeramente más altos de variación entre
poblaciones que los no mirmecófitos.M. giganteafue en el caso de los haplotipos de
cloroplastos a escala local (Cuadro1).
La situación es más complicada en elbancanagrupo de secciónPaquistemón. Primero, los
datos de cloroplastos de especies individuales no eran aplicables debido a la distribución
geográfica en lugar de taxonómica de los haplotipos de cloroplastos en este grupo (ver arriba
y Fig.4). En segundo lugar, sólo hay unos pocos no mirmecófitos en el bancanagrupo, y los
árboles filogenéticos sugieren que estos están en una posición derivada en lugar de basal (B€
Anfer et al.2004; Higo.3), apuntando a una pérdida secundaria de mirmecofitismo. Por lo
tanto, fue difícil encontrar pares de especies adecuados para la comparación, yM. depresa
parece ser el único no mirmecófito del grupo que es suficientemente abundante para este
tipo de investigación. Una vez más, ninguno de nuestros análisis genéticos de población
basados en datos de microsatélites nucleares mostró ninguna diferencia significativa entreM.
depresapor un lado y siete especies diferentes de mirmecófitos por otro que podrían estar
relacionadas con la asociación con hormigas simbióticas (Dorstewitz2008; Mesa1).Macaranga
depresamostró un nivel intermedio de variación entre poblaciones, tanto a escala regional
como local. También hay que tener en cuenta que no sabemos cuándo se perdió el
mirmecofitismo en esta especie, o qué tan rápido se han manifestado los cambios en la
estructura genética de la población después de la pérdida. El nivel de variación entre
poblaciones en las dos especies mirmecófitas delhipoleucagrupo estaba en el mismo orden de
magnitud que en los otros grupos taxonómicos (Kröger-Kilian2006; Mesa1).
Aparentemente, las plantas colonizan con éxito cualquier localidad donde un específico
Crematogaster (Decacrema)hay especies de hormigas disponibles que son capaces de colonizarlas.
En otras palabras, si “no pueden encontrar las hormigas que les gustan, han aprendido a que les
gusten las hormigas que encuentran”. En consecuencia, las hormigas son específicas de clados de
plantas hospedantes más que de especies hospedantes individuales, y hay especies de hormigas con
un espectro de plantas hospedantes bastante amplio. Por lo tanto, suponemos que la mayoría de
Crematogaster (Decacrema) hormigas que se encuentran comúnmente enmacarangapuede permitir
que una planta colonice con éxito un nuevo hábitat, incluso si la interacción no es óptima. Incluso si
una especie de hormiga en particular ofreciera una mejor protección y fuera más “rentable” que
otras (ver Feldhaar et al., este volumen), las plantas sufrirían pérdidas de aptitud si fueran demasiado
selectivas, favoreciendo así una generalización de la asociación. La dispersión en hábitats
completamente libres de hormigas fue probablemente un fenómeno bastante raro o quizás solo
retrasó el proceso de colonización, pero no condujo al aislamiento de las poblaciones. Podemos
por lo tanto, concluya que nuestra hipótesis de trabajo de la especiación alopátrica no se aplica en la forma
descrita anteriormente.
También queda la pregunta de cuánto tiempo pasa antes de que la reducción del flujo de
genes se refleje en los parámetros genéticos de la población analizados aquí. Tenemos que
considerar que la selva tropical continua cubrió todo Borneo durante mucho tiempo, y
algunos refugios de selva tropical ciertamente permanecieron incluso en períodos de
fluctuaciones climáticas. Como planta pionera,macarangapuede haber sido influenciado por la
reducción/expansión de las selvas tropicales durante las glaciaciones del Pleistoceno y por la
severa destrucción y fragmentación antropogénica de los bosques durante los últimos 50
años. Hasta hace poco,macarangaEs probable que las plantas hayan estado muy extendidas y
sean abundantes en los claros y a lo largo de los ríos, que son sus hábitats originales en los
bosques vírgenes. Mientras las poblaciones han estado en contacto a lo largo del bosque
continuo, el flujo de genes probablemente ha sido tan eficiente en los mirmecófitos como en
los no mirmecófitos. Incluso después de que se hayan formado las barreras, puede pasar
algún tiempo antes de que la interrupción del flujo de genes dé como resultado una
diferenciación poblacional medible. EnM. griffithiana,por ejemplo, las poblaciones de la
península de Malasia y un área separada en el este continental de Tailandia solo se
diferenciaron débilmente entre sí, a pesar de estar separadas por miles de kilómetros sin que
quedara cubierta forestal (Maschwitz et al.2004).
4.3 Rol putativo de la vicarianza
Como se describió en la sección anterior, nuestros datos no revelaron ninguna asociación obvia
entre la estructura de la población de myrmecophyticmacarangaespecies y su asociación con
hormigas. El nivel de estructura de la población tampoco era predecible a partir de la afiliación
taxonómica, la altitud, el rango de distribución o las hormigas compañeras asociadas. Concluimos
que el grado de estructura de la población en individuosmacaranga Lo más probable es que la
especie dependa de una serie de factores que interactúan y que son difíciles de desentrañar.
Los únicos factores que claramente juegan un papel general en la diferenciación (y

especiación) de la población enmacarangason barreras geográficas. En todas las especies
investigadas por inferencia bayesiana conESTRUCTURA2.2, encontramos una fuerte diferenciación
entre las poblaciones de (1) la Península Malaya y Borneo, separadas por el Mar de China
Meridional, y (2) entre Sabah, Brunei/Sarawak y Kalimantan Oriental en Borneo, separadas por
la cadena montañosa central y montañas en el sur de Sabah (datos no presentados). Las
mismas barreras geográficas separan a una serie de alopátricos o parapátricos.macaranga
pares de especies (Fig.2). Por lo tanto, hay pocas dudas de que la vicarianza desempeñó un
papel importante durante la diferenciación de especies enmacaranga.Dentro de cada una de
estas regiones, la diferenciación de la población fue casi insignificante. También hay bastante
buena congruencia en la división de los principales grupos de hormigas con los principales
linajes enMacarango (ver Feldhaar et al., este volumen). Estos paralelos biogeográficos son
una indicación de que las distribuciones contemporáneas de plantas y hormigas son en gran
parte productos de los mismos eventos históricos.
4.4 El papel relativo de la dispersión de semillas y polen
Otro resultado general de nuestro estudio fue que, para todosmacarangaespecies, los haplotipos de
cloroplastos revelaron una estructura genética mucho más fuerte en comparación con los
marcadores nucleares. Al menos en parte, esto es sin duda una consecuencia del menor tamaño
efectivo de la población del genoma del cloroplasto (Ennos et al.1999). Sin embargo, esta
observación también puede indicar una dispersión de polen más eficiente enmacaranga de lo
previsto anteriormente. Inicialmente, asumimos que la capacidad de vuelo restringida de los
principales polinizadores (trips; Moog et al.2002; Moog2002) debería mejorar el aislamiento de la
población, porque se suponía que el flujo de genes mediado por polen entre poblaciones remotas
era bajo. Teniendo en cuenta la estructura de población mucho más débil revelada por los datos
nucleares frente a los de cloroplastos, revisamos esta suposición. Un escenario posible es que los
trips se dispersen pasivamente por el viento, y de esta manera deberían poder viajar largas
distancias (Lewis1973; Montículo y Marullo 1996). Si esto es cierto, los trips en realidad representan
polinizadores altamente eficientes al combinar la dispersión pasiva a larga distancia con la búsqueda
activa de plantas objetivo adecuadas a escala local. También se demostraron distancias de
polinización inesperadamente altas de 5 a 16 km para las avispas diminutas de la higuera (Nason et
al.1998). El cruce extensivo, como en las plantas dioicas, puede homogeneizar fácilmente la
subestructuración de la población. Por lo tanto, si las tasas de flujo de polen monitoreadas por
marcadores nucleares son lo suficientemente altas, pueden oscurecer los efectos de otros factores
restrictivos (como la dispersión limitada de semillas) en la diferenciación genética de las poblaciones.
5. Conclusiones
Probablemente, se han producido dos fases principales en la evolución de myrmecophytic

macaranga:una primera fase involucró una división en varios linajes ancestrales principales debido a
cambios en la historia de vida y especialización ecológica como consecuencia de la asociación con
hormigas. Más tarde, los eventos de disyunción han desencadenado la especiación alopátrica (y en
parte) vicariante dentro de cada uno de estos linajes. Básicamente, la colonización demacarangaLas
plantas de las hormigas pueden verse como una innovación clave, que abrió una nueva zona de
adaptación para ambos socios porque puso a disposición nuevos recursos y hábitats. Las hormigas
que ingresan a una asociación de este tipo eluden la competencia con las hormigas arbóreas
simpátricas por las zonas de alimentación y el espacio de anidación. Por otro lado, las plantas que
reclutaron hormigas crecerán con más éxito en claros y otras áreas forestales perturbadas porque
sus socios las protegen de los herbívoros y de las numerosas enredaderas que actúan como
competidores en hábitats abiertos. Por lo tanto, las mirmecófitas tienen una ventaja inmediata en los
hábitats pioneros sobre las plantas que no están habitadas por hormigas.
Por lo tanto, la radiación adaptativa en ambos sistemas podría haber seguido un escenario
diferente.macarangalas plantas podrían haberse diversificado en el contexto ecológico particular de
las presiones selectivas en sus hábitats pioneros, como un sistema de auto-reforzamiento de rasgos
adaptativos, evolucionando por retroalimentación recíproca entre los socios. Las hormigas podrían
haber impulsado la diferenciación de las plantas por cambios en su comportamiento, morfología,
y fisiología. A su vez, los cambios en los rasgos de las plantas que son relevantes para el mutualismo, por
ejemplo, el sitio del nido y los recursos alimentarios, así como las ceras epicuticulares, podrían haber
impulsado la diferenciación de las hormigas compañeras. Sin embargo, como ambos socios estaban
restringidos por las distribuciones de sus anfitriones ya que no podían vivir de forma independiente, la
disponibilidad de socios podría haber sido más relevante que la adaptación perfecta.
Expresiones de gratitudReconocemos el apoyo financiero de Deutsche Forschungsgemeinschaft

(subvenciones We 1830/4, Fi 606/5 y Bl 462/2) dentro del programa prioritario SPP1127. El permiso para
realizar investigaciones en Malasia fue amablemente otorgado por la Unidad de Planificación Económica
(EPU) de la Oficina del Primer Ministro, Kuala Lumpur y la EPU en Kota Kinabalu, Sabah, así como por el
Comité de Gestión del Valle Danum y el Departamento Forestal, Sarawak. El permiso para trabajar en Brunei
fue obtenido por la Universiti Brunei Darussalam y el Museo de Brunei. Agradecemos a nuestros homólogos
y colegas en Malasia y Brunei por su cooperación y apoyo, especialmente al Prof. Datin Dr. Maryati
Mohamed, al Dr. Rosli bin Hashim, al Dr. Kamariah Abu Salim y a los miembros de Sabah Parks, a saber, el
Dr. Jamili Nais y el Dr. Maklarin bin Lakim. Apoyo logístico y ayuda en muchas otras formas por parte del
Prof. Dr. K. Se reconoce con gratitud a Eduard Linsenmair. Agradecemos al Dr. Ferry Slik y al Prof. Dr. Ulrich
Maschwitz por el amable suministro de material vegetal, y a la Dra. Heike Feldhaar por las fructíferas
discusiones sobre las interacciones entre hormigas y plantas. Dos revisores anónimos brindaron valiosas
sugerencias.
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Especiación en Obligatoriamente Asociado a Plantas
CrematogasterHormigas: la distribución del host en lugar
de la adaptación hacia hosts específicos impulsa el
proceso
Heike Feldhaar, Ju€rgen Gadau y Brigitte Fiala
AbstractoLas interacciones ecológicas entre organismos pueden ser un factor esencial que
facilite los procesos de especiación. En uno de los sistemas simbióticos de plantas y hormigas
con mayor riqueza de especies en todo el mundo, árboles pioneros del género Euphorb
macarangaestán habitadas por hormigas asociadas específicas, en su mayoría del género
Crematogastersubgénero Decacrema.Ambos grupos fueron sometidos a radiación, con 30
especies demacarangasiendo colonizado por ocho especies deCrematogaster.En esta
asociación obligada, las hormigas dependen únicamente de su anfitrión para la nutrición y el
espacio para anidar. Los huéspedes se distribuyen en parches en sitios perturbados o claros
en el bosque primario. Los patrones de asociación no son aleatorios a pesar de la ocurrencia a
menudo simpátrica de varias especies de plantas hospedantes. Generalmente, cada especie
de hormiga coloniza de dos a siete especies diferentes de huéspedes en todo su rango de
distribución. Los procesos de especiación en las hormigas pueden ser impulsados por la
adaptación hacia especies hospedantes alternativas o por patrones espaciales de distribución
del hospedante, o por ambos factores. Se encontró que la dispersión limitada de las reinas y la
limitación del sitio de anidación debido a la asociación obligada con un huésped conducen a
un aislamiento significativo por distancia en una pequeña escala espacial en el bosque
primario.
H. Feldhaar (*)
Fisiología del Comportamiento y Sociobiología (Zoología II), Biocenter, Am Hubland, Universidad de W€
urzburgo, 97074 W€Urzburgo, Alemania
Biología del Comportamiento, Universidad de Osnabr€Vaya, Barbarastr. 11, 49076 Osnabr€uck, Alemania
Correo electrónico: feldhaar@biologie.uni-osnabrueck.de
J. Gadau
Fisiología del Comportamiento y Sociobiología (Zoología II), Biocenter, Am Hubland, Universidad de W€
urzburgo, 97074 W€Urzburgo, Alemania
Facultad de Ciencias de la Vida, Universidad Estatal de Arizona, PO Box 874501, Tempe, AZ 85287 - 4501, EE.
UU.
B. Fiala
Ecología Animal y Biología Tropical (Zoología III), Biocenter, Am Hubland, Universidad de W€
Urzburgo, Alemania

194 H. Feldhaar et al.
hormigas y la importancia de la deriva genética en los procesos de diversificación. La adaptación hacia

hospedantes alternativos puede ocurrir como un subproducto cuando diferentesmacaranga Los huéspedes
son colonizados en diferentes regiones.
1. Introducción
Si queremos comprender mejor la naturaleza de las fuerzas selectivas, creo que debe provenir de un estudio
de la ecología. En particular, debe provenir de un estudio de la evolución conjunta de las especies que
interactúan, porque es probable que las principales fuerzas selectivas que actúan sobre una especie
provengan de cambios en sus competidores, sus depredadores y sus parásitos (Maynard Smith 1998), y
podemos agregar "simbiontes".
Las interacciones mutuamente beneficiosas entre diferentes organismos están muy extendidas en la
naturaleza, a pesar de la supuesta inestabilidad de tales interacciones. En teoría, los mutualismos
deberían ser inestables debido a la posibilidad de que evolucionen tramposos que exploten el
mutualismo sin proporcionar una mercancía beneficiosa para el organismo socio. A lo largo de las
escalas de tiempo evolutivas, el conflicto en las asociaciones mutualistas puede reducirse acoplando
la reproducción de los respectivos organismos, lo que se realiza de manera más efectiva mediante la
transmisión vertical de un simbionte (Bronstein et al.2006; douglas2008).
En las asociaciones hormiga-planta, la transmisión de los socios es horizontal. Las hormigas
reinas y las plantas se reproducen y dispersan de forma independiente y necesitan volver a unirse en
cada generación. Para evitar que los tramposos exploten estas asociaciones obligadas entre
hormigas y plantas, se supone que las plantas hospedantes han desarrollado caracteres que actúan
como filtros selectivos que permiten que solo aquellas especies de hormigas accedan a la planta que
mejoran la aptitud del hospedante (Bronstein et al.2006; Davidson y McKey1993). Por lo tanto, se
puede desencadenar un proceso coevolutivo en el que los mutualistas se adaptarán a los huéspedes,
lo que dará como resultado un alto grado de coincidencia fenotípica entre la hormiga y la planta
huésped (Brouat et al.2001; Davidson y McKey1993; Davidson et al.1989; Federle et al. 2001; Federle
et al.1997).
En una de las asociaciones simbióticas de hormigas y plantas más ricas en especies del
mundo, ca. 30 especies de árboles pioneros del géneroMacarango (Euphorbiaceae) están
habitadas por hormigas asociadas específicas, en su mayoría por ocho especies de hormigas
del géneroCrematogaster (subgéneroDecacrema) (B€Anfer et al.2004; Blatner et al.2001; Davis
et al. 2001; Feldhaar et al.2003a; Fiala et al.1999). En estas asociaciones mutualistas, las
hormigas defienden los árboles contra herbívoros y enredaderas (Federle et al.2002; Fiala et
al.1994) a cambio de espacio para anidar en tallos huecos, así como alimento en forma de
cuerpos alimentarios (Fig.1) (Fiala et al.1989). Todos los hosts asociados conDecacrema
especies pertenecen a las seccionespaquistemonypruinosadentro del género Macarango (
Blatner et al.2001; Davis et al.2001). Sin embargo, las asociaciones de hormigas y plantas no
son estrictamente específicas de especie, ya que cada una de las ocho especies de
Crematogaster (Decacrema)habita entre dos y siete diferentesmacaranga huéspedes y, desde
el punto de vista de las plantas, cada especie demacarangaobligatoriamente asociado con
Crematogaster (Decacrema)Las hormigas pueden ser colonizadas por hasta tres
Especiación en Obligatoriamente Asociado a PlantasCrematogasterhormigas 195
a d
mi
Georgia GB
Figura 1Crematogaster (Decacrema)hormigas enmacaranga. (a)trabajadores deC.captiosacaminando por

senderos hechos a sí mismos en la superficie cubierta de cera delgada deM. glandibracteolata. (b)reina deC.
decameraroyendo un agujero de entrada en un entrenudo deM. hypoleuca. (C)trabajadores de
diferentes especies de hormigas (Feldhaar et al.2003a; Fiala et al.1999). No obstante, se

pueden observar patrones de asociación recurrentes entre los dos grupos que son
estables en un amplio rango geográfico (Feldhaar et al.2003b; Fiala et al. 1999).
macarangaLos huéspedes generalmente se encuentran en un rango geográfico más
pequeño en comparación con las hormigas, es decir, se encuentran más especies
endémicas, mientras que cuatro de las nueve especies deCrematogaster (Decacrema)
ocurren en todo el rango de distribución de esta asociación hormiga-planta (Fiala et al.
1999). Estas especies extendidas deCrematogaster (Decacrema)a menudo habitan
diferentes especies demacarangaen diferentes regiones y, al igual que las especies de
hormigas endémicas, también pueden colonizar más de una especie de planta huésped
en simpatía (Feldhaar et al.2003a,b; Fiala et al. 1999). El mirmecofitismo, la asociación
obligada de plantas hospederas con habitantes permanentes de hormigas, ha
evolucionado de forma independiente no solo en las seccionespaquistemon ypruinosas
pero en otro grupo demacaranga,la secciónWinklerianae (Blatner et al.2001; Davis et al.
2001; Weising et al., este volumen). Las dos especies mirmecófitas dentro de este grupo
son endémicas de Borneo (Winkleriy lo raroWinkleriella)y también están habitados por
una especie deCrematogaster (Crematogaster)especie 8), que sin embargo no pertenece
al subgéneroDecacrema (Fiala et al.1999).
La asociación es obligatoria tanto para las hormigas como para las plantas. Sin embargo, la hormiga
compañera depende más de la planta compañera, ya que las hormigas dependen exclusivamente del
alimento proporcionado directamente por la planta (Fiala y Maschwitz1992; Heil et al.1997) o indirectamente
a través de cochinillas dentro de la domatia (Heckroth et al.1998) y hasta la fecha nunca se han encontrado
anidando o alimentándose lejos de sus anfitriones. Por el contrario, los retoños de las plantas hospedantes
tienen que sobrevivir sin la protección de sus hormigas compañeras hasta que alcanzan un tamaño en el que
desarrollan entrenudos lo suficientemente grandes como para que entre una hormiga reina. Grande
macarangalos árboles que han perdido a su hormiga asociada debido a la vida comparativamente más corta
de la colonia de hormigas, a menudo también sobrevivirán el retraso en el tiempo hasta que sean
recolonizados (Feldhaar et al.2003b).
Procesos de especiación en el obligadoCrematogaster (Decacrema)Por lo tanto, las plantas-
hormigas pueden ser impulsadas por varias fuerzas diferentes: por un lado, la asociación obligada
con sus anfitriones puede influir en los procesos de diversificación en la hormiga compañera, ya que
las plantas-hormigas están restringidas en su distribución por sus anfitriones y no pueden existir sin
ellos. Por lo tanto, el número de árboles jóvenes de huéspedes disponibles en una población impone
un límite superior al tamaño de la población de las especies de hormigas en el hábitat respectivo, con
cada huésped habitado por una sola colonia (Feldhaar et al. 2003b; Fiala et al.1999). Por otro lado, la
asociación con varios diferentes macarangalos hospedantes pueden impulsar procesos de
diversificación por especialización y adaptación hacia especies hospedantes alternativas. Puede
ocurrir una adaptación local, especialmente cuando
Figura 1 (continuado)C.captiosaenM. indistinta. (d)trabajadores deC. decamerarecolectar alimentos-

cuerpos de la parte inferior de una hoja deM. hipuleuca. (mi)trabajadores deC.captiosaenM.
indistinta (imagen cortesía de S. Frohschammer). (F)reina deC.captiosacon cría y obreras en el tallo de
M. glandibracteolata (imagen cortesía de KE Linsenmair). (gramo)hojas deM. indistintade una planta no
colonizada (a)y una planta protegida por hormigas (b) (imagen cortesía de S. Frohschammer)
diferentes especies hospedadoras son colonizadas en diferentes regiones. Además, la

asociación hormiga-planta está restringida a la selva tropical constantemente húmeda y ha
sufrido repetidas expansiones y reducciones de rango debido a los cambios climáticos
durante el Pleistoceno (Quek et al.2007).
2 Especies Delimitación deCrematogaster (Decacrema)

Hormigas asociadas conmacaranga
Un requisito previo para inferir procesos de especiación es delimitar especies (Sites y

Marshall2003). Hasta la fecha, la mayoría de los ochoMacaranga-asociadoCrematogaster
(Decacrema)Las especies no se han descrito formalmente, pero se han asignado a
morfoespecies (msp.) (Fiala et al.1999). La especie se puede distinguir en función de la
morfología de la reina y los caracteres de la historia de vida, como el inicio de la
reproducción o la constancia en la elección del huésped (Feldhaar et al.2003b; Fiala et al.
1999). dos especies, Crematogastermsp. 4 yC.msp. 6, puede ser sinónimo deC.captiosay
C. decameradescrito por Forel (1910,1911), respectivamente. Análisis filogenético de la
Decacrema-especies asociadas conmacarangabasado en el ADN mitocondrial (ADNmt) ha
confirmado en su mayoría las morfoespecies, pero varios desajustes entre la morfología y los
haplotipos del ADNmt implican polifilia de algunas morfoespecies (Feldhaar et al.2003a).
Además, las distancias genéticas dentro de las morfoespecies fueron mucho más altas de lo
esperado, con distancias por pares superiores al 5% dentro de
C.captiosao 7% dentroC. decamera (Feldhaar et al.2003a). Estas distancias tan altas dentro de
las especies son inusuales para la mayoría de los grupos de insectos (pero véase Magnacca y
Danforth2007), pero se han encontrado antes para hormigas, incluso cuando se excluye la
posibilidad de especies crípticas o hibridación (Brandt et al.2007). Con el fin de distinguir entre
los diferentes procesos que conducen al patrón observado, como la introgresión debido a la
hibridación, la presencia de especies crípticas o tasas de sustitución elevadas en el ADN
mitocondrial, se agregaron más taxones a nuestra filogenia de ADNmt (86 taxones; Fig.2), y un
análisis filogenético de un fragmento de 579 pares de bases del factor de elongación del gen
nuclear 1-a (EF1-a)También se realizó (red de parsimonia; Fig.3). EF1-ase utiliza con frecuencia
para el análisis filogenético a nivel de género de himenópteros (Danforth et al.1999; Degnan
et al.2004).
La filogenia ampliada deCrematogaster (Decacrema)no resultó en una
mejor resolución de las morfoespecies designadas (Fig.2). De nuevo,C.msp. 3 y
C.msp. 7 eran monofiléticos, aunque con una gran variación dentro de la especie (Tabla1).
C. decameraes parafilético con respecto aC.msp. 9, que es una especie muy rara y
endémica que se encuentra solo en Malasia peninsular (Feldhaar et al.2003a; Fiala et al.
1999). Todas las especies pertenecientes a los derivadoscaptiosa-grupo son polifiléticos.
En contraste con el mtDNA, la topología de árbol de EF1-ase resolvió pobremente
debido a la variación muy baja en este gen nuclear entreCrematogaster (Decacrema)que
habitanMacarango (Mesa1). Por lo tanto, construimos una red de parsimonia (Fig.3).C.
decamerayC.msp. 9 forman un grupo distinto que está separado de todas las demás
especies por seis pasos. A diferencia de,C.msp. 3 que se agrupa conC. decamera
región
Muestreo
rasgo del tallo
mirmecocistussp.
Crematogaster(Crematogaster) sp., (Gombak) C.
msp. 8 (Winkleri, PHS)
100 C. msp. 7 (m. motleyana, Telúpido) #59 C
. msp. 7 (m. motleyana, Telúpido) #58
100 89 C. msp. 7 (METRO. Especificaciones. B, PHS) #114 C.
msp. 7 (METRO. Especificaciones. B, PHS) #115 C. msp. 7
100 100 (M. hipoleuca, Tawau) #J34
C. msp. 7 (m. motleyana, Kg. Madai) #J47
63 C. msp. 7 (M. hypoleuca, Tawau) #BF60 C.
72 msp. 7 (M. hypoleuca, Luasong) #BF80
100 C. msp. 3 (M. hullettii, GentingHighl.) #46 C.
msp. 3 (M. hullettii, GentingHighl.) #106
100 C. msp. 3 (M. umbrosa, Mulú) #136 C.
decamera-grupo
msp. 3 (M. umbrosa, Mulú) #137
100 C.decamera(M. hypoleuca, PHS) #120 C.
54 decamera(M. hypoleuca, PHS) #57 C.
100 87 decamera(M. hypoleuca, PHS) #121 C.
decamera(M. hypoleuca, Gombak) #51
99 100 C. decamera(M. hypoleuca, Gombak) #52 C.
85 msp. 9 (M. hypoleuca, Marán) #53 C. msp. 9 (
M. hypoleuca, Marán) #26 C.decamera(M.
100 hypoleuca, Mulú) #125
C.decamera(M. beccariana, Lambir) #85 C.
100 decamera(M. hypoleuca, Bt. Taviu) #bf4-99
100 C.decamera(M. beccariana, Bt. Taviu) #bf4-105
C.decamera(M. beccariana, Bt.Taviu) #bf4-106
64 C. decamera(METRO.hipoleuca, Bt. Taviu) #bf4-92
C.decamera(M. beccariana, Bt. Taviu) #bf4-102
100 C. msp. 10 (M. indistinta, Tawau) #J43 C.
100 msp. 10 (M. indistinta, Tawau) #J50
100 C. msp. 10 (M. umbrosa, Lambir) #3053
C. msp. 10 (M. umbrosa, Mulú) #128 C.
100 66 msp. 2 (M.hosei, Lambir) #3054
94 C. msp. 2 (M.hosei, Mulú) #129 C.
58 100 msp. 2 (M.hosei, Mulú) #130
C. msp. 2 (M. pearsonii, PHS) #B2qu C.
92 msp. 2 (M. pearsonii, PHS) #55
62 C. msp. 2 (M. pearsonii, PHS) #B3qu C.
81 msp. 2 (M. lamellata, Tawau) #J104
74 63 C.captiosa(M. indistinta, Bt. Taviu) #bf4-88
C.captiosa(M. indistinta, Bt. Taviu) #bf4-89 C. msp. 10 (
M. indistinta, Bt. Taviu) #bf4-83 C. msp. 10 (M.
100 glandibracteolata, Bt. Taviu) #bf4-112
C. msp. 10 (M. indistinta, Bt. Taviu) #bf4-68 C. msp. 10 (
63 M. glandibracteolata, Bt. Taviu) #bf4-109 C. msp. 2 (M.
pearsonii, Tawau) #bf73 C. msp. 1 (M. indistinta, Bt.
100 Taviú) #54
98 80 C. msp. 1 (M. glandibracteolata, Bt. Taviu) #bf4-52 C.
msp. 1 (M. pearsonii, PHS) #61
53 C. msp. 1 (M. glandibracteolata, PHS) #3033 C.
98 msp. 1 (M. hypoleuca, PHS) #J69 C. msp. 1 (M.
pearsonii, PHS) #111 C. msp. 1 (M. pearsonii,
captiosa-grupo
PHS) #3051
C.captiosa(m bancana, Gombak) #48
C.captiosa(m bancana, Gombak) #UM5-3
C.captiosa(m bancana, Gombak) #49 C.
99 msp. 2 (M.hosei, Gombak) #3077
C.captiosa(M. hullettii, Gombak) #UM5-2
C.captiosa(m bancana, Kuantan) #107
C.captiosa(m bancana, Gombak) #UM5-4 C.
70 msp. 1 (M. griffithiana, Rawang) #42
99 C. msp. 1 (M. hypoleuca, Gombak) #104
100 C. msp. 2 (M.hosei, Gombak) #44 C. msp. 2
(M.hosei, Bt. Rengit) #UM2-8
100 C. msp. 5 (M. lamellata, Brunéi) #132
C. msp. 1 (M. lamellata, Lambir) #3069
90 66 C.captiosa(m bancana, Gombak) #UM5-1 C.
89 msp. 5 (M. hypoleuca, Marán) #50 C. msp. 5 (
M. hypoleuca, Marán) #108
86 C.captiosa(M. glandibracteolata, Gama Crocker) #3022
80 67 C.captiosa(m bancana, Lambir) #UM2-1
C.captiosa(M. umbrosa, Mulú) #131
C.captiosa(M. indistinta, Bt. Taviu) #bf4-62
62 C.captiosa(M. indistinta, Deramakot) #3016
C.captiosa(M. indistinta, Valle Danum) #3035
60 C. msp. 2 (M. pearsonii, Valle Danum) #3045
C.captiosa(M. indistinta, Valle Danum) #3038
93
C. msp. 10 (M. indistinta, PHS) #J22
C. msp. 10 (M. indistinta, PHS) #J29
C.captiosa(M. indistinta, PHS) #J5
84 C.captiosa(M. indistinta, PHS) #116
C.captiosa(M.angulata, PHS) #117
C.captiosa(M. glandibracteolata, PHS) #3073 C.
msp. 10 (M. indistinta, PHS) #J18
C.captiosa(M. indistinta, PHS) #J25
Figura 2Árbol de consenso de la regla de la mayoría (de 216 árboles más parsimoniosos) obtenido por
análisis de parsimonia máxima deMacaranga-asociadoCrematogaster (Decacrema)hormigas basadas en 924
pb de ADN mitocondrial (484 pb de COI/ 440 pb de COII). Análisis de máxima verosimilitud (PHyML versión
2.4.4; Guindon y Gascuel,2003) produjo topologías de árbol similares. Los valores Bootstrap -50 se dan por
encima de los nodos (análisis de máxima parsimonia, 1000 pseudorreplicaciones de búsqueda heurística,
con diez réplicas de adición de secuencia aleatoria por pseudoréplica y TBR como rama
6 pasos
captiosa-grupo
C.msp. 7
C.captiosa
C.msp. 2 decamera-grupo
C. msp. 5 C. decamera
C. msp. 10 C.msp. 3
C. msp. 1 C. msp. 9
Fig. 3Red de parsimonia deMacaranga-asociadoCrematogaster (Decacrema)hormigas basadas en 579 pares de bases

del factor de elongación del gen nuclear-1a.Las especies están codificadas por colores. Tamaño decírculos son
proporcionales al número de secuencias contenidas en este haplotipo
y yC.msp. 7 que forma un clado bien separado de todos los demásDecacrema especies en la
filogenia del mtDNA están incluidas en el haplotipo más común delcaptiosa-grupo (fig.3).
Todos los haplotipos de lacaptiosa-El grupo está separado del haplotipo más común por dos
pasos como máximo y, a menudo, comprende muestras de dos morfoespecies. Curiosamente,
los haplotipos compartidos de loscaptiosa-El grupo comprende muestras de los dos clados
principales del grupo en la filogenia del mtDNA, por ejemplo, el haplotipo en la parte inferior
izquierda de la red de haplotipos (Fig.3) contiene el
<
Figura 2 (continuación) modo de intercambio). Las regiones geográficas en las que se recolectaron las muestras están
representadas porbarrasa la derecha de los taxones:barras grisesPenínsula de Malasia,barras blancasSaba, barras negras
Sarawak y Brunéi. Los rasgos del tallo de los respectivos huéspedes de los que se recolectaron las hormigas están representados
porcírculos: círculos negrossuperficie no cerosa,círculos grisescubierto de cera,circulo punteado sólo una ligera cubierta de cera;
círculos abiertosla médula se degrada por sí misma, ficírculos llenosla médula debe ser excavada activamente por la hormiga
compañera
tabla 1Comparación de distancias por pares corregidas dentro de la especie (parámetro Kimura-2) de un
fragmento de 924 pares de bases de Citocromooxidasa 1 (COI: 484 pb)/Citocromooxidasa 2 (COII: 440 pb) y
un fragmento de 576 pares de bases de el factor de elongación del gen nuclear 1a.Entre el Crematogaster
especie (subgéneroDecacrema)reinas de ladecamera-grupo son más pequeños que las reinas delcaptiosa-
grupo.Crematogastermsp. 8 que no pertenece a este subgénero tiene reinas más grandes
Especies máx. por parejas Región Estado de Alta distancia por pares
distancias (%) especies (ADNmt) debido a
COI/COII EF-1a
C.msp. 7 14 (10) 0.51 (6) Sabah monofilético Sustitución acelerada
tarifas
decamera-grupo
C. decamera 8.5 (16) 0.0 (5) PM, Sabah parafilético Sustitución acelerada
tarifas
C.msp. 3 5.4 (4) – PM, monofilético Sustitución acelerada
Sarawak tarifas
captiosa-grupo
C.msp. 1 10 (10) 0.17 (6) PM, Sabah polifilético Hibridación/antiguo
haplotipos/acelerado
tasas de sustitución
C.msp. 2 9 (10) 0.3 (9) PM, Saba, polifilético Hibridación/antiguo
Sarawak haplotipos/acelerado
C.captiosa 8 (25) 0.5 (11) PM, Sabah polifilético Hibridación/antiguo
C. msp. 10 8 (8) 0.0 (8) Sabah polifilético Hibridación/antiguo
no-Decacrema
C. msp. 8 2 (136) 0.0 (2) Saba, monofilético
Brunéi,
Sarawak
muestras #J5 y #bf4-62 deC. captiosa (clado inferior decaptiosa-grupo en la fig.2) así como
#3054 deC. msp. 2 (clado superior en la Fig.2, respectivamente).
Como tercer método, aparte del análisis de la secuencia mitocondrial y nuclear, un método
de agrupamiento bayesiano implementado en la ESTRUCTURA 2.2 (Pritchard et al. 2000) se
usó para probar si la asignación de individuos a especies dentro del captiosa-grupo basado en
la morfología fue congruente con la asignación basada en genotipos de microsatélites
multilocus. Reinas de pequeñas colonias de todas las especies pertenecientes a lacaptiosa-
grupo (C.msp. 1,C.msp. 2,C. captiosa,yC.msp. 10, que es endémica del sureste de Borneo) se
analizaron utilizando cinco loci de microsatélites altamente polimórficos que se desarrollaron
paraC.msp. 2 (Feldhaar et al.2004). Al menos cuatro loci amplificados en cada especie y
ninguno fue fijado para un solo alelo en ninguna especie. La prueba de asignación confirmó
nuestro concepto de morfoespecies sin ambigüedades, ya que la mayoría de los especímenes
se asignaron a la especie "correcta" con una alta probabilidad posterior (>95 %) cuando se
utilizó la afiliación de especies basada en la morfología de la reina como criterio previo.
información de la población (Fig.4). Sin embargo, alrededor del 2% de los individuos de

C.captiosayC.msp. 10 estudiados muestran desajustes entre fenotipo y multilocus-
genotipo. Los individuos de estas dos especies también comparten haplotipos de
mtDNA en un área de muestreo (Poring Hot Spring, Sabah), lo que sugiere fuertemente
una hibridación en curso (Fig.4, individuos marcados con una flecha) (Feldhaar et al.2008
). Estos híbridos aún pueden ser fértiles, ya que los individuos genotipados eran reinas
que ya habían producido varias obreras. Curiosamente, la evidencia de hibridación se
puede encontrar principalmente en hormigas que colonizan el mismoMacaranga-
especies en un hábitat determinado (p. ej.,C.captiosayC.msp. 10 colonizarM. indistintay
M. glandibracteolataen las aguas termales de Poring).
En conclusión, la obligaciónMacaranga-especies asociadas de laCrematogaster (Decacrema)El
complejo se puede delimitar solo cuando se usa una combinación de marcadores de microsatélites y
morfología. Polifilia de especies dentro de lacaptiosa-grupo a nivel de mtDNA y baja resolución del
gen nuclear EF1-adificulte significativamente el uso de dichos datos para este fin. El problema puede
evitarse utilizando solo filotipos que no estén vinculados a un concepto de especie (Quek et al.2004,
2007), que, sin embargo, no descubrirá procesos como la hibridación en estas hormigas. La alta
variación genética dentro de las especies y la polifilia de las especies en el conjunto de datos de
mtDNA pueden explicarse, al menos en parte, por los procesos de hibridación en curso. Otros
desajustes de fenotipo y haplotipo de mtDNA pueden deberse a eventos de hibridación pasados o
haplotipos ancestrales compartidos. Otra razón de la alta divergencia de secuencia que se encuentra
dentro de las especies que forman un grupo monofilético puede ser la aceleración de las tasas de
sustitución en el mtDNA en contraste con el gen nuclear (Magnacca y Danforth2007). Para los
enfoques de identificación o delimitación de especies basados en el ADN, como el código de barras
o la taxonomía del ADN, que se basan únicamente en el ADNmt, elCrematogaster (Decacrema)
hormigas
1.00
0.80
0,60
0.40
0.20
0.00
msp. 1 msp. 2 C.captiosa(msp. 4) n msp. 10
n = 17 n = 28 = 164 n = 93
Figura 4Delimitación de especies e identificación de híbridos (marcados conrojoyflechas negras)dentro de

captiosa-grupo usando el programa de asignación Estructura 2.2 (Pritchard et al.2000) basado en cinco loci
de microsatélites. Todas las muestras se recolectaron en Sabah (noreste de Borneo). Los datos morfológicos
de las reinas se utilizaron como base para la asignación de especies. Para permitir la hibridación entre
especies, se utilizó el modelo de mezcla. Los híbridos fueron identificados por desajustes en morfología y
genotipo. Elflechasmarcar individuos deC.msp. 10 yC.captiosaque comparten el mismo haplotipo de ADN
mitocondrial. Los individuos se representan comolíneas verticalescon la coloración de la línea indicando
probabilidad de asignación hacia el racimo con el color respectivo
sería muy desafiante. Al igual que otros grupos con una alta variabilidad genética intraespecífica a
nivel de ADNmt y en parte una variabilidad interespecífica muy baja debido a la introgresión, la
asignación de especies a menudo fallará (p. ej., Meier et al.2006). El número de especies dentro de la
diversidad genéticadecamera-grupo yC.msp. 7 estaría sobreestimado, mientras que el número de
linajes encontrados en elcaptiosa-el grupo no puede ser alterado dramáticamente. En este último,
sin embargo, las especies a menudo pueden asignarse incorrectamente debido a los haplotipos
compartidos entre las especies.
3 Co-evolución entreCrematogaster (Decacrema) y

macarangaAnfitriones: adaptaciones de las hormigas
hacia sus anfitriones
La asociación obligada y exclusiva deCrematogaster (Decacrema)hormigas con susmacaranga

hosts sugiere que la diversificación de las hormigas puede haber sido impulsada por un
proceso coevolutivo. Una comparación de las filogenias de los CrematogasterLas hormigas
con su planta huésped mostraron que las filogenias no son congruentes, lo que apunta hacia
frecuentes cambios de huésped de las hormigas (Feldhaar et al.2003a). La coevolución estricta
entre parejas de hormigas y plantas es poco probable, ya que todas DecacremaLas especies
colonizan más de un huésped, e incluso hospedan especies de diferentes clados demacaranga
donde el mirmecofitismo, la asociación obligada con las hormigas, ha evolucionado de forma
independiente (Blattner et al.2001; Davis et al.2001; Feldhaar et al.2003a).
No obstante, cuando las especies de hormigas colonizan más de una especie huésped, un
subconjunto no aleatorio demacarangaSe elige la especie que coincida con los caracteres
morfológicos de las hormigas y los rasgos de la historia de vida, lo que sugiere la adaptación de las
hormigas hacia sus huéspedes (Fig.2; Feldhaar et al.2003b; Queck et al.2004). Presumimos que la
adquisición de simbiontes de hormigas permitió lamacarangaárboles para extenderse a nuevos
hábitats y posteriormente diversificarse debido a esta extensión de hábitat mediada por hormigas.
Los simbiontes de hormigas podrían entonces haber irradiado sobre el fondo de esta creciente
diversidad de especies de sus socios vegetales. El reconocimiento del huésped es un requisito previo
para la especialización y la adaptación hacia huéspedes adecuados y permitir que las hormigas
regresen a la misma especie o grupo de especies de generación en generación. Se espera que los
caracteres más importantes de los hospedantes que ejercen presiones de selección sobre las
hormigas sean la cantidad y calidad del alimento y el espacio para anidar provisto por la planta, ya
que las hormigas vegetales obligadas dependen completamente de su hospedante.
3.1 Elegir y encontrar un host
Los experimentos de elección mostraron que las fundadoras son capaces de distinguir
entre diferentesmacarangaespecies basadas en químicos (Inui et al.2001; j€Urgens et al.
2006), y posiblemente también táctil (J€Urgens et al.2006), señales, y que prefieren su
plantas hospederas naturales. Presumimos que la impronta en el huésped natal puede ser un
posible mecanismo para mejorar el reconocimiento de las reinas por parte del huésped (Davis
y Stamps 2004). Sin embargo, las reinas deC.captiosayC.msp. 10 levantados enM. indistinta no
mostró preferencia por este huésped cuando se le dio a elegir entre esta especie y su segundo
huésped potencialM. glandibracteolataen Sabah (noreste de Borneo) (Feldhaar y Fiala,
resultados no publicados).
Las señales químicas de los anfitriones también pueden desempeñar un papel en el apareamiento de
estas hormigas vegetales especializadas. A diferencia de otras hormigas, los vuelos de apareamiento en
estasCrematogaster (Decacrema) las especies no están sincronizadas y se pueden encontrar fundadoras
durante todo el año (Feldhaar et al.2005). Por lo tanto, los anfitriones pueden aumentar la atracción hacia los
compañeros de apareamiento si el apareamiento tiene lugar cerca de los anfitriones, lo que aún no se sabe.
Si este fuera el caso, también podría explicar la hibridación entre especies que colonizan el mismo
macarangaespecie en un hábitat dado (ver arriba).
3.2 Corrida en cera
macarangaLos hospedantes se pueden subdividir en plantas cuyos tallos están cubiertos con una flor
de cera y hospedantes no cerosos, con la excepción de unas pocas especies que tienen solo una
ligera cubierta de cera (M. glandibracteolata,Higo.1a) o producir flores de cera sólo como árboles
grandes (M. indistinta).Sólo “corredores de cera” (C.msp. 1,C.msp. 2,C. decamera, C.msp. 7 yC.msp. 9)
son capaces de moverse sobre tales superficies de plantas cerosas, mientras que las otras especies
se caen de la planta o solo pueden caminar muy lentamente sobre tales tallos hospedantes (Federle
et al.1997). La capacidad de correr cera de las hormigas se basa en una combinación de adaptaciones
morfológicas (patas más largas), locomotoras y de comportamiento (Bruening y Federle2005).
3.3 Entrar al anfitrión: el tamaño de la reina importa
El tamaño de la reina parece importar con respecto a la fuerza de las mandíbulas y la capacidad de
ganar la entrada a los anfitriones. Ambas pequeñas reinas deldecamera-grupo y grandes reinas del
captiosa-el grupo puede ingresar fácilmente a los árboles jóvenes de sus respectivas especies
hospedantes. Sin embargo, sólo las reinas más grandes delcaptiosa-se encontró que el grupo
entraba en las ramas de los árboles abandonados, cuyo tejido es mucho más grueso y duro en
comparación con los árboles jóvenes. Encontramos una correlación positiva entre la dureza del tejido
y el tiempo necesario para roer los agujeros de entrada en el tallo. reinas de ladecameragrupo no
logró producir un agujero en absoluto (Feldhaar y Fiala, resultados no publicados). El tamaño de la
reina y la fuerza de las mandíbulas serán igualmente importantes cuando las hormigas tengan que
excavar los domatia de las plantas hospedantes, como es el caso en varias especies hospedantes de
la sección.pruinosascomoM.hoseiyM. pearsonii (ver Weising et al., este volumen; Queck et al.2004).
De este modo,C.msp. 2, la especie más grande entre las Decacremaenmacaranga,está altamente
especializado en este grupo de huéspedes (Fig.2).
3.4 Comida disponible y espacio para anidar
Características demacarangalos huéspedes relacionados con la cantidad y la calidad de la comida, así

como el espacio de anidación, deberían ser los más importantes para las hormigas y, por lo tanto,
pueden ejercer fuertes presiones de selección. Param bancana,Se estima que el 5% de la biomasa
producida por la planta se invierte en la producción de cuerpos alimentarios (Heil et al. 1997).
Densidad obrera de las colonias de hormigas deC.captiosaenm bancanacorrelacionó positivamente
con la cantidad de alimento ofrecido por la planta hospedera (Heil et al.2001). La producción de
cuerpos alimenticios dependía a su vez de la disponibilidad de nutrientes para la planta. hormigas de
ladecamera-grupo yC.msp. 7 tienen reinas y obreras más pequeñas que las hormigas delcaptiosa-y
las colonias del primer grupo comienzan la reproducción con un tamaño de colonia mucho más
pequeño, cuando las colonias comprenden solo aproximadamente 500 obreras. En comparación, las
hormigas delcaptiosa-El grupo produce descendencia reproductiva cuando el tamaño de la colonia
supera las 3.000 obreras (Feldhaar et al.2003b). Por lo tanto, la limitación de alimentos puede
desempeñar un papel más importante en las hormigas pertenecientes a lacaptiosa-grupo que el
decamera-grupo. Las especies con un inicio temprano de la reproducción potencialmente podrían
alcanzar la etapa reproductiva en todas las especies hospedantes. Especies de lacaptiosa-El grupo
puede tener una desventaja competitiva en comparación con las especies más pequeñas en plantas
de crecimiento lento y menos productivas en el bosque primario y en algún momento son
reemplazadas por ellas (Feldhaar y Fiala, observaciones personales).
Las diferencias en la disponibilidad de alimento y espacio para anidar pueden ser menores entre
el conjunto demacarangahuéspedes colonizados por una especie particular de hormiga. La cantidad
y la calidad de los alimentos producidos por, por ejemplo,M. indistintayM. glandibracteolatano difirió
significativamente, medido como el número de cuerpos alimenticios producidos por la planta y su
contenido de aminoácidos. No encontramos diferencias significativas en la densidad de obreras ni en
la mortalidad de reinas en colonias deC.captiosaoC.msp. 10 sobre estos hosts (Feldhaar y Fiala,
resultados no publicados). Sin embargo, los desajustes en la disponibilidad de alimentos de las
plantas y las necesidades de la colonia de hormigas a veces ocurren y pueden generar conflictos en
las asociaciones.C.captiosase observó que a veces castraba flores deM. hullettiipero no dem bancana
dentro de la misma área (Moog2002). Cuandomacarangalos huéspedes florecen, las estípulas que
producen los cuerpos alimenticios son abscisas por la planta y las hormigas se enfrentarán a un
período de baja disponibilidad de alimentos hasta que las estípulas vuelvan a crecer después del
período de floración. Por lo tanto, las flores pueden destruirse para garantizar la disponibilidad
constante de alimentos. Curiosamente, las hormigas solo mostraron un comportamiento de
castración en plantas relativamente pequeñas y cuando aún no habían alcanzado la etapa
reproductiva (Moog2002).
3.5 ¿Todos los socios hormiga son iguales? – La perspectiva de la planta
Además de ser castrados a veces por las hormigas compañeras específicas, los anfitriones se benefician de la
Crematogaster (Decacrema)colonias Sin embargo, desde el punto de vista del huésped, se deben favorecer
aquellas hormigas que maximicen la relación costo-beneficio, por ejemplo, cuando
Las hormigas de cuerpo más pequeño con menor densidad de obreras brindan los mismos servicios que las
hormigas más grandes. La fuerza del comportamiento de poda (el recorte de la vegetación que crece
demasiado por parte de los trabajadores) difiere entre lasDecacremaespecies. Este comportamiento, por un
lado, mantiene a las hormigas competidoras fuera de la planta y, por otro lado, es importante para la planta
en la competencia por la luz. Por lo general, los estolones de cera podan menos en comparación con los
estolones que no son de cera, presumiblemente debido al hecho de que los primeros enfrentan menos
hormigas competidoras en sus anfitriones, ya que solo unas pocas especies pueden caminar sobre
superficies cerosas (Federle et al.2002). colonias deC.captiosayC.msp. Se encontró que 10 podan las vides de
manera menos eficiente en la capa finamente cubierta de cera.M. glandibracteolataque en
M. indistinta,a pesar de que las colonias tienen la misma densidad de trabajadores. Sin embargo,
C.msp. 10 era todavía significativamente más activo en la superficie de la primera especie
huésped queC.captiosay por lo tanto es la hormiga compañera más deseable. Sin embargo,
hasta la fecha, no se conoce ningún "tramposo" real para elCrematogaster–Macaranga
asociación que cosecha todos los beneficios de su anfitrión sin pagar los costos. Debido a la
monofilia de losCrematogaster (Decacrema),las diferencias entre las hormigas compañeras
pueden ser menos pronunciadas en comparación con las hormigas compañeras más diversas
que habitan en otras mirmecófitas que a menudo comprenden hormigas de diferentes
géneros (Davidson y McKey 1993; Dejean et al.2004; frederickson2005; heil y mckey2003; yu y
davidson1997).
4 Radiación enCrematogaster (Decacrema)Hormigas: ¿Es impulsado

por la adaptación hacia diferentes especies huésped?
4.1 Estudios de genética de poblaciones a escala local
La asociación obligada de losCrematogaster (Decacrema)hormigas con susmacarangaanfitriones puede ser

un arma de doble filo. Por un lado, las hormigas especializadas se benefician de un espacio relativamente
libre de competencia ya que las hormigas no especializadas no pueden utilizar el espacio de anidación y la
comida que se les ofrece (Federle y Rheindt2005) a menos que el anfitrión haya sido abandonado por una
colonia debido a la muerte de la reina (Feldhaar et al. 2003b). Por otro lado,Crematogaster (Decacrema)las
especies ahora están restringidas por sus anfitriones en distribución y abundancia, ya que ya no pueden
anidar independientemente lejos de sus anfitriones. Por lo tanto, el número de huéspedes adecuados
presentes en un área determinada establece el límite superior del tamaño de la población de hormigas. En
los claros del bosque primario, uno puede encontrar solo un puñado de árboles jóvenes o varias docenas a
la vez (Feldhaar, observación personal), mientras que el número de huéspedes puede ser mucho mayor en
las áreas despejadas. Procesos de especiación en elCrematogaster (Decacrema)Por lo tanto, las hormigas
pueden ser impulsadas por la adaptación hacia diferentes especies huésped, como todasDecacremalas
especies colonizan más de una especie huésped, o por la distribución espacial de sus huéspedes.
Si las plantas hospedantes ejercen fuertes presiones de selección sobre sus compañeras de hormigas,
obligándolas a especializarse en un hospedante en particular, esto debería reflejarse en la estructura genética de su
población, es decir, las hormigas pueden formar razas hospedantes. Esta hipótesis fue probada en
dos poblaciones (Poring Hot Spring y Kampung Monggis) en un hábitat de bosque secundario
en Sabah, al noreste de Borneo (aproximadamente 35 km de distancia lineal), donde
C.captiosacoloniza a ambosM. indistinta (población 1:norte¼51 reinas fundadoras; población
2:norte¼9, respectivamente) yM. glandibracteolata (población 1:norte¼37 reinas fundadoras;
población 2:n=13) en simpatía. Esperábamos que siC.captiosa forma razas anfitrionas,
entonces la variación genética que se encuentra dentro de cada hábitat entre las reinas
recolectadas de los diferentes anfitriones debería exceder la variación entre los hábitats del
mismo anfitrión. La diferenciación genética entre poblaciones se estudió mediante dos
análisis jerárquicos de varianza molecular (AMOVA) de tres niveles basados en cinco loci de
microsatélites utilizando el programa ARLEQUIN 3.11 (Excoffier et al.2005). Se utilizaron dos
órdenes de anidamiento: individuos en hospedantes en sitios e individuos en sitios en
hospedantes. La diferenciación genética fue significativa dentro de las poblaciones (entre
individuos) en ambos órdenes jerárquicos (97,1 y 95,8% de la variación genética respectiva). La
variación entre sitios también fue significativa en ambos órdenes jerárquicos (3,4 y 2%),
mientras que no se pudo detectar diferenciación entre hospedadores (-0,5 y 2,01%).
Comparaciones por pares de FCALLEde las cuatro poblaciones (C.captiosaseparados por sitio y
huésped dentro de los sitios) mostró que la diferenciación entreC.captiosarecogido deM.
glandibracteolataen Kampung Monggis hacia todas las demás poblaciones fue el principal
responsable de la diferenciación genética detectada (rango de FCALLEde 0,044 a 0,079 en
contraste con todas las demás comparaciones que oscilaron entre 0,012 y 0,017).
Llamaba la atención, sin embargo, que cuando la población deC.captiosadel bosque secundario
en Poring Hot Spring de ambos anfitriones se comparó con una pequeña población dentro del
bosque primario en una elevación más alta, que habita en un tercer huésped,
M. angulata,la diferenciación genética fue significativamente mayor (pares FCALLEde 0,12
aC.captiosadeM. indistintay 0.1 deM. glandibracteolata). Esta tercera población
comprende sólo unos pocosM.angulataanfitriones a lo largo de la orilla de un arroyo. De
los 50 huéspedes estimados presentes, solo una minoría fue colonizada por
C.captiosamientras que la mayoría fueron colonizados porC.msp. 7. Sin embargo, la fuerte
diferenciación puede no ser el resultado de la adaptación hacia el huésped, sino más bien debido a la
deriva genética en una pequeña población aislada. Sin embargo, las poblaciones de anfitriones
restringidas a un claro o al borde de un río como el deM.angulatapuede representar la estructura
natural de la población de la mayoríamacarangaespecies (Whitmore1969). Debido únicamente a la
reciente destrucción antropogénica del bosque, varias especies demacarangaLos huéspedes se han
convertido en árboles bastante comunes en áreas despejadas, con
M. pearsonii, M. hypoleuca, M. indistincta,ym.bancanaa veces domina rodales en hábitats
alterados (Fiala y Feldhaar, observación personal). Por lo tanto, hoy en día, la estructura de la
población de las hormigas vegetales obligadas puede estar fuertemente influenciada por tales
perturbaciones antropogénicas y puede no reflejar las condiciones naturales. Por lo tanto,
realizamos un segundo análisis genético de población en un hábitat de bosque primario (Valle
de Danum) en Sabah, al noreste de Borneo.
Para excluir la influencia potencial en la estructura de la población debido a la
colonización y posible adaptación hacia diferentes huéspedes, elegimosC. decamera,que
solo habitaM. hypoleucaen el área respectiva. En total se recolectaron 190 reinas
fundadoras o reinas de colonias incipientes de su hospedanteM. hypoleucade un área
de ca. 1.500 2.000 m que se sitúa en el borde del bosque primario y es
dividida por unos senderos. Se recolectaron reinas fundadoras de 28 claros naturales debido a
la caída de árboles, y cada hueco contenía entre 2 y 46 árboles jóvenes (desviación estándar
media 4,5 8,9). Además, se recolectaron 24 reinas en un bosque secundario contiguo a menos
de 1 km de distancia del sitio de estudio principal. En todas las muestras de los espacios que
contienen más de cinco reinas individuales (distancia máxima de aproximadamente 3,5 km),
encontramos un ligero pero significativo aislamiento por distancia (Fig.5) (siguiendo a Rousset
2000), es decir, un aumento en la distancia genética (basado en cinco loci de microsatélites) se
correlacionó con el aumento de la distancia geográfica. Estimamos la distancia de dispersión
de las fundadoras asignándolas a su colonia natal en función de sus genotipos multilocus. Las
22 fundadoras (de 190) que pudieron ser asignadas sin ambigüedades tenían una distancia de
dispersión media de 475 m desde su colonia natal (rango, 1-900 m). Entre las fundadoras, era
más probable que las hermanas completas se encontraran a distancias más cortas (hasta 400
m de distancia entre ellas) que en los retoños que estaban más separados. Además, la tasa de
colonización de árboles jóvenes deshabitados en claros se correlacionó negativamente con la
distancia a la siguiente colonia potencialmente madura que libera a los sexuales. Todos los
eventos de colonización observados (norte¼39) estaban en árboles jóvenes que estaban a
menos de 1 km de todas las colonias potenciales con reproductores (Feldhaar, T€Urke y Fiala,
Estos resultados sugieren que las reinas rara vez se dispersan más de unos pocos kilómetros,
aunque se produce una dispersión a mayor distancia cuando las reinas son capaces de encontrar y
0.30
0.25
0.20
Distancia genética (FCALLE)
0.15
0.10
0.05
0.00
– 0,05
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
distancia logarítmica (m)
Figura 5Estructura genética a pequeña escala deCrematogaster decamerabasado en cinco loci de microsatélites. Los
espacios que contenían cinco o más reinas fundadoras se incluyeron en el análisis. Las fundadoras se recolectaron en
claros en un hábitat de bosque primario y un parche contiguo de bosque secundario
colonizar plantas aisladas dentro del bosque primario. Estos hallazgos pueden explicarse por
la limitada capacidad de dispersión de las reinas y la alta mortalidad a medida que aumenta la
distancia de dispersión o por la filopatría. Las reinas pueden beneficiarse de no dispersarse
demasiado lejos de su nido natal, ya que la supervivencia de su planta huésped particular
hasta la etapa reproductiva de las hormigas que la habitan debería ser un buen indicador de
que el hábitat local es adecuado para sus plantas huésped. Por lo tanto, las reinas fundadoras
primero pueden buscar un retoño adecuado en las cercanías de su nido natal y solo en el caso
de que no encuentren ninguno, se ven obligadas a volar más lejos. Que la disponibilidad de
árboles jóvenes es muy limitada es obvio por el hecho de que la mayoría de los árboles
jóvenes son colonizados por varias reinas antes de que una colonia finalmente ocupe la planta
sola (Fiala y Feldhaar, observaciones personales). Sin embargo,1990), los machos pueden
verse obligados a dispersarse más lejos de su nido natal, lo que podría lograrse volando
activamente o posiblemente a la deriva del viento. Este problema puede aumentar en
poblaciones pequeñas. Para los machos, el riesgo de mortalidad durante la dispersión puede
ser aún mayor debido a su tamaño corporal más pequeño, pero por la misma razón son
menos costosos de producir para la colonia.
La dispersión limitada o la filopatría de las reinas en contraste con los niveles más altos de flujo
de genes entre las poblaciones debido a la dispersión de los machos también explicaría el patrón
observado de mtDNA fuertemente divergente en comparación con la diferenciación limitada en los
marcadores nucleares (microsatélites y EF-1).a).Si ambos sexos permanecen cerca de su nido natal
para aparearse y fundar colonias, nuestras expectativas serían que la subestructura de la población
local debería traducirse en una mayor cantidad de especies de hormigas (crípticas) en comparación
con sus anfitriones, y no en ocho especies de hormigas.Crematogaster (Decacrema) colonizando
aproximadamente 30macarangaespecie hospedera.
4.2 Evolución vicariante: la escala geográfica más amplia
Las divisiones genéticas más profundas dentro de las especies de hormigas a menudo no se
correlacionan con cambios en la asociación del huésped, sino con barreras geográficas similares a las
de sus macarangaanfitriones (Weising et al., este volumen; B€Anfer et al.2006). Encontramos una
fuerte diferenciación entre las poblaciones separadas por el Mar del Sur de China (Península de
Malasia frente a Borneo) y, dentro de Borneo, la Cordillera de Crocker separó las poblaciones del
noreste (Sabah) de las poblaciones occidentales (Brunei y Sarawak), un patrón biogeográfico que es
consistente con el patrón encontrado por Quek y colaboradores (Quek et al.2007). Los individuos de
las regiones geográficas más grandes rara vez se agrupan (Fig.2). La divergencia de poblaciones en
una gran escala geográfica también está respaldada por una mayor divergencia genética en loci de
microsatélites (resultados no mostrados). Se encontró que la diversidad de linajes de mtDNA era más
alta enCrematogaster (Decacrema)hormigas en cadenas montañosas por Quek et al. (2007),
especialmente la gama Crocker. Las cadenas montañosas han sido refugios de la selva tropical
durante las partes más secas del Pleistoceno y, por lo tanto, albergan una gran cantidad de plantas
endémicas, que incluyen
mirmecofíticomacarangaespecies (Ashton2003; B€Anfer et al.2006). Además de un mayor

número de hospedantes potenciales, la heterogeneidad espacial debería ser mayor en el
bosque primario desde las tierras bajas hasta las altitudes más altas, y puede facilitar la
coexistencia de más linajes (Yu et al.2001).
5 Conclusión y perspectivas
Procesos de especiación en elCrematogaster (Decacrema)Las hormigas solo se pueden inferir

cuando se utilizan varios marcadores genéticos diferentes junto con datos morfológicos, así como
experimentos de campo y observaciones. En contraste con nuestras expectativas cuando iniciamos
este proyecto, la especiación en elCrematogaster (Decacrema)planta-hormigas no parece estar
impulsada por la adaptación hacia huéspedes específicos. Cuandomacarangahospederos
inicialmente diversificados, la presión de selección ejercida por ciertos tipos de hospederos sobre los
caracteres morfológicos y de historia de vida puede haber sido más fuerte para elDecacrema
hormigas, por ejemplo, para reinas más pequeñas y más grandes, así como hormigas que pueden
utilizar huéspedes con una superficie de tallo cerosa. Una vez que estos "tipos" de hormigas
compañeras evolucionaron, la adaptación hacia los anfitriones a menudo bastante similares de la
misma sección taxonómica (o clado) puede haber desempeñado un papel menor y la dispersión
limitada de la hormiga compañera puede haberse vuelto más importante para impulsar los procesos
de diversificación. ElCrematogaster (Decacrema)Se encontró que las hormigas estaban estructuradas
genéticamente en pequeñas escalas espaciales, como lo reflejan los estudios sobre la estructura de
la población en el bosque primario. Las subpoblaciones en los claros de los bosques primarios tienen
tamaños de población muy pequeños (a menudo por debajo de 50 individuos) y los huéspedes
suelen estar muy dispersos. La fuerte diferenciación genética a nivel de mtDNA respalda la noción de
que los tamaños de población pueden ser pequeños, ya que la probabilidad de que las sustituciones
de ADN se fijen debido a la deriva genética es mucho mayor que en poblaciones más grandes.
Además, se ha demostrado que la hibridación entre especies de hormigas ocurre a menudo cuando
las parejas de apareamiento homoespecíficas son escasas para las reinas y el tamaño de la población
es pequeño, como en los parásitos sociales (Feldhaar et al.2008). Sin embargo, a escala regional, esta
subestructura no se tradujo en una fuerte diferenciación en los marcadores nucleares.
En estudios previos (Fiala et al.1999) y nuevamente aquí, encontramos que todos Crematogaster
(Decacrema)Las especies colonizan varias especies hospedantes diferentes, aunque con rasgos similares
relacionados con las hormigas (como el espacio para anidar y la producción de alimentos o la cubierta de
cera de los tallos; véase también Quek et al.2004,2007). Es poco probable que tal conjunto de anfitriones
ejerza una selección sobre sus compañeras de hormigas lo suficientemente fuerte como para especializarse
aún más, ya que los caracteres relevantes para la aptitud física, como la comida y el espacio de anidación
proporcionado, no difieren mucho entre esos anfitriones. La capacidad de reconocer y colonizar más de un
huésped puede ser beneficiosa para las hormigas incluso cuando los huéspedes difieren hasta cierto punto.
La aptitud perdida al cambiar a un huésped subóptimo (p. ej., uno que proporcione menos comida) que
puede ser colonizado cuando el huésped "adecuado" no está disponible incurre en un costo relativamente
bajo en comparación con la pérdida total de aptitud cuando las reinas no pueden encontrar un colonia en
absoluto. Desde el punto de vista de la planta, ser demasiado exigente no
no pagan por la misma razón: si las hormigas compañeras no difieren demasiado en la relación
costo-beneficio para su huésped, las ganancias de aptitud física serían pequeñas en comparación
con el riesgo de no ser colonizadas cuando se trata de excluir a demasiadasDecacremaespecies de
hormigas La heterogeneidad espacial de las distribuciones de huéspedes y hormigas por igual puede
limitar una mayor especialización en el lado de la hormiga y la planta, pero también puede facilitar la
coexistencia de especies en esta asociación hormiga-planta (Yu et al.2001).
Mientrasmacarangalos huéspedes pueden ser dispersados a distancias medias o largas por aves
o pequeños mamíferos (Weising et al., este volumen; Moog et al.2002) y por lo tanto puede llegar a
hábitats remotos, elCrematogasterlas reinas generalmente no podrán "seguir" la planta desde la
misma fuente en distancias más largas. Los huéspedes pueden ser colonizados por hormigas reinas
de las respectivas especies de poblaciones de origen cercanas al nuevo hábitat de la planta, o las
hormigas que colonizan diferentes huéspedes pueden cambiar al nuevo huésped. Sin embargo, esto
puede suceder principalmente en poblaciones donde las hormigas se enfrentan a una alta
competencia intraespecífica, ya que, por lo demás, las reinas muestran altos niveles de constancia en
el hospedador.
Las poblaciones anfitrionas y, posteriormente, las poblaciones de las hormigas compañeras pueden
haber sido fuertemente alteradas en las últimas dos décadas debido a la perturbación humana de los
bosques. No podemos excluir que esta perturbación ya haya tenido un impacto en los patrones de
asociación y la diversidad genética local encontrada en este estudio y otros en este sistema (Feldhaar et al.
2003a; Queck et al.2004,2007). Cuando comenzó la fragmentación, los parches despejados pueden haber
facilitado primero un aumento en la abundancia de la pionera macarangaplantas, mejorando el flujo de
genes entre las poblaciones de hormigas. Con la conversión progresiva de bosques primarios o secundarios
en grandes áreas de tierras agrícolas o plantaciones de palma aceitera, los rodales demacarangaahora a
menudo están separados por muchos kilómetros y, por lo tanto, pueden restringir fuertemente el flujo de
genes entre las poblaciones de hormigas o resultar en la pérdida de las poblaciones de origen de las
fundadoras. Por lo tanto, un estudio comparativo en el futuro puede arrojar resultados interesantes sobre la
dinámica de esta asociación hormiga-planta, por ejemplo, esperaríamos que los cambios de huésped
ocurrieran con mayor frecuencia y encontrar una subestructura genética más pronunciada de la planta.
Crematogaster (Decacrema)hormigas a escala regional si las poblaciones de hormigas se vuelven más
aisladas.
Expresiones de gratitudEstamos muy agradecidos con David Nash y dos revisores anónimos por sus
comentarios sobre una versión anterior de este manuscrito. Este trabajo fue apoyado por Deutsche
Forschungsgemeinschaft (subvenciones Ga661/2-1, Fe631/1-1, Fe631/1-2 y Fi606/5) dentro del programa
prioritario SPP 1127 "Radiaciones adaptables". El permiso para llevar a cabo la investigación en Malasia fue
otorgado amablemente por la Unidad de Planificación Económica (EPU) de la Oficina del Primer Ministro,
Kuala Lumpur, y la EPU en Kota Kinabalu, Sabah, así como por el Comité de Gestión del Valle Danum.
Nuestro permiso para trabajar en Brunei fue obtenido por la Universiti Brunei Darussalam y el Museo de
Brunei. Agradecemos a nuestros homólogos y colegas en Malasia y Brunei por su cooperación y apoyo,
especialmente al Prof. Datin Dr. Maryati Mohamed, al Dr. Rosli bin Hashim, al Dr. Kamariah Abu Salim y a los
miembros de Sabah Parks, a saber, el Dr. Jamili Nais y el Dr. . Maklarin bin Lakim. Se agradece el apoyo
logístico y la ayuda de muchas otras formas por parte del Prof. Dr. K. Eduard Linsenmair. Agradecemos al
Prof. Dr. Ulrich Maschwitz por el amable suministro de material de hormigas. Barbara Feldmeyer, Sabine
Frohschammer y Manfred T€Urke contribuyó en gran medida al trabajo de campo. Agradecemos a Daniela
Guicking, Frank Blattner, Kurt Weising, Ute Moog y Christina Baier por su apoyo en el muestreo y,
especialmente, en la discusión de los procesos de especiación en esta asociación de hormigas y plantas, de
los acompañantes.macarangaproyecto.
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Radiación, diversidad biológica e interacciones
huésped-parásito en rosas silvestres, hongos de la
roya e insectos
Annette Kohnen, Roland Brandl, Roman Fricke, Friederike Gallenmu €ller,

Katrin Klinge, Ines Köhnen, Wolfgang Maier, Franz Oberwinkler,
Christiane Ritz, Thomas Speck, Gu €Entre Theissen, Teja Tscharntke,
Andrea Vaupel y Volker Wissemann
AbstractoUna de las principales tareas de la ecología evolutiva es explicar cómo las

interacciones interespecíficas influyen en la dinámica de los procesos evolutivos y permiten la
radiación y la génesis de la diversidad biológica. La desconcertante diversidad de las rosas
caninas es generada por un sistema reproductivo heterógamo. La distancia genética entre los
taxones de rosas se analizó como línea de base para la explicación de la radiación posterior de
los dos grupos de parásitos dependientes del huésped, los hongos de la roya y los insectos.
Investigamos la interacción entre cada sistema huésped-parásito y entre los grupos de
parásitos. Aprendimos que la diploidía funcional a nivel meiótico no se refleja a nivel
fenotípico en los escaramujos. La comunidad de insectos fitófagos muestra solo diferencias
menores en la composición de diferentes especies de rosas. Estos invertebrados no parecen
verse afectados negativamente por los tricomas glandulares,fragmidiolos tricomas
glandulares importan, porque se correlacionan negativamente con la infección. La abundancia
de dos especialistas en rosas, la
V. Wissemann (*)
Instituto f€ur Allgemeine Botanik & Pflanzenphysiologie, AG Spezielle Botanik, Universidad Justus-Liebig€en
Giessen, Heinrich-Buff-Ring 38, 35390 Gießen, Alemania Correo electrónico: volker.wissemann@bot1.bio.uni-
giessen.de
A. Kohnen, R. Brandl, R. Fricke y A. Vaupel Philipps-
Universit.€en Marburgo, Marburgo, Alemania
F. Gallenm€Uller y T. Speck
Universidad Albert-Ludwigs€en-Freiburg, Freiburg im Breisgau, Alemania
K. Klinge y T. Tscharntke
Universidad Georg-August€en Göttingen, Göttingen, Alemania
W. Maier
Universidad Ruhr€en Bochum, Bochum, Alemania
F.Oberwinkler
Universidad Eberhard Karls€en T€ubingen, T€ubingen, Alemania
I. Köhnen y G. Theissen
Universidad Friedrich Schiller€en Jena, Jena, Alemania
c ritz
Universidad Justus-Liebig€en Giessen, Giessen, Alemania

216 A. Kohnen et al.
mosca de la rosa mosquetaRhagoletis alternataCaer. y la avispa rosadaDiplolepis rosaeL., difería en

especies de rosas, peroRh. alternatano mostró ninguna diferenciación genética en las especies
huésped ni diferenciación geográfica. Como resultado básico, detectamos que la diversidad genética
de los escaramujos no se traduce en una radiación específica del huésped de los parásitos.
Suponemos que la evolución reticular intensiva de los escaramujos impide la coespeciación.
1 Introducción: Radiación, Biodiversidad e Interacción

Huésped-Parásito en elrosa-Sistema
Un tema clave en la ecología evolutiva es explicar cómo las interacciones interespecíficas

influyen en la dinámica de los procesos evolutivos y permiten la radiación y el desarrollo de la
diversidad biológica. En los sistemas de interacción huésped-parásito, las preguntas más
importantes son: ¿cómo se traduce la radiación y la diversidad de los huéspedes en la
radiación y diversidad de los parásitos, y cuál es el papel de las interacciones de los parásitos?
Dichos análisis son extremadamente raros debido a la complejidad de estos sistemas (ver, por
ejemplo, Clay1989; Pirozynski y Hawksworth1989). En este estudio, investigamos la red huésped-
parásito de los escaramujos (Rosaceae, Rosoideae,rosasL., secta.caninos (DC.) Ser.) hongos de la roya
(fragmidio)e insectos Al analizar la distancia genética, la variabilidad y las relaciones filogenéticas
entre los taxones de rosas, determinamos una línea de base para la explicación de los procesos de
radiación posteriores de dos grupos de parásitos dependientes del huésped, los hongos de la roya y
los insectos (Fig.1). Comprender el proceso de radiación de los escaramujos nos permite desentrañar
los niveles de interacción (coevolución, coespeciación, interacción individualista) sobre los que actúan
los hongos de la roya y los insectos. Se cree que los escaramujos evolucionaron durante el Plioceno
(5,3–1,8 millones de años) como resultado de un único evento en el que se produjo el peculiar modo
deCanina-la meiosis se desarrolló y luego colonizó Europa Central por una radiación muy rápida y
explosiva durante el Pleistoceno y el Holoceno (Zielinski1986). Wissemann (2000b) y el estudio de Ritz
et al. (2005a) mostró que las rosas caninas son alopoliploides permanentes que han surgido por
múltiples eventos de hibridación. La alta variabilidad genética debida a la alopoliploidía y la gran
homología entre los diferentes juegos de cromosomas que permiten la interfertilidad entre cualquier
especie de rosa canina son las razones de la variación morfológica y la existencia de numerosas
formas locales.
Posterior a larosasradiación, numerosos patógenos interactuaron con sus anfitriones. En la
actualidad, tanto las especies analizadas de royas de rosa como los insectos se encuentran en
cualquiera de las especies de rosal investigadas. Sin embargo, poco se sabe sobre la
diversidad genética de los dos principales (y comercialmente importantes) hongos de la roya
en las rosas, Phragmidium mucronatum (pers.) Schltdl. yP.tuberculatumJ. M.€más No sabemos
nada sobre el proceso de radiación de taxones subespecíficos (razas, cepas) y no sabemos el
nivel en el que los hongos se convirtieron en huéspedes específicos. Lo mismo ocurre en las
numerosas especies de insectos propios de las rosas. Un grupo son los insectos formadores
de agallas, que son muy susceptibles a la resistencia de las plantas y se adaptan a recursos
específicos en la mayoría de los casos.
Radiación, diversidad biológica e interacciones huésped-parásito 217
a b C
d F gramo
mi h
i j
Figura 1 (a)Superficie inferior deR. corymbifera (peludo), (b)R. rubiginosa (glandular), (C)R. canina (glabras,
eglandulares). (d)Esporas del hongo de la roya de las rosasPhragmidium mucronatum. (mi)Esporas del
hongo de la roya de las rosasPhragmidium tuberculatum. (F)Infección por óxido en una cadera deR. canina
(gramo)teliosporas (h)Rhagoletis alternatacadera infectada deR. canina. (i)Diversidad de flores enRosa.
(j)Diversidad de cadera
2 Las rosas de perro son alopolilipoides: constitución genética

de la secciónCaninos
el génerorosasconsta de unas 200 especies siguiendo la clasificación de Wissemann

(2003) y Wissemann y Ritz (2005). Según los caracteres morfológicos, se reconocen
cuatro subgéneros:Hultemia (Dumort.) Focke,Platyrhodon (Hurst) Rehder,Hespérhodos
cockerell yRosa.el subgénerorosascomprende diez secciones con más de 150 especies
de varios niveles de ploidía, distribuidas principalmente en las regiones templadas del
hemisferio norte. Los estudios relacionados con la clonación excesiva de genes
nucleares (espaciadores ribosómicos y genes de baja copia) revelaron que la hibridación
desempeñó un papel importante en la evolución de los taxones de rosas poliploides
(Wissemann2000b; Ritz et al.2005a; Joly y Bruenau2006; Joly et al.2006). Dentro del
subgéneroRosa,miembros de la sección poliploideCaninosson de particular interés, no
solo por su comportamiento meiótico único, sino también por la facilidad con la que los
miembros de la sección pueden hibridar (Feuerhahn y Spethmann 1995; Wissemann y
Hellwig1997; reichert1998; Nybom et al.2004,2006; Werlemark y Nybom2001;
Werlemark et al.1999). Los primeros estudios que analizaron las secuencias de nrITS-1
revelaron la existencia de una evolución no concertada de la región nrITS y, por lo tanto,
confirmaron la constitución alopoliploide de los escaramujos (Eigner y Wissemann).1999;
Wissemann1999,2000b,2002). Con base en estos estudios, demostramos que las rosas
de perro tetra, penta o hexaploides surgieron de múltiples hibridaciones en todo el
género.Rosa (Higo.2; Ritz et al.2005a).
Las rosas de perro se caracterizan citológicamente por una meiosis específica (T€ackholm
1920, 1922; Klášterská1969,1971; Klášterská y Natarajan1974; roberts1975). Esta meiosis da
lugar a una reproducción heterógama (en el caso de las rosas pentaploides, 2norte =5x = 35)
granos de polen haploides (norte =1x = 7) y óvulos tetraploides (n =4x = 28; revisado en
Wissemann y Ritz2007). Por análisis de microsatélites (Ritz y Wissemann, presentado)
agregamos más apoyo a los primeros resultados de Nybom et al. (2004,2006) que siempre los
mismos juegos de cromosomas se aparean durante la meiosis (bivalentes) y los mismos tres
juegos no están apareados (univalentes). Estos hallazgos respaldan la hipótesis de que las
rosas caninas son diploides funcionales: los bivalentes se recombinan meióticamente y se
transmiten a través del óvulo y el grano de polen.
XXX X
X X
xxxxxxx X
X xxxxxxx
X X
XXXX
Figura 2Constitución genética hipotética de una rosa canina alopoliploide pentaploide (2norte =5x =
35, x = 7) con genomas parentales de hibridación múltiple según Ritz et al. (2005a) y Kovarik et al. (
2008).Negrocromosomas: genoma diploide bivalente formando Protocaninae;gris blancoy
comprobadocromosomas:woodsii-, rugosa-ygallica-genomas formadores de univalentes de otras
secciones del génerorosas
pero los univalentes son heredados apomícticamente solo por el óvulo (Fagerlind 1945;
Zielinski1986; Nybom et al.2004,2006; Lim et al.2005). Por lo tanto, la meiosis canina combina
dos modos de reproducción: los bivalentes que interactúan generan variabilidad a través de la
recombinación sexual y los univalentes apomícticos conservan información que permite la
tremenda variabilidad y posibilidades de radiación. Esta meiosis única de las rosas caninas
está presumiblemente conectada a un conjunto de cromosomas particular caracterizado por
lacanina-tipo nrITS, que ya no se sabe que exista en una especie diploide (Ritz et al.2005a). Los
resultados actuales muestran que lacanina-El tipo nrITS tiene al menos dos copias en cada
escaramujo y está involucrado en la formación bivalente (Kovarik et al.2008; Ritz et al., inédito).
Asumimos estocanina-tipo nrITS para ser un rastro de la existencia del genoma hipotético de
Protocaninae. Los Protocaninae diploides probablemente se extinguieron, pero se rescataron
como el conjunto de formación bivalente durante la meiosis (Fig.2). Por otro lado, el genoma
de la canina también podría haber evolucionado por mutación como se demostró en la
evolución de teosinte a mayze en la que también se ha propuesto la existencia de un
“Protomayze” (Doebley 2004). Un origen polifilético de los escaramujos parece improbable
teniendo en cuenta la singularidad y complejidad de la meiosis canina. Sin embargo, los
árboles filogenéticos basados en secuencias de ADN de cloroplastos son polifiléticos con
respecto a la secciónCaninosporque los miembros de la subsección.Caninos no son hermanas
de las especies glandulares de la subsección.RubigineaeH. Cristo yVestitae
H. Cristo pero a rosas no caninas de tramosindicatorio,rosasysinstilasCORRIENTE
CONTINUA. (Wissemann y Ritz 2005; Bruneau et al.2007).
3 Herencia de caracteres en el sistema heterógamo de

Dog Roses
Como consecuencia de la canina-meiosis la proporción de información genética aportada por

el progenitor materno a la descendencia es cuatro veces mayor que la del progenitor polen.
Por lo tanto, la descendencia es en gran parte matroclinal con respecto a la mayoría de los
caracteres morfológicos de hojas, flores y caderas (revisado en Wissemann y Ritz2007). Este
patrón de herencia de caracteres también se expresa a nivel anatómico, bioquímico y
genético, ya que estudios sobre ceras epicuticulares y volátiles florales (Wissemann 2000a,b,
2007; Wissemann y Degenhardt, sin publicar) y sobre microsatélites y bandas de ADN
polimórfico amplificado aleatoriamente (RAPD) (Werlemark et al. 1999, Werlemark y Nybom
2001; Nybom et al.2004,2006; Ritz y Wissemann, presentado) demostraron una fuerte
matroclina de híbridos interespecíficos.
Sin embargo, algunos rasgos morfológicos no concuerdan con estas observaciones, ya que
Wissemann et al. (2006) mostró que el hábito de crecimiento de los escaramujos se hereda
predominantemente. Híbridos recíprocos interespecíficos entreR. caninaTierraR. rubiginosa
L. se caracterizaron por las ramas laxas y arqueadas en contraste con las densas ramas
erectas deR. rubiginosa.Este patrón podría ser el resultado de (1) un efecto de heterosis, (2) la
herencia del alelo dominante que codifica la forma de crecimiento, o (3), favorecido por los
autores, múltiples factores de los cuales algunos no están inevitablemente sujetos a la
herencia, pero son responsables de la forma de crecimiento del síndrome.
Además, los caracteres taxonómicos importantes, la persistencia del sépalo y el diámetro

del orificio, se expresan paternalmente y posiblemente están controlados por la impronta
genómica (Gustafsson1944; Ritz y Wissemann2003). La herencia paterna de estos caracteres
da como resultado la identidad morfológica entre los híbridos interespecíficos y las especies
de rosas caninas descritas (Fig.3). Ritz y Wissemann (presentado) demostraron queR.
micranthaBorrador ex Sm. y el híbrido interespecífico correspondienteR. rubiginosa - R. canina
genéticamente no son completamente idénticos. Alelos de microsatélites deR. micrantha
correspondía a los de los padres potenciales; sin embargo, todas las muestras investigadas de
R. micranthaestaban en contraste con los híbridos pentaploides hexaploides. Los autores
asumieron que el híbrido interespecífico inicial que dio lugar aR. micranthase estableció
mediante un aumento del nivel de ploidía para mantener dos conjuntos de cromosomas
altamente homólogos para la correcta formación bivalente durante la meiosis canina.
La matroclinía de la mayoría de los caracteres apunta, a pesar de la diploidía funcional del

sistema de meiosis, a la funcionalidad de la información genética almacenada en genomas
univalentes. Por el contrario, Lim et al. (2005) supuso que la falta de recombinación entre los
univalentes conduce a la degradación de genes debido a una presión de selección relajada. Sin
embargo, un estudio sobre la expresión génica de genes de una sola copia no apuntó a la
degradación o silenciamiento de alelos en monovalentes (Ritz et al. sin publicar).
R. canina
R. rubiginosa
R. dumalis? = =R. micrantha?
R. canina x R. rubiginosa x
rubiginosa canino
Fig. 3Diagrama del experimento de cruce (Wissemann y Hellwig1997) entre las dos especies de dogroseR. canina (Tipo
L: sépalos caducos durante la maduración de la cadera) yR. rubiginosa (Tipo D: sépalos persistentes durante la
maduración de la cadera). Ambos progenitores se usaron como progenitor de semillas y polen. flechassimbolizan la
dirección de las cruces.Flechas grises: R. caninase usó como progenitor de semilla y
R. rubiginosafue utilizado como el padre del polen.Flechas negras: R. rubiginosase usó como progenitor de
semilla yR. caninacomo padre de polen. Elespesordelflechassimboliza la herencia matroclinal debida a la
meiosis canina: el progenitor semilla hereda 4/5 del genoma y el progenitor polen sólo 1/5 del genoma. Los
resultados de ambos cruces muestran el mismo tipo de persistencia del sépalo que el progenitor del polen.
La combinación de los caracteres vegetativos matroclinales (por ejemplo, superficie de la hoja) y el tipo
paterno de persistencia del sépalo también se encuentra en especies ya descritas (R. dumalisy
R. micrantha).Reproducción de Wissemann y Ritz (2007, Higo.2).
4 Los tricomas glandulares importan: hongos de la roya enrosas
En Rosaceae, los hongos de la roya se han reconocido durante mucho tiempo como parásitos
importantes. La coevolución de las royas y las rosáceas parece tan fuerte y evidente que los hongos
de las royas pueden usarse para determinar las relaciones filogenéticas entre ciertos huéspedes en
las rosáceas (Savile1979). El Gazzar (1981) señaló que más de 1.500 especies de 49 géneros de
Rosaceae son susceptibles a unas 300 especies de los 27 géneros de Uredinales, y que la
susceptibilidad a la infección por roya está fuertemente correlacionada con el número de bases
cromosómicas dex =7. Los hongos de roya más importantes enrosassonPhragmidium mucronatumy
P.tuberculatum.Ambos han sido registrados en rosas para perros (G€aumann1959; erudito
1994; Brandeburgo1994). Comparable a los hallazgos de Evans et al. (2000). que mostraron la
formación de cepas subespecíficas o razas dePhragmidium violaceum (Schultz) Winter, un
parásito de la zarzamora (RubusL., Rosaceae), esperábamos que los dos fragmidioespecies en
rosas para evolucionar e irradiar de la misma manera. Sin embargo, desde la publicación de
Savile (1979) en la que la interacción entre los hongos de la roya y las rosáceas ha sido
considerada como un sistema coevolutivo, nuestros hallazgos han debilitado esta suposición
(Ritz et al.2005b). Rangos de hospedantes deP. mucronatumyP.tuberculatum se superpusieron
y sus tasas de infección no difirieron entreRosa canina, R. corymbifera Borkh. yR. rubiginosa.
Estas tres especies sirvieron como ejemplos de la variación de los tricomas de las hojas y las
glándulas observadas en los escaramujos que podrían ser cruciales para la infección por roya
(Bahçecioğlu y Yildiz2005; Valkama et al.2005). Los resultados mostraron que la infección porP.
mucronatumyP.tuberculatumno difirió significativamente entre especies con hojas glabras y
pilosas,R. caninayR. corymbifera,respectivamente. Sin embargo,R. rubiginosa,desarrollando
hojas peludas con numerosas glándulas odoríferas, fue significativamente menos infectado
por ambas especies (Ritz et al.2005b). A pesar de sus rangos de huéspedes superpuestos y su
similitud morfológica, ambos hongos están genéticamente relacionados de forma lejana:P.
mucronatumpertenece a un clado de “rose rust sensu stricto”, mientras que
P.tuberculatumestá estrechamente relacionado con las royas que viven enRubusySanguisorbaL. y,
por lo tanto, exploró las rosas de perro mediante un salto de anfitrión. La falta de especificidad de
huésped de las royas en los escaramujos podría explicarse por la hipótesis del puente híbrido (Floate
y Whitham1993). Predice que la hibridación de huéspedes y, por lo tanto, la mezcla de diferentes
genomas impide el proceso paso a paso de coevolución y especiación conjunta de huéspedes y
parásitos.
5 Evolución y diversidad de las redes alimenticias de plantas, patógenos e

insectos en las rosas de perro
Las especies de insectos herbívoros y sus especies de plantas hospedantes juntas comprenden más
del 50% de las especies macroscópicas (Strong et al.1984). Por lo tanto, la comprensión de las fuerzas
motrices evolutivas, así como de las interacciones ecológicas, es un tema importante para nuestra
comprensión general de la biodiversidad. Durante los últimos 30 años, el paradigma de
interpretación de la enigmática diversidad de insectos cambió
de la coevolución y la coespeciación a una visión más individualista (por ejemplo, Brandl

et al.1992; Schoonhoven et al.1998).
El trabajo macroecológico de los últimos 20 años mostró que la fauna de insectos asociada
con una especie de planta en particular es una mezcla compleja de generalistas y especialistas
(Strong et al.1984; Tscharntke y Greiler1995; Schoonhoven et al.1998; hermano€andle y brandl
2001). La fauna de insectos en un huésped en particular depende del grupo de especies
disponibles de fitófagos, la distribución y abundancia del huésped, y el número de nichos de
alimentación proporcionados por el huésped, así como el aislamiento taxonómico y la
composición bioquímica del huésped (Strong et al. Alabama.1984; Leyton1986; Tscharntke y
Greiler1995; Frenzel y Brandl1998). Los genotipos de plantas con diferentes rasgos
morfológicos pueden afectar no solo la abundancia de una sola especie de insecto, sino
también la estructura de las comunidades de herbívoros asociadas (Maddox y Root1987; fritz y
precio1988). Whitham et al. (2003) mostró que incluso los rasgos únicos codificados por unos
pocos genes pueden tener efectos importantes en la comunidad de explotadores (fenotipo
extendido).
Los rosales son elementos característicos de los paisajes europeos, en particular como
componentes de los setos. Las rosas se han incluido en varios intentos de entendera-
diversidad (por ejemplo, cuero1986). Sin embargo, la mayoría de los datos disponibles sobre
fitófagos no distinguen entre las diferentes especies de rosas y, por lo tanto, ignoran la
desconcertante diversidad dentro de ese taxón huésped. Como las rosas proporcionan un
ejemplo fascinante de una radiación explosiva, las rosas son buenas candidatas para estudiar
los efectos de la hibridación, así como la rápida radiación de los anfitriones en los herbívoros a
través de una bandada de plantas anfitrionas. La información disponible sobre fitófagos en
rosas muestra que hay una serie de generalistas que atacan a las rosas (p. ej., véase Zwölfer et
al.1981, 1984), pero también muchos especialistas como la avispa cinípidaDiplolepis rosaeL., la
mosca tefrítidaRhagoletis alternataFallén, y la polilla tortricidanotocelia roboranaDennis y
Schifferm€más Por ejemplo, Ferrari et al. (1997) tomaron muestras de 6000 especímenes de
insectos ectófagos de 32 rosales alrededor de Göttingen. Ocho de las 10 avispas tenthredinid,
3 de las 19 especies de Cicadina y 4 de las 76 especies de escarabajos eran especialistas en
rosas, mientras que las 20 especies de insectos estaban menos especializadas.
Para todas nuestras investigaciones, seleccionamos tres especies de rosas caninas (rosa caninal,
R. corymbiferaBorkh. yR. rubiginosaL.), todos los miembros de la sección de rosas caninas
caninos (DC.) Ser. Estas tres especies están ampliamente distribuidas y son abundantes en
Europa central y, a menudo, se encuentran en los mismos hábitats. Se supone que se
originaron por eventos de hibridación alopoliploide (Ritz et al.2005a; Wissemann 2002) y
expandió su área de distribución al centro y norte de Europa después de la última glaciación
(Zielinski 1986). Aunque estrechamente relacionados, difieren en varios caracteres:
R. caninaes una rosa glabra,R. corymbiferatiene pelos en el raquis y la superficie abaxial de la
hoja yR. rubiginosatiene tricomas glandulares en la superficie inferior de la hoja. Además, las
tres especies de rosas también difieren en la arquitectura de la planta (Wissemann et al.2006)
y fenología (Timmermann1998). Esto lleva a la pregunta: ¿cómo se traducen estas diferencias
en la diversidad de los niveles tróficos superiores? A continuación, comparamos (1) la
estructura de la comunidad de estas tres especies de rosas caninas, (2) las densidades de dos
consumidores especialistas en las especies de rosas y (3) la genética
°N
dieciséis
15
54
18
17
52
8
7 11 14 12
10 13
9
5
4 6
50 2
1
3
48
°E
6 8 10 12 14
Figura 4Ubicación geográfica de los 18 sitios de estudio a lo largo de un transecto a lo largo de Alemania. En todos los
sitios de estudio, las tres especies de escaramujos (Rosa canina, R. corymbiferayR. rubiginosa)ocurrieron juntos. Se
llevó a cabo un estudio comunitario en los 18 sitios de muestreo, análisis de densidad deRhagoletis alternatay
Diplolepis rosaeen 17 sitios de estudio (todos excepto el n.° 10), y elD. rosaeSe tomaron muestras de la comunidad de
agallas en ocho sitios (núms. 1–3, 5–6, 9, 11, 18)
adaptación de uno de estos especialistas a las tres especies de escaramujos. A lo largo de un gradiente a
través de Alemania (Fig.4), tomamos muestras en 18 sitios de estudio donde las tres especies de rosas se
encontraban juntas en el mismo hábitat.
5.1 ¿Las comunidades de invertebrados se ven afectadas por las características del tricoma de la hoja
de los huéspedes?
Como ya se señaló, los escaramujos europeos difieren en una variedad de rasgos morfológicos, que
pueden influir en las interacciones con las redes alimentarias asociadas. En particular, perro
las rosas difieren considerablemente entre especies en densidad y tipo de tricomas en la

superficie inferior de la hoja. Se supone que los tricomas influyen en la elección del huésped
de los herbívoros, así como de otros invertebrados (Yencho y Tingey1994; Zvereva et al.1998;
Guardabosques y Hower2002). Aunque los tricomas son a menudo parte de un sistema de
defensa, sin embargo, pueden ser beneficiosos para algunos herbívoros (Eisner et al.1998). Sin
embargo, las comunidades de invertebrados pueden mapear la variación de tricomas entre
especies (Andres y Connor2003).
Las comunidades de insectos se muestrearon utilizando bandejas batidoras (diámetro 70
cm; Stechmann et al.1981) en mayo, junio, julio y agosto de 2002 (Fricke, inédito). Los datos
fueron recolectados de 88 arbustos deR. rubiginosa,87 deR. corymbiferay 88 deR. canina (3–5
arbustos por sitio de muestreo; Higo.4). Clasificamos 75,937 individuos en órdenes de insectos
(Tabla1). Se identificaron las especies Coleoptera y Heteroptera para
tabla 1Información básica para los grupos de invertebrados muestreados de los 263 arbustos de rosas
durante mayo, junio y julio de 2002 en 18 sitios en Alemania (ver Fig.4). Los taxones fueron clasificados por el
número total de individuos (norte).Los primeros cinco grupos (nombres enatrevido)se utilizaron para análisis
detallados de las abundancias.Significares la abundancia promedio en una submuestra (5 submuestras por
arbusto). La abundancia se midió como el número de individuos dividido por las submuestras. Correlaciones
de abundancias (medias a través de fechas de abundancias transformadas estandarizadas para cada
arbusto,norte =263) con puntuaciones de los dos primeros componentes principales (PCA1yPCA2)que
caracteriza la arquitectura vegetal. Correlaciones significativas en negrita. El análisis de componentes
principales (PCA) se realizó con seis variables medidas de cada arbusto. Dos componentes pasaron el criterio
de Kaiser. El primer componente representó el tamaño (PCA 1; valor propio: 2,31, varianza explicada: 38,6%)
y el segundo la forma de un arbusto individual (PCA 2; valor propio: 1,31, varianza explicada: 21,8%)
Taxón norte Significar Dakota del Sur ACP 1 ACP 2

r pag r pag
afidina 19,656 4.97 12.44 - 0.07 0.293 0.11 0.084
Colémbolo 19,140 4.97 8.21 - 0.01 0.866 0.16 <0.05
Araneae 11,275 2.90 3.65 - 0.36 <0.001 0.19 <0.01
himenópteros 5,842 1.50 2.32 - 0.23 <0.001 0.28 <0.001
coleópteros 3,714
herbívoro 2,648 0,67 1.56 - 0.18 <0.01 0.02 0.759
otro 1,066 0.27 0.54 - 0,37 <0.001 0.11 0.081
tisanópteros 2,969 0.74 2.00 - 0,20 <0.001 0.18 <0.01
ácaro 2,642 0,68 1.55 0.02 0.780 0.01 0.902
dípteros 2,481 0,63 1.01 - 0.22 <0.001 0.08 0.208
Auchenorrhyncha 2,259 0.59 1.81 0.02 0.796 - 0.00 0.970
heterópteros 1,504
herbívoro 803 0.21 0.24 0.09 0.164 - 0.09 0.155
carnívoro 701 0.18 0.31 0.03 0.598 0.06 0.339
Dermatera 1,359 0.35 0,65 - 0.19 <0.01 - 0.04 0.549
psocóptero 1,147 0.29 0.58 - 0,06 0.315 0.09 0.154
lepidópteros 814 0.21 0.38 - 0,06 0.340 0.02 0.775
Gasterópodos 337 0.09 0.28 0.09 0.142 0.03 0.646
Planipenia 311 0.08 0.18 - 0.09 0.160 0.08 0.183
Opiliones 126 0.03 0.15 - 0,06 0.333 - 0,06 0.363
ortópteros 59 0.02 0.07 - 0,06 0.367 - 0,06 0.370
S 75,937
distinguir entre especies fitófagas y no fitófagas. Para caracterizar la arquitectura

de los individuos hospederos muestreados, se midieron seis variables de cada
arbusto.
Con un ANOVA de medición repetido, encontramos solo diferencias menores en la
abundancia de grupos de invertebrados comunes (Aphidina, Collembola, Araneae,
Hymenoptera y Coleoptera) entre las tres especies de rosas (Tablas1y2). Las ordenaciones que
utilizan todas las unidades taxonómicas principales también mostraron pocas diferencias en la
composición de las comunidades explotadoras. Contrariamente a nuestras expectativas, la
abundancia de invertebrados fitófagos fue mayor enR. rubiginosaque en las otras dos
especies de rosas. Esto es notable, porque los experimentos de alimentación mostraron una
menor palatabilidad deR. rubiginosahojas usando larvas deSpodoptera littoralis (Klinge2005;
Higo.5). Sin embargo, los datos de campo sugieren que la mayoría de los invertebrados
fitófagos no se ven afectados negativamente por los tricomas glandulares y estos tricomas no
sirven como defensa general contra los fitófagos.
Además de los invertebrados fitófagos, los rosales sufren infecciones por hongos de la
royafragmidioEspecificaciones. lo que muestra diferencias significativas en la densidad entre
las tres especies de rosas (Ritz et al.2005b; Klinge2005; Higo.6). Las especies
R. corymbiferayR. caninamuestran tasas de infección más altas que las glandulares
R. rubiginosa (ver cap. 5). Con la infección por este hongo de la roya, la superficie inferior de la hoja
de la planta huésped es de especial preocupación. El hongo de la roya infecta las plantas al penetrar
los estomas de los folíolos con los tubos de germinación de sus uredosporas. Los tricomas de las
rosas de perro se encuentran solo en la superficie inferior de la hoja, donde también se encuentran
los estomas. Por lo tanto, los tricomas podrían servir como defensa contra las infecciones por roya.
Esta idea no es nueva y ya ha sido propuesta para otras especies de plantas por Bahçecioğlu y Yildiz (
2005) y Valkama et al. (2005). Además, en los tricomas glandulares deR. rubiginosa,se producen
sesquiterpenos (Klinge, inédito). Se sabe que estas sustancias inhiben el crecimiento de hongos (p.
ej., Álvarez-Castellanos et al.2001; Kakir et al.2004). En general, nuestros datos no respaldan la
hipótesis de que los tricomas evolucionaron como una estrategia de defensa contra los
invertebrados y especialmente contra los herbívoros. Sin embargo, nuestros datos son consistentes
con las hipótesis de que los tricomas son una estrategia de defensa contra los hongos de la roya.
5.2 HacerRhagoletis alternatayDiplolepis rosae¿Difieren en

densidad entre las tres especies de rosas?
Dos especies consumidoras altamente especializadas de rosas caninas son la mosca europea de la
rosa mosqueta. Rhagoletis alternataCaer. (Diptera, Tephritidae) y la avispa rosadaDiplolepis rosaeL.
(Hymenoptera, Cynipoidea). la mosca de la frutaRh. alternatainfesta los frutos carnosos de especies
de variasrosassecciones (Blanco1988). Los adultos emergen a principios del verano y las hembras
ovipositan en caderas verdes, marcando las caderas atacadas por una feromona que disuade la
oviposición (Bauer1986). Las larvas se alimentan exclusivamente en el hipantio y no atacan las
semillas. Las larvas maduras dejan las caderas para la pupa.
Tabla 2Medidas repetidas ANOVA (tipo I sumas de cuadrados) para los cinco grupos de invertebrados más abundantes en rosas (Tabla1). El sitio fue un factor aleatorio, mientras que la
especie de rosa y la fecha fueron factores fijos.contraste yofue definido comoR. corymbiferaversusR. canina, Contraste IIfue definido comoR. rubiginosaversusR. corymbiferayR. canina.En la
226
parte superior a la línea horizontal se utilizaron las medias de cada arbusto sobre las fechas, en la parte inferior a la línea se utilizaron todas las muestras. Los efectos significativos están
marcados *pag <0,05, **pag <0,01, ***pag <0.001, y resaltado en negrita
Fuente de variación afidina Colémbolo Araneae himenópteros Fito. coleópteros

SS. F SS. F SS. F SS. F SS. F
cubierta de follaje 0.33 3.0 5.99 54.3*** 3.22 86,3*** 1.54 38,3*** 0.04 1.8
ACP 1 0.12 1.1 0.29 2.6 2.37 63,5*** 0.50 12.4*** 0.39 16.0***
ACP 2 0.42 3.9* 0.13 1.2 0.29 7.7** 0.76 18,9*** 0.00 0.1
Sitio 14.35 7.8*** 26.20 14.0*** 12.72 20.1*** 4.56 6.7*** 4.87 11,9***
especies de rosas 4.69 7.1** 0.23 0.4 0.21 1.7 0.17 1.0 0.00 0.0
contraste yo 0.11 0.6 0.25 1.2 0.00 0.0 0.01 0.4 0.00 0.0
Contraste II 4.60 9,9** 0.01 0.0 0.21 3.4 0.16 1.2 0.00 0.0
Sitio - especies de rosas 11.25 3.0*** 10.17 2.7*** 2.15 1.7* 2.93 2.1*** 2.28 2.8***
Sitio - contraste I 3.24 1.8* 3.71 2.1* 1.06 1.7 0,66 1.0 0.52 1.6
Sitio - contraste II 7.92 4.0*** 6.19 3.0*** 1.04 1.6 2.29 3.4*** 1.76 4.2***
Residuales I 22.42 22.72 7.68 8.29 4.96
Residuos I (contraste I) 14.20 14.49 5.09 5.28 2.59
Residuos I (contraste II) 25.85 26.92 8.79 8.95 5.48
Fecha 14.74 11.1*** 31.18 22.2*** 21.83 87,7*** 5.68 14.4*** 4.36 17,8***
Fecha - cubierta de 2.21 15.1*** 1.44 12,8*** 0.20 5.1** 1.71 35,0*** 0,67 20.8***
follaje Fecha - PCA 1 0.17 1.2 0.03 0.3 0.04 0.9 0.74 15.1*** 0.10 3.0
Fecha - ACP 2 0.02 0.2 0.36 3.2* 0.22 5.7** 0.14 2.8 0.12 3.8*
Fecha - sitio 22.54 9.0*** 23.90 12,5*** 4.23 6.3*** 6.72 8.1*** 4.17 7.6***
Fecha - especie de rosa 2.95 5.2** 0.32 0.6 0.44 4.8** 1.01 4.8** 0,65 5.1**
Fecha - contraste I Fecha - 0.22 1.5 0.00 0.0 0.07 2.1 0.08 1.4 0.06 1.8
contraste II Fecha - sitio - 2.75 6.5** 0.31 1.3 0.37 6.5** 0,95 6.0** 0.59 6.2**
especie de rosa 9.65 1.9*** 8.57 2.2*** 1.56 1.2 3.62 2.2*** 2.15 2.0***
Fecha - sitio - contraste I 2.54 1.0 4.38 2.2*** 0.58 0.9 0,95 1.2 0,56 1.2
Fecha - sitio - contraste II 7.17 2.9*** 4.17 2.0** 0.96 1.4 2.67 3.2*** 1.60 2.9***
Residuales II 30.27 23.23 8.19 10.09 6.63
Residuales II (contraste I) 21.08 15.93 5.13 6.39 3.82
Residuales II (contraste II) 32.95 27.64 8.87 11.10 7.25
A. Kohnen et al.
Total 136.14 154.77 65.35 38.37 31.39

Figura 5espodópterosconsumo de hojas entre especies de rosas e híbridos durante 3 meses. Medias
corregidas 1 SE de un modelo de parcela dividida ANCOVA (Tipo I) con consumo de hoja como
variable de respuesta en relación con los dos factores categóricos (mes de experimento y genotipo
de rosa) y las covariables (peso fresco de larvas y contenido específico de agua) . Especies de rosas: 1
R. rubiginosa, 2R. corymbifera,3R. canina,4R. rubiginosa - R. corymbifera,5R. rubiginosa - R. canina, 6
R. corymbifera - R. rubiginosa,7R. corymbifera - R. canina,8R. canina - R. rubiginosa, 9R. canina - R.
corymbifera
e hibernan en el suelo (Bush1992). El porcentaje de escaramujos infestados por arbusto suele

ser alto, llegando frecuentemente al 100% (Bauer1998). En general,Rh. alternatatiene poco
impacto en la reproducción sexual de las rosas y, por lo tanto, en la aptitud de los anfitriones
(Bauer1998).
La avispa cinípida holárticaD. rosaees un fabricante de agallas univoltinas (Adler1877). En
Europa, las agallas conspicuas y con múltiples cámaras se han encontrado enrosas especies
de varias secciones (Schröder1967). En el sur de Suecia, Stille (1984) encontraron que todas las
especies en las queD. rosaeocurrir pertenecía a la secciónCaninas. Debido a la manipulación
fisiológica de la planta huésped, las avispas de las agallas cinípidas son
Figura 6Densidad dePhragmidium spp.a través de las tres especies de rosas caninas (círculo gris = Rosa
rubiginosa, cuadrado gris oscuro = R. corymbifera, triángulo negro = R. canina)y las ubicaciones geográficas
en el año 2002. Las medias corregidas se calcularon con análisis de modelos lineales generales. Ubicación
geográfica =clasificación de los 18 sitios de sur a norte, de oeste a este y de altitudes altas a bajas según los
resultados de un análisis de componentes principales
estrechamente adaptados a sus plantas huésped (por ejemplo, Crawley y Long1995; kato y hijii
1997). La relación entre las plantas y los insectos que provocan agallas suele ser muy
específica, lo que sugiere procesos coevolutivos estrechos (Hilker et al.2002). Las agallas se
desarrollan como resultado de interacciones entre el insecto inductor y la planta, donde el
insecto obtiene el control y redirige el crecimiento y la fisiología de los órganos atacados en
beneficio de los insectos (Shorthouse et al.2005). Se sabe que ambas especies consumidoras
atacan a las tres especies de rosas. Sin embargo, ¿las especies consumidoras muestran
diferencias de densidad entre las especies hospederas? Klinge (2005) monitorearon la
densidad de larvas deRh. alternatayD. rosaeagallas para cada especie de rosa en septiembre
de 2002 y 2003 en 3–5 arbustos seleccionados al azar dentro de cada sitio de muestreo (Fig.4).
Para controlar la densidad deRh. alterna,Se recogieron al azar 50 escaramujos de cada arbusto
y se utilizó el porcentaje de escaramujos infestados como estimación de la densidad. Durante
las mismas fechas de muestreo, se buscaron en los rosales agallas deD. rosae.El número total
de agallas en cada arbusto se utilizó como medida de la densidad de agallas.
Las densidades de las dos especies consumidoras variaron entre las especies de plantas
hospederas y la ubicación geográfica (Fig.7, Mesa3). Las densidades más altas de los dos
fitófagos se encontraron en el odoranteR. rubiginosa.Aunque la densidad de Rh. alternatayD.
rosaeexhibieron variaciones significativas entre los sitios, no encontramos tendencias
geográficas generales. Dos conjuntos de factores pueden explicar estas diferencias: factores
ecológicos y genéticos. Fenología vegetal (Hodkinson1997) y abundancia de enemigos
naturales (Koptur1985) pueden ser tales posibles factores o la variación genética de las
especies de consumo también puede desencadenar una variación en la densidad.
Sobre la reproducción sexual de las rosas,Rh. alternatatuvo poco impacto. Incluso cuando las
larvas atacaron todas las caderas de un arbusto, no encontramos un impacto negativo de
Figura 7Patrones de densidad a través de las tres especies de escaramujos y las ubicaciones geográficas en
los dos años de estudio 2002 y 2003 para (una, b)Rhagoletis alternatay (cd)Diplolepis rosae (las medias
corregidas se calcularon con análisis de modelos lineales generales). Ubicación geográfica = clasificación de
los 18 sitios de sur a norte, de oeste a este y de altitudes altas a bajas según los resultados de un análisis de
componentes principales
Rh. alternatadensidades de reproducción (número de caderas) y cobertura foliar en el año

siguiente. Además,Rh. alternataLos patrones de densidad a lo largo de los años fueron
altamente predecibles: las plantas hospedantes con un alto nivel de ataque en un año también
mostraron un alto nivel de ataque en el año siguiente (r2= 0,45,pag <0.05,norte =212).
Interpretamos la producción predecible de frutos como evidencia adicional de que las larvas
deRh. alternatatienen poco impacto general en la aptitud de las rosas.
En contraste conRh. alterna,la formación de agallasD. rosaemanipula la fisiología de los rosales
para producir la agalla y el tejido biliar (Bronner1992; Bayer 1992; Bagato et al.1996; Harper et al.
2004). Aunque los efectos significativos de arriba hacia abajo de las avispas de las agallas en la
dinámica de la población de los huéspedes parecen ser raros (p. ej., Stone et al.2002), existe
evidencia de que las altas densidades de cinípidos pueden afectar negativamente el crecimiento de la
planta huésped (p. ej., Crawley y Long1995; kato y hijii1997). Debido a la baja densidad deD. rosae
agallas, con una densidad media de 0,17 agallas por arbusto, las rosas no mostraron una respuesta
negativa: la densidad de escaramujos, así como la cubierta de hojas, fue independiente del número
de agallas en el año anterior (densidad de escaramujos:r2= 0,02, PAG =ns; cubierta de la hoja:r2= 0,02,
PAG =ns).
Tabla 3Medidas repetidas ANOVA (tipo I sumas de cuadrados) para las densidades deRhagoletis alternatay
Diplolepis rosae.El sitio fue un factor aleatorio, mientras que las especies hospederas (Rosa canina, R.
corymbiferayR. rubiginosa)y el año fueron factores fijos. Las diferencias en las características de los arbustos
se explicaron con los dos componentes principales (PC1yPC2)derivado en un PCA. PC1 caracteriza el tamaño
de un arbusto (varianza explicada 35%; variables con carga >0.6: altura, diámetro, diámetro del brote más
grande) y PC2 la densidad foliar de un arbusto (varianza explicada 26%; cargas >0.6: densidad de folíolos y
caderas, cubierta de hojas).SSSuma de cuadrados,d.f.grados de libertad, laFla relación se calculó con el
término de error apropiado; los efectos significativos están marcados
* pag <0,05, **pag <0.01, ***pag <0.001, y resaltado en negrita
Rh. alternata D. rosae
SS d.f. F SS d.f. F
PC1 0.16 1 2.24 0.59 1 1.24
PC2 0.20 1 2.71 16.93 1 35,61***
Sitio (S) 38.73 dieciséis 33,63*** 34.33 dieciséis 4.51***
Anfitrión (H) 1.15 2 3.69* 12.86 2 6.01**
S-H 4.98 32 2.16*** 34.21 32 2,25***
Derechos residuales de autor 11.45 159 82.26 173
Año (Y) 10.77 1 48.09*** 10.11 1 18.14***
Y - PC1 0.18 1 5,99* 0.02 1 0.06
Y - PC2 0.18 1 6.21* 4.61 1 17.45**
Y-S 3.58 dieciséis 7.61*** 8.92 dieciséis 2.11**
Y-H 0.29 2 2.01 2.54 2 1.89
Y-S-H 2.28 32 2.42*** 21.53 32 2,55***
Derechos residuales de autor 4.68 159 45.65 173
5.3 HaceRhagoletis alternata¿Formar razas anfitrionas en las tres especies

de rosas caninas?
Los insectos fitófagos pueden adaptarse a las plantas hospederas, formando así razas hospederas como
primer paso durante la especiación simpátrica. Las razas hospedantes son poblaciones simpátricas pero
genéticamente diferenciadas de explotadores que usan diferentes especies hospedantes (Drès y Mallet 2002
).
Vaupel et al. (2007) estudiaron la estructura genética de poblaciones deRh. alternata a lo
largo del gradiente geográfico y en relación con las tres especies de rosas. Recolectaron larvas
de 15 sitios en Alemania y de tres valles de Valais en Suiza. Fueron capaces de puntuar 9 loci
de aloenzimas (5 polimórficos). Las poblaciones de los tres huéspedes no diferían en la
variabilidad genética. Estos resultados proporcionan otros dos hallazgos inesperados. En
primer lugar, aunque encontraron una diferenciación genética significativa entre poblaciones
de diferentes especies hospedantes, la diferenciación fue muy baja (0,9%) y no puede
interpretarse como una indicación de las razas hospedantes. Una razón puede ser la
hibridación permanente y en curso entre las especies de rosas de la sección.Caninas.En
segundo lugar, encontraron una estructura geográfica sorprendentemente pequeña de
diferenciación genética entre las poblaciones de esta mosca de la fruta en Europa central.
Además, el análisis de fragmentos amplificados y secuenciados de los genes mitocondriales
que codifican la citocromo oxidasa I (800 pb), la citocromo oxidasa II (470 pb) y el citocromob (
450 pb) indicó que todos los individuos deRh. alternativa (n =21)
de varios sitios en Europa compartían el mismo haplotipo (Kohnen et al.2009). Esta falta de variación
genética es inesperadamente baja en comparación con los datos de otros taxones de insectos. (pag =
0.0016,norte =63).
Tres razones mutuamente no excluyentes pueden explicar estos hallazgos. En primer lugar, el
flujo de genes entre poblaciones deRh. alternataes alto. En segundo lugar, el patrón de
diferenciación genética se basa en una expansión reciente del rango de distribución o un cambio de
huésped de la mosca. En tercer lugar, los simbiontes, comoWolbachia,dar forma al menos a la
evolución del mtDNA (Hurst y Jiggins2005). Durante la fase inicial de la invasión de simbiontes, los
barridos selectivos pueden reducir la diversidad de mtDNA, produciendo así una señal genética
similar a la producida por un cuello de botella poblacional con expansión subsiguiente (Hurst y
Jiggins).2005).
Debido al bajo flujo de genes estimado a partir de datos de aloenzimas,Rh. alternataparece
ser un buen dispersor (Leclaire y Brandl1994; Vaupel et al.2007). Incluso los Alpes no parecen
ser una barrera geográfica para el flujo de genes entre poblaciones. En parte esto se explica
por el comportamiento de las hembras que marcan las caderas con una feromona después de
la oviposición (Bauer1986,1998). A menudo, una alta proporción de caderas (hasta el 100%)
están infestadas. Las hembras abandonan tales localidades y buscan rosales con una menor
proporción de caderas infestadas. Vaupel et al. (2007) no encontró aislamiento por distancia (r
2 = 0,01,p =0.19), lo que puede indicar que las poblaciones no están en equilibrio entre la
deriva y el flujo de genes (Hutchison y Tempelton1999). El tiempo para alcanzar el equilibrio
genético de la población aumenta con el tamaño de la población. El tamaño de la población de
tefrítidos suele ser muy alto (McPheron et al.1988), y Rh. alternatano es una excepción. La baja
diferenciación genética y la falta de aislamiento por distancia apuntan a una reciente
expansión del rango (Hutchison y Tempelton1999). Tal expansión podría ser inducida por
eventos de colonización posteriores a las últimas glaciaciones o por eventos de cambio de
huésped muy recientes. En ambos casos, un bajo número de individuos fundadores conduciría
a un cuello de botella poblacional. Se esperarían niveles más bajos de variación genética
(Harrison1991).Rh. alternataes especialista en miembros del género rosassecciónCaninosy por
lo tanto dependiente de la distribución de su anfitrión. Estos escaramujos se originaron por
eventos de hibridación durante las últimas glaciaciones (Ritz et al. 2005a; Wissemann2002) y
recolonizaron Europa después (Dingler1907). Los individuos fundadores de la especie de
mosca pueden haber cambiado a este nuevo huésped, lo que explica la baja variabilidad
genética. En general, el considerable flujo de genes entre las poblaciones deRh. alternatalas
diferencias fenológicas limitadas entre las especies hospedantes y la hibridación en curso de
los hospedantes pueden prevenir la formación de diferencias genéticas entre las poblaciones
de explotadores de especies de rosas.
6 ¿Cómo se traducen las diferencias entre las tres especies de escaramujos

estrechamente relacionadas en niveles tróficos más altos?
Debido al entorno cerrado dentro de las agallas, los productores de agallas y sus parasitoides brindan una
buena oportunidad para analizar las interacciones tritróficas. Las características de las agallas, como la
forma y la dureza, son estructuras derivadas de plantas, pero a menudo reguladas por insectos.
genes mientras que el diámetro de la agalla, por ejemplo, está regulado por el genotipo de la
planta (en Salix lasiolepis;Precio y Clancy1986). A su vez, el tamaño y la densidad de las agallas
determinan el éxito y la composición de las comunidades de parasitoides (Brandl y Vidal1987;
Schlumprecht1989; weis1983).
Hasta ahora, hemos mostrado ciertas diferencias en la estructura de la comunidad y
la densidad de consumo entre la rosa glandularR. rubiginosay las otras dos especies de
rosas. las agallas deD. rosaeforman la base de una comunidad compleja de un inquilino
y al menos 12 especies de parasitoides (Blair1944; Redfern y Askew1992). Además
D. rosae,la inquilinaPericlistus brandtiiR. (Hym. Cynipidae) y varias especies de avispas
parasitoide se pueden encontrar dentro de las agallas (Redfern y Askew1992). el hacedor
de hielD. rosaeestá parasitado por al menos cinco especies de parasitoides:mediador de
ortopelmaThunb. (Himno. Ichneumonidae),Torymus bedeguarisL. (Him. Torymidae),
Pteromalus bedeguarisThomson (Hym. Pteromalidae),Estigma de glifomero Fabricación
(Himno. Torymidae) yEupelmus urozonusDalman (Hym. Eupelmidae). El dominante que
está casi invariablemente presente esO. mediador (todavía1984). el inquilínP. brandtii
utiliza las agallas para crear sus propias cámaras en la superficie de las agallas. El efecto
deP. brandtiiEl ataque a la hiel es hasta ahora desconocido, ya sea que agranda la hiel o
reduce el espacio disponible de otro modo paraD. rosae.La inquilina también es
parasitada porG. estigmayE. urozonus,pero además porCaenacis inflexa Ratzeburg
(Hym. Pteromalidae) yEurytoma rosaeNees (Hym. Eurytomidae).
Probamos todos los disponiblesD. rosaeagallas en ocho de los sitios de muestreo (Fig.4) y
eclosionaron las agallas afuera hasta que emergieron todos los habitantes (Tabla4). Con un modelo
lineal generalizado, la tasa de parasitismo deD. rosaevarió entre los sitios, así como entre las
especies de rosas y disminuyó con el aumento del volumen de las agallas (Klinge2005; Kohnen et al.
inédito). Considerando que el número medio deD. rosaelas agallas fueron más altas en
R. rubiginosa,la tasa media de parasitismo fue más baja en esta especie de rosa. Pero todas las
interacciones bidireccionales entre la especie huésped y el sitio también fueron significativas, lo que
apunta a efectos complejos de la geografía y las especies de rosas en las comunidades asociadas.
Tabla 4los habitantes deDiplolepis rosaeagallas, a base de crías denorte =299 agallas. Se dan números de
individuos para el fabricante de agallas.D. rosae,el inquilínPericlistus brandtiiy los parasitoides [suma de
individuos, error estándar medio (valores transformados hacia atrás), el mínimo y el máximo]. Parasitoides
deD. rosaeestán marcados conDy parasitoides deP. brandtiiconPAG
Anfitrión Suma de Significar - SE þSE Máximo
individuos por galón
Diplolepis rosae 1,968 2.08 1.87 2.31 130

Periclistus brandtii 765 0.54 0,45 0,62 73
mediador de ortopelma D 1,111 1.36 1.22 1.50 56
Estigma de glifomero D, P 751 1.14 1.03 1.26 28
Torymus bedeguaris D 562 0.84 0.76 0.93 44
Pteromalus D 377 0,67 0,61 0.74 24
bedeguaris
Caenaxis inflexa PAG 326 0.28 0.23 0.33 38
Eurytoma rosae PAG 131 0.24 0.20 0.27 9
Eupelmus urozonus D, P 105 0.18 0.15 0.21 20
Torymus rubi D 32 0.06 0.05 0.08 4
Torymusspp. ? dieciséis 0.03 0.02 0.04 3
conD. rosaeagallas Como se ha mencionado más arriba,R. rubiginosaes la única especie de rosa que
examinamos con tricomas glandulares ricos en metabolitos secundarios como sesquiterpenos. La
variación de la planta huésped y las diferencias en los metabolitos secundarios a menudo influyen en
las interacciones de orden superior dentro de las comunidades de insectos (Eisenbach1996; Fritz et
al.1997; ganga1995; Marqués y Whelan1996; Prezler y Boecklen1994).
Más allá de los factores intrínsecos a la planta huésped, las condiciones ambientales locales
también tienen cierta influencia en los rasgos de la planta, por ejemplo, dando como resultado una
calidad nutritiva diferente y, por lo tanto, cambiando las interacciones con los herbívoros y sus
enemigos naturales (Moon y Stiling). 2000; Precio y Clancy1986; Stiling y Rossi1997). Incluso los
efectos de las diferencias genéticas entre y dentro de los taxones de plantas hospedantes pueden
verse modificados por las condiciones ambientales (Fritz et al.1997). De la misma manera, Thompson
(2005) sugiere en su Teoría del Mosaico Geográfico de la Coevolución que las interacciones entre
especies pueden ser modificadas por las condiciones ambientales. Thompson (2005) considera un
proceso dinámico de composición variable de especies, condiciones ambientales y variaciones
subsiguientes en las interacciones. Nuestros datos muestran variaciones significativas en las
estructuras comunitarias y las densidades de consumo entre sitios geográficos. Las variaciones
ambientales entre sitios no solo alteraron la abundancia deD. rosaesino también la estructura y el
éxito de los niveles tróficos superiores, la comunidad asociada de parasitoides (Klinge2005; Kohnen
et al. inédito). Durante este estudio, se investigó cómo la plasticidad fenotípica de los escaramujos
afecta los siguientes niveles tróficos. Pero las interacciones entre las especies de plantas
hospedantes y las comunidades de herbívoros cambiaron dependiendo no solo de las diferencias
fenotípicas entre las especies de plantas hospedantes sino también de su ubicación geográfica.
7. Conclusión
La pregunta rectora de nuestro estudio fue cómo la radiación y la diversidad de los anfitriones se
traducen en la radiación y la diversidad de los niveles tróficos superiores y qué papel juegan las
interacciones en todo el sistema. Observamos un gran impacto de laCanina sistema de reproducción
en la evolución del carácter y, por lo tanto, influye en la interacción directa entre huéspedes y
parásitos. Sin embargo, las interacciones entre las especies de plantas hospedantes y las
comunidades de herbívoros cambiaron dependiendo no solo de las diferencias fenotípicas entre las
especies de plantas hospedantes sino también de su ubicación geográfica. Por lo tanto, la diversidad
genética de los escaramujos no se traduce en un proceso de radiación de los parásitos específico del
huésped. Suponemos que la evolución reticulada intensiva de los escaramujos a través de la
hibridación impide la coespeciación.
AgradecimientosEste estudio fue habilitado bajo el programa prioritario DFG 1127: Radiationen -
Genese Biologischer Diversit€en apoyo financiero a Volker Wissemann (WI 2028/1), Franz
Oberwinkler (OB 24/25), Teja Tscharntke (TS 45/16) y Roland Brandl (BR 1293/2). Estamos en deuda
con la DFG por brindarnos la oportunidad de un proyecto de cooperación intensivo de 6 años que,
aunque bajo una ardua presión de trabajo, estableció nuestra red científica, fue muy divertido y
formó amistades. Nos gustaría agradecer a nuestros numerosos colaboradores que son demasiados
para ser nombrados aquí individualmente. Agradecemos a Konrad Bachmann (Gatersleben) y William
Martin (D€usseldorf) por haber tomado la iniciativa del programa prioritario.
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Especiación a través del uso diferencial de plantas y
huéspedes en la mosca tefrítidatefritis conura
Jes Johannesen, Thorsten Diegisser y Alfred Seitz
AbstractoLa estrecha asociación entre los insectos fitófagos y las plantas huésped y la posibilidad de
especialización en nuevas plantas hacen que los insectos fitófagos sean los principales candidatos
para la especiación simpátrica a través de la evolución de la raza huésped. En este capítulo,
resumimos los resultados que abordan la evolución de la raza huésped en la mosca tefrítida.Tefritis
conura (Tephritidae) infestandoCirsium heterophyllumyC. oleraceum (asteráceas). Las distribuciones
de plantas hospedantes en alopatría, simpatría y parapatría, y diferentes patrones de infestación nos
permitieron probar escenarios de especiación geográfica, investigar adaptaciones y abordar la
importancia de la historia de la población de plantas para la diversificación deT. conura.
1. Introducción
Los insectos fitófagos son inmensamente especiosos, constituyendo un 25-40% estimado de todas
las especies animales (Bush y Butlin2004). Se cree que esta diversidad de especies se debe en gran
medida a la inclusión de nuevas plantas hospedantes, seguida de la adaptación a estas plantas (Bush
1975). Sin embargo, la inclusión y adaptación a nuevas plantas huésped tiene dos resultados con
implicaciones evolutivas significativamente diferentes. En el primer caso, una población de insectos
puede estar preadaptada y ser capaz de usar el huésped nuevo sin perder su capacidad de usar
huéspedes antiguos. Tal "expansión del rango de huéspedes" (sensu Hare1990) puede ocurrir
cuando no se requieren adaptaciones significativas o si las adaptaciones al nuevo huésped pueden
evolucionar sin pérdida de aptitud en el antiguo huésped. En cualquier caso, la población consistirá
en generalistas polífagos y ninguna población relacionada con el huésped.
J. Johannesen (*), T. Diegisser y A. Seitz

Instituto f€ur Zoologie, Abteilung Ökologie, Universidad€en Maguncia, Saarstrasse 21, 55099 Maguncia,
Alemania
correo electrónico: jesjo@uni-mainz.de

240 J. Johannesen et al.
se espera que la diferenciación evolucione. La segunda incidencia ocurre si las poblaciones no

pueden adaptarse simultáneamente al huésped nuevo y antiguo. En este caso, las compensaciones
de aptitud asociadas con la planta huésped pueden evolucionar (Rausher1984; A través de1990). Este
llamado “cambio de huésped” puede resultar en poblaciones de insectos parcialmente aisladas
reproductivamente llamadas “razas huésped” (Diehl y Bush1984). Las razas hospedantes se pueden
definir como dos poblaciones que difieren consistentemente en uno o más loci, tienen al menos un
rasgo adaptativo que reduce el flujo de genes, pero aún poseen la capacidad para el flujo de genes y
la reproducción (Berlocher y Feder2002). Se han documentado razas huésped para una variedad de
grupos de insectos (Bush1969; Madera y Guttmanmil novecientos ochenta y dos; katakura y hosogai
1994; Sezer y Butlin1998; A través de1999; Emelianov et al. 2001; Diegisser et al.2004, 2006a,b;
Ohshima2008), prestando apoyo a la noción de que la especiación a través del uso diferencial del
huésped es común en los insectos fitófagos (Dres y Mallet2002). En un estudio de especies de
insectos que infestanSolidago altoyS. gigantea,Stireman et al. (2005) encontró evidencia de
divergencia genética asociada al huésped en cuatro de nueve especies.
Debido a que se requiere la presencia tanto de la planta huésped tradicional como de la nueva en
la fase inicial de los cambios de huésped, la especiación a través de la evolución de la raza huésped
es un candidato principal para la especiación simpátrica. La plausibilidad de la especiación simpátrica
a través de cambios de huésped se ha demostrado en estudios empíricos (Bush y Smith1998; Feder
et al. 1998; A través de1999) y estudios teóricos (Arroz1984; Kawecki1996,1997). Sin embargo, los
escenarios alternativos son difíciles de excluir por completo. Es particularmente difícil descartar fases
alopátricas y/o parapátricas durante el proceso de especiación (Coyne y Orr2004). Si el huésped
principal escasea o se extingue, el contexto geográfico en el que se producen los cambios de
huésped puede tener fuertes componentes alopátricos. Esto puede suceder, por ejemplo, cuando
aumentan los rangos geográficos. En caso de escasez de la planta huésped tradicional, un insecto
puede verse obligado a colonizar una planta nueva o subóptima y esto, a su vez, puede conducir a la
especialización en diferentes plantas de forma aislada (Janz et al.2006). Larson y Ekbom (1995)
encontraron que los cambios de hospedero pueden ser incidentales si la proporción de plantas
hospederas deficientes es grande y el tiempo para la oviposición es corto. Estos hallazgos, además,
sugieren que los entornos recién colonizados pueden aumentar la probabilidad de diversificación.
Además del debate sobre la especiación simpátrica versus alopátrica, la historia de la

población de las plantas huésped putativas también puede ser de gran relevancia para la
diversificación de las poblaciones de insectos. Por ejemplo, los cuellos de botella genéticos en
las poblaciones de plantas pueden alterar la constitución genética de las plantas al aumentar
la consanguinidad, lo que, en algunos casos, puede aumentar la susceptibilidad a la
infestación (Carr y Eubanks2002; Stephenson et al.2004; Hull-Sanders y Eubanks2005; Koslow y
DeAngelis2006). Por lo tanto, existe un fuerte componente geográfico que afecta tanto a las
plantas como a los parásitos y su interacción y, por lo tanto, el modo de especiación. Quizás es
por eso que hay poca evidencia de co-filogenias estrictas entre plantas y parásitos, pero más
por la importancia de la geografía (Thompson 2005; pero mira Becerra y Venable,1999).
Esclarecer la escala geográfica de la diversificación genética y de las infestaciones de plantas
entre las razas huésped brinda la oportunidad de obtener información sobre los procesos que
impulsan la divergencia.
Especiación a través del uso diferencial de plantas y huéspedes en la mosca tefrítidatefritis conura 241
Las moscas de la fruta (Tephritidae) forman un grupo especial de unas 4.500 especies y
subespecies descritas (Norrbom2004). La mayoría de las especies son especialistas en una o pocas
plantas (Aluja y Norrbom2000). En algunos casos, las asociaciones huésped-planta, más que la
morfología, delimitan las especies (p. ej., Kovac et al.2006). Los Tephritidae tienen varias razas
huésped bien documentadas, incluidas especies de los géneroseurosta (Craig et al. 1993),Rhagoletis (
Arbusto1969; Feder et al.1998) ytefritis (Diegisser et al. 2004,2006a,b). Los Tephritidae son, por lo
tanto, objetivos principales para la especiación a través de la evolución de la raza huésped. Sin
embargo, varios estudios no han encontrado evidencia o han encontrado evidencia ambigua para las
razas anfitrionas (Leclaire y Brandl1994; Schwarz et al.2003; Stireman et al.2005; Vaupel et al.2007).
Para comprender la importancia de la especiación a través de la evolución de la raza huésped en los
insectos fitófagos, es importante conocer la frecuencia relativa de las expansiones del rango de
huéspedes (plasticidad fenotípica) y los cambios de huésped (especialización) y en qué condiciones
difieren los dos.
La tefrítida univoltinaT. conura (Loew 1844) infesta varios cardos del género
Cirsio (Asteraceae) (Zwölfer1988; Romstöck-Völkl1997). Curiosamente,
T.conurano ataca a todos los hospedantes en todo su rango de distribución, y existen rodales mixtos
de diferentes especies hospedantes donde solo se ataca a un hospedante (Romstöck-Völkl1997).
MuchosCirsiolas especies son en gran parte alopátricas en su distribución, mientras que muchas
también exhiben zonas de contacto y áreas de verdadera simpatía. dos especies,
C. heterophyllum (L) HENFERMO.(cardo melancólico) yC. oleraceum (L) SPOLICÍA. (cardo repollo),
albergan razas anfitrionas deT. conura (Seitz y Komma1984; Komma 1990; Romstöck-Völkl
1997; Diegisser et al.2006a,b). Las dos plantas se encuentran en simpatría, parapatría y
alopatría en diferentes partes de sus rangos de distribución. En este capítulo, resumimos la
investigación sobre la evolución deT.conurarazas hospedantes utilizando las distribuciones
geográficas para abordar el contexto geográfico y la dirección de la evolución de la raza
hospedante, investigar las adaptaciones y abordar la importancia de la historia de la población
de plantas en la diversificación deT. conura.
2 Historia Natural de laT. conura – CirsioSistema
2.1T.conura
T.conurainfesta varias especies del géneroCirsio.Las dos plantas hospederas más importantes,
C. oleraceumyC. heterophyllum,son atacados a través de sus amplias distribuciones desde
Europa occidental hasta los Montes Urales en Rusia. Tres especies hospederas,
C. acaule, C. spinossisimumyC. eristales,tener centros de distribución en la región de los
Alpes europeos (Hegi,1987) y aquí son localmente atacados. En otras incidencias,
T.conuraprobablemente explotaCirsioespecies solo de forma temporal, pero faltan datos
exactos. En un caso extremo, el huéspedC. palustreestá infestado solo en el norte de
Gran Bretaña pero no en Europa continental en áreas de simpatía con los dos
huéspedes principales (Romstöck y Arnold1987; Johannesen et al.2008). El general
patrón de infestación deT.conurasugiere que recientemente ha ampliado su rango de

huéspedes en plantas asociadas con los Alpes europeos (J. Johannesen, datos no publicados).
Seitz y Komma (1984) y Komma (1990) demostraron que las moscas que utilizanC. oleraceumy
C. heterophyllumen las montañas alemanas de Fichtel diferían en las frecuencias alélicas en la
hexoquinasa del locus de la aloenzima (Maleficio),sugiriendo razas hospedantes genéticas deT.
conura. Moscas que infestan a otrasCirsioLas especies se pueden dividir enC. oleraceumy
C. heterophyllumgrupos de raza anfitriona (Romstöck-Völkl1997; Johannesen et al., resultados no
publicados).
Apareamiento enT.conurase asocia con las plantas hospederas. Ambas razas anfitrionas ponen huevos en
pequeños brotes apicales. moscas infestandoC. heterophylluminserte los huevos a través de la parte superior de las
cabezas de flores expuestas libremente. Por el contrario, los brotes deC. oleraceumestán envueltos por pequeños
folíolos, que deben ser perforados por el ovipositor de la mosca para poner huevos en la cabeza de la flor
(Eschenbachermil novecientos ochenta y dos; Romstöckmil novecientos ochenta y dos). Dentro de las cabezas de las
flores en desarrollo, las larvas del primer estadio se alimentan de los floretes, mientras que el segundo y tercer
estadio utilizan el área del receptáculo. La pupación comienza aproximadamente 3 semanas después de la oviposición
y los imagos emergen 3 semanas después de la pupa. Por lo tanto, los adultos hibernan el invierno. En primavera, las
moscas se pueden encontrar en las plantas anfitrionas antes del desarrollo de los brotes, resurgiendo de lugares
desconocidos. La hibernación invernal es necesaria para que las moscas maduren sexualmente (Diegisser2005). La
hibernación de adultos significa que los adultos de las dos razas anfitrionas tienen el potencial de encontrarse en
sitios simpátricos al comienzo de la primavera (Fig.1).
Diciembre
septiembre Abril
Julio
Compañero
Oviposición
Los adultos emergen
desarrollo larvario
pupación
Figura 1Ciclo de vida deT. conura.Se tomaron muestras de moscas para análisis durante la etapa de pupa recolectando flores
infestadas. Todas las moscas utilizadas en los análisis surgieron en el laboratorio. Las moscas para los análisis genéticos se
congelaron inmediatamente después de emerger. Las moscas para los estudios de comportamiento se separaron por sexo, se
retiraron de las plantas huésped y se expusieron a la inactividad invernal durante aproximadamente 2 meses. Este
procedimiento excluye la impronta de la planta huésped y la pareja.
2.2 Las plantas huésped
En esta sección, nos enfocamos en la divergencia raza-huésped deT.conuraasociado con

C. heterophyllum y C. oleraceum.Las dos plantas son las más ampliamente distribuidas de las
Cirsioespecies que se sabe que están infestadas. Debido a los diferentes requisitos de hábitat,
se distribuyen en gran medida alopátricamente en Europa (Hegi1987). La distribución de
C. oleraceumes más o menos continua desde el este de Francia hasta Rusia, desde el nivel del
mar hasta aproximadamente 1200 m (Fig.2). El límite de distribución sur es el norte de Italia y
el norte de los Balcanes; en el norte, se encuentra en el sur de Escandinavia y las tierras bajas
de Siberia occidental. Está ausente en las Islas Británicas.C. heterophyllumse asocia con
ambientes boreales del norte y subalpinos a alpinos. Se distribuye de forma contigua en el
centro de Escandinavia y Finlandia, a través de los Estados bálticos hasta Siberia. En Europa
Central y Gran Bretaña está restringida a rangos de mayor altitud, por ejemplo, en los Alpes,
los Cárpatos, las Montañas Metálicas y las Montañas Fichtel de Baviera, las Montañas Tatra y
las tierras altas del norte de Gran Bretaña (Fig.2). En estas cadenas montañosas (excepto en
Gran Bretaña), las dos plantas se pueden encontrar parapatricalmente conC. heterophyllum a
gran altura yC. oleraceumen altitudes más bajas, con superposición de rango en altitudes
intermedias. Las dos plantas ocurren en verdadera simpatría (es decir, sintópica) en el sur de
Suecia y partes de Rusia.
El principal período de floración deC. heterophyllumes de mayo a junio, pero se extiende
hasta agosto en altitudes muy altas. El principal período de floración deC. oleraceumes julio-
agosto. En los sitios sintópicos,C. heterophyllumcomienza a producir cogollos 2 o 3 semanas
antes queC. oleraceum.Debido a la separación geográfica y temporal,
simpatía
Alopatría estricta
parapatria
Figura 2Principales áreas de distribución deC. heterophyllum (rojo)yC. oleraceum (amarillo)y su ocurrencia
común (naranja)en Europa.Círculosmuestran las regiones utilizadas para el análisis de razas huésped donde
las plantas se encuentran en alopatría estricta (tierras bajas de Alemania y el norte de Suecia), parapaptría
(gradientes de altitud en los Alpes y las montañas Fichtel) y simpatría (sur de Suecia). En los sitios sintópicos,
la fenología difiere en 2 a 3 semanas,C. heterophyllumser el primero
las dos plantas huésped son efectivamente sólo sintópicas para la oviposición porT.conuradentro de
un lapso de tiempo corto cuando los brotes tardíos deC. heterophyllumy primeros brotes deC.
oleraceumestán disponibles.
3 Especiación Geográfica
El conocimiento del componente geográfico de la diferenciación genética entre especies

incipientes brinda la oportunidad de estudiar los procesos de diversificación porque los
escenarios de especiación en entornos geográficos distintos se basan en diferentes
suposiciones de modelos genéticos. Por ejemplo, se supone tradicionalmente que el modo
predominante de especiación ocurre en poblaciones geográficamente aisladas (Mayr 1963).
Aunque la adaptación ambiental puede ocurrir dentro de tales aislamientos, la propagación
de alelos responsables de la incompatibilidad reproductiva (es decir, la especiación) es una
consecuencia pasiva de la separación y, en este sentido, la especiación no es adaptativa
(Turelli et al.2001; Presgraves et al.2003). En contraste, la especiación dentro de un área
simpátrica compartida asume un proceso de adaptación al restringir el flujo de genes entre
dos poblaciones a través de una selección disruptiva contra formas intermedias (Kawecki1997;
Dieckmann y Doebeli1999). Debido a que la especiación simpátrica requiere un vínculo entre
la aptitud y los "genes" de reproducción, se ha debatido mucho (Coyne y Orr2004).
El debate actual no es si la especiación simpátrica es posible, sino más bien su importancia

relativa (Mallet2001) y de la definición de “aislamiento” (Fitzpatrick et al.2008). En los insectos
fitófagos, por ejemplo, las diferentes fenologías de la planta huésped pueden hacer que las
poblaciones de insectos simpátricos sean efectivamente alopátricas en el tiempo (Wood y Guttman
mil novecientos ochenta y dos). Esto puede causar un flujo de genes restringido en la simpatría
incluso en ausencia de selección (Butlin1990). Si la selección de hábitat es fuerte, la divergencia
adaptativa en cualquier área simpátrica con hábitats ambientales distintos puede potencialmente
reducir el flujo de genes, lo que puede aumentar aún más la divergencia (Mallet2001). Una pregunta
con respecto a la especiación simpátrica es también si debe considerarse como un proceso que
ocurre estrictamente entre poblaciones con condiciones iniciales idénticas. La divergencia puede
comenzar en la alopatría y la selección de refuerzo en la simpatría podría tomar el control más tarde
(Kondrashov et al.1998; Feder et al.2003; michel et al.2007). En el ya clásico estudio comparativo de
pares de especies endrosófila,Coyne y Orr (1989,1997) encontraron que los pares de especies
simpátricas tienden a mostrar más aislamiento precigótico que los pares alopátricos a distancias
genéticas bajas, lo que implica que el aislamiento reproductivo ocurre por algún tipo de refuerzo y
más rápidamente en la simpatría que en la alopatría. Sin embargo, estos estudios no pueden
descartar por completo las fases alopátricas durante la especiación. La dificultad de separar los
eventos de especiación alopátricos de los simpátricos es particularmente pertinente para la
especiación a través de la evolución de la raza huésped, que a menudo tendrá lugar en ambientes
abiertos (ver Coyne y Orr2004para los "requisitos" para la especiación simpátrica; Fitzpatrick et al.
2008) como las experimentadas por el
T. conura–Cirsiumsistema donde las alteraciones del rango geográfico durante las glaciaciones
pueden iniciar la diversificación en la alopatría pero completarse en la simpatría. Por ejemplo,
variación genética que promueve la formación de razas huésped simpátricas enRhagoletis

pomonella pudo haber tenido una fuente alopátrica (Feder et al.2003).
en el estudio deT. conura,utilizamos la combinación única de distribuciones simpátrica,
parapátrica y alopátrica deC. heterophyllumyC. oleraceumpara abordar el contexto geográfico
(este subcapítulo) y los procesos (Sect.4) involucrados en la evolución de la raza huésped. Los
análisis del contexto geográfico de la evolución de la raza huésped se basaron en la
distribución de la variación del ADN mitocondrial (ADNmt) y en las predicciones de la teoría de
la coalescencia, donde la distribución de polimorfismos compartidos y/o únicos puede
especificar distintas historias geográficas (ver Berlocher 1998; Berlocher y feder2002).
Además, la dirección de los cambios de huésped se puede inferir por las cantidades y los
patrones geográficos de variación, y las filogenias alélicas de las razas huésped (Harrison1991
).
Sesenta y unoT.conurapoblaciones (33C. heterophyllumsitios,norteIndiana= 128; 28
C. oleraceumsitios,norteIndiana= 113) se analizaron para la variación de mtDNA de los tres entornos
geográficos (Fig.2), junto con moscas de Escocia, Croacia, Finlandia y Rusia. Las razas anfitrionas
diferían significativamente en la distribución y diversidad genealógica de la variación del mtDNA.
moscas infestandoC. heterophyllumeran más diversas y geográficamente estructuradas que las
moscas que infestanC. oleraceum (número medio de haplotipos = 2,27 frente a 1,67,pag <0,01;
diversidad de nucleótidos (0,00137 frente a 0,00037, pag <0,0001). moscas infestandoC.
heterophyllumtenían varios haplotipos comunes que estaban estructurados regionalmente (Fig.3).
Por el contrario, las moscas que infestanC. oleraceumtenían una red de mtDNA genealógicamente
similar a una estrella con un haplotipo dominante (H1) y no estaban estructurados geográficamente.
El haplotipo H1 era común a ambas razas anfitrionas. Asumiendo que la alta diversidad genética
puede interpretarse en términos del huésped original, y debido a que el predominanteC. oleraceum
El haplotipo H1 se encuentra dentro del
C. heterophyllumred y no había rama larga desdeC. heterophyllum poblaciones aC. oleraceum
poblaciones, planteamos la hipótesis de que el cambio de huésped ocurrió hace relativamente
poco tiempo deC. heterophyllumaC. oleraceum.
La dirección y la edad del cambio de huésped fueron respaldadas por análisis
demográficos del equilibrio de la población usando Tajima'sDprueba (Tajima1989) y FuFs
prueba (fu1997) – después de descartar la selección en mtDNA y usar distribuciones de
desajuste (Harpending et al.1998). El equilibrio poblacional fue rechazado porC. oleraceumen
los tres entornos geográficos y sobre todas las poblaciones; negativo muy significativoFs
valores indicaron un exceso de mutaciones recientes y apoyaron una expansión demográfica
de laC. oleraceum-poblaciones infestantes. Por el contrario,T.conurainfestandoC.
heterophyllumno mostró desviaciones significativas del equilibrio en ningún entorno
geográfico. Al observar las distribuciones de desajustes, ninguna de las razas anfitrionas
difería significativamente de un modelo de expansión repentina, pero el desajuste sí difería
significativamente.C. heterophyllum flies mostró una distribución unimodal, truncada a la
izquierda, mientras que el desajuste para las moscas que infestanC. oleraceumtenía forma de
L debido a la diversidad molecular muy baja. Los análisis demográficos respaldan así una
reciente y rápida expansión demográfica deC. oleraceum flies en todas las regiones y en todo
su rango geográfico euroasiático.
moscas infestandoC. oleraceumfueron más diversos en los Alpes europeos. Fuera de esta área,
las poblaciones se volvieron progresivamente menos polimórficas alejándose de los Alpes.
H32
H28 H29
H14
H27
H31
H
H66 H
H55
H26
H4
H2255
H22
Mineral y Fichtel
H1 metros (D) H13
H15 H23
H24 H3 H
H22 H1 H9 H10
Alpes
H21
H30
H16 8
HH118
H19 H19
H3300
H17 Rusia
H20
Eslovaquia
H7
Escandinavia
H12 H11
H
H77 H8
C. oleraceum C. heterophyllum
Fig. 3Árboles genéticos de haplotipos de mtDNA para razas huésped deT.conurainfestandoC. heterophyllumy
C. oleraceum.Las razas anfitrionas compartían el haplotipo común H1; por lo demás, hubo poca superposición.
Tamaños de círculoson proporcionales a las frecuencias de haplotipos. Poblaciones deT.conurainfestando
C. heterophyllumeran genéticamente diversos y regionalmente estructurados. Nótese también que las
poblaciones alpinas de moscas que infestanC. heterophyllumeran genéticamente poco diversos (compárese
con la Fig.5). Poblaciones deT.conurainfestandoC. oleraceumtenía un árbol genético en forma de estrella y
mostraba signos de expansión demográfica reciente sin estructura regional. El haplotipo principal H1 se
distribuyó en todo el rango de muestreo deT.conurainfestandoC. oleraceumincluyendo Alemania, Croacia,
Escandinavia y Rusia (cifra redibujada de Diegisser et al.2006a)
Suponiendo nuevamente que la diversidad genética pueda interpretarse en términos de

centros de origen, los Alpes europeos o sus alrededores pueden haber servido como el origen
geográfico de las moscas que infestanC. oleraceum.Por el contrario, el nivel de diversidad de
mtDNA para moscas que infestanC. heterophyllumen los Alpes y en Europa occidental se
redujo mucho en relación con las poblaciones orientales (Fig.3), sugiriendo que el origen
geográfico deT.conurayacía hacia Rusia dondeC. heterophyllumtiene una amplia distribución
contigua (Diegisser et al.2006a).
El patrón de diversidad de mtDNA para las moscas que infestanC. oleraceumtenía componentes
simpátricos y alopátricos: las especies que evolucionan en simpatía deberían compartir alelos y las
poblaciones alopátricas recién colonizadas deberían perder alelos (Berlocher 1998), y las primeras
etapas de la especiación alopátrica deberían dejar una huella de número reducido y mayor similitud
de haplotipos (Berlocher y Feder2002). Común a ambos escenarios es la pérdida de diversidad. En el
primer caso, se debe a la colonización durante la expansión del rango, en el segundo caso, debido al
efecto de cuello de botella en el aislamiento. Combinadas, estas predicciones se ajustan a la
diversificación peripátrica, es decir, la diversificación en una pequeña población separada del rango
de distribución principal. Bajo un escenario de especiación peripátrica, las poblaciones que infestan
al nuevo huésped deberían ser genéticamente menos diversas, distribuidas de forma más estrecha y
los haplotipos deberían anidarse dentro de los haplotipos del huésped ancestral (parafilético)
(Harrison1991,1998).
Por lo tanto, el modo geográfico más parsimonioso de formación de la raza huésped fue la
divergencia peripátrica de moscas que infestanC. oleraceum.La distribución de los haplotipos de
mtDNA no apoyó ni la divergencia en curso de la raza huésped simpátrica en las áreas de contacto
actuales ni una antigua división alopátrica. Subdivisión de las montañas Fichtel y las poblaciones de
los Alpes europeos de la raza huésped que infestaC. heterophyllum,y la existencia de haplotipos
privados en la raza huésped derivada que infestaC. oleraceum hacen improbable que el cambio de
anfitrión haya ocurrido en tiempos históricos como se propone para otros sistemas de razas
anfitrionas (Bush1969; Shirai y Morimoto1999; Groman y Pellmyr 2002), sino que la divergencia de la
raza huésped es tan antigua, o incluso más antigua, que el último ciclo glacial. Las razas anfitrionas
evolucionaron así antes de las distribuciones actuales. Los hallazgos paraT.conurallamar la atención
sobre la noción de que los escenarios de especiación geográfica no necesitan ser mutuamente
excluyentes, sino que actúan en combinación (Michel et al. 2007; Xie et al.2007).
4 Flujo de genes y signos de selección
La distribución de la variación del mtDNA apoyó la diversificación de las razas anfitrionas antes de las
distribuciones de plantas actuales y sugirió un flujo de genes limitado (femenino) entre las razas
anfitrionas. Sin embargo, la variación compartida del mtDNA en los Alpes y el contacto secundario
renovado entre las razas anfitrionas hoy pueden restaurar el flujo de genes. ¿Qué tan estables son
T.conura organizar carreras en áreas de contacto? Abordamos esta pregunta con loci de aloenzimas
heredados biparentales utilizando dos enfoques. CuarentaT.conurapoblaciones (19C. heterophyllum
sitios, 21C. oleraceumsitios) de los tres entornos geográficos fueron analizados.
En el primer enfoque, analizamos si la diferenciación genética entre las razas anfitrionas que viven en simpatría y parapatría difiere de las poblaciones
que viven en alopatría (Diegisser et al.2006b). En estos análisis, también evaluamos los desequilibrios de ligamiento en loci relacionados con la raza del
huésped. El ligamiento podría interpretarse en términos de oviposición en plantas hospedantes equivocadas y/o hibridación entre razas hospedantes. La
distribución de la variación genética se analizó dentro y entre cada uno de los tres entornos geográficos para cada raza huésped, mientras que los análisis
jerárquicos de la varianza determinaron cuánto de la varianza total era atribuible a la afiliación de la planta huésped y a la varianza independiente de la
planta huésped. Las razas hospedantes se muestrearon en plantas hospedantes parentales puras. Con base en las variaciones geográficas y genéticas, se
pueden hacer varias inferencias sobre el flujo de genes y la integridad de las razas huésped. Si las razas anfitrionas difieren más en alopatría que en
simpatría y/o parapatría, esto podría indicar que la diversificación original fue una consecuencia pasiva de la deriva genética o de la selección aislada y que
las razas huésped son genética y conductualmente compatibles debido al flujo de genes en curso. Las razas hospedantes en áreas de contacto pueden
volverse genéticamente más similares debido a apareamientos híbridos y/o oviposición en la planta hospedante equivocada. En contraste, un patrón
consistente con la selección contra la hibridación y/o la oviposición en la planta hospedante equivocada se indica cuando la diferenciación entre las razas
hospedantes es mayor en las áreas de contacto que en la alopatría. Si los loci de aloenzimas están vinculados a rasgos que reducen los eventos de mala
adaptación Las razas hospedantes en áreas de contacto pueden volverse genéticamente más similares debido a apareamientos híbridos y/o oviposición en la
planta hospedante equivocada. En contraste, un patrón consistente con la selección contra la hibridación y/o la oviposición en la planta hospedante
equivocada se indica cuando la diferenciación entre las razas hospedantes es mayor en las áreas de contacto que en la alopatría. Si los loci de aloenzimas
están vinculados a rasgos que reducen los eventos de mala adaptación Las razas hospedantes en áreas de contacto pueden volverse genéticamente más
similares debido a apareamientos híbridos y/o oviposición en la planta hospedante equivocada. En contraste, un patrón consistente con la selección contra la
hibridación y/o la oviposición en la planta hospedante equivocada se indica cuando la diferenciación entre las razas hospedantes es mayor en las áreas de
contacto que en la alopatría. Si los loci de aloenzimas están vinculados a rasgos que reducen los eventos de mala adaptación
en las zonas de contacto, p. ej., elección incorrecta del hospedador y/o apareamiento, deberían
diferenciarse más en las áreas de contacto. Un tercer patrón de diferenciación refleja un nivel
uniforme en todos los entornos geográficos. La uniformidad puede ocurrir cuando los procesos de
flujo de genes y selección contra la hibridación desadaptativa/elección incorrecta del huésped
ocurren pero se contrarrestan entre sí o, alternativamente, los genes pueden estar tan fuertemente
restringidos que las frecuencias alélicas son constantes independientemente del entorno geográfico.
Esto último sugiere razas huésped geográficamente estables y reproductivamente aisladas.
El análisis geográfico comparativo mostró queT.conuralas razas anfitrionas tenían alelos

de diagnóstico, aunque no específicos de especie, en los lociMaleficioyPepD,y diferencias
significativas en otros tres loci (Diegisser et al.2006b). La diferenciación relacionada con el
huésped no fue significativamente mayor en simpatría/parapatría que en alopatría cuando se
analizó en todos los loci. Sin embargo, la diferenciación relacionada con el huésped en el locus
de diagnóstico Maleficiofue significativamente mayor en simpatría/parapatría que entre las
regiones simpátrica/parapátrica y alopátrica (PAG =0,008). la diferencia enMaleficiose
encontró en la región bávara parapátrica, así como en la región sueca simpátrica. Este patrón
se asemeja a un patrón esperado bajo la selección de refuerzo enMaleficiofrente a eventos
desadaptativos. moscas infestandoC. oleraceumen las áreas de contacto mostró un vínculo
significativo en la combinación de locusHexadecimal/PepD (P =0.01) causado por un exceso
del genotipo equivalente F1Hexadecimal 100/107-PepD 92/100.Por el contrario, no hubo
evidencia de vinculación entreMaleficioyPepDen poblaciones alopátricas que infestan
C. oleraceum (P =0.82) ni en ningún entorno geográfico para moscas enC. heterophyllum. El exceso
bajo pero significativo de equivalentes de F1 (4 esperados, 8 observados) proporcionó evidencia de
flujo de genes restringido en áreas de contacto que involucran al huésped derivado.
C. oleraceumcomo sitio de apareamiento/huésped. Sin embargo, la diferenciación constante entre entornos
geográficos muestra queT.conuralas razas anfitrionas son discretas, experimentan una selección de ajuste
fino como máximo, y que el principal proceso de diversificación tuvo lugar antes de que se establecieran los
entornos geográficos actuales. El flujo de genes a través del híbrido F1 puede explicar la selección de ajuste
fino enMaleficiorelacionados con plantas parentales puras.
El segundo enfoque para estimar la integridad de la raza hospedante fue un análisis del flujo de
genes en una población sintópica con plantas hospedantes y sus híbridos (C. oleraceum XC.
heterophyllum).Las plantas híbridas constituyen un ambiente intermedio y pueden actuar como un
puente (vector) para el flujo de genes (Diegisser et al.2007). De hecho, la frecuencia deT.conura
equivalentes de doble heterocigoto F1 de plantas híbridas excedieron significativamente las
expectativas si el apareamiento hubiera tenido lugar solo dentro de las razas huésped (F1 de plantas
híbridas = 0.062,C. heterophyllum =0.012,C. oleraceum =0,017; T. Diegisser, datos no publicados). La
tasa de equivalentes F1 también fue mucho más alta que en las poblaciones simpátricas/parapátricas
en las que solo se produjeron plantas huésped parentales pero no plantas híbridas. Curiosamente, la
frecuencia de laC. heterophyllumasociadoHexadecimal 100alelo fue mayor en las moscas que
infestan puroC. oleraceumque en promedio en otras poblaciones simpátricas/parapátricas (0,34
frente a 0,19). Este resultado contradice los análisis globales dondemayor queSe encontró
diversificación entre las razas anfitrionas en las poblaciones de contacto, y está en desacuerdo con la
selección de tipo de refuerzo defendida anteriormente. Estos resultados aparentemente
contradictorios son importantes por dos razones. Primero, prueban indirectamente que el
apareamiento está genéticamente asociado a la planta huésped.
reconocimiento (p. ej., señales químicas) y no reconocimiento de pareja. En el análisis global, los sitios
simpátricos solo tenían plantas parentales puras, en las que se selecciona la oviposición. En segundo lugar,
los resultados sugieren que los genes pueden filtrarse entre las razas de huéspedes, que no son
reproductivamente incompatibles. Ambos hallazgos concuerdan con los de Bush (1969) concepto original de
diversificación mediada por plantas hospedantes. Si este flujo de genes mediado por plantas híbridas es
relevante para la hipótesis del "puente híbrido" (Floate y Whitman1993) no está seguro. La hipótesis del
"puente híbrido" establece que las plantas híbridas pueden aumentar la probabilidad de que los insectos se
desplacen entre las plantas parentales. Solo ha habido una pequeña evidencia de cambios de huésped de
insectos mediados por genomas de plantas introgresivas (Pilson1999). Para la evidencia presentada aquí, el
flujo de genes a través de las plantas híbridas puede ser simplemente una consecuencia secundaria de la
localización de la pareja y, de hecho, puede actuar de manera opuesta al "puente híbrido" al aumentar el
flujo de genes entre las razas huésped. Solo podemos especular sobre la frecuencia del flujo de genes a
través de plantas híbridas, pero considerando la constancia global de las diferencias de frecuencia de alelos,
no puede ser común, de lo contrario, la selección, como se indica enMaleficio,es lo suficientemente fuerte
como para mantener separadas genéticamente a las razas anfitrionas.
5 adaptaciones de raza anfitriona
Varios rasgos pueden, solos o en combinación, adaptar insectos a nuevos huéspedes y asegurar la
discreción de las razas de huéspedes. Se pueden identificar cuatro tipos principales de adaptaciones.
El primero y más importante es el reconocimiento de las plantas, incluida la disposición de las
hembras a utilizar las plantas como sustrato de oviposición (Bernays y Chapman1994; Madera et al.
1999; Gasmann et al.2006). En segundo lugar, los insectos pueden necesitar adaptarse
fisiológicamente a la química del huésped. Las plantas difieren en metabolitos secundarios (Roitberg
e Isman1992) y valor nutricional (H€aggström y larsson1995). El rendimiento larvario dependiente
del huésped ha sido demostrado en numerosos estudios (Via 1991; Craig et al.1993, 1997; katakura y
hosogai,1994), lo que indica que las adaptaciones fisiológicas juegan un papel importante en el curso
de un cambio de huésped. Tercero, la adaptación a las fenologías de las plantas asegura un
momento óptimo para la oviposición. Las fenologías de las plantas pueden jugar un papel
fundamental en mantener separadas a las poblaciones divergentes. De hecho, todas las razas
hospederas de tefrítidos reportadas tienen un tiempo alocrónico para las fenologías de las plantas
(Horner et al.1999; Diegisser et al. 2004,2006b; Dambroski y Feder2007). Por último, una vez que el
parásito se ha adaptado fisiológica y conductualmente al nuevo huésped, puede adaptarse
morfológicamente a la planta. Sin embargo, las diferencias morfológicas, en particular, a menudo
tienen antecedentes no hereditarios debido a la plasticidad fenotípica no adaptativa. Diferencias en
el valor nutricional (H€aggström y larsson1995) y cantidad de metabolitos secundarios (Roitberg e
Isman1992) puede afectar las diferencias de tamaño corporal (Leclaire y Brandl1994; Stoyenoff et al.
1994; lill y marqués2001; Blair et al.2005) y variación de forma (Gillham y Claridge1994).
El estudio de las adaptaciones específicas deT.conuraorganizar carreras paraC. heterophyllumy

C. oleraceumhasta ahora se ha visto obstaculizada por no lograr que ambas plantas hospedantes florezcan en
el laboratorio y simultáneamente tener moscas ingenuas de ambas razas huésped (que deben
sobrevivir a una fase de hibernación). Esto significa que los experimentos recíprocos para evaluar el
rendimiento y las diferencias hereditarias solo se pueden realizar parcialmente. Sin embargo, varios
resultados directos e indirectos muestran queT.conuralas razas anfitrionas han desarrollado
rápidamente un conjunto de diferencias morfológicas y de comportamiento.
5.1 Reconocimiento de plantas y voluntad de aparearse
Reconocimiento de plantas enT.conurase analizó como atracción por las plantas y como disposición a
aparearse en plantas alternativas. En estas pruebas, se usaron moscas ingenuas sin experiencia con plantas
huésped después de la emergencia para asegurar que las diferencias de comportamiento no estuvieran
sesgadas por la impronta. Las moscas se mantuvieron a 4-C durante 2 meses para simular la latencia
invernal, que se requiere para la madurez sexual (Diegisser2005). Las pruebas de atracción de plantas se
realizaron en jaulas con ambas plantas hospederas, con soloC. heterophyllumo soloC. oleraceum,mientras
que las pruebas que estudian la voluntad de aparearse tenían jaulas de prueba adicionales con otros tres
Cirsioespecies y jaulas de control sin plantas. Estas últimas pruebas incluyeron machos y hembras de ambas
razas hospedantes. El primer experimento, la atracción por las plantas, mostró que las razas hospedantes se
sintieron significativamente atraídas por sus propias plantas hospedantes (Tabla1). En el segundo
experimento, la voluntad de aparearse, las moscas dormidas deC. heterophyllumestaban listos para
aparearse tan pronto como la temperatura se elevó de 4-C a temperatura ambiente, y fue independiente de
la planta hospedante (Fig.4). Por el contrario, las moscas que infestanC. oleraceumnecesitó de 2 a 3 semanas
para volverse sexualmente activa. Por lo tanto, las moscas infestanC. heterophyllum,que no necesitaban la
planta huésped para el apareamiento, terminaron el apareamiento antes que las moscas de ambos sexos de
C. oleraceum se volvió sexualmente activa. Debido a la fase de retraso de las moscas que infestanC.
oleraceum,solo se observaron unos pocos apareamientos puros de estas moscas, pero los que ocurrieron
tuvieron lugar en presencia deC. oleraceum (Higo.4b). En un tercer experimento preliminar, probamos si las
moscas infestabanC. oleraceummadurado sexualmente después del contacto con la planta huésped.
Nuevamente, el apareamiento comenzó después de una fase de retraso (ca. 1 semana) y solo en presencia
deC. oleraceum.La fase de retraso difirió ligeramente entre los dos experimentos, pero estuvo presente en
ambos ensayos. El diferente comienzo del apareamiento entre el huésped
tabla 1Pruebas de atracción de plantas hospedantes paraT.conurarazas anfitrionas que infestanC. heterophyllumy
C. oleraceum (Diegisser2005). Las razas y los sexos hospedantes se probaron por separado. Cada ensayo expuso
moscas a ambas plantas simultáneamente
Número de visitas en
Origen Sexo norte C. heterophyllum C. oleraceum PAG
C. heterophyllum Masculino 50 101 32 <0.001
Femenino 50 96 39 <0.001
Total 100 197 71 <0.001
C. oleraceum Masculino 50 86 124 <0.01
Femenino 50 45 97 <0.001
Total 100 131 221 <0.001
a b
40 40
35 35
30 30
número de apareamientos
25 25
20 20
+ 20 Ch hembras + 20 Ch machos
15 15
10 10
5 5
0 0
7 14 21 28 C. hetero - C. olera - C. oleraceum sin plantasC. acaule
filo ceum C. heterophyllum C. palustre
Día después de la liberación de la condición de invierno
C. erisithales
plantas en jaula C. tuberosum
Figura 4Pruebas de preferencia de apareamiento paraT.conurarazas anfitrionas que infestanC. heterophyllumy

C. oleraceum.Las pruebas de preferencia se realizaron en cuatro jaulas cada una con 20 machos y hembras de cada
raza huésped. A las moscas se les permitió aparearse solo una vez y todas las parejas de apareamiento se retiraron
inmediatamente del experimento. Apareamiento específico de raza huésped entre moscas que infestanC.
heterophyllum (barras negras)comenzó de inmediato (a)y era independiente de la planta huésped (b).En el día diez,
20 nuevas hembras delC. heterophyllum-raza hospedante se introdujeron en cada jaula, lo que resultó en parejas
híbridas entre machos originarios deC. oleraceumy hembras procedentes deC. heterophyllum (barras grises) (a).Estos
apareamientos fueron independientes de la planta huésped (b).En el día veinte, 20 nuevos machos de laC.
heterophyllum-raza huésped se introdujeron en cada jaula. Esto no resultó en pares híbridos. Apareamiento
específico de raza huésped entre moscas que infestanC. oleraceum (barras blancas)comenzó después de una fase de
latencia de 2 a 3 semanas y solo, con una excepción, se registró en presencia deC. oleraceum (una, b)
razas coincide con el tiempo alocrónico de las fenologías de la planta huésped en la naturaleza y sugiere un
componente genético para el tiempo de apareamiento. Es probable que este componente no esté
directamente relacionado con la temperatura, ya que no se han encontrado gradientes de frecuencia alélica
de altitud o latitud.dentrorazas anfitrionas (Diegisser et al.2006b). Este resultado difiere de los hallazgos para
la mosca del gusano de la manzana.R. pomonelladonde el cierre larvario está relacionado con la
temperatura y donde se observan inclinaciones latitudinales de la raza del huésped (Feder et al. 1997;
Dambroski y Feder2007).R. pomonellaemergen en primavera lo que permite seleccionar la duración de la
diapausa mientrasT.conuraemergen en verano, sobreviviendo al invierno como adultos.
En resumen, las pruebas de apareamiento y atracción de plantas mostraron que ambas razas huésped se
sintieron atraídas por sus propios huéspedes, pero solo la raza huésped derivada, es decir, las moscas que infestaron
C. oleraceum,requería que su planta huésped se volviera sexualmente activa. Esta asimetría difiere
ligeramente del comportamiento recíproco asumido por los modelos teóricos de especiación relacionados
con la planta huésped.
5.2 Supervivencia enC. oleraceum
Como se mencionó anteriormente, los análisis genéticos de las razas anfitrionas indicaron queC. oleraceum
es la planta huésped derivada. En un experimento de puesta de huevos, probamos si el cambio a la derivada
C. oleraceuminvolucró adaptaciones fisiológicas mediante el estudio de la aceptación de la oviposición y la
supervivencia de las dos razas hospedantes en esta planta. grávida capturada en la naturaleza
se ofrecieron hembras de ambas razas anfitrionasC. oleraceumplantas para la oviposición. Se

registró el número de hembras exitosas que (1) aceptaron yemas, (2) produjeron larvas con éxito, (3)
pupas (supervivencia de larva a pupa) y (4) produjeron adultos (supervivencia de pupa a adulto)
(Diegisser et al. 2008).T.conuraprocedente deC. oleraceumprodujeron adultos en el 75% de todos los
ensayos de puesta de huevos en contraste con solo el 6,6% enT.conuraprocedente deC.
heterophyllum. El bajo rendimiento de estos últimos estuvo determinado por la falta de aceptación
de las plantas y por la alta mortalidad larvaria. Por el contrario, la eclosión de al menos una larva por
lote y la supervivencia de las pupas no se vieron afectadas (Diegisser et al.2008). Los primeros dos
parámetros involucran etapas que no están directamente involucradas en las interacciones con la
planta huésped, mientras que las diferencias significativas de mortalidad durante la etapa larvaria
implican diferentes respuestas a la fisiología de la planta. Este experimento también mostró que las
hembras, si son forzadas, pondrán huevos en una planta subóptima, y que la raza anfitriona
ancestral (moscas que infestan
C. heterophyllum)exhibe variación genética para la adaptación fisiológica a un huésped
nuevo.
5.3 Adaptación de la Longitud del Ovipositor
Las plantas hospederasC. heterophyllumyC. oleraceumdifieren significativamente en el tamaño de la

cabeza de la flor. El ovipositor deT.conuradebe ser lo suficientemente largo para llegar a la cavidad
dentro de la cabeza de la flor. Estudios de Zwölfer y Romstöck-Völkl (1991) en un sitio en los Alpes
europeos mostró que las moscas que parasitanC. heterophyllumtienen oviscarpos significativamente
más largos que las moscas asociadas conC. oleraceum.Sin embargo, estos estudios no pudieron
descartar las causas fenotípicas inducidas por el huésped y/o geográficas de la diferencia. PorqueC.
oleraceumestá en gran parte restringida a altitudes por debajo de ca. 1.200 m mientras
C. heterophyllumse encuentra desde ca. 1100 m a más de 2000 m, existe la posibilidad de que la
altitud afecte el tamaño corporal (Stalker y Carson1948; Bitner-Mathé y Klaczko1999; Dahlgaard et al.
2001). Debido a que aún no hemos podido criar moscas en el laboratorio, utilizamos dos enfoques
indirectos para evaluar si la longitud del ovipositor está determinada genéticamente y, por lo tanto,
se adapta al tamaño de la inflorescencia. Los análisis se basaron en la relación ovipositor/longitud del
ala. La relación elimina las diferencias de ovipositor relacionadas con el huésped causadas por el
tamaño del cuerpo. La longitud del ala se utilizó como sustituto del tamaño del cuerpo.
Comparamos moscas de cada planta huésped de sitios simpátricos separados geográficamente
(sur de Suecia y Fichtelgebirge bávaro), y en un sitio sintópico en los Montes Metálicos alemanes
(Erzgebirge), estudiamos moscas que emergen de plantas parentales puras y plantas híbridas (C.
heterophyllumXC. oleraceum),y moscas híbridas que emergen de las plantas híbridas. Debido a que
el entorno de las larvas dentro de las cabezas de flores híbridas es el mismo para las moscas
parentales y las híbridas, las moscas emergentes se pueden utilizar para inferir la causa subyacente
de la diferenciación morfológica. Si las razas hospedantes difieren cuando se desarrollan en su
hospedante original pero no cuando se desarrollan en el mismo ambiente, las diferencias pueden
asignarse a la plasticidad fenotípica. Se sustenta una base genética de divergencia morfológica
cuando las razas huésped no reaccionan al medio ambiente (es decir, huésped original o planta
híbrida). Una combinación de
morfología independiente del huéspedyLa morfología de la mosca híbrida intermedia proporciona

una fuerte evidencia de una base genética y adaptaciones al huésped.
Los resultados mostraron que las razas de hospedantes puros tenían longitudes de ovipositores
significativamente diferentes, que eran independientes tanto de la ubicación geográfica (es decir, la
temperatura) como del entorno del hospedante (planta). Las moscas híbridas fueron intermedias, lo
que demuestra que la longitud del ovipositor está determinada genéticamente enT. conura.
Curiosamente, este resultado contrasta con lo ocurrido en razas anfitrionas de los congéneresT.
bardanaeinfestando Arctium tomentosumyA. menos.EnT. bardanae,La longitud del ovipositor se ha
adaptado a las diferencias de tamaño de las inflorescencias ajustando el tamaño del cuerpo
(Diegisser et al.2004). Este último es común entre las razas huésped (Emelianov et al.1995; Carrol et
al. 1997) y otros insectos fitófagos. Por ejemplo, en los escarabajos bellota (Curculio),la tribuna, que
se utiliza para excavar un sitio de oviposición en las estructuras de las plantas, aumenta
proporcionalmente al tamaño del cuerpo y sugiere que el tamaño de la semilla es un importante
agente selectivo en la especiación (Zwölfer1975; Hughes y Vogler2004). Las diferentes soluciones
para aumentar la longitud del ovopositor en las especies hermanasT. bardanaeyT.conura sugieren
diferentes presiones de selección en dos especies relacionadas.
6 ¿Importa la historia de las plantas en la evolución de la raza huésped?
El estudio de la adaptación de insectos fitófagos a plantas hospederas alternativas se ha centrado

tradicionalmente en encontrar parámetros que hagan posible que un insecto sobreviva y evolucione
en diferentes hospederos. Pero la pregunta también se puede hacer a la inversa, a saber, ¿qué hace
que las plantas sean susceptibles de ser atacadas? ¿Por qué algunas especies de plantas se infestan y
otras no, y algunas especies solo localmente? La responsabilidad por la infestación estará
influenciada por la variación genética entre las plantas hospedantes (Fritz1995; Cronin y Abrahamson
1999; Nuismer y Thompson2001). ParaT. conura,esto se observa directamente en la población de
híbridosC. heterophyllumXC. oleraceumdonde ambas razas hospedantes usaron plantas híbridas
pero no la planta hospedante alternativa. Tales diferencias de responsabilidad indican la existencia
de jerarquías de rango de hospedantes y diferentes niveles de infestación cuando las plantas
hospedantes se encuentran en áreas geográficas amplias (Thompson2005). Una pregunta
relacionada con la responsabilidad per se es si es posible hacer inferencias sobre la formación de
razas hospederas a partir de la historia de la población de las plantas hospederas (Despres et al.
2002). ¿Los dos coinciden; ¿los patrones son congruentes?
Este tema está todavía en su infancia en elT. conura–Cirsiumpero los análisis genéticos de
poblaciones deC. heterophyllumyC. oleraceum (Johannesen y Lampei, resultados no
publicados), y una investigación de una expansión reciente del rango de hospedantes por
T.conuradeC. heterophyllumaC. palustreen el norte de Gran Bretaña (Johannesen et al.2008),
sugieren que la historia y/o constitución de la planta pueden desempeñar un papel
importante, si no decisivo.
En cuanto a primeroC. heterophyllumyC. oleraceum,sus estructuras genéticas e historias
de población eran congruentes con el patrón global de variación de mtDNA encontrado en
T.conuracarreras anfitrionas:C. heterophyllumLas poblaciones están altamente estructuradas
y divididas en un linaje oriental y occidental, mientras queC. oleraceummuestra poco
estructura en toda Europa y Rusia. Las historias de las plantas sugieren un origen ruso o de
Europa del Este de la asociación, seguido de una expansión deT.conuraen Europa occidental.
Sin embargo, una diferencia decisiva es que las poblaciones de Europa occidental deC.
heterophyllummuestran signos de hibridación o duplicación de genes (vistos como supuestas
secuencias heterocigóticas ITS y ETS; Johannesen y Lampei, resultados no publicados). Las
moscas que infestan estos supuestos híbridosC. heterophyllumen los Alpes, y todos los demás
infestadosCirsioen esta región, son casi monomórficos para el haplotipo H1 (Fig.5) (Diegisser
et al.2006a; Johannesen et al., resultados no publicados). La combinación de tener un
haplotipo principal enT.conuray genética alterada deC. heterophyllumen Europa occidental
sugieren queC. heterophyllumen Europa occidental misma ha sido colonizada recientemente.
Se puede especular que el cambio genético deC. heterophyllummedia la capacidad deT.conura
para diversificar a otras plantas por completo. Si esto es correcto, sugiere que las alteraciones
del área de western
C. heterophyllumpoblaciones permitieron la expansión del rango de huéspedes en plantas
previamente no infestadas comoC. oleraceum.Curiosamente, no observamos la infestación de
una población alpina occidental deC. heterophyllumque no mostraba signos de introgresión y
que estaba genéticamente más relacionado conC. monspessulanum (Johannesen et al.,
El segundo ejemplo de la posible influencia de la historia de la población de plantas en la
expansión del rango de huéspedes es la infestación deC. palustreen el norte de Gran Bretaña por
H25
H19 CC..oolle
hola
C..h
C.. paall
C pag
H18
C. het H
H1 H30
C. het
C. girar C. oleraceum C. ole
C. acaule
C. canum
H33 C. heterophyllllum
C. girar C. spinosissimum
C. erisithalles
C. palustre
HH2233
c..oOllee
H34 HH2244
C.eri coe
C.. olle
H26
CC..oollee
HH2288
le
C.. viejo
HH2277
CC.. olle
Figura 5Haplotipos encontrados enT.conurainfestandoCirsioLas especies en los Alpes europeos mostraron

un árbol genético en forma de estrella con poca diversidad. El haplotipo común H1 se encontró enT.conura
emergiendo de todosCirsioespecias
C. heterophyllum flies (Johannesen et al.2008; Diegisser et al.2009).C. palustretampoco está infestado

en el sur de Gran Bretaña, dondeC. heterophyllumestá ausente ni en la Europa continental donde
ocurre simpátricamente con infestadoC. heterophyllum yC. oleraceum.Los análisis genéticos
utilizando microsatélites mostraron que los británicos no infestados e infestadosC. palustreestán
estrechamente relacionados pero también que infestadosC. palustre están genéticamente muy
empobrecidos. La pérdida de diversidad genética probablemente fue causada por cuellos de botella
durante la expansión del rango.
Tanto para el cambio de huésped de las moscas que infestanC. heterophyllumyC. oleraceumy la
expansión del rango de huéspedes de las moscas que infestan tantoC. heterophyllumyC. palustreen
el norte de Gran Bretaña, las peculiaridades genéticas locales de las plantas hospederas y las
historias genéticas de población deT.conuracoincidir. Estos patrones sugieren que los orígenes de las
infestaciones están influenciados por la historia de la población y/o la constitución genética de las
plantas. Para verificar estas suposiciones, necesitamos datos experimentales de atracción y
desempeño de las moscas a los linajes genéticos de las diversas plantas hospederas y la
cuantificación de los metabolitos secundarios de estos linajes genéticos. La combinación de historias
de plantas y parásitos puede ser una guía futura para dilucidar los procesos de especiación en
insectos fitófagos con más detalle.
7. Conclusiones
La mosca tefrítidaT.conuraexhibe dos razas anfitrionas que infestanC. heterophyllumy

C. oleraceum,respectivamente. Con base en las distribuciones geográficas de la variación genética en
T.conuray sus plantas hospederas, el cambio de hospedero probablemente ocurrió deC.
heterophyllumaC. oleraceumy vía aislamiento peripátrico. El cambio de hospedante probablemente
ocurrió rápidamente pero antes de las distribuciones actuales de hospedante-planta. La adquisición
de una nueva planta hospedante resultó en un rápido conjunto de nuevas adaptaciones. Estos
incluyen adaptaciones a la fenología de la planta, la atracción y fisiología de la planta, así como el
ajuste morfológico del ovipositor a la morfología de la cabeza de la flor. Los cambios de
comportamiento son más pronunciados en la raza huésped derivada, es decir, moscas que infestanC.
oleraceum.Los resultados también sugieren que las distribuciones geográficas de las plantas
anfitrionas, más que la evolución cofilogenética entre moscas y plantas, jugaron un papel en la
diversificación de las razas anfitrionas. Esto implica que las condiciones geográficas cambiantes
pueden haber sido un requisito previo para la diversificación inicial. Por lo tanto, la especiación
simpátrica y alopátrica no son mutuamente excluyentes, pero probablemente deberían, en sistemas
abiertos como elT. conura–Cirsiumsistema, ser pensado como un continuo de eventos.
AgradecimientosEste estudio se benefició enormemente de las investigaciones de Christian Tritsch,

Christian Lampei, Karoline Köhler y Ariane Grastat. Damos las gracias a Dagmar Klebsch y Susanne
Maus para el trabajo práctico en el laboratorio. Harald Schneider y un revisor anónimo hicieron
sugerencias útiles sobre un borrador anterior de MS. El estudio fue apoyado por Deutsche
Forschungsgemeinschaft (DFG Se506/10-1/3 para AS y JJ
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Las babosas marinas alimentadas por energía solar
(Opisthobranchia, Gastropoda, Mollusca): incorporación
de unidades fotosintéticas: ¿un carácter clave que
mejora la radiación?
Heike W.€agele, Michael J. Raupach, Ingo Burghardt, Yvonne Grzymbowski y

Katharina H.€andeler
AbstractoSe ha investigado la incorporación de unidades fotosintéticas bajo el supuesto de

que representan un carácter clave que mejoró la especiación y condujo a una radiación
adaptativa. Se eligieron dos sistemas de opistobranquios independientes para probar esta
hipótesis: el género nudibranquiofilodesmioviviendo en una relación simbiótica mutualista
con el dinoflageladosimbiodinio,y el taxón Sacoglossa (babosas marinas herbívoras)
secuestrando e incorporando parcialmente cloroplastos sanos de clorofitas. Se midió la
actividad fotosintética de varios miembros de ambos taxones en condiciones de hambre y se
estudió la eficiencia de incorporación analizando los valores de rendimiento de la fotosíntesis.
Para ambos sistemas, se observaron ciertas tendencias: los clados que exhiben una
incorporación funcional de unidades fotosintéticas (es decir, estas unidades no fueron
digeridas después del secuestro) son aproximadamente cinco veces más ricas en especies que
su taxón hermano. Al comparar las especies, la eficiencia observada difirió. Además, las
adaptaciones morfológicas a eficiencias más altas podrían identificarse en formas de
retención a largo plazo (por ejemplo,Phyllodesmium longicirrum con una glándula digestiva
muy ramificada en los apéndices dorsales, y sacogloso Plakobranchus ocellatuscon crestas
especiales en el lado dorsal, que albergan la mayor parte de los cloroplastos incorporados).
Sin embargo, no se pueden excluir otros factores que impulsan la evolución de estos clados;
incluso podrían estar vinculados con el personaje clave investigado. Estos son, por ejemplo, el
cambio de comida y/o la incorporación de metabolitos secundarios para la defensa.
H W€agele (*), MJ Raupach, Y. Grzymbowski y K. H.€andeler Zoologisches

Forschungsmuseum Alexander Koenig, Bonn, Alemania Correo
electrónico: hwaegele@evolution.uni-bonn.de
I. Burghardt
Instituto Australiano de Ciencias Marinas, PMB No. 3, Townsville QLD 4810, Universidad de
Tecnología de Australia Sydney, Grupo de Cambio Climático, PO Box 123, Sydney, NSW 2007,
Australia

264 H W€agele et al.
1 Introducción
La radiación adaptativa se define como un “aumento en la tasa de aparición de nuevas

especies y un aumento simultáneo en la diversidad ecológica y fenotípica” (Schluter2000: pág.
10). La radiación adaptativa puede ser impulsada por características, como la ausencia de
taxones que compiten en una zona de adaptación. Se puede ingresar a dicha zona cuando un
rasgo novedoso que ayuda a explotar los recursos no se usa o se usa poco antes (Schluter
2000). El taxón de gasterópodos Opisthobranchia, con unas 6.000 especies descritas, es
conocido por algunos rasgos notables que podrían interpretarse como caracteres clave (W€
agele2004; W€agele y klussmann-kolb2005). Un carácter único es la capacidad de incorporar
cnidoquistes funcionales de presas cnidarias para usar en defensa propia (Edmunds1966; k€
alker y schmekel1976; Aguado y Marín2007). Otra característica generalizada es el secuestro
de compuestos químicos de la presa, su biotransformación y despliegue en defensa (ver
Cimino y Gavagnin2006; W€agele et al.2006).
En este estudio, investigamos la adquisición de unidades fotosintéticas (dinoflagelados
unicelularessimbiodinioo cloroplastos) dentro de Opisthobranchia en dos taxones
distantemente relacionados para probar la premisa de que la incorporación de unidades
fotosintéticas puede ser un carácter clave que mejoró la tasa de especiación e influyó en la
radiación adaptativa. El análisis de dos sistemas independientes que posean el carácter
previsto puede probar la hipótesis de que este carácter fue de hecho una innovación clave.
El primer sistema comprende el génerofilodesmio (Facelinidae, Aeolidoidea,
Nudibranchia), que actualmente incluye 30 especies (Fig.1a–l). Se conoce su distribución
en todo el Indo-Pacífico, incluidas las zonas templadas y tropicales. Estas babosas se
alimentan de miembros específicos de Octocorallia (Anthozoa, Cnidaria) e incorporan el
dinoflagelado.simbiodiniospp. (a menudo llamados zooxanthellae) de sus organismos
de presa secuestrados, y luego viven en una relación simbiótica mutualista con estos
protistas (Rudman1981,1987,1991; Burghardt y W.€agele2004; Burghardt et al.2005,
2008a,b; Burghardt y Gosliner2006; Burghardt y W.€agele2006).
El segundo sistema es el taxón Sacoglossa con unas 300 especies conocidas (Fig.2a–l
). Estas babosas se alimentan de algas pertenecientes principalmente a la Chlorophyta
(Jensen 1993a,b,1997; ver H€andeler y w€agele2007; H€andeler et al.2009). Se sabe que
algunos miembros incorporan cloroplastos y explotan los productos fotosintéticos de los
cloroplastos que aún funcionan dentro de las babosas (Greene1970; Zanja1973;
Trinchera et al.1973a,b; Clark et al.1981; Rumpho et al.2000,2001; Evertsen et al. 2007).
Ambos taxones incorporan las unidades fotosintéticas dentro de las células glandulares
digestivas de su sistema digestivo (Fig.3a, b, d, e). Sin embargo,filodesmioincorpora organismos
completamente funcionales, mientras que solo los orgánulos celulares (cloroplastos) con equipo
genómico reducido para el autosustento son secuestrados y alojados en la glándula digestiva de los
miembros del sacogloso. En ambos sistemas, se supone que las babosas se benefician de la
incorporación de unidades fotosintéticas funcionales (PU: zooxantelas o cloroplastos) al explotar los
productos fotosintéticos durante un tiempo variable.
Pueden derivarse varias ventajas de la incorporación de PU. Primero, las babosas
adquieren el mismo color que sus organismos alimentarios y, por lo tanto, se camuflan.
Las babosas de energía solar (Opisthobranchia, Gastropoda, Mollusca) 265
Figura 1filodesmioespecies: (a)P. lembehensis, (b)P. koehleri, (C)P. kabiranum, (d)P. rudmani,
(mi)P. lizardensis, (F)P. jakobsenae, (gramo)P. briareum, (h)P. colemani, (i)P. longicirrum, (k)
P. lizardensis (flecha)en su alimento, un coral blando del géneroHeteroxenia, (l)juvenilP. briareum (flecha)
junto a dos pólipos de su alimento, el coral blandoBriareum violacea
Esto dificulta la detección por parte de depredadores visuales como peces o cangrejos (Figs.1k, l, y2k, l). En
segundo lugar, la utilización de productos fotosintéticos puede permitir la especialización en presas que son
más raras o de menor contenido energético. Este aspecto es importante ya que muchos taxones de
opistobranquios están altamente especializados en ciertas especies alimenticias, y solo unos pocos muestran
un rango más amplio en su espectro de presas. Por lo tanto, un suministro de energía independiente puede
permitir que los miembros de algunas especies prolonguen los períodos de tiempo en busca de alimentos
nuevos y raros. En tercer lugar, un suministro de energía autónomo puede soportar slugs
Figura 2Especies de sacogloso: (a)Lobiger viridis, (b)Ercolania kencolesi, (C)Costasiella kuroshimae, (d)
Cyerce nigricans, (mi)Thuridilla carlsoni, (F)Elysia ornata, (gramo)dosElysia timida especímenes en
posición de apareamiento, (h)Elysia crispata, (i)Plakobranchus ocellatus, (k)Ercolaniasp en su
alimento de clorofitaAvrainvillea, (l)Boselia miméticaen su alimento de clorofitaAtún Halimeda. Flecha
indica la parte que se muestra ampliada en la Fig.3g
en busca de parejas de apareamiento. Los opistobranquios no suelen ser muy abundantes; por lo
tanto, la búsqueda de socios adecuados puede llevar mucho tiempo. Finalmente, un excedente de
energía producido por las UP secuestradas podría permitir un aumento en la fecundidad y la aptitud
(Burghardt y W.€agele, resultados no publicados).
Fig. 3Patrones de ramificación de la glándula digestiva e incorporación de UPs (C.A)filodesmio, (d-h)

Sacoglosa: (b)zooxantelas (flechas)dentro de las células de las ramas glandulares digestivas en filodesmio
briareum; (b)Sección longitudinal de ceras deP. lizardensiscon ramas glandulares digestivas y canal central (
flecha); (C)Vista general de ceras deP. longicirrum.Tenga en cuenta las ramas blancas dentro de las ceras y
las manchas marrones en la parte exterior, que representan las áreas donde se almacenan las zooxantelas. (
d)parte posterior dePlakobranchus ocellatuscon parapodios abiertos. Tenga en cuenta las crestas verdes,
que contienen los cloroplastos. (mi)Sección transversal a través de parapodios con varias crestas (flechas). (F)
Sección histológica a través de una de estas crestas, mostrando detalles de los túbulos glandulares
digestivos (flechas),y la acumulación de cloroplastos en las partes externas de los túbulos (puntas de flecha).
(gramo)Detalle de los parapodios laterales deBoselia mimética (ver figura2l,flecha)mostrando el sistema
tubular altamente ramificado de la glándula digestiva.
(h)Sección longitudinal de una cera deErcolania kencolesimostrando los túbulos de la glándula digestiva (flechas).
Barras de escala (a)50metrom, (b)250metrom, (mi)200metrom, (F)25metrom, (gramo)200metrometro
Probamos varias hipótesis para abordar la pregunta principal, si la incorporación de

PU mejoró la especiación y permitió la radiación adaptativa:
1. Tasa de especiación aumentada como consecuencia de la incorporación de unidades

fotosintéticas funcionales.
2. Las especies derivadas exhiben una mayor eficiencia en su actividad fotosintética
durante condiciones de hambre. Suponemos que el secuestro de zooxantelas o
cloroplastos generalmente da como resultado su digestión para la extracción directa
del contenido de energía. En los sistemas investigados aquí, muchos miembros ya no
digirieron PU, sino que se mantuvieron en la glándula digestiva de las babosas
durante un cierto período de tiempo, lo que mejoró la apariencia críptica en su
organismo alimentario preferido. La digestión tardía o nula dio lugar al uso de la
actividad fotosintética de las zooxantelas/cloroplastos antes en la evolución de este
grupo y finalmente resultó en el cultivo de PU dentro del sistema digestivo.
3. La ramificación de la glándula digestiva se correlaciona con la eficiencia de la actividad
fotosintética del sistema babosa/zooxantelas o babosa/cloroplasto. Por lo general, la
glándula digestiva dentro de Opisthobranchia es una estructura más o menos globular,
internamente muy plegada o en forma de tubo para aumentar la superficie para la
secreción de enzimas y para la fagocitosis de elementos nutricionales. Cuando se explotan
las zooxantelas o los cloroplastos por sus productos fotosintéticos, es probable que se
optimice el alojamiento de las UP. Esto se puede lograr extendiendo las ramas glandulares
digestivas hacia la periferia del cuerpo de la babosa y formando áreas especiales en estas
partes del cuerpo, lo que permite una exposición óptima a la luz y minimiza la sombra de
las PU.
especímenes del génerofilodesmiofueron recolectados principalmente en áreas tropicales (ver

Burghardt y W€agele2004; Burghardt y Gosliner2006; Burghardt et al. 2008a,b), mientras que
los animales de la Sacoglossa fueron recolectados en el Mar Mediterráneo, el Mar Caribe y
alrededor de Australia (ver H€andeler et al.2009). Las mediciones del rendimiento fotosintético
en babosas marinas se realizaron con un fluorómetro modulado por amplitud de pulso (Diving
PAM; Walz, Alemania). Este método ha sido establecido para babosas (W€agele y johnsen2001;
Burghardt y W.€agele 2006). La actividad fotosintética se mide como un valor de rendimiento
relativo, con valores altos que indican fotosíntesis funcional debido a PU sanas. Para investigar
la eficiencia de la fotosíntesis a largo plazo, los animales recolectados en el campo se llevaron
al laboratorio y se mantuvieron en pequeños acuarios en condiciones controladas
(temperatura y salinidad según su origen) y generalmente en ritmo natural de día y noche. Los
acuarios no estaban expuestos a la luz solar directa sino a la sombra de un techo de plástico o
una construcción similar. Por lo tanto, la irradiación durante el día se redujo a valores
máximos de alrededor de 150 a 200metrocuantos molares m-2s-1. Todas las mediciones de la
fotosíntesis se realizaron en las primeras horas de la noche después de permitir que los
animales se aclimataran a la oscuridad. En consecuencia, la primera sesión de medición suele
comenzaron varias horas después de recolectar los animales y continuaron a un ritmo regular
de 24 horas. Cada espécimen se midió generalmente tres veces por sesión.
3 resultados
3.1filodesmio
De las 30 especies conocidas defilodesmio,Se ha investigado la actividad fotosintética de

14 especies diferentes, y algunas de ellas retienen la actividad durante 5 meses o más (P.
longicirrum;véase Burghardt et al.2008b). Cifra4muestra una hipótesis actual de la
relación filogenética de estos 14filodesmio especies y su capacidad para incorporar
zooxantelas. El cladograma representa una ilustración esquemática de un análisis
bayesiano (fragmentos de 16S y CO1) con las babosas de marAustraeolis ornatusy
Dondice banyulensiscomo taxones externos. Esta elección se basa en resultados no
publicados de W€Agele y Bleidissel. Ambas especies exogrupo pertenecen a la misma
familia quefilodesmio,los Facelinidae, pero no albergan zooxantelas. Se recuperaron dos
clados distintos en la reconstrucción del árbol, así como en los análisis de NeigborNet.
Pero, contrariamente a la reconstrucción del árbol (que se muestra aquí), los análisis de
NeigborNet resultaron conP. pointimieicomo la especie con mayor afinidad por los
exogrupos. Esta incongruencia se refleja en la baja probabilidad posterior de este clado
(ver Fig.4). La investigación de la actividad fotosintética reveló que, a excepción deP.
pointdimiei (el taxón dispuesto más basal en el clado rojo) y los taxones del grupo
externo no xanteladoAustraeolis ornatayDondice banyulensis,todo investigado
filodesmioespecies exhibieron actividad fotosintética cuando recién capturadas
(indicado por un cuadrado verde delante del nombre de la especie en la Fig.4). Esto está
de acuerdo con la presencia o ausencia de zooxantelas en los organismos de presa.
Austraeolis ornatayDondice banyulensisse mencionan como que se alimentan de
hidrozoos no xantelados (ver Rudman2001; McDonald y Nybakken2009) yFilodesmio
poindimieiencarijoa,un octocoral clavularido que no se sabe que sea xantelato (Fabricius
y Alderslade2001).Phyllodesmium rudmani, P. jakobsenae, P. lizardensis, P. hyalinum, P.
kabiranum, P. lembehensis yP. cripticumse alimentan de miembros del zooxantelato
Xeniidae, mientras que todos los demás analizadosfilodesmioLas especies se alimentan
de miembros zooxantelados de diferentes familias de octocorales (Fig.4)
Investigaciones a largo plazo de la actividad fotosintética de variosfilodesmio

especies revelaron claras diferencias en la eficiencia, aunque no fue posible un enfoque
estadístico debido a la rareza de muchas especies y las dificultades para realizar
mediciones a largo plazo en condiciones tropicales sin la infraestructura adecuada. Cifra
5a, bmuestran el rendimiento fotosintético de diferentes especies en condiciones de
hambre (datos agrupados de varios individuos).P. longicirrum muestra la capacidad de
retención más larga en comparación con todos los demásfilodesmioespecies medidas.
Cifra5amuestra esta especie en comparación con dos especies del clado azul y la Fig.5b
del clado rojo. Comparando las especies dentro de los clados,
comida cnidaria
Género Familia
Phyllodesmium jakobsenae
93
100 Phyllodesmium lizardensis Heteroxenia
Phyllodesmium hyalinum Heteroxenia
Filodesmio kabiranum
Xeniidae
81 Phyllodesmium lembehensis
Phyllodesmium rudmani
Phyllodesmium crypticum
Phyllodesmium koehleri neftéidos
100
filodesmio cf. botella doble Sinularia
64
Alcyoniidae
57 Phyllodesmium longicirrum sarcofiton
Phyllodesmium macphersonaeeritropodio Anthotelidae
99
Phyllodesmium colemani tubipora Tubiporidae
sesenta y cinco
Filodesmio briareum briareum Briareidae
Filodesmio poindimiei carijoa Clavulariidae
Dondice banyulensis Eudendrio
HIDROZOOS
Austraeolis ornata hidroides
Figura 4Filogenia y rasgos evolutivos defilodesmioespecies. Cladograma basado en un análisis baysiano de

16S rDNA con varios especímenes por especie.Valoresindican probabilidades posteriores. La presencia de
zooxantelas en las babosas, por lo tanto la presencia de fotosíntesis, se indica con unverde,ausencia con un
cuadrado negroSe indican los organismos alimentarios en los que se puede encontrar la especie. Se pueden
observar dos clados monofiléticos. Los miembros del clado azul se alimentan principalmente de especies de
corales blandos zooxantelados de Xeniidae (exceptoP. koehleri).Los miembros del clado rojo se alimentan de
varios miembros de diferentes familias de corales blandos.P. longicirrumcomo la babosa de energía solar de
mejor rendimiento se destaca con unestrella verde.Aquellas especies que no muestran fotosíntesis se
alimentan de especies no xanteladas.
a
1.0 producir
Phyllodesmium longicirrum
0.9 Phyllodesmium lizardensis
Phyllodesmium rudmani
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
días
0.0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
b
1.0 producir
Phyllodesmium longicirrum
Phyllodesmium briareum
0.9 Phyllodesmium colemani
Phyllodesmium macphersonae
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
días
0.0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Figura 5actividad fotosintética de variosfilodesmioespecies en comparación. Los valores de rendimiento se

representan frente al tiempo de inanición. (a)Gráficos de rendimiento versus tiempo de la fotosíntesis de dos
alimentadores de Xeniidae,P. lizardensisyP. rudmani,en comparación conP. longicirrumcomo el de mejor rendimiento.
Tenga en cuenta queP. rudmanies menos eficaz en el rendimiento fotosintético después de 20 días que
P. lizardensis. (b)Gráficas de rendimiento versus tiempo de la fotosíntesis de tresfilodesmioespecies que se alimentan
de diferentes tipos de corales blandos (ver Fig.4). Tenga en cuenta la eficiencia más baja enP. briareum
P. lizardensismuestra una disminución menos clara que el estrechamente relacionadoP. rudmani.

Todos los miembros del clado rojo también muestran una clara disminución, pero la eficiencia
comenzó en diferentes niveles. Al mapear estos resultados en el cladograma, parece que una especie
más derivada, a saberP. longicirrum,exhibe la actividad fotosintética de mejor desempeño, aquí
indicada con una estrella, mientras que las especies más basales comoP. briareum yP. colemanidel
mismo clado exhiben eficiencias más bajas. La disposición de las especies dentro del clado azul, que
comprende principalmente comedores de xeniidos, en especies fotosintéticas de rendimiento bueno
o menos eficiente, no es evidente debido a la falta de datos a largo plazo. Además, la reconstrucción
del árbol resultó en politomías y los análisis de NeighborNet indicaron conflicto en los datos, lo que
hace que una conclusión con respecto a la evolución de la eficiencia sea vaga en este estado. Sin
embargo, ninguno de los alimentadores de xeniidos muestra la eficiencia deP. longicirrum.En el
clado de los alimentadores xeniid,
P. koehlerise destaca debido a sus diferentes presas alimenticias (Nephteidae; ver Burghardt
et al.2008a). Pero la posición de esta especie es todavía un tema de discusión como se
muestra en el valor de probabilidad posterior bajo en el cladograma (Fig.4).
Una comparación de los patrones de ramificación en montajes totales de apéndices
dorsales (cerata), así como en investigaciones histológicas, muestra diferencias considerables
entre las especies investigadas (Fig.3a–c). Por ejemplo,P. longicirrumexhibe altos valores de
rendimiento fotosintético por más de 5 meses y muestra un patrón glandular digestivo mucho
más ramificado (Fig.3c) que aquellos con eficiencias más bajas (por ejemplo,P. briareum, P.
lizardensis,Higo.3a, b). Investigación morfométrica preliminar de epitelios glandulares
digestivos y zooxantelas enP. longicirrumen comparación con especies no xanteladas de
varios eólidos (Cuthona caerulea, Facelina rubrovittata)reveló un volumen total mucho más
pequeño del epitelio glandular digestivo dentro de todo el apéndice en comparación con las
especies no xanteladas con una proporción de 25% para el primero y 50% para el segundo (W
€agele y kr€uger, datos no publicados). Esto es sorprendente a primera vista. Probablemente,
la superficie glandular digestiva deba ser mayor en especies que deben alimentarse
continuamente, mientras que las especies zooxanteladas que realizan fotosíntesis han
reducido la epidermis secretora en favor de un sistema ramificado mucho más efectivo y con
menor superficie. Por otro lado, el volumen total de ceratas en comparación con el resto del
cuerpo está mucho más aumentado, lo que indica la importancia de las ceratas para
almacenar zooxantelas. Cifra3muestra un sistema de ramificación con sólo ramas primarias y
secundarias en
P. lizardensis (Higo.3b), mientrasP. longicirrum (Higo.3c) posee una glándula digestiva altamente
ramificada dentro de los apéndices dorsales. En el futuro, se deben realizar extensas mediciones
morfométricas para revelar resultados más detallados sobre esta característica.
4 Sacoglosa
De las 300 especies conocidas de sacoglossan, más de 60 especies seleccionadas han

sido incluidas en un análisis filogenético basado en el gen mitocondrial 16S rDNA, CO1 y
el gen nuclear 28S rDNA (H€andeler et al.2009). Cifra6muestra un análisis baysiano con
ramas terminales unidas a nivel de especie. En congruencia con
comida de algas 89 elysiaEspecificaciones. 1

100 elysiaEspecificaciones. 5
caulerpales elysia macnaei
98
Bryopsidales 100 Elysia pratensis
100 Elysia subornata
cladoforales 100
Dasycladales Elysia tomentosa
100 Elysia cornigera
rodofita 98 99 Elysia timida
Heterokontophyta Elysia obtusa
100 100
desconocido Elysia amakusana
Elysia ornata
99 elysia marcussi
53 elysia serca angiospermas
100 Elysia clorotica
99 Elysia crispata
100 Elysia viridis
98 Elysia papilosa
100 elysia zuleicea
90 Pátina Elysia
Plakobranchoidea
98 87 Elysia benettae
elysia tuca
90 Elysia stylifera
Elysia pusila
99 99 thuridilla bayeri2
100
100 Thuridilla gracilis
97 thuridilla bayeri1
100 Thuridilla lineolata
99 Thuridilla esperanza
98 Thuridilla albopustulosa
99 100 Thuridilla carlsoni
100 thuridilla kathae
Thuridilla hofae
Plakobranchus ocellatus
72 100 Bosellia mimetica
boseliaEspecificaciones.
100
Plakobranchacea
Polybranchia orientalis
100 Polybranchia viridis
96 Mourgona osumi
87 Caliphylla mediterranea
100 Hermaea bífida
100 hermaea cruciata
Aplysiopsis enteromorphae
100 Ercolania kencolesi
ErcolaniaEspecificaciones.
78 Ercolania fuscata
100
78 Ercolania felina
Ercolania boodlea
53 100 Alderia modesta
alderia willowi
90 72 Plácida verticillata
Plácida dendrítica
placida kingstoni
100 Cyerce nigricans
100
CíerceEspecificaciones. 2
Cyerce antillensis
100 Costasiella kuroshimae
87
Costasiella ocellifera
Costasiella nonatoi
89 Volvatella viridis
95 julia exquisita
oxinoacea 99 Tamanovalva Limax
100 Oxynoe antillarum
92 Oxynoe viridis
Lobiger viridis
Cylindrobulla beauii
Figura 6Filogenia y rasgos evolutivos de la Sacoglossa. El cladograma se basó originalmente en un análisis

baysiano de secuencias de ADNr 16S, CO1 y ADNr 28S con varios especímenes por especie (después de H€
andeler et al.2009).Valoresindican probabilidades posteriores. La presencia de actividad fotosintética en los
primeros días se indica con unCuadrado azul (valores de rendimiento por encima de 0,4), y aquellos sin
fotosíntesis desde el principio con uncuadrado vacío.Elestrellas verdesindicar formas de retención a largo
plazo. Las fuentes conocidas de alimentos de algas se indican detrás de los nombres de las especies.
producir
Plakobranchus ocellatus Elysia timida Elysia crispata Elysia pusila Ercolania kencolesi
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
días
0.0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 sesenta y cinco
Figura 7Comparación de la actividad fotosintética de varias especies de Sacoglossan. Los valores de rendimiento se
representan frente al tiempo de inanición (después de H€andeler et al.2009). Las tres formas de retención a largo
plazo se indican encolores verdesSolo se representa una especie enazullo que representa un gran grupo de especies
que no digieren los cloroplastos al principio y, por lo tanto, muestran un alto valor de rendimiento durante los
primeros días. Pero los cloroplastos se degradan después de unos días y los valores de rendimiento se reducen a
cero. Un gráfico ennegrosignifica el grupo que digiere los cloroplastos a la vez y los valores de rendimiento nunca son
superiores a alrededor de 0,2 o incluso inferiores
Según los datos morfológicos, dos de los taxones principales (Oxynoacea: clado negro;
Plakobranchacea: clado azul) se reconocen como monofila, pero los datos moleculares indican
que Limapontioidea parcialmente no resuelta (clados rojos) es un taxón parafilético. Se han
realizado mediciones de fotosíntesis en condiciones de inanición en 28 especies; los ejemplos
seleccionados se representan en la Fig.7. Se agrupan los datos de varios especímenes por
especie y se dan las desviaciones estándar. Las líneas de tendencia muestran diferentes
eficiencias entre especies (después de H€andeler et al.2009). La monofilética Oxynoacea y la
parafilética Limapontioidea nunca exhibieron valores de rendimiento superiores a 0,2–0,3, a
pesar de recolectarlos directamente de su alimento preferido y medirlos unas horas más tarde
(gráfico negro en la Fig.7, y cuadrados negros en la Fig.6). En estas especies, los cloroplastos
se digieren directamente después del secuestro. Sin embargo, las mediciones de PAM en
sacoglosos de bajo rendimiento son difíciles, con una tasa de errores mucho mayor. Por lo
tanto, los resultados para algunas especies deben considerarse preliminares.
Muchos especímenes mostraron un alto valor de rendimiento de 0,4 a 0,7 al principio, lo que
indica una actividad fotosintética de los cloroplastos secuestrados, pero la actividad disminuyó a cero
después de 10 a 20 días. El gráfico azul de la Fig.7deElysia pusilaejemplifica esta retención a corto
plazo. Otros ejemplos se indican con cuadrados azules en la Fig.6. Estos valores de rendimiento
indican que los cloroplastos permanecen en condiciones funcionales durante un par de días antes de
que ocurra la degradación y/o la digestión (H€andeler et al.2009).
Los pocos valores disponibles paraElysia subornatayE. zuleiceaestaba por debajo de 0,4 y
podría indicar ya un cierto período de tiempo de inanición. Durante nuestros estudios, solo
tres especies mostraron una retención a largo plazo de cloroplastos funcionales: (1)
Plakobranchus ocellatusdel Indopacífico, con una ligera disminución de los valores de
rendimiento durante 2 meses de medición, (2)Elysia timidadel mar Mediterráneo, con una
disminución constante de alrededor de 0,2 en 5 semanas, y (3)Elysia crispatadel Caribe, con
una disminución de 0,4 en casi 6 semanas (gráficos verdes en la Fig.7, y estrellas verdes en la
Fig.6). Los cloroplastos se mantienen en condiciones saludables dentro de estas tres especies
de babosas durante un período muy largo en comparación con otras especies de sacoglosos,
lo que demuestra una cleptoplastia funcional. Debe mencionarse aquí que los datos se
recopilan de varios especímenes, y no se sabe cuándo y qué tipo de alga se consumió antes de
los análisis (ver también H€andeler et al.2009). En consecuencia, las variaciones
intraespecíficas de los valores de rendimiento en especies con un espectro alimentario más
amplio (p.Elysia crispata;Higo.6) puede resultar del consumo de diferentes especies de algas,
que pueden variar en la medida en que sus cloroplastos se pueden mantener en las babosas.
La cleptoplastia funcional por más de 8 meses ha sido descrita paraElysia clorotica (Rumpho et
al.2000,2001). Por lo tanto, esta especie representa otra forma de retención a largo plazo
(indicada por un asterisco verde en la Fig.6). Ambos grupos (retención a largo y corto plazo)
representan el taxón monofilético Plakobranchacea. Sin embargo, las cuatro especies de
retención a largo plazo identificadas no forman un grupo monofilético.
Dentro de Oxynoacea sin cáscara, la morfología de la glándula digestiva es bastante

simple, formando una masa compacta. En contraste con esto, todos los demás sacoglosos
tienen glándulas digestivas ramificadas con pequeños túbulos y, en el caso de muchas
Plakobranchacea, esos túbulos conducen directamente a la superficie debajo de la epidermis.
Esto se puede observar, por ejemplo, enBoselia mimética,que exhibe una alta actividad
fotosintética al menos durante los primeros días (Fig.2y3g), sino también en aquellas especies
con una retención a largo plazo de cloroplastos (por ejemplo,Elysia crispata). Plakobranchus
ocellatusexhibe una característica morfológica no observada en ninguna otra especie hasta el
momento: la parte dorsal del cuerpo forma crestas que están llenas de diminutos túbulos
glandulares digestivos (Fig.3d) y en el que la parte predominante de los cloroplastos se
almacena en los túbulos agrandados de la glándula digestiva (Fig.3f). Estas estructuras suelen
estar ocultas por los parapodios plegados. Sin embargo, la presencia de una glándula
digestiva muy plegada dentro de las especies, que digieren los cloroplastos directamente (por
ejemplo, Ercolania kencolesi;Higo.3 horas; véase Grzymbowski et al.2007), indica que los
patrones de ramificación complejos dentro de Sacoglossa no están correlacionados con la
eficiencia en la fotosíntesis.
5 Discusión
Al comparar los dos sistemas estudiados, debemos tener en cuenta que difieren en
características esenciales. Mientrasfilodesmioincorpora un organismo autosuficiente
completo, a sabersimbiodiniospp, los sacoglosos solo incorporan un orgánulo,
que no es capaz de sobrevivir por sí mismo. Sin embargo, se pueden observar similitudes en
los dos sistemas.
Primero, la incorporación de unidades fotosintéticas no está presente en todos los
miembros de los clados analizados (filodesmioasí como Sacoglossa). Aquellas especies que se
ramifican antes no exhiben incorporación debido a la falta de PU en el organismo presa (p. ej.,
filodesmio poindimiei)o digestión de PU (principalmente miembros de los clados Oxynoacea y
limapontioidean). Sin embargo, es probable que las tasas de especiación más altas estén
asociadas con la capacidad fotosintética adquirida en ambos sistemas, ya que los taxones con
UP son al menos cinco veces más ricos en especies en comparación con su taxón hermano
putativo. En el caso defilodesmio,los géneros del grupo externoaustraeolisydóndice
comprenden de dos a tres especies cada uno. Estos números son similares a casi todos los
demás géneros de facelínidos, mientras quefilodesmioIncluye alrededor de 30 especies.
Dentro de Sacoglossa, el taxón hermano putativo comprende la familia Hermaeidae y parte de
Polybranchiidae (Fig.6) con alrededor de 25 especies, mientras que Plakobranchoidea incluye
más de 130 especies. Sin embargo, los datos actuales aún son limitados y los enfoques
estadísticos, como gráficos de linajes a través del tiempo (Nei1992), no se puede aplicar,
porque este método se basa en árboles completos que incluyen todas las especies, que no
están presentes para ninguno de los dos.filodesmioo Sacoglossa.
En segundo lugar, hay alguna evidencia que derivafilodesmioespecies (aquí filodesmio
longicirrum)muestran una fotosíntesis más eficiente que los linajes más basales y, por lo
tanto, más antiguos. En contraste con esto, los sacoglosos clasificados como formas de
retención a largo plazo no forman un monophylum y no representan taxones altamente
derivados en el cladograma (ver posición dePlakobranchus ocellatusen la Fig.6). Sin embargo,
la línea madre de Plakobranchoidea ha desarrollado un rasgo que da como resultado la
pérdida de la digestión directa de los cloroplastos secuestrados y, por lo tanto, es un paso
importante hacia la retención a largo plazo.
El patrón de ramificación de la glándula digestiva se correlaciona con la presencia de
zooxantelas y su eficiencia fotosintética al menos en zooxantelas.filodesmioespecies. Las
especies con menor eficiencia fotosintética tienen un sistema glandular digestivo menos
ramificado dentro de los apéndices dorsales que las altamente eficientes.
P. longicirrum.En este último, las zooxantelas se concentran en las partes externas de las ramas
glandulares digestivas, mientras que enP. briareumno se puede observar tal concentración
(compárese con la Fig.3a y c). Hasta ahora, nuestros resultados sobre los patrones de ramificación
que se correlacionan con la eficiencia de la fotosíntesis confirman las suposiciones descritas por
Rudman (1981). Dentro de Sacoglossa, este aspecto es más difícil de evaluar debido a la morfología
muy variable de las diferentes especies, dependiendo de la presencia de apéndices dorsales o
parapodios (compárese con la Fig.2b y f). Incluso las especies sin actividad fotosintética y digestión
directa de los cloroplastos pueden exhibir una glándula digestiva ramificada o plegada. Esos
animales aparecen de color verde (p. ej.,Ercolania kencolesi),y por lo tanto son crípticos en su hábitat
natural en las algas. Por otro lado, las crestas en el lado dorsal dePlakobranchus ocellatuscon una
acumulación de cloroplastos en las ramas glandulares digestivas ciertamente representan un rasgo
morfológico adaptativo, que permite una exposición óptima de los sitios de cloroplastos a la luz
solar. Además, la presencia de parapodios, que cubren estas crestas principalmente durante el día
brillante y que se abren con luz tenue, indican adaptaciones de comportamiento según las
irradiancias.
Un comportamiento similar también se observa enElysia tímida,una especie que muestra

retención a largo plazo de cloroplastos, pero no tiene adaptaciones morfológicas especiales
(Rahat y Monselise1979; Casalduero y Munain2008).
Hasta la fecha, no tenemos información sobre el número de diferentes clados desimbiodinioque
se incorporan en las diferentes especies defilodesmio.Por supuesto, la composición de las babosas
depende de la composición de las zooxantelas en la fuente de alimento. Si bien se mostró una
variabilidad latitudinal en la especificidad del simbionte para los corales escleractinios (p. ej.,
Rodríguez-Lanetty et al.2001), otros estudios muestran una variabilidad batimétrica en la diversidad
de simbiontes (Iglesias-Prieto et al.2004; Frade et al.2008). Pero esto aún debe investigarse para la
mayoría de las babosas zooxanteladas. Loh et al. (2006) han mostrado paraPteraeolidia ianthina,otro
miembro del taxón de babosas Facelinidae, que la composición desimbiodinioclados depende de la
localidad, y los clados alojados reflejan las condiciones ambientales. La heterogeneidad de las
zooxantelas dentro de esta especie podría estar correlacionada con las diferentes fuentes de
alimentos y, por lo tanto, no refleja la selección activa de ciertos clados. Desafortunadamente, la
información sobre los organismos alimentarios es muy limitada para esta especie. Todofilodesmiolas
especies muestran una estrecha afinidad con una determinada especie de coral y no cambian ni
siquiera a especies estrechamente relacionadas. Los datos no publicados de K. Stemmer indican una
composición de clados de zooxanthellae similar enPhyllodesmium lizardensisen comparación con su
especie huésped no identificadaHeteroxeniasp.
El origen de los cloroplastos y la heterogeneidad de la composición de los cloroplastos a
nivel intraespecífico y/o intraindividual de los sacoglosos, así como los factores que afectan el
tiempo de retención de los cloroplastos y la eficiencia de la fotosíntesis, apenas se
comprenden (ver, por ejemplo, Curtis et al.2005; Casalduero y Munain 2008; Vieira et al.2009).
Los miembros de Sacoglossa generalmente se consideran especialistas en alimentos que se
alimentan de una determinada especie de algas. Sin embargo, las especies que exhiben una
fotosíntesis más eficiente se alimentan de una variedad de especies de algas, y el papel del
secuestro de cloroplastos de heterokontofitos (p. ej., enElysia chlorotica, E. crispata)parece ser
de especial interés (Rumpho et al.2000; Curtis et al.2005; Pierce et al.2006; H€andeler y w€
agele2007) (ver Fig.6). Desafortunadamente, la comida dePlakobranchus ocellatus,que
representa una de las especies más eficientes en la realización de la fotosíntesis, es
actualmente desconocido. Experimentos preliminares de alimentación conElysia crispataal
ofrecer ciertas especies de algas y medir la actividad fotosintética mostró que algunas de las
algas consumidas no contribuyen a la fotosíntesis: la actividad fotosintética disminuyó
después del consumo de halimeda opuntia,mientras que los cloroplastos deCaulerpa
verticillatano fueron digeridos y los valores de rendimiento se mantuvieron altos
(Grzymbowski y W€agele, datos no publicados). Sin embargo, esta observación debe ser
investigada en detalle. Trinchera et al. (1973a,b) sospechaba que la "robustez" de las
membranas externas de los cloroplastos en las algas sifonáceas era un requisito previo para la
retención en las babosas de mar. Un estudio reciente (H€andeler et al.2010) identificaron al
menos tres tipos diferentes de cloroplastos en el sistema digestivo de una especie no descrita
elysiaespecies analizando el gen del cloroplastotufA.Usando tales técnicas moleculares, se
puede identificar la identidad de especie de los cloroplastos que son responsables de la
fotosíntesis y retenidos durante muchas semanas. Estos análisis son fundamentales para
comprender la evolución de la energía solar en los sacoglosos.
6 ¿Podemos considerar la incorporación de unidades fotosintéticas

(UP) como una radiación adaptativa?
Esta pregunta es todavía difícil de responder debido a muchas preguntas que surgieron durante los
estudios. Parece probable que, cuando la capacidad ha evolucionado para incorporar y no digerir
más unidades fotosintéticas, no se puede observar ninguna reversión a la condición plesiomórfica
dentro de los taxones investigados. Resultados ambiguos, como los deelysia zuleiceayE. subornata,
hay que volver a investigar. De acuerdo con los resultados presentados aquí, la evolución de la
energía solar ha ocurrido una vez (Análisis de NeighborNet) o dos veces (reconstrucción de árboles)
enfilodesmio,dependiendo de la posición ambigua del no xantelatoP. pointdimiei.El análisis del
estado de carácter ancestral demostró claramente la evolución de la no digestión de los cloroplastos,
el requisito previo para la retención a largo plazo, como un evento único dentro de Sacoglossa (H€
andeler et al.2009).
El alto número de especies en esos clados con incorporación de UP en comparación con
otros taxones estrechamente relacionados, incluidos los taxones hermanos putativos, sugiere
una tasa de especiación más alta. En consecuencia, se cumple un requisito previo para definir
un carácter clave (Schluter2000). Pero no tenemos idea acerca de las tasas de extinción en los
diferentes clados, y estos, por supuesto, tienen un impacto en la tasa neta de especiación
(Skelton1993). en el generofilodesmio,vemos adaptaciones morfológicas evolucionando
dentro del clado que permiten un mejor almacenamiento y exposición de las zooxantelas
incorporadas. De acuerdo con los resultados actuales, han evolucionado dos clados distintos
con miembros que exhiben varios fenotipos: un clado con varias especies en diferentes
familias de corales blandos, y un segundo clado con especies que viven y se alimentan
exclusivamente de la familia Xeniidae. La “mini-radiación” en Xeniidae podría haber sido
provocada por otros factores, por ejemplo, metabolitos secundarios, que también son
incorporados por las babosas (Affeld et al.2009).
En el caso de Sacoglossa, la ramificación de la glándula digestiva es una adaptación previa
que evolucionó antes de la incorporación (es decir, la no digestión) de los cloroplastos.
Muchas especies de Oxynoacea son verdes sin incorporación de cloroplastos. Aquí, el
pigmento no está asociado con la glándula digestiva sino que se distribuye por todo el cuerpo,
incluso en la cáscara. Por lo tanto, la biosíntesis de novo por parte de la babosa parece
probable, un proceso que ciertamente incurre en costos de energía. Volverse verde y críptico
al retener la clorofila ingerida durante algún tiempo podría ser una estrategia menos costosa.
Sin embargo, la retención a largo plazo de los cloroplastos solo se observa en cuatro especies.
Por lo tanto, la incorporación de PU más la ventaja de aprovechar los productos fotosintéticos
no es una característica común de la Sacoglossa y está restringida a estas pocas especies.
Trinchera et al. (1973a,b) investigó la fijación de carbono fotosintético por los cloroplastos en
Codioy comparó estos resultados con la fijación de carbono enElysia viridis,una especie que es
sólo una forma de retención a corto plazo. Más del 30% del carbono fijo se incorpora a la
galactosa producida por la babosa y este porcentaje es comparable a la liberación de carbono
fijo enCodio.Por el contrario, los cloroplastos aislados liberan al medio solo alrededor del 2%
del carbono fijado. De ahí que no digerir los cloroplastos de golpe, sino utilizarlos hasta que se
degraden, constituye una ventaja para estas babosas. Desafortunadamente, no se han
realizado estudios similares para otras especies.
Según los resultados filogenéticos, los Plakobranchoidea son monofiléticos. Las

mediciones de PAM han demostrado que el ancestro de este clado ha perdido la capacidad de
digerir los cloroplastos y/o ha cambiado a organismos que se alimentan de algas, lo que
permite la retención de los cloroplastos hasta su degradación. Incluso si no vemos una
adaptación en la morfología u otros rasgos de vida para este grupo en general, podemos decir
que la tasa de especiación aumentó y finalmente condujo a la evolución de la retención a largo
plazo en al menos cuatro especies no estrechamente relacionadas. Curiosamente, una
transferencia horizontal de genes desde el genoma de algas de un heterocontofito al genoma
deElysia cloroticase describe (Pierce et al.2007; Rumpho et al. 2008).E. cloroticase sabe que
sobrevive 8 meses sin alimentarse y el metabolismo se mantiene gracias a los productos
fotosintéticos de los cloroplastos incorporados. Los cloroplastos tienen solo un pequeño
porcentaje de los genes necesarios para realizar la fotosíntesis; una transferencia horizontal
de genes parece ser una explicación probable de la posibilidad de realizar la fotosíntesis.
Ahora tenemos que preguntar, ¿ocurrió tal transferencia de genes en la evolución temprana
de Sacoglossa, seguida de la activación independiente de genes transferidos en los linajes
capaces de retención de cloroplastos a largo plazo?
7. Conclusión
Nuestra conclusión final es que no fue la evolución de un solo carácter, sino la combinación y
evolución conjunta de varios rasgos lo que mejoró la especiación. “. . .de hecho, parece
razonable que exista una diversidad de mecanismos en la naturaleza, dada la enorme
variación entre organismos. . .” (Skelton1993: pág. 54). en el generofilodesmio,una "innovación
clave" adicional podría haber sido el cambio a otros organismos alimentarios que ofrecían una
composición alternativa de productos naturales y hacían que las babosas estuvieran mejor
defendidas. Esto explicaría la radiación adicional sobre el taxón de coral blando Xeniidae.
Dentro de Sacoglossa, un cambio de comida ancestralcaulerpaa otros alimentos de algas
podría haber facilitado la penetración de la pared celular de las algas (Jensen1997), o permitió
un mejor aprovechamiento de los productos naturales en las algas (Cimino et al.1999), o
permitió una apariencia más críptica, porque los cloroplastos no fueron destruidos durante el
secuestro. Por lo tanto, la incorporación de cloroplastos activos fotosintéticos puede haber
sido solo un subproducto. La transferencia de genes postulada para la retención funcional de
los cloroplastos también se puede hipotetizar como un carácter clave que finalmente podría
haber llevado a la retención a largo plazo en algunos taxones. Todos estos cambios de estilo
de vida discutidos, inducidos por un uso alternativo de las opciones ambientales, pueden
interpretarse como adaptaciones y, por lo tanto, conducir a una radiación adaptativa en el
sentido de Schluter (2000).
8 Resumen
La incorporación de unidades fotosintéticas fue aparentemente un carácter con un impacto

importante en la evolución del género.filodesmioy el taxón Sacoglossa. En ambos sistemas, se
ha demostrado que las tasas de especiación son más altas en aquellos clados
mostrando este rasgo. Sin embargo, la incorporación de unidades fotosintéticas

probablemente fue paralela a un cambio de alimentación y/o cambio de estrategias
defensivas. En consecuencia, la separación de estos diferentes rasgos y nombrarlos como el
único carácter clave que mejoró la especiación reduciría nuestra observación de los procesos
evolutivos a simples eventos. Contrariamente a las radiaciones inducidas por eventos
geográficos, la especiación en hábitats complejos ya habitados por parientes probablemente
necesite más señales que ciertamente están íntimamente ligadas y por lo tanto no deben ser
consideradas como procesos separados.
Expresiones de gratitudNos gustaría expresar nuestro más sincero agradecimiento al organizador

del "Schwerpunktprogramm" SPP 1127, Bill Martin (D€usseldorf) y Konrad Bachmann (Jena). Sin su
iniciativa, este proyecto probablemente no se habría llevado a cabo. Gracias también a Roswitha
Schönwitz de la Fundación Alemana de Ciencias (Bonn) ya los revisores de este programa. Deseamos
agradecer a Kristina Stemmer (Bochum) por proporcionar información sobre Xeniidae y Nils Anthes
(T€ubingen) por proporcionar la diapositiva deP. longicirrum.Gracias a Patrick Krug (Los Ángeles) por
compartir secuencias de sacogloso y especialmente por las discusiones y su ayuda para mejorar el
manuscrito. Este proyecto fue financiado por la Fundación Alemana de Ciencias (Wa 618/8-1 a 3).
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¿Están los hidrocarburos cuticulares involucrados
en la especiación de termitas productoras de
hongos (Isoptera: Macrotermitinae)?
Andreas Marten, Manfred Kaib y Roland Brandl
AbstractoAunque las termitas son especies clave de los ecosistemas tropicales, se sabe poco sobre
los factores y procesos involucrados durante la diversificación. Un requisito previo de todos los
procesos de especiación es el aislamiento de los linajes. Investigamos el papel potencial de los
hidrocarburos cuticulares para el aislamiento conductual en termitas. La composición de
hidrocarburos en la cutícula de los inquilines coincide con la composición de la termita huésped, lo
que sugiere que los hidrocarburos brindan pistas para el reconocimiento de compañeros de nido y,
por lo tanto, también tienen el potencial de estar involucrados en el reconocimiento de especies.
Estudiamos la variación de los hidrocarburos cuticulares dentro y entre especies del género
Macrotérminosy las respuestas conductuales a estas variaciones. Nuestros resultados indican que los
hidrocarburos cuticulares son al menos un factor involucrado en el reconocimiento de compañeros
de nido y podrían actuar como una estrategia de defensa contra las inquilinas. Sin embargo, no
juegan un papel importante durante los eventos de especiación de las termitas superiores; la
situación en las termitas inferiores probablemente sea diferente.
1. Introducción
Las termitas son especies clave en muchos ecosistemas tropicales. Contribuyen a los procesos
de los ecosistemas, como la descomposición de la hojarasca y, por lo tanto, son una parte
importante de los ciclos del carbono y el nitrógeno (p. ej., madera y arena).1978; Holt y Lepage
2000; Sugimoto et al.2000; Donovan et al.2001). Además de sus ecológicos
A. Marten y R. Brandl (*)

Ecología Animal, Departamento de Ecología, Facultad de Biología, Universidad de Marburg, Karlvon-
Frisch Str. 8, 35032 Marburgo, Alemania
correo electrónico: brandlr@staff.uni-marburg.de
M. Kaib
Departamento de Fisiología Animal, Facultad de Biología, Universidad de Bayreuth, Universit€atsstr.
30, 95440 Bayreuth, Alemania
correo electrónico: manfred.kaib@uni-bayreuth.de

284 A. Marten et al.
importancia, las termitas atraen el interés de los investigadores por otras dos razones. Primero, el
estilo de vida eusocial de las termitas, con una amplia división del trabajo entre castas, hace de las
termitas un objetivo prometedor para estudiar la evolución de la eusocialidad en comparación con
las hormigas y las abejas. A diferencia de los himenópteros sociales, las termitas son diplo-diploides y
en cada colonia hay hembras (reinas) y machos (reyes) reproductores. Por lo tanto, una comparación
de los sistemas sociales de Hymenoptera e Isoptera podría revelar información sobre los procesos
generales detrás de la evolución de la eusocialidad (Husseneder et al.1998). En segundo lugar,
algunas termitas son plagas que atacan los cultivos, las existencias de alimentos y las casas,
causando grandes pérdidas económicas (p. ej., Su y Scheffrahn 2000).
Las termitas (Isoptera) comprenden más de 280 géneros con más de 2600 especies
conocidas. Sin embargo, cada año se describen más de 20 nuevas especies (Eggleton 1999).
Las termitas son morfológicamente bastante uniformes y, por lo tanto, solo unos pocos
caracteres taxonómicos tradicionales están disponibles para estudios taxonómicos y
filogenéticos, y las especies crípticas parecen ser comunes en las termitas (por ejemplo, Page
et al.2002; Copren et al. 2005; Brandel et al.2007; Marten et al.2009). Solo las castas de
soldados muestran una diversidad de estructuras morfológicas, en su mayoría adaptaciones
para la defensa (Kaib 1985). Además de esta diversidad morfológica, los soldados utilizan un
conjunto considerable y diverso de sustancias químicas para la defensa que caracterizan a
ciertos linajes importantes (Prestwich1983).
Las termitas son ciegas y silenciosas. Por lo tanto, las únicas formas de comunicarse son
las señales táctiles y químicas. La baja diversidad de feromonas en comparación con las
hormigas (Pasteels y Bordereau1998; Kaib2000) inició la búsqueda de sustancias alternativas
que pudieran estar implicadas en la comunicación entre individuos o especies durante los
vuelos nupciales. Muchos insectos muestran una variación considerable en la composición
química de la epicutícula, en particular los hidrocarburos, dentro y entre especies (Lockey1991
; Howard1993). Estos hidrocarburos cuticulares se han convertido en foco de investigación
entomológica durante las últimas dos décadas, principalmente por dos razones. En primer
lugar, se supone que las composiciones de hidrocarburos son específicas de la especie y, por
lo tanto, pueden usarse como caracteres en la quimiotaxonomía (p. ej., Carlson y Service1980;
Bagneres et al.1991; Estrada-Peña et al.1994; Espelie et al.1996; marrón et al.1997; Steiner et
al.2002; Raboudi et al.2005; Ye et al.2007; véase también la revisión exhaustiva de Lockey1988
). En segundo lugar, los hidrocarburos cuticulares pueden estar involucrados en el
reconocimiento de compañeros de nido en insectos sociales y, por lo tanto, en cuestiones
importantes para el mantenimiento del sistema social (p. ej., Howard et al.1980; Smith y raza
1995; Takahashi y Gassa1995; Clément y Bagnères1998; Cantante1998; Lahav et al.1999;
Ruther et al.2002; Howard y Blomquist2005).
La especiación requiere siempre mecanismos de aislamiento reproductivo. Estos podrían ser
mecanismos precigóticos de aislamiento geográfico, ecológico, temporal o conductual, o
mecanismos cigóticos, por ejemplo, esterilidad híbrida (Bouillon1981). En las termitas, los
mecanismos de aislamiento entre especies simpátricas ocurren durante los vuelos nupciales de los
alados y los apareamientos subsiguientes y pueden involucrar diferentes tiempos de enjambre (por
ejemplo, Wood1981; Haverty et al.2003), diferencias en atrayentes sexuales (p. ej., Peppuy et al.2004),
diferencias en el comportamiento de emparejamiento (Wood1981), o agresión entre linajes como
respuestas a diferencias en sus señales de reconocimiento. En muchos
¿Están los hidrocarburos cuticulares involucrados en la especiación de las termitas productoras de hongos? 285
taxones de insectos, el aislamiento reproductivo se basa en la variación de las feromonas (p. ej.,
revisado en Howard y Blomquistmil novecientos ochenta y dos; Howard1993). Sin embargo, solo hay
un número muy bajo de feromonas sexuales conocidas en las termitas que se utilizan, además, para
otros fines (p. ej., seguimiento de senderos) y que no son específicas de la especie (Billen y Morgan
1998; pasteles y bordereau1998; pero véase Peppuy et al.2004). Como las termitas pueden usar
hidrocarburos para definir la "gestalt" de una colonia y especie, las diferencias en la composición de
hidrocarburos dentro y entre poblaciones pueden proporcionar pistas adicionales para el
aislamiento de linajes al desencadenar un comportamiento agonista durante los emparejamientos
entre diferentes especies.
Investigamos el potencial de los hidrocarburos para el aislamiento de linajes en varias
especies del género termita superior.Macrotérminos (Termitidae) en África Oriental y
Occidental (Fig.1) utilizando métodos que van desde análisis químicos y conductuales hasta
análisis filogenéticos. el géneroMacrotérminospertenece a la subfamilia Macrotermitinae, que
cultiva hongos del géneroTermitomyces (liofiláceas). colonias de Macrotérminosson
sociedades cerradas sin ningún tipo de intercambio de individuos entre colonias. Los
reproductores se encuentran en un compartimento especial dentro del montículo, la llamada
“cámara real”, donde quedan atrapados. A veces, varios reproductores no relacionados
coexisten dentro de una cámara (Hacker et al.2005).
Figura 1Montículos típicos de los investigadosMacrotérminosespecies. (a)M. bellicosus,Kapenguria,

Kenia, (b)M. michaelseni,Kajiado, Kenia, (C)M. subhyalinus,Magadi, Kenia, (d)M. subhyalinus,Costa de
Marfil, (mi)M falciger,Lunga-Lunga, Kenia, (F)M.herus,Kakamega, Kenia, (gramo)
M. jeanneli,Valle de Kerio, Kenia
Para mantener la colonia como una unidad funcional, los insectos sociales necesitan un sistema consistente para distinguir a los
compañeros de nido de los que no son compañeros de nido u otros invasores. Por lo tanto, primero proporcionamos evidencia
de que los hidrocarburos pueden estar involucrados en el reconocimiento de compañeros de nido.
2 Reconocimiento de Hidrocarburos Cuticulares y Nestmate
El reconocimiento de compañeros de nido es importante para la integridad de una colonia y

para el comportamiento territorial (Hamilton1964; Clément y Bagnères1998). Durante los
encuentros entre dos individuos, cada uno de estos individuos busca etiquetas en la pareja y
compara estas etiquetas con una plantilla innata o aprendida (Shorey1973). Si las etiquetas y
la plantilla encajan, los dos individuos se reconocerán como miembros de la misma colonia o
unidad (Fig.2). Las etiquetas y las plantillas pueden verse influenciadas por factores genéticos
y ambientales. Como se explicó anteriormente, los hidrocarburos cuticulares son los
principales candidatos para las principales etiquetas de especies y reconocimiento de
compañeros de nido en termitas, pero solo si la composición de hidrocarburos varía
constantemente entre colonias y especies.
Los inquilines, en su mayoría otras especies de insectos que viven en una colonia, son invasores
que necesitan romper el sistema de defensa de la colonia huésped. Si los hidrocarburos cuticulares
son específicos de la colonia y están involucrados en el reconocimiento de compañeros de nido,
esperábamos que los anfitriones de termitas y sus inquilinas tuvieran perfiles casi idénticos (ver
Howard et al.1980,mil novecientos ochenta y dos). Por lo tanto, analizamosTermitobia herus,un
escarabajo estafilínido con un abdomen fisiogástrico como el de una reina termita (Fig.3c), que vive
en los termiteros deMacrotermes herusde África Oriental (varias especies crípticas pueden caer bajo
ese nombre; véase Brandl et al.2007; Marten et al.2009). Los escarabajos se encuentran a menudo
cerca de la cámara real y son alimentados por trabajadores de termitas (ver Kistner
Figura 2Reconocimiento de compañeros de nido en termitas. Cada individuo tiene una etiqueta o un conjunto de etiquetas como
señal de reconocimiento. Estas etiquetas se comparan con plantillas para probar el estado de otro individuo como compañero
de nido o extraño. Las etiquetas y las plantillas pueden estar influenciadas por factores genéticos y ambientales.
Fig. 3Comparación de la composición de hidrocarburos cuticulares del escarabajo termitófiloTermitobia

herusy su huésped de termitasMacrotermes herus. (a)Perfiles de hidrocarburos obtenidos por cromatografía
de gases de termitas y escarabajos de la misma colonia. (b)Gráfico de ordenación (análisis de
correspondencia; ter Braak y Smilauer2002) de perfiles de hidrocarburos cuticulares de 62 obreras
principales de cuatro colonias de termitas y seis escarabajos de dos de estas colonias. Se observaron tres
fenotipos de hidrocarburos entre las cuatro colonias de termitas, es decir, dos colonias tenían el fenotipo
Tipo I. (C)termitero deM. herus (arriba)y el escarabajo estafilínidoT. herus (abajo)con abdomen fisogastrico
2001). Hasta donde sabemos, no proporcionan ningún beneficio a las termitas. De hecho, se
encontraron los mismos patrones de hidrocarburos cuticulares para hospedantes e inquilinas
(Fig.3; Kaib et al.2004b). Se obtuvieron resultados similares para la termita de madera
húmeda.Schedorhinotermes lamanianus (Rhinotermitidae) y su polilla termitófila tineid
Paraclistis entero (datos no mostrados; véase Brandl et al.1996para obtener más información
sobre este sistema termita-inquilina). No está claro si las inquilinas imitan activamente los
perfiles de hidrocarburos al sintetizar sus propios hidrocarburos (ver Howard et al. 1980) o si
reciben los hidrocarburos pasivamente de las termitas (ver Vander Meer y Wojcikmil
novecientos ochenta y dos).
Los hidrocarburos también varían algo entre las castas. EnM.herus,encontramos diferencias
sutiles en los perfiles de hidrocarburos cuticulares entre castas. Mientras que los perfiles de las
castas obreras, los soldados menores y las ninfas se superponen, los soldados mayores y los
reproductores muestran patrones distintos separados (Fig.4). Sorprendentemente, la composición de
los hidrocarburos cuticulares de los escarabajos termitófilos coincide
Figura 4Gráfico de ordenación de perfiles de hidrocarburos cuticulares de diferentes castas de una colonia
de Macrotermes herusy dosTermitobia herusescarabajos (inquilines) de la misma colonia. La ordenación se
basa en el análisis de correspondencia (ter Braak y Smilauer2002)
el perfil de los reproductores. Los trabajadores pueden confundir a los escarabajos con las reinas
cuando les suministran comida, proporcionándoles la misma comida que a los reproductores. El
abdomen fisiogástrico de los escarabajos, por lo tanto, puede ser una consecuencia de esta
confusión (Kistner2001). En general, estos hallazgos brindan evidencia de que los hidrocarburos
cuticulares proporcionan las etiquetas para los procesos de reconocimiento en una variedad de
niveles jerárquicos: entre colonias ("gestalt" de una colonia) y dentro de colonias entre castas.
La especiación en organismos sexuales siempre implica algunos mecanismos de reconocimiento
entre miembros de la misma especie, o algunos mecanismos de aislamiento de miembros de otras
especies, que involucran la reproducción (Bouillon1981; Turelli et al. 2001). Por lo tanto, en las
termitas, los hidrocarburos también pueden desempeñar un papel en el aislamiento de los
reproductores. Sin embargo, es muy difícil estudiar los vuelos nupciales y, en particular, las
interacciones que se producen entre los sexuales voladores, denominadas alates. Además, los
emparejamientos entre alados sobre el suelo se desencadenan por la presión de los depredadores y,
por lo tanto, los alados se entierran lo más rápido posible en el suelo. Pero en la primera etapa de
formación de colonias debajo de la superficie, ocurren muchas interacciones importantes (ver, por
ejemplo, Brandl et al.2001,2004) que son difíciles de observar. Este estilo de vida críptico dificulta los
estudios observacionales y experimentales sobre el aislamiento reproductivo, y los estudios
evolutivos y ecológicos en termitas van a la zaga del progreso en otros grupos. Sin embargo,
nuestras investigaciones intentaron inferir el papel potencial de los hidrocarburos en el
reconocimiento de especies durante los vuelos nupciales mediante la evaluación de una serie de
corolarios de la hipótesis de que los hidrocarburos cuticulares pueden estar involucrados en el
aislamiento reproductivo:
(1) Debe haber suficiente variabilidad en la composición de los hidrocarburos

cuticulares entre colonias, poblaciones y especies para definir la "gestalt" de
una colonia, población o especie.
(2) Los hidrocarburos cuticulares deben ser hereditarios y el medio ambiente debe tener solo
una influencia limitada en la composición.
(3) Las termitas deberían responder a las diferencias en la composición de los hidrocarburos cuticulares
mediante un comportamiento agonista.
(4) Las diferencias en la composición de los hidrocarburos cuticulares entre colonias deben
estar correlacionadas con la diferenciación genética.
3 Variación de hidrocarburos cuticulares dentro y entre

especies de termitas
Los hidrocarburos que se encuentran en la cutícula de la mayoría de los insectos examinados

consisten típicamente en compuestos alifáticos saturados, insaturados y ramificados impares con
una longitud de cadena entre C21y C37(ver Lockey1988); la longitud de la cadena en algunas especies
del desierto podría exceder bastante más de C41(por ejemplo, Akino2006). Estos hidrocarburos se
sintetizan con ácidos grasos como precursores en células epidérmicas modificadas (oenocitos;
revisado por Howard y Blomquistmil novecientos ochenta y dos; Lockey1988; Blomquist et al.1998).
Se propone que una función principal de los hidrocarburos y otras sustancias lipofílicas en la cutícula
es la reducción de la pérdida de agua (revisado por Lockey1988). Otras funciones incluían la
protección contra la radiación ultravioleta, las toxinas y las bacterias u hongos patógenos. Hemos
analizado qué hidrocarburos cuticulares varían entre especies, dentro de especies pero entre
diferentes colonias, y entre castas dentro de una colonia. Extrajimos hidrocarburos de la cutícula de
obreras mayores connorte-hexano y evaluó los perfiles de hidrocarburos mediante cromatografía de
gases. Los picos de diferentes cromatogramas se clasificaron comparándolos con los picos de un
norte-series de alcanos desde eicosano hasta hexatriacotano. Los hidrocarburos individuales se
identificaron mediante cromatografía de gases acoplada/espectrometría de masas (para conocer los
métodos detallados, consulte Kaib et al.2002). Para estos análisis, utilizamos las intensidades
relativas de 135 picos cromatográficos de gases. En algunos casos raros, los picos asignados a un
tiempo de retención pueden haber incluido más de un compuesto.
Los hidrocarburos cuticulares de 62 colonias de 7Macrotérminostaxones (M. bellicosus,

M. falciger, M. herus, M. jeanneli, M. michaelseni, M. subhyalinusÁfrica occidental,
M. subhyalinusÁfrica Oriental) contenía una mezcla de saturados (norte-alcanos),
hidrocarburos insaturados (alquenos, alcadienos y alcatrienos) y ramificados (metil- o
dimetilalcanos) (Fig.5b). Los compuestos con una longitud de cadena impar dominaron
claramente los perfiles. Dentro de una colonia, las composiciones de hidrocarburos cuticulares
entre individuos fueron similares (ver también Bagine et al.1994). Además, los perfiles de
hidrocarburos de una colonia parecen ser estables entre años con diferentes condiciones
climáticas (Kaib et al.2002). En contraste, la composición de los hidrocarburos cuticulares de
diferentes colonias de una especie específica varió considerablemente; principalmente, fueron
los hidrocarburos insaturados de cadena corta los que diferían (Fig.5a, c). Las diferentes
especies, por otro lado, diferían principalmente en cadenas largas.
Figura 5Variabilidad de los hidrocarburos cuticulares entre colonias y especies de 7Macrotérminos especies
(62 colonias, 357 individuos, 135 picos de hidrocarburos GC). (a)Resultados de un análisis de varianza
anidado por máxima verosimilitud restringida, con individuos anidados dentro de colonias y colonias
anidadas dentro de especies. Usando esta jerarquía, estimamos los componentes de la varianza relativa de
cada compuesto entre individuos (no se muestra), entre colonias (trama superior)y entre especies (trama
inferior).Ellíneas de regresión trazadasson solo para fines ilustrativos. (b) Cantidades relativas de las
diferentes clases de hidrocarburos. (C)Variabilidad de las diferentes clases de hidrocarburos entre colonias
hidrocarburos (Fig.5a). Dichos hidrocarburos de cadena larga pueden ser un factor importante
para prevenir la desecación, y la variación de estos hidrocarburos entre especies podría
reflejar diferencias en sus preferencias microclimáticas (ver más abajo, y Pomeroy1978). Por
ejemplo, en comparación con otrosMacrotérminosespecies, la cutícula deM. jeanneliy este
africanoM. subhyalinuscontiene una mayor cantidad de hidrocarburos con largas cadenas
principales (>C29). De hecho, ambas especies construyen
Figura 6Gráfico de ordenación de todos los perfiles de hidrocarburos cuticulares de 7Macrotérminosespecies (62
colonias, 357 individuos, 135 picos de hidrocarburos GC) basados en análisis de correspondencia (ter Braak y
Smilauer2002). Las diferentes especies están indicadas por diferentescoloresysimbolosTodos los individuos de la
misma especie están rodeados por unsobre
montículos con un sistema de ventilación abierto (Fig.1c, gramo) y ocurren predominantemente en áreas
áridas que requieren protección contra la pérdida de agua (ver también a continuación).
La variación en los perfiles de hidrocarburos cuticulares dentro de las especies suele
ser mucho mayor que la variación entre especies (Figs.5ay6). Para varias especies,
encontramos diferencias claras en colonias simpátricas que diferían claramente en sus
perfiles de hidrocarburos cuticulares, y estas diferencias fueron mucho mayores que las
diferencias entre especies. A continuación, llamaremos a estos distintos tipos de
composición de hidrocarburos "fenotipos". Un ejemplo bien analizado esM falciger (Kaib
et al. 2002). Entre colonias dentro de un área de unas pocas hectáreas en la Reserva
Nacional de Shimba Hills (Distrito de Kwale, Provincia de la Costa, Kenia), encontramos
tres fenotipos que diferían en su composición cualitativa y cuantitativa (en particular,
hidrocarburos no saturados). Dentro de los fenotipos, no siempre fue posible distinguir
las colonias sin ambigüedades por sus perfiles de hidrocarburos. En otro estudio sobre
M. subhyalinusen el Parque Nacional de Comoë (Costa de Marfil), encontramos cuatro
fenotipos entre diez colonias, nuevamente en una pequeña escala espacial (Fig.7c; Kaib
et al.2004a). Los fenotipos se caracterizaron por alquenos de diferente longitud de
cadena y con diferentes posiciones del doble enlace y por las cantidades relativas de
alcanos y alquenos (Fig.7a, b). Nuevamente, los fenotipos mostraron diferencias
considerables en su composición cualitativa y cuantitativa. Estos fenotipos también se
encontraron en otrosMacrotérminosespecies (Fig.6).
En resumen, encontramos una variación considerable de hidrocarburos dentro y
entre especies. En varias especies, encontramos fenotipos distintos y discretos, que
diferían en su composición cualitativa y cuantitativa de compuestos. Los fenotipos
ocurren simpátricamente y, por lo tanto, estos fenotipos pueden representar especies
crípticas.
Figura 7Composición de hidrocarburos cuticulares de cuatro fenotipos deMacrotermes subhyalinus

recolectados en África Occidental (ver Kaib et al.2004a). (a)Cantidades relativas de alcanos, alquenos,
alcadienos y alcanos ramificados con metilo. (b)Cantidades relativas de diferentes clases de alquenos.
(C)Ejemplos de perfiles de hidrocarburos de los diferentes fenotipos obtenidos por cromatografía de gases
4 Heredabilidad de los Hidrocarburos Cuticulares y Variación

Ambiental
Se ha demostrado un control genético de la composición de hidrocarburos para el género

mosca drosófila (por ejemplo, Coyne1996; Ferveur y Jallon1996; Dallerac et al.2000; Takahashi
et al.2001). Para las termitas, hay algunos estudios que sugieren una base genética de señales
de reconocimiento basadas en una comparación del comportamiento agonista entre colonias
y la relación genética (Microcerotermas:adams1991;Schedorrinotermas:por ejemplo,
Husseneder et al.1998). Sin embargo, la composición química de las propias señales de
reconocimiento no se analizó en estos estudios. En un estudio posterior de Dronnet et al. (
2006) en la termita inferiorReticulitermes santonensis,Se observó una fuerte correlación
positiva entre las distancias químicas de los perfiles de hidrocarburos y las distancias
genéticas obtenidas a partir de datos de microsatélites. Durante nuestros propios estudios de
M. subhyalinusrecolectados en África Occidental (Kaib et al.2004a), encontramos que las diferencias de
hidrocarburos cuticulares entre colonias están relacionadas con las diferencias morfométricas, así como con
la disimilitud genética, estimada a partir de las huellas dactilares del polimorfismo de longitud de fragmento
amplificado (AFLP) (Fig.8). Estos son claros indicios de un componente genético para la variación de los
hidrocarburos cuticulares dentro de las especies.
La epicutícula con sus hidrocarburos cuticulares se encuentra en la interfaz entre el
organismo y el medio ambiente. Los hidrocarburos protegen contra el medio ambiente
Figura 8Relación positiva (r =

0.54,PAG =0,039; Prueba de
mantel) entre genética
disimilitud (basada en datos AFLP,
estimada por el índice de Jaccard) y
diferencias en la composición de los
hidrocarburos cuticulares (estimada
por distancias Nei, descritas por
Kaib et al.1991) basado en
comparaciones por pares
entre colonias de Africa

OccidentalMacrotérminos
subhialino (para más detalles,
véase Kaib et al.2004a)
influencias. En consecuencia, el medio ambiente debería afectar en cierta medida la composición de

los hidrocarburos. Esto podría ocurrir de dos maneras posibles. En primer lugar, se pueden sintetizar
diferentes hidrocarburos o se pueden ajustar las cantidades relativas de hidrocarburos específicos de
acuerdo con las condiciones ambientales. En segundo lugar, en los insectos sociales, en los que con
frecuencia se produce trofalaxis y acicalamiento entre los miembros de una colonia, las sustancias
adquiridas del entorno pueden afectar a la composición de hidrocarburos. Un ejemplo de este último
escenario se encuentra con la hormiga argentinaLinepithema humile,en el que la composición de
hidrocarburos cuticulares está dominada por compuestos adquiridos de la presa (Liang y Silverman
2000). En la termita inferiorZootermopsis nevadensis,Los microorganismos intestinales suministran
precursores (p. ej., propionato) para la biosíntesis de hidrocarburos ramificados con metilo (Guo et al.
1991). Las macrotermitinae cultivan hongos y albergan una microbiota diversa en su intestino (p. ej.,
Darlington1994; brune1998). Las sustancias adquiridas de diferentes cepas de hongos o de
simbiontes intestinales pueden integrarse directamente en el olor específico de la colonia o
incorporarse a las vías de biosíntesis de hidrocarburos. Hasta donde sabemos, nunca se ha probado
una relación entre la composición de hidrocarburos cuticulares y las cepas fúngicas cultivadas o la
microbiota intestinal en termitas superiores.
Como se señaló anteriormente, los lípidos superficiales, como los hidrocarburos

cuticulares, tienen una función importante en el equilibrio hídrico de los insectos (p. ej.,
Hardley1978). Se piensa que la capacidad impermeabilizante de los hidrocarburos depende de
sus propiedades biofísicas, principalmente de la temperatura de fusión. La temperatura de
fusión aumenta en una función casi lineal con la elongación de la cadena hidrocarbonada
(Gibbs y Pomonis 1995). Sin embargo, en los hidrocarburos ramificados e insaturados, la
posición del doble enlace o del grupo metilo también afecta la temperatura de fusión. Sin
embargo, una correlación entre las longitudes medias de cadena de los hidrocarburos
cuticulares de la mosca de la fruta del desiertoDrosophila mojavensisy la temperatura
ambiente ha sido reportada (Gibbs et al.1998).
En África Oriental, el géneroMacrotérminostolera un fuerte gradiente en las condiciones
climáticas que van desde las regiones boscosas húmedas hasta las zonas cálidas semiáridas.
Cuando el perfil de hidrocarburos cuticulares de una especie forestal (p. ej.,M. herus)se
compara con la deM. subhyalinusde un área con menos de 500 mm de precipitación anual,
Figura 9Perfiles de hidrocarburos

cuticulares de diferentes
Macrotérminosespecies de
Kenia, ocupando diferentes
climas de húmedo (arriba)a
climas áridos (abajo).Los
tiempos de retención en los
cromatógrafos de gases son un
sustituto de la longitud de la cadena
de los hidrocarburos
Se hace evidente un aumento notable en la longitud de la cadena principal del

hidrocarburo en paralelo con un aumento en la temperatura ambiente y una
disminución en la precipitación anual (Fig.9). De acuerdo con esta observación, las
cadenas de hidrocarburos cuticulares de la especieM. bellicosusyM. michaelseni,que
habitan climas intermedios, son de longitud intermedia (Fig.9). Además, investigamos la
variación de los hidrocarburos cuticulares entre colonias deM. subhyalinus (África
Oriental) a lo largo de un gradiente ambiental [según Brandl et al.2007, y según la
diferente arquitectura de los montículos (ver Fig.1c, d),M. subhyalinusdel este de África
también es una especie críptica en comparación con el oeste de África
M. subhyalinus].El transecto investigado comenzó cerca de Nairobi (Kenia) en ca.
1.530 m snm, con un clima moderadamente húmedo, y atravesó un escarpe empinado hasta
el fondo del valle del Rift en el lago Magadi (ca. 640 m snm), con un clima cálido y semiárido.
No encontramos fenotipos distintos en esta especie, pero sí encontramos un cambio continuo
en la composición de hidrocarburos a lo largo del gradiente climático (Fig.10 a). A pesar de
este cambio continuo en la composición de hidrocarburos a lo largo del gradiente climático,
solo la concentración de 4,22-hentriacontadieno aumentó fuertemente a medida que
disminuyó la altitud (Fig.10b). En las zonas áridas secas y cálidas a bajas altitudes, la
concentración de este alcadieno alcanza casi el 20% de la fracción total de hidrocarburos. Las
implicaciones fisiológicas de los cambios geográficos observados en la composición de los
hidrocarburos merecen más investigaciones.
En resumen, existe evidencia limitada de que la composición de hidrocarburos es
heredable. Además, existe alguna evidencia de que la composición de los hidrocarburos
está influenciada por el medio ambiente en escalas de tiempo evolutivas (diferencias
entre especies según el clima del rango de distribución) y ecológicas (p. ej., alimentos).
Sin embargo, los factores climáticos y ambientales varían de forma más o menos
continua y, por lo tanto, no pueden explicar la aparición de fenotipos de hidrocarburos
discretos.
Figura 10Variación de hidrocarburos cuticulares deMacrotermes subhyalinusa lo largo de un transecto en

Kenia. El gradiente geográfico es un gradiente altitudinal y climático. Las regiones superiores se caracterizan
por temperaturas moderadas y un clima más húmedo (p. ej., 1530 m snm, 900 mm de precipitación anual),
mientras que las regiones inferiores del Valle del Rift son cálidas y secas (p. ej., 640 m snm, 400 mm de
precipitación anual). (a)Composición de los hidrocarburos cuticulares a lo largo del gradiente (r =0.72, PAG =
0,003). Los puntajes de geografía (latitud, longitud, altitud) y los perfiles de hidrocarburos se extrajeron de
los primeros ejes de análisis de ordenación. (b)Relación entre la abundancia relativa de 4,22-
hentriacontadieno en la mezcla de hidrocarburos y la altitud (r =0.97,pag <0.001)
5 Hidrocarburos Cuticulares y Comportamiento Agonístico
En general, se acepta que el reconocimiento de parentesco en los insectos sociales se basa en

señales químicas. En Hymenoptera, los hidrocarburos cuticulares juegan un papel importante en el
reconocimiento (p. ej., Clément et al.1987; Página et al.1991; Vander Meer y Morel1998; Lucas et al.
2005). Sin embargo, algunos estudios con hormigas (Obin1986; Kaib et al.1993) y termitas (p. ej., Su y
Haverty1991) no encontraron evidencia de que los hidrocarburos cuticulares estén involucrados en el
reconocimiento de compañeros de nido. En experimentos de laboratorio, agresión intercolonial en la
termita subterránea de FormosaCoptotermes formosanus dependía de las condiciones de crianza
más que de los hidrocarburos cuticulares (Florane et al.2004; Pan et al.2006). Los autores sugirieron
que la dieta, los microorganismos del suelo o los componentes volátiles del suelo proporcionan las
claves para el reconocimiento de compañeros de nido. Otros experimentos sugirieron que los
microbios intestinales desempeñan un papel en el reconocimiento de compañeros de nido.
(Reticulitermes:Matsuura2001;Coptotermas:Wei et al.2007;Hodotermas: Kirchner y Minkley2003). El
comportamiento agonístico cambió cuando las termitas fueron tratadas con antibióticos para
manipular la comunidad intestinal microbiana. Los autores argumentaron que los compuestos
volátiles producidos por los microbios intestinales pueden ser responsables del olor específico de
una colonia. Sin embargo, las respuestas conductuales deben interpretarse con precaución porque
los tratamientos con antibióticos podrían inducir una serie de efectos secundarios inesperados.
Existen numerosos estudios sobre la agresión dentro y entre castas, colonias y

especies de termitas (p. ej., Kaib y Brandl1992; Husseneder et al.1998; reseñas de
Thorne y Haverty1991; Clément y Bagnères1998). Pero solo en los últimos años.
¿Se ha relacionado el comportamiento agonístico con diferencias en los perfiles de

hidrocarburos (ver Haverty y Thorne1989o Bagnères et al.1991para estudios muy
tempranos). En un bioensayo, Haverty et al. (1999a) grupos emparejados de
obreras de diferentes colonias de Reticulitermesde Carolina del Norte en placas de
petri y después de 24 h correlacionó el comportamiento agonista y la mortalidad
con fenotipos de hidrocarburo cuticular. Los encuentros forzados entre
trabajadores de diferentes fenotipos dieron como resultado un mayor nivel de
agresión inmediata y una mayor mortalidad en comparación con los
emparejamientos intrafenotípicos. Sin embargo, aunque el nivel de agresión
inmediata fue menor en los emparejamientos intrafenotípicos, un número
comparativamente alto de encuentros intercoloniales entre trabajadores del
mismo fenotipo también resultó en altos niveles de agresión y mortalidad. Esto
sugiere que alguna variación de los hidrocarburos cuticulares dentro de los
fenotipos también podría ser responsable del comportamiento agonista o que,
además de los hidrocarburos cuticulares,1996).
Durante nuestro proyecto, llevamos a cabo experimentos en arena sobre el comportamiento
agonístico entre compañeros de nido, compañeros de nido conespecíficos y diferentes especies con
diferencias en sus perfiles de hidrocarburos cuticulares. En estos bioensayos, los grupos de obreras
principales de la misma colonia o de dos colonias diferentes se emparejaron en placas de Petri y se
cuantificó el comportamiento agonístico posterior (para conocer los métodos, consulte Kaib et al.
2002). Utilizamos trabajadores mayores porque realizan la mayoría de las actividades de
alimentación en el género.Macrotérminosy, por lo tanto, es más probable que interactúen con
competidores o invasores. Aunque en condiciones experimentales algo artificiales, los resultados se
correlacionaron entre castas y correspondieron a observaciones de campo (Jmhasly y Leuthold1999).
Nuestras pruebas de comportamiento revelaron una respuesta de comportamiento clara y
consistente a las diferencias en los perfiles de hidrocarburos: (1) no se observó ningún
comportamiento de alarma o mortalidad entre los trabajadores de la misma colonia; (2) en contraste,
durante los encuentros de diferentes especies, se observaron con frecuencia agresión y mortalidad;
(3) el nivel de comportamiento agonístico se correlacionó con las diferencias entre los perfiles de
hidrocarburos (Fig.11a); y (4) la intensidad de las interacciones agonísticas entre compañeros de nido
conespecíficos aumentó con la disimilitud en la composición de los hidrocarburos cuticulares (Fig.11b
) (M. falciger:Kaib et al.2002;M. subhyalinus:Kaib et al.2004a). EnM. subhyalinusde África occidental, la
variación en la composición de los hidrocarburos contribuye mucho más al comportamiento agresivo
entre grupos de termitas que la relación genética o la similitud morfológica (Fig.11c). Ningún
compuesto individual en los perfiles de hidrocarburos fue suficiente para explicar la variación en la
agresión. La búsqueda de patrones estadísticos sugirió que los factores desencadenantes de la
agresión fueron hidrocarburos menores, de cadena corta e insaturados del grupo de hidrocarburos.
Sin embargo, durante nuestros estudios, demostramos que la respuesta de

comportamiento a las diferencias de hidrocarburos depende del contexto espacial. por
ejemplo, enM falciger,Se observó el llamado “efecto vecino-extraño” o “fenómeno querido-
enemigo” (Kaib et al.2002). Como se describió anteriormente, las colonias diferían en su
composición de hidrocarburos cuticulares y se produjeron tres fenotipos en una escala de
menos de 200 m. Durante los experimentos en arena, la proximidad de las colonias contribuyó
mucho más al comportamiento de alarma entre los miembros de diferentes colonias que el
Figura 11Relaciones positivas entre diferencias en la composición de hidrocarburos cuticulares (estimadas

por distancias Nei, descritas por Kaib et al.1991) y comportamiento agonista. (a)Comportamiento agresivo
entre especies deMacrotérminoscorrelacionado con las diferencias de hidrocarburos (r =0.78, pag <0,001).
Diferentesimbolosindicar diferentes estaciones de campo. (b)Agresión entre colonias de África OccidentalM.
subhyalinuscorrelacionado con las diferencias de hidrocarburos (r =0.89,PAG =0,002, prueba de chimenea;
para más detalles, véase Kaib et al.2004a). (C)Contribuciones independientes (estimadas por partición
jerárquica, Chevan y Sutherland1991) de la disimilitud genética, la distancia morfológica y las diferencias en
la composición de los hidrocarburos cuticulares a la variación del comportamiento agonista entre estas
colonias
composición de hidrocarburos. Los residentes territoriales aparentemente discriminaron

entre vecinos y extraños y fueron menos agresivos con los vecinos directos, incluso si los
vecinos pertenecían a diferentes fenotipos de hidrocarburos. Sin embargo, se observó el
fenómeno contrario conNasutitermes corniger (Dunn y Messier 1999). Las razones de estos
resultados contradictorios no están claras, pero subrayan la importancia del contexto espacial
y el entorno para la comprensión de las interacciones de comportamiento y la competencia
entre colonias (ver también Kaib y Brandl 1992). Sin embargo, la capacidad de discriminar a los
vecinos de los extraños independientemente de su fenotipo químico sugiere que las termitas
no solo pueden diferenciar entre compañeros de nido y no compañeros de nido, sino también
entre diferentes categorías de no compañeros de nido. El aprendizaje o la habituación pueden
explicar el reconocimiento de vecinos, como se sugiere para las hormigas carpinteras (Carlin y
Hölldobler1986).
En resumen, nuestros experimentos en la arena mostraron que las diferencias en la

composición de hidrocarburos cuticulares a menudo inducen agresión intercolonial e
interespecífica y parecen desempeñar un papel en la discriminación de los no compañeros de
nido. Sin embargo, todavía falta evidencia directa del uso de hidrocarburos cuticulares como
etiquetas de colonias y especies porque no se puede descartar la posibilidad de que la
composición de los hidrocarburos cuticulares esté correlacionada con otras señales. Etiquetar
señuelos con mezclas de hidrocarburos sintéticos o extraídos puede resolver este problema.
Bagnères et al. ya han realizado un primer experimento en esta dirección centrado en el
reconocimiento interespecífico. (1991), quienes demostraron que un señuelo cubierto con
extracto cuticular de unaReticulitermesespecie inició un comportamiento agresivo en otro (ver
Takahashi y Gassa 1995para resultados similares). Para probar si el comportamiento
agonístico como respuesta a diferentes composiciones de hidrocarburos cuticulares puede
actuar como mecanismo de aislamiento durante los emparejamientos, sería mejor usar alatos
en tales experimentos de campo. Sin embargo, no existe una alternativa práctica al uso de
obreras, porque los alados maduros solo ocurren en los nidos poco antes de los vuelos
nupciales. Además, no ha sido posible observar directamente un comportamiento agresivo
entre alados durante los vuelos nupciales. Sin embargo, hay alguna evidencia indirecta de
altos niveles de agresión entre los reproductores; al menos durante los primeros pasos de la
fundación de la colonia, los reproductores a menudo son mutilados (Brandl et al.2001,2004).
6 Hidrocarburos cuticulares y diferenciación

genética entre fenotipos
Como ya se mencionó, las termitas muestran poca diversidad morfológica y, por lo tanto, los
hidrocarburos cuticulares son caracteres bienvenidos para la taxonomía y filogenia de las
termitas. Varios estudios han demostrado el potencial de los hidrocarburos cuticulares en la
delimitación de taxones de termitas (Reticulitermas:por ejemplo, Haverty et al.1999b;
Takematsu y Yamaoka1999; Página et al.2002;Coptotermas:por ejemplo, Haverty et al.1990a;
Heterotermos:Watson et al.1989;Zootermopsis:por ejemplo, Haverty y Thorne1989;
Drpanotermas:marrón et al.1996;Nasutitermes:por ejemplo, Haverty et al. 1990b;
Macrotérminos:Bagine et al.1994;Odontotermas:Kaib et al.1991). El uso de hidrocarburos
cuticulares en quimiotaxonomía asume un patrón bastante fijo de hidrocarburos dentro de
taxones y diferencias fijas entre taxones. Como se muestra arriba, los perfiles de
hidrocarburos cuticulares podrían diferir considerablemente entre colonias simpátricas dentro
de una supuesta especie (ver también Haverty et al.1999a; Bagine et al.1994; Copren et al.
2005). Algunos autores han sugerido que los hidrocarburos cuticulares son específicos de la
especie y que los diferentes fenotipos reflejan, por lo tanto, especies hermanas (por ejemplo,
Haverty et al.1996,1999b; Haverty y Nelson1997). Copren et al. (2005) encontraron distintos
fenotipos de hidrocarburos dentro de laReticulitermes hesperusgrupo que ocurre en
California. La comparación de estos fenotipos con una filogenia del grupo de las termitas
basada en el ADN mitocondrial reveló monofilia para la mayoría de los fenotipos y, por lo
tanto, los fenotipos representan especies crípticas. Se obtuvieron resultados similares para
Reticulitermestermitas del sureste de los Estados Unidos por
Figura 12Distancias genéticas medias por pares (distancias de 2 parámetros de Kimura de un fragmento de
658 pb del citocromoCgen de la subunidad I de oxidasa (COI)) entre fenotipos de hidrocarburo cuticular (n =
19), dentro de las especies (norte =8), y entre especies congenéricas (norte =113). Para cálculos de distancia
entre fenotipos de hidrocarburos, secuencias deMacrotermes falciger, M.herusy
M. subhyalinus (África Occidental) fueron considerados. Para los cálculos de distancia dentro y entre especies, se
utilizaron nuestras propias secuencias y las publicadas (para más detalles, consulte Marten et al.2009)
mapeo de fenotipos de hidrocarburos en un árbol filogenético basado en secuencias de

ADN mitocondrial (Jenkins et al.2000).
Estos resultados de las termitas inferiores proporcionaron la primera evidencia de que los
hidrocarburos cuticulares están correlacionados con el patrón filogenético (por ejemplo,
Zootermopsis: Haverty et al.1988; Haverty y Thorne1989). El comportamiento agresivo entre
termitas con diferente composición de hidrocarburos puede mediar en el aislamiento
reproductivo con el potencial de especiación simpátrica si los alados usan la misma
información para la elección de pareja y exhiben respuestas agonísticas a la variación en los
hidrocarburos cuticulares similares a las de las obreras. Por lo tanto, probamos si los
fenotipos simpátricos deMacrotérminoscorresponden a especies crípticas, como se demostró
para las termitas inferiores, utilizando secuencias COI (Marten et al.2009). A pesar de las
fuertes diferencias en sus composiciones, se produjeron diferentes fenotipos de
hidrocarburos dentro del mismo haplotipo. Claramente, la diferenciación genética entre los
fenotipos de hidrocarburos es muy baja y no representa especies crípticas enMacrotérminos (
Higo.12). Esta variabilidad intraespecífica de la composición de hidrocarburos también se ha
observado en la cucaracha gigante.Macropanesthia rinoceronte (marrón et al.2000).
Nuestros resultados sobre la diferenciación genética entre fenotipos de hidrocarburos
contradicen las observaciones en termitas inferiores y sugieren diferencias fundamentales en
la evolución y función de los hidrocarburos cuticulares entre termitas. Además, la aparición de
fenotipos discretos dentro de las especies cuestiona el valor general de los hidrocarburos
cuticulares como caracteres en la quimio-taxonomía de las termitas.
7. Conclusiones
Investigamos si los hidrocarburos cuticulares tienen el potencial de estar involucrados en procesos

de aislamiento conductual y, por lo tanto, de diferenciación genética. Encontramos una variación
considerable en la composición de los hidrocarburos cuticulares entre las especies.
y entre colonias de ciertas especies del género superior de termitasMacrotérminos. La variación

dentro de las especies fue discreta con diferencias entre fenotipos dentro de las especies que
excedieron las diferencias entre especies. Además, proporcionamos alguna evidencia de que las
variaciones en la composición de los hidrocarburos cuticulares tienen un componente genético,
aunque la variación de los hidrocarburos dentro y entre las especies también puede tener un
trasfondo ambiental. Sin embargo, el ambiente varía de manera continua y la variación ambiental
puede no explicar la existencia de fenotipos discretos que ocurren incluso en simpatría. Encontramos
una clara correlación entre las diferencias en los perfiles de hidrocarburos cuticulares y el
comportamiento agonístico dentro y entre especies. Los individuos parecen ajustar sus respuestas
conductuales de acuerdo con las diferencias en los perfiles de hidrocarburos. Sin embargo, a pesar
de la idoneidad general de los hidrocarburos cuticulares en el reconocimiento de especies y
compañeros de nido, este sistema no es perfecto. Las colonias separadas con fenotipos de
hidrocarburos similares a menudo mostraban un comportamiento agonístico escaso o nulo. Por lo
tanto, las colonias usan señales adicionales para mantener la integridad de la colonia. La reacción de
las termitas durante los encuentros depende no solo del perfil de hidrocarburos de la otra termita
sino también del contexto dentro del cual ocurre el encuentro.
Aunque los hidrocarburos cuticulares cumplen la mayoría de los requisitos previos para el
reconocimiento de especies y compañeros de nido, no hubo evidencia de que los hidrocarburos
cuticulares estén conectados o involucrados de alguna manera en los eventos de especiación de
Macrotérminostermitas Incluso se produjeron diferentes fenotipos de hidrocarburos dentro del
mismo haplotipo de ADN. Es posible que los alados en enjambre no reconozcan a los socios
conespecíficos por sus composiciones de hidrocarburos cuticulares. En cambio, la separación
temporal de los vuelos nupciales puede evitar el apareamiento entre simpátricosMacrotérminos
especies (Madera1981; Haverty et al. 2003). Además, Peppuy et al. (2004) mostró recientemente
diferencias de feromonas sexuales entre dos simpátricosMacrotérminosespecies, y la noción de que
la diversidad de feromonas es baja en las termitas en comparación con las hormigas puede ser
prematura. La función específica de las pocas feromonas conocidas en las termitas también podría
ser una cuestión de concentración y depende del contexto (p. ej., Bordereau et al.1991; Laduguie et
al.1994). Sin embargo, nuestros hallazgos de que los fenotipos no corresponden a linajes genéticos
diferenciados contrastan con los hallazgos dentro de las termitas inferiores y sugieren diferencias
fundamentales en la evolución y función de los hidrocarburos cuticulares entre las termitas inferiores
y superiores.
Proponemos una posible función diferente de los fenotipos de hidrocarburos cuticulares en
Macrotermitinae. La aparición de diferentes fenotipos dentro de las especies, incluso en una pequeña escala
espacial, posiblemente podría actuar como una estrategia de defensa contra las inquilinas (ver Howard et al.
mil novecientos ochenta y dos). Las colonias de termitas de larga vida son un recurso predecible para
posibles invasores, y las termitas pueden haber desarrollado estrategias para limitar el acceso a las colonias
para los inquilinos. Como se demostró anteriormente, los invasores tienen que imitar el patrón de
hidrocarburos específico de la colonia. Una alta variabilidad de diferentes fenotipos podría dificultar la
entrada a la colonia de los inquilinos. Esta hipótesis está de acuerdo con nuestra observación de que las
composiciones de hidrocarburos cuticulares a menudo varían mucho más dentro de un área determinada
que entre áreas.
Expresiones de gratitudDurante nuestro trabajo sobre el géneroMacrotérminosvarias personas ayudaron a realizar el

trabajo de campo, realizaron pruebas de comportamiento o ayudaron a identificar los hidrocarburos. Queremos
agradecer a R. Bagine, S. Franke, W. Francke y, en particular, a A. Halwas, que realizó la mayor parte de la
cromatografía de gases. Un hablante nativo de inglés mejoró el idioma de nuestro manuscrito. Agradecemos a dos
revisores anónimos y al editor encargado por sus comentarios. El trabajo fue apoyado por la Fundación Alemana de
Ciencias dentro del Programa Prioritario 1127 (Radiaciones – El origen de la biodiversidad).
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La divergencia de descarga de órganos eléctricos
promueve la especiación ecológica en peces africanos
débilmente eléctricos simpátricos (Campylomormyrus)
Ralph Tiedemann, Philine GD Feulner y Frank Kirschbaum
AbstractoMientras que la especiación a menudo se discute principalmente con respecto a su

contexto geográfico, es decir, alopátrico versus parapátrico versus simpátrico, el papel de la
adaptación en la especiación se ha enfatizado repetidamente en el pasado reciente. Talespeciación
ecológica,en el que las poblaciones divergen por selección disruptiva, pueden ocurrir en diferentes
contextos geográficos. Aquí, presentamos un estudio combinado de genética molecular,
electrofisiología, morfometría y comportamiento sobre una radiación adaptativa de peces africanos
débilmente eléctricos (géneroCampylomormyrus).Los datos genéticos multilocus, los tipos de
descarga de órganos eléctricos (EOD) y la morfometría identificaron varios grupos de especímenes
reproductivamente aislados, es decir, diferentes especies, en simpatría. Mediante este análisis, se
pudieron confirmar seis especies descritas anteriormente, mientras que al menos un espécimen
parecía no pertenecer a ninguna de las especies descritas hasta el momento.Campylomormyrusse
caracteriza por su hocico alargado en forma de tronco que se utiliza para depredar larvas de
insectos. El análisis morfométrico confirmó que la divergencia entre especies se atribuye
principalmente a diferencias en la morfología del hocico. Aunque todavía falta evidencia directa,
parece razonable suponer que estas diferencias en el aparato de alimentación se traducen en
diferentes dietas y/o hábitos de alimentación. También podríamos demostrar que la elección de
pareja ocurre con respecto a EOD y, por lo tanto, podría haber desencadenado
R. Tiedemann (*)
Unidad de Biología Evolutiva/Zoología Sistemática, Instituto de Bioquímica y Biología, Universidad de
Potsdam, Karl-Liebknecht-Strasse 24-25, Haus 26, 14476 Potsdam, Alemania Correo electrónico:
tiedeman@uni-potsdam.de
PGD Feulner
Unidad de Biología Evolutiva/Zoología Sistemática, Instituto de Bioquímica y Biología, Universidad de
Potsdam, Karl-Liebknecht-Strasse 24-25, Haus 26, 14476 Potsdam, Alemania Instituto de Evolución y
Biodiversidad, Grupo de Bioinformática Evolutiva, Westf€Universidad Alische-Wilhelms€Cajero
automático€unster, H€ufferstrasse 1, 48149 M€Unster, Alemania
F. Kirschbaum
Instituto de Ciencias Animales, Universidad Humboldt de Berlín, Berlín, Alemania
Instituto Leibniz de Ecología de Agua Dulce y Pesca Interior, Berlín, Alemania

308 R. Tiedemann et al.
especiación sirviendo como un mecanismo de aislamiento precigótico entre especies con aparatos
de alimentación divergentes. Además, los EOD extremadamente divergentes (diferencia de 100 veces
en la duración) entre especies estrechamente relacionadas también podrían tener un valor
adaptativo directo, ya que estas diferencias afectan la ecolocalización (la función principal del EOD) y,
por lo tanto, podrían alterar el espectro de presas detectadas. Bajo tal escenario, la EOD como un
rasgo único combina pleiotrópicamente la selección natural divergente (adaptación a dietas y/o
hábitos de alimentación divergentes) y el aislamiento reproductivo (apareamiento selectivo con
respecto a la EOD). Por lo tanto, EOD podría constituir un "rasgo mágico" que promovió la
especiación ecológica en peces africanos débilmente eléctricos.
1. Introducción
El concepto de especiación ecológica invoca la divergencia adaptativa, en lugar de la

separación geográfica (es decir, la alopatría) como principal impulsor de la especiación
(Schluter 2000). Bajo tal escenario, las poblaciones divergen entre sí principalmente debido a
la selección disruptiva. En comparación, bajo el escenario clásico de especiación alopátrica, las
poblaciones divergirán por deriva genética aleatoria; también pueden experimentar
divergencia adaptativa, pero esto no es necesario para que ocurra una especiación alopátrica.
Si bien la idea de la especiación ecológica no está restringida a un entorno geográfico
particular (Rundle y Nosil2005), se vuelve especialmente atractivo en situaciones parapátricas
y simpátricas. Hay ejemplos espectaculares de especiación simpátrica debido a la divergencia
adaptativa en peces cíclidos, tanto en África (Schliewen et al.1994) y Nicaragua (Barluenga et
al.2006). Sin embargo, la mayoría de estos ejemplos están restringidos a entornos peculiares,
por ejemplo, pequeños lagos de cráter geológicamente jóvenes con condiciones ambientales
aparentemente uniformes. No menos importante debido a las influyentes contribuciones de
Ernst Mayr en el siglo pasado, los factores ecológicos en la especiación han sido discutidos,
pero se considera que juegan un papel secundario, en relación con los factores geográficos (p.
ej., Mayr1947,1963; revisado en Nosil2008). En consecuencia, la especiación alopátrica todavía
se considera típicamente hoy en día como la "hipótesis nula" por defecto (Coyne y Orr2004,
pag. 142), que sigue siendo válida a menos que se rechace explícitamente. De hecho, concluir
que los casos potenciales de especiación simpátrica solo deberían aceptarse si “la historia
biogeográfica y evolutiva [. . .] hacen muy improbable la existencia de una fase
alopátrica” (Coyne y Orr2004, pag. 142) restringe, por definición, la posibilidad de especiación
simpátrica a entornos especiales, como los lagos de cráter mencionados anteriormente.
Nuestro argumento aquí es que, si nos adherimos a criterios tan rigurosos, es

prácticamente imposible defender la especiación ecológica simpátrica en hábitats abiertos
más grandes, como los sistemas fluviales. Investigamos aquí una radiación en peces africanos
débilmente eléctricos del géneroCampylomormyrus,por lo cual, aunque ocurren en el enorme
sistema del río Congo, los patrones de divergencia genética, morfológica, electrofisiológica y
conductual son totalmente compatibles con el concepto de especiación ecológica.
La divergencia de descarga de órganos eléctricos promueve la especiación ecológica 309
2 Taxonomía deCampylomormyrus
Los peces mormíridos débilmente eléctricos (Mormyridae) constituyen uno de los clados
más diversos de peces de agua dulce de África y el grupo más grande conocido de peces
eléctricos, con al menos 188 especies descritas (Gosse1984; Alves-Gomes y Hopkins 1997
). Los mormíridos comprenden un grupo monofilético bien sustentado que es endémico
de África (Taverne1972; Alves-Gomes y Hopkins1997; Sullivan et al.2000). Dentro de
Mormyridae, la taxonomía del géneroCampylomormyrus ha sido particularmente
desconcertante, ya que el número de especies aceptadas varió entre 3 y 16, según los
análisis morfológicos realizados por diferentes autores (Tabla1). La mayoría de las 14
especies consideradas válidas en la revisión taxonómica más reciente (Poll et al.mil
novecientos ochenta y dos) son endémicas de un solo sistema fluvial, el Congo y sus
afluentes (Cuadro1; Higo.1). Una sola especie (Campylomormyrus phantasticus)no se ha
encontrado en la cuenca del Congo, sino en el río Sanaga. Una sola especie más (
Campylomormyrus tamandua)se distribuye a través de diferentes sistemas fluviales,
incluidos el Congo, Volta, Níger y Tchad/Shari (Gosse1984).
Antes de nuestro trabajo, sólo dos especies deCampylomormyrus (C. numeniusy
C. tamandúa)han sido incluidos en filogenias moleculares (Sullivan et al.2000; Lavoue et al.
2003). Nuestro análisis filogenético en profundidad dentro de este género fue motivado por la
observación de queCampylomormyrusespecímenes de morfología similar (putativamente
asignados aC. numenio)puede exhibir descargas de órganos eléctricos (EOD) adultos
dramáticamente divergentes (Schugardt y Kirschbaum2002; Feulner
tabla 1Taxonomía deCampylomormyrussegún tres autores diferentes, su distribución y tipo de material

museístico utilizado para la comparación morfométrica en nuestro estudio (adaptado de Feulner et al.2007).
H, S, Pse refieren a la inclusión de holotypus, syntypus o paratypus en el análisis. Los taxones subrayados
han sido confirmados como especies separadas por nuestro análisis combinado genético/electrofisiológico/
morfométrico (Feulner et al.2007)
taberna1972 roberts y Encuesta et al.mil novecientos ochenta y dos Distribución (Gosse1984) Tipo
Estuardo1976
C. alces C. mirus C. alces Cuenca del Congo S
C. bredoi C. rhynchophorus C. bredoi Lago Moero y afluencia del río H
C.cassaicus C. mirus C.cassaicus Luapula Río Kasai PAG
C. christyi C. mirus C. christyi Cuenca del Congo S
C. curvirostris C. rhynchophorus C. curvirostris Cuenca del Congo H
C. elephas C. mirus C. elephas Cuenca del Congo S
C. luapulaensis C. rhynchophorus C. luapulaensis Alto Luapula H
C. mirus C. mirus C. mirus Cuenca del Congo H
C. numenio C. rhynchophorus C. numenio Cuenca del Congo S
C. ibis C. rhynchophorus C. numenio Cuenca del Congo S
C. orycteropus Lago Moero H
C. fantástico C. rhynchophorus C. fantástico Río Sanaga H
C. rhynchophorus C. rhynchophorus C. rhynchophorus Cuenca del Congo S
C. compresirostris C. rhynchophorus C. rhynchophorus Cuenca del Congo H
C. lualabaensis C. rhynchophorus C. rhynchophorus Cuenca del Congo H
C. tamandúa C. tamandúa C. tamandúa Volta, Níger, Tchad/Shari y H
Cuenca del Congo
C. tshokwe C. rhynchophorus C. tshokwe Río Kasai y afluencia H
Figura 1Sistemas fluviales africanos

en los queCampylomormyrus
ocurre. La mayoría de las especies
son endémicas de la cuenca del
Congo. Asteriscoindica el
lugar de muestreo en
Chad/Shari
Brazzaville/Kinshasa (de Níger
Feulner et al.2007)
Sanaga
voltaje
cuenca del congo
*
Luapula
kasai
Lago Moero
et al.2006). Con esta descarga, los peces producen un campo eléctrico que se utiliza
para la electrolocalización activa (von der Emde1999). Cada especie (y a veces cada
sexo) produce su EOD específico, que también se utiliza en la comunicación social
(Hopkins y Bass1981; Kramer y Kuhn1994; Werneyer y Kramer2002) y formación de
parejas (Bratton y Kramer1989; Crawford1992; Kramer y Kuhn1994).
Probamos específicamente la hipótesis de queCampylomormyruslos especímenes que se
descargan de manera diferente cuando son adultos se aíslan reproductivamente unos de
otros. Analizamos en total 109CampylomormyrusTodos los especímenes se encuentran en
una sola región, es decir, Kinshasa/Brazzaville en el río Bajo Congo, en el área de inicio de los
rápidos inferiores (* en la Fig.1; véase Feulner et al.2006,2007,2008para detalles). Para la
reconstrucción filogenética, secuenciamos dos loci de marcadores moleculares diferentes: el
gen del citocromo b mitocondrial completo (1142 pares de bases, pb) y una parte del gen de la
proteína ribosomal nuclear S7 (895 pb; véase Feulner et al.2006para detalles experimentales).
Este análisis arrojó una filogenia sólida y bien resuelta, en la que cuatro clados monofiléticos
(A, B, D y F) separaron los especímenes de acuerdo con su EOD (Fig.2). En otras palabras, si los
especímenes fueran asignados a grupos según su EOD, estos grupos (excepto C) serían
recíprocamente monofiléticos en nuestra filogenia molecular. Como todos nuestros
especímenes ocurren en simpatría o parapatría (derivados de un solo sitio), esta
corroboración de la asignación de EOD por genética ya cumple con los criterios para la
delineación de especies (ver, por ejemplo, Milinkovitch et al. 2002). Para confirmar aún más el
aislamiento reproductivo entre estos clados simpátricos, desarrollamos microsatélites
nucleares específicos paraCampylomormyrus (Feulner et al.2005) para evaluar nuestra
asignación de clados por datos genéticos independientes. De hecho, la asignación de
especímenes a grupos por información de genotipo para 16 microsatélites no vinculados
(usando STRUCTURE; Pritchard et al.2000) confirmado
Cn25
K01
K59
K11
K29
K50
K65
K64
K09
K10
K49
K21
K31
K40
K33
K66
400 µs
K06a
Cn32
K32
Cn24
K67
Cn30
K28
K42
*
1 CVA distinto
cn 34b
C
Cn26
K58b
K39
K35
K63
C 1C. compresirostris p < 0,001
K58a
K06b
K55
FCALLE= 0,08
(57;-)
K14
K43 *
K30
K05
K19
p < 0,001
K54
Cn35
K08
K13 * C2C. curvirostris*
K12
K17
K18
K68 400 µs
K20
K38
(64; -) Cn28
Cn31
K57
Cn27
Cn33
K41
Cn34a
40ms
K52
K16 *
Cn29
AC. rhynchophorus
K04
(94; 52) (91;
A
Cn07Cn22Cn23
72) Cn08
Cn09
Cn10
(98;-)
K37
K53
Cn12
B 40ms
(95; 100) (100; 100) Cn11
K23
K25
Cn21
BC. numenio
K36
K03K07K26
D
K45
(50; 74) K46
K48
K24
K34
(98; 97) K27
4 ms
K51
K47
(100; 100)
(100; 99)
K15
K56
K02
K71 mi
K69 DC. tshokwe
Ct06
Ct04
Ct17
Ct16
K70
Ct07
Ct14
Ct12
(69;-)
F
Ct19
Ct02
Ct01
Ct05 400 µs
Ct09
Ct15
(95; 100) Ct18
Ct08
Ct03
Ct13
Ct11
FC. tamandúa
Ct10
K61 Marcusenius sp.
K60Hipopotamyrus wilverthi
0.001 sustituciones/sitio
Figura 2Filogenia bayesiana basada en 2.037 pb (genes del citocromo b mitocondrial y nuclear S7). Se
muestran fotografías y EOD de adultos (observe las diferencias en la duración) para aquellos clados
que podrían asignarse a las especies descritas. En el clado C, la diferenciación entreC.
compresirostrisyC. curvirostris (este último indicado porasterisco)no se resuelve en el árbol
filogenético, pero podría detectarse mediante diferencias significativas en los análisis morfométricos
y de microsatélites (de Feulner et al.2008)
nuestros clados A, B, D y F (Feulner et al.2007; Higo.3). Además, el clado C se separó, pero

mostró una heterogeneidad sustancial entre los especímenes.
Ahora habíamos acumulado evidencia electrofisiológica (EOD) y genética de múltiples locus
(mtDNA, S7, microsatélite) de que los grupos A, B, D y F eran verdaderas especies en simpatía.
Aún así, quedaba por evaluar si comprenden especies crípticas detrás de la especie putativa.C.
numenioo si podrían asignarse a taxones ya descritos. Para resolver este problema,
accedimos a la información del espécimen tipo de todos los descritos.Campylomormyrus
especies (Cuadro1). Idealmente, habríamos analizado el mismo conjunto de marcadores
moleculares para estas muestras. Eso, sin embargo, resultó no ser factible, ya que las
muestras tipo se conservaron en formalina, un reactivo altamente destructivo para el ADN.
Por lo tanto, adoptamos un enfoque morfométrico multivariado: en base a imágenes digitales
de todos los especímenes (tanto los nuestros como los del tipo), registramosx, ycoordenadas
de 11 puntos de referencia homólogos (Fig.4a) para capturar información de la forma del
cuerpo usando TpsDig (Rohlf2003). Después de la corrección de las diferencias debidas al
tamaño, la orientación y la posición, estas variables se pueden utilizar en un análisis de
variables canónicas (CVA) para la estratificación de especímenes de acuerdo con morfotipos
multivariados (ver Feulner et al.2007para los métodos). Curiosamente, todos los clados A–F
100%
80%
60%
40%
20%
0%
AB C D F
Fig. 3El análisis de ESTRUCTURA de microsatélites identifica claramente los grupos A, B, D y F encontrados en
el análisis filogenético. Los especímenes dentro del clado C parecen heterogéneos. Los datos se muestran
para k =6, el valor con mayor probabilidad (de Feulner et al.2007)
Figura 4Punto de referencia

a
configuración y
7
vectores de desplazamiento 4
5
que distinguen clados de 89 10
3
2 11
Campylomormyrus. (a)Los 11 puntos de 6
1
referencia elegidos para analizar la
variabilidad en la forma del cuerpo. (
b
antes de Cristo)Cuadrícula de
deformación con vectores de
desplazamiento relativo que visualiza
los cambios de forma para cada hito
capturado por los dos primeros ejes
CVA, por lo que se pueden discriminar
diferentes grupos (adaptado de Feulner
et al. 2007)
CVA eje 1
CVA eje 2
podría estratificarse según los dos ejes principales del CVA (Fig.5a). Asignaciones
basadas en formas siguiendo el método de Nolte y Sheets (2005) nos permitió asignar
nuestros clados A, B, D y F para tipificar especímenes de diferentes especies (Fig.5a),
mientras que el estado de los clados C y E permaneció ambiguo. Para el clado E, el
análisis reveló una asignación tentativa alC. elephasespécimen tipo, sin embargo, con
muy poca certeza para ser concluyente. En C, varios especímenes se desviaron de la
mayoría. Para investigar más a fondo el estado taxonómico de estos especímenes,
realizamos un análisis de componentes principales (PCA) solo con especímenes del clado
C, que separó dos clados CI y CII. Estos clados se estratificaron aún más en un CVA
posterior (Fig.5b). Además, los dos clados C se compararon a posteriori con respecto a
sus genotipos de microsatélites multilocus. De hecho, divergieron de forma muy
significativa (FCALLE¼0,08;pag <0,001; Higo.5). Nuestra asignación morfométrica indicó
que CI y CII comprenden dos especies separadas, es decir,C. compresirostrisy
C. curvirostris (higos.2y5b).
En resumen, en nuestro análisis combinado morfométrico, genético y electrofisiológico
pudimos identificar seis especies diferentes descritas previamente deCampylomormyrus,
todos divergentes genética y morfométricamente. En cuanto a la EOD, había un tipo estándar
de pulsos muy cortos compartidos entre especies no relacionadas directamente (es decir,C.
compressirostris, C. curvirostris,yC. tamandúa;higos.2y6). De este tipo, tres especies difieren
ya sea por la forma de la EOD (C. tshokwe)o por elongación extrema (alrededor de 100 veces)
de pulsos EOD únicos (C. rhynchophorus, C. numenius) (Higo.6). Curiosamente, las dos
especies con la EOD más larga (C. rhynchophorus, C. numenius)comprenden taxones
hermanos anidados filogenéticamente en el grupo C (que exhibe el EOD estándar; Fig.2).
Tenga en cuenta que nuestro estudio asignó un grupo de especímenes genética y
morfométricamente distinto (clado CII) al espécimen tipo deC. curvirostris,apoyando así
tentativamente la existencia deC. curvirostriscomo una especie separada (como en Taverne
1972), contrario a Roberts y Stewart (1976) y Poll et al. (mil novecientos ochenta y dos), que
sugieren agrupar
C. curvirostris-como especímenes enC. rhynchophorus.
Un solo espécimen (K15) se separó como grupo hermano divergente deC. tamandúa
en el análisis filogenético (Fig.2). Este espécimen también se destacó
morfométricamente (Fig.5). Como no pudimos asignarlo a ningún espécimen tipo con
suficiente confianza, concluimos que este espécimen podría pertenecer a una especie no
descrita hasta ahora.
3 Indicación para la especiación ecológica
La inspección visual revela diferencias pequeñas, pero consistentes, en la forma del cuerpo entre
nuestrosCampylomormyrusespecímenes asignados a diferentes clados por EOD y/o análisis
filogenético (Fig.2). Estas diferencias son especialmente evidentes en cuanto a la forma y la longitud
del hocico en forma de trompa, así como la altura total del cuerpo. En nuestro CVA de 11 puntos de
referencia morfométricos, estos caracteres demostraron tener en cuenta
a
C. tshokwe
C
0.005
D
0.000
CVA eje 2
– 0.005 B
C. numenio F
A
– 0.010 K15 C. tamandúa
C. rhynchophorus
– 0.015 mi C. cf. elefantes
– 0,020 – 0,015 – 0,010 – 0,005 0.000 0.005 0.010

CVA eje 1
0.006
C. compresirostris
0.004
C. curvirostris
0.002
CVA eje 2
0.000
CI C-II
– 0.002
– 0.004
– 0.006
– 0.008
– 0.005 0.000 0.005 0.010 0.015

CVA eje 1
Figura 5 (a)Resultados del CVA realizado sobre variables morfológicas para todosCampylomormyrus muestras
analizadas genéticamente.Letras (A–F)coincidencia de codificación de clados en el árbol de la Fig.2. Los seis clados
diferentes principales identificados por motivos genéticos están claramente separados debido a los dos primeros ejes
CVA. (b)CVA restringido a individuos del clado C en el árbol de la Fig.2. Cuatro individuos (K13–14–16–52) están
claramente diferenciados (de Feulner et al.2007). Los nombres de las especies se dan si los clados pueden asignarse
morfométricamente a los especímenes tipo. Asignación del clado E a
C. elephasera incierto
Figura 6Descarga de órgano eléctrico adulto (EOD) diferenciación entreCampylomormyrusespecies. Tenga en cuenta
que los EOD alargados deC. numenioyC. rhynchophorusse muestran en una escala de tiempo 100 veces mayor, es
decir, 20 ms en lugar de 200metros (de Feulner et al.2009b)
para la mayor parte de la variación morfométrica entre nuestrosCampylomormyrusespecímenes: El

primer eje CVA (Lambda¼0,0007; v2 = 619,1097;d.f.¼108;pag <0.001) describió variación en la
longitud del tronco, mientras que el segundo eje (Lambda¼0,0076; v2¼417.0081;d.f.¼85;pag <0,001)
se relacionó principalmente con la altura del cuerpo (Feulner et al.2007). Estas diferencias se pueden
visualizar en una cuadrícula de deformación con vectores de desplazamiento relativo que
representan los cambios de forma para cada punto de referencia capturado por los dos primeros
ejes CVA (Figs.4b, c).
Argumentamos aquí que, en particular, la divergencia en la morfología del tronco puede ser
adaptativa:Campylomormyrusse alimentan de larvas de insectos que excavan o se esconden dentro
de los espacios intersticiales y agujeros en los sedimentos arcillosos de los canales de los ríos
(Marrero y Winemiller1993). Por lo tanto, es razonable suponer que las diferentes formas del tronco
están asociadas con diferentes dietas, ya que la accesibilidad de ciertos alimentos podría depender
de la morfología del aparato trófico. En la actualidad, no podemos verificar esta hipótesis mediante
evidencia directa, ya que hasta ahora no se han analizado ni el comportamiento alimentario ni el
contenido estomacal en estos peces tropicales nocturnos. Sin embargo,
todas las especies identificadas por motivos genéticos diferían significativamente en un rasgo
morfológico importante, es decir, su aparato trófico.
Hasta el momento, la información sobre la distribución geográfica exacta de los
Campylomormyrusespecies analizadas aquí es escasa. Lo que sí sabemos es que todos están
descritos para la cuenca del Congo. Es cierto que esta información actualmente disponible es
insuficiente para poner cualquier escenario de especiación en una perspectiva geográfica
convincente. No obstante, todas estas especies se encuentran simpátricamente al menos en una
parte de su rango de distribución, es decir, en nuestros sitios de muestreo en Kinshasa/Brazzaville.
Según el principio de exclusión competitiva (Hardin1960), parece muy poco probable que
todos estos eventos simultáneosCampylomormyrusespecies deben explotar los mismos
recursos ambientales. Por el contrario, al presentar diferencias significativas en su aparato
trófico, parece razonable suponer que estas diferencias se traducen en diferencias en los
hábitos alimentarios y/o dieta. La radiación de Campylomormyruspor lo tanto, puede
considerarse adaptativo (Schluter2000; Feulner et al.2007,2008). En consecuencia, es probable
que la selección disruptiva para adaptarse a la explotación de diferentes recursos alimentarios
haya jugado un papel predominante en esta radiación. Tal especiación adaptativa puede
ocurrir en diferentes contextos geográficos. Puede implicar una fase alopátrica inicial y una
posterior simpátrica (o parapátrica) (Rundle y Nosil2005); también puede ser impulsado por la
especialización del hábitat (arroz1987), un escenario a veces llamado "microalopátrico" (Smith
1965). Se podría argumentar que estas consideraciones eluden la pregunta "¿qué es, si acaso,
la especiación simpátrica?", el título de una revisión reciente de Fitzpatrick et al. (2008). De
hecho, la especiación “verdaderamente simpátrica” frente a la “verdaderamente alopátrica”
representan “extremos opuestos de la geografía de la especiación” (Rundle y Nosil2005).
Podría ser demasiado simplista reducir nuestra visión de la especiación a la geografía. Más
bien, podría valer la pena considerar los efectos respectivos de diferentes factores evolutivos,
en particular, la deriva, el flujo de genes y la selección (Fitzpatrick et al.2008). En escenarios de
especiación donde se supone que la selección (disruptiva) juega un papel importante, como en
nuestroCampylomormyrus ejemplo, el proceso puede denominarseespeciación ecológica,
independientemente del conocimiento sobre el contexto geográfico exacto de la especiación
(Rundle y Nosil2005).
4 Descarga de órgano eléctrico y elección de pareja
Si bien argumentamos que el proceso de especiación observado en nuestroCampylomormyrus fiella

esecológicoen el sentido de que presumiblemente está impulsada por la selección disruptiva como
una adaptación a la explotación de diferentes recursos alimentarios (Feulner et al.2008), queda por
discutir por qué mecanismo proximal el aislamiento reproductivo (como lo demuestran los estudios
genéticos; Feulner et al.2007) se consigue. Dada la ocurrencia simpátrica/parapátrica de las especies
estudiadas aquí, un mecanismo de aislamiento reproductivo efectivo debería facilitar en gran medida
la especiación. Dada la pronunciada divergencia en EOD entre especies estrechamente relacionadas
deCampylomormyrus (higos.2 y6), planteamos la hipótesis de que este carácter podría funcionar
como un mecanismo de aislamiento precigótico en estos peces débilmente eléctricos, si el
apareamiento fuera selectivo con respecto a
EOD. Si esto fuera cierto, entonces esperábamos que la EOD divergiera particularmente entre
especies estrechamente relacionadas.
No tenemos evidencia concluyente con respecto a la polaridad de los caracteres de
las características EOD, es decir, no sabemos definitivamente qué tipos son ancestrales y
cuáles son derivados. No obstante, aplicando el principio de parsimonia, uno podría
asumir indirectamente que los pulsos EOD cortos mostrados por muchos no
directamente relacionados Campylomormyrusespecies (es decir,C. compressirostris, C.
curvirostris,yC. tamandúa;higos.2y6) podría constituir el tipo ancestral, a partir del cual
los pulsos EOD formados desviados y/o alargados producidos por tres especies (C.
tshokwe, C. rhynchophorus,yC. numenio)podría haber derivado.
Para probar la función del EOD para el reconocimiento de pareja, expusimos hembras de
C. compresirostrisen un experimento de elección a machos conespecíficos y heteroespecíficos. Los
machos heteroespecíficos pertenecían (1) a una especie relacionada lejanamente que mostraba una
EOD similar a la deC. compressirostris (es decir,C. tamandúa)o (2) a una especie estrechamente
relacionada que muestra una EOD divergente (es decir,C. rhynchophorus;higos.2y6; véase Feulner et
al.2009apara detalles experimentales). Para probar si el EOD por sí solo era suficiente para
desencadenar el reconocimiento de pareja femenina, los machos fueron eliminados y "sustituidos"
mediante la reproducción de EOD específicos de machos (Feulner et al.2009a).
En ambos experimentos de elección de pareja,C. compresirostrislas hembras prefirieron machos
conespecíficos sobre machos de parientes cercanos, pero descargando divergentemente
C. rhynchophorusmachos Por el contrario,C. compresirostrislas hembras tampoco discriminaron
entre conespecíficos y los relacionados más distantes, pero de manera similar descargando
C. tamandúamachos ni sus señales de reproducción (Fig.7). Curiosamente, el reconocimiento de
pareja masculina (Arnegard et al.2006) y reconocimiento de especies (Markowski et al.2008) en otros
géneros de mormíridos también mostró una respuesta tan asimétrica. La evolución de una EOD más
larga divergente enC. rhynchophorusjunto con el apareamiento selectivo podría haber promovido el
aislamiento reproductivo y la divergencia entre los estrechamente relacionados y los que ocurren
simpátricamente.C. rhynchophorusyC. compresirostris.En base a esta evidencia, podemos concluir
queCampylomormyrusha sufrido una especiación ecológica rápida con una selección disruptiva para
diversos aparatos de alimentación, que fue promovida por el apareamiento selectivo basado en
señales eléctricas masculinas adultas (EOD) sorprendentemente diferentes, que sirven como un
mecanismo de aislamiento precigótico efectivo.
5 Descarga de órganos eléctricos: ¿un rasgo mágico para la especiación?
Hasta ahora, hemos desarrollado un escenario que (1)Campylomormyrusse ha diversificado en

varias especies por especiación ecológica y (2) que esta especiación fue promovida por la elección de
pareja según la EOD divergente. Como tal, los dos complejos de caracteres discutidos relevantes
para la especiación, es decir, (1) la diferenciación en el aparato de alimentación y (2) la divergencia en
el EOD parecen estar correlacionados, en lugar de estar funcionalmente (o genéticamente)
vinculados. Los modelos teóricos han demostrado que la especiación a partir de la selección
disruptiva y el apareamiento selectivo es posible incluso cuando la variabilidad de la aptitud y la
elección de pareja dependen de diferentes rasgos cuantitativos heredados de forma independiente.
Figura 7 (a)Interacciones pez-pez (norte¼6) y (b) fish-interacciones de reproducción (norte¼7).

Comportamiento de asociación deC. compresirostrishembras con machos conespecíficos y heteroespecíficos
(a)y EOD presentados solos (b;significar - se). Diferentes símbolos se refieren a diferentes especies (triángulo,
C. rhynchophorus; círculo, C. compressirostris; además, C. tamandua) (de Feulner et al.2009a)
(Kondrashov y Kondrashov1999). Sin embargo, la EOD podría ser un rasgo que también permita la
transmisión directa de la selección divergente causada ecológicamente a una forma de aislamiento
reproductivo (Kirkpatrick y Ravigne2002; rundle y nosil2005). Existe evidencia de que el EOD está
involucrado en la búsqueda de larvas de insectos en peces eléctricos (von der Emde y Bleckmann
1998) y la duración de EOD podría adaptarse para la detección de diferentes presas (Meyermil
novecientos ochenta y dos; Von der Emde y Ringer1992). La función dual, (1) la electrolocalización
utilizada en la búsqueda de alimento y (2) la comunicación social,
incluidas las preferencias de selección (como se evidencia en este estudio), sugiere que la EOD es un
rasgo moldeado por una selección natural disruptiva, pero que también afecta pleiotrópicamente al
aislamiento reproductivo precigótico. Tales rasgos han sido denominados "mágicos" (Gavrilets 2004;
Feulner et al. 2009b). Tener el mismo rasgo (y por lo tanto la misma base genética) para la
divergencia adaptativa y el aislamiento reproductivo facilita enormemente la especiación, en
particular con el flujo de genes (es decir, en condiciones simpátricas y parapátricas).
Concluimos que nuestro EOD de "rasgo mágico" promovió la especiación ecológica en
nuestros peces africanos débilmente eléctricos simpátricos al (1) permitir una adaptación
divergente a diferentes recursos alimentarios (debido a cambios en la ecolocalización junto
con diferencias morfológicas en el aparato de alimentación) y ( 2) desencadenar
adicionalmente el aislamiento precigótico como pista para la elección selectiva de pareja.
Expresiones de gratitudLos estudios informados en este artículo han sido financiados por la Fundación
Alemana de Ciencias (DFG, TI 349/1) y la Universidad de Potsdam.
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Diversificación fenotípica y genotípica en
curso en cangrejos de agua dulce
irradiados adaptativamente de Jamaica
Christoph D. Schubart, Tobias Weil, Jesper T. Stenderup,

Keith A. Crandall y Tobias Santl
AbstractoLa isla caribeña de Jamaica alberga un linaje de cangrejos (Crustacea: Decapoda:

Brachyura: Sesarmidae) que han colonizado los hábitats terrestres más insólitos. Hoy en día,
se pueden encontrar anidando en las axilas de las hojas de bromelia o en conchas de caracol
vacías, corriendo por el suelo del bosque o entre escombros de roca seca, trepando por las
paredes de sistemas de cuevas profundas o cavando madrigueras en las orillas de los arroyos
de montaña. Para facilitar la supervivencia de sus crías en estos extraordinarios y nuevos
hábitats, se han desarrollado complejas adaptaciones de comportamiento, que incluyen la
alimentación y protección de las crías, y el transporte de caracoles vacíos al vivero para
amortiguar el pH y proporcionar el carbonato de calcio necesario [resumido en Diesel (Proc
Roy Soc Lond B 264: 1403–1406, 1997), Diesel y Schubart (Ecología evolutiva de los sistemas
sociales y sexuales: los crustáceos como organismos modelo. Oxford University Press, Nueva
York, págs. 365–386, 2007)]. Ninguna otra especie de cangrejo sesármido americano muestra
este grado de terrestre y comportamiento elaborado de cuidado de la cría. En cambio, las
especies más emparentadas suelen ser habitantes de marismas y manglares y se reproducen
liberando sus larvas en el océano, sin ninguna obligación paternal adicional. Los análisis
filogenéticos moleculares revelaron que los sesármidos endémicos de Jamaica son
monofiléticos y, por lo tanto, el resultado de un solo evento de colonización, que tuvo lugar
hace aproximadamente 4,5 millones de años y fue seguido por una rápida radiación,
especiación y adaptación a nichos ecológicos, que no han sido utilizados. por cangrejos en
cualquier otra parte del mundo y requirió la evolución de complejas estrategias de
comportamiento para hacer posible la supervivencia en estos hábitats (Schubart et al. Nature
393:363–365, 1998a).
CD Schubart (*), T. Weil y T. Santl

Biología 1, Instituto f€ur Zoologie, Universidad€en Ratisbona, 93040 Ratisbona, Alemania Correo
electrónico: christoph.schubart@biologie.uni-regensburg.de
JT Stenderup
Biología 1, Instituto f€ur Zoologie, Universidad€en Ratisbona, 93040 Ratisbona, Alemania Museo de
Historia Natural de Dinamarca, Universidad de Copenhague, 1350 København, Dinamarca
KA Crandall
Departamento de Biología, Universidad Brigham Young, Provo, UT 84602-5255, EE. UU.

324 CD Schubart et al.
una radiación adaptativa de edad comparativamente joven. Requiere investigación sobre los
mecanismos y el ritmo de evolución para generar estas formas altamente especializadas. En el
presente trabajo aportamos nuevos datos sobre procesos evolutivos a nivel intraespecífico,
que pueden ayudar a comprender el potencial de diversificación de estos cangrejos. Además,
se resumen los datos publicados y no publicados disponibles para estos cangrejos
especializados, lo que brinda evidencia de la asombrosa diversidad de estrategias evolutivas y
la dimensión de la biodiversidad más allá del nivel de especie.
1. Introducción
La idea de Charles Darwin de que los animales y las plantas que prosperan en nuestro planeta
están sujetas a cambios continuos como resultado de la selección natural y la adaptación ha
sido decisivamente influenciada por los pinzones terrestres endémicos (Emberizidae:
Geospizinae) de las Islas Galápagos. Trece de estas aves fueron recolectadas por Darwin en el
otoño de 1835 durante el viaje delHMS Beagley, poco después del regreso a Londres, el
ornitólogo John Gould comunicó a Darwin que los pinzones y los sinsontes de las diferentes
islas eran especies distintas y no solo variedades (Sullowaymil novecientos ochenta y dos).
Darse cuenta de que cada isla tenía su propio conjunto de especies con diferentes
adaptaciones incitó a Darwin a escribir: “Al ver esta gradación y diversidad de estructuras en
un pequeño grupo de aves íntimamente relacionado, uno realmente podría imaginar que a
partir de una escasez original de aves en este archipiélago , una especie había sido tomada y
modificada para diferentes fines” (Darwin1845), planteándose así una “transmutación de las
especies” y culminando posteriormente con la publicación de su teoría de la selección natural
(Darwin1859). Hoy en día, los Geospizinae se conocen comúnmente como "pinzones de
Darwin" y son el ejemplo más citado de las llamadas radiaciones adaptativas.
Por lo tanto, las radiaciones adaptativas pertenecen a las primeras evidencias de la

evolución biológica y, junto con los pinzones de Darwin, las enredaderas de miel
(Drepanidinae), las moscas de la fruta (Drosophilidae) y las espadas plateadas (Madiinae) de
Hawai,Anolislagartijas (Iguanidae) de las islas del Caribe, así como peces cíclidos de los lagos
de África Oriental son frecuentemente reportados y ejemplos impresionantes de tales eventos
evolutivos (Schluter 2000). Según este autor, una radiación adaptativa es “la evolución de la
diversidad ecológica y fenotípica dentro de un linaje que se multiplica rápidamente”. Los
posibles factores que causan radiaciones adaptativas podrían ser (1) la combinación de hábitat
diverso y competencia (selección divergente), (2) la evolución de nuevas características
ventajosas (innovación) y/o (3) la presencia de oportunidades ecológicas, como nuevos
hábitats. , combinado con la falta de depredación o competencia (nichos desocupados). En la
mayoría de los casos, tal aumento de la diversidad da como resultado un número de especies
(u otros taxones) de aproximadamente la misma edad.
Schluter (2000) propusieron cuatro criterios para definir y reconocer las radiaciones
adaptativas: (1) ascendencia común, (2) especiación rápida, (3) correlación fenotipo-ambiente y
(4) utilidad de rasgo. Los dos primeros criterios son de naturaleza filogenética, mientras que
los dos últimos criterios correlacionan características morfológicas y ecológicas presentes.
Diversificación fenotípica y genotípica en curso 325
con selección natural. Schubart et al. (1998a) proporcionó evidencia filogenética de

ascendencia común y especiación rápida en un grupo monofilético de cangrejos endémicos de
la familia Sesarmidae de Jamaica, que habitan diversos ambientes terrestres y de agua dulce.
Este y estudios previos (Hartnoll1964; Schubart et al.1997) brindan ejemplos de correlación
fenotipo-ambiente, lo que sugiere que las diferencias morfológicas entre las especies pueden
estar relacionadas con sus hábitats (p. ej., caparazón aplanado en los cangrejos bromelias y
patas táctiles alargadas en los cangrejos de las cavernas). Utilidad de los rasgos, es decir,
“evidencia de que los rasgos morfológicos y fisiológicos de las especies son realmente útiles
donde se emplean” (Schluter2000: p.11) se hace evidente al observar estos animales en el
campo; por ejemplo, un cangrejo de bromelia que se retira a la parte más estrecha de la axila
de una hoja, un cangrejo de río de montaña que construye madrigueras con sus corpulentos,
fuertes y setosos deambulatorios, o un cangrejo de las cavernas que explora su entorno
tridimensional en la oscuridad estirando sus piernas delgadas y alargadas en todas las
direcciones (observaciones personales; Diesel y Schubart2000: higos. 3 y 6). Asimismo, las
diferencias en la evolución del desarrollo abreviado (Hartnoll1964; González-Gordillo et al.
2010) y de regulación hiperosmótica (Schubart y Diesel1999) en comparación con sus
parientes confamiliares marinos pueden considerarse rasgos que proporcionan ventajas
fisiológicas y morfológicas en el nuevo entorno. Por lo tanto, consideramos que se cumplieron
todos los criterios para clasificar la radiación adaptativa de los cangrejos terrestres de Jamaica.
Como consecuencia del tiempo prolongado que normalmente es necesario para completar
los procesos de especiación, la mayor parte de nuestra evidencia disponible para radiaciones
adaptativas es post-hoc, es decir, el resultado de radiaciones adaptativas. En la literatura
científica, el término “radiación adaptativa” se usa principalmente cuando se hace referencia a
eventos pasados de especiación múltiple con divergencia ecológica simultánea. Sin embargo,
la radiación adaptativa se manifiesta primero como variación entre poblaciones. Por lo tanto,
el estudio de la divergencia ecológica y genética entre poblaciones es un enfoque prometedor
para obtener nuevos conocimientos sobre los procesos fundamentales que causan las
radiaciones adaptativas (p. ej., Huber et al.2007). Las reconstrucciones e interpretaciones post-
hoc de las radiaciones adaptativas suelen ser muy difíciles debido a la relativa rapidez de los
procesos de especiación involucrados (p. ej., Schubart et al.1998a). Es posible que las
divisiones rápidas en varias especies no permitan establecer caracteres morfológicos o
moleculares de diagnóstico en los diferentes linajes evolutivos. La variación morfológica y
genética dentro de la población ancestral se distribuye aleatoriamente entre los diferentes
linajes e, incluso con una falta absoluta de flujo de genes, pasará un tiempo evolutivo
considerable antes de que estos linajes puedan diferenciarse. Si este proceso de “selección de
linajes” (ver Neigel y Avise1986) no se completa, puede dificultar las reconstrucciones de
eventos de especiación rápidos o recientes.
El presente estudio proporciona ejemplos de la diversificación morfológica y genética en curso
dentro de algunos de los cangrejos de agua dulce endémicos de Jamaica que evolucionaron por
radiación adaptativa hace entre 3 y 4,5 millones de años. Esto demuestra una vez más que en la
evolución nunca se completa nada, sino que se encuentra en un flujo constante. La formación de
especies y la diversificación biológica es un proceso continuo del que solo podemos presenciar una
ventana de tiempo muy limitada, tratando de comprender los principios de la evolución de la
biodiversidad.
2 Modificación fenotípica de la forma del cuerpo en respuesta a la

vida en cuevas
Las cuevas de Jamaica están habitadas por diferentes especies de cangrejos, de los
cuales solo uno, sesarma verleyiRathbun1914, es un troglobionte obligatorio (es decir,
restringido a las cuevas), mientras que otros son cangrejos de agua dulce troglofílicos
que se pueden encontrar tanto en las cuevas como fuera de ellas. Un ejemplo de ello es
sesarma windsorT€urkay y diesel1994. Originalmente descrito de toda la región centro-
occidental de Jamaica (T€urkay y diesel1994), la presencia de esta especie se restringió
más tarde a un solo sistema de cuevas en el centro de Jamaica, su localidad tipo Printed
Circuit Cave (Trelawny), y la especie fue redescrita por Schubart et al. (1997), tras
reconocer diferencias morfológicas con otras poblaciones de cangrejos de agua dulce
previamente incluidas dentroS. windsor.En ese momento, la mayoría de sus diferencias
morfológicas, como por ejemplo una coloración más clara, apéndices más largos, tallos
oculares más pequeños, una forma corporal más plana y ancha, se atribuyeron a un
modo de vida cavernícola (Schubart et al.1997), similar, pero no tan pronunciado como,
enS. verleyi. Muestreo geográfico adicional obtuvo material que reveló ques. windsor
ocurre en cuatro sistemas fluviales vecinos (Hectors River, Quashies River, Mouth River y
Cave River) a lo largo de la franja noreste de Cockpit Country (Trelawny, Jamaica central)
(Schubart y Koller2005) (Higo.1). Estos ríos tienen en común que sus cauces están solo
en parte expuestos a la superficie. Todos ellos se caracterizan por la infiltración de agua
en la roca calcárea y probable reaparición en las llanuras costeras (por ejemplo, Río
Bueno) oa lo largo de la plataforma insular sumergida. Las conexiones subterráneas
entre estos ríos aún permanecen en su mayoría inexploradas.s. windsorse encontró en
las corrientes superficiales de estos ríos, así como en el área de entrada de las cuevas o
en las profundidades de las cuevas accesibles. Por lo tanto, quedaba la pregunta de si
las características morfológicas descritas por Schubart et al. (1997) son únicos para la
población cavernícola o son una característica general de esta especie. Expresado de
otra manera: es la presunta morfología troglofílica de
Bahía de Montego
lanzas r lucea r
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isla verde r.
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Cabarita R.
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Nuevo rugiente r boca r.
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Valle de Deans R. Héctor R. cueva r

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Río
sesarma windsor
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Meridianos de Sesarma
e
Sesarma fosarum Kingston

Sesarma bidentato
sesarma verleyi
20 kilómetros
Figura 1Mapa de Jamaica que muestra ríos y localidades seleccionados donde se han recolectado especies para el
presente estudio
s. windsorconsistente y también encontrado en representantes que prosperan en aguas superficiales, o

existen mecanismos genéticos o incluso fenotípicos a corto plazo que permiten una rápida evolución de una
forma corporal que es favorable en hábitats de cuevas?
Para investigar esta pregunta, comparamos la morfometría y la genética de los cangrejos
del río Mouth en el centro de Jamaica, que tiene pasajes subterráneos extendidos (Cueva del
circuito impreso, Cueva Harties, Laberinto del río Mouth) conectados directamente con las
aguas superficiales cercanas. Los cangrejos de las poblaciones subterráneas y superficiales
parecen diferir en su apariencia morfológica general. Sin embargo, la falta de flujo de genes
con solo unos pocos metros de distancia entre las poblaciones parece poco probable y solo
podría explicarse por una fuerte exclusión ecológica. La diferenciación genética a distancias
geográficas tan cercanas sería un ejemplo sorprendente de separación parapátrica, mientras
que la identidad genética representaría un caso interesante de plasticidad fenotípica en el
mundo de los artrópodos.
2.1 Materiales y Métodos
especímenes desesarma windsorfueron recolectados durante un período de 11 años entre 1993 y

2003 de un arroyo subterráneo dentro de la Cueva del Circuito Impreso (también conocida como
Cueva de la Esquina o Cueva de John Foden) y fuera de la cueva del Río Boca. La cueva del circuito
impreso está ubicada al sureste del sumidero del río Mouth, cerca del pueblo de Rock Spring, y se
extiende a lo largo de aproximadamente 610 m de longitud más o menos paralela al río Mouth.
Como la mayoría de las otras cuevas de piedra caliza en el karst de Cockpit, la cueva del circuito
impreso tiene muchas terrazas de sinterización que bordean el canal del río del pequeño arroyo de la
cueva. Estas terrazas de sinterización son el hábitat de los cangrejos que viven en la cueva, mientras
que los cangrejos fuera de la cueva habitan en los lechos y riberas de los ríos. También se realizaron
recolecciones en el vecino río Quashies, en las cercanías del pueblo de Stettin (este de Cockpit
Country, Parroquia de Trelawny). Los cangrejos de agua dulce se sacrificaron en hielo y se
conservaron en etanol al 75–90 % para mediciones y análisis genéticos posteriores.
2.1.1 Datos morfométricos
En total, 58 cangrejos adultos de ambos sexos estuvieron disponibles para los análisis
estadísticos de los datos morfométricos. Las medidas del material estudiado incluyeron
el ancho del caparazón en el diente epibranquial (CWT), el ancho máximo del caparazón
(CW), el largo del caparazón (CL), la altura del cuerpo (BH), el ancho máximo del pleón
(PW) , el ancho interorbitario (IOW), la longitud del diente epibranquial (ET), la longitud
del dáctilo (DaL), la longitud (PrL) y la altura del propodo (PrH) de la chela más grande, la
longitud del merus del quelípodo más grande (MerL), el ancho (MW) y la longitud (ML)
de los meros de todas las patas para caminar (pereiópodos 2–5) y la longitud ventral
(ischium-dactylus) del cuarto pereiópodo extendido (4PpL). Se probó el ajuste de los
datos a una distribución normal mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov
(Estadística, versión 6.0). Debido al dimorfismo sexual, las mediciones de quelas y pleones se
probaron por separado para ajustarse a una distribución normal para cada género. Las diferencias
estadísticas entre las proporciones de estas variables se probaron con un tprueba. Se llevó a cabo un
análisis discriminante para una diferenciación precisa entre las poblaciones mediante la elección de
14 variables morfométricas transformadas logarítmicamente no relacionadas con el sexo. Por la
presente, el número de especímenes se redujo a 47 como consecuencia de la falta de variables en el
conjunto de datos general causada por la ausencia de diferentes apéndices corporales en algunos
especímenes (p. ej., piernas individuales para caminar). Seis ejemplares de
s. windsordel vecino río Quashies se incluyeron como grupo externo y el análisis
discriminante se realizó con Statistica. Las variables PW, DL, PrL, PrH y 4PpL se
excluyeron de los análisis discriminantes debido a las evidentes diferencias de
tamaño dependientes del sexo.
2.1.2 Datos genéticos
El ADN genómico se aisló del tejido muscular de las patas para caminar de 40 cangrejos
(20 de la cueva y 20 del exterior) utilizando el kit de extracción Puregene (Gentra
Systems). El ADN aislado se precipitó con etanol al 100 %, se desalinizó con etanol al 70
%, se secó y se resuspendió en tampón TE. La amplificación selectiva de una región de
1059 pares de bases del gen de la subunidad I de la citocromo oxidasa mitocondrial
(Cox1) se llevó a cabo mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con 35–40
ciclos y el siguiente perfil de temperatura: 45 s desnaturalización a 94-C, 1 min de
recocido a 48–56-C, y 1 min de extensión a 72-C, precedida y concluida por 5 min de
desnaturalización inicial y 10 min de extensión final. Se utilizaron los siguientes
cebadores: COL6b (50- ACA AAT CAT AAA GAT ATY GG-30; Schubart y Huber 2006), COL8
(50-GAY CAA ATA CCT TTA TTT GT-30; Schubart2009), CO1f (50-CCT GCA GGA GGA GGA
GAY CC-30; Palumbi et al.1991) como cebadores directos y COH6 (50- TAD ACT TCD GGR
TGD CCA AAR AAY CA-30; Schubart y Huber2006), COH8 (50-TGA GGR AAA AAG GTT AAA
TTT AC-30; Schubart2009), COH4 (50-AAR RATA CCT RAD TTR CCA TAY CC-30; Mateo et al.
2002), y CO1a (50-AGT ATA AGC GTC TGG GTA GTC-30; Palumbi et al. 1991) como
cebadores inversos. Las reacciones de PCR se llevaron a cabo en 25-metrol volúmenes
que contienen cebadores directos e inversos (1,25metrol de 20metroM), dNTP 1,25 mM,
cloruro de magnesio 25 mM, tampón 10, 1U/metrol Polimerasa Taq (MBI Fermentas),
ADN plantilla y agua Millipore. Los productos de PCR se purificaron con Millipore
Montage™Dispositivos de filtro centrífugo PCR (Millipore) antes de la secuenciación del
ciclo. Los productos de la secuencia se precipitaron con etanol, se resuspendieron en
ddH2O, y ejecutar en un ABI Prism™Secuenciador automatizado 310 Genetic Analyzer
(Applied Biosystems/Perkin Elmer). Se secuenciaron las cadenas directa e inversa para
todas las muestras. Las secuencias se analizaron con el programa ABI Sequencing
Analyzes®3.4 (Applied Biosystems) y datos de secuencia alineados sin ambigüedades (sin
indeles) con el software de edición multisecuencia XESEE (Cabot and Beckenbach1989).
Las secuencias de los diferentes haplotipos se han depositado en la base de datos EMBL
(FN395290-FN395305).
la heterogeneidad dentro de las poblaciones se estimó como diversidad de haplotipos

GenéticoPAG
(h¼1 Fi2;Fsiendo i la frecuencia del haplotipo i; Avise,2004). Por parejas F
CALLELos valores entre poblaciones y análisis de varianza molecular (AMOVA) se
calcularon con Arlequin versión 3.1 (Excoffier et al.2005). Las relaciones
filogenéticas entre los haplotipos se representan gráficamente con una red de
parsimonia estadística utilizando el algoritmo descrito en Templeton et al. (1992) y
el software TCS (estimación de redes filogenéticas usando parsimonia estadística;
Clement et al. 2000).
Tres loci de microsatélites actualmente disponibles para Jamaican Sesarmidae
(Marcadé et al., inédito; Heine2006) se amplificaron para 25 animales de las cuevas
frente a 25 de fuera de la cueva.
2.2 Resultados
2.2.1 Morfometría
Diferencias morfométricas altamente significativas entre individuos desesarma windsorde la cueva

del circuito impreso y la población de Mouth River se revelaron en todas las comparaciones:
proporciones de caracteres individuales, caracteres específicos de sexo y en los análisis
discriminantes generales. El carácter más obvio para distinguir a los especímenes de ambas
poblaciones es la longitud de las patas para caminar en ambos sexos, teniendo los especímenes de la
población de las cuevas patas más largas y delgadas que los de la población del río. La longitud
relativa del cuarto pereiópodo en relación con el ancho del caparazón (4PpL/CW) es 1.75 0.04 en los
animales de las cavernas (Nordenador personal¼18) y 1,65 0,06 en el río Desembocadura (NSEÑOR¼24).
También hay diferencias muy significativas en las proporciones de largo a ancho de los meri de todas
las patas para caminar, con animales de las cavernas que siempre muestran valores por encima de
2,5 y los habitantes de la superficie por debajo. Estas diferencias son tan pronunciadas que las
desviaciones estándar no se superponen, con la excepción del último par de piernas que caminan
(Tabla1). Además, los cangrejos de la población de río tienen un frente significativamente más ancho
en relación al ancho del caparazón (IOW/CW¼0,48 0,01, norteSEÑOR¼29; OIA/CW¼0,47 0,01, norte
ordenador personal
¼28) y un diente exorbital significativamente más largo en relación con la longitud total del
caparazón (ET/CL¼0,27 0,09, norteSEÑOR¼26; hora del Este/Límite¼0,18 0,01, norteordenador personal¼28).
Las relaciones de las quelas y el pleón se analizaron por separado para machos y hembras
adultos para explicar su dimorfismo sexual. Las quelas de los machos muestran diferencias
muy significativas entre ambas poblaciones, siendo más cortas y más altas en los animales de
superficie, mientras que las garras de las hembras no muestran diferencias significativas
(Tabla1). La tendencia de apéndices más largos en especímenes de cuevas solo se sigue en los
dedos de quelípidos masculinos. Una posible explicación a este fenómeno sería que las
marcadas diferencias en la altura del quelar masculino (mayor en los animales de superficie)
se pueden atribuir a la selección sexual en forma de exhibición visual durante el cortejo, que
tiene lugar en la población de superficie, pero no es posible en la cueva.
tabla 1Comparación de relaciones morfométricas (media Desviación Estándar;norte¼muestra

tamaño) de las poblaciones de cangrejos de la Cueva del Circuito Impreso y del Río Boca. Se midieron exclusivamente animales
adultos de ambos sexos. Cálculo estadístico basado en dos colas no emparejadastprueba. Los resultados significativos se
muestran en negrita
<y , Cueva del circuito impreso río boca pag t d.f.

OIA/CW 0,47 0,01 (norte¼28) 0,48 0,01 (norte¼29) 0.002 2.41 55
4Pl/CW 1,75 0,04 (norte¼18) 1,65 0,06 (norte¼24) <0.0001 6.49 40
2 ML/2 MW 2,57 0,15 (norte¼26) 2,28 0,11 (norte¼29) <0.0001 8.18 53
3ML/3MW 2,63 0,13 (norte¼26) 2,35 0,11 (norte¼28) <0.0001 8.93 52
4 ML/4 MW 2,66 0,13 (norte¼25) 2,36 0,12 (norte¼26) <0.0001 8.8 49
5 ML/5 MW 2,51 0,16 (norte¼25) 2,29 0,10 (norte¼26) <0.0001 5.91 49
hora del Este/Límite 0,18 0,01 (norte¼28) 0,27 0,09 (norte¼26) <0.0001 5.16 52
<PrL/PrH 1,81 0,08 (norte¼18) 1,75 0,08 (norte¼20) 0.009 2.65 37
<DaL/PrH 1,17 0,05 (norte¼18) 1,11 0,05 (norte¼20) 0.0007 3.67 37
, PrL/PrH 2,03 0,11 (norte¼10) 1,99 0,03 (norte¼9) 0.3 1.07 17
, DaL/PrH 1,24 0,05 (norte¼10) 1,22 0,03 (norte¼9) 0.25 1.18 17
Para probar la diferenciación general entre las dos poblaciones, se llevó a cabo un
análisis discriminante utilizando 14 variables transformadas logarítmicas no
relacionadas con el sexo y agregando seis especímenes des. windsordel río Quashies
desconectado como un grupo externo. El conjunto de datos se sometió a análisis
canónicos como se muestra en la Fig.2. La discriminación entre los grupos fue altamente
significativa (Wilks´ Lambda: 0.0299,F(28.74)¼12.650,pag <0,0001). Todas las poblaciones
podrían clasificarse correctamente con una probabilidad del 100%. Las distancias de
Mahalanobis son más cortas entre la población del río Mouth y la cueva del circuito
impreso que entre ambas poblaciones en comparación con la población del grupo
externo del río Quashies. La primera función canónica (raíz1) representó el 93,94 % de la
varianza explicada, las dos primeras raíces juntas el 100 %.
2.2.2 Genética
Se amplificó y secuenció un fragmento de 1059 pares de bases del gen

mitocondrial Cox1 para un total de 20 especímenes de cada población. Entre las 40
secuencias, se pudieron identificar un total de 16 haplotipos diferentes y 19
posiciones de nucleótidos variables. La red de parsimonia estadística construida
con TCS ilustra las distancias genéticas entre los haplotipos (ht) deS. windsor (Higo.
3). Los haplotipos comunes ht1 (3- PC, 4- MR), ht6 (4- PC, 3- MR) y ht7 (2- PC, 3- MR)
ocurren en ambas poblaciones con frecuencias similares. Ht1 puede considerarse
como el haplotipo ancestral, porque otros seis haplotipos parecen haber divergido
de él (Crandall y Templeton1993). De esos seis haplotipos, tres (6, 7, 16) son
nuevamente el punto de partida para más haplotipos. Ht4 muestra la distancia
máxima a ht1. Estos dos haplotipos están separados por ocho sustituciones. La
mayor distancia entre todos los haplotipos registrados se muestra entre ht4 y ht13,
que están separados por 13 sustituciones (Fig.3, Mesa2).
2
raíz 2
–1
–2
–3
Cueva del circuito impreso
–4 río boca
–8–6–4–20 2 4 6 8 10 12
Río Quashies
Raíz 1
Figura 2Análisis discriminante que muestra la diferenciación morfométrica entre 53 especímenes de

Sesarma windsor (24 especímenes, Circuito Impreso Cueva; 23, Boca Río; 6, río Quashies) según 14 variables
transformadas logarítmicamente no relacionadas con el sexo
Seis haplotipos ocurren en ambas poblaciones (1–4, 6–7), mientras que cinco aparecen
actualmente como haplotipos privados para la población de Printed Circuit Cave (5, 8–11) o la
población de Mouth River (12–16). Entre los haplotipos restringidos a una de las dos
poblaciones, los haplotipos ht12 y ht13 son los únicos que aparecen dos veces. Los tres
haplotipos más comunes, ht1, ht6 y ht7 (que representan el 47,5 % de las secuencias totales),
son compartidos y ht6 y ht7 están separados por transiciones únicas desde ht1. Se encuentran
transversiones entre haplotipos compartidos (2, 3, 4) así como en haplotipos hasta ahora
restringidos a la cueva (5, 8, 10). Cuatro haplotipos dan como resultado un intercambio de
aminoácidos de acuerdo con el uso de codones de invertebrados (Tabla2). Ambas poblaciones
se caracterizan por diversidades haplotípicas idénticas deh¼0,88 y divergencia de secuencia
máxima de 13 pasos mutacionales (1,23%) en la población del río y 12 pasos mutacionales
(1,13%) en la población de la cueva. El análisis de la divergencia molecular utilizando AMOVA
mostró que no existe una diferencia genética significativa entre la población de la cueva y la
del río (pag¼0,51). El generalFCALLEde 0,09 indica que el flujo de genes entre las poblaciones no
está restringido durante períodos de tiempo más largos.
Del mismo modo, tres marcadores de microsatélites no pudieron proporcionar evidencia
de diferenciación genética entre la población de la cueva y la población de la superficie.
Originalmente diseñado para el cangrejo bromeliaMetopaulias depressusRathbun1896, el
microsatélite Met23 (Marcadé et al., inédito) mostró variabilidad en forma de
Fig. 3Red de parsimonia 5

estadística que muestra las
distancias genéticas entre los
haplotipos del río Mouth
población y la población de la
Cueva del Circuito Impreso de 7
Sesarma windsor.El tamaño del
área circular es equivalente a la
frecuencia con la que aparece el
4
haplotipo dentro de los 40 9
especímenes examinados.
(Mesa2). Cadalínea de conexióny
cada transversal línea más
pequeñailustra una sustitución. 2 1 dieciséis 14
Las transversiones se muestran
conlíneas en negrita Los
8
haplotipos de Mouth River se
muestran enverde,haplotipos de
circuito impreso enazul y
3
haplotipos que ocurren en ambas
poblaciones engris
13 12 6 11
15 10
25 alelos, pero su distribución entre 50 individuos sugiere un extenso flujo de genes

entre la población de la cueva y la superficie (FCALLE¼0.0065,pag >0.05) y una fuerte
deficiencia de heterocigotos (FES¼0.0065,pag <0,001). Microsatélites MHA y MHE (Heine
2006) regiones amplificadas con repeticiones, pero tenían la misma longitud en todos
los individuos evaluados.
3 Diversificación genotípica dentro de tres especies de

cangrejos de agua dulce
La radiación adaptativa y la consiguiente diversidad de especies de cangrejos terrestres y de

agua dulce en Jamaica no es igualada por la fauna de cangrejos de las otras Antillas Mayores.
Cuba, La Española y Puerto Rico; todos tienen una o más especies de cangrejos de agua dulce
endémicos pertenecientes al géneroEpiloboceray la familia Pseudothelphusidae. Sin embargo,
ni en términos de número de especies ni ecológicamente, los cangrejos de agua dulce de
estas islas son tan diversos como la fauna de Jamaica, a pesar del tamaño considerablemente
mayor de algunas de estas islas. A diferencia de los Sesarmidae, que son en su mayoría
formas marinas costeras, la familia Pseudothelphusidae es una antigua
Tabla 2Posiciones variables dentro de 16 haplotipos obtenidos de 40 secuencias Cox1 mitocondriales (1059 pb) de la especieSesarma windsor.Comparación de posiciones de nucleótidos
referentes al haplotipo 1. *Nucleótidos idénticos comparados con el haplotipo 1;Notofrecuencia del haplotipo con respecto al tamaño total de la muestra (norte¼40);norteordenador personal
frecuencia del haplotipo con respecto al tamaño de muestra de la Cueva del Circuito Impreso (norte¼20); norteSEÑORfrecuencia del haplotipo con respecto al tamaño de muestra de Mouth
River (norte¼20);Aa1aminoácido con respecto al haplotipo 1;Aa2aminoácido después de la mutación
Posición del nucleótido
haplotipos 208 260 262 277 284 364 395 445 521 571 580 649 758 779 782 970 1017 1036 1054 Ntot NPC RMN
1 CCG TTTTTGATGCCGGTTT 7 3 (0,15) 4 (0,20)
2 **C ********A***** * * 3 2 (0,10) 1 (0,05)
3 **T ************** * * 2 1 (0,05) 1 (0,05)
4 T** C C * * * * G * ATT * C * * * 4 3 (0,15) 1 (0,05)
5 *** ****C********G * * 1 1 (0,05) 0
6 *** ***C********** * * 7 4 (0,20) 3 (0,15)
*** ****C ********* 2 (0,10) 3 (0,15)
Diversificación fenotípica y genotípica en curso
7 * * 5
8 T*T ************** * * 1 1 (0,05) 0
9 **A **C****C****A* * * 1 1 (0,05) 0
10 *** ***C ********** GRAMO * 1 1 (0,05) 0
11 *** ***C *******A** * * 1 1 (0,05) 0
12 *T * ***C****A***A* * * 2 0 2 (0,10)
13 *T * ***C*A**A***A* * * 2 0 2 (0,10)
14 T* A ************** * * 1 0 1 (0,05)
15 ** * ***C********** * C 1 0 1 (0,05)
dieciséis T* * ************** * * 1 0 1 (0,05)
posición de codones 31 3 31313133311132 3 3
Aa1 A A V I
Aa2 T T GRAMO METRO
333
linaje de cangrejos exclusivamente de agua dulce distribuidos a lo largo del neotrópico

(norte de Brasil hasta el sur de México). Si bien los representantes de
Pseudothelphusidae probablemente colonizaron las Antillas Menores recientemente
desde el continente sudamericano a través de Aves Ridge (similar a la descripción en
Iturralde y MacPhee1999), las Antillas Mayores (con la excepción de Jamaica) tienen una
fauna de cangrejos de agua dulce mucho más antigua y más derivada, que
morfológicamente se parece más a los pseudotelphúsidos de Yucatán (México). La
colonización en este caso puede haber tenido lugar por medio de vicarianza (como se
describe en Hedges2001), cuando la Placa del Caribe fue empujada hacia el este entre
las dos Placas Americanas en el Terciario Temprano (ver mapas en Buskirk1985).
Actualmente, hay siete especies endémicas reconocidas deEpilobocerasobre Cuba
(Capolongo y Pretzmann2002; Ng et al.2008), dos sobre La Española y uno sobre Puerto
Rico (Chace y Hobbs1969; Rodríguez y Williams1995). La ausencia deEpilobocerade
Jamaica se puede explicar por el hecho de que esta isla estuvo casi completamente
sumergida durante parte del Terciario Medio (ver Buskirk1985).
La mayoría de los ríos y arroyos de montaña de las diferentes islas de las Grandes Antillas
son muy similares en términos de suelos, vegetación y temperatura. Parecen representar
nichos ecológicos comparables, que también es reconocible por la presencia de la misma
especie de camarón de agua dulce (por ejemplo,Atya scabra, A. inocuo, Macrobrachium
faustinum, M. carcinus, Xiphocaris elongata)en ríos de Cuba, Hispaniola, Jamaica y Puerto Rico
(Chace y Hobbs1969). Estos camarones tienen un desarrollo larvario marino que les permite
dispersarse entre las islas del Caribe (Reuschel y Schubart, presentado). En contraste, los
cangrejos de agua dulce tienen un desarrollo larvario directo (Pseudothelphusidae) o
abreviado (Sesarmidae) (Hartnoll 1964; Chace y Hobbs1969; Schubart et al.2000; La ira y
Schubart2005; González-Gordillo et al.2010). Esto permite la evolución y las radiaciones
independientes en las diferentes islas. La pregunta sigue siendo, ¿por qué en Jamaica una
diversidad tan alta de cangrejos de agua dulce y terrestres evolucionó en un período de
tiempo mucho más corto (4,5 ma, según Schubart et al.1998a) en comparación con la fauna de
cangrejos de las otras Antillas Mayores, que tuvo un tiempo diez veces mayor para
diversificarse. Esta cuestión se abordará mediante análisis genéticos comparativos de
poblaciones. hacer especies de SesarmayEpiloboceradifieren en su diversificación
intraespecífica? Los resultados de tres especies de Jamaica se presentarán aquí, mientras que
la diversificación de los cangrejos de agua dulce de las otras Antillas Mayores se trata en otro
lugar (Rivera y Schubart, presentado; Schubart et al.,enviado) y se resumen más adelante en
este capítulo.
3.1 Material y métodos
Para tres especies endémicas de agua dulce deSesarmade Jamaica, se recolectaron

especímenes de todos los ríos donde se sabe que se encuentran los cangrejos (Fig.1).Sesarma
delfínReimer et al.1998está presente en los ríos del extremo occidental de Jamaica (parroquias
de Hanover y Westmoreland). Para esta especie se obtuvieron muestras de 13 localidades
correspondientes a nueve sistemas fluviales independientes. La Cabarita
El río es el río más grande del área con afluentes largos en diferentes áreas elevadas,
pero un hábitat inadecuado en las tierras bajas del sur donde se unen los afluentes. Esta
especie fue seleccionada para cuantificar la diversidad genética y la heterogeneidad
geográfica en un área relativamente pequeña con muchos ríos que se sabe que no están
conectados. Este no es el caso desesarma windsorT€urkay y diesel1994yMeridianos de
Sesarma Schubart y Koller2005, que ocurren en ríos del este de Cockpit Country
(parroquias de Trelawny y Clarendon), con ríos que desembocan en el norte albergando
s. windsor,mientras que los ríos que drenan hacia el sur están habitados porS. meridianos.La
última especie también se encuentra más al este en el Río Magno (Parroquia de St. Catherine),
un afluente del sistema del Río Cobre, habitado por lo demás porSesarma bidentato Benedicto
1892.Meridianos de Sesarmaes la especie de cangrejo de agua dulce de Jamaica descrita más
recientemente y actualmente también la división filogenética más joven (Schubart, sin
publicar). Su distinción genética y morfológica des. windsorha sido destacada por Schubart y
Koller (2005) con la ayuda del ADN de dos genes mitocondriales. Sin embargo, no se probó
con marcadores nucleares si estas dos especies estrechamente relacionadas pueden mostrar
signos de hibridación.
Entre 1995 y 2005, se recolectaron para este estudio más de 250 individuos de 20
sitios de muestreo diferentes. Siempre que fue posible, se colectaron un mínimo de 10
individuos por localidad. Los animales se sacrificaron en hielo y se transfirieron a etanol
al 95%. El ADN se extrajo como se describió anteriormente (ver2.1). En este caso, se
amplificó el complejo génico nuclear completo ITS1-5.8SrRNA-ITS2 (ITS1-2) para
comparar el ADN variable de los espaciadores transcritos internamente (ITS) no
codificantes. Los cebadores ITS-5 (aquí ITSL1) (50-GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G-30,
Blanco et al.,1990); ITSL1b (50-GTC GTA ACA AGG TTT CCG TAG-30, nuevo), ITSH1 (50-TTC
AGT CGC CCT TAC TAA GGG AAT CC-30; nuevo) e ITSH1b (50-CCA GTT CAG TCG CCC TTA
CT-30, nuevo) anidado dentro de 18SrRNA (ITSL1 y L1b) y 28SrRNA (ITSH1 y H1b).
Además, los cebadores internos ITSL2 (50-AAG AAT ACC AGA TAC ATC GAC AA-30; nuevo)
e ITSH4 (50-TTG TCG ATG TAT CTG GTA TTC TT-30; new), ubicado dentro del rRNA 5.8S, se
aplicaron ocasionalmente. Los fragmentos amplificados resultantes tenían una longitud
de entre 1200 y 1400 pares de bases (pb), debido a varios motivos repetidos de
microsatélites que varían en longitud (ver Harris y Crandall2000). Los clones ITS1-2
también se obtuvieron de individuos individuales del cangrejo de montaña del oeste y
centro de Cockpit Country,Sesarma fosarumSchubart et al.1997y del cangrejo de las
cavernas
S. verleyipara ser utilizados como grupos externos. Las secuencias de los diferentes clones se
han depositado en la base de datos EMBL (FN395306-FN395315, FN395609-FN396100).
Para PCR, estándar 25-metrol reacciones se utilizaron incluyendo 2,5metrol de 10- tampón,
2.5metrol de dNTP 1,25 mM, 0,5metrol de ambos cebadores (20metrom), 2metrol de MgCl 25
mM2, 1metrol de 0,5 U/metrol TAQ y 15metrol de agua bidestilada. La reacción duró 40 ciclos
con el programa descrito en la secc.2.1.2, pero 90 s de tiempo de elongación y una
temperatura de recocido de 50-C. Se prepararon amplificaciones positivas para la clonación
mediante tratamiento con un kit A-Addition de Invitrogen (Carlsbad CA) para agregar
extremos poliA. La clonación se realizó utilizando el kit de clonación TOPO-TA de Invitrogen.
Las colonias que habían incluido con éxito el vector con el inserto de PCR se recogieron y
transfirieron a 50metrol de ddH2O. Esta solución se desnaturalizó durante 10 min a
96-C, y 1metrol fue utilizado para una PCR con 35 ciclos y 55-C como temperatura de recocido
para controlar la clonación del fragmento correcto. Este producto de PCR se limpió con placas
PCR Cleanup Millipore (Millipore, Billerica, MA) y luego se secuenciaron en ciclos en ambas
direcciones usando protocolos estándar. Las secuencias se leyeron con un secuenciador
automático ABI 3730.
Los cromatogramas de secuencia fueron editados y corregidos por posibles errores con Chromas
Litehttp://www.technelysium.com.au/chromas_lite.html. Se creó una alineación con el plugin
ClustalW de BioEdit (Hall1999). Esta alineación se verificó y modificó manualmente, porque las
regiones de microsatélites no siempre fueron tratadas correctamente por la alineación
automatizada. Para un análisis más detallado, todos los archivos de alineación se convirtieron al
formato de archivo nexus. Una parte importante de la información de las secuencias ITS se basa en el
elevado número de eventos indel, lo que debería considerarse señal filogenética según Simmons y
Ochoterena (2000). Los indeles a menudo se deben a elementos repetitivos de microsatélites de
diferentes longitudes y mutaciones puntuales en la región no codificante ITS1 e ITS2, mientras que la
región 5.8 rRNA permaneció prácticamente sin modificar. Para hacer que los indels sean útiles para
todos los métodos de búsqueda de árboles, el método de codificación indel simple (Simmons et al.
2001) que se calculó con el programa GapCoder (Young and Healy2003). Se mantuvieron dos
conjuntos de datos por separado para abordar dos preguntas ligeramente diferentes. El conjunto de
datos de todos los clones ITS1-2 deS. delfínse utilizó para medir la diversificación intraespecífica
genética nuclear en una especie que se encuentra en muchos ríos desconectados, pero en un área
relativamente pequeña. Por el contrario, el conjunto de datos que incluye todos los clones ITS1-2 de
s. windsoryS. meridianosse utilizó para probar la posible hibridación en dos especies

estrechamente relacionadas y morfológicamente similares, que se encuentran en ríos
separados por pocos kilómetros y que en parte se filtran al subsuelo, con conexiones
subterráneas desconocidas. En consecuencia, estos conjuntos de datos se analizaron por
separado utilizando un método de red para los datos preprocesados obtenidos con
GapCoder. La gran cantidad de variación dentro del conjunto de datos ITS no permitió el uso
del algoritmo de parsimonia estadística del software TCS. En cambio, el software Splitstree
versión 4 (Huson y Bryant2006) se utilizó para la construcción de las redes. Por parejasFCALLE
Los valores entre poblaciones se calcularon con Arlequin versión 3.1 (Excoffier et al.2005). Para
una interpretación filogenética general de los datos, finalmente se combinaron todos los
clones ITS1-2. En este caso se construyó un árbol de radiación bayesiano con Mr. Bayes
(Huelsenbeck & Ronquist2001) y niveles de confianza determinados después de ejecutar un
millón de generaciones con cuatro cadenas y una frecuencia de muestreo de 100.
3.2 Resultados
3.2.1Sesarma delfín
232 clones de 32 individuos deSesarma delfínfueron secuenciados incluyendo toda la

región ITS1-2. En este análisis se incluyeron hasta 15 clones secuenciados con éxito, con
una longitud de secuencia ITS de entre 1191 y 1244 pb (después de excluir las regiones
flanqueantes del ADNr). Esto coloca a esta especie en una posición intermedia
posición considerando la longitud de las secuencias ITS encontradas en crustáceos

decápodos (Harris y Crandall2000). Dos de los clones tenían insertos grandes con
más de 300 pb y se excluyeron del análisis. Después de la conversión de los datos
de alineamiento con GapCoder, obtuvimos un alineamiento de 1408 sitios (415
variables/173 informativos de parsimonia, incluidas las regiones flanqueantes) y
223 haplotipos. Sólo diez alelos aparecieron más de una vez y ningún alelo más de
dos veces. La red de expansión mínima correspondiente se presenta en la Fig.4. Lo
más destacado es la posición separada no superpuesta de clones de individuos del
río Deans Valley y el río Roaring, ambos son poblaciones del sureste deS. delfinum.
Los siguientes más cercanos, y conectados con las otras poblaciones, son los clones
del río Flint y la parte superior del río Cabarita de la cordillera nororiental deS.
delfinum.En el otro extremo de la red están los clones del río New Savannah del
rango suroeste de la especie, que también se agrupan muy juntos. Cercanos y en
parte superpuestos con el río New Savannah están los clones de los ríos Green
Island, Morgan, Davis y Lances, y ambos ríos Lucea. Estas son las poblaciones del
noroeste deS. delfinum.Por lo tanto, esta red puede reconocer una marcada
estructura geográfica intraespecífica. Esto se confirma mediante el análisis de la
varianza molecular, que resultó en diferencias significativas entre todos los
sistemas fluviales, excepto los vecinos Green Island y Morgan Rivers (Tabla3)
S. delfínValle de Deans R.
S. delfínrugiente r
S. delfínAlto Cabarita R.
S. delfínpedernal r
S. delfínlucea r
S. delfínDavis R./Lances R.
S. delfínmorgan r
S. delfínisla verde r.
S. delfínnueva sabana r.
5
Figura 4Red construida con Splitstree que representa alelos ITS1-5.8S-ITS2 completos de
diferentes poblaciones deSesarma delfín
338
Tabla 3Por parejasFCALLEvalores entre poblaciones y análisis de varianza molecular (AMOVA) basado en secuencias nucleares del complejo ITS1-5.8S-ITS2
calculado con Arlequin versión 3.1 (Excoffier et al.2005). Matriz superior:Sesarma delfinum;matriz inferior:S. meridianosyS. windsor. norteclones, k
individuos
pedernal r lucea r davis r morgan r isla verde r. nueva sabana Valle de los decanos rugiente r superior
(norte¼24) (norte¼4) (norte¼14) (norte¼5) (norte¼29) R. (norte¼17) R. (norte¼29) (norte¼44) Cabarita R.

(norte¼48)
pedernal r. (k¼3) Lucea 0.37514 0.42624 0.36819 0.31784 0.21282 0.4424 0.32427 0.04277
R. (k¼2) Davis R. (k¼2) pag <0.0001 0.07404 0.11646 0.01120 0.20766 0.62805 0.52456 0.363
Morgan R. (k¼2) Isla pag <0.0001 p < 0,05 0.11129 0.0792 0.18119 0.63125 0.50048 0.40927
Verde R. (k¼4) Nueva pag <0.0001 pag <0.05 pag <0.01 0.05366 0.11531 0.58909 0.46086 0.35564
Savannah R. (k¼4) pag <0.0001 pag <0.05 pag <0.01 p =0.05581 0.13191 0.55874 0.46254 0.3258
Deans Valley R. (k¼5) pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.01 pag <0.01 pag <0.0001 0.42403 0.33825 0.23344
Rugido R. (k¼6) pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 0.17929 0.40655
pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.01 0.30156
Alto Cabarita R. (k =5) pag <0.05 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.01 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001
s.meridiesRío s.meridies s.meridies s.windsor s.windsor s.windsor s.windsor

miño pedro r magno r cueva r Héctor R. Quahies R. boca r.
(n =28) (norte¼19) (norte¼11) (norte¼42) (norte¼43) (norte¼52) (norte¼51)
S.meridies Rio Minho 0.19341 0.53127 0.80596 0.8315 0.77479 0.70757

(k¼6)
S.meridies Pedro R. (k¼3) pag <0.0001 0.48769 0.80741 0.83586 0.75119 0.70184
S.meridies Magno R. pag <0.0001 pag <0.0001 0.80419 0.83458 0.74416 0.69193
(k¼3)
S.windsor Cave R. (k¼8) pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 0.15558 0.31952 0.27955
S.windsor Hectors R. pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 0.26282 0.2535
(k¼5)
S.windsor Quahies R. pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 0.15865
(k¼5)
S.windsor Boca R. (k¼4) pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001 pag <0.0001
CD Schubart et al.
el parFCALLEreflejan el grado de diferenciación entre las distintas poblaciones y

están de acuerdo con la representación de la red.
3.2.2sesarma windsoryMeridianos de Sesarma
El complejo ITS1-2 también se usó para representar la estructura genética de la población de

sesarma windsoryMeridianos de Sesarmadel centro de Jamaica. En total, se obtuvieron 260
clones de 31 individuos. La longitud del gen ITS en estas especies varió entre 1196 y 1226 pb
(después de la exclusión de las regiones flanqueantes del ADNr). Después de la codificación de
brechas, la longitud de los datos alineados fue de 1427 sitios (314 variables/142 informativos
de parsimonia, incluidas las regiones flanqueantes) y revelaron 23 haplotipos. La mayoría de
los haplotipos ocurrieron solo una vez y el haplotipo más común se encontró 11 veces. La red
de expansión mínima que se muestra en la Fig.5y el árbol de distancias en la Fig.6muestran
que las dos especies están bien separadas en dos nubes bien delimitadas que están
conectadas por una simple línea larga de genotipos faltantes. Esto confirma el estatus de
especie para ambas especies y refuta la posibilidad de hibridación, debido a rangos cercanos y
posible contacto subterráneo. En ambas especies, no se reconoce fácilmente ninguna división
en los diferentes sistemas fluviales, pero ciertas partes de la red están dominadas por
sistemas fluviales o conjuntos de ríos específicos. Esto también es cierto para los clones del
Río Magno, una localidad geográficamente más distante de todos los demás puntos de
muestreo. AMOVA, por el contrario, confirma una diferenciación genética significativa de
todos los sistemas fluviales analizados (Tabla3), lo que confirma el alto grado de diferenciación
intraespecífica entre los cangrejos de río de Jamaica.
15
s.windsor-río cueva
s.windsor-Río Quashies
s.windsor-río boca alta
s.windsor-Héctores
s.meridies-rio pedro
s.meridies-Río Magno
s.meridies-Río Miño
s.meridiesubicación incierta
Figura 5Red construida con Splitstree que representa alelos ITS1-5.8S-ITS2 completos de
diferentes poblaciones desesarma windsoryS. meridianos
5
0.
0.86
0.5
0.
5
5
0.
0.
5
1.00
1.00
1.00
sesarma windsor
sesarma verleyi
Sesarma delfín
Sesarma fosarum
Meridianos de Sesarma 0.5
1.00
1.00 0,63
1.0
0,
0
64
0,69
00
1.
Figura 6Árbol de radiación bayesiano construido con MrBayes (un millón de generaciones) que representa las
relaciones filogenéticas entre los alelos ITS1–5.8S-ITS2 de Sesarmidae endémicos de Jamaica seleccionados
3.3 Discusión
La mayoría de los estudios filogeográficos y de genética de poblaciones de animales se llevan

a cabo con secuencias mitocondriales (mt), especialmente de la subunidad 1 de la citocromo
oxidasa o la región de control mt. Esto se debe principalmente a su tasa de mutación general
más alta en comparación con el ADN nuclear. El mtDNA es relativamente estable y se produce
en numerosas copias por célula. Esto, y el hecho de que muchos cebadores universales están
disponibles para varios genes, hace que el mtDNA sea relativamente fácil de amplificar para
una amplia gama de organismos. Debido a su herencia uniparental (normalmente del lado
materno) y su consiguiente aparición de copia única en la mayoría de las mitocondrias, el
mtDNA es, además, relativamente fácil de interpretar. Sin embargo, el descubrimiento de los
barridos selectivos, las introgresiones mitocondriales y las copias nucleares de mtDNA (numts)
han dado una nota de precaución al interpretar los resultados filogeográficos o genéticos de
poblaciones basados exclusivamente en mtDNA. La necesidad de datos complementarios del
genoma nuclear es, por lo tanto, más urgente que nunca. Hay varias técnicas moleculares
disponibles que usan información del genoma nuclear para distinguir entre individuos o
poblaciones dentro de una especie, como microsatélites, AFLP, etc. Establecer bibliotecas de
microsatélites es costoso y, a veces, complicado, los cebadores correspondientes solo son
útiles para un estrecho gama de especies. Además, la información de los microsatélites y de
los AFLP es indirecta y se basa en diferencias de longitud o patrones específicos de
fragmentación del ADN. El uso de la información de la secuencia completa en su composición
original solo es posible mediante la secuenciación del ADN. Sin embargo, muy pocas regiones
de ADN nuclear son lo suficientemente variables, pero aún universalmente amplificables, para
usarse como marcadores genéticos intraespecíficos. Los espaciadores transcritos
internamente (ITS) representan una excepción importante. No codifican y, por lo tanto,
permiten mutaciones sin alteración de su función como amortiguadores entre los genes
ribosómicos 18S rRNA, 5.8S rRNA y 28 rRNA. Estos genes vecinos, por otro lado, proporcionan
regiones flanqueantes altamente conservadas en las que se pueden diseñar fácilmente
cebadores adecuados. El hecho de que algunos cebadores, que se usan comúnmente para
amplificar ITS de animales, se diseñaron originalmente para hongos es una buena evidencia
de la universalidad de las regiones flanqueantes. Siempre se encuentran dos genes ITS en el
complejo ITS1–5.8rRNA-ITS2, pero la longitud de ITS1 e ITS2 varía enormemente entre los
principales taxones y, en menor medida, entre especies, individuos o incluso copias dentro de
los individuos. La razón principal por la que los ITS no se aplican con mayor frecuencia para
estudios de población es probablemente precisamente el hecho de que pueden estar
presentes varias copias de diferentes longitudes dentro de los individuos, lo que da como
resultado señales superpuestas cuando se secuencian directamente los productos de la PCR.
Harris y Crandall (2000) encontraron varios elementos repetitivos cortos en el genoma de los
géneros de cangrejos de río OrconectasyProcámbaro,los cuales fueron considerados
microsatélites de acuerdo a su estructura. Este fue también el caso en ambos genes ITS de los
cangrejos de Jamaica estudiados aquí, así como en los cangrejos de agua dulce de la familia
Pseudothelphusidae (ver Schubart et al.,enviado) y la familia Parathelphusidae (ver Kolbinger,
Koller y Schubart, inédito). Para obtener secuencias limpias de los diferentes alelos de un
individuo, los productos de PCR deben clonarse antes de la secuenciación. cuando esto fue
realizado en diferentes insectos (Culicidae por Wesson et al.1992,Cicindela dorsalispor Vogler

y DeSalle1994, Coccinelidae por Schulenburg et al.2001) o crustáceo (cangrejo cambarid por
Harris y Crandall2000, cangrejos de agua dulce sesarmid y pseudothelphusid en el estudio
actual y Schubart et al.,enviado) taxones, resultó que siempre estaban presentes más de dos
(de cada padre) alelos. Se sabe que la matriz de ADN ribosómico eucariótico (ADNr) consta
típicamente de varios cientos de copias repetidas en tándem de la unidad de transcripción,
que codifican 18S-ITS1-5.8S-ITS2-28SrRNA. Sin embargo, se cree que estas copias están
genéticamente homogeneizadas por evolución concertada (p. ej., Hillis et al.1991). Williams et
al. (1988) consideraron la posibilidad de que la homogeneización a través de la evolución
concertada pueda tomar tiempos evolutivos más largos de lo que comúnmente se cree.
Vogler y De Salle (1994) encontraron una gran variación intraindividual de secuencias ITS1 en
el escarabajo tigreCicindela dorsal, oscureciendo la señal filogeográfica dentro del Golfo de
México y a lo largo de la costa atlántica, y concluyó que falta un sistema de homogeneización
eficiente. Además, los datos de Harris y Crandall (2000) y el presente estudio se oponen al
menos a una evolución concertada de acción rápida en los crustáceos decápodos. Si bien
nuestra filogenia ITS nos permitió distinguir dos especies estrechamente relacionadas,
sesarma windsoryS. meridianos,su uso para revelar la estructura filogeográfica es limitado
debido al hecho de que la variación intraindividual fue en parte lo suficientemente grande
como para incluir secuencias de todo el espectro de variabilidad dentro de la especie. Por lo
tanto, estamos de acuerdo con los autores anteriores en que el uso de ITS para la
filogeografía y la genética de poblaciones disminuye si hay múltiples copias por individuo y el
rDNA no se homogeneiza constantemente mediante una evolución concertada.
4 Hallazgos Adicionales y Perspectivas
Una radiación adaptativa relativamente joven de cangrejos terrestres en una pequeña isla tropical
ofrece muchas oportunidades para estudiar los mecanismos y las consecuencias de dicha radiación.
No todos los resultados pueden presentarse dentro del marco de este capítulo de libro; sin embargo,
algunos de ellos se resumirán aquí para mostrar el progreso después de 1998, cuando Schubart et
al. (1998a) proporcionó evidencia final de que la diversidad de cangrejos de Jamaica es, de hecho, la
consecuencia de la radiación adaptativa.
Entre 1994 y 2005, se describieron cinco nuevas especies de cangrejos de agua dulce de
Jamaica en función de la morfología y la genética. Anteriormente, se pensaba que todos
pertenecían a la especie de cangrejo de agua dulce descrita en ese momento de los arroyos de
las montañas de Jamaica,Sesarma bidentatum.Las seis especies de cangrejos de agua dulce
ahora reconocidas son alopátricas y tienen rangos de distribución que no se superponen y
están dispuestos de oeste a este de la isla de la siguiente manera:S. delfínReimer et al.1998;S.
fossarumSchubart et al.1997;s. windsorT€urkay y diesel1994;
S. meridianosSchubart y Koller2005;S. bidentatoBenedicto 1891;S. ayatum Schubart et al.
1998b. A primera vista, estas seis especies son de morfologías similares, pero el ojo del
especialista reconocerá rápidamente diferencias importantes, como la mencionada
forma corporal desesarma windsorpoblaciones de cuevas, diferentes
grados de pubescencia en las patas para caminar, diferentes patrones de tuberculación en las garras
y también dimorfismo sexual pronunciado de manera diferente en algunas de las especies, lo que
indica diferentes comportamientos durante el cortejo y/o interacciones macho-macho. Por ejemplo,
la constatación de que las hembras de cangrejo del Río Magno tienen quelas claramente más
pequeñas que los machos fue la razón por la que pudieron identificarse inmediatamente como
S. meridianos,a pesar de encontrarse en un afluente del río Cobre, que por lo demás está
habitado porS. bidentatum,debido a que esta última especie, yS. ayatum, tienen dimorfismo
sexual nulo o muy débil. Esto podría ser confirmado posteriormente por otros resultados
morfológicos y moleculares y actualmente constituye el único ejemplo de dos especies que se
encuentran en afluentes del mismo sistema fluvial más grande (ver Fig.1), pero sin evidencia
de mezcla como se confirma en este estudio con los resultados del ADN nuclear de la
población de Rio Magno deS. meridianos.Curiosamente,
S. meridianostodavía se encuentra en un afluente occidental yS. bidentatoen la
oriental, siguiendo así la tendencia geográfica general de las especies y
permitiéndonos trazar una línea límite de distribución entre ellas. El río Cobre
bajo es un río de tierras bajas sin mucha estructura que consiste en aguas
turbias y de flujo rápido durante la temporada de lluvias. Por lo tanto, no es
adecuado para cangrejos de montaña, lo que impide una mezcla de adultos de
ambas especies en esta parte del sistema de agua conectado. Sin embargo, se
debe suponer que las etapas ontogenéticas tempranas de los cangrejos, que
no tienen apéndices que los sujeten (larvas de zoea) o que son demasiado
pequeños y débiles para soportar las corrientes (juveniles), son regularmente
arrastrados al río principal y algunos de ellos más tarde. encontrar su camino
de regreso a las partes más adecuadas del sistema fluvial. Actualmente,
Un caso similar, pero a nivel intraespecífico, podría demostrarse con los datos aquí
presentados sobre la diferenciación poblacional dentro deSesarma delfín.El sistema del
río Cabarita alberga poblaciones de cangrejos en varios de sus afluentes, de los cuales
cuatro fueron muestreados para este estudio (Fig.1, Mesa3). Dos de estas poblaciones
de la parte superior del río Cabarita eran genéticamente idénticas y estaban
estrechamente relacionadas con el río Flint, que drena hacia el norte pero tiene sus
cabeceras en las inmediaciones de las del río Cabarita que drena hacia el sur desde allí.
Otra población de la cuenca Cabarita es la del río Morgan superior, afluente que recoge
sus aguas en la zona noroeste de la distribución deS. delfinum.Curiosamente, esta
población no pudo separarse estadísticamente del cercano río Green Island que drena
hacia el noreste (Tabla3), pero era claramente distinta de las otras tres poblaciones del
sistema Cabarita. Finalmente, la población del Río Rugido en el sureste del rango de
distribución deS. delfinum,y uniéndose al río Cabarita en las llanuras del sur, también
puede separarse genéticamente de las otras poblaciones del río Cabarita y, en cambio,
está más estrechamente relacionado con la población cercana del río Deans Valley con
drenaje independiente hacia el océano.
Todos estos hallazgos proporcionan evidencia clara de que es más probable que estos
cangrejos migren a través de las cabeceras que en los grandes lechos de los ríos de las tierras
bajas, donde se unen los afluentes correspondientes. Al mismo tiempo, da evidencia de la
clara estructura geográfica que ya es reconocible a nivel intraespecífico y
puede explicar el alto potencial de diversificación de los cangrejos de Jamaica como un factor
que conduce a la riqueza actual de especies. Paralelamente a estos estudios, estamos y hemos
estado realizando estudios filogeográficos y de genética poblacional sobre la diversificación de
los cangrejos dulceacuícolas de las demás Antillas Mayores. Por lo tanto, se hace evidente que
su potencial de diversificación intraespecífica es realmente reducido en comparación con los
cangrejos de Jamaica, a pesar de ser el linaje mucho más antiguo de cangrejos de agua dulce y
probablemente haber tenido mucho más tiempo en las islas respectivas para desarrollar
endemismos regionales. Cocine et al. (2008) estudió la filogeografía del cangrejo de agua
dulce Epilobocera sinuatifrons (A. Milne-Edwards, 1866) de Puerto Rico con el gen mitocondrial
Cox1 y encontró una diferenciación muy limitada para un cangrejo de agua dulce. Esto podría
ser confirmado por los estudios actuales de Santl (2009) y Schubart et al. (enviado) utilizando
el ADN mitocondrial NDH1 más variable y las secuencias ITS1-2 en un patrón similar al que se
muestra en el estudio actual. En esta especie hay un gradiente del oeste al este de Puerto
Rico, y las poblaciones de los extremos son significativamente diferentes entre sí, pero hay un
claro aislamiento por patrón de distancia reconocible, al incluir poblaciones intermedias.
Rivera y Schubart (enviado) estudió la genética de poblaciones del cangrejo de agua dulce
Epilobocera haytensisRathbun, 1893 de Hispaniola con conclusiones similares a las de
E. sinuatifrons.Por un lado, existe una estructura genética significativa en 20 ríos diferentes de

la isla y una clara diferenciación oeste-este relacionada con la Cordillera Central. Sin embargo,
esta diferenciación es menor a la esperada para una isla tan grande y también muestra
patrones de aislamiento por distancia. Solo una población del Río Ocoa parece haber estado
aislada por más tiempo, sin merecer el estatus de especie distinta. El número de especies
actualmente reconocidas para Cuba (Capolongo y Pretzmann2002; Ng et al.2008)
probablemente esté sobreestimado.E. armatano es una especie válida y las diferencias
genéticas entre algunas de las otras especies no son lo suficientemente grandes como para
justificar el estatus de especie (Schubart et al., en progreso). Estos hallazgos sugieren que los
cangrejos del géneroEpiloboceradebe mantener un flujo de genes relativamente constante
entre los ríos, lo que contrarresta la diferenciación regional, si los cangrejos de agua dulce
viven en sistemas fluviales aislados durante períodos prolongados (ver, por ejemplo, Shih et
al.2006). Este flujo de genes probablemente se logra mediante migraciones regulares por
tierra y, de hecho, esto ha sido observado repetidamente y recientemente documentado por
nosotros con experimentos de captura (Rivera y Schubart, sin publicar).
La diversificación intraespecífica e interespecífica de los cangrejos de agua dulce
de Jamaica descrita aquí es la misma que se encuentra en muchos otros
organismos marinos, límnicos y terrestres, y sigue los patrones típicos conocidos
de la diferenciación y especiación alopátrica "estándar": es decir, falta de flujo de
genes seguido por la especialización local y la diferenciación genética en las
poblaciones separadas debido a la deriva genética, lo que resulta en un aislamiento
reproductivo a largo plazo sin la especialización ecológica necesaria. La descripción
de las cinco nuevas especies de cangrejos de agua dulce es, por lo tanto, el primer
caso en el que se documenta que la radiación adaptativa de los cangrejos de
Jamaica está acompañada o impulsada por una especiación alopátrica "simple".
También demuestra lo difícil que es separar las radiaciones no adaptativas de las
adaptativas.Sesarma
windsor (véase más arriba). Además, en los ejemplos de libros de texto de radiación adaptativa, como en los
pinzones de Darwin y otros organismos que se sabe que evolucionaron a través de radiaciones adaptativas,
la separación alopátrica en combinación con las adaptaciones subsiguientes a menudo juega un papel
fundamental, como puede verse por el hecho de que muchos de los ejemplos provienen de organismos que
viven en islas cercanas, donde el flujo de genes es muy reducido y los organismos pueden especializarse en
parte debido a la reducción del flujo de genes de homogeneización. La especiación simpátrica puede tener
lugar durante las radiaciones adaptativas, pero definitivamente no es una condición para definir las
radiaciones adaptativas.
Los procesos exactos de especiación pueden entenderse mejor si todos los eventos de
especiación están claramente documentados en un árbol filogenético. Sin embargo, como se
mencionó anteriormente, las radiaciones adaptativas son normalmente procesos muy
rápidos, y diferentes procesos de diversificación (geográficos y ecológicos) pueden tener lugar
dentro de una sola especie al mismo tiempo que conducen a relaciones filogenéticas
reticulares tipo red no dicotómicas. La filogenia de los cangrejos de Jamaica publicada en
Schubart et al. (1998a) sugiere una radiación tan rápida con una rama larga y un alto soporte
de arranque que conduce al clado monofilético de todas las especies endémicas de Jamaica,
pero con ramas cortas compartidas y valores de confianza bajos dentro del clado de
endémicas de Jamaica. Actualmente, estamos en el proceso de mejorar esta filogenia
agregando secuencias de más genes a esta reconstrucción filogenética. La filogenia preliminar
más reciente basada en más de 4300 pb (12S, 16S y 28S rRNA, 1200 pb Cox1 e ITS1–5.8S-ITS2)
refuerza la idea de árboles anteriores de que ni los cangrejos de aspecto similar de los arroyos
de montaña ni los más las formas terrestres especializadas son monofiléticas, pero que su
diversificación sigue un fuerte patrón geográfico (Schubart, en progreso). Eso significa que la
diferenciación alopátrica en aguas dulces jugó un papel importante desde el principio, pero
estuvo acompañado por la evolución de formas ecológicamente más especializadas que
evolucionaron regionalmente a partir del ancestro de la especie fluvial correspondiente. Por
ejemplo, el cangrejo de los escombros de roca de las montañas John Crow más orientales,
Cocina SesarmaHartnoll1971, está más estrechamente relacionado con un clado formado por
los cangrejos de ríoS. bidentatum (hoy en su mayoría Montañas Azules) yS. ayatum (hoy
exclusivamente montañas de John Crow) y no a los cangrejos de escombros de roca de
aspecto similar del centro (S. jarvisiRathbun1914) y occidental (Sesarmasp.n.) Jamaica. La
convergencia morfológica es, por lo tanto, otro problema que debe tenerse en cuenta al
estudiar las radiaciones y puede ser un factor para mantener morfologías similares en las
especies de arroyos de montaña, a pesar de su divergencia temprana en el árbol filogenético
general.
Nuevas especies de cangrejos endémicos se han agregado regularmente a la lista de la
fauna de Jamaica durante los últimos años, y surge la pregunta de si hemos visto el final de la
misma. En comparación con la diversidad de organismos terrestres "reales" como los
caracoles (Goodfriend 1986; Rosenberg y Muratov2006), anfibios (setos1989), y reptiles
(Hedges y Burnell1990), los cangrejos de Jamaica no son un grupo excepcionalmente rico en
especies. Sin embargo, para un invasor marino reciente, probablemente lo sean. Hasta ahora,
todas las nuevas especies jamaicanas se han descrito utilizando métodos morfológicos, a
veces con la ayuda de resultados moleculares (p. ej., Schubart & Koller 1998b; Schubart and
Koller 2005). Sin embargo, en el futuro, será una práctica cada vez más común reconocer las
especies únicamente en función de su diferenciación genética. De esta manera, Bond y
Siervaldo (2002) reveló especies crípticas entre los milpiés de Jamaica. Para los cangrejos
de río de montaña de Jamaica, se han muestreado la mayoría de los ríos y se está
describiendo la diversidad intraespecífica para las seis especies actualmente
reconocidas. Reimer et al. (1998), al describirS. delfíncomo nuevo, notó que los animales
de Galloway (Deans Valley River) tenían una morfología ligeramente diferente y
consideró la posibilidad de ubicarlos en una subespecie separada. Nuestros resultados
moleculares presentados aquí, y otros basados en mtDNA por Santl (2009), confirman
la distinción de los animales del río Deans Valley. Frente a las diferencias que vamos
encontrando entre especies ya descritas (ej.S. meridianosy
S. windsor),reconocemos un nivel más bajo de diferenciación. Sin embargo, las poblaciones de
Deans Valley-Roaring River representan una unidad evolutiva significativa que es geográfica,
morfológica y genéticamente separable de otras unidades dentro deS. delfinum.Por lo tanto,
un estado de subespecie puede ser justificable. Además, entre las especies jamaicanas más
especializadas, la genética de poblaciones sigue revelando la posible existencia de especies no
descritas. Este es el caso del cangrejo bromeliaMetopaulias depressuscomo lo indica Heine (
2006) y Rivera (2007) y actualmente en investigación con marcadores nucleares. Se puede
discernir una distinción aún más pronunciada a nivel de especie en el cangrejo de concha de
caracol.Sesarma jarvisi,para lo cual actualmente se está describiendo una nueva especie
basada en marcadores mitocondriales y nucleares así como en morfología (Schubart, en
preparación). Esto se sumará a la espectacular diversidad ecológica y biológica de los
cangrejos de Jamaica, que descienden de un solo linaje de ancestros marinos hace
aproximadamente 4,5 millones de años y no se detendrán en su divergencia y formación de
especies a largo plazo, si la destrucción ambiental humana, como ocurre actualmente. visto en
los bosques de Jamaica, no destruye parte de la diversidad antes de que pueda ser descrita y
apreciada.
AgradecimientosEl primer autor está especialmente agradecido a su antiguo asesor Rudi Diesel, quien lo
introdujo en el mundo de los cangrejos de Jamaica y contribuyó decisivamente a este manuscrito con
muchas discusiones iniciales y viajes de recolección. También nos gustaría agradecer a todas las demás
personas que ayudaron a recolectar en el campo a lo largo de los años, entre ellos Jens Reimer, Gernot B.€
aurle, Martina Schuh, Gary Rosenberg, Rene Brodie, Klaus Anger, Silke Reuschel y Luise Heine, así como al
Laboratorio Marino Discovery Bay y la Universidad de las Indias Occidentales por su continuo apoyo.
También se debe un agradecimiento especial al equipo del Laboratorio Crandall, que apoyó a dos de
nosotros, mientras clonaba un máximo de alelos ITS en intervalos de tiempo relativamente cortos y el apoyo
asociado de la Fundación Nacional de Ciencias de EE. UU. (EF-0531762). Este estudio fue apoyado
financieramente por el proyecto de investigación Schu 1460/3 a CDS dentro del Programa Prioritario DFG
1127 “Radiación Adaptativa-Origen de la Diversidad Biológica”.
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El complejo de la gaviota argéntea (Larus argentatus -
fuscus - cachinnans)como grupo modelo para
radiaciones recientes de vertebrados holárticos
Dorit Liebers-Helbig, Viviane Sternkopf, Andreas J. Helbig{ y

Peter de Knijff
AbstractoTodavía es controvertido bajo qué circunstancias puede ocurrir la especiación en animales

que se reproducen sexualmente sin disyunción geográfica. De acuerdo con el modelo de especies en
anillo, una barrera reproductiva puede surgir a través del "aislamiento por distancia" cuando las
poblaciones periféricas de una especie se encuentran después de expandirse alrededor de una
barrera inhabitable. El ejemplo clásico de este tipo de especiación es la gaviota argéntea (Larus
argentatus)complejo con una distribución circumpolar en el hemisferio norte. Un análisis de la
variación del ADN mitocondrial entre 21 taxones de gaviotas indicó que los miembros de este
complejo se diferenciaron en gran medida en alopatría después de múltiples eventos de vicarianza y
colonización a larga distancia, no principalmente a través de "aislamiento por distancia".
En un enfoque reciente, aplicamos secuencias de intrones nucleares y marcadores
AFLP para compararlos con la filogeografía mitocondrial. Estos marcadores sirvieron
para reconstruir la filogenia general del género.Larúsy para probar el origen bifilético
aparente de dos especies (argentatus, hiperbóreo)así como la posición inesperada deL.
marinusdentro de este complejo. Los tres taxones son miembros de la radiación de la
gaviota argéntea pero experimentaron, en diferente grado, una amplia introgresión
mitocondrial a través de la hibridación. Se ilustran las discrepancias entre el árbol
genético mitocondrial y la filogenia taxonómica basada en marcadores nucleares.
1. Introducción
Ernest Mayr (1942), basado en ideas anteriores de Stegmann (1934) y Geyr (1938), propusieron
que el aislamiento reproductivo puede evolucionar en una sola especie a través de
D. Liebers-Helbig (*) y V. Sternkopf

Deutsches Meeresmuseum, Katharinenberg 14-20, 18439 Stralsund, Alemania Correo
electrónico: dorit.liebers@meeresmuseum.de
P. de Knijff
Departamento de Genética Humana, Centro Médico de la Universidad de Leiden, PO Box 9600, 2300
RC Leiden, Países Bajos
correo electrónico: knijff@lumc.nl

352 D. Liebers-Helbig et al.
“aislamiento por distancia” cuando las poblaciones periféricas se encuentran después de expandirse
alrededor de un área grande e inhabitable. Este modo de especiación a través de la "superposición
circular" (Mayr 1942) más tarde se denominó el modelo de "especies de anillo" (Cain1954). La
superposición geográfica entre taxones que están conectados en otros lugares a través de
poblaciones entrecruzadas es un elemento esencial de este modelo, porque es el flujo de genes en
curso lo que distingue a las especies en anillo de los casos de especiación alopátrica que se
organizan de forma más o menos circular (Irwin et al.2001a).
El ejemplo clásico del modelo de especies anulares se basó originalmente en el complejo de la
gaviota argéntea (Mayr1942). Este grupo comprende más de 20 taxones de grandes gaviotas (Haffer
mil novecientos ochenta y dos) que juntos ocupan un área de reproducción circumpolar en el
hemisferio norte. Fenotípicamente, los taxones difieren más obviamente en el tamaño corporal y en
a b
C d
mi F
gramo h
Figura 1Ejemplos de variación fenotípica dentro del complejo de la gaviota argéntea. (a)L.
michahellis, Lesbos, Grecia, (b)L. smithsonianus,Terranova, Canadá, (C)LA argentatus,
Róterdam, Países Bajos, (d)LA argentino,Leiden, Países Bajos, (mi)L. hiperbóreo,Svalbard, (F)
L. hiperbóreo,Churchill, Canadá, (gramo)L. marinus,Greifswald, Alemania, (h)L fuscus,Leiden, Países
Bajos. Fotos: P. de K. (a–c, e, f),contra (d, g, h)
El complejo de la gaviota argéntea 353
la oscuridad de su plumaje dorsal (ver Fig.1), que varía del gris pálido al negro (Malling
Olsen y Larsson2003). Según Mayr (1942), el grupo se originó en la región Aralo-Caspio,
desde donde las gaviotas se dispersaron en tres direcciones (Fig.2): (1) al oeste a través
del Mediterráneo hacia el Atlántico dando lugar al Mediterráneo (michahellis)y Atlántico
(atlántida)gaviotas argénteas; (2) al este hacia el interior de Asia dando lugar a la gaviota
de Mongolia (mongolicus)y (3) al norte del Océano Ártico. A lo largo de las costas del
norte de Eurasia, la población ancestral se expandió en ambos sentidos: (1) al oeste a
través de Escandinavia hacia Gran Bretaña e Islandia, diferenciándose en gaviotas de
lomo negro menores de manto oscuro (fusco),y (2) hacia el este hasta el Pacífico Norte
dando lugar a formas de manto progresivamente más pálido, taimirensis (Taimir),Birulai
yvegas (Siberia oriental), y en América del Norte (smithsoniano).Después del último
Máximo Glacial, se supone que las gaviotas argénteas norteamericanas cruzaron el
Atlántico Norte e invadieron Europa, donde
smithsoniano
glaucoides
vegas
argentatus
fusco
mongolicus
atlántida
heuglini
michahellis
cachinanos
Figura 2de Mayr (1942) modelo de especies anulares sobre la historia de diferenciación y colonización del complejo de
gaviotas argénteas. Mayr asumió un solo refugio Aralo-Caspio (óvalo anaranjado pálido)y una invasión más reciente
de gaviotas argénteas de América del Norte a Europa, donde ahora se superponen con gaviotas de lomo negro
menores (patrón de tablero de ajedrez). flechasindican rutas de colonización inferidas con progresión temporal desde
eventos antiguos hasta los más recientes indicados porsólido, rotoy flechas punteadas,respectivamente
ahora se superponen con las gaviotas de lomo negro menores (Mayr1942; Geyr1938). Mayr imaginó
que todos los taxones de la cadena circumpolar estarían conectados por el flujo de genes, mientras
que el arenque y las gaviotas de lomo negro en Europa, los extremos hipotéticos del anillo, han
alcanzado un aislamiento reproductivo completo y ahora coexisten como especies distintas.
Los intentos anteriores de probar el modelo de especies de anillos en estas gaviotas no
fueron concluyentes debido a la baja cantidad de variación recuperada de las aloenzimas
(Snell1991) y segmentos cortos y conservadores de ADN mitocondrial (Crochet et al.2002).
Nuestro trabajo ha demostrado para los “patiamarillos”L. cachinnanssubgrupo (Liebers et al.
2001) y para los de manto oscuroL fuscussubgrupo (Liebers y Helbig2002) que han surgido
barreras reproductivas parciales in situ entre taxones vecinos tanto dentro de la cadena de
taxones del norte (Océano Ártico - Atlántico NE) como del sur (Mediterráneo - Aralo-Caspio)
que Mayr (1942) plantearon la hipótesis de estar interconectados por el flujo de genes.
Hay algunos casos bien documentados de especies de anillos (ver, por ejemplo, Irwin et al. 2001b
para otro ejemplo aviar), la mayoría de los cuales indican que es probable que la fragmentación
alopátrica repetida de rangos grandes y aproximadamente circulares conduzca a la evolución de
múltiples barreras reproductivasantesla superposición circular y el aislamiento por distancia lo
hacen. En particular, el conocidoEnsatinacomplejo de salamandras en el oeste de América del Norte
(Wake1997), así como nuestros resultados obtenidos hasta ahora para el complejo de gaviotas
argénteas, se ajustan mejor a tal escenario. Esto significa que la fragmentación de rangos circulares,
muy probablemente debido a episodios repetidos de avance y retroceso glacial, puede ser un
mecanismo importante en las primeras etapas de una radiación en diversos grupos de vertebrados.
Ya hemos completado un estudio exhaustivo de la variación del ADN mitocondrial

(ADNmt) del complejo de la gaviota argéntea (Liebers et al.2004). El objetivo del presente
proyecto, financiado por la Fundación Alemana de Investigación durante 4 años, era
utilizar marcadores genéticos nucleares (genotipado AFLP, secuencias de intrones) para
probar una serie de hipótesis derivadas del estudio anterior. Se ha demostrado que la
técnica AFLP también es eficaz en varios grupos diferentes de aves, por ejemplo, en
gaviotas (de Knijff et al.2001),filoscopocurrucas (Bensch et al.2002), pinzón común (Wang
et al.2003),Hipólaiscurrucas (Secondi et al.2006), piquituertos del Nuevo Mundo
(Parchman et al.2006), y reinitas de alas doradas y azules (Vallender et al. 2007). Lo
mismo se aplica a la resolución de secuencias autosómicas (intrones), no solo para
grupos de especies de aves estrechamente relacionadas, comofiloscopocurrucas
(Bensch et al.2006) yÁguilaáguilas (Helbig et al.2005), sino también para resolver
filogenias aviares de orden superior (Hackett et al.2008).
2 Estado del arte
Investigamos la filogeografía de 20 taxones de gaviotas del hemisferio norte (Fig.3) y

una gaviota grande del sur (L. dominicanus)utilizando 1,5 kb de secuencia de ADN
mitocondrial. Esto incluía todo el gen del citocromo b y una parte hipervariable de la
región de control mitocondrial (HVR-1), que previamente se había demostrado que
ser muy informativo sobre la diferenciación evolutiva reciente de varios taxones

(Liebers y Helbig1999,2002; Liebers et al.2001).
La red de haplotipos (Fig.4) muestra una amplia divergencia genética dentro de este
complejo de gaviotas. Análisis de varianza molecular (Excoffier et al.1992) indicaron una fuerte
segregación de haplotipos a lo largo de límites taxonómicos, es decir, fenotípicamente
definidos. La importante estructura taxonómica y geográfica nos permite interpretar la
historia evolutiva de estas gaviotas con base en la variación genética mitocondrial. La gaviota
occidental (Larus occidentalis)de la costa oeste de América del Norte (rango no mostrado en la
Fig.3) se encontró que tenía haplotipos altamente divergentes en relación con todos los
demás taxones en este estudio y se considera como el grupo externo. Análisis de clados
anidados (NCA; Templeton1998) indicaron que la población del endogrupo ancestral fue
dividida por un evento de fragmentación alopátrica que condujo a la evolución de dos clados
principales: el clado I centrado en el Atlántico Norte y el clado II con una distribución
circumpolar. Suponiendo una tasa de divergencia del citocromo b de 1,6 % por millón de años
(Fleischer et al.1998), el evento de vicarianza inicial ocurrió hace unos 308 000 (IC 95 %: 102
000–602 000) años.L.argentatusyL. cachinnansson los dos taxones que actualmente contienen
los linajes de haplotipos más altamente divergentes y de ramificación más temprana (Fig.4).
Esto indica que son descendientes directos de las dos poblaciones ancestrales. Si los rangos
de reproducción actuales son una indicación, los ancestros del clado I probablemente vivieron
en el Atlántico nororiental (rango actual deargentatus), los antepasados del clado II vivían en
la región Aralo-Caspian (rango actual de cachinanos;Higo.5).
Como lo indica NCA, la población Aralo-Caspiana (ancestros del clado II) se extendió
por expansión de rango contiguo hacia la costa norte de Eurasia, luego hacia el oeste
hasta Gran Bretaña e Islandia (fuscorango) y el este en todo el norte de Siberia (vegas,
esquistisago)y América del Norte (smithsonianus, glaucescens, glaucoides; Higo.5). De
acuerdo con la teoría de Mayr, compartir haplotipos entre taxones adyacentes en este
rango circumpolar indica un flujo de genes en curso. Sin embargo, no encontramos
apoyo para el elemento clave de la hipótesis de las especies del anillo, es decir, una
invasión transatlántica de las gaviotas argénteas norteamericanas (smithsoniano)en
Europa Sin haplotipos típicos o derivados del Neárticosmithsonianofueron encontrados
en cualquier parte de Europaargentatuspoblación, ni siquiera en Islandia. Los extremos
del anillo circumpolar de taxones cruzados, por lo tanto, no se superponen. Además, las
gaviotas patiamarillas de las Islas Atlánticas (atlántida),Mar Mediterráneo (michahellis)y
Asia Menor (armenico)se derivan del Atlántico Norte (clado I), no de los ancestros Aralo-
Caspio (contra Mayr1942).
Dos aspectos más de la filogenia mitocondrial son sorprendentes. En primer lugar, dentro del
complejo de la gaviota argéntea anidan tres especies distintas que antes se pensaba que derivaban
de ancestros filogenéticamente más antiguos: gran gaviota de lomo negro (L. marinus) y gaviota
glauca (L. hiperbóreo),que se superponen ampliamente en el rango de reproducción entre ellos y con
otros miembros del complejo, y la gaviota cocinera del hemisferio sur (L. dominicanus).Esta última
evolucionó a través de la colonización a larga distancia de la misma población ancestral que la
gaviota sombría menor (Fig.4), lo que sugiere que los ancestros de las gaviotas cocineras eran
altamente migratorios, como todavía lo son las gaviotas de lomo negro nominales en la actualidad.
glaucescens
esquistisago
glaucoides
vegas
smithsoniano
taimirensis
fusco-grupo
atlántida
mongolicus
heuglini
barabensis
cachinanos
michahellis
armenico
Fig. 3Rangos de reproducción y lugares de muestreo (puntos)de los taxones de gaviotas investigados. Por
razones de claridad, los rangos ampliamente superpuestos se muestran en diferentes mapas, por ejemplo,
paraL.argentatus en la Fig. 8 y paraL. marinus,yL. hiperbóreoen la Fig. 9. Rangos deL. occidentalisy
L. dominicanusno se muestran
En segundo lugar, dos taxones son bifiléticos en la red de mtDNA: poblaciones de

europeos argentatus (azul pálido en la Fig.4) y dehiperbóreo (gris oscuro) cada uno contiene
haplotipos de ambos clados principales. Esto puede explicarse por la retención de
polimorfismos ancestrales y/o por el flujo de genes mitocondriales que se produjo después de
la división inicial en dos refugios separados.
En el caso deargentatus,hay evidencia de que ambos procesos estuvieron involucrados.
Marcadores AFLP nucleares (de Knijff et al.2001) presentadoargentatusestar más
estrechamente relacionado con los taxones del clado I (atlantis/michahellis).Dentro del clado I,
argentatushaplotipos dentro de lamarinus-grupo probablemente reflejan polimorfismo
antiguo. La ocurrencia geográficamente extendida de los haplotipos del clado II en los
argentatuspoblaciones parece ser la huella de un episodio pasado de flujo de genes. Aves
derivadas del refugio Aralo-Caspio, posiblemente miembros de un pre-heuglinipoblación,
debe haberse hibridado, quizás brevemente, con el ancestralargentatuspoblación del Atlántico
Norte. El linaje mitocondrial del clado II introgresado persistió y se diversificó hasta el día de
hoy en elargentatuspoblación.
clado yo clado II
N-Atlántico, Mediterráneo mundial
dominicano
atlántida/
michahellis
Radiación de Beringia
fusco-grupo
marino
armenico
hiperbóreo cachinanos
argentatus argentatus
occidentalis
grupo externo
Taxones de la radiación de Beringia
smithsoniano glaucescens mongolicus

hiperbóreo vegas heuglini
glaucoides esquistisago taimirensis
Figura 4Red de unión media (Bandelt et al.1999) de 160 haplotipos de ADNmt concatenados (citocromo b,
HVR-1) identificados en este estudio.Larus occidentalisfue designado como el grupo externo. Colores
representan taxones como se muestra en la Fig.3, Higo.8(L. argentatus),y la figura9(L. marinusy
L. hiperbóreo)
La aparente bifilia de las gaviotas glaucas (hiperbóreo)es más problemático. En las aves
paleárticas, encontramos solo haplotipos estrechamente relacionados o compartidos con los
europeos.argentatus (clado I), mientras Neárticohiperbóreosolo contenía una variedad de
haplotipos compartidos con los taxones de América del Norte y el Pacífico (clado II). En
Islandia se ha observado hibridación entre gaviotas glaucas y argénteas (Ingolfsson1970;
Vigfúsdottir et al.2008) y el noroeste de Canadá (Spear1987) y puede haber llevado a la
introgresión mitocondrial.
No encontramos una relación cercana entre la distancia genética mitocondrial y el
aislamiento reproductivo. El taxón más divergente en términos de ADN mitocondrial,
L. occidentalis,se hibrida extensamente con uno de los taxones del endogrupo,L. glaucescens,
glaucescens
smithsoniano
glaucoides
vegas
marino
esquistisago
taimirensis
fusco
mongolicus
atlántida heuglini
argentatus barabensis
michahellis cachinanos
armenico
clado yo clado II
Figura 5Modelo alternativo de la historia de colonización del complejo gaviota argéntea basado en las
secuencias de ADN mitocondrial. Se infieren dos antiguos refugios (Verde pálidoyóvalo anaranjado pálido).
Los rangos actuales de taxones derivados del refugio del Atlántico se muestran enverde,los derivados del
refugio Aralo-Caspio están ennaranja, patrón de tablero de ajedrezmuestra áreas de superposición. No se
produjo ninguna invasión de gaviotas argénteas desde América del Norte a Europa.L. marinusdesarrolló
aislamiento reproductivo en alopatría (probablemente en el noreste de América del Norte) antes de hacer un
contacto secundario con América del Nortesmithsonianoy euroasiáticoargentatus/fuscus.Dos eventos de
colonización separados del Atlántico al Mediterráneo llevaron a la diferenciación dearmenico y, mucho
después,michahellis. flechascomo en la figura2
a lo largo de la costa oeste de América del Norte (Bell1997). Por otro lado, nuestros
datos no apoyan la visión tradicional de la gaviota de lomo negro (L. marinus)siendo un
grupo externo en relación con el complejo de la gaviota argéntea. A pesar deL. marinus
está claramente aislado desde el punto de vista reproductivo de todas las especies con
las que coexiste, en la red mitocondrial está anidado entre taxones, varios de los cuales
se hibridan:argentatusXhiperbóreo (Ingolfsson1970; Lanza1987),michahellisXGraellsii (
furgoneta swelm1998), cachinanosXargentatus (Panov y Monzikov1999) y, a principios
del siglo XX,argentatusXfusco (Tinbergen1953).
3 Progreso reciente
El ADN mitocondrial por sí solo, debido a su modo de herencia materno y clonal, que puede estar
sujeto a barridos selectivos y efectos estocásticos de clasificación de linajes, no es suficiente para
reconstruir de manera sólida la filogeografía y la secuencia de eventos de divergencia que conducen
a una radiación reciente como la del arenque. complejo de gaviotas (p. ej., Sattler y Braun2000;
ballard y whitlock2004). Por lo tanto, estudiamos y seguimos trabajando en marcadores nucleares
autosómicos, es decir, heredados biparentalmente, con el fin de
yo Compare la genómica nuclear con la filogenia mitocondrial. Compare los

yo niveles de flujo de genes nucleares versus mitocondriales.
yo Identificar clases de marcadores que se segregan en las primeras etapas del proceso de
especiación y, por lo tanto, pueden ser aplicables en general al estudio de radiaciones recientes
en aves y quizás en otros vertebrados.
3.1 Marco filogenético para el complejo de la gaviota argéntea
Pregunta:¿Qué especies no incluidas en nuestro estudio hasta ahora podrían ser parte del
complejo de la gaviota argéntea? El complejo de la gaviota argéntea se ha visto
tradicionalmente como un grupo circumpolar del norte, pero ya hemos demostrado que una
especie del hemisferio sur (L. dominicanus)es de hecho parte de ella. Esto bien puede ser
cierto para un número de otras especies (Fig.6) que hasta ahora no se consideraban parte del
complejo ya sea por su menor tamaño corporal (L. californicus, L. canus)o debido a su
distribución en el hemisferio sur (L. pacificus).
Para responder a esta pregunta y, lo que es igualmente importante, para verificar la
congruencia entre la señal filogenética entre los genomas mitocondrial y nuclear, ampliamos
el muestreo de taxones tanto para secuencias mitocondriales (gen del citocromo b, HVR-1)
como para secuencias de intrones nucleares (LDH intrón 3 , VLD intrón 9, GAP intrón 11, BRM
intrón 15) para proporcionar un marco filogenético detallado para el complejo de la gaviota
argéntea (Sternkopf et al., en preparación).
Resultados:Resultó queL. californicus,aunque claramente más pequeño que todos los
demás miembros del grupo de gaviotas argénteas identificado hasta ahora, es de hecho un
miembro de este grupo (Fig.7), mientrascano izquierdoyL. delawarensisjuntos forman el grupo
hermano del complejo. Más específicamente,L. californicuses un miembro del clado II de la
red mitocondrial general (ver Fig.4) y se deriva dentro de la radiación de Beringia que se
diversificó principalmente en la región del Pacífico Norte-América del Norte (de Knijff et al.
2005; Sternkopf et al., en preparación).
La gran especie australianaL. pacificus,aunque superficialmente similar a
L. occidentalisyL. marinusdel Holártico yL. dominicanusdel hemisferio sur, no es
miembro del complejo. Forma un clado conL. crassirostris yL. belcheri,otras dos especies
del Pacífico con las que comparte una banda subterminal negra de la cola en plumaje
adulto. Este carácter no ocurre en los plumajes adultos en el complejo de la gaviota
argéntea.
a b
C d
Figura 6Miembros conocidos y nuevos candidatos para la radiación de la gaviota argéntea. (a)la gaviota
cocinera (L. dominicanus)es un representante del hemisferio sur del complejo de la gaviota argéntea,
anidado dentro del clado II. (b)La gaviota del Pacífico (L. pacificus)se parece a la gaviota cocinera a primera
vista. Habita las costas de Australia y Tasmania. (C)Gaviota común (L. canus)y (d)gaviota californiana (L.
californicus)son gaviotas más pequeñas que se reproducen en todo el Paleártico y en el interior de América
del Norte, respectivamente. Fotos: (a)E. Stich, Isla Rey Jorge, Antártida. (b)N. Murray, Phillip Island, Australia. (
C)P. de K., Róterdam, Países Bajos. (d)P. de K., Palo Alto, California
En general, la filogenia de Laridae se ha resuelto mucho mejor que en intentos anteriores

(Crochet et al.2000; Pons et al.2005). Monofilia del género Larúsestaba totalmente apoyado
(triángulo azul en la Fig.7), pero solo con la exclusión de la gaviota (anteriormente llamadaL.
minutuspero renombrado comohidrocoleus minutus;cf. Helbig 2005). Esta especie es un
miembro del clado basal de no-Larúsgaviotas (Rissa, Xema, Pagophila, Creagrus).Nuestros
resultados apoyan fuertemente una relación de taxón hermano entre la gaviota pequeña y la
gaviota de Ross (Rhodostethia rosea).Como consecuencia taxonómica, proponemos excluir la
gaviota pequeña del géneroLarúsy en su lugar lo agrupe junto con la gaviota de Ross en el
génerohidrocoleo (Sternkopf et al., en preparación).
Dentro de la región de control mitocondrial, las “gaviotas enmascaradas” compartían un
inserto más grande (31 pares de bases) (L. genei–ridibundusgrupo), dando apoyo adicional
(más allá de la variación de un solo nucleótido) para la monofilia de este grupo. La bifilia de las
gaviotas grandes también es evidente en las secuencias genómicas mitocondriales y nucleares
combinadas, lo que respalda aún más el modelo de dos refugios de su historia filogenética
(Fig.5).
3.2 Historia de la población de taxones "polifiléticos" en el

árbol genético mitocondrial
Pregunta:Varios taxones estaban representados por un patrón bifilético en la red genética

mitocondrial, más notablementeL.argentatusyL. hiperbóreo (ver figura4), pero como
L. smithsonianus
L. glaucescens
L. dominicanus
l heuglini clado II
L. cachinnans
88 L. californicus
blanco grande-
L. michahellis
gaviotas de cabeza
L atlantis
L. marinus clado yo
L.argentatus
L. hiperbóreoEUR
L. occidentalis
cano izquierdo
pequeño blanco-
L c kamtchatkensis
L. delawarensis gaviotas de cabeza
L. belcheri
L. crassirostris cola de banda
87
L. pacífico gaviotas
L. heermanni
79 L. audouinii
L. hemprichii
cabeza negra
92 L. melanocéfalo
gaviotas
L. relictus
L. ichthyaetus
L. atricilla
L. puntuacionesbii
gaviotas encapuchadas
L. pipixcán
L. modesto
83 L. bulleri
90 L. novaehollandiae
L. cirrocéfalo
L. hartlaubii
gaviotas enmascaradas
L. maculipennis
L. serrano
L. ridibundus
91 L. genei
filadelfia
Rissa brevirostris
Rissa tridactyla
Pagophila eburnea
xema sabini gaviotas basales
Creagrus furcatus
Rhodostethia rosea
hidrocoleo minutus
Estolido anus
Chlidonias leucopterus charranes
Chlidonias niger
Sterna sandvicensis
Stercorarius longicaudus págalos
Stercorarius pomarinus
Figura 7Árbol de consenso bayesiano de gaviotas de la familia Laridae basado en secuencias mitocondriales
concatenadas (citocromo b, HVR-1) e intrones nucleares (LDH 3, VLD 9, GAP 11, BRM 15). Los números en las
ramas son soporte de probabilidades posteriores bayesianas (GTR+gramomodelo, 20.000 generaciones),
gruesolas ramas indican valores de soporte superiores a 95.L. californicus, L. canus,y
L. pacificus,tres especies sospechosas de ser posibles miembros del complejo de la gaviota argéntea, sonsombreado
Monofilia del géneroLarússe muestra por untriangulo azul
descubrimos mientras tanto, esto ahora también es cierto paraL. marinus (Sternkopf et al., en
preparación). Surge la pregunta de si los individuos que pertenecen a diferentes clados en el
árbol genético mitocondrial pero que coexisten en la misma área geográfica forman
comunidades reproductivas únicas o separadas.
En la red mitocondrial,L. argentatus (azul pálido en la Fig.4) muestra un origen
bifilético y una fuerte subestructura geográfica dentro de su rango paleártico. Los
haplotipos del clado I (parte verde en la Fig.8) predominan en las poblaciones del norte,
los haplotipos del clado II en el sur (parte naranja en la Fig.8; Sternkopf et al., en
preparación).
gaviota glaucaL. hiperbóreo,que también es bifilético en la red (gris oscuro en la Fig.4),
muestra una segregación aún más pronunciada de los haplotipos mitocondriales (Fig.9).
Todas las aves de América del Norte exhiben haplotipos del clado II (parte naranja en la Fig.9),
mientras que las poblaciones europeas, excepto dos aves (invernantes, no reproductoras)
9:5 12:11 9:2 16:4 11:3 28:3
argentatus
argentino
4:17 9:24
5:22 7:16
2:24 6:34 8:13 5:29 5:15 1:16
clado yo clado II
Figura 8Rangos de reproducción, lugares de muestreo (puntos)y composición haplotípica (gráficos

circulares)de gaviotas argénteas en toda Europa (norte¼377). Áreas de entremezclado entre las dos
subespecies. argentatusyargentinosonsombreado Coloresengráficos circularescorresponden al clado
I (verde)y clado II (naranja)haplotipos en la red mitocondrial (ver Fig.4). Elnegroparte de la población
estonia representa a dos individuos que llevan una distribución surcachinnans-secuencia tipo
L. marinus L. hiperbóreo
neártico
11:7 0:18
1:4 0:17
2:0 9:0
14:1 3:2
4:0 10:0
12:0 Paleártico 8:0
clado yo clado II
Figura 9Rangos de reproducción, lugares de muestreo (puntos)y composición haplotípica (gráficos circulares)de
L. marinus (n¼56) yL. hyperboreus (n¼67).Coloresengráficos circularescorresponde al clado I
(verde)y clado II (naranja)haplotipos en la red mitocondrial (ver Fig.4)
de las Islas Feroe, portan haplotipos del clado I (parte verde en la Fig.9). Tanto la
población neártica como la paleártica adquirieron sus haplotipos mitocondriales a través
de la hibridación, en América del Norte consmithsoniano,o en Europa con argentatus.
De las cuatro grandes gaviotas de lomo negro europeasL. marinuspoblaciones, todos

menos un individuo de las Islas Feroe muestran haplotipos del clado I (parte verde en la Fig.9).
entre norteamericanosL. marinus,el clado I todavía predomina, pero los haplotipos del clado II
representan una cantidad sustancial de variación de secuencia.
Decidimos utilizar la técnica de polimorfismos de longitud de fragmentos
amplificados (AFLP) (Vos et al.1995) porque permite la detección de un gran número de
loci autosómicos y ha demostrado ser muy informativo (Bensch y Akesson2005).
Resultados totales:Una extensa selección de AFLP entre siete grandes taxones de gaviotas
arrojó 17 combinaciones de cebadores que pudieron calificarse con suficiente confiabilidad. La
matriz AFLP resultante constaba de las puntuaciones 1/0 de 230 loci entre 369
individuos (Sternkopf et al., en preparación). Realizamos un análisis de componentes

principales (PCA), asumiendo una correlación dentro del grupo. La gráfica de los tres primeros
valores de los componentes principales, que explican el 72,7 % de la variación total de los
datos, se muestra en la Fig. 10. Esto demuestra claramente que cinco taxones, incluidos
argentatus ymarino,están genéticamente bien definidos y forman grupos distintos. Los dos
taxones restantes,smithsonianoyhiperbóreo,muestran grupos parcialmente superpuestos que
sugieren fuertemente una afinidad genética autosómica cercana.
3.2.1 Evolución de las gaviotas argénteas en Europa
Por medio de AFLP loci, no fue posible reproducir la fuerte distribución bifilética entre
las gaviotas argénteas europeas.L.argentatuscomo se observó utilizando secuencias
mitocondriales (Fig.4). No pudimos detectar diferencias significativas en las frecuencias
de AFLP entre las gaviotas argénteas agrupadas según el clado I definido por ADNmt
frente al clado II (resultados no mostrados). Además, cuando comparamos los patrones
de frecuencia de AFLP entre las poblaciones de gaviotas argénteas del norte y del sur
(ver Fig.8), no se encontraron diferencias significativas (resultados no mostrados).
Incluso si comparamos las dos colonias más extremas con haplotipos de ADNmt del
clado I casi puros del Mar Blanco y los haplotipos de ADNmt del clado II casi puros de los
Países Bajos, no se observaron diferencias significativas en la distribución de AFLP.
Por el contrario, el análisis PCA (Fig.10) y varias ejecuciones de análisis de estructura
(Pritchard et al.2000; Falush et al.2007) ilustran que las gaviotas argénteas del clado I y II no
eran separables (no se muestran los resultados), sino que formaban un grupo uniforme
separado de las otras seis especies (Fig.10). La diferenciación de poblaciones y las relaciones
de flujo de genes nucleares también mostraron queL.argentatusde ambos clados
mitocondriales no se diferenciaron significativamente entre sí, mientras que sí lo son de las
otras especies (Sternkopf et al., en preparación).
Estos resultados confirman nuestra predicción de que las gaviotas argénteas del clado I y clado II
forman una sola comunidad reproductiva. Su biphyly en el árbol de genes mitocondriales debe, por
lo tanto, ser la huella del flujo de genes pasado entre aves derivadas de diferentes refugios
ancestrales.
Esto apoya nuestra hipótesis original (Liebers et al.2004) que las aves derivadas
del refugio Aralo-Caspio, posiblemente miembros de un pre-heuglinipoblación,
debe haberse hibridado con la ancestralargentatuspoblación del Atlántico Norte. El
linaje mitocondrial del clado II introgresado persistió y se ha diversificado hasta el
día de hoy en elargentatuspoblación.
3.2.2 Historia filogeográfica de las gaviotas glaucas reproductoras circumpolares
Entre las crías circumpolares de gaviota glauca L.hiperbóreo,vemos una distribución

geográfica aún más distinta de los haplotipos mitocondriales. Todohiperbóreo de las colonias
de reproducción del Neártico muestran exclusivamente haplotipos del clado II, mientras que
las aves del Paleártico muestran secuencias del clado I (Fig.9). Los dos únicos paleárticos
–2
–4
- 15
–6 – 10
–5
–8 0
– 10 5
–5 0 10
5 10
cachinanos
michahellis / atlantis smithsoniano
fuscus / graellsii hiperbóreo
argentatus / argenteus marino
Figura 10Análisis de componentes principales de la matriz de datos total 1/0 AFLP (norte¼369 individuos). El eje
representa los tres primeros valores de los componentes principales
hiperbóreocon secuencias del clado II eran individuos que pasaban el invierno en las Islas
Feroe. Los marcadores AFLP nucleares no se cosegregan con los mitocondriales y no
muestran diferenciación entre las poblaciones neártica y paleártica. Por el contrario, las aves
neárticas y paleárticas se agrupan y se superponen significativamente con las gaviotas
argénteas norteamericanas (L. smithsonianus)lo que indica que ambos taxones son los
parientes más cercanos entre sí según el marcador autosómico (Fig.10).
Lo más probable es que la gaviota glauca sea un miembro original de la radiación de
Beringia (Fig.4) que se originó y diversificó a lo largo de las costas del Pacífico Norte/Ártico
noroccidental de América del Norte y el noreste de Rusia. Sólo muy recientemente, por
ejemplo, después del último evento de desglaciación del Neártico, podríahiperbóreose ha
extendido al norte de Europa donde entró en contacto conargentatusaves del clado I (ver Fig.8
, porción verde). poblaciones paleárticas dehiperbóreodeben haber adquirido sus haplotipos
mitocondriales a través de la hibridación conargentatusen Europa. Hasta ahora, nuestro
muestreo paleártico llega tan al este como Taimyr. Para resolver completamente la expansión
circumpolar, también deberíamos incluir muestras del noreste de Siberia. Obviamente, solo
con esas muestras podemos reconstruir la historia poblacional completa y el proceso de
introgresión dehiperbóreo.
Ya en esta etapa de investigación, las gaviotas glaucas constituyen un ejemplo de libro de

texto de "toma de control mitocondrial", es decir, el reemplazo completo de los haplotipos
mitocondriales originales (clado II) a través de la hibridación con aves del otro clado.
3.2.3 Patrón de Colonización de las Gaviotas Dorsales Mayores
Los marcadores nucleares confirmaron la posición filogenética demarinodentro del complejo de la

gaviota argéntea (Fig.7) contrariamente a la opinión tradicional de que la gran gaviota de lomo negro
es un grupo externo distinto, aunqueL. marinusestá totalmente aislada reproductivamente de todas
las especies con las que coexiste (Liebers et al.2004).
Basado en secuencias mitocondriales,marinomuestra una estructura bifilética. Las
poblaciones paleárticas portan exclusivamente el clado I, con una sola excepción en las Islas
Feroe, mientras que las poblaciones neárticas muestran una proporción sustancial de
haplotipos del clado II (Fig.9). Con base en los loci AFLP, no es posible distinguir de manera
confiable entre norteamericanos y europeos.marino (Sternkopf et al., en preparación).
Sugerimos quemarinose desarrolló originalmente en el norte de Europa como miembro
del clado I. Solo muy recientemente colonizó las costas del este de América del Norte. Los
resultados combinados mitocondriales y AFLP sugieren fuertemente un breve período de
hibridación en el Neártico con miembros de la radiación de Beringia, después del cualmarino
rápidamente volvió a aislarse reproductivamente. Este proceso involucró solo a unos pocos
individuos y duró solo un número limitado de generaciones. Los haplotipos mitocondriales del
clado II, que invadieron la población a través de la introgresión, ahora están capturados en el
acervo genético demarinoy enmascarar la verdadera historia filogenética de esta especie.
3.2.4 Resumen
mazo (2005) sugirió que alrededor del 10% de las especies animales, en su mayoría las más
jóvenes, se hibridan y, por lo tanto, continúan intercambiando material genético a través de la
introgresión. Muchos estudios de especies estrechamente relacionadas revelan introgresión,
principalmente del ADN mitocondrial heredado de la madre. Por ejemplo, en mamíferos, se
descubrió por primera vez en ratones domésticos (Ferris et al.1983; Prager et al.1993), seguido
de una lista creciente de especies, por ejemplo, campañoles (Tegelström1987), ciervos (Cathey
et al.1998), liebres (Thulin et al.1997; Melo-Ferreira et al.2005), y ardillas listadas (Good et al.
2008). En aves, la introgresión por hibridación ha sido probada enHipólais currucas (Secondi et
al.2006),Vermívoracurrucas (Vallender et al.2007), y banabaquit del Caribe (Bellemain et al.
2008).
Las consecuencias de tal hibridación críptica hacen eco y enfatizan que se necesita extrema
precaución cuando se interpretan genealogías de un solo gen, especialmente aquellas
basadas solo en el ADN mitocondrial (Brito y Edwards2008). La representación bifilética de las
gaviotas argénteas, las gaviotas glaucas y las grandes gaviotas de lomo negro en la red de
haplotipos mitocondriales proporciona una ilustración sorprendente de cómo pueden surgir
discrepancias entre un árbol genético (en este caso, basado en genes mitocondriales).
ADN) y una filogenia taxonómica (basada en marcadores autosómicos). El hecho de que algunas
especies, aparentemente debido a episodios pasados de flujo de genes, contengan haplotipos
mitocondriales altamente divergentes sugiere que la clasificación de linajes podría tener resultados
bastante diferentes e impredecibles (Gadagkar et al.2005; Rokas y Carroll2005).
En especies estrechamente relacionadas, como la radiación de la gaviota argéntea, solo un
análisis multilocus de marcadores mitocondriales y nucleares probablemente pueda revelar la
compleja historia de la subdivisión de la población y el flujo de genes. Nuestros resultados destacan
la importancia de utilizar información de marcadores genéticos independientes al evaluar la historia
evolutiva de una radiación adaptativa.
4 Perspectivas futuras
A pesar del uso de una amplia variación de la secuencia de ADN mitocondrial, la variación de la
secuencia de intrones autosómicos y una gran cantidad de loci AFLP autosómicos que se segregan
de forma independiente, no pudimos reconstruir completamente los eventos demográficos antiguos
que dieron como resultado la posición bifilética actual de tres miembros de la gaviota grande.
radiación: gaviota argénteaL. argentatus,gaviota glaucaL. hiperbóreo,y gran gaviota de lomo negroL.
marinus.Para una visión mucho mejor de los eventos, probablemente relativamente recientes, que
dan lugar a la variación genética actual observada en la radiación de la gaviota argéntea, se requiere
mucha más información de ADN autosómico. Aquí, vemos dos enfoques claramente distintos. El
primero es la identificación de una gran cantidad de polimorfismos de nucleótido único (SNP)
autosómicos codominantes distribuidos en todo el genoma que podrían usarse para reconstruir las
afinidades genéticas entre grupos de individuos estrechamente relacionados. Tal enfoque se puede
aplicar con éxito, como ha sido claramente demostrado por una serie de estudios que utilizan
muchos miles de SNP entre poblaciones humanas cercanas y lejanas (Jakobsson et al.2008; Lao et al.
2008; Li et al.2008; Noviembre et al.2008). Otro enfoque implica el uso de tramos no recombinantes
relativamente cortos pero altamente polimórficos de intrones y/o exones autosómicos que podrían
servir como múltiples bloques de minihaplotipos. Dichos haplotipos autosómicos, cuando son
suficientemente polimórficos, son ideales no solo para rastrear sutiles procesos de flujo de genes
entre poblaciones, sino que también facilitarán la sincronización relativa de tales procesos. Para
ambos enfoques, ahora hay un número creciente de soluciones biotecnológicas, incluida la
secuenciación de rendimiento extremadamente alto (Vera et al.2008), y la identificación de
fragmentos de genoma conservados simplemente comparando el creciente número de genomas
completos (casi) completamente secuenciados (Backström et al.2008).
Además, los niveles de divergencia en los loci autosómicos versus cromosómicos Z podrían
compararse para probar si el refuerzo desempeñó un papel importante en el proceso de
especiación de las gaviotas grandes. Presumimos que la diferenciación ha progresado más en
el cromosoma Z que en los autosomas porque es más probable que los loci del cromosoma Z
estén relacionados o vinculados a los loci que causan incompatibilidades reproductivas
(Servedio y Sætre2003; Sætre et al.2003; Borge et al.2005; Mank et al.2007; Qvarnström y
Bailey2009). Finalmente, las firmas genéticas contrastantes de aves
Los cromosomas W y Z pueden ser informativos para inferir y reconstruir patrones de flujo de genes
específicos del sexo en gaviotas grandes.
Con este fin, ya hemos identificado -35.000 fragmentos genómicos autosómicos cortos
entre cuatro miembros diferentes del complejo de la gaviota argéntea que podrían servir
como base para futuras investigaciones utilizando los enfoques descritos anteriormente.
AgradecimientosNos gustaría agradecer a todos los colegas que proporcionaron muestras o ayudaron
durante el trabajo de campo, al Instituto de Ecología (Universidad de Jena) por el uso de las instalaciones del
laboratorio y a M. Ritz por su ayuda para generar los perfiles AFLP. M. Braun y S. Bensch hicieron
comentarios útiles sobre versiones anteriores de este manuscrito. Esta investigación fue apoyada por dos
subvenciones de la Fundación Alemana de Investigación a DLH (LI 1049/1-1 y 1-2).
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Divergencia genética y evolución del
aislamiento reproductivo en ranas de
agua del Mediterráneo oriental
Jörg Plötner, Thomas Uzzell, Peter Beerli, Çiğdem Akın, C. Can Bilgin,
Cornelia Haefeli, Torsten Ohst, Frank Köhler, Robert Schreiber, Gaston-
Denis Guex, Spartak N. Litvinchuk, Rob Westaway, Heinz-Ulrich Reyer,
Nicolas Pruvost, y Hansju €rg Hotz
AbstractoRanas de agua [géneroPelophylax (Rana)]que ocurren alrededor del mar Mediterráneo

oriental brindan la oportunidad de estudiar las primeras etapas de la especiación. La geografía de la
región del Mediterráneo oriental ha cambiado drásticamente desde el Mioceno medio como
resultado de los movimientos de las placas litosféricas adyacentes y los movimientos verticales de la
corteza a escala regional (ascenso y hundimiento). Durante varios cientos de miles de años, entre
hace 6 y 5 millones de años (Mya), la cuenca del Mediterráneo estuvo aislada del Océano Atlántico y
se secó (la Crisis de Salinidad Messiniense; MSC). Los datos geológicos sugieren que el linaje
endémico de ranas acuáticas en Chipre fue aislado por la inundación de la cuenca del Mediterráneo
por agua salada al final del MSC, alrededor de 5,5 a 5,3 millones de años. Esto sugiere una tasa de
errores genéticos no corregidos.
J. Plötner (*), T. Ohst y R. Schreiber

Museo f€ur Naturkunde, Leibniz-Institut f€ur Evolutions- und Biodiversit€atsforschung an der
Humboldt-Universit€en zu Berlin, Invalidenstraße 43, 10115 Berlín, Alemania Correo electrónico:
joerg.plotner@mfn-berlin.de
T. Uzzell
Laboratorio de Sistemática Molecular y Ecología, Academia de Ciencias Naturales, 1900 BF
Parkway, Filadelfia, PA 19103, EE. UU.
P. Beerli
Departamento de Computación Científica, Universidad Estatal de Florida, Tallahassee, FL 32306-4120, EE. UU.
C. Akın y CC Bilgin
Departamento de Biología, Laboratorio de Biodiversidad y Conservación, Universidad Técnica de Medio
Oriente, 06531 Ankara, Turquía
C. Haefeli, G.-D. Guex, H.-U. Reyer y N. Pruvost
Instituto f€ur Evolutionsbiologie und Umweltwissenschaften, Universidad€en Z€urich-Irchel,
F. Köhler
Museo f€ur Naturkunde, Instituto Leibniz f€ur Evolutions- und Biodiversit€atsforschung an der
Humboldt‐Universit€en zu Berlin, Invalidenstraße 43, 10115 Berlín, Alemania
Departamento de Investigación, Museo Australiano, 6 College Street, Sydney 2010, NSW, Australia

374 J. Plötner et al.
divergencia de aproximadamente 1,1% por millón de años (Mi). Las estimaciones de tiempo de
divergencia basadas en esta tasa concuerdan bien con la cronología de eventos en la historia
de la deformación de la corteza y el desarrollo del paisaje en la región del Mediterráneo
oriental.
A pesar de una gran similitud en la morfología, las ranas acuáticas del este
del Mediterráneo muestran una divergencia genética considerable, lo que
indica la existencia de varias especies evolutivas en diversos niveles de
diferenciación. Sobre la base de dos genes mitocondriales (mt) (ND2 y ND3), se
han identificado varios linajes:Pelophylax bedriagae, P. cretensis, P.
epeiroticus, P. ridibundus (Europa), seis linajes de Anatolia, todos subsumidos
provisionalmente bajo el nombrePAG.cf.bedrigae,y un linaje distinto
restringido a Chipre. Los datos genéticos de las zonas de transición en el este
de Grecia/oeste de Anatolia, el suroeste de Anatolia y el sureste de Anatolia,
junto con los resultados de los experimentos de elección de hembras, indican
que los mecanismos de antihibridación están débilmente desarrollados en las
ranas de agua del este del Mediterráneo. La incompatibilidad genética,
expresada por la tasa promedio de eclosión de cruces heteroespecíficos,
aumenta con la divergencia genética medida por la distancia no corregida
estimada a partir de secuencias de mtDNA. Sin embargo, las tasas de eclosión
de cruces heteroespecíficos muestran una variabilidad extremadamente alta y
se originaron híbridos F1 viables a partir de casi todos los cruces.
Palabras claveRanas de agua - Pelophylax (Rana) - Mediterráneo oriental - Diversidad genética

- Geología - Tiempo de divergencia - Incompatibilidades genéticas - Mecanismos de
antihibridación - Especiación
SNLitvinchuk
Instituto de Citología, Academia Rusa de Ciencias, Tikhoretsky prospekt 4, 194064 San
Petersburgo, Rusia
IRES, Universidad de Newcastle, Newcastle-upon-Tyne NE1 7RU, Reino Unido H.
Hotz
IRES, Universidad de Newcastle, Newcastle-upon-Tyne NE1 7RU, Reino Unido H.
Hotz
Divergencia genética y evolución del aislamiento reproductivo 375
1. Introducción
Las especies son entidades reales en la naturaleza, originadas en un proceso interminable

llamado especiación, pero su historia es difícil de reconstruir debido a muchos parámetros y
eventos desconocidos. La especiación es un proceso de adaptación impulsado por la selección
natural o sexual; implica complejos mecanismos genéticos, ecológicos y conductuales. Se han
propuesto varios modos de especiación: (1) especiación alopátrica, incluida la especiación
inducida por cuellos de botella (revisada por Carson y Templeton1984), (2) especiación
simpátrica (revisada por Bolnick y Fitzpatrick2007), y (3) la especiación a través de la
hibridación (por ejemplo, Bullini1994, Seehausen2004; Baak y Rieseberg,2007). Sin embargo,
en casi todos los casos, las fuerzas evolutivas convencionales, como la mutación, la selección y
la deriva, conducen a distintos linajes de poblaciones de antepasados y descendientes con
grupos genéticos específicos y tendencias evolutivas distintas.
La especiación suele comenzar con la acumulación de diferencias genéticas entre
poblaciones aisladas. Si poblaciones tan diferenciadas entran en contacto secundario, las
diferencias entre ellas pueden favorecer la evolución de mecanismos de antihibridación y
anticompetencia (Remington1968), que reducen los apareamientos inútiles entre las nuevas
poblaciones simpátricas y disminuyen la competencia entre ellas. Ni la especiación en sí
misma ni el establecimiento de estas secuelas de la especiación dependen necesariamente del
grado de divergencia genética de dos linajes; genes individuales o complejos de genes, en
lugar de genomas como un todo, pueden ser las unidades de especiación (por ejemplo, Wu
2001).
Ranas de agua [géneroPelophylax (Rana)]distribuidos por el mar Mediterráneo oriental son
un grupo ideal de vertebrados para estudiar los procesos de especiación, especialmente en
sus primeras etapas, porque representan una radiación biológica genética y
filogenéticamente compleja que comprende diferentes niveles de diferenciación molecular y
de organismos. Además, la complejidad geomorfológica de la región permite analizar los
efectos de los procesos geológicos y el cambio ambiental en la diversificación genética y la
especiación. En particular, la formación de cadenas montañosas como las Montañas del Norte
de Anatolia (las Montañas Pontide, paralelas a la costa del Mar Negro) y las Montañas Tauro
(desde el suroeste de Anatolia, a lo largo de la costa mediterránea hasta la parte norte del
sureste de Anatolia ), el levantamiento de la meseta de Anatolia entre estas cadenas
montañosas, y el desarrollo de otras cadenas montañosas más localizadas en bloques
elevados delimitados por zonas de fallas activas puede haber tenido un impacto considerable
en la distribución actual y la diversidad genética de las ranas acuáticas y otros grupos de
organismos en esta área. El cambio climático cíclico, incluidas las repetidas glaciaciones en los
últimos -3 Ma en latitudes altas del norte de Europa y Asia occidental (p. ej., Ehlers y Gibbard
2007), probablemente redujo el tamaño de las poblaciones y las aisló en áreas de refugio del
sur (Hewitt2000,2004). Además, las zonas de contacto entre distintos linajes genéticos pueden
usarse para probar los efectos de la divergencia alopátrica sobre contactos secundarios.
Las ranas de agua del Mediterráneo oriental se encuentran en muchas islas, separadas del continente
por barreras efectivas de agua salada. Debido a que la piel de rana es fácilmente permeable a los iones del
agua salada, estas barreras impiden el intercambio de individuos entre islas.
y poblaciones continentales. Las ranas de agua se han introducido en muchos países

europeos (p. ej., Schmeller et al.2007; Holsbeek et al.2008; Ohst2008) pero, siempre que
ningún individuo haya sido introducido en las islas por humanos o llegado a través de rafting
(por ejemplo, Vences et al.2003; Heinicke et al.2007), y siempre que las poblaciones originales
en las tierras continentales adyacentes no hayan sido reemplazadas por otros linajes, la edad
de las barreras de agua salada que aislan pares de poblaciones de ranas de agua debe
corresponder al tiempo mínimo en que tales pares de poblaciones han estado genéticamente
aisladas (Beerli et al.1996).
Durante un estudio de 6 años, hemos estimado, para varios pares de poblaciones, la cantidad de
divergencia genética utilizando diferentes conjuntos de marcadores moleculares, y hemos analizado
el papel de la incompatibilidad genética y los mecanismos de antihibridación para la especiación en
las ranas de agua del Mediterráneo oriental. Las ranas estudiadas representan al menos cuatro
especies conocidas y varias especies crípticas no descritas: una especie delPelophylax ridibundus
grupo yP. epeiroticusen el Peloponeso,P. cretensis (Creta),
P. bedriagae (El Levante), una forma restringida a Chipre, y seis más o menos diferenciadas
ridibundus-formas similares distribuidas en Anatolia y en algunas islas del Mediterráneo. Estas
últimas seis formas y la forma chipriota se han subsumido provisionalmente bajo el nombre
PAG.cf.bedrigae (por ejemplo, Plötner et al.2001, Haefeli et al., inédito) porque su estado
sistemático aún no está claro (Akın et al., en prensa).
2.1 Muestreo de taxones
Se recolectaron ranas en diferentes localidades de Anatolia y Grecia, incluidas las

islas Chios, Creta, Chipre, Evvoia, Ikaria, Karpathos, Kerkyra (Corfú), Kythira, Lesbos,
Rhodos, Samos y Zakynthos (Tabla1). Beerli et al. publicaron información detallada
sobre la localidad. (1996), Haefeli (2005), Parecido (2007), Plötner et al. (2001,2009),
y Akın et al. (2010).
2.2 Estimación de la divergencia genética
La divergencia genética se estimó utilizando tres conjuntos de datos independientes:

aloenzimas (productos de hasta 33 loci independientes; Beerli et al.1996, y datos no
publicados), secuencias de nucleótidos y aminoácidos de dos genes mitocondriales
(subunidades 2 y 3 de NADH deshidrogenasa o ND2 y ND3; por ejemplo, Plötner et al.2008,
Akın et al., en prensa), y secuencias de nucleótidos del intrón 1 de albúmina sérica (SAI1) y un
retrotransposón similar a la repetición 1 de pollo no LTR (ranaCR1) que se detectó en SAI1 de
especies de ranas acuáticas (Plötner et al.2009).
tabla 1Distancias genéticas entre pares de poblaciones estimadas sobre la base de secuencias de nucleótidos (nu) y aminoácidos (aa) de dos genes mitocondriales
(ND2, ND3), y por datos electroforéticos de proteínas (D*Nei,Beerli et al.1996). Los tiempos mínimos de aislamiento geológico se comparan con tiempos parciales
putativos estimados a partir de distancias p medias utilizando una tasa de divergencia genética no corregida de 1,1% por My. Entre paréntesis: número de
individuos/número de haplotipos. cre: P. cretensis (de Demati, Kastelli, Lavris y Skinias), cf.cama: p.cf.bedriagae, epe: P. epeiroticus, per: P. perezi, sah: P.
saharicus, kur: P. kurtmuelleri (los individuos del Peloponeso se originaron en las siguientes poblaciones: Kalanistra, Kaminia, Kavasilas, Lake Stimfalias, Nea
Manolada y Skala)
par de población Estimado tiempo minimo Población p Distancia (nu) [%] p Distancia (aa) [%] D*Nei
tiempo fraccionado de geología par mínimo Media DE Máx. Mín. Media SD Máx.
(ND2 + ND3) aislamiento
[Mía] [Mía]
España (1/1) Marruecos (9/9) 14.8 5.3 por - sah 16,18 16,33 0,114 16,47 9,17 9,28 0,156 9,39 0,550
Creta (9/7) Akçapinar (4/3) 9.7–13.4 5.3 o 10.0 cre-cf.cama 10,53 10,71 0,135 10,89 4,38 4,60 0,215 4,81 0,584
Peloponeso (10/6) cre-kur 11,18 11,44 0,178 11,69 5,25 5,47 0,220 5,69 0,698
Lechena (2/1) cre – epe 14,60 14,74 0,114 14,89 7,88 7,99 0,156 8,10 0,530
Chipre (3/2) Ceyhan, 5,6–6,0 5.3 cf.cama -cf. 6,39 6,46 0,070 6,53 3,49 3,60 0,156 3,71 –
Cevlik (4 /4) cama
Silicona (2 /1) cf.cama -cf. 6,17 6,17 0,000 6,17 3,49 3,60 0,156 3,71 –
cama
W-Siria (3/3) cf.cama – cama 6,61 6,85 0,357 7,26 2,63 3,06 0,345 3,50 –
Chipre del Norte (2/1) Silifke (2/1) 1,0–3,6 5.3 cf.cama -cf. 1,09 1,09 0,000 1,09 1,53 1,53 0,000 1,53 –
Divergencia genética y evolución del aislamiento reproductivo
cama
Ceyhan, cf.cama -cf. 3,92 4,02 0,112 4,14 3,06 3,06 0,000 3,06 –
Cevlik (4 /4) cama
Kárpatos (3/1) Akçapinar (4/3) 0,43–1,3 1,8–3,0 cf.cama -cf. 1,38 1,42 0,050 1,45 0,87 0,98 0,156 1,09 0,26
cama
Fethiye, Kas, cf.cama -cf. 0,36 0,47 0,094 0,58 0,44 0,55 0,156 0,66 –
Antalia (4/4) cama
Rodos (2/1) Akçapinar (4/3) cf.cama -cf. 1,38 1,42 0,050 1,45 0,87 0,98 0,156 1,09 0,18
cama
Fethiye, Kas, cf.cama -cf. 0,36 0,47 0,094 0,58 0,44 0,55 0,156 0,66 –
Antalia (4/4) cama
(continuado)
377
Tabla 1 (continuado)
378
par de población Estimado tiempo minimo Población p Distancia (nu) [%] p Distancia (aa) [%] D*Nei
tiempo fraccionado de geología par mínimo Significar Dakota del Sur máx. mínimo Media DE Máx.
(ND2 + ND3) aislamiento
[Mía] [Mía]
Andrós (3/1) Aliartos (3/3) 0,24–1,53 0,2–0,45 cf.cama -cf. 0.29 0.36 0.075 0.44 – – – 0.01
cama
Evoia (3/2) cf.cama -cf. 0,22 0,33 0,156 0,44 0,0 0,11 0,156 0,22 0,03
cama
Icaria (3/1) Ozbasi (3/1) cf.cama -cf. 1,60 1,60 0,000 1,60 0,88 0,88 0,000 0,88 –
cama
Sámos (2/2) cf.cama -cf. 1,68 1,68 0,000 1,68 1,10 1,21 0,156 1,32 0,06
cama
Citera (3/1) Peloponeso (10/6) kur - kur 0,15 0,26 0,090 0,36 0,22 0,33 0,156 0,44 0,02 0,87
Quíos (3/1) Foça (3/3) 0,16–0,90 0,012–0,025 cf.cama -cf. 0,29 0,65 0,317 0,0 0,22 0,220 0,44 –
cama
Evoia (3/2) Aliartos (3/3) kur - kur 0,15 0,45 0,178 0,65 0,0 0,11 0,156 0,22 0,04
Kerkira (2/1) Igoumenitsa, epe – epe 0,36 0,99 1,028 2,18 0,44 0,88 0,615 1,31 –
ioannina,
Aitolikon
(6/4)
Lesbos (4/3) Edremit (2/2) cf.cama -cf. 0,80 0,94 0,115 1,09 0,22 0,33 0,156 0,44 –
cama
Sámos (2/2) Ozbasi (3/1) cf.cama -cf. 0,51 0,51 0,000 0,51 0,22 0,33 0,156 0,44 –
cama
Zante (5/3) peloponeso kur - kur 0,0 0,18 0,135 0,36 0,0 0,22 0,220 0,44 –
(10/6)
J. Plötner et al.
Las secuencias de ADN se alinearon utilizando CLUSTAL V (Higgins et al.1992). Para

las estadísticas de secuencias, los programas MEGA4 (Tamura et al.2007) y DnaSP 5.0
(Librado y Rozas2009) fueron usados. Los análisis de regresión se realizaron utilizando
Statgraphics Plus 4.1 (Statistical Graphics, StatPoint, Herndon, Virginia). Los grupos
monofiléticos fueron identificados por inferencia bayesiana utilizando el programa
MrBayes (Ronquist y Huelsenbeck 2003; Huelsenbeck y Ronquist2005), con un modelo
GTR + I + G de evolución de secuencias. Para el árbol filogenético, aumentamos las
secuencias de las ranas de agua del Mediterráneo (incluyendoP. bedriagae,el linaje
chipriota endémico, y todos los linajes de Anatolia delP. ridibundusgrupo) con
secuencias deP. epeiroticusyP. cretensiscomo exogrupos.
2.3 Estimación de tasas y tiempos de divergencia utilizando

un reloj molecular no constante
BESTIA (Drummond y Rambaut)2007), que tiene en cuenta todas las muestras y permite tasas
de mutación variables entre linajes de especies, se usó con los datos de mtDNA para comparar
cuatro escenarios geológicos y volver a estimar la tasa de divergencia utilizada para las
estimaciones por pares (Akın et al., en prensa) . En el marco bayesiano de BEAST, los tiempos
de los nodos internos de la filogenia se pueden asociar con distribuciones previas que reflejan
el conocimiento previo sobre el tiempo de los eventos de especiación asociados con ese nodo.
Exploramos el poder de nuestros datos para distinguir entre cuatro escenarios alternativos
relacionados con el supuesto tiempo de aislamiento de Creta con desviaciones estándar
amplias (la mitad de la media) y estrechas (0,3):
1. Creta9w; tiempo de aislamiento¼9.0 4,5 millones de años,
2. Crete9n; tiempo de aislamiento¼9.0 0,3 millones de años,
3. Creta5w; tiempo de aislamiento¼5.3 2,65 millones de años,
4. Cretón; tiempo de aislamiento¼5.3 0,3 millones de años.
El tiempo de aislamiento de Chipre se fijó en 5,3 0,3 millones de años en todos los escenarios. BESTIA
se corrió para cada escenario utilizando un modelo de reloj relajado que permite diferencias entre
tasas evolutivas entre linajes; las tasas se extrajeron de una distribución previa lognormal
suponiendo que las tasas no están correlacionadas. Cada escenario se ejecutó cinco veces con un
período de prueba de 106iteraciones y 107iteraciones muestreadas; posteriormente, las cinco réplicas
se combinaron en Tracer (http://tree.bio.ed.ac.uk/software/tracer/) y analizado; luego se usaron
estimaciones de verosimilitud marginal para calcular los factores de Bayes (Kass y Raftery1995), que
sirvieron para comparar los diferentes escenarios geológicos. La tasa de mutación se estimó usando
el modelo TN93 con variación de tasa de sitio.
2.4 Experimentos cruzados
Para evaluar las cantidades de incompatibilidad genética entre taxones, se realizaron cruces
artificiales interespecíficos e intraespecíficos utilizando métodos estándar (p. ej., Berger et al.
mil novecientos ochenta y dos,1994). Después de llegar a la etapa de natación libre (etapa 25; Gosner1960)
se contaron los renacuajos y se calcularon las tasas de eclosión.
2.5 Investigaciones bioacústicas
Las grabaciones de las llamadas publicitarias se realizaron en un estanque artificial utilizando

un micrófono direccional (SONY ECM 707) y se analizaron con Avisoft SASLab Pro versión 4.2.
Se midieron once parámetros de llamada en los espectrogramas de audio y oscilogramas
(Haefeli2005; Haefeli et al., inédito). Cinco parámetros de llamada (duración de llamada,
grupos de pulsos por llamada, duración de grupos de pulsos, pulsos por grupo de pulsos,
intervalo entre grupos de pulsos) se compararon directamente con los datos publicados por
H. Schneider y colaboradores (revisados por Plötner2005). Los parámetros de llamada
dependientes de la temperatura se predijeron para una temperatura de 20 C, utilizando los
modelos de regresión publicados por Joermann et al. (1988), Schneider (1997) y Schneider y
Sinsch (1992).
2.6 Experimentos de elección femenina
Se realizaron experimentos de elección de hembras con 29 hembras de Creta (P. cretensis)y 26

hembras de rana de lago (P. kurtmuelleri)del Peloponeso, siguiendo el diseño experimental
desarrollado por Roeseli y Reyer (2000). Se colocaron dos altavoces orientados hacia el interior
a 97 cm del centro de la arena en radios con un ángulo de 120 entre ellos; los altavoces
estaban a 160 cm de distancia. La cuenca se dividió en 24 sectores de igual tamaño. Las
hembras fueron expuestas individualmente a vocalizaciones alternas, con un altavoz tocando
la llamada deP. cretensis,el otro la llamada de
P. kurtmuelleridel Peloponeso. La posición de las hembras en la arena se registró cada 7 s
durante 12 min. El interés general de las mujeres se midió por el tiempo relativo que una
mujer pasó en cualquiera de los sectores del altavoz, en comparación con el valor esperado
bajo una distribución aleatoria. Haefeli (2005) proporcionó detalles adicionales.
3.1 Diversidad genética de las ranas acuáticas del Mediterráneo oriental
La extensa diversidad genética detectada en las ranas de agua del Mediterráneo oriental
indica la existencia de varios linajes distintos que pueden representar varias especies
evolutivas (sensu Wiley1978,1981). Además de los principales haplogrupos
mitocondriales (MHG) específicos paraP. epeiroticusyP. cretensis,seis adicionales
30° E 40° E
40° N
MHG1: ridículo/kurtmuelleri, Europa

MHG2: bedrigae, El Levante Chipre
MHG3:
MHG4: Oeste de Cilicia
MHG5: Este de Cilicia
MHG6a: ver. caralitanus
MHG6b: ver. cerigensis
MHG6c: ver. bedrigae
MHG6d: Éufrates
Figura 1Distribución de los principales haplogrupos ND2/ND3 (MHG) y subgrupos de ranas acuáticas
(géneropelofilax)en la región del Mediterráneo oriental los GEI deP. cretensisyP. epeiroticus no están
graficados.
Los MHG se pueden distinguir entre las ranas de agua del Mediterráneo oriental (Akın et al.,
en prensa). Estos MHG están definidos por pares no corregidospagdistancias >3,5%; están
respaldados por una distribución geográfica específica (Fig.1) y probabilidades de clado de 1.0
(Fig.2).
MHG1 está compuesto por europeosP. ridibundus,incluidoP. kurtmuelleride la
Península Balcánica. MHG2 comprende haplotipos deP. bedriagae,una especie
distribuida en el Levante (Plötner2005); los haplotipos de este grupo se encuentran en el
oeste de Siria, Jordania y el delta del Nilo. MHG3 comprende haplotipos de Chipre. Los
haplotipos MHG4 ocurren principalmente en la llanura de Cilicia en el sureste de
Turquía, pero también al este de las montañas Amanos, mientras que los haplotipos
MHG5 solo ocurren al este de las montañas Amanos. MHG4 y MHG5 representan clados
hermanos con una divergencia de secuencia de aproximadamente 3,7 %. Los haplotipos
de MHG6 se distribuyen desde el noreste de Grecia (Akın et al., en prensa; Hotz et al., en
preparación) hasta el centro de Rusia; también se encuentran en Irán y Siria (Plötner et
al.2001, datos no publicados). En algunas áreas, MHG6 ocurre sintópicamente con
haplotipos de otros grupos, por ejemplo, con MHG4 en la llanura de Cilicia occidental,
con MHG5 en la llanura de Cilicia oriental (Akın et al., en prensa) y con MHG1 en el
noreste de Grecia ( Hotz et al., en preparación).
382
SG b (cerigensis) SG c (cf.bedrigae) SG d SG un (caralitanus)
MHG1 (P. ridibundus/kurtmuelleri, Europa) MHG6 (PAG. cf.bedrigae)

MHG3 (Chipre)
MHG5 (E-Cilicio)
MHG4 (W-Cilicio)
MHG2 (P. bedriagae)
J. Plötner et al.
MHG6 se puede dividir en cuatro subgrupos (6a–d). El subgrupo 6a es específico

para una forma que, debido a características morfológicas, cariológicas,
bioacústicas y enzimológicas particulares (p. ej., Jdeidi2000; Alpagut Keskin y
Falakali Mutaf2006), se asumió que representaba una especie separada,
P.caralitanus (Jdeidi 2000; Jdeidi et al.2001; plötner2005). Los haplotipos de este
grupo se distribuyen en el suroeste y centro-sur de Anatolia, pero también se
encuentran en la isla de Ikaria y en el norte de Chipre. Ocurren sintópicamente en
los límites de su área de distribución con individuos que portan otros haplotipos:
con el subgrupo 6b al suroeste, con el subgrupo 6c al norte y al oeste, y con MHG4
al sureste (Akın et al., en prensa).
El subgrupo 6b es característico de las ranas de agua de Karpathos y Rhodos. Con base en
datos electroforéticos de proteínas, las ranas que habitan en estas islas se describieron como
una especie separada (P. cerigensis)por Beerli et al. (1994). Sin embargo, los haplotipos de
este subgrupo no se limitan a Karpathos y Rhodos, sino que también se encuentran en la
región costera del suroeste de Anatolia (Ohst2001; Akın et al., en prensa).
El subgrupo 6c tiene una amplia distribución desde el este de Grecia en el oeste, más allá
de Anatolia hasta el Mar Caspio en el este, incluyendo Atyrau, la localidad tipo de
P. ridibundusen la costa norte del Mar Caspio (Akın et al., en prensa; Plötner y Litvinchuk,
datos no publicados). La divergencia de secuencia entre los haplotipos de Atyrau y los
haplotipos de las ranas lacustres de Europa Central y los Balcanes (MHG1) es de
alrededor del 6,5 %, lo que indica que las ranas lacustres de Atyrau y Europa Central no
son conespecíficas. También se detectaron haplotipos del subgrupo 6c en varias islas del
Mediterráneo cerca de la costa de Anatolia, por ejemplo, Quíos, Lesbos y Samos.
Los haplotipos del subgrupo 6d se encuentran en las cuencas del Tigris y el Éufrates del
noreste de Siria, el este de Anatolia y el oeste de Irán (Akın et al., en prensa; Plötner, datos no
publicados).
3.2 Divergencia genética entre pares de poblaciones
Divergencia genética entre poblaciones seleccionadas y pares de especies (Tabla1), calculado

sobre la base de datos electroforéticos de proteínas (Beerli et al.1996), secuencias de los
genes mitocondriales ND2 y ND3 (Plötner et al.2001; Akın et al., en prensa;
<
Figura 2 (continuación) Relaciones filogenéticas de las ranas de agua del Mediterráneo oriental estimadas
con inferencia bayesiana. El árbol se basa en 1.378 pares de bases de la proteína que codifica los genes
mitocondriales ND2 y ND3. Los valores en las ramas son probabilidades posteriores para el clado a la
derecha de esa rama. La barra de escala representa una mutación esperada por sitio.Pelophylax epeiroticusy
P. cretensisfueron utilizados como grupos externos.MHGhaplogrupo principal,SGsubgrupo.
Abreviaturas de países (código ISO):AlabamaAlbania;BUBulgaria;CYChipre;P.EJEgipto;FR
Francia;GEGeorgia;GRAMO Grecia;JOJordán;KGKirguistán;KZKazajstán;MKMacedonia;ES
Polonia;RORumania; RSRepública Serbia;ruRusia;SKEslovaquia;TMTurkmenistán;TRPavo;UA
Ucrania;UZ Uzbekistán
Fig. 3Relaciones entre

distancias genéticas basadas
en el ADN mitocondrial (mt)
(ND2+ND3), nuclear (n)
ADN del intrón 1 de albúmina sérica
(SAI1) yranaCR1 y datos
electroforéticos de proteínas. Se
calcularon distancias p no
corregidas tanto para mtDNA como
para nuDNA. Para datos
electroforéticos de proteínas,
distancias Nei modificadas (D*Nei) se
estimaron según lo propuesto por
Hillis (1984).Arriba Distancia p no
corregida
(ADNmt) frente a D*Nei. D*
Nei¼ (0,28 + 3,35*pADNmt)2,r¼
0,88, relación F¼709.8,pag

<0.01.
medio: pADNmtcontra pADNn.
pagADNn¼0.01 +
0,24*pADNmt,r¼0,77, relación F¼
191.0,pag <0.01. AbajoD*Nei
contra pADNn. pagADNn¼1/(11,2 +
6,06/D*Nei),r¼0,89, relación F¼
70.6,pag <0.01. Línea sólidalínea
de regresión. lineas quebradas
límites de confianza del 95%
datos no publicados de Plötner), y secuencias de los marcadores nucleares SAI1 y rana

CR1 (Plötner et al.2009) están significativamente correlacionados entre sí (Fig.3).
Prevemos que los cambios ambientales asociados con la Crisis de Salinidad Messiniense (MSC)
tuvieron un efecto significativo en el desarrollo de las poblaciones de ranas genéticamente distintas
en la región de estudio. Hasta -6 Ma, el mar Mediterráneo estuvo conectado con el Atlántico, la
conexión se realizaba a través de vías marítimas poco profundas a través del sur de España y el norte
de Marruecos, no a través del Estrecho de Gibraltar, que aún no
existen (por ejemplo, Krijgsman et al.1999a). El levantamiento de España y Marruecos cerró

gradualmente estas vías marítimas, de modo que alrededor de 6 Mya (5,96 Mya según Krijgsman et
al. 1999b) la cuenca mediterránea quedó aislada del océano Atlántico. Debido a que la evaporación
ya no estaba equilibrada por la afluencia del Atlántico, la cuenca del Mediterráneo se secó en este
momento, lo que marcó el comienzo de la MSC. El aislamiento fue inicialmente intermitente (durante
los mínimos globales del nivel del mar que fueron contemporáneos con los máximos de la glaciación
en latitudes altas, restringida en ese momento a la Antártida), pero se completó en -5,6 millones de
años (a los 5,59 millones de años según Krijgsman et al.1999b); con completo aislamiento, lo que
ahora es el fondo del mar Mediterráneo (en lugares -3 km o más por debajo del nivel del mar
moderno) estaba cubierto por vastas playas (salinas) en las que sales como la halita (NaCl) y el yeso
(CaSO4) fueron precipitados (Fig.4). Este era un ambiente extremadamente hostil, con temperaturas
superficiales estimadas tan altas como
- 80 C; las ranas no podrían haber sobrevivido allí. Sin embargo, estas condiciones
probablemente duraron menos de 100.000 años y se siguieron (a los 5,50 millones de años
según Krijgsman et al.,1999b) por la inundación parcial de la cuenca mediterránea (conocida
como la etapa "Lago-Mare" del MSC), que creó un reino lacustre de baja salinidad que duró
alrededor de 200.000 años. Se ha propuesto que la afluencia de agua dulce para crear el
paleo-lago Lago-Mare fue una consecuencia de la captura temporal, por parte de la cuenca
mediterránea con su nivel de base reducido, del río Danubio (p. ej., Kvasov 1983). También se
han presentado explicaciones alternativas relacionadas con el aumento de las precipitaciones
en las regiones circundantes como resultado del cambio climático global (p. ej., van der Laan
et al.2006; Hilgen et al.2007). La fase Lago-Mare terminó cuando,
40°
Figura 4Mapa de la cuenca del

Mediterráneo oriental que muestra la
distribución de los depósitos de
evaporitas de la crisis de salinidad del
35°
Messiniense, modificado a partir de
parte de la Fig.1de Hilgen et al. (2007).
Las costas modernas se muestran con
fines de ubicación y no corresponden a
las costas contemporáneas; el mapa no
intenta restaurar los cambios en las
posiciones y formas relativas de partes
de la región causados por los
movimientos de las placas posteriores
a Messiniense y la deformación de la
20° 25° 30° 35°
corteza relacionada 0 500
Yeso Hálito kilómetros
aparentemente como resultado de la erosión de los ríos en el extremo occidental del

Mediterráneo (p. ej., Loget et al.2005), el Océano Atlántico irrumpió en la cuenca del
Mediterráneo a través de lo que ahora es el Estrecho de Gibraltar y restauró rápidamente su
nivel de agua al nivel del océano global. Adoptamos como el momento de este evento de
inundación 5.33 Mya, de Krijgsman et al. (1999b), Hilgen et al. (2007), y otros.
Las condiciones ambientales durante el Messiniense en Chipre y sus alrededores
fueron descritas en detalle por Robertson (1998). Durante la fase evaporítica de la MSC,
esta isla estuvo rodeada en gran parte por playas (Fig.4); durante la siguiente fase Lago-
Mare, las aguas del paleo-lago cubrieron estas áreas. Los sedimentos de la facies Lago-
Mare se encuentran tanto en la costa de Chipre en perforaciones como en tierra en
partes bajas de la isla; estos últimos depósitos reflejan el levantamiento posterior de la
isla, ya que la superficie del agua durante la fase Lago-Mare estuvo muy por debajo del
nivel del mar actual. La cadena montañosa de Kyrenia (Beşparmak) del norte de Chipre
está conectada estructuralmente con la cadena montañosa de Misis al este de Adana en
el sur de Turquía por la zona de falla de Misis-Kyrenia (MKFZ), que forma parte del límite
entre las placas turca y africana (Fig.5). Esta zona de falla se volvió activa alrededor del
comienzo de la MSC (p. ej., Robertson et al.2004; Westaway et al. 2008) y forma una
cresta lineal significativa, tanto en tierra en Chipre como en alta mar hacia el noreste.
Como se representa esquemáticamente en la Fig.4, parece haber sobresalido por
encima del nivel de deposición de evaporita durante la MSC. Inferimos que también
permaneció por encima del nivel del agua durante la siguiente fase Lago-Mare, lo que
permitió a las ranas migrar de Anatolia a Chipre; esta población de ranas quedó aislada
cuando se restableció el nivel normal del mar.
Se puede contrastar esta situación con la de Creta. Como se indica en la Fig.4. Creta estaba
rodeada por depocentros de evaporita de Messiniense, y partes de la isla eran lo suficientemente
bajas en ese momento (antes de que se produjera el levantamiento posterior) para estar cubiertas
por evaporita. Cosentino et al. (2007) han demostrado que gran parte de Creta se inundó
posteriormente durante la fase Lago-Mare. No hay evidencia, sin embargo, de ninguna contigua
Figura 5Mapa de la región del Mediterráneo oriental, que muestra los límites (líneas rojas)del
africano (AF),árabe (ARKANSAS),euroasiático (UE),y turco (TR)platos.MKFZ:Zona de falla Misis-Kyrenia
estructura geológica, análoga a la MKFZ de Chipre, que podría permitir la migración de ranas
hacia o desde Creta en este momento; Creta era evidentemente una isla, rodeada por decenas
o cientos de kilómetros de agua salada abierta en todas direcciones. La población local de
ranas (P. cretensis)probablemente se aisló antes de la MSC y sobrevivió a su fase evaporítica,
presumiblemente en lo que ahora son las partes más altas de la isla, que estaban muy por
encima del nivel de la playa contemporánea.
Concluimos que los datos geológicos apoyan fuertemente un origen Messiniense para las ranas
chipriotas y un aislamiento potencialmente más antiguo para las ranas en Creta. El límite de edad más bajo
para el aislamiento de Chipre es el momento de la inundación del final del MSC en aproximadamente 5,33
millones de años; su límite superior es de 5,50 millones de años, el inicio de la fase Lago-Mare del MSC. Las
ranas de Chipre (MHG3) difieren en las posiciones homólogas de su ND2
+ Genes ND3 de ranas de Anatolia (MHG6) en aproximadamente un 6 %. La tasa de
desarrollo de la divergencia genética no corregida se puede estimar así entre 1,09
% por My (6,0 %/5,50 My) y 1,13 % por My (6,0 %/5,33 My) o aproximadamente 1,1
% por My.
3.3 Estimación de límites de confianza para tiempos de divergencia de

linajes básicos utilizando un reloj molecular no constante
El análisis BEAST (2.3) reveló solo pequeñas diferencias estadísticas entre los cuatro escenarios
geológicos; la mayoría de los intervalos de credibilidad del tiempo de divergencia para clados
particulares se superponen (Akın et al., en prensa). Creta parece haberse aislado antes que
Chipre, pero las distribuciones posteriores de los tiempos de divergencia se superponen
considerablemente. El escenario con distribuciones previas con picos fuertes para el
aislamiento de Creta y Chipre logró la verosimilitud logarítmica marginal más alta (CRETE9n:
10.511,035 0.164), pero los otros escenarios produjeron resultados muy similares.
valores: CRETE9w tiene 10.511,474 0,177, CRETA5w tiene 10.511,623
0.183, y CRETE5n tiene 10.514,081 0,182. La mayor diferencia entre
escenarios es de 3,046 unidades logarítmicas de verosimilitud; usando Kass y Raftery (1995),
esta diferencia sugiere que los escenarios CRETE5n y CRETE9n son diferentes. Los otros
escenarios, sin embargo, son solo 0.588 y 0.439 unidades de probabilidad logarítmica aparte
de CRETE9n, lo que sugiere que no se pueden rechazar. Seleccionando entre los cuatro
escenarios, usando el de Kass y Raftery (1995), da como resultado probabilidades de 0,445,
0,287, 0,247 y 0,021 para CRETE9n, CRETE9w, CRETE5w y CRE-TE5n, respectivamente. Por lo
tanto, aunque el escenario CRETE9n (que implica el aislamiento de Creta alrededor de 9 Mya y
Chipre alrededor de 5,3 Mya) es el escenario más probable considerado, no se pueden
descartar otros escenarios posibles (por ejemplo, el aislamiento de Creta antes que Chipre,
pero no alrededor de 9 Mya). . Lo mismo es cierto para la separación del par de especies del
Mediterráneo occidental.P. saharicus (África del Norte) yP. perezi (Península Ibérica) que se
sugiere que ocurrió antes de 5.3 Mya (Tabla1; Akın et al., en prensa). Los datos actuales son
suficientes para revelar el orden de los eventos de divergencia, pero insuficientes para la
correlación exacta de los eventos geológicos con las divergencias de especies.
BEAST también calcula una estimación posterior de la tasa de mutación promedio

esperada. La tasa de mutación promedio estimada para el mejor modelo fue de 0,00943
mutaciones por sitio por My con un coeficiente de variación de 1,112 que indica una
desviación estándar de 0,0105. Una desviación estándar de la magnitud de la media sugiere
una considerable heterogeneidad en la tasa de mutación entre los linajes en la filogenia. Una
comparación usando factores de Bayes del modelo de reloj estricto versus el modelo de reloj
relajado con tasas evolutivas independientes y restricciones de tiempo sin divergencia
muestra un apoyo considerable para el modelo sin reloj (Akın et al., en prensa).
3.4 Evolución de las poblaciones de ranas acuáticas de Anatolia
Nuestros datos de secuencia son insuficientes para elegir entre los cuatro escenarios
alternativos para el aislamiento de Creta de las áreas continentales, pero brindan un apoyo
relativamente sólido para la secuencia de divergencia de los propios linajes mitocondriales.
Sin embargo, la aplicación de una tasa de divergencia constante ofrece hipótesis plausibles
sobre eventos históricos que influyeron en la evolución de la diversidad genética en las ranas
de agua del Mediterráneo, especialmente en las poblaciones de Anatolia. Si se aplica la tasa de
divergencia de 1,1% por Mya a todas las ranas de Anatolia, varios linajes parecen haber
divergido entre aproximadamente 4 y 1 Mya (5,3–1,6 Mya, según el análisis BEAST utilizado
por Akın et al., en prensa). Los clados de Cilicia MHG4 y 5 pueden haberse separado primero
del resto de las poblaciones de Anatolia (MHG6), con una divergencia de alrededor del 4,0% de
las poblaciones de MHG6 y 3. 7% entre sí; estos valores corresponden a tiempos de
divergencia de aproximadamente 3,6 y 3,4 millones de años, respectivamente (5,3–3,5 y 4,4–
1,6 millones de años, según el análisis BEAST). Las poblaciones con haplotipos de MHG6
probablemente fueron aisladas del resto de las poblaciones de Anatolia por el levantamiento
de las montañas Tauro centrales durante el Mioceno tardío y el Plioceno (Jaffey y Robertson
2005), aunque el momento de este levantamiento no está bien limitado. Los clados de Cilicia
probablemente se separaron entre sí por el levantamiento de las montañas Amanos, que
comenzó en -3,7 o -3,6 millones de años como resultado de un cambio en el patrón de
movimiento de las placas en la región (Seyrek et al.2008a; Westaway et al.2008).
Las tasas de divergencia observadas implican una ventana de tiempo de 2,0 a 1,4 millones
(1,6 a 1,1 millones, según un modelo TrN + G más sofisticado de evolución de secuencias
utilizado por Akın et al., en prensa) para la diversificación de los subgrupos (a– d) de MHG6,
por lo que la radiación de estos linajes de Anatolia parece haber tenido lugar alrededor del
límite Plioceno-Pleistoceno. Este fue un momento de enfriamiento global significativo (por
ejemplo, Head y Gibbard2005; Ehlers y Gibbard2007), el límite se define actualmente en la
primera afluencia de taxones de ostrácodos y moluscos marinos de clima frío en el mar
Mediterráneo, según lo registrado en sedimentos en el sur de Italia (por ejemplo, Aguirre y
Pasini1985). En Gran Bretaña, en ese momento ocurrió un aumento dramático en el
transporte fluvial de sedimentos (p. ej., Rose et al.2002), que se cree que refleja una reducción
en la cubierta vegetal y, como resultado, un mayor transporte de sedimentos a los ríos (p. ej.,
Bridgland y Westaway2007a,b). Como resultado de una erosión más rápida
De acuerdo con el cambio climático en esta época, se produjeron mayores tasas de

levantamiento en algunas regiones, por ejemplo, al norte del Mar Negro (p. ej.,
Bridgland y Westaway).2007b), en la plataforma árabe del norte en el sureste de Turquía
y partes adyacentes de Siria (Demir et al.2007,2008; Westaway et al.2009), y en el este de
las Montañas Tauro (Seyrek et al.2008b). Estos procesos pueden haber reducido los
rangos de distribución y mejorado el aislamiento de diferentes linajes (Akın et al., en
prensa).
Los subgrupos de MHG6 tienen rangos geográficos en gran parte contiguos de
diferentes tamaños, pero las primeras tres formas (cf.caralitanus,cf.cerigensis,y cf.
bedrigae) todos se encuentran en el suroeste de Anatolia. El sudoeste de Anatolia se ha
propuesto a menudo como un refugio glacial (p. ej., Kosswig1955; Schmidtler1998)
debido a la presencia de taxones relictos o endémicos, incluido el árbolLiquidámbar (Özt
€Urk et al. 2008), los pescadosAfanio (Hrbek et al.2002) yPseudophoxinus (Hrbek et al.
2004), la salamandraLiciasalamandra (Veith y Steinfartz2004), la rana de montañaRana
tavasensis (Veith et al.2003), y la serpienteVipera (ursinii) anatolica (Joger et al.1992). La
presencia, a veces sintópicamente, de estos subgrupos de ranas acuáticas de Anatolia
estrechamente relacionados en esta región probablemente indica que dos o más
subgrupos de MHG6 encontraron refugio aquí durante las glaciaciones del Pleistoceno.
3.5 Incompatibilidades genéticas
Las incompatibilidades genéticas y los conflictos de genes únicos, junto con factores
ecológicos, pueden dar como resultado una menor viabilidad o fertilidad de los híbridos o de
la descendencia de los híbridos (p. ej., Uzzell y Ashmole1970; Guex et al.2001,2002; Orr2005).
La cantidad de incompatibilidad genética a menudo se puede estimar cruzando experimentos.
Sin embargo, los resultados de tales experimentos deben interpretarse con cautela porque los
cruces artificiales pueden diferir de la hibridación en la naturaleza con respecto a los
parámetros de aptitud tales como el éxito de la eclosión, la vitalidad y la fertilidad de los
híbridos. Entre los factores que pueden haber influido en los resultados de nuestros
experimentos de cruce, el largo tiempo de transporte (hasta 4 semanas) de los individuos
parentales, el tratamiento hormonal artificial de las hembras y las condiciones ambientales en
el laboratorio (p. ej., composición de alimentos o química del agua) podría haber tenido
efectos significativos en los resultados. Aunque todos los cruces se realizaron con el mismo
método, las respuestas fisiológicas al tratamiento artificial probablemente fueron diferentes
entre individuos y especies.1960) al inicio de la metamorfosis, la calidad del agua, la densidad
de individuos y el suministro de alimentos son parámetros importantes que influyen en el
rendimiento de las larvas. En cautiverio, las ranas acuáticas juveniles a menudo sufren
infecciones bacterianas y fúngicas que resultan en una alta mortalidad, especialmente
durante e inmediatamente después de la metamorfosis. Por lo tanto, consideramos
principalmente la tasa de eclosión (etapa 25) como un parámetro de incompatibilidad genética
(Tabla2), aunque se sabe por experimentos de cruce anteriores que la viabilidad de F1híbridos
en ranas de agua es un estimador débil para las incompatibilidades genéticas (por ejemplo,
Tabla 2Tasas de eclosión (mínimo, media geométrica, máximo) de cruces intraespecíficos e interespecíficos
de ranas acuáticas y sin corregirpagdistancias (p) estimadas para las formas cruzadas sobre la base de dos
genes mitocondriales (ND2 y ND3).cre: P. cretensis,cf.cama: p.cf.bedrigae (Anatolia),epe: P. epeiroticus, les: P.
Lessonae, kur: P. kurtmuelleri (Balcánico),shq: P. shqipericus, n:número de cruces
Femenino Masculino norte Tasa de eclosión [%] pag [%]
Especies Origen Especies Origen Mín. Media Máx.

Cruces interespecíficos
crear Esquí cf.cama Akç 12 13,2 48,8 98,8 10,68
cf.cama Akç crear Esquí 4 22,5 46,1 88,9
crear Esquí kur ska 12 6,9 42,7 99,4 11,36
kur Kav, Lec, Ska crear Esquí 5 58,1 75,5 94,1 11,40
crear Esquí epe Kil, Lec 3 21,3 42,6 67,8 14,72
epe Kil, Lec crear Esquí 7 15,9 45,9 97.5
cf.cama Sil crear Esquí 1 – 89.8 – 10.93
cf.cama Sil cf.cama Cyp (N) 1 – 98.5 – 1.09
cf.cama Cyp (N) cf.cama Sil 1 – 34.8 –
les Rog epe Igo, Lec 3 18.0 39.8 91,4 16,84
les Rog kur Kav 1 – 66,9 – 15.13
les poz shq vir 3a 31,7 59,2 94.6 8.52
shq vir les poz 3a 89,4 91,4 91.7
les poz cf.les pia 6a 25,5 62,7 96.2 4.93
cf.les pia les poz 3a 56,0 92.1 99.2
Cruces intraespecíficos
crear Esquí crear Esquí 1 – 99.3 – 0
epe Ker epe Voy 2 16,4 47,9 73,9 0.40
kur ska kur ska 1 – 95.0 – 0
kur Kav kur Zak 1 – 96,0 – 0.18
Localidades: Akç:Akçapinar (Turquía);Chip (N):Chipre del Norte (Turquía);Voy:Igoumenitsa
(Grecia); Kav:Kavasilas (Grecia);Ker:Kerkyra (Grecia);matar:Kilini (Grecia);lec:Lechena (Grecia);
Pía:Piana di Catania (Italia, Sicilia);Pos:Poznan (Polonia);Roger:Rogaczewo (Polonia);Sil:Silifke
(Turquía);Ska:Skala (Grecia);Esquí:Skinias (Creta);Vir:Virpazar (Montenegro);Zak:Zante (Grecia)
aDatos de Berger et al. (1994)
GRAMO€desenterrar1973; Kawamura y Nishioka1979,1986; Berger et al.mil novecientos ochenta y

dos,1994); fertilidad de F1híbridos y la viabilidad de la progenie de retrocruzamientos entre F1
los híbridos y sus especies parentales son parámetros más apropiados para revelar
incompatibilidades genéticas en ranas de agua.
Las tasas de eclosión de cruces intraespecíficos e interespecíficos de diferentes combinaciones
mostraron una variabilidad extremadamente alta; los valores obtenidos para la combinación
P. cretensismujer xP. ridibunduslos hombres, por ejemplo, oscilaron entre el 6,9 y el 99,4 %. La
correlación negativa significativa pero relativamente débil entre la tasa de eclosión
promedio y la distancia genética por pares no corregida estimada a partir del ADNmt (Fig.6)
probablemente refleja la divergencia genética gradual de las poblaciones en alopatría. ElR2la
estadística indica que el modelo ajustado explica solo alrededor del 25% de la variabilidad en
la tasa de eclosión; la predicción de las tasas de eclosión para ciertos valores de distancia (p)
parece ser propensa a errores. Esto también se ve si se utiliza el modelo de regresión lineal
propuesto para estimar elpagvalor en el que la tasa de eclosión es cero
Figura 6Relación entre la tasa

de eclosión (Tabla2) y
distancia p no corregida
estimado a partir de los genes mt
ND2 y ND3 (r¼0,50, relación F¼5.61,
pag <0,05). Línea sólidalínea de
regresión. lineas quebradaslímites
de confianza del 95%
(aprox. 41%). No se observan valores tan altos de divergencia, incluso entre especies que se
encuentran completamente aisladas reproductivamente. Por ejemplo, los genes ND2 de
Europa CentralP. ridibundusy la especie de rana marrón paleárticarana temporaria muestran
una divergencia de secuencia de aproximadamente 24%. Se obtuvieron valores similares (-21
%) entre las secuencias de mtDNA (ND2+ND3) de las ranas acuáticas del Paleártico occidental y
las especies de ranas acuáticas del Paleártico oriental.P. nigromaculatusyP. plancyi (Plötner y
Ohst, datos no publicados). Como lo muestran varios experimentos cruzados, los genomas de
las ranas de agua del Paleártico oriental son casi incompatibles con los de las especies de
ranas de agua del Paleártico occidental; generalmente hay un aislamiento completo por F1
inviabilidad híbrida y esterilidad en cruces entre los dos grupos (Kawamura et al. 1972;
Kawamura y Nishioka1979). Estos datos indican claramente que alrededor de un nivel de
divergencia del 20%, los genes ND de las ranas ranidas están saturados por múltiples
sustituciones. Incluso a niveles más bajos de divergencia, la divergencia de secuencias de
mtDNA parece ser un parámetro bastante inapropiado para predecir el grado de
incompatibilidad genética en las ranas de agua paleárticas occidentales.
Tasas de eclosión relativamente altas observadas en ciertos cruces heterotípicos entre
especies genéticamente distintas (por ejemplo,P. ridibundusXP. cretensis)indican que los
genomas individuales pueden ser más o menos compatibles. Interespecies naturales F1los
híbridos, cuando se observan, pueden originarse a partir de cruces únicos excepcionales. Esta
suposición está respaldada por los resultados de cruces entre especies, por ejemplo entreP.
nigromaculatusde Japón yP. leccionesde Luxemburgo (Kawamura et al.1972; Kawamura y
Nishioka1979). Normalmente, casi todos los embriones resultantes de dichos cruces mueren
antes de eclosionar. Sin embargo, algunos híbridos pudieron completar la metamorfosis y
algunos incluso alcanzaron la madurez. Resultados similares obtuvieron Berger et al. (1994),
quienes realizaron cruces entre especies de ranas de agua, F1 F1
cruces y retrocruzamientos entre F1híbridos y sus especies parentales. Por ejemplo, el
éxito de eclosión de cruces entreP. shqipericusyP. epeiroticusvarió entre alrededor del
74 y el 97%. Dos retrocruzamientos, uno para cada especie parental (usando una F1
individuo híbrido de unP. shqipericus P. epeiroticuscruz que tuvo una tasa de eclosión
de 74,4%), resultó en tasas de eclosión de 42,6 y 97,3%.
Si se tiene en cuenta la alta tasa de reproducción de las ranas acuáticas hembras (una
hembra puede poner varios cientos o miles de huevos por temporada de reproducción; por
ejemplo, Berger y Uzzell1980), solo unos pocos cruces interespecíficos exitosos podrían ser
híbridos
ridículoXridículo ridículox cf.bedrigae cf. bedrigaex cf.bedrigae
Etapa de desarrollo
Día
Figura 7Etapas de desarrollo (Gosner1960) apagado1larvas de cruces experimentales homo y

heteroespecíficos en diferentes momentos después de la fertilización.línea rojalarvas mantenidas en el
laboratorio. Línea azullarvas mantenidas al aire libre. Puntos¼modo. de Ohst (2008), modificado
suficiente para mantener la ocurrencia de F1híbridos en áreas de simpatría. El papel de

la compatibilidad del genoma individual para la aptitud híbrida también se demostró
mediante un experimento en el que el desarrollo de F1individuos resultantes de cruces
homo- y heteroespecíficos se analizó bajo diferentes condiciones ambientales (Ohst
2008). En comparación con la progenie homotípica obtenida de cruces de
centroeuropeosP. ridibundus (MHG1) y de las ranas lacustres de Anatolia (MHG6c), F1
larvas de un cruce heteroespecífico entre un centroeuropeoP. ridibundusmujer y
anatoliaPAG.cf.bedrigaeel macho exhibió una mayor heterogeneidad en la tasa de
desarrollo larvario (Fig.7). Queda por investigar si la inviabilidad y la esterilidad de los
híbridos en las ranas de agua del Paleártico occidental son causadas por genes únicos o
es un efecto aditivo de diferentes loci.
3.6 Mecanismos de antihibridación
Los mecanismos de antihibridación (también conocidos como mecanismos de aislamiento

precigóticos o de apareamiento) sirven para prevenir la combinación de dos genomas
genéticamente incompatibles; evolucionan porque los híbridos con genomas diploides mal
adaptados tienen una aptitud más baja que sus especies parentales. La incompatibilidad genética
entre dos o más linajes a menudo se debe a la acumulación de diferencias genéticas en la alopatría.
Por el contrario, los mecanismos de antihibridación, que minimizan el desperdicio de gametos como
resultado de apareamientos heteroespecíficos (p. ej., Coyne y Orr1998), son favorecidos por
selección solo cuando ocurre el mestizaje; son, por lo tanto, una secuela de la
especiación que es necesaria para establecer la simpatía de linajes genéticamente
incompatibles (Remington1968).
En los anfibios anuros, los mecanismos de antihibridación a menudo incluyen varios
elementos de comportamiento de cortejo y apareamiento, por ejemplo, llamadas de
apareamiento o anuncios de machos que permiten a las hembras discriminar entre machos
conespecíficos y heteroespecíficos. Los mecanismos de antihibridación solo son adaptativos
bajo simpatría. Sin embargo, ellos, o al menos elementos de ellos, ya pueden haber
evolucionado en alopatría como lo indica la correlación entre las diferencias en las llamadas
de publicidad y las distancias p (Fig.8; Haefeli et al., inédito).
Si bien para muchas especies de ranas, se sabe que la llamada de apareamiento es un determinante
importante de la formación de parejas y, por lo tanto, de la singamia (revisado por Schneider y Sinsch2007),
su papel como elemento integral de los mecanismos de antihibridación en las ranas de agua no se
comprende completamente. Por ejemplo, experimentos preliminares de elección de pareja con hembras de
Creta y el Peloponeso, que representan especies genéticamente distintas. (P. cretensisyP. kurtmuelleri)con
llamadas de apareamiento específicas (Fig.9), no reveló una preferencia femenina por las llamadas de
apareamiento de machos conespecíficos (Haefeli2005; Haefeli et al., sin publicar; Higo.10). A pesar de la
presencia de la elección de las hembras para el apareamiento, los machos pueden generar competencia y
coerción sexual debido a las proporciones de sexos operativas altamente sesgadas por los machos en los
sitios de reproducción abarrotados (Bergen et al.1997).
Aunque el comportamiento de las hembras en tales experimentos de elección posiblemente esté
sesgado por los ambientes artificiales y/o las condiciones fisiológicas de los animales, las observaciones de
campo también han demostrado que las llamadas de apareamiento muy distintas no siempre previenen los
apareamientos heteroespecíficos y la hibridación en áreas de simpatía, por ejemplo. instancia entreP.
kurtmuelleriyP. epeiroticus (Hotz y Uzzellmil novecientos ochenta y dos) o entre
Figura 8Correlación entre la Distancia Euclidiana Estándar (SED) calculada sobre la base de cinco parámetros
de llamadas de apareamiento de diferentes especies de ranas acuáticas (datos de Joermann et al.1988; Akef
y Schneider1989; Schneider y Sinsch1992; Schneider y Haxhiu1994; Schneider1997,1999; Haefeli2005) y la
distancia p no corregida obtenida de los genes mt ND2 y ND3 de la misma especie (r¼0.79,Frelación¼31.72,
pag <0,01). ElR2La estadística indica que el modelo ajustado explica el 62,5% de la variabilidad en SED
después de transformar a una escala logarítmica para linealizar el modelo.Línea sólidalínea de regresión.
lineas quebradaslímites de confianza del 95%
P. cretensis PAG.cf.bedrigae(Anatolia)
a a
b b
P. kurtmuelleri(Balcánico) P. epeiroticus
a a
b b
Figura 9Formas de onda (a)y espectrogramas de audio (b)de llamadas de apareamiento registradas
desdeP. cretensis, P.cf.bedrigae (Pavo),P. kurtmuelleridel Peloponeso yP. epeiroticusregistrado a
temperaturas del agua de 26 C (cretensis),27 C (cf.bedriagae),28 C (kurtmuelleri),y 26,5C (epirótico).
De Haefeli (2005)
P. ridibundusyP. Lessonae (GRAMO€Unther et al.1991). Del mismo modo, las investigaciones

genéticas de dos grupos distintos con diferentes llamadas de apareamiento en una zona de
transición, que se extiende por el noreste de Grecia y la Turquía europea, indican un
apareamiento casi aleatorio entre ranas en un área de contacto secundario cerca del río
Nestos (Beerli1994; Hotz et al., en preparación). También se han hecho observaciones
similares en zonas de transición en Anatolia (Akın et al.2010), como en el suroeste de Anatolia
(MHG4 y 6) y el este de las montañas Amanos (MHG4, 5 y 6), donde los haplotipos de mtDNA
de distintos linajes se encuentran sintópicamente en muchas poblaciones. Estas
observaciones también están respaldadas por otros hallazgos en el suroeste de Anatolia;
individuos con lacaralitanus-la maculación ventral específica de color naranja tiene haplotipos
de los subgrupos 6b o 6c; y las personas con el vientre manchado de negro o de color blanco
pueden tenercaralitanus-haplotipos específicos del subgrupo 6a (Akın et al.2010).
Por otro lado, la baja frecuencia de híbridos naturales en el oeste de Grecia, dondeP.
epeiroticusyP. kurtmuellericomparten los mismos hábitats (p. ej., Hotz y Uzzellmil novecientos
ochenta y dos; Schneider et al.1984; Berger et al.1994), o en el delta del Danubio dondeP.
ridibundusyP. leccionesocurren simpátricamente (G€Unther et al.1991),
Figura 10Porcentaje de tiempo

de observación que las hembras
deP. cretensis (n¼26) y de
BalcánicaP. kurtmuelleri (n¼29)
gastados en áreas de altavoz
definidas como conespecíficas y
heteroespecíficas y en áreas sin
elección (indiferentes). barras
negrasvalores observados,
barras grisesvalores esperados
bajo distribución aleatoria. De
Haefeli (2005)
habla a favor de mecanismos antihibridación efectivos probablemente relacionados con el sistema

de apareamiento, incluidas las llamadas de apareamiento. Esta suposición es consistente con las
observaciones empíricas en el oeste de Grecia, dondeP. epeiroticusyP. kurtmuelleriocurren
sintópicamente pero forman coros separados en el mismo hábitat acuático y al mismo tiempo. Los
coros contenían solo individuos individuales de la especie extranjera y el llamado deP. epeiroticuslos
coros no estimularon la actividad de convocatoria de
P. kurtmuellericoros (Kordges1988). Observaciones similares fueron hechas por G€unther (mil
novecientos ochenta y dos) en el lago Skutari (Montenegro) dondeP. shqipericusvive
sintópicamente conP. kurtmuelleri.
3.7 Implicaciones para la sistemática de ranas de agua
Nuestros datos genéticos sugieren varias hipótesis nuevas sobre la sistemática de las ranas de
agua como base para futuras investigaciones. Lo más sorprendente es que, aunque los cuatro
individuos de la localidad tipo deP. ridibundus (Atyrau, Kazajstán) poseía mtDNA típico del
clado de Anatolia (Fig.2), todos eran heterocigotos para los marcadores nucleares SAI1 yrana
CR1, con un alelo característico de las ranas acuáticas de Anatolia y el otro de las ranas
lacustres de Europa Central (Plötner et al.2009). Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que la
región norte del Mar Caspio representa una zona de transición donde diferentes linajes han
entrado en contacto secundario y se han cruzado al azar.
Como demuestran claramente nuestros datos moleculares, las ranas acuáticas de Anatolia y
P. bedriagaedel Levante no son conespecíficos como proponen Schneider y
compañeros de trabajo (p. ej., Schneider y Sinsch1999). Una divergencia de secuencia en

los genes mitocondriales ND2 y ND3 de aproximadamente el 6% (Ohst2001; Akın et al.,
en prensa) y diferencias significativas en los marcadores no codificantes SAI1 yranaCR1
(Plötner et al.2009) indican claramente queP. bedriagaey las ranas de agua de Anatolia
representan especies evolutivas distintas. De manera similar, el Cilicio MHG4 y 5 juntos
representan un clado distinto separado de ambosP. bedriagaey los linajes de Anatolia
(MHG6) (Fig.2). Sin embargo, aún no está claro si el grado de diferenciación observado
entre MHG4, 5 y 6 (3,7–4,0 %) garantiza el estatus de especie para las poblaciones de
Cilicia, en conjunto o por separado.
Por otro lado, los pequeños valores de divergencia genética observados entre los cuatro
subgrupos (a–d) del enorme MHG6 de Anatolia (1,5–2,2 %) sugieren que los subgrupos no son
especies distintas. Por ejemplo, aunque las poblaciones pertenecientes al subgrupo b de
MHG6 se describieron como una especie separada bajo el nombre de
P. cerigensisdebido a la presencia de alelos únicos que codifican proteínas en las
poblaciones de Karpathos y Rhodos (Beerli et al.1994), las muestras utilizadas en este
análisis no eran completamente representativas de las poblaciones de ese subgrupo; los
especímenes de las poblaciones vecinas de Anatolia de las partes costeras de las
provincias de Antalya y Muğla (Turquía), con haplotipos mitocondriales exactamente o
muy similares, no se incluyeron en este estudio. La divergencia general entrecerigensisy
los subgrupos vecinos de Anatolia no supera el 1,3% (Cuadro1). la validez de
P. cerigensiscomo una especie distinta no está respaldado por nuestros hallazgos.
Asimismo, aunque varios autores (Jdeidi2000; Jdeidi et al.2001; plötner 2005) han
sugerido elevarcaralitano (MHG6a) al estado de especie basado en características
morfológicas, cariológicas, bioacústicas y enzimológicas particulares (p. ej., Jdeidi2000;
Alpagut Keskin y Falakali Mutaf2006), sus distancias genéticas observadas a formas
relacionadas y la aparente hibridación extensiva con poblaciones vecinas de ranas de
agua (Akın et al.2010) indican que esta sugerencia fue probablemente prematura. En
general, a pesar de, por ejemplo, Frost's (2008) tratamiento de los taxones antes
mencionados como especies distintas, las relaciones evolutivas dentro de los linajes de
Anatolia requieren una revisión taxonómica.
Dos linajes diferentes están representados en Chipre, uno estrechamente relacionado con
las ranas de Anatolia (MHG6) del subgrupo a, y el otro (MHG3) exclusivo de la isla y de origen
más antiguo. La distinción genética (ca. 6–7% de distancia por pares; Tabla1) y monofilia bien
sustentada (Fig.2) del último linaje confirma un estado de especie separado para ese grupo
(Plötner et al.2001; plötner2005). Esta hipótesis también está respaldada por datos de
secuencia obtenidos de SAI1 yranaCR1 (Plötner y Akın, resultados no publicados). Lo mismo es
cierto para las ranas de los lagos de los Balcanes (Plötner et al.2009), que originalmente se
separaron de Europa CentralP. ridibundussobre la base de rasgos bioacústicos y nombrados
Rana balcanicapor Schneider et al. (1993). Debido a que los datos morfológicos, de
electroforesis de proteínas y de ADNmt han revelado solo pequeñas diferencias entre las
ranas lacustres de los Balcanes y de Europa Central, se ha cuestionado el estado sistemático
de las ranas de los Balcanes (p. ej., Beerli et al.1996; plötner1998, 2005; Plötner y Ohst2001).
Las diferencias entre los genomas de las ranas lacustres de los Balcanes y de Europa Central
también se expresan cruzando experimentos con
P. lecciones:mientras que los cruces interespecies entre centroeuropeosP. ridibundus
yP. leccionesconducen a híbridos hibridogenéticos, cruces entre ranas de los lagos de los
Balcanes yP. leccionesdan como resultado híbridos no hibridogenéticos que son casi todos
estériles (Hotz et al.1985; Berger et al.1994). Los resultados de cruces entre ranas lacustres
centroeuropeas y balcánicas (Berger1999, y datos no publicados) también apoyan la hipótesis
de que las dos formas representan especies distintas: individuos retrocruzados (F1especies
parentales híbridas) son estériles y la F2la progenie no es viable. Por lo tanto, proponemos
reconocer las ranas de los Balcanes como una especie separada cuyo nombrePelophylax
kurtmuelleriGayda, 1940 está disponible (Dubois y Ohler1994).
3.8 Conclusiones y Perspectivas
La divergencia genética entre las ranas acuáticas del Mediterráneo oriental, incluidas las
diferencias en los cantos publicitarios, parece ser el resultado de una divergencia genética
gradual en la alopatría, estrechamente asociada con la evolución geodinámica del
Mediterráneo desde el Mioceno medio (es decir, desde alrededor de 11 millones de años). La
dispersión entre poblaciones ha sido impedida por el desarrollo de cadenas montañosas
localizadas, mesetas sin agua y barreras de agua salada que se han originado como resultado
de movimientos de placas, levantamiento y hundimiento regional y cambios ambientales
como el MSC. Además, los eventos climáticos cíclicos durante los últimos 3 Ma restringieron
aún más el patrón de migración y dieron como resultado la subdivisión entre las poblaciones,
especialmente en la región del Mediterráneo oriental. Nuestra hipótesis es que tres factores
principales son importantes en la especiación de las ranas de agua del Mediterráneo oriental:
(1) acumulación de diferencias genéticas durante períodos de alopatría en refugios glaciales
ya través de la subdivisión de poblaciones por el desarrollo de barreras montañosas
localizadas o levantamiento regional; (2) selección natural y adaptación impuesta por
diferentes ambientes; y (3) efectos estocásticos asociados con la colonización y una reducción
extrema en el tamaño de la población. Se cree que el último factor desempeña un papel
importante para varias poblaciones insulares (p. ej., Rhodos y Karpathos), mientras que el
primer y el segundo factores parecen promover la evolución de la mayoría de las poblaciones
continentales. La estasis morfológica extrema de las ranas de agua del Mediterráneo oriental
sugiere una baja evolución fenotípica adaptativa. A pesar de esta gran similitud en la
morfología, muestran una considerable divergencia genética (1,5 a 6,9%),
La hibridación, observada, por ejemplo, en el este de Grecia y el oeste de Anatolia (Hotz et al., en
preparación) y en el oeste del Peloponeso (Hotz y Uzzellmil novecientos ochenta y dos), puede
interpretarse como resultado de contactos secundarios entre linajes ya divergentes. Bajo simpatría,
se puede esperar una divergencia más rápida de los rasgos asociados con los mecanismos de
antihibridación, por ejemplo, las señales de apareamiento. Debido a que las diferencias en las
llamadas publicitarias generalmente no han divergido más rápidamente que los rasgos genéticos
(Fig.8), la selección natural y la deriva en la alopatría son aparentemente las fuerzas principales para
la evolución de los mecanismos de antihibridación en las ranas de agua, en lugar de la selección
sexual. Sin embargo, tras un contacto secundario, los mecanismos de aislamiento podrían reforzarse
(Dobzhansky1940), como se ve en las especies simpátricas
P. kurtmuelleri/P. epieróticoque tienen llamadas de apareamiento bastante diferentes (Fig.9):

P. epeiroticuslas llamadas de apareamiento se caracterizan por muchos grupos de pulsos muy
cortos con pocos pulsos por grupo (cf. Schneider et al.1984) mientras que las llamadas de
apareamiento de BalkanP. kurtmuellerise caracterizan por unos pocos grupos de pulsos
relativamente largos con muchos pulsos por grupo (Schneider et al.1984,1993; Schneider y
Sinsch 1992). No sabemos, sin embargo, si los mecanismos de antihibridación, las
incompatibilidades genéticas o ambos causan la baja frecuencia de híbridos entre estas
especies. El trabajo futuro también aclarará el papel de los factores ecológicos y demográficos
en la causa de la especiación en las ranas de agua del Mediterráneo.
Expresiones de gratitudAgradecemos a Rainer G€unther (Berlín) por sus comentarios constructivos sobre el
manuscrito. Agradecemos a Metin Bilgin (Urbana-Champaign) por la secuenciación del ADN y el desarrollo
de un nuevo protocolo de extracción de ADN. Agradecemos a Christina Scheib (Eberswalde), Sylvia Glaser
(Berlín), Kai-Joachim Schultze (Berlín) y Ronny Knop (Berlín) por su asistencia técnica. Por proporcionar
muestras de ranas de agua, agradecemos a Wolfgang Böhme (Bonn), Petr Kotlik (Libechov), Peter Mikuliček
(Praga) y Mathias Stöck (Lausana). El Ministerio griego de Desarrollo Rural y Alimentación, amablemente
mediado por Doris Tippmann (Embajada de la RFA, Atenas), puso a disposición muestras de tejido de Grecia.
Esta investigación fue apoyada por Deutsche Forschungsgemeinschaft (subvenciones PL 213/3-1, 3-2, 3-3) y
el Fondo Nacional Suizo (subvenciones 31-37579.93, 31-59144.99, 31-103903/1 y 31-64004.00) . Çiğdem Akın
y Can Bilgin recibieron el apoyo del METU Research Fund (BAP-08-11-DPT-2002K120510). Peter Beerli recibió
el apoyo parcial del programa conjunto NSF/NIGMS Mathematical Biology bajo la subvención NIH R01 GM
078985 y la subvención NSF DEB 0822626. Spartak N. Litvinchuk recibió el apoyo parcial de una subvención
DAAD bajo A/03/06782.
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Inferir corso múltipleLimax (Pulmonata:
Limacidae) Radiaciones: un enfoque
combinado usando morfología y moléculas
Barbara Nitz, Gerhard Falkner y Gerhard Haszprunar
AbstractoBabosas del géneroLimax (Gastropoda: Stylommatophora) muestran un sistema

genital y un comportamiento reproductivo muy complicados que probablemente
desencadenan la radiación y la especiación. Los estudios previos han revelado dos grupos de
especies hasta ahora en gran parte no descritos deLimaxen Córcega. Para aclarar la filogenia y
la historia evolutiva de estas radiaciones, utilizamos una combinación de técnicas moleculares
y caracteres morfológicos. Los dos grupos de especies independientes de CórcegaLimaxlas
especies son monofiléticas y constan de seis a diez especies cada una, la mayoría de ellas
nuevas para la ciencia. El primer grupo de especies, las endémicas.Wolterstorffi- grupo, puede
ser diferenciado por COI-Sequences, mientras que COI-secuencias fallan en discriminar
especies delCórcega-grupo, que también tiene representantes en la península de los
Apeninos. Este patrón sugiere una radiación mucho más joven del Córcega-grupo. Dos
especies hasta ahora no reconocidas en las islas adyacentes de Elba y Capraia se describen en
un apéndice.
Palabras claveLimax - Córcega -grupo -Wolterstorffi-grupo - Córcega - Elba - Capraia -

Península de los Apeninos - Endemismo - Radiaciones - Secuencias COI - Sistemática molecular
- Código de barras de ADN - Nuevas especies
B.Nitz (*)
Zoologische Staatssammlung M€Unchen, M€unchhausenstr. 21, 81247 M€Unchen, Alemania Instituto de
Epidemiología, Centro Helmholtz M€unchen, Centro Alemán de Investigación para la Salud Ambiental, M€
unchen/Neuherberg, Alemania Correo electrónico: Barbara.Nitz@zsm.mwn.de
G. Falkner
Museo Staatliches f€ur Naturkunde Stuttgart, Rosenstein 1, 70191 Stuttgart, Alemania Muséum
National d'Histoire Naturelle Paris, Département Systématique et Evolution. UMS “Taxonomie et
collections”, 55 rue de Buffon, 75005 París, Francia
correo electrónico: Falkner@malaco.de
G. Haszprunar
Zoologische Staatssammlung M€Unchen, M€unchhausenstr. 21, 81247 M€Unchen, Alemania
Correo electrónico: haszi@zsm.mwn.de

406 B. Nitz et al.
1 Introducción
el géneroLimax (Gastropoda: Pulmonata: Stylommatophora) se distribuye principalmente en Europa,

con énfasis en el sur de Europa y las regiones alpinas (Falkner et al.2001; Manganelli et al.1995). Estas
babosas nocturnas son animales bastante grandes (6–30 cm) y se alimentan principalmente de
hongos, algas terrestres, líquenes y material vegetal muerto, pero también son parcialmente
carnívoras. Hasta el momento, las especies han sido definidas por su morfología externa y
principalmente por su compleja anatomía genital.
El comportamiento de cópula único y altamente complicado ya ha sido descrito en
detalle, por ejemplo, por Gerhardt (1933,1934,1937). La cópula es muy delicada: a veces
una diferencia del 20% en la longitud del pene impide una cópula exitosa (GF,
observación personal). Las diferentes especies varían en la longitud y la forma de sus
penes y también en el comportamiento de cópula.
Las estimaciones sobre el número de especies varían, oscilando entre unas 15 especies (Schileyko
2003) hasta 40 especies (Wiktor2001) para todo el rango de distribución. Sin embargo, en contraste
con estos números bastante bajos, Manganelli et al. (1995) enumeran 18 especies solo para Italia.
MayoríaLimaxlas especies, especialmente las que tienen una distribución mediterránea, tienen áreas
de distribución pequeñas y fragmentadas y, por lo tanto, están en peligro por la destrucción del
hábitat (quema de bosques, desarrollo urbano).
Conocimiento actual de laLimaxla fauna de Córcega es bastante pobre. Moquin-
Tandot (1855) descritoLimax córsicobasado en caracteres externos con una localidad
tipo en Bastelica, Córcega. El nombreLimax córsicofue utilizado por Lessona y Pollonera (
1882) no solo para especímenes de Córcega, sino que también aplicaron el nombre a
variosLimaxespecímenes del norte de Italia. Sin embargo, Simroth (1910) consideró
L. córsicoser un sinónimo de la especie común y extendidaL. máximoLinneo, 1758. Hoy,
L. córsicose considera una especie distribuida no sólo en Córcega sino también en varias
islas italianas como Cerdeña y Capraia (Giusti y Mazzini1971) y en la región de Toscana
(Giusti y Mazzini 1971). El nombre se aplica generalmente para Limaxejemplares con
campos de suela rojos y coloración corporal de marrón a crema.
Además deL. córsico,otros dosLimaxespecies se enumeran para Córcega
(Holyoak1983; Réal y Réal-Testud1988):L. máximoyL. cinereoniger Lobo, 1803;
ambas especies tienen un amplio rango de distribución en toda Europa, y el
sinantrópicoL. máximoincluso ocurre en el extranjero.
Basado en estudios de campo exhaustivos, experimentos de reproducción, observaciones de
cópula e investigaciones morfológicas, Falkner (2001) y Falkner et al. (2002) asumió una diversidad
total de alrededor de nueveLimaxespecies probablemente endémicas de Córcega y la mayoría de
ellas nuevas para la ciencia. Las especies forman dos grupos, con cuatro y cinco especies
respectivamente, que probablemente representan dos radiaciones insulares independientes. Sin
embargo, la discriminación morfológica deLimaxespecies sigue siendo difícil debido a la alta
variabilidad de color y al hecho de que solo los especímenes completamente maduros pueden
considerarse para las comparaciones genitales. Esto conduce a dudosas identificaciones de especies
en colecciones y bioinventarios. Se requiere un método rápido e inequívoco de reconocimiento de
especies nuevas o no detectadas en el género para facilitar nuevos conocimientos sobre la
composición de especies y la protección de estas babosas.
Inferir corso múltipleLimax (Pulmonata: Limacidae) Radiaciones 407
El gen del código de barras estándar, el citocromoCLa subunidad I de oxidasa (COI), se utiliza no
solo para la reidentificación de especies, sino también para el descubrimiento de nuevas especies
(Hebert et al.2003a). Esto funciona bastante bien en la mayoría de los grupos de animales; más del
95% de las especies poseen secuencias de códigos de barras COI únicas y la identificación a nivel de
especie es posible en la mayoría de los casos (Hajibabaei et al.2007; véase también Waugh 2007para
un resumen). Se encuentran excepciones, por ejemplo, en Cnidaria (Hebert et al.2003b) y en insectos
(Whitworth et al.2007; Elías et al.2007).
Para el descubrimiento y la (re)identificación de especies a través de códigos de barras de ADN,
se utilizan dos enfoques generales. En primer lugar, los métodos basados en árboles deberían
revelar la identidad de muestras desconocidas por su posición en una filogenia establecida (Hebert
et al. 2003a,b). El segundo enfoque consiste en utilizar un valor umbral de divergencia de secuencia
para separar la variación intraespecífica de la interespecífica. Este valor umbral se puede inferir de
dos maneras. Puede basarse en un valor de umbral fijo, por ejemplo, una diferencia de secuencia del
3 % (Hebert et al. 2003 a, b); alternativamente, se ha propuesto un umbral de diez veces el promedio
de la divergencia intraespecífica (Hebert et al.2004). Sin embargo, estudios recientes han mostrado
altas tasas de error en la delineación de especies basadas solo en códigos de barras de ADN, lo que
sugiere fuertemente un uso de secuencias de ADN solo en combinación con bases taxonómicas
sólidas y en un enfoque de taxonomía integradora (Meyer y Paulay2005; Meier et al.2006).
En nuestro estudio que combina moléculas y morfología, las secuencias COI deberían
ayudar a aclarar el estado del CórcegaLimaxespecies/poblaciones. Para probar la validez
de nuevas especies en Córcega y asignar especímenes no identificados a especies
conocidas, secuenciamos especímenes de especies ya descritas (L. córsicode su localidad
tipo en Córcega,L. senensisPollonera, 1890 yL.ciminensisPollonera, 1890 de sus
respectivas localidades tipo en el continente italiano,L. cinereonigerde su localidad tipo
en Alemania yL. maximus)y especímenes de especies corsas desconocidas y
potencialmente nuevas. A modo de comparación, incluimos variosLimax especies/
poblaciones de la península de los Apeninos y de algunas islas del Tirreno, y también
una de las más basalesLimaxespecies,L. wohlberedtisimroth, 1900(BN, observación
personal).
2.1 Recolección y tratamiento de especímenes
más corsoLimaxlos especímenes fueron recolectados por los autores (GF y BN). En algunos
casos, fue posible documentar y fotografiar el comportamiento de cópula en el hábitat natural
y en cautiverio. Europeo complementarioLimaxlos especímenes se recolectaron para
comparación y diferenciación genética o se tomaron prestados de otras colecciones (consulte
la lista de materiales en el Suplemento). Para las instituciones de las que obtuvimos material,
se utilizan las siguientes abreviaturas estandarizadas (entre paréntesis): Istituto di Zoologia
dell'Università di Siena (IZSI); Museo Nacional
408 B. Nitz et al.
d'Histoire Naturelle, París (MNHN); Museo de Historia Natural, Universidad de

Wrocław (MNHW); Natur-Museo de Luzern (NMLU); Museo de Historia Natural de
Viena (NMW); Museo Nacional de Historia Natural de Leiden (RMNH); Museo
Staatliches f€ur Naturkunde Stuttgart (SMNS); Museo Zoológico de Hamburgo
(ZMH); Zoologische Staatssammlung M€unchen (ZSM).
Inferir la posición filogenética del corsoLimaxespecies dentro del género
Limax,representantes de otros géneros limacid [Lehmannia marginata (DE M€
Uller, 1774),Limacus flavus (Linnaeus, 1758)] y como grupo externo, el vitrínido
Vitrina pelúcida (DE M€uller 1774), se incluyeron en la parte genética del
estudio.
La mayoría de los animales recolectados fueron fotografiados vivos. Las muestras de tejido
para la extracción de ADN se tomaron vivas del lado izquierdo del manto. Este procedimiento
es mínimamente invasivo para que las babosas vivas sobrevivieran sin problemas. En
especímenes preservados, se tomó tejido de la pared del cuerpo o del lado izquierdo del
manto. Para su conservación, los animales se relajaron y sacrificaron en agua o en una mezcla
de agua y 2 ó 3 gotas de una solución del tensioactivo sintético SUPRALAN-UF (tres partes de
SUPRALAN-UF, un éter poliglicol de alcohol graso; Bauer Handels-GmbH, Adetswil, Suiza – a
dos partes de agua). Las preparaciones de babosas con penes evertidos se obtuvieron con un
poco de suerte ahogando animales que estaban listos para copular. La eversión del pene se ve
favorecida por una rápida reducción de oxígeno en el agua de ahogamiento obtenida
ahogando varios animales juntos y un ligero movimiento regular de la jarra combinado con un
calentamiento muy suave. El método de Colosi (1919) para usar una solución veratric aún no
se ha probado. Este método debería producir babosas con penes evertidos y posiblemente
también proporcione un procedimiento para estudiar la morfología de los peines peniales y
las estructuras superficiales de los penes. Con ambos métodos no se alcanza una eversión
completa de la punta del pene. Esto parece tener razones morfológicas funcionales que
también desempeñan un papel en el acondicionamiento de los espermatozoides y debe
investigarse más a fondo mediante cortes finos. Todos los animales fueron fijados y
conservados en etanol. Los estudios morfológicos siguieron procedimientos estándar.
El material está depositado en la ZSM, en el SMNS (Coll. Falkner) y en el MNHN. Las

eluciones de ADN se almacenan en el banco de ADN del ZSM (verhttp://www.
zsm.mwn.de/dnabank/).
2.2 Análisis de secuencias de ADN
El ADN se aisló de una pequeña muestra de tejido del manto o de la pared del cuerpo de las
babosas utilizando un kit de extracción QIAGEN (Qiagen Blood and Tissue Kit). Alrededor de
650 nucleótidos del citocromo mitocondrialCEl gen de la subunidad I de la oxidasa (COI) se
amplificó mediante reacciones en cadena de la polimerasa (PCR) para todos los taxones
utilizando el conjunto de cebadores: mtCOI-1F-54 (50-TTTCAACAAAYCATAARGATATTGG-30) y
mtCOI-1R-53 (50-AAYACCAATAGAAATTATAGCATAAA-30). Los cebadores se basaron en los
cebadores universales COI (Folmer et al.1994) y los cebadores utilizados por
Hyman et al. (2007) y fueron evaluados mediante el programa informáticoAlineación1.2 (Inglés

1993). Las condiciones de PCR fueron: 92-C durante 4 min, luego 40 ciclos de 92-C por 1
minuto, 50-C durante 1 minuto, 72-C por 1 min y elongación final 72-C durante 5 min.
Los productos de la PCR se purificaron con una de tres técnicas, según la calidad y la
intensidad de los resultados de la PCR: un kit de purificación de ADN de Qiagen (kit de
purificación por escisión de banda ultralimpia) o con ExoSapIt [el producto de la PCR se incubó
a 37-C durante 30 min y luego a 85-C durante 15 min con 5 unidades de exonucleasa I (ExoI;
Amersham) y 0,5 unidades de fosfatasa alcalina de camarón (SAP; Amersham) para escindir los
nucleótidos de uno en uno de los extremos de los cebadores en exceso y para inactivar los
nucleótidos individuales (Werle et al.1994)]. Los productos de PCR purificados se amplificaron
con los mismos cebadores anteriores con un kit de secuenciación de ciclo Terminator BigDye
v3.1, se limpiaron con columnas SephadexG-50 Superfine (GE Healthcare) y se secuenciaron
con un secuenciador automático capilar Applied Biosystems 3730 de acuerdo con el protocolo
estándar. . Las secuencias fueron ensambladas y corregidas usando Sequencher™ (Gene
Codes), alineado manualmente en el programa Se-Al v. 2.0a11 (Rambaut1996) y depositado en
GenBank (para los números de acceso, consulte la lista de material en el Suplemento). La
alineación se recortó a 615 nucleótidos, comenzando con la posición 40 del taxón de
referencia.Biomphalaria glabrata (Say, 1818) (número de GenBank NC 005439) y terminando
en la posición 655.
Antes del análisis filogenético, los datos se dividieron en sitios de codón primero, segundo
y tercero. La selección del modelo se realizó mediante comparaciones de las pruebas de razón
de verosimilitud jerárquica y las puntuaciones del criterio de información de Akaike en
MrModeltest2.3 (Nylander)2004). El modelo general reversible en el tiempo (GTR) con ocho
rayos gamma discretos (GRAMO)categorías y una proporción de sitios invariantes (I) (GTR+
GRAMO8+I). El muestreo de Markov Chain Monte Carlo (MCMC) se llevó a cabo enseñorbayes
3.1.2 (Ronquist y Huelsenbeck2003) para 1.000.000 de generaciones (cuatro cadenas simultáneas, frecuencia
de muestreo 50, quemado de 100.000 generaciones). Los árboles de consenso de la regla de la mayoría se
calcularon a partir de los conjuntos de árboles muestreados.
Los árboles filogenéticos estaban enraizados enVitrina pelúcida,porque Vitrinidae
parece ser la familia más basal de la superfamilia Limacoidea (Hausdorf1998).
Las distancias genéticas inter e intraespecíficas se calcularon con la versión MEGA
4.0 (Tamura et al. 2007) usando el modelo de 2 parámetros de Kimura (K2P), el modelo
más efectivo cuando las distancias son bajas (Nei y Kumar2000).
3 resultados
3.1 Estudios Morfológicos y de Cópula
Con base en los resultados preliminares, se pueden definir dos grupos de especies: las
Wolterstorffi- grupo (fig.1a–e) y elCórcega-grupo sensu lato (Fig.2a–e).
Representantes de laWolterstorffi-grupo (llamado así porL. wolterstorffisimroth, 1900) son generalmente
animales pequeños (menos de 10 cm, en su mayoría unos 8 cm), en su mayoría oscuros
410 B. Nitz et al.
Figura 1Fotos de habitus de diferentes morfos de color delWolterstorffi-grupo. Todas las imágenes
detalladas son aproximadamente 2/3 de tamaño natural. (una, b)Limax vizzavonensisnorte. nom. (a)
Espécimen de Vizzavona cerca de Cascade des Anglais (no. 12 en el mapa, Fig. 10); (b)espécimen de Ruine de
Sorba (nº 10 en el mapa),blanquecino cremoso,pero no albino; (C)espécimen (F1) de Monte Rotondo cerca de
Petra Piana (no. 9 en el mapa),profundo negrotransformar, enservirmostrando eloscurocampos laterales de
la suela (fotografía, cortesía de CM Brandstetter); (d)espécimen de Vallée de la Restonica en Tuani morfo con
manchas brillantes irregulares; (mi)espécimen de Oporto, ravin du Riù (n° 3 en el mapa),gris parduscomorph
con brillo metálico (fotografía, cortesía de M. Falkner)
a uniformemente negro sin patrones definidos y nunca muestra pigmentación roja en el

cuerpo o la suela. Las crías y los juveniles tempranos investigados hasta ahora exhiben
un color de cuerpo difuso que carece por completo de bandas laterales ("Stammbinden"
sensu Simroth; Fig.3a–d). Esta carencia ha sido verificada por las observaciones de ocho
poblaciones (Monte Cinto, Citadelle of Corte, Porto, Vallée de la Restonica, Monte
Rotondo, Bergeries de Baccialojo, Vizzavona, Plateau de Coscione), y define para
Córcega un carácter discriminatorio de laWolterstorffi-grupo. En todo el generoLimax,
este carácter sólo se ha observado fuera de Córcega duranteL. ianniniiGiusti, 1973, y
L. brandstetteriFalkner, 2008, dos especies basales unicolores dentro delLimax máximo
grupo. Además, los experimentos de reproducción dentro de laCórcega-grupo con
animales de Córcega (11 poblaciones) e Italia continental (9 poblaciones) mostró la
presencia constante de “Stammbinden” al menos en las primeras etapas de desarrollo
(Fig.3e–g); este carácter es compartido con la mayoría de losLimaxespecies. El examen
morfológico de laWolterstorffi-grupo muestra una gran variedad en
Figura 2Fotos de habitus de diferentes morfos de color en elCórcega-grupo sensu lato. Todas las imágenes
detalladas son aproximadamente 2/3 del tamaño natural. (a)limax córsico,topotipo de Bastelica (n° 28 en el
mapa, Fig. 11); (b)espécimen de Vizzavona (núm. 26 en el mapa), morfo con bandas interrumpidas y puntos
brillantes difusos en el manto; (cd)Vallée de la Restonica en Tuani, (nº 25 en el mapa):
(C)juveniles de dos morfos de color simpátricos que muestran una fenología diferente, aunque
genéticamente no son diferenciables: el ejemplar más grande de la cohorte oscura se fotografía
junto al ejemplar más retrasado de la cohorte rojiza; (d)Ejemplar adulto consuela roja; (mi)espécimen
de Castagniccia cerca de Croce, morfo con lenguado blanquecino cremoso; esta forma rufinless está
restringida al centro de Castagnicca y es dominante en el Monte San Petrone
longitud del pene en especímenes preservados. Por ejemplo, la longitud observada del pene de L. sp.
(Oporto) (Fig.4a) es aproximadamente el doble de la longitud del cuerpo. En contraste con este pene
largo y delgado, el pene deL. wolterstorffies menor que la longitud del cuerpo y muy gruesa (Fig.4b).
Sobre la base de los resultados de los análisis morfológicos, se pueden distinguir de ocho a diez
especies, aunque todavía faltan por completo los datos sobre el comportamiento reproductivo.
En la Corsicus-grupo sl, están presentes especímenes de Córcega y de la península de los

Apeninos adyacente. Aunque las especies de este grupo de especies tienen características de cópula
específicas con una gran variedad en la longitud del pene (Figs.5y6), comparten un modo distinto de
transferencia de esperma a través de los penes extendidos, mientras que en otros grupos de
especies (por ejemplo,cinereoniger-omaximus-grupo), el pene se evierte con la masa de esperma ya
en la punta. Hasta ahora, los criterios morfológicos no han logrado
412 B. Nitz et al.
Fig. 3Desarrollo cromático de juveniles. Todas las imágenes detalladas son aproximadamente dos veces el
tamaño natural. (anuncio)Descendencia de representantes del grupo Wolterstorffi: no hay rastros de
"Stammbinden". (a)F1 de un espécimen de la meseta de Coscione, fotografiado 1 h después del final de la
eclosión, los embriones no desarrollan pigmento en los huevos; (b)F1 de un ejemplar del Monte Rotondo,
fotografiado poco después de la eclosión, la pigmentación del cuerpo ya comienza en los huevos; (C)F1 de un
espécimen de la Ciudadela de Corte, fotografiado 1 día después de la eclosión;
(d)los mismos animales que en (C)4 semanas después. (p.ej)Descendencia de representantes del grupo Corsicus
(grupo Cap Corse/Toscana como ejemplo): “Stammbinden” siempre están presentes. (mi)F1 de un ejemplar de Furiani,
4 días después de la eclosión, alimentándose de pepino; (F)F1 de un ejemplar de Pietrabugno, Casevecchie, 5 días
después de la eclosión, las bandas laterales del cuerpo están presentes pero muy poco desarrolladas; (gramo)F1 de
un ejemplar de Furiani, 3 semanas después de la eclosión
dividir aún más este grupo, pero los datos moleculares (ver más abajo) distinguen un
endémico Córcega-grupo con representantes estrictamente corsos (Figs.5b, c, d,6b, c, y
7a) y el grupo Cap Corse/Toscana (Figs.5e,6e, y7b) con representantes en Córcega y la
península de los Apeninos. para el endémicoCórcega-mismo grupo, la comparación de
la morfología del pene y los modos de cópula muestra claramente diferencias
morfológicas severas que justifican la suposición de al menos cinco especies diferentes
en Córcega. Especieslsp. (Bonifatu) ylsp. (Tuani), por ejemplo, ambos posicionados en
este grupo, representan especies con diferencias genitales muy marcadas (Figs.5b, c,6b,
c, y8b).
Los caracteres morfológicos en el grupo Cap Corse/Toscana revelan la existencia de
al menos dos especies para Córcega. Los ejemplares de la localidad de Furianilsp.
Figura 4Fotografías de disección de las dos formas extremas en elWolterstorffi-grupo. (a)Limaxsp. (Oporto);
los animales de esta nueva especie tienen un pene extremadamente largo y delgado. (b)Limax Wolterstorffi (
topotipo): pene corto y macizo
(Cap Corse A), por ejemplo, muestran un modo de cópula único (Figs.5ey6e) y una
morfología del pene muy especial (Fig.7b).
3.2 Análisis de secuencias
Los resultados del análisis filogenético (Fig.9) muestran monofilia tanto para la familia
Limacidae (incluyendoLimax, LimacusyLehmannia)y el generoLimax (probabilidad
posterior, PP 100%). La parte basal de laLimaxclado está bien resuelto, conL.
wohlberedtiyL. cinereonigerdivergente basalmente (PP 100%, 100%). Todas las especies
que representan linajes europeos no corsos (sin los parientes italianos de los corsos) son
claramente distintas de sus vecinos más cercanos [L. brandstetteri, L. maximus, L.
cinereoniger, L. ianninii, L. wohlberedti, L.sp. (Mte. Altísimo),
lsp. (Mte. Baldo),Limacus flavus]y forman grupos monofiléticos que en la mayoría
de los casos están respaldados por probabilidades posteriores del 100%. La
reconstrucción filogenética apoya firmemente la suposición preliminar de dos
grupos de especies independientes de Córcega/Tirreno: un grupo mixto de algunas
islas italianas y el continente y Córcega (flecha) y un grupo de especies endémicas
de Córcega (barra G). Este último grupo (Wolterstorffi-grupo) es bien resuelto y
monofilético (PP 100%). Las especies ya descritas (L. wolterstorffiyL. vizzavonensis
norte. nom.) y también las especies sin nombre [comolsp. (Coscione),lsp. (Oporto) y
lsp. (Restonica)] muestran una separación monofilética bien sustentada.
414 B. Nitz et al.
Figura 5Máxima extensión de los penes entrelazados durante la cópula en elCórcega-grupo sensu
lato. Todo a escala. (a)Montagnola Senese, Toscana, 92,5 cm (fotografía, cortesía de CM
Brandstetter); (b)Bonifatu (n° 23 en el mapa, Fig. 11), 50 cm; (C)Tuani, Restonica Valley (n° 25 en el
mapa), 19 cm; (d)Marmuccio, Castagniccia, 27 cm; (mi)Furiani-Marinella (n° 21 en el mapa), 22 cm; (F)
Capraia (nº 31 en el mapa), longitud estimada 28,0 cm (fotografía, cortesía de F. Giusti)
Figura 6Morfología de los penes en elCórcega-grupo sl durante o poco después del intercambio de esperma. Letras
coincide con las parejas de la Fig.2. Todas las imágenes detalladas son aproximadamente 2/3 de tamaño natural.
Longitud estimada del pene: (b)5 cm; (C)2 cm; (mi)6,5 cm; (F)4 centímetros (F:fotografía, cortesía de F. Giusti)
Figura 7Ejemplos de especialización anatómica en elCórcega-grupo. (a)Espécimen de Sperono (no. 30 en el

mapa), pierna. E.Th.J. Ripken 1996; inserción terminal de retractor y conducto deferente, morfología de la
punta del pene correspondiente aL. córsicos. calle; (b)espécimen de Furiani-Marinella (no. 21 en el mapa, Fig.
11), F1; ciego distinto e inserción lateral del retractor y conducto deferente
416 B. Nitz et al.
Figura 8Morfología de penes evertidos de formas claramente distinguibles delCórcega-grupo de diferentes

lugares de muestreo. (a)Truggia (n° 27 en el mapa, Fig. 11); (b)Bonifatu (núm. 23 en el mapa), no
completamente evertido; (cd)Dos formas simpátricas de Grigione (no. 19 en el mapa)
Por el contrario, las diferencias de especies dentro del grupo de otras especies
(flecha) están menos respaldadas. El análisis revela un gran grupo de especies y
poblaciones mixtas de Córcega, la península de los Apeninos y varias otras islas del
Tirreno (Cerdeña, Capraia, Elba): elCórcega-grupo sensu lato. Dentro de esta
agrupación, tenemos clados monofiléticos distintos para las dos especies de las islas de
Capraia y Elba (L. giustiinorte. sp. yL ilvensisnorte. sp., ver Apéndice). Más adelante,
varios grupos no corsos están formados por ejemplares de la península de los Apeninos
[ciminensis-grupo: compás F, “sp. 2” de la lista de verificación italiana (Manganelli et al.
1995): desnudo, senensis-grupo: barra D, grupo de “Islas Fósiles” (“Isole Fossili” sensu
Lanza 1984): compás B].
Los ejemplares de Córcega se dividen en dos clados: los endémicosCórcega-grupo (barra
C) y el grupo Cap Corse/Toscana (barra A). Este último clado monofilético (PP 100%)
forma un grupo no resuelto que incluye especímenes de Toscana (península de los
Apeninos) y especímenes de Cap Corse (la parte más al norte de Córcega).
el endémicoCórcega-El grupo (PP 91%) comprende especímenes solo de Córcega, es
decir, toda el área de la Córcega Herciniana y la parte sur de la Córcega Alpina (véanse
también las Figs.10y11).
La divergencia de secuencias dentro de los tres grupos de especies (Wolterstorffi-
grupo, EndémicaCórcega-grupo Cap Corse/Toscana-grupo) es 3.9, 0.1 y 0.1%
respectivamente (Tabla1). La divergencia de secuencia entre los grupos es del 10,8%
para el Wolterstorffi-grupo y la endémicaCórcega-grupo. Entre losWolterstorffi- grupo y
el grupo Cap Corse/Toscana, hay una divergencia de secuencia del 10,8%
Figura 9Árbol de consenso de la regla de la mayoría del análisis de inferencia bayesiano de los datos COI. Las
probabilidades posteriores están marcadas encima de las ramas.Flecha Corsicus-grupo sensu lato.Barra A
418 B. Nitz et al.
también. para el endémicoCórcega-y el grupo Córcega/Toscana, la divergencia

de secuencia entre ellos es del 1,4%.
Divergencia interespecífica dentro de laWolterstorffi-grupo varía de 1,1 a 6,8%
(Cuadro2), con un valor promedio de 3.9%.
3.3 Distribución
Todos los sitios de distribución conocidos delWolterstorffi-grupo (fig.10) están ubicados

en hábitats montañosos en la Córcega Hercínica (la parte geológicamente antigua y
cristalina de Córcega; Fig.10insertar). Tanto la endémicaCórcega-y las especies corsas
del grupo Cap Corse/Toscana tienen su preferencia ecológica en la zona de bosque
montano. el endémicoCórcega-El grupo se encuentra en la parte media y sur de
Córcega, mientras que los especímenes corsos del grupo Cap Corse/Toscana están
restringidos a la región de Cap Corse, la parte más al norte de la isla (Fig.11). El rango de
distribución de los especímenes italianos del grupo Cap Corse/Toscana también
comprende hábitats en la Toscana.
4. Discusión
4.1 Escenarios Biogeográficos
El patrón de distribución actual de laLimaxLa historia geológica ciertamente ha influido

en las especies de la zona del Tirreno. La polifilia de los grupos sardos y corsos implica
que hubo varios eventos de colonización independientes en las islas de Cerdeña y
Córcega, así como en las islas más pequeñas más cercanas a la Italia continental.
Aunque actualmente no es posible una escala directa de los eventos de división en el
árbol, la geohistoria de ambas islas sugiere solo unos pocos eventos de colonización:
Córcega fue colonizada porLimaxal menos tres veces. La primera radiación deLimax, el
Wolterstorffi-grupo, es (según el conocimiento actual) endémico de la Córcega herciniana, lo
que sugiere una colonización muy antigua de una población del continente europeo. En
consecuencia, este grupo probablemente tiene su origen en el continente francés y se ha
separado de los taxones continentales por la rotación de la microplaca Córcega-Cerdeña
(Álvarez1972; Durand Delga1974). El marco de tiempo para este evento es durante el Eoceno u
Oligoceno a más tardar (30–21 Mya). Una prueba de esta hipótesis sería
Figura 9 (continuación) Cap Corse/grupo Toscana.Barra Bgrupo de islas fósiles.Barra CEndémico Córcega-
grupo.Bar D senensis-grupo.Desnudogrupo de “sp. 2” de la lista de verificación italiana (Manganelli et al.1995
).Bar F ciminensis-grupo.Bar G Wolterstorffi-grupo
Figura 10Localidades de las poblaciones estudiadas de laLimax wolterstorffi-grupo. Mapa base MNHN
(modificado).InsertarGeología simplificada según A. Gautier (1983). (1)Circo de Bonifatu, 610 m (loc. típ.
Wolterstorffi); (2)Oporto, D 81 dirección Piana; (3)Oporto, ravin du Riù; (4)Casamaccioli, 990 m;
(5)Bosque de Melo, 1.300 m; (6)Corte, Ciudadela, 450 m; (7)Vallée de la Restonica, 900–1000 m;
420 B. Nitz et al.
el hallazgo de taxones hermanos delWolterstorffi-grupo en el sur de Francia, un tema para

futuros estudios.
Un segundo linaje adicional deLimaxderivado de la cepa europea antigua mencionada
anteriormente y siguió las cadenas ya formadas y expuestas (del Mioceno) de los Alpes
occidentales y de Liguria más adelante a lo largo de la cadena de los Apeninos (cf. Rook et al.
2006: Higo.2) e irradiado en Italia central (Lacio, Campania). Este linaje – en nuestro árbol está
representado por la subsiguiente desviación deLimax máximos. lat.,
L. ianninii,ylsp. (Mte. Altissimo) (correspondiente a “Limaxsp. 3” del Checklist italiano de
Manganelli et al.1995) – dio lugar a todas las colonizaciones posteriores de Córcega, así
como a la colonización de Cerdeña y las pequeñas islas cercanas a Italia (ver más abajo).
Más puentes terrestres que permitenLimaxentrar en Córcega probablemente ocurrió solo

durante el Pleistoceno; este escenario de colonización se basa en las siguientes consideraciones: en
primer lugar, a pesar de un muestreo denso, no existe un taxón de Córcega que pertenezca a la
radiación Lacio-Cerdeña mencionada anteriormente. En consecuencia, Córcega probablemente no
estuvo conectada ni con Cerdeña ni con Lacio durante el Mioceno tardío. En segundo lugar, una gran
transgresión marina durante el Plioceno hizo improbable cualquier intercambio faunístico terrestre.
En tercer lugar, solo las regresiones marinas que siguieron al inicio de las edades de hielo en el
Pleistoceno ofrecieron conexiones terrestres nuevamente. Cuarto, las bajas diferencias genéticas de
los miembros de la EndémicaCórcega-grupo implica una radiación reciente. Y, quinto, las dos
principales radiaciones corsas (laWolterstorffi-grupo y la endémicaCórcega-grupo) son
genéticamente claramente distintos, lo que sugiere una considerable separación a largo plazo de
estos grupos de especies.
Por lo tanto, esta segunda colonización de Córcega probablemente tuvo lugar en el
Pleistoceno (Inicio o) Medio (780-130 ka). Curiosamente, este grupo ahora endémico de los
Córcega-El grupo parece haber llegado inicialmente solo al área herciniana (es decir, más
antigua) de Córcega, lo que sugiere que todavía no había conexión con la Córcega alpina más
joven (noreste de Córcega). La Córcega alpina estaba separada de la Córcega de Hercinia y del
puente terrestre del norte de Liguria-Océano por un pequeño canal marino, o todavía no se
elevaba tectónicamente lo suficiente como para alcanzar la superficie del mar (Cavazza et al.
2001; Brunet et al.2000; Danisik et al.2007).
En el continente italiano, los últimos remanentes de esta segunda ola de colonización son
las Limaces de las “Islas Fósiles”: esta área occidental de la Toscana se inundó durante el
Plioceno, excepto por una serie de picos montañosos sobre el nivel del mar (Brunet et al. 2000;
Cipollari et al.1999; Brogi2008).
La regresión masiva del nivel del mar durante el Pleistoceno (Medio o) Tardío
(probablemente W€urm glaciación, 115.000–10.000 AP) posiblemente permitió la tercera
colonización más joven del grupo Córcega sl (el grupo Cap Corse/Toscana), que
Figura 10 (continuado) (8)Vallée de la Restonica, 1.080 m; (9)Monte Rotondo, cerca de Petra Piana,
1.850 m; (10)Ruina de Sorba, 1.254 m; (11)Vizzavona, margen derecha del Vecchio, 850 m; (12)
Vizzavona, 1120–1190 m (ubicación típ.mínimo); (13)Monte Renoso, Bastani, 2.090 m; (14)Monte
Renoso, Vitalacia, 1.800 m; (15) Bosque de Coscione, 1.340 m; (dieciséis)Meseta de Coscione, 1.360 m
Figura 11Localidades de las poblaciones estudiadas de laLimax corsicus-grupo. Mapa base MNHN
(modificado).marco verdeEndémicoCórcega-grupo;marco amarillogrupo Cap Corse/Toscana;marco
lilaAislamiento de Capraia. (17)Vallée de la Méria; (18)Nonza; (19)Vallée du Grigione; (20) pietrabugno;
(21)Furiani-Marinella; (22)Monte San Petrone, 1.060 m; (23)Bonifatu, 550 m;
422 B. Nitz et al.
tabla 1Porcentaje de divergencia de la secuencia de nucleótidos (distancias K2P) en COI dentro y entre los grupos de
especies de Córcega/Toscana. (nortenúmero de especímenes en cada grupo)
Dentro de las especies Entre grupos Cabo Córcega/

grupos grupo toscana
grupo de especies norte Wolterstorffi-grupo Endémico
Córcega-grupo
Wolterstorffi-grupo 22 3.9
Endémico 20 0.1 10.8
Córcega-grupo
Cabo Córcega/ 14 0.1 10.8 1.4
grupo toscana
presumiblemente ingresó a Córcega en la parte alpina nororiental de la isla, la parte más

cercana de Córcega al continente italiano.
Debido a la posición filogenética basal del sardoLimaxen comparación con los taxones de
Córcega, actualmente preferimos la siguiente hipótesis para el origen de las especies de Cerdeña.
Cerdeña fue probablemente colonizada por dos linajes deLimaxen el Mioceno superior tardío
(alrededor de 5 millones de años), durante el extenso período de nivel del mar más bajo después de
una evaporación a gran escala del mar Mediterráneo ("crisis de salinidad de Messiniense"). Los
sistemas de drenaje de agua dulce en las áreas expuestas poco profundas y las condiciones salobres
en las cuencas más profundas (entorno "Lago-Mare") dieron como resultado puentes terrestres. El
origen de la colonización de Cerdeña conLimaxestaba en el continente italiano, presumiblemente en
el norte de Lacio, que estaba conectado a través de las partes expuestas del norte de la corteza
oceánica del Tirreno (Jolivet et al.2008; Govers et al.2009).
Las islas más pequeñas de Capraia y Elba, así como las "Islas Fósiles" mencionadas
anteriormente en la Toscana, permanecieron aisladas (o parcialmente sumergidas) durante el
Plioceno, pero probablemente ya se conectaron repetidamente con la Italia continental
durante los períodos de enfriamiento del Pleistoceno temprano (1.8– 0.78 Mya) lo que resultó
en regresiones marinas moderadas. Tanto el linaje de los primerosCórcegaradiación ahora
endémica de Hercynian Córcega y la parte sur de Alpine Córcega ("endémicaCórcega- grupo”),
así como la radiación posterior de Cap Corse/Toscan probablemente derivada del área de las
“Islas Fósiles”. El aislamiento geográfico de Capraia y Elba condujo a la formación de dos
especies hermanas distintas:L. giustiinorte. sp. yL. ilvensisnorte. sp. (ver el Apéndice). Otro
grupo de paleoendémicos, caracoles pulmonares del género TaqueocampileaL. Pfeiffer, 1877,
muestra un patrón de distribución similar (Giusti 2007) con especies endémicas de Córcega,
Capraia y Cerdeña.
La interpretación esbozada de los diversos eventos de colonización porLimaxspp. en
el área del Mediterráneo occidental están totalmente de acuerdo con la evidencia
paleontológica del intercambio faunístico de mamíferos entre provincias
paleobiogeográficas en Italia (Rook et al.2006) así como estudios filogenéticos realizados
con Amphibia (Zhang et al.2008; Meijden et al. 2009; Stock et al.2008), y Reptilia (Mayer
Figura 11 (continuado) (24)Corte, al oeste de Citadelle, 430 m; (25)Tuani, Vallée de la Restonica, 624
m; (26)Vizzavona, 860 m; (27)Truggia, Vallée du Liamone; (28)Bastelica, 770 m (ubicación típ. córcega);
(29)Bosque de Piattone, 1.035 m; (30)Sperono, al oeste de Bonifacio; (31)capraia
Tabla 2Porcentaje de divergencia de la secuencia de nucleótidos (distancias K2P) en COI entre las especies delWolterstorffi-grupo
Especies lsp. L. wolterstorffi L. vizzavonensis lsp. lsp. lsp lsp lsp lsp lsp
(Restonica) (Oporto) (Casamaccioli) (Corte) (Ft. (Coscione) (Mte. (Mte.
melo) Renoso) rotondo)
lsp. (Restonica)
L. wolterstorffi 4
L. vizzavonensis 5.3 4.9
lsp. (Oporto) 4.8 2.1 4.5
lsp. 4.5 1.9 4.4 2.1
(Casamaccioli)
lsp (Corte) 1.2 4.1 5.5 3.7 4.3
lsp (Ft.Melo) 2 4.3 5.7 4.7 4.9 2.1
lsp (coscione) 6.8 4.6 4.9 4.8 4.6 6.4 6.4
lsp 4.6 2.9 3.5 2.9 2.7 4.3 4.7 2.1
Inferir corso múltipleLimax (Pulmonata: Limacidae) Radiaciones
(Mt. Renoso)
lsp (Mte. 4.7 3.7 1.1 3.3 3.5 4.8 5 4.2 2.3
rotondo)
423
424 B. Nitz et al.
y pavlicev2007) aunque estos estudios varían en su interpretación de los eventos y su

momento.
4.2 Límites de especies
Los supuestos de grupos de especies y especies en Córcega se infirieron con beneficio mutuo
de la morfología y de los análisis de secuencia de un fragmento del gen mitocondrial
citocromoCsubunidad I de oxidasa. Esta última también permite la reconstrucción del árbol y
proporcionó la base de nuestras hipótesis de colonización múltiple de Córcega. Además,
nuestro estudio proporciona información sobre los beneficios y los límites de los códigos de
barras COI estándar:
en el caso de laWolterstorffi-grupo (y la mayoría de los otrosLimaxgrupos de especies; BN,
observación personal), podría establecerse un código de barras de especies estándar (es decir,
reidentificación y detección de otras especies mediante secuenciación COI parcial). En todos los casos
probados, el árbol basado en COI resuelve las mismas especies que fueron detectadas por caracteres
morfológicos. Las divergencias de secuencia dentro de este grupo son en la mayoría de los casos (33
de 45 emparejamientos; cf. Tabla2) superior al 3% entre especies, aunque todas las especies pueden
estar conectadas por valores inferiores al 3%.
Sin embargo, la Endémica más jovenCórcega-y el grupo Cap Corse/Toscana que
contiene especímenes de Córcega y la península de los Apeninos muestran claramente
los límites del código de barras estándar de ADN en relación con la reidentificación con
COI. A pesar de la falta de resolución en el árbol molecular, los caracteres morfológicos y
de copulación sugieren que EndémicaCórcega-grupo comprende al menos cinco
especies, incluida la genuinaL. córsicos. calle de la localidad tipo.
Ambos últimos mencionadoscórcega-los grupos con radiación bastante reciente comparten
secuencias COI muy similares (0,1% de divergencia de secuencia en estos grupos); un enfoque de
código de barras acrítico subestimaría el número real de especies determinado por la anatomía
genital y el comportamiento reproductivo.
El caso actual es un ejemplo significativo de que, incluso dentro de un solo género, los límites de
las especies pueden diferir sustancialmente a nivel molecular.
4.3 Consideraciones evolutivas
La baja diversidad genética en contraste con la anatomía genital distinta y las características de
cópula sugieren una tasa de especiación acelerada de las dos radiaciones más jóvenes en
comparación con laWolterstorffi-grupo. Esta aceleración puede ser desencadenada por agentes
extrínsecos e intrínsecos. En primer lugar, el aumento de la tasa de fragmentación de los hábitats de
la parte más profunda de Córcega (al contrario de la parte de Hercinia) por los cambios en el nivel del
mar. Alternativamente, podría haber habido un intercambio genético entre poblaciones o especies in
statu nascendi de la península de los Apeninos y la isla de Córcega (quizás también muy
recientemente por influencia humana). Y segundo, el rápido establecimiento de los límites de las
especies por una fuerte selección sexual que también se refleja en una extremadamente
complicado modo de cópula con transferencia de esperma a través de los penes extendidos. El
comportamiento de cópula único y complejo y los caracteres morfológicos asociados, como la
longitud y la forma del pene, son criterios de diagnóstico para cada especie. La naturaleza
discriminatoria de los órganos copuladores también es obvia en la ocurrencia simpátrica de
diferentesLimaxespecie en Córcega.
5. Conclusiones
El enfoque combinado de caracteres morfológicos y secuenciación COI reveló

colonización múltiple y tres radiaciones independientes de Córcega porLimax. Además,
nuestro estudio proporciona un caso que muestra los beneficios y las desventajas de los
códigos de barras COI dentro de un solo género: a excepción de las radiaciones jóvenes
en Córcega y Toscana, los códigos de barras estándar brindan suficiente resolución para
identificar los otros Limaxy ha llevado a la confirmación molecular de dos endémicas
insulares no reconocidas hasta ahora que se describen en el Apéndice. Además, los
resultados establecen un marco para facilitar la selección de especímenes para futuros
análisis filogenéticos con más genes. En resumen, el presente estudio muestra la
necesidad de un enfoque morfológico-molecular combinado o una taxonomía
integradora.
Expresiones de gratitudEste trabajo fue apoyado por la DFG (Fundación Alemana para la Ciencia) a través de
la subvención HA 2598/7 a GH dentro del Programa Prioritario “Radiaciones” (SPP 1127).
Tenemos que agradecer a un gran número de personas (mencionadas en la lista de materiales) por
recopilar amablemente o proporcionarnos material adicional. Agradecemos a todos los encargados de la
colección y al personal de diversas instituciones por brindarnos material y asistencia. La Dra. Isabel Hyman
(Sydney, Australia) comentó sobre el manuscrito y nos brindó valiosos aportes y sugerencias para el trabajo
molecular. Estamos muy agradecidos al Dr. Markus Moser (Bayerische Staatssammlung f€tu amigo€
aontología y geología M€unchen) por contribuciones muy útiles sobre la geohistoria de Córcega y las áreas
adyacentes. Margrit Falkner nos brindó un apoyo continuo y una generosa donación, lo que finalmente
permitió agregar secuencias cruciales. Estas tres secuencias han sido elaboradas por la empresa comercial
kmbs M€unchen
Estamos muy agradecidos al Prof. Dr. Folco Giusti (Univ. Siena) por brindarnos material y valiosos
comentarios y consejos sobre la taxonomía del italiano.Limax.
Agradecemos a Janine Serafini (Société des Sciences historiques et naturelles de la Corse),
Bernard Recorbet (DIREN Córcega), el difunto Bernard Roché (DIREN Córcega), Achille Pioli
(Corte, ONF), Lucien Borelli (Furiani Marinella), Jean-Claude Gabrielli (ONF) y Emilio Vichera
(Golfe de Sperono) por su muy útil y cordial apoyo en el sitio.
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Suplemento:Lista de materiales
Los correspondientes puntos del mapa de localidad en las Figs.9y10se muestran entre
paréntesis. L023, L024:Limaxsp. (Restonica); FR, Córcega, Restonica Valley (7); pierna. B. y H.
Nitz, 2004; ZSM Mol 20071660, ZSM Mol 20071661, GenbankNo. GQ145497,
GQ145498.
L030, L079:Limaxsp. (Tuani); FR, Córcega, Restonica Valley (25); pierna. B. y H.
Nitz, 2004; ZSM Mol 20071662, ZSM Mol 20071663; GenbankNo. GQ145499,
GQ145515.
L036:Limax Wolterstorffi (simroth,1900); FR, Córcega, Bonifatu (1); pierna. M. y G.
Falkner, 2000; MNHN; GenbankNo. GQ145500.
L038:Limax vizzavonensis;FR, Córcega, Vizzavona, Cascade des Anglais (12); pierna.
M. y G. Falkner, 2000; MNHN; GenbankNo. GQ145501.
L040:Limax vizzavonensis;FR, Córcega, Sorba (10); pierna. M. y G. Falkner, 2000;
MNHN; GenbankNo. GQ145502.
L043, L044:Limaxsp. (Oporto); FR, Córcega, Oporto (2; 3); pierna. M. y G. Falkner,
2000; MNHN; GenbankNo. GQ145503, GQ145504.
L046:Limaxsp. (Casamaccioli); FR, Córcega, Casamaccioli (4); pierna. m &
G. Falkner, 2000; MNHN; GenbankNo. GQ145505.
L048:Limax vizzavonensis;FR, Córcega, Bastani/Monte Renoso (13); pierna. B. y J.
Recorbet, 2003; MNHN; GenbankNo. GQ145506.
L049:Limaxsp. (Rugelona B); TI, Toscana, Com. Talla, localidad Ruggelone; pierna.
W.Weidinger, 2003; SMNS ZI 0071837; GenbankNo. GQ145507.
L066:Limaxsp. (Corte); FR, Córcega, Corte, Citadelle (6); pierna. M. y G. Falkner,
F1; Col. Falkner SMNS ZI 0071838; GenbankNo. GQ145508.
L068:Limax wolterstorffi;FR, Córcega, Bonifatu (1); pierna. M. y G. Falkner, 2002;
MNHN; GenbankNo. GQ145509.
L069, L070:Limaxsp. (Tuani); FR, Córcega, Restonica Valley (25); pierna. M. y G.
Falkner, 2000; MNHN; GenbankNo. GQ145510, GQ145511.
L072:Limaxsp. (Corte); FR, Córcega, Corte, Citadelle (24); F2; Coll Falkner;
SMNS; ZI 0071839 GenbankNo. GQ145512.
L074:Limaxsp. (Cap Córcega A); FR, Córcega, Furiani (21); F1; Col. Falkner;
SMNS ZI 0071840; GenbankNo. GQ145513.
L085:Limaxsp. (Rugelona B); TI, Toscana, Com. Talla, localidad Ruggelone; F1;
Col. Falkner; SMNS ZI 0071842; GenbankNo. GQ145516.
L088:Limaxsp. (Mte. Baldo); IT, Lombardía, Monte Baldo; pierna. M. y G. Falkner,
B.Nitz, 2004; ZSM Mol 20071664; GenbankNo. GQ145517.
L094:Limaxsp. (Mte. Sagro); IT, Toscana, Alpi Apuane, Monte Sagro; pierna. m &
G. Falkner, B. Nitz, 2004; ZSM Mol 20071665; GenbankNo. GQ145518.
L100:Limaxsp. (Mte. Altísimo); IT, Lombardía, Monte Altissimo; pierna. M. y G.
Falkner, B.Nitz, 2004; ZSM Mol 20071666; GenbankNo. GQ145519. L111,
L112, L125:Limaxsp. (Mte. San Petrone); FR, Córcega, Castagniccia,
Monte San Petrone (22); pierna. M. y G. Falkner, B. Nitz, 2004; ZSM Mol
20071667 - ZSM Mol 20071669; GenbankNo. GQ145520, GQ145521,
GQ145522.
L126, L127, L129, L140:Limaxcf.córcegas. calle; FR, Córcega, Vizzavona (26);
pierna. M. y G. Falkner, B. Nitz, 2004; ZSM Mol 20071670 - ZSM Mol 20071673;
GenbankNo. GQ145523, GQ145524, GQ145525, GQ145526.
L143:Limax vizzavonensis;FR, Córcega, Vizzavona (11); pierna. M. y G. Falkner,
L148:Limaxsp. (Bonifatu); FR, Córcega, Bonifatu (23); pierna. M. y G. Falkner,
L150, L151:Limaxsp. (Restonica); FR, Córcega, Restonica Valley (8); pierna. m &
G. Falkner, B. Nitz, 2004; ZSMMol 20071676, ZSMMol 20071677; GenbankNo.
GQ145529, GQ145530.
L158, L159:Limaxsp. (pie Melo); FR, Córcega, Fôret de Melo (5); pierna. M. y G.
Falkner, B.Nitz, 2004; ZSM Mol 20071678, ZSM Mol 20071679; GenbankNo.
GQ145531, GQ145532.
L160:Limax vizzavonensis;FR, Córcega, Sorba (10); pierna. M. y G. Falkner, B. Nitz,
2004; ZSM Mol 20071680; GenbankNo. GQ145533.
L161, L162:Limaxsp. (pie Piattone); FR, Córcega, Fôret de Piattone (29); pierna. m &
G. Falkner, B. Nitz, 2004; ZSMMol 20071681, ZSMMol 20071682; GenbankNo.
GQ145534, GQ145535.
L164:Limaxsp. (Coscione); FR, Córcega, Plateau de Coscione (16); pierna. M. y G.
Falkner, B.Nitz, 2004; ZSM Mol 20071683; GenbankNo. GQ145536. L165:Limax
sp. (Coscione); FR, Córcega, Fôret de Coscione (15); pierna. M. y G.
Falkner, B.Nitz, 2004; ZSM Mol 20071684; GenbankNo. GQ145537. L169, L170:
Limax córsicos. calle; FR, Córcega, Bastelica (28); pierna. G. Falkner, B.
Nitz&B. Recorbet, 2004; ZSMMol 20071685, ZSMMol 20071686; GenbankNo.
GQ145538, GQ145539.
L180, L188, L189:Limax ilvensisnorte. sp.; TI, Elba; pierna. E. Schwabe y J. Bohn,
2004; ZSM Mol 20071687 - ZSM Mol 20071689; GenbankNo. GQ145540,
GQ145541, GQ145542.
430 B. Nitz et al.
L195:Limaxsp. (Cap Córcega A); FR, Córcega, Grigione cerca de Bastia (19); pierna. m &
L197:Limaxsp. (Cap Córcega A); FR, Córcega, Pietrabugno cerca de Bastia (20); pierna. METRO.
y G. Falkner, 2000; MNHN; GenbankNo. GQ145544.
L210, L211:Limaxsp. (Maiella); TI, Abruzos, Maiella; pierna. CM Brandstetter,
2004; SMNS ZI 0071844, ZI 0071861; GenbankNo. GQ145546, GQ145547. L232:
Limaxsp. (Villa Strozzi); TI, Toscana, Villa Strozzi cerca de San Gimignano;
pierna. M. y G. Falkner, 1992; SMNS ZI 0071845; GenbankNo. GQ145548. L237:
Limaxsp. (Masa Marítima); TI, Toscana, Massa Marittima; pierna. M. y G.
Falkner, 1999; SMNS ZI 0071846; GenbankNo. GQ145549.
L240:Limaxsp. (Trugia); FR, Córcega, Truggia, Liamone-Valley (27); pierna. m &
L241:Limaxsp. (Bonifatu); FR, Córcega, Bonifatu (23); pierna. M. y G. Falkner,
2000; MNHN; GenbankNo. GQ145551.
L269:Limaxsp. (Mte. Renoso); FR, Córcega, Monte Renoso (14); pierna. B. Recorbet,
2000; MNHN; GenbankNo. GQ145552.
L301:Limax ciminensis;TI, Lacio, Monte Cimino; pierna. G. Falkner y
CM Brandstetter, 2005; SMNS ZI 0071847; GenbankNo. GQ145553.
L345:Limaxsp. (Verna); TI, Toscana, Chiusi della Verna; pierna. W.Weidinger,
2005; SMNS ZI 0071848; GenbankNo. GQ145554.
L382:Limaxsp. (Torrente Trosa); IT, Toscana, Fontebagni/Torrente Trossa; pierna.
G. Falkner y CM Brandstetter, 2005; SMNS ZI 0071849; GenbankNo.
GQ145555.
L384:Limaxsp. (Marmoraia); TI, Toscana, Montagnola Senese, Marmoraia; pierna.
G. Falkner y CM Brandstetter, 2005; SMNS ZI 0071850; GenbankNo.
GQ145556.
L387:Limaxsp. (Chianti); TI, Toscana, Castellina in Chianti; pierna. G. Falkner y
L389:Limaxsp. (Vignano); IT, Toscana, Vignano cerca de Siena; pierna. G. Falkner y
L392:Limaxsp. (Mte. Rasu); IT, Cerdeña, Monte Rasu; pierna. B. y H. Nitz, 2005;
ZSM Mol 20071690; GenbankNo. GQ145559.
L405, L408, L424:Limaxsp. (Castelsecco); IT, Toscana, Castelsecco cerca de Arezzo;
pierna. G. Falkner y CM Brandstetter, 2005; SMNS ZI 0071853, ZI 0071863, ZI
0071864; GenbankNo. GQ145560, GQ145561, GQ145567.
L412:Limaxsp. (Arezzo A); IT, Toscana, Arezzo, Podere Redi; pierna. G. Falkner y
L419, L420:Limaxsp. (Mte. Rotondo); FR, Córcega, Monte Rotondo (9); pierna.
B. Recorbet, 2005; MNHN; GenbankNo. GQ145563, GQ145564.
L422, L423:Limaxsp. (Rugelona A); TI, Toscana, Com. Talla, localidad Ruggelone;
pierna. W.Weidinger, 2005; SMNS ZI 0071855, ZI 0071862; GenbankNo.
GQ145565, GQ145566.
L426:Limaxsp. (Arezzo A); IT, Toscana, Arezzo, Villa Fiorita; pierna. G. Falkner y
CM Brandstetter, 2005; ZSM Mol 20071691; GenbankNo. GQ145568.
L427:Limaxsp. (Arezzo B); IT, Toscana, Arezzo, Villa Fiorita; pierna. G. Falkner y
L506:Lehmannia marginata;Suecia, Dalsland; pierna. R. Heim, 2001; NMLU
14457; GenbankNo. FJ606455.
L523, L524:Limax giustiinorte. sp.; TI, Capraia (31); pierna. F. Giusti, 2005; IZSI 36444/1;
IZSI 36444/2; GenbankNo. GQ145582, GQ145581.
L604:Limaxsp. (Cap Córcega B); FR, Córcega, Nonza (18); pierna. M. y G. Falkner,
L605:Limaxsp. (Cap Córcega A); FR, Córcega, Vallée de la Meria (17); pierna. M. y G.
Falkner, 2006; ZSM Mol 20071694; GenbankNo. GQ145580.
L607:Limaxcf.córcegas. calle; FR, Córcega, Étang de Sperono, cerca de Bonifacio,
campo de golf (30); pierna. M. y G. Falkner, 2006; ZSM Mol 20071693; GenbankNo.
GQ145571.
L765:Limax brandstetteri (Falkner, 2008); TI, Abruzos, Maiella; pierna.
CM Brandstetter, 2005; SMNS ZI 0066222-1 ; GenbankNo. GQ145572.
L811:Limax ianninii (Giusti, 1973); IT, Lacio, Monti Reatini, Monte Terminillo;
pierna. CM Brandstetter, 2006; SMNS 0071857-1; GenbankNo. GQ145573.
L898:Limacus flavus;DE, Goch; pierna. S. Henssen, 2006; ZSM Mol 20071629;
FJ606456.
L903:Limax máximo;CH, Grisones, Chur; pierna. B. Nitz y U. Schneppat, 2006;
ZSM Mol 20071620; GenbankNo. FJ606467.
L991:Limax máximo;TI, Campania, Roccamonfina; pierna. C. y L. Cavegu, 2006;
L1016:Limax senensisLessona & Pollonera,1882); IT, Toscana, Siena; pierna. m &
G. Falkner, F1; ZSM Mol 20071699; GenbankNo. GQ145575.
L1125:Limax cinereoniger;DE, Oberkrumbach; pierna. E. Klee, A. Klee y B. Nitz,
2006; ZSM Mol 20071618; GenbankNo. FJ606460.
L1410:Limacus flavus;Reino Unido, Surrey, Banstead; pierna. J. Hutchinson, 2007; Mol de ZSM
20071630; GenbankNo. FJ606457.
L1464:vitrina pelúcida;DE, Kolbinga; pierna. B.Hausdorf, 2006; ZMH 51046;
GenbankNo. FJ606454.
L1600:Limaxsp. (Luogosanto); IT, Cerdeña, Luogosanto; pierna. B. Ruthensteiner,
L1612:Limaxsp. (Populonia A); IT, Toscana, Populonia; pierna. J. Spelda, 2007;
L1613:Limaxsp. (Populonia B); IT, Toscana, Populonia; pierna. J. Spelda, 2007;
L1749:Limaxsp. (Cutigliano); TI, Toscana, Cutigliano-Melo; pierna. G. Bertagni,
L1778:Limax cinereoniger;DE, Oberkrumbach; pierna. E. Klee, A. Klee y B. Nitz,
2007; ZSM Mol 20071619; GenbankNo. FJ606463.
W002:Limax wohlberedti;HR, Dalmacia; pierna. A. Wiktor, 1999; MNHW, col.
A. Wiktor 3004; GenbankNo. FJ606481.
432 B. Nitz et al.
Apéndice: Dos Nuevas Especies y Un Nuevo Nombre

de Peri-TyrrhenianLimax
Gerhard Falkner y Bárbara Nitz

En este apéndice, presentamos los nombres de dos especies no reconocidas hasta ahora reveladas
originalmente por el código de barras COI y reemplazamos un nombre preocupado por una especie bien
definida.
Limaxespecímenes de las islas toscanas Elba y Capraia han sido descritos por Giusti
(1969; 1976) y Giusti y Mazzini (1971) y se creía que pertenecían aLimax córsicos. calle
(ver también Pollonera 1905). Sin embargo, nuestra reconstrucción del árbol bayesiano
de 615 nucleótidos del citocromoCEl gen de la subunidad I de la oxidasa (COI) agrupó
especímenes de estas dos islas en dos clados distintos con altos valores de soporte (PP
100% para especímenes de Elba y 95% para especímenes de Capraia), colocando
L. córsicode la localidad tipo en un grupo diferente. Estos hallazgos revelan las diferencias
anatómicas (especialmente en la estructura interna del pene) encontradas por Giusti bajo una
nueva luz. De acuerdo con el Código Art. 13.1.2 (ICZN 1999), basamos los nuevos nombres en
las excelentes descripciones existentes. La información necesaria (parcialmente inédita) sobre
el material tipo fue proporcionada amablemente por el autor.
Limax giustiinorte. sp.
Descripción: Giusti 1969: Aparato genital (Fig. 12); Giusti y Mazzini1971:

Estructura interna del pene (Fig. 13).
Derivatio nominis: Nombrada en honor a nuestro distinguido colega y amigo
Prof. Dr. Folco Giusti di Massa, cuya valiosaLimax-comenzó sus estudios en su
amada isla de Capraia.
Holotipo: El espécimen representado en la Fig. 13 (Giusti y Mazzini 1971); recogidos
en el sitio de Capraian (muy cerca del pueblo y de la localidad llamada “La Grotta”) que
se llama “San Leonardo”; pierna. F. Giusti 14.04.1968 (1966 es un error tipográfico –
Giusti, comunicación personal). Longitud del cuerpo en etanol (después de ahogarse)
aprox. 6,2 cm, ancho aprox. 1cm Longitud del pene aprox. 10,5 cm. Elaboración en
colección Giusti, IZSI 22001.
Paratipos: Cuatro especímenes recolectados en el sitio de Capraian de “San Rocco”; pierna. F.
Giusti 31.10.2005. Longitud máxima en etanol aprox. 8 cm, ancho aprox. 1,5 cm. El dorso de estos
ejemplares es predominantemente uniformemente oscuro o con una banda blanquecina
correspondiente a la línea de la quilla. Preparados en la colección Giusti, IZSI 36444; Muestras de
tejido SMNS ZI 0071865 (se han secuenciado dos muestras: L523 y L524, eluciones de ADN
almacenadas en el banco de ADN ZSM).
Observaciones: De acuerdo con las observaciones personales de Giusti, los especímenes de Capraia son
en realidad un poco más pequeños que otros miembros de los llamadosL. corsicus (“pero esto no tiene una
relevancia segura, debido a la posibilidad de un fenómeno de enanismo insular”). Estimados de memoria,
alcanzan vivos una longitud de ca. 10 cm cuando está completamente
extendido. A juzgar por las fotografías, existen principalmente los siguientes morfos de color:
marrón oscuro a negruzco, marrón medio con bandas laterales de color blanco amarillento
contrastantes y la línea de la quilla, y marrón medio con bandas laterales oscuras con manchas
irregulares que están separadas del dorso más oscuro por zonas más brillantes. a veces se mancha
el escudo del manto. La coloración rojiza de la suela no suele ser muy intensa.
Giusti observó y fotografió varias cópulas en la primavera de 1983 y 1985. La base de
comparación aún no es suficiente para sacar conclusiones taxonómicas definitivas. La
acción sigue el esquema general de laCórcega-grupo descrito por primera vez por
Gerhardt (1937) para Isquia. Algunas características especiales son: los peines peniales
están bastante débilmente desarrollados, las bases peniales no están en estrecho
contacto [como, por ejemplo, enlsp. (Bonifatu)], las bases de la bursa copulatrix no están
evertidas [como, por ejemplo, enlsp. (Tuani) y ejemplares de Marmuccio], en la fase de
contracción se excreta una densa espuma blanca (que no es el caso en la Endémica).
Córcega-grupo, pero presente en el grupo de Cabo Córcega/Toscana), la extensión
máxima de los penes está entre 26 y 30 cm (ver Figs.5y6).
La nueva especie es endémica de la isla toscana de Capraia.
Limax ilvensisnorte. sp.
Descripción: Giusti 1976: Discusión de los caracteres y estructura interna del

pene (Fig. 21).
Derivatio nominis: Adjetivo formado a partir de Ilva, el nombre romano de Elba.
Holotipo: El espécimen representado en la Fig. 21 (Giusti 1976); recogido en el sitio
“Portoferraio: il Forte”, de la Isla de Elba; pierna. F. Giusti 18.02.74. Longitud en etanol
(después de ahogarse) ca. 7 cm; ancho aprox. 1,25 cm. Longitud del pene aprox. 12cm
Elaboración en colección Giusti, IZSI 11977.
Paratipos: 1 espécimen (L180), Elba, Monte Perone, ca. 600 m, biotopo con
castaños y pinos; pierna.E. SCHWABE Y J. BOHN19.10.2004. ZSM Mol 20071687. – 2
especímenes (L188 y L189), Elba, Capoliveri, ca. 250 metros; lugar de descanso
ruderalizado; pierna.E. SCHWABE&J.BOHN20.10.2004. ZSMMol 20071688 y 20071689.
Observaciones: Los paratipos y especímenes vivos adicionales (ZSM) comprendían morfos
de color marrón y marrón oscuro con lenguado rojizo, este último característico de la
Córcega-grupo.
Según Giusti, la preparación del holotipo ha sido decolorada por el etanol, pero sin embargo su
color es claramente más pálido que el de los especímenes de Capraia. El holotipo muestra una
estrecha banda blanquecina a ambos lados que está bordeada por bandas negruzcas interrumpidas
igualmente estrechas. El dorso muestra un color marrón pálido con manchas lobuladas más o menos
grandes y oscuras. El clípeo tiene un color básico más pálido, casi blanquecino, con grandes manchas
lobuladas más oscuras. La parte inferior de los costados es igualmente blanquecina con pequeñas
manchas lobuladas parduscas. La suela blanqueada es blanquecina en todas partes.
Para dos colecciones de Elba con colores bastante bien conservados en el NMW
(nº 39559, leg. Holdhaus 1904; nº 45114, leg. Paganetti 1908) lo siguiente
434 B. Nitz et al.
se han observado observaciones: los morfos oscuros a casi negros son dominantes, los juveniles casi negros,
los subadultos más brillantes con bandas laterales marrones difusas y el dorso ligeramente más oscuro; en
la segunda colección, algunos especímenes eran de color negro intenso con bandas laterales blancas
angostas contrastantes. Las suelas eran ligeramente rojizas a amarillas.
La nueva especie es endémica de la isla toscana de Elba.
Limax vizzavonensisnorte. nom.
Este nuevo nombre de reemplazo se presenta aquí paraLimax (Eulimax)

cinereonigervariedadmínimoPolloneras,1896, que se preocupa porLimax mínimo
Forsskål, 1775.
Historia nomenclatural: aunque para su época se describe acertadamente,Limax mínimo
Polloneras,1896, se descuidó en gran medida. El nombre solo fue utilizado por Taylor (1903) y
Hesse (1926) para una entidad infrasubespecífica, por Caziot (1903) y Alzona (1971) en el rango
subespecífico, y por Falkner et al. (2002) en el rango de especie.
Siguiendo a Hesse (1924), Falkner et al. pasó por alto el hecho de que el nombre está
preocupado por el nombre de una babosa de mar. Supresión del homónimo más
antiguo.Limax mínimoForsskål, 1775, fue propuesto por Lemche (1964: 37), quien
consideró la especie como irreconocible, para evitar confusiones. RespectivamenteLimax
mínimo Forsskål, 1775, fue por el Dictamen 773 (ICZN 1966) “suprimido a los efectos de
la Ley de Prioridad pero no a los de la Ley de Homonimia”. La consecuencia de esto
último es que continúa impidiendo la validación de su homónimo primario más joven
que, por lo tanto, debe ser reemplazado. El nombre de reemplazo existente
L. oscurosimroth,1900, no puede ser utilizado ya que en sí mismo está preocupado porL. máximo
variedadoscuroMoquín-Tandot,1855.
Los resultados de nuestros estudios morfológicos y genéticos anteriores han demostrado
que es necesario disponer de un nombre válido para esta entidad biológica distinguible que
ya ha sido nombrada inválidamente dos veces. el nuevo nombrevizzavonensisse deriva de la
localidad tipo.
Observaciones: La localidad tipo que fue dada por Pollonera simplemente como
“Vizzavona” es enunciada más precisamente por Caziot (1903), quien recogió el holotipo, como
“la Foce, près Vizzavona, à l'altitude de 1.000 m.” El animal secuenciado recolectado cerca de
Cascade des Anglais (L038) se encontró a solo unos 200 m de la localidad tipo.
A pesar de que se proporciona la solución actual del problema de nomenclatura, una
redescripción completa sigue siendo un deseo para futuras investigaciones.
Referencias adicionales
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terrestri e d'acqua dolce. Atti Soc ital Sci nat Mus civ Stor nat Milano 111:433
Caziot E (1903) Étude sur la faune des Mollusques vivants terrestres et fluviatiles
de l'Île de Corse. Bull Soc Sci hist nat Corse 22:354
Giusti F (1969) Notulae Malacologicae V. Le Isole di Gorgona, Capraia e Giglio.

Atti Soc tosc Sci nat, Mem (B) 75:265–324
Giusti F (1976) Notulae Malacologicae XXIII. I Molluschi terrestri, salmastri e
di acqua dolce dell'Elba, Giannutri e scogli minori dell'Arcipelago Toscano.
Conclusioni generali sul popolamento malacologico dell'Arcipelago toscano
y descrizione di una nuova specie. (Studi sulla riserva naturale dell'Isola di
Montecristo. IV. Lav Soc ital Biogeogr (NS) 5:99–355
Hesse P (1924) Kritische Fragmente, XXIX. Aenderungsbed€urftige Nacktschnecken-
Nombre Arco Molkunde 56: 228–230
Hesse P (1926) Die Nacktschnecken der palaearktischen Region. Arco de Abh
Molkunde 2:1–152
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en virtud de los poderes plenarios. Bull zool Nomencl 23: 84–86
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confianza para la nomenclatura zoológica, Londres
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nombre de grupo familiar Cuthonidae sobre Tergipedidae y para estabilizar algunos nombres
específicos en el género conocido comoEubranchusForbes, 1838 (Clase Gastropoda). Bull zool
Nomencl 21: 35–39
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d'Elba e Pianosa. Boll Mus Zool Anat comp r Univ Torino 20:3–9
Taylor JW (1902–1907) Monografía de los moluscos terrestres y de agua dulce del
Islas Británicas. Vol. 2. Taylor Brothers, Leeds
Paleogeografía o selección sexual: ¿Qué factores
promovieron las radiaciones del caracol terrestre de
Creta?
Jan Sauer y Bernhard Hausdorf
AbstractoLa gran diversidad de caracoles terrestres de Creta es el resultado de unas pocas

radiaciones. Se ha sugerido que estas radiaciones fueron provocadas por la fragmentación de
Creta en el Neógeno. Contrariamente a las predicciones de este modelo, las áreas de
distribución de las especies endémicas no están agrupadas y su diversidad no es mayor en las
áreas de las islas paleogénicas. Investigamos la radiación del género helicoide Xerocrasaen
detalle. La asimetría entre los tamaños de distribución de las especies hermanas y los clados
deXerocrasaindica que la especiación peripátrica fue el modo de especiación predominante.
Las simulaciones coalescentes muestran que las diferencias en los genitales de losXerocrasa
las especies no pueden explicarse por la deriva genética. Tampoco pueden explicarse por
selección natural contra híbridos, porque no son más grandes entre grupos geográficamente
superpuestos que entre grupos alopátricos. La evolución de las diferencias en la longitud del
flagelo se concentra hacia las puntas del árbol, lo que indica que la selección sexual podría
haber facilitado la radiación. Si la especiación es impulsada por la selección sexual, los nichos
pueden permanecer conservados y puede resultar una radiación no adaptativa.
1. Introducción
La fauna de caracoles terrestres de Creta es extraordinariamente rica. Se conocen

aproximadamente 140 especies de caracoles terrestres de Creta. Este número es mucho más
alto de lo que se esperaría considerando el área de Creta, si se comparara con otras islas del
Egeo (Welter-Schultes y Williams1999). La gran diversidad de caracoles terrestres en Creta es
principalmente el resultado de unas pocas radiaciones, a saber, demasto (Maassen1995;
Parmakelis et al.2005),Orculella (Gittenberger y Hausdorf2004),Albinaria (Schilthuizen
J. Sauer y B. Hausdorf (*)

Museo Zoológico, Universidad de Hamburgo, Martin-Luther-King-Platz 3, 20146 Hamburgo,
Alemania
correo electrónico: hausdorf@zoologie.uni-hamburg.de

438 J. Sauer y B. Hausdorf
y Gittenberger1996; Douris et al.1998; Welter-Schultes2000a,b; Nordsieck

2004; Schilthuizen et al.2004), yXerocrasa (Hausdorf y Sauer2009).
Gittenberger (1991) señaló que laalbinarialas especies ocupan más o menos la misma
gama de hábitats o solo una pequeña. Así, sugirió que laalbinaria la radiación en Creta
es una radiación no adaptativa. Parmakelis et al. (2005) no pudo encontrar evidencia de
adaptación diferencial en el EgeoMastusespecies y también clasificó lasMastusradiación
como no adaptativa. ¿Qué procesos dieron como resultado las radiaciones del caracol
terrestre en Creta, si no fueron causadas por una selección natural divergente y una
adaptación diferencial? Welter-Schultes y Williams (1999) sugirió que las radiaciones de
los caracoles terrestres en Creta fueron el resultado de la fragmentación de la región de
la actual Creta en varias paleoislas desde el Tortoniense inferior (hace 11 millones de
años) hasta finales del Plioceno (hace 2-3 millones de años) (Dermitzakis) 1990; Welter-
Schultes y Williams1999; Welter-Schultes2000a,b; Fassoulas 2001). Parmakelis et al. (
2005) supuso que la radiación deMastusfue provocado por una diversificación de la
morfología de los espermatóforos en la alopatría, quizás por selección sexual.
Teniendo en cuenta estas hipótesis, investigamos la sistemática, la ecología, la

biogeografía y el papel potencial de la selección sexual en una radiación hasta ahora
insuficientemente conocida en Creta, la del género helicoide.Xerocrasa.
2 Sistemática de laXerocrasaRadiación en Creta
En el siglo XIX, diez especies nominales pertenecientes aXerocrasafueron descritas de

Creta, desde entonces este grupo no ha sido revisado. Debido a que las pruebas de
hipótesis evolutivas requieren hipótesis taxonómicas y filogenéticas sólidas, hemos
revisado el CretanXerocrasaespecies basadas en caracteres morfológicos, marcadores
AFLP y mitocondrialcox1secuencias.
Once nativos de CretaXerocrasalas especies se pueden delimitar en base a los caracteres
morfológicos de la concha y los genitales (Hausdorf y Sauer2009). Con la excepción deX. crtica,
que está muy extendida en el Mediterráneo oriental, todas las especies son endémicas de
Creta. Todas las especies excepto el par de especiesX. siderensisy
X. amphiconusdifieren en los caracteres de los genitales.
La clasificación morfológica está respaldada en gran medida por datos AFLP de múltiples
locus. De las 11 especies definidas morfológicamente, 9 son monofiléticas en el árbol de unión
de vecinos según las distancias de Jaccard entre los datos AFLP de 151Xerocrasa especímenes
(Fig.1). SoloX. amphiconusyX siderensis,que son simpátricos, pero rara vez sintópicos, no se
pueden distinguir con base en los datos de AFLP.
En contraste, los haplotipos mitocondriales de solo 6 de las 11 especies morfológicamente
definidas forman grupos monofiléticos en un árbol de máxima verosimilitud de 122 parciales.
cox1secuencias (634 pb) de cretenseXerocrasaespecies (Fig.2), mientras que las secuencias de
las otras 5 especies no forman clados distintos. En particular, las secuencias de la extendidaX.
mesostenason parafiléticos con respecto a la mayoría de las otras endémicasXerocrasa
especies. Estos resultados confirman otros estudios (p. ej., Sota y
Paleogeografía o Selección Sexual 439
X. crítica
X. subvariegata
X. grabusana
X. heraklea
X. rhythymna
X. kydonia
X. lasithiensis
X. franciscoi
X. amphiconus
y
X. siderensis
X. mesostena
0,0 0,05 0,1
Figura 1Árbol de unión de vecinos basado en distancias Jaccard entre datos AFLP de CretaXerocrasa.Los
valores de soporte de Bootstrap superiores al 70% se indican mediante unasteriscodebajo de las ramas
Trochoidea
X. crítica
X. subvariegata
X. grabusana
X. mesostena (parcialmente)
X. lasithiensis
X. heraklea
X. rhythymna
X. kydonia
X. amphiconus (parcialmente)
X. siderensis
X. amphiconus (parcialmente)
X. franciscoi
0.0 0.1
Figura 2Árbol de máxima verosimilitud de 122 parcialescox1secuencias de cretenseXerocrasaespecies y dos

Trochoideaespecies. Los valores de soporte de Bootstrap superiores al 70% se indican medianteasteriscosdebajo de
las ramas
Vogler2001; Shaw2002; Machado y Oye2003; Weisrock et al.2006) que han informado

grandes distinciones entre los árboles de genes mitocondriales y los árboles basados
en marcadores nucleares y/o clasificaciones de especies basadas en la morfología. Si los
conjuntos de secuencias para los cuales cada secuencia en un conjunto tiene al menos
otra secuencia dentro de un umbral de distancia del 3% se consideran aproximaciones
para especies siguiendo a Hebert et al. (2003), el 122cox1las secuencias representarían
50 especies. Esta división excesiva es, al menos en parte, el resultado de las altas tasas
de sustitución del ADN mitocondrial en los caracoles terrestres helicoidales (Thomaz et
al.1996; Chiba1999; Hayashi y Chiba2000; van Riel et al.2005). Este resultado desafía la
generalidad y la aplicabilidad de los enfoques para identificar y delimitar especies
putativas en secuencias únicas (p. ej., Floyd et al.2002; Blaxter et al.2003,2005; Hebert et
al.2003).
3 Diferenciación ecológica del cretenseXerocrasaEspecies
TodoXerocrasalas especies son xerófilas y viven en hábitats abiertos y secos. Durante el

verano estivan bajo piedras y arbustos o, más raramente, adheridos a la vegetación. Son
generalistas que se alimentan de plantas en descomposición. No hay adaptaciones obvias a
diferentes hábitats o estilos de vida. Por lo general, sólo uno o dosXerocrasa especies viven en
el mismo lugar, al igual que enAlbinaria (Gittenberger1991). La única especie que coexiste
regularmente con otras especies es la extendidaX. críticaque es mucho más grande que todos
los demás cretensesXerocrasaespecies. En los pocos casos en los que coexisten dos de las
otras especies, también hay diferencias notorias en el tamaño del cuerpo. Por lo tanto, hemos
investigado si una diferenciación en el tamaño del cuerpo podría haber desencadenado la
radiación. Primero, probamos si la diferenciación en el tamaño del cuerpo podría ser el
resultado de la competencia entre las especies. Si este fuera el caso, esperaríamos que las
diferencias sean mayores entre especies con áreas de distribución geográficamente
superpuestas que entre especies que no están en contacto o tienen áreas de distribución
ligeramente superpuestas. Siguiendo a Barraclough et al. (1999), probamos esta predicción al
aleatorizar contrastes filogenéticos independientes en el tamaño del cuerpo (medido como
volumen de la concha) entre los nodos, manteniendo fijo el grado de superposición para cada
nodo. Se calcularon contrastes independientes filogenéticos estandarizados en base a un
árbol de especies derivado de lacox1árbol de genes El árbol AFLP no se pudo usar porque no
proporcionó una longitud de rama significativa. Primero, hicimos lacox1árbol de genes
ultramétrico con el método de verosimilitud penalizada (Sanderson2002) y luego construimos
el árbol de especies usando una modificación del método de agrupamiento de divergencia
más superficial (Maddison y Knowles2006). Pruebas de aleatorización basadas en el árbol
resultante (X. cretica,((X. subvariegata, X. grabusana),(X. lasithiensis, ((X. heraklea,(X. kydonia,
X. rhithymna)),(X. amphiconus+X. siderensis,(X. franciscoi, X. mesostena))))))mostró que los
contrastes en el tamaño del cuerpo son significativamente mayores entre los clados que se
superponen geográficamente en CretaXerocrasaradiación que la esperada bajo el modelo
nulo de ausencia de asociación entre el cambio morfológico y la superposición geográfica
(Tabla1). Esto indica que la competencia entre
tabla 1Asociaciones positivas entre contrastes estandarizados en caracteres y el grado de superposición

geográfica y asociaciones entre contrastes estandarizados en caracteres y edad relativa del nodo en el
cretenseXerocrasaradiación según pruebas de aleatorización. Los signos positivos de asociación de
contrastes en caracteres con edad relativa de los nodos sugieren que los cambios se concentran hacia la raíz
y los signos negativos sugieren que los cambios ocurren cerca de las puntas.
Superposición geográfica Edad del nodo
pag Firmar pag

Tamaño del cuerpo del registro 0.021 + 0.372
Log pene: log tamaño del cuerpo Log 0.134 - 0.270
epiphallus: log tamaño del cuerpo Log 0.775 - 0.092
flagelo: log tamaño del cuerpo Log vagina: 0.458 - <0.002
log tamaño del cuerpo 0.598 - 0.102
Log bursa copulatrix:log tamaño del cuerpo 0.192 - 0.122
las especies concurrentes dieron como resultado un desplazamiento de las características ecológicas con respecto al tamaño
corporal.
En el siguiente paso, probamos si los cambios en el tamaño del cuerpo estaban asociados con la
especiación. Si este fuera el caso, las especies recientemente divididas deberían mostrar una mayor
divergencia en el tamaño corporal de lo esperado bajo un modelo nulo de ausencia de asociación de
los cambios en el tamaño corporal con la cladogénesis. Por el contrario, si las diferencias en el
tamaño corporal promueven la persistencia y/o la subsiguiente radiación, la divergencia debería ser
mayor entre los linajes más distantes. Por lo tanto, probamos una concentración de cambios hacia
las puntas o la raíz del árbol de especies mezclando al azar contrastes filogenéticos independientes
entre las ramas del árbol y registrando dónde ocurren los cambios en el árbol en cada ensayo, como
lo proponen Barraclough et al. (1999). Esta prueba mostró que la distribución de los contrastes en el
tamaño del cuerpo en el árbol de especies no difiere de las distribuciones aleatorias (Tabla1) lo que
indica que los cambios en el tamaño del cuerpo no han desencadenado la especiación.
4 Modo geográfico de especiación
Los organismos con poca vagilidad como los caracoles terrestres son más prometedores
como grupos modelo en estudios que investigan los modos geográficos de especiación que
los grupos más móviles, porque los cambios frecuentes de rango oscurecen el patrón
geográfico de especiación (Barraclough y Vogler2000).
Para comprobar si la fragmentación de la región de la actual Creta en varias paleoislas a finales
del Mioceno y el Plioceno podría haber desencadenado las radiaciones del caracol terrestre en Creta,
como sugieren Welter-Schultes y Williams (1999), primero investigamos si la especiación era
predominantemente alopátrica. Si este fuera el caso, se espera que las especies hermanas
divergentes recientemente muestren poca o ninguna superposición en los rangos geográficos
(Barraclough y Vogler2000). Alternativamente, si la especiación es predominantemente simpátrica, se
espera que un rango de especies hermanas divergentes recientemente encierre a la otra por
completo. El intercepto de una regresión del grado de simpatría
entre clados hermanos, la relación entre el área de superposición y el tamaño del rango del clado
con el rango más pequeño, frente a la edad del nodo aproximada por las longitudes de las ramas en
el árbol de especies ultramétricas indica el modo geográfico predominante de especiación. Se espera
que sea cercano a 0, si la especiación es predominantemente alopátrica, y cercano a 1, si la
especiación es predominantemente simpátrica. La intersección de la regresión lineal del grado de
simpatría transformado en arcoseno contra la longitud de la rama en el árbol de especies como
aproximación para la edad del nodo es 0.202 (-0.176) (Fig.3a) indicando que la especiación alopátrica
era al menos predominante.
Si las radiaciones del caracol terrestre en Creta fueron el resultado de la fragmentación de
Creta en varias paleoislas desde finales del Mioceno hasta el Plioceno, como plantearon la
hipótesis de Welter-Schultes y Williams (1999), esperaríamos que los rangos de las especies
estén agrupados y que los rangos estén centrados en las posiciones de las islas paleogénicas
del Neógeno. Sin embargo, las áreas de distribución de las 74 especies endémicas de
caracoles terrestres que pertenecen a géneros con al menos dos especies endémicas no están
agrupadas significativamente (pag¼0.311) según la prueba de agrupamiento propuesta por
Hausdorf y Hennig (2003). El número de ocurrencias de la especie endémica de caracol
terrestre en cuadrículas de 10 km UTM que se ubican en áreas que antes pertenecían a paleo-
islas, no fue significativamente mayor (pag¼0,595) para los datos reales (742) que para 1000
conjuntos de datos obtenidos mediante simulaciones de Monte Carlo (media 723,21, rango
431–1156) según lo descrito por Hausdorf y Sauer (2009). Estos resultados indican que no hay
evidencia para la hipótesis de que las radiaciones del caracol terrestre en Creta son el
resultado de la fragmentación de Creta a finales del Mioceno y Plioceno.
La especiación peripátrica en pequeñas poblaciones aisladas en la periferia de un área de
distribución es una alternativa a la vicarianza. Siguiendo a Barraclough y Vogler (2000), utilizamos la
simetría de rango como indicador de la especiación peripátrica. Se puede predecir que los rangos
geográficos de especies hermanas recientemente divididas tienden a mostrar asimetría en el tamaño
del rango, si la especiación peripátrica es el modo de diversificación predominante. Los dos modelos
nulos propuestos por Barraclough y Vogler (2000) se utilizaron para producir
a b
1 0.5
0.8 0.4
simetría de tamaño de rango
Grado de simpatía
0.6 0.3
0.4 0.2
0.2 0.1
0 0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
Edad relativa del nodo Edad relativa del nodo
Figura 3 (a)Gráfico del arcoseno transformado grado de simpatría deXerocrasaclados contra la edad relativa del nodo
basado en el árbol de especies ultramétrico construido a partir de lacox1árbol genético (ver pág. 440).
(b)Gráfico de simetría de tamaño de rango deXerocrasaclados contra la edad relativa del nodo
fragmentos de rango. De acuerdo con el modelo filogenético del palo roto, el rango de una
especie ancestral se dividió sucesivamente en dos fragmentos de tamaño aleatorio según la
filogenia de cada grupo. Este modelo produce una distribución uniforme de la simetría del
tamaño del rango inmediatamente después de la especiación que varía de 0,0 a 0,5 con un
valor medio de 0,25. Los valores más bajos sugerirían una tendencia hacia la asimetría del
tamaño del rango, lo que indica la posible importancia de la especiación peripátrica.
Alternativamente, también usamos el modelo de palo roto simultáneo según el cual un palo
de longitud dada se rompe ennorte-1 puntos aleatorios uniformes para producirnorte piezas
de tamaño aleatorio.
La intersección de la regresión lineal del grado de simetría doblado y arcoseno
transformado del cretenseXerocrasaespecie contra la edad relativa del nodo (Fig.3b
) es significativamente menor de lo esperado bajo el modelo filogenético de palo
roto (pag¼0.043) así como bajo el modelo de palo roto simultáneo (pag¼0,004).
Este resultado indica que la especiación peripátrica fue el modo de especiación
geográfica predominante en elXerocrasaradiación en Creta.
5 Evolución de los genitales por deriva genética versus selección
Como ya se ha señalado, el cretenseXerocrasalas especies no se diferencian por la adaptación

a diferentes nichos. ¿Qué factores podrían haber desencadenado la radiación, si no la
adaptación diferencial por selección natural? Varias teorías asumen que la deriva genética
aleatoria juega un papel importante para la especiación en aislamientos periféricos (Mayr1963
,mil novecientos ochenta y dos; Carson y Templeton1984; Slatkin1996; Templeton1996). La
mayoría de los cretenses Xerocrasalas especies difieren en las proporciones de las diferentes
partes de los genitales. Probamos si las diferencias fenotípicas entre las especies divergentes
más recientes pueden explicarse por la deriva genética utilizando el enfoque de simulación
coalescente propuesto por Masta y Maddison (2002) basado en elcox1árbol (Fig.2). De acuerdo
con este enfoque, la diferenciación fenotípica observada es poco probable (pag¼0.016) de
haber surgido bajo neutralidad, asumiendo que las diferencias fenotípicas fijas entre especies
reflejan diferencias fijas en los genes nucleares subyacentes (Sauer y Hausdorf 2009). Así, la
evolución de los genitales se explica mejor por la selección divergente.
6 Hipótesis de la cerradura y la llave frente a la selección sexual
Las diferencias en los genitales pueden resultar de la selección natural contra los
híbridos como se supone en la hipótesis de la cerradura y la llave (Shapiro y Porter1989)
o por selección sexual (Eberhard1985,2001; Arnqvist1998; Hosken y Stockley2004).
Si las diferencias en los genitales son el resultado de la selección natural contra los híbridos,
esperaríamos que las diferencias sean mayores entre especies con áreas de distribución geográficamente
superpuestas que entre especies que no están en contacto o tienen áreas de distribución ligeramente
superpuestas, porque la selección contra los híbridos puede ocurrir solo donde dos
las especies coexisten. Probamos esta predicción aleatorizando contrastes filogenéticos

independientes entre nodos, manteniendo fijo el grado de superposición para cada nodo como se
describió anteriormente para el tamaño del cuerpo (ver p. 440). Esta prueba mostró que los
contrastes independientes en la longitud del pene, el epífalo, el flagelo, la vagina y la bursa copulatriz
estandarizados por el tamaño del cuerpo no son mayores entre los clados que se superponen
geográficamente en Creta.Xerocrasaradiación que la esperada bajo el modelo nulo de ausencia de
asociación entre las diferencias en los genitales y la superposición geográfica (Tabla1; Sauer y
Hausdorf2009). Por lo tanto, no hay evidencia de selección contra híbridos que resulten en mayores
contrastes entre especies geográficamente superpuestas.
7 Influencia de la evolución de los genitales en la especiación

enXerocrasa
Si los cambios en los genitales estuvieran asociados con la especiación, las especies divididas
recientemente deberían mostrar una mayor divergencia de lo esperado bajo un modelo nulo
de ausencia de asociación de cambios en los genitales con la cladogénesis. Probamos esta
predicción utilizando el enfoque propuesto por Barraclough et al. (1999) (ver también p. 440).
Las pruebas mostraron que las distribuciones de los contrastes en la longitud del pene, el
epífalo, la vagina y la bursa copulatrix estandarizados por el tamaño del cuerpo en el árbol de
especies no difieren de las distribuciones aleatorias (Tabla1; Sauer y Hausdorf2009). Por el
contrario, los cambios en la longitud del flagelo estandarizados por el tamaño del cuerpo se
concentran significativamente hacia las puntas del árbol, lo que indica que la evolución de las
diferencias en la longitud del flagelo facilitó la especiación en el cretense.Xerocrasa radiación
(Sauer y Hausdorf2009).
Si un mecanismo de cerradura y llave (Shapiro y Porter1989) desencadenó la radiación,
esperaríamos que los cambios en aquellas partes de los genitales que interactúan directamente
durante la cópula, a saber, el pene y la vagina, se concentraran hacia las puntas del árbol. Este no es
el caso. Más bien, la especiación en el cretenseXerocrasala radiación ha sido facilitada por la
evolución de las diferencias en la longitud del flagelo. El flagelo forma la cola del espermatóforo.
Durante la cópula, los espermatóforos se intercambian y se transfieren a la bursa copulatrix de la
pareja, el órgano gametolítico femenino. En la bursa copulatrix, se digiere el espermatóforo de la
pareja de apareamiento. Los espermatozoides tienen que salir nadando activamente a través de la
cola del espermatóforo formado por el flagelo para evitar la digestión (Lind1973). Los
espermatozoides tienen más éxito para llegar a las espermatecas cuando la cola del espermatóforo
sobresale hacia la vagina. Por lo tanto, un alargamiento del flagelo podría aumentar el éxito de la
paternidad. Koene y Schulenburg (2005) encontraron correlaciones entre la longitud del flagelo y el
órgano receptor de espermatóforos en caracoles terrestres helicoides que indican una
contraadaptación. También encontramos una escala positiva de órganos productores de
espermatóforos masculinos y órganos receptores de espermatóforos femeninos en el cretense.
Xerocrasaespecies que indican coevolución sexual. La evolución conjunta de los órganos productores
de espermatóforos masculinos y los órganos receptores de espermatóforos femeninos podría ser el
resultado de una carrera armamentista evolutiva por el control de la fertilización, es decir, de
conflicto sexual (Chapman et al.2003; Arnqvist y Rowe2005). Alternativamente, los cambios en la longitud de
los órganos productores de espermatóforos podrían ser el resultado de una elección críptica de la hembra
(Eberhard1985,2001) para espermatozoides que son mejores para escapar de la digestión de
espermatozoides, o para espermatóforos más grandes como obsequios nupciales nutricionales (Gwynne
1984; vahed1998), o como señales de la calidad o condición del donante (Anthes et al.2008), y la coevolución
podría ser el resultado de la necesidad de procesar espermatóforos más grandes (Anthes et al.2008). La
selección natural podría contrarrestar el aumento de la longitud de los espermatóforos debido al aumento
del riesgo de depredación o desecación resultante de los largos tiempos de cópula necesarios para la
transferencia de espermatóforos largos. La divergencia en los aspectos de tamaño y forma de la morfología
de los espermatóforos en la alopatría también podría haber desencadenado la radiación en el género del
caracol terrestre.masto (Parmakelis et al.2005).
8 Selección sexual y radiación no adaptativa
Nuestros análisis muestran que la especiación enXerocrasaen Creta se asoció con y quizás
impulsado por la selección sexual. Este resultado está de acuerdo con otros estudios que han
demostrado que la selección sexual puede promover la especiación (Darwin1871; Oeste-
Eberhard1983; dominey1984; Gavrilets2000; gris y cade2000; Panhuis et al.2001; Masta y
Madison2002; Ritchie2007). Esta hipótesis ha recibido apoyo previo de estudios comparativos
que encontraron correlaciones entre la diversidad de especies y los índices de selección sexual
en aves (Barraclough et al. 1995; Moller y Cuervo1998; Owens et al.1999; Seddon et al.2008),
lagartos (Stuart-Fox y Owens2003) e insectos (Arnqvist et al.2000; Katzourakis et al. 2001). Sin
embargo, estudios comparativos similares de mamíferos, mariposas y arañas (Gage et al.2002
; Isaac et al.2005) y aves (Morrow et al.2003) no encontraron correlaciones significativas entre
la diversidad de especies y los índices de selección sexual, y cuestionan la generalidad de la
importancia de la selección sexual en la especiación y la diversificación. Una razón de los
resultados heterogéneos puede ser que la escala taxonómica gruesa en la que se realizaron la
mayoría de los estudios puede dar lugar a comparaciones de taxones con una ecología e
historia biogeográfica muy diferentes, de modo que el efecto de la selección sexual en la
especiación puede verse oscurecido por tales factores (Seddon et al., 2012). Alabama. 2008).
Por lo tanto, los análisis de grupos de especies estrechamente relacionadas considerando sus
relaciones filogenéticas, como se hizo en nuestro estudio, podrían ser un enfoque más
poderoso para investigar la generalidad y la importancia de la selección sexual en la
especiación.
en el cretenseXerocrasaradiación, la selección sexual parece ser el mecanismo inicial que
da lugar a la especiación. Por el contrario, la diferenciación ecológica de los linajes indicada
por diferentes tamaños corporales generalmente no está asociada con la especiación reciente
(linaje que se divide cerca de las puntas del árbol), sino que se logró cuando los clados
entraron en contacto. Esto es consistente con el patrón encontrado en algunos cíclidos de
lagos de cráter de Nicaragua en los que la selección sexual contribuye más fuertemente o
antes durante la especiación que la separación ecológica (Wilson et al.2000), y con los
resultados del análisis comparativo de Barraclough et al. (1999) quien tampoco encontró
evidencia de una asociación de especiación con disparidad ecológica en el tigre
escarabajos Sin embargo, la separación de linajes como resultado de la selección sexual no

siempre precede a la diferenciación ecológica en las radiaciones. Basado en la distribución de
características ecológicas y morfológicas a lo largo de la filogenia de los peces cíclidos del lago
Malawi, Danley y Kocher (2001) sugirieron que esta radiación se produjo en tres grandes
estallidos de cladogénesis, de los cuales los primeros dos episodios dieron como resultado la
adaptación a diferentes nichos, mientras que el tercer episodio se asoció con la diferenciación
de la coloración nupcial masculina, muy probablemente en respuesta a la selección sexual
divergente. Además, los estudios de otros taxones sugieren que la divergencia ecológica es
común en las primeras etapas de una radiación (Schluter y McPhail1993; Losos et al. 1998;
Sturmbauer1998; Schluter2000a,b,2001). Aunque es plausible que el espacio del nicho pueda
subdividirse al principio de la historia de una radiación, no está claro por qué la importancia
de la selección sexual debe variar en la historia de una radiación. Una explicación alternativa
de los patrones observados podría ser que una fracción apreciable de los eventos de
especiación es siempre el resultado de la selección sexual, pero que los linajes que se
adaptaron a diferentes nichos durante o después de la especiación tienen una mayor
probabilidad de persistencia. Como el patrón geográfico de las diferencias de tamaño corporal
en el Xerocrasaindica la radiación, la diferenciación en propiedades ecológicamente
importantes está asociada con la simpatía. Los linajes que no difieren en características
adaptativas pueden extinguirse más fácilmente si se vuelven simpátricos. La extinción
diferencial de linajes que difieren solo en características no adaptativas dará como resultado
una fase adaptativa aparentemente casi exclusiva en la historia temprana de una radiación y
casos más frecuentes de especiación como resultado de la selección sexual hacia el presente.
Sin evidencia de que las diferencias fenotípicas observadas reflejen la adaptación a
diferentes nichos enXerocrasa,como con otras radiaciones de caracoles terrestres en
Creta (Gittenberger1991; Parmakelis et al.2005), nuestros resultados sugieren que la
Xerocrasa la radiación fue facilitada por la selección sexual más que por la adaptación. Si
la especiación es facilitada por la selección sexual, los nichos pueden permanecer
conservados (Peterson et al. 1999; Viena2004; Viena y Graham2005) y radiación no
adaptativa (Dominey 1984; Gittenberger1991; Cameron et al.1996; Turgeon y McPeek.
2002; Parmakelis et al.2005; Kozak et al.2006; Kozak y Viena2006) puede resultar.
Expresiones de gratitudPor el préstamo o donación de material, agradecemos a E. Clauss, Z. Fehér, E.

Gittenberger, M. Glaubrecht, J. Hemmen, G. Lindner, WJM Maassen, T. von Proschwitz,
P. Subai, WG Ullrich, FW Welter-Schultes y V. Wiese. Agradecemos a T. Barraclough por su ayuda con los
análisis de aleatorización ya B. Rudolph y F. Herder por su asesoramiento sobre AFLP. Este estudio fue
financiado por el programa prioritario "Radiaciones - Orígenes de la diversidad biológica" de la Deutsche
Forschungsgemeinschaft (HA 2763/3-1,2).
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¿Radiaciones no ecológicas en saltamontes que
se comunican acústicamente?
Frieder Mayer, Dirk Berger, Brigitte Gottsberger y Wolfram Schulze
Dedicamos este capítulo al profesor Dr. Otto von Helversen, quien estudió la evolución de la
comunicación acústica en saltamontes durante más de 30 años y quien murió trágicamente durante
la redacción de esta revisión.
AbstractoEl análisis de los mecanismos de cómo se diferencian las poblaciones y surgen nuevas
especies es fundamental para entender la evolución de la diversidad biológica. Las preferencias de
apareamiento y los caracteres seleccionados sexualmente pueden divergir rápidamente entre
poblaciones, y esto probablemente puede conducir a un aislamiento reproductivo previo al
apareamiento y, por lo tanto, a la evolución de nuevas especies. Hemos investigado el papel de un
complejo sistema de comunicación acústica bidireccional para la radiación de saltamontes de la
subfamilia Gomphocerinae. Las especies se caracterizan por cantos específicos de la especie, que
resultan de patrones complejos de movimiento estridulatorio de ambas patas traseras. Una filogenia
molecular indica que dentro de los génerosCortipoyestenobotrusvarios taxones ricos en especies
divergieron recientemente y, por lo tanto, representan radiaciones independientes. La divergencia
en la alopatría y la hibridación después del contacto secundario son dos mecanismos que condujeron
a nuevos tipos de canciones y preferencias femeninas y, por lo tanto, pueden haber contribuido a la
rápida especiación por la evolución del aislamiento reproductivo previo al apareamiento.
F. Mayer (*)
Museo f€ur Naturkunde – Leibniz Institute for Research on Evolution and Biodiversity at the
Humboldt University Berlin, Invalidenstraße 43, 10115 Berlin, Germany
correo electrónico: frieder.mayer@mfn-berlin.de
D.Berger
Colecciones de Historia Natural Senckenberg Dresde, Museo de Zoología, Königsbr€ucker
Landstraße 159, 01109 Dresde, Alemania
B. Gottsberger
Departamento de Ecología de la Población, Universidad de Viena, Rennweg 14, 1030 Viena, Austria
W. Schulze
Fisiología Animal, Universidad de Bayreuth, Universit€atsstraße, 30, 95440 Bayreuth, Alemania

452 F. Mayer et al.
1 Introducción
La filogenética molecular proporciona un enfoque poderoso para estimar y comparar las

tasas de especiación entre taxones. Mientras tanto, la rápida diversificación y
especiación en algunos pero no en otros linajes filogenéticos están bien documentados
en numerosos taxones. A pesar de estos avances, los mecanismos evolutivos que
conducen a la divergencia y especiación de las poblaciones son menos claros y
requieren estudios detallados de los caracteres involucrados en el aislamiento
reproductivo. Dichos estudios generalmente se han concentrado en rasgos que están
directamente relacionados con la ecología de las especies. Una cantidad sustancial de
estudios muestra cómo las especies estrechamente relacionadas se adaptaron a
diferentes hábitats y entornos de alimentación, a menudo después de la colonización de
nuevas áreas o la evolución de innovaciones clave. Esto condujo a radiaciones
adaptativas en numerosos taxones.2000) y Coyne y Orr (2004).
En los últimos años, se hizo cada vez más evidente que la selección sexual y el conflicto sexual
conducían a la rápida evolución del aislamiento reproductivo precigótico o previo al apareamiento
(véanse las revisiones recientes de Ritchie2007; Snook et al.2009). Esto plantea dos preguntas
importantes. Primero, ¿la selección sexual o el conflicto sexual inician la evolución de las barreras de
hibridación que podrían conducir al aislamiento reproductivo? En segundo lugar, ¿evoluciona el
aislamiento reproductivo sin un papel principal de factores ambientales como el hábitat o la comida?
Una respuesta positiva a ambas preguntas apoyaría la hipótesis de que las radiaciones pueden
ocurrir sin un papel primario del medio ambiente, es decir, radiaciones no ecológicas.
Los saltamontes de la subfamilia Gomphocerinae representan un taxón perfectamente
adecuado para probar la posibilidad de radiaciones no ecológicas por la rápida divergencia de
rasgos sexualmente seleccionados. Dentro de la familia Acrididae, solo los saltamontes
gomphocerine desarrollaron un complejo sistema de comunicación acústica bidireccional.
Producen señales acústicas al frotar el fémur posterior contra el ala anterior (p. ej., Jacobs
1953; von Helversen y Elsner 1977; von Helversen y von Helversen1997). Los cantos de los
machos, así como las preferencias acústicas de las hembras, son específicos de la especie y
heredados genéticamente, lo que resultó en barreras efectivas de hibridación antes del
apareamiento (p. ej., Perdeck1958; Stumpner y Von Helversen1994). Varios experimentos de
reproducción e hibridación entre especies estrechamente relacionadas han demostrado que
el aislamiento reproductivo previo al apareamiento evolucionó antes de los mecanismos
obvios de aislamiento postcigótico (von Helversen y von Helversen1975a; Saldamando et al.
2005a,b; Vedenina et al.2007; Gottsberger y Mayer2007).
Algunos linajes de saltamontes gomphocerine han desarrollado señales acústicas
elaboradas. Estos cantos comprenden varios elementos audibles misceláneos y, en algunas
especies, los machos además realizan señales visuales complejas (algunos ejemplos se dan en
las Figs.1y2). Estas señales se utilizan en varias situaciones de comportamiento diferentes,
todas relacionadas con el apareamiento (para más detalles, consulte Faber1953; Jacobs 1953;
Alejandro1960; otte1970,1974; Elsner1974; Ewing1984; Von Helversen1986). En algunas
especies, los machos producen cantos de rivalidad y responden a los cantos de los demás. Las
canciones más comunes son las llamadas de los machos a las que las hembras de la misma
especie responden acústicamente cuando están dispuestas a aparearse. El canto de respuesta
de la hembra permite que el macho localice y se acerque a la hembra.
¿Radiaciones no ecológicas en saltamontes que se comunican acústicamente? 453
aStenobothrus fischeri glaucescens(Francia, Monte Ventoux)
bStenobothrus fischeri(Croacia, Rijeka)
CStenobothrus fischeri(Grecia, Taigetos, Ilias)
5s
Figura 1canciones de cortejo deStenobothrus fischerimachos de tres poblaciones alopátricas. Registros

simultáneos de movimientos estridulatorios de las dos patas traseras (trazas superiores)utilizando un
dispositivo optoelectrónico (von Helversen y Elsner1977) y el sonido aéreo (trazas inferiores)
fonotácticamente (von Helversen1997). Una vez que se encuentran, el macho intenta copular,
pero una hembra que no está excitada puede prevenir las cópulas de manera efectiva
pateando al macho con las patas traseras. Los machos realizan un comportamiento de cortejo
frente a la hembra para vencer su resistencia al apareamiento. Por lo tanto, el complejo
sistema de comunicación bidireccional de los saltamontes gomphocerine tiene tres funciones
principales: reconocimiento de especies (von Helversen y von Helversen1983), localización de
pareja (von Helversen1997) y la selección sexual por elección femenina (Kriegbaum1989,
Kriegbaum y von Helversen1992, Klappert y Reinhold2003).
En esta revisión, nos enfocamos en el papel de la comunicación acústica bidireccional para la especiación
de saltamontes en la subfamilia Gomphocerinae. Las preferencias de canto de las hembras y las señales
acústicas de apareamiento coevolutivas representan factores intrínsecos que probablemente evolucionan de
manera bastante independiente del entorno. Por lo tanto, los factores ecológicos pueden no desempeñar un
papel crucial en la especiación de los saltamontes que se comunican acústicamente.
2 Comunicación acústica y especiación
2.1 Diversidad de especies y comunicación acústica
Un total de 290 especies fueron incluidas en una encuesta reciente de saltamontes de la

familia Acrididae en Europa (Heller et al.1998). Actualmente se clasifican en siete
subfamilias de las cuales la subfamilia Gomphocerinae es la más rica en especies.
454 F. Mayer et al.
1000ms mi
frase
b
1000ms
C F
frase 2000ms
d
10mm
1000ms
mi
+ + + + + +
F
+
* * * * * *
*
100ms sílaba “Schwirrlaut”

100ms
gramo
h
100ms sílaba 100ms
Figura 2cantos de llamada deChorthippus biguttulus (una, mi),C. mollis ignifer (segundo, f),C. brunneus (c, g)
yGomphocerippus rufus (d, h).Registro de movimientos estridulatorios de las dos patas traseras. (trazas
superiores)y oscilogramas de sonido aéreo grabado simultáneamente (trazas inferiores)son exhibidos. La
temperatura de registro fue 31 - 2-C.Barras "mi"y "f ”indique los detalles que se muestran en (mi) y (F).flechas
enf, gyhmarcar partes distintivas (para más detalles, ver texto) de las canciones. (a)Masculino
Comprende casi la mitad de las especies descritas (48%). Dentro de la subfamilia

Gomphocerinae, la diversidad de especies es mayor en los génerosCortipoyestenobotrus con
aproximadamente 45 y 20 especies en Europa, respectivamente (Heller et al.1998). Ambos
géneros comprenden una serie de especies que muestran un comportamiento de cortejo
complejo y altamente derivado. Tales comportamientos de cortejo complejos pueden consistir
en múltiples elementos distintos del canto, que son producidos por movimientos específicos
de las piernas como, por ejemplo, enStenobothrus fischeri (Higo.1). Además, los movimientos
del cuerpo, las patas traseras o las antenas pueden generar señales visuales (p. ej., Fig.2;
Jacobs1953; Vedenina y von Helversen2003).
Las mayores diversidades de especies en la subfamilia Gomphocerinae que se
comunican acústicamente y en los géneros que comprenden especies con cantos
complejos son los primeros indicios de un vínculo entre la comunicación acústica y la
complejidad de la señal con la especiación. Desafortunadamente, analizar la diversidad
de especies en diferentes grupos taxonómicos no dice mucho sobre el marco de tiempo
evolutivo en el que evolucionó la diversidad de especies. Sin embargo, un enfoque
filogenético molecular permite inferir tasas de especiación y compararlas entre linajes
filogenéticos.
2.2 Filogenia molecular
El análisis filogenético molecular basado en el gen mitocondrial codificador de proteínas

co1 (subunidad 1 de la citocromo oxidasa) reveló tres linajes ricos en especies (Fig.3). En
los tres casos, una rama larga conduce a un gran grupo de especies con secuencias de
ADN mitocondrial similares. Un linaje comprende numerosas especies del género
Cortipo.Los otros dos linajes incluyen principalmente especies de los géneros
estenobotrusyOmocesto.La similitud genética entre especies (ilustrada por ramas cortas
en la Fig.3) dentro de estos tres grupos sugiere una diversificación reciente y rápida y
posiblemente un flujo de genes interespecífico ocasional por hibridación. Hasta ahora, el
muestreo taxonómico incompleto impide el cálculo de tasas de especiación razonables.
Sin embargo, los tres linajes ricos en especies comprenden especies con llamadas
complejas o canciones de cortejo (Faber1953; Jacobs1953; ragge y reynolds
<
Figura 2 (continúa) canto de llamada deC. biguttulus. (b)CompletoC. mollis ignifercanción de llamada.
(C)canto de llamada deC. brunneus. (d)Comportamiento de cortejo de ungomphocerippus rufusmasculino;
además de sonido (traza inferior)y movimientos de piernas (huellas intermedias)la posición de la antena
izquierda (traza superior)y posturas características (dibujos)de esta especie se dan. (mi)Detalle de la
C. biguttuluscanción mostrada en (a).Las dos patas traseras están desfasadas y realizan diferentes patrones
de movimiento: una pierna (traza superior)está conduciendo y realiza el patrón I (+) durante toda la frase; la
otra pierna (segundo rastro)tiene retardo de fase y realiza el patrón II (*). (F)Detalle de la
C. mollis ignifercanción mostrada en (b).flechasindican los pulsos característicos de gran amplitud al
final de la pausa entre dos “Schwirrlaute”. (gramo)Una frase de laC. brunneuscanción mostrada en
(C).Elflechaindica el paso típico durante la carrera descendente. (h)Detalle de lagomphocerippus rufus
canción mostrada en (d).
456 F. Mayer et al.
gomphocerippus rufus
Chorthippus binotatus
chorthippus jacobsi
Chorthippus brunneus
chorthippus yersini
Chorthippus biguttulus
chorthippus bornhalmi
Chorthippus ilkazi
Chrothippus crassiceps
Chorthippus chiprioto
Chorthippus taurensis
Chorthippus mollis
Chorthippus euhedickei
Chorthippus eisentrauti
85 Chorthippus reissingeri
71 Chorthippus rubratibialis
100 77 Chorthippus lesinensis
Chorthippus albicornis
95 Chorthippus macrocerus
93 Chorthippus demokidovi
Chorthippus apricarius
Gomphocerus sibiricus
Stauroderus escalaris
Chorthippus vagans
Chorthippus jucundus
100 Chorthippus dorsatus
88 Chorthippus dichrous
99 Chorthippus bruttius
100 100 Chorthippus lacustris
Chorthippus albomarginatus
Chorthippus oschei
chorthippus willemsei
Chorthippus loratus
Chorthippus alticola
Stenobothrus zubowskyi
Stenobothrus macedonicus
Stenobothrus fischeri
Stenobothrus graecus
Stenobothrus werneri
Gomphocerinae
84 Stenobothrus rubicundulus
100 Stenobothrus nigromaculatus
Stenobothrus coticus
Stenobothrus clavicornis
98 Stenobothrus clavatus
Stenobothrus eurasius
Stenobothrus lineatus
Omocestus petraeus
Stenobothrus gramicus
Stenobothrus ursulae
Stenobothrus stigmaticus
Omocestus burri
88 Myrmeleotettix maculatus
Omocestus antigai
Stenobothrus crassipes
95 Omocestus minutus
71 Myrmeleotettix antennatus
99 Omocestus nanus
99 Microhippus turcicus
93 Stenobothrus apenninus
73 Stenobothrus bolivari
100 80
Omocestus viridulus
98 Omocestus ventralis
Omocestus haemorrhoidalis
Omocestus panteli
76 café chorthippus
100 Paralelo de Chorthippus
Chorthippus montanus
100 Euchorthippus pulvinatus
Euchorthippus declivus
73 Chrysochraon dispar
Euthystira brachyptera
Dociostaurus genei
Dociostaurus brevicollis
Dociostaurus maroccanus
82 Ramburiella turcomana
Ochrilidia tibialis
Psophus estridulus
Sphingonotus caerulans
Estrepes de Ailopus
Edipoda germanica Oedipodinae
Oedipoda caerulescens
Estetofima grossum
Locusta migratoria
Duroniella laticornis
Pyrgomorpha conica Pyrgomorphinae
0,02 sustituciones/sitio
Fig. 3Filogenia molecular de las subfamilias de saltamontes Oedipodinae y Gomphocerinae. Pyrgomorpha

cónica (Pyrgomorphinae) y Oedipodinae se utilizaron como grupo externo. El árbol se generó con el
algoritmo de unión de vecinos y distancias de parámetros Kimura-2 utilizando un conjunto de datos de 915
pb del gen mitocondrial.citocromo oxidasasubunidad 1 (co1). Númerosarribasucursales
1998; Berger2008), lo que apoya la hipótesis de que la complejidad del canto facilita la divergencia de
especies. Intuitivamente, esto no es sorprendente; una mayor complejidad de la canción en términos
de movimientos complejos de las piernas, múltiples elementos de la canción o señales visuales de
apareamiento además de las señales acústicas pueden permitir más patrones de señales y diversas
señales multimodales. Dos ejemplos de cortejo complejo en dos linajes distintos se muestran en las
Figs.1y2.
2.3 Evolución de los patrones de movimiento de las piernas
Los saltamontes gomphocerine alcanzan un alto grado de complejidad del canto por el
mecanismo de estridulación tegminofemural. Por lo general, generan sonido al frotar una fila
de clavijas en el lado interno del fémur de cada pata trasera contra una vena del ala anterior.
Cada clavija que se mueve a través del ala anterior provoca un impulso muy corto. Una serie
de impactos, causados por un movimiento ininterrumpido parcial o total hacia arriba o hacia
abajo de una pata trasera, da como resultado un pulso de sonido. Los pulsos suelen estar
separados por pausas. Ocurren cuando la pata trasera se detiene durante una carrera hacia
arriba o hacia abajo, o cuando está en su punto de inversión de una carrera hacia arriba a una
carrera hacia abajo o de una carrera hacia abajo a una carrera hacia arriba. Una serie de
pulsos producidos por la pata trasera derecha e izquierda en un patrón temporal específico
permiten la composición de una gran diversidad de canciones. La creciente complejidad se
puede reconocer en diferentes niveles, por ejemplo,1953; Jacobs1953; otte 1970; von
Helversen y von Helversen1994).
Elsner (1983) proporcionaron la primera contribución a la filogenia de los patrones motores
estridulatorios, y von Helversen y von Helversen (1994) propusieron un aumento sucesivo de la
complejidad en los movimientos de las piernas. Linajes basales de saltamontes gomphocerine (Fig.3)
producen series de movimientos simples (ininterrumpidos) hacia arriba y hacia abajo de ambas patas
traseras. Tal patrón de movimiento de la pierna presumiblemente plesiomorphic se encuentra, por
ejemplo, en los génerosOchrilidia, Euthystira,yCrisocraon.El sonido podría emitirse durante las
carreras hacia arriba y hacia abajo o solo durante las carreras hacia abajo (p. ej., Fig.4). Es concebible
que estos simples movimientos de piernas desciendan de movimientos de locomoción o de defensa
(Faber1953; Jacobs1953). una serie de géneros que incluyen Dociostaurus, Omocestus, Stenobothrus,
yCortipogenerar elementos característicos de la canción (a menudo llamados sílabas; por ejemplo,
Ragge y Reynolds1998) mediante movimientos de piernas con movimientos rectos hacia arriba y
hacia abajo (comparar Stumpner y von Helversen1994; ragge y reynolds1998; Berger2008). Esto
sugiere que, al principio de la evolución del canto de los saltamontes gomphocerine, el trazo
descendente continuo
<
Fig. 3 (continuación) se refieren a valores de soporte de arranque de al menos 70. La mala resolución cerca de la raíz es
probablemente el resultado de homoplasia debido a tasas de mutación relativamente altas del genoma mitocondrial. Por el
contrario, elramas cortascerca deconsejossugieren una divergencia reciente y, por lo tanto, una especiación rápida (radiaciones)
en algunos linajes pero no en otros (para más detalles, consulte el texto)
458 F. Mayer et al.
Stenobothrus eurasius derivado

patrón
Omocestus petraeus
Chorthippus montanus
Euthystira brachyptera
simple
150ms patrón
Figura 4Cuatro niveles de complejidad de movimiento de piernas (modificado de von Helversen y von
Helversen 1994). Trazos rectos hacia arriba y hacia abajo (Euthystira brachyptera-patrón), trazos rectos hacia
arriba y hacia abajo (Chorthippus montanus-patrón), trazos rectos hacia arriba y vibratorios hacia abajo (
Omocestus petraeus-patrón) y trazos ascendentes y descendentes (Stenobothrus eurasius-patrón). Para
cada registro de movimientos de piernas (trazas superiores)y oscilograma del sonido emitido (traza inferior)
son dados. Elcolorescorresponden a los del árbol filogenético que se muestra en la Fig.3
se vio interrumpido por breves paradas durante el movimiento hacia abajo. Esto da como resultado
una serie de pulsos cortos durante la carrera descendente, mientras que durante la carrera
ascendente se emite un pulso más largo (p. ej.,C. montanus;Higo.4). El trazo reducido fue
presumiblemente un importante desarrollo inicial que condujo a la impresionante diversidad de
canciones complejas. En muchas especies, las paradas durante la carrera hacia abajo se convirtieron
en un breve movimiento hacia arriba. Esto resultó en movimientos vibratorios de alta frecuencia
durante la carrera descendente y surgieron una serie de pulsos cortos.Omocestus petraeus (Higo.4),
Stenobothrus nigromaculatusymirmeleotettixspp. (Elsner y Popov 1978; Berger2008) son buenos
ejemplos de esta tendencia. EnStenobothrus eurasius,complejidad aumentada por la adopción de
vibraciones más rápidas, también durante la carrera ascendente, lo que resultó en pulsos más cortos
durante la carrera ascendente y pulsos más largos durante la carrera descendente (Fig.4).
2.4 Evolución de la canción en especies estrechamente relacionadas
Con el fin de ilustrar la evolución de cantos sorprendentemente diferentes dentro de un grupo

de especies estrechamente relacionadas, seleccionamos el grupo de especies bien estudiado
deChorthippus biguttulus.Las tres especies,Chorthippus biguttulus, C. brunneusyC. mollis,
ocurren en simpatría en amplias áreas de Europa (Ragge et al.1990). Se parecen mucho entre
sí en su morfología externa, lo que sugiere una estrecha relación. Esto está respaldado por la
similitud de las secuencias de ADN mitocondrial (Mason et al. 1995; ver arriba).
La canción de llamada masculina deChorthippus biguttulus (Higo.2a, mi) es un ejemplo

bien conocido de la coordinación asincrónica de ambas patas traseras. El cambio de fase entre
las patas enmascara las pausas: mientras una pata trasera genera un pulso, la otra pata está
en su punto de inflexión. Los elementos sonoros prolongados resultantes a menudo se
denominan sílabas (Jacobs1953; Von Helversen1972; von Helversen y von Helversen 1997). La
proporción de la duración de la sílaba a la pausa entre las sílabas es el factor más importante
para el mecanismo de liberación innato de las mujeres (von Helversen1972; Gottsberger2007).
Las sílabas se repiten muchas veces, lo que da como resultado un elemento de canción de
mayor nivel, a menudo denominado frase (p. ej., von Helversen y von Helversen1997). Al igual
que con otros elementos de la canción, las frases se repiten varias veces formando una
canción (Fig.2a).
En contraste conC. biguttulus, C. mollisproduce elementos similares a zumbidos llamados
"Schwirrlaute" (Fig.2f). Estos “Schwirrlaute” se repiten muchas veces (hasta más de 100) para
formar una canción (Fig.2b). Dentro de la pausa entre dos “Schwirrlaute”, un movimiento
fuerte hacia abajo de al menos una pierna provoca un pulso prominente aislado (véanse las
flechas en la Fig.2f). Experimentos de hibridación entreC. biguttulusyC. mollis indican que
“Schwirrlaute” no son homólogos a “C. biguttulus-sílabas” (para más detalles, véase von
Helversen y von Helversen1975a).
La canción de llamada deChorthippus brunneustiene una estructura sintagmática característica
que difiere notablemente de las deC. biguttulusyC. mollis (Higo.2c). Las 5-14 frases duran solo
alrededor de 180 ms y cada frase generalmente se genera mediante cinco ciclos de movimiento de
piernas (compárese con la Fig.2g), cada uno de ellos produciendo una sílaba. Cada sílaba es
generada por un ciclo de movimiento de piernas de tres pasos: es decir, un golpe continuo hacia
arriba y un golpe hacia abajo de dos pasos (Gottsberger y Mayer2007).
El análisis de secuencias de ADN mitocondrial sugiere quegomphocerippus rufustambién está
estrechamente relacionado con las especies mencionadas anteriormente. El macho realiza una
llamativa exhibición de cortejo frente a la hembra (Fig.2d). Comienza con elementos principalmente
visibles como el movimiento de la cabeza, los movimientos de las antenas, los movimientos de las
piernas de gran amplitud y dos pulsos acústicos cortos. Las antenas aporreadas con puntas de alto
contraste, las piezas bucales ligeras y las patas traseras rojizas están ciertamente asociadas con este
comportamiento. A partir de entonces, sigue el elemento de sonido principal. Se asemeja al canto de
llamada y consta de dos elementos interpretados alternativamente como en
C. molliscantos de llamada. El primer elemento es un pulso relativamente fuerte causado por un golpe hacia abajo de
ambas patas traseras (ver flecha en la Fig.2 horas). A partir de entonces, sigue un elemento vibratorio de unos seis
ciclos de movimiento de piernas. Con todo, los patrones de movimiento de las piernas de
460 F. Mayer et al.
todas estas cuatro especies estrechamente relacionadas se asemejan a patrones de estridulación muy complejos que
dan como resultado canciones muy diferentes.
3 Mecanismos de especiación
El enfoque filogenético y los análisis detallados de las canciones no permiten inferir y

distinguir entre diferentes mecanismos de especiación. Por lo tanto, la pregunta sigue siendo
cómo divergen las poblaciones y cómo esto puede conducir al aislamiento reproductivo. Al
menos dos mecanismos contribuyen a la divergencia de la población y la evolución de nuevas
canciones.
3.1 Divergencia en la alopatría
Se supone que la radiación reciente de Gomphocerinae es el resultado de la evolución divergente de

poblaciones parciales por la separación geográfica inducida por las oscilaciones climáticas durante el
Pleistoceno. Las especies termófilas, como la mayoría de las Gomphocerinae, estuvieron restringidas
a los refugios del sur durante los estadios glaciales, en Europa, la Península Ibérica, la Península de
los Apeninos y los Balcanes (Taberlet et al.1998; Hewitt 1999). Durante los interestadiales cálidos,
expandieron sus rangos hacia el norte. Por el contrario, las especies adaptadas al frío,
principalmente especies montanas, alpinas y boreoalpinas, sobrevivieron a los máximos glaciares en
altitudes más bajas y muestran distribuciones actualmente disyuntivas (Ramme1951; Berger et al.,
2010).
Muchas especies extendidas con una distribución continua en toda Europa muestran pocas
o ninguna diferencia en sus llamadas y canciones de cortejo, por ejemplo,Chorthippus
parallelus, C. vagans, C. montanus, Omocestus ventralis, O. haemorrhoidalis, Stenobothrus
stigmaticus,yS. lineatus (ragge y reynolds1998; datos propios no publicados). A diferencia de
estas especies,Stenobothrus fischeries un ejemplo de una especie de gomphocerine con una
distribución fragmentada en una amplia gama del sur de Europa (Harz1975). En todo el rango
de distribución, las canciones de llamada no muestran diferencias obvias. La canción consiste
en frases cortas de aproximadamente 2 a 4 s y las sílabas son producidas por patrones de
movimiento de piernas, que son muy similares a los de Chorthippus montanus (Higo.4; Berger
2008). A diferencia del canto de llamada, el canto de cortejo consta de hasta cuatro elementos
de canto diferentes, como en las poblaciones occidentales deStenobothrus fischeri (Higo.1a;
Berger2008): una serie de pulsos de “tic-tac” preludian la canción de cortejo. El segundo
elemento se asemeja a una frase de canción de llamada prolongada. El tercer elemento
consiste en una serie de sílabas que son producidas por movimientos de piernas muy
elevados. Los movimientos muy elevados de las patas traseras (que están visiblemente
marcadas por las rodillas oscurecidas) probablemente representen un estímulo visual. El
cuarto elemento (caricias de salto previas a la monta ritualizadas) es producido por machos
muy excitados al final de un cortejo mediante una serie de caricias rápidas en las piernas que
dan como resultado pulsos agudos.
A diferencia de las poblaciones occidentales deS. fischeri,las poblaciones de Croacia y

Grecia carecen del segundo elemento (el canto de llamada) (Fig.1; para más detalles, consulte
Berger2008). Estas diferencias obvias en los cantos de cortejo de poblaciones orientales y
occidentales geográficamente separadas deStenobothrus fischeri poblaciones sugieren que
los ancestralesS. fischeriya ha producido canciones de cortejo de múltiples componentes, que
comprenden los cuatro elementos.Stenobothrus fischeriilustra que las canciones complejas en
términos de múltiples elementos de canciones y/o cortejo multimodal pueden conducir a una
rápida divergencia en poblaciones geográficamente separadas. Sin embargo, no está claro en
qué medida la selección, las nuevas mutaciones o la deriva genética contribuyen a esta
divergencia.
3.2 Evolución de nuevas canciones por hibridación
Se informaron híbridos interespecíficos y zonas híbridas más o menos amplias de varios

taxones, particularmente en el géneroCortipo.Estos híbridos fueron comúnmente reconocidos
de acuerdo con sus característicos y únicos cantos de llamada. El análisis de canciones
híbridas a menudo reveló parámetros intermedios de canciones en híbridos. canciones de
Chorthippus p. paraleloyC. p. eritropodifieren principalmente en la duración de las sílabas
dentro de una frase. Los híbridos masculinos entre los dos taxones produjeron canciones con
una duración de frase intermedia, probablemente formada por una simple introgresión de
caracteres (Butlin y Hewitt1985a,b). Canciones de híbridos entre
C. brunneusyC. jacobsitambién fueron intermedios para los caracteres duración de
la frase (llamada “echeme”), duración de la sílaba (llamada “frase”) y duración del
pulso (llamada “sílaba” en Saldamando et al.2005a). En cambio, el análisis de
C. biguttulusyC. mollishíbridos mostraron que los cantos de los machos híbridos F1 fueron
generados por patrones de movimiento de patas más complejos que los observados en ambas
especies parentales porque los híbridos produjeron patrones de movimiento de patas de ambas
especies (von Helversen y von Helversen1975a). Mientras tanto, los híbridos naturales entre
C. biguttulusyC. mollisencontrados, que también mostraron la combinación de parámetros de
canto parental de ambas especies parentales (datos propios no publicados). Una observación
similar de mayor complejidad en canciones híbridas se hizo en híbridos entre
C. albomarginatusyC. oschei.Estas dos especies parentales tienen canciones elaboradas con una
exhibición visual conspicua. Los híbridos muestran más complejidad en los cantos, e incluso incluyen
elementos novedosos en sus despliegues de cortejo (Vedenina et al. 2007). Los diferentes patrones
de movimiento de las piernas posiblemente podrían combinarse en híbridos si dos generadores de
patrones neuronales independientes son responsables de los diferentes patrones de movimiento de
las piernas. Tal control neuronal puede permitir que ambas redes se expresen en híbridos y
conduzcan a un resultado final común (von Helversen y von Helversen1975b; Von Helversen y Elsner
1977). También se observaron canciones novedosas en híbridos entreC. biguttulusyC. brunneus.Pero
estos híbridos mostraron canciones más simples que los taxones parentales. Los distintos patrones
temporales de sílabas y pulsos dentro de las frases de las especies parentales se perdieron y
resultaron en movimientos uniformemente realizados hacia arriba y hacia abajo de las piernas en las
canciones híbridas (Gottsberger y
462 F. Mayer et al.
Mayer2007). Esto indica que las redes neuronales deC. biguttulusy

C. brunneusno se puede formar en paralelo. Estos estudios de taxones actualmente hibridados
muestran que la hibridación puede conducir rápidamente a nuevas canciones. Por lo tanto, la
hibridación podría haber sido un factor de especiación en saltamontes.
4. Conclusiones
En saltamontes gomphocerine, el sistema de comunicación bidireccional juega un papel

importante en el aislamiento reproductivo entre especies, ya que otros mecanismos (p. ej.,
aberturas genitales complejas o barreras de hibridación post-apareamiento obvias) no se
desarrollan entre especies recientemente divergentes. La voluntad de las hembras para
aparearse depende de la llamada y el comportamiento de cortejo del macho. La evolución de
señales acústicas específicas de especies complejas que se complementaron con señales
visuales en varios linajes contribuyó a radiaciones independientes en diferentes clados.
Aunque los mecanismos evolutivos subyacentes no se comprenden bien, la diferenciación
etológica, al menos durante la separación geográfica y la hibridación después del contacto
secundario de las poblaciones, ha contribuido a nuevos patrones de canto. Se desconoce
hasta qué punto los factores ecológicos pueden haber influido en la diversidad de especies.
Las canciones también pueden haber sido influenciadas entre especies de saltamontes
simpátricas (Bukhvalova y Zhantiev1993; Safí et al.2006). Sin embargo, la rápida evolución de
barreras de preapareamiento efectivas en saltamontes gomphocerine en términos de fuertes
preferencias femeninas por el comportamiento de cortejo de machos conespecíficos
representa un candidato prometedor para radiaciones no ecológicas.
AgradecimientosAgradecemos a Jana Ustinova y Klaus-Gerhard Heller por sus fructíferos debates e

importantes sugerencias para el manuscrito. La Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) y la Staedtler-
Foundation apoyaron financieramente nuestro trabajo.
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Más allá de la especiación simpátrica: la
radiación de los pejerreyes de aleta vela en los
lagos Malili (Sulawesi)
Fabian Herder y Ulrich K. Schliewen
AbstractoLas radiaciones adaptativas de plantas y animales juegan un papel importante

como sistemas modelo en la investigación de la especiación. El rápido surgimiento de la
diversidad biológica brinda oportunidades para estudiar los factores adaptativos y no
adaptativos que conducen a la especiación, incluido el papel de los factores espaciales y
los mecanismos ecológicos, genéticos y de comportamiento que pueden impulsar los
procesos de especiación. La radiación de los pejerreyes de aleta vela (Atheriniformes:
Telmatherinidae) endémicos de “Wallace's Dreamponds”, es decir, los lagos Malili en
Sulawesi Central (Indonesia), permite probar hipótesis de procesos de especiación en
diferentes entornos geográficos. En comparación con otras radiaciones de peces de
agua dulce bien conocidas, el sistema Telmatherinid es de tamaño intermedio en
términos de tamaño geográfico y diversidad orgánica. Los análisis filogenéticos
proporcionan evidencia de múltiples clados que se conectaron secundariamente a
través de la evolución reticulada, pero los análisis combinados respaldan un antiguo
origen monofilético de todos los clados de Telmatherinidae en el lago Matano. La
opinión de consenso es que el lago contiene dos grupos recíprocamente monofiléticos
de pejerreyes de aleta vela, "aletas puntiagudas" muy diversas fuertemente
introgresadas por las poblaciones de los arroyos, y "aletas redondas" menos diversas
que no se ven afectadas por la introgresión alóctona. Los datos genéticos, morfológicos,
de utilización del hábitat, tróficos y de elección de pareja demuestran que la hipótesis
más plausible para el origen de las aletas redondas es la especiación simpátrica.
F. Pastor (*)
Sektion Ichthyologie, Zoologisches Forschungsmuseum Alexander Koenig, Adenauerallee 160, 53113
Bonn, Alemania
Departamento de Ictiología, Colección Estatal de Zoología de Baviera (ZSM), M€unchhausenstr. 21, 81247 M€
Unchen, Alemania Correo electrónico: f.herder.zfmk@uni-bonn.de
Reino Unido Schliewen

Departamento de Ictiología, Colección Estatal de Zoología de Baviera (ZSM), M€unchhausenstr. 21,
81247 M€Unchen, Alemania

466 F. Herder y UK Schliewen
aletas redondas Por el contrario, los polimorfismos de color masculinos discretos pueden explicarse
por selección sexual, pero no parecen estar asociados con la divergencia de la población. De acuerdo
con la evidencia de radiación adaptativa en aletas afiladas, la selección natural de recursos distintos
es sin duda una fuerza importante que da forma a la diversidad en esta radiación lacustre. Sin
embargo, queda por probar el papel de la selección sexual divergente en la divergencia de aletas
afiladas ecológicamente diversas.
Palabras claveRadiación adaptativa - Lagos antiguos - Polimorfismo de color - Lago

Matano - Telmatherina - Telmatherinidae
1. Introducción
La cuestión de si la especiación depende esencialmente del efecto aislador de estrictas

barreras geográficas o no ha iniciado y alimentado de forma recurrente intensos debates
entre los biólogos evolutivos (Bolnick2004; coyne2007; Dieckmann y Doebeli1999; jiggins2006;
Mazo2001). Estas discusiones tienen graves implicaciones para nuestra comprensión de los
procesos evolutivos, ya que están directamente conectados con los mecanismos que impulsan
la especiación. Sobre la base de la distribución geográfica de las poblaciones en evolución,
tres conceptos principales han dirigido la investigación de la especiación en las últimas
décadas (Coyne y Orr2004). mayo (1942) introdujo el marco de la especiación alopátrica, que
supone la ausencia de flujo de genes debido a una estricta barrera geográfica. Se espera que
el aislamiento reproductivo que separa a las especies después del contacto secundario surja
como un subproducto del aislamiento geográfico, que a su vez se cree que es el resultado de
la selección o la deriva. Con base en su plausibilidad intuitiva, la especiación alopátrica
generalmente se ha aceptado como la norma y, a menudo, todavía se usa como una hipótesis
nula para otros escenarios de especiación geográfica (Coyne y Orr2004; pero mira a Bolnick y
Fitzpatrick2007para una mirada crítica).
En contraste con el concepto de separación extrínseca de Mayr, la especiación simpátrica
asume la evolución de restricciones en el flujo de genes por factores intrínsecos. Se cree que
la selección divergente junto con el apareamiento selectivo y la competencia intraespecífica
dividen una sola población ancestral en dos o más especies hermanas en condiciones
simpátricas. El tercer escenario, la especiación parapátrica, combina elementos de la
especiación simpática y alopátrica. Se espera que las poblaciones divergentes tengan áreas de
contacto pero no superpuestas, lo que facilita la adaptación local, que es menos probable que
evolucione en simpatía (Gavrilets y Vose2005; Gavrilets et al.2000). Sin embargo, aún quedan
por detectar en la naturaleza casos inequívocos sobre el origen parapátrico de las especies
(Gavrilets et al.2000; Coyne y Orr2004).
La idea de que la especiación puede proceder sin una separación extrínseca que impida la
homogeneización de los acervos genéticos divergentes ha suscitado un escepticismo
sustancial, especialmente con respecto a la probabilidad de divergencia frente al flujo
genético en curso (Coyne y Orr2004; mayo1963). Sin embargo, trabajos teóricos recientes
muestran que incluso una selección divergente moderadamente fuerte puede superar tasas
muy altas de flujo de genes (Bolnick y Fitzpatrick2007; Doebeli y Dieckmann2000; Gavrilets y
Más allá de la especiación simpátrica: la radiación de los pejerreyes de aleta vela 467
vose2005; ver Gavrilets2004y Fitzpatrick et al.2008aPara discusión). De hecho, un número

creciente de estudios de campo respaldan la opinión de que las especies pueden permanecer
distintas a pesar de un flujo genético sustancial, o incluso divergir en tales condiciones (Arnold
2006; Danley et al.2000; Fitzpatrick et al.2008b; Samonte et al.2007; Schilthuizen et al.2005). De
acuerdo con este punto de vista, los miembros individuales de poblaciones divergentes
representan mosaicos genómicos que consisten en comparativamente pocos loci
seleccionados divergentemente y una mayoría restante del genoma que permanece
funcionalmente neutral e indiferenciado (Templeton1981; Vía y Oeste2008; Wu2001).
Comprender los detalles genómicos de los procesos de divergencia que conducen a la
especiación sigue siendo un gran desafío, pero las técnicas genómicas que evolucionan
rápidamente hoy en día permiten abordar los enfoques de genómica de poblaciones en
organismos que no son modelo (Luikart et al. 2003; Nosil et al.2009).
2 Investigación de la especiación en radiaciones adaptativas
Las razas huésped ecológicamente aisladas, los pares de especies en evolución o las radiaciones
emergentes son objetos principales para probar las hipótesis de los mecanismos que promueven las
primeras etapas de la especiación (Berlocher y Feder2002; Coyne y Orr2004; Vía y Oeste2008).
Especialmente, las radiaciones insulares como los pinzones de Darwin (Grant y Grant2003), lagartos
antillanos (Thorpe et al.2008) o las espadas de plata hawaianas (Baldwin y Sanderson1998) tienen la
ventaja de permitir escenarios geográficos restringidos involucrados en procesos de especiación
(Emerson2002). Análogamente, los peces de agua dulce endémicos de las “islas inversas”, es decir,
lagos de agua dulce aislados, figuran entre los modelos más interesantes para la investigación de la
especiación. Estos incluyen sistemas bien conocidos como los espinosos del norte (Schluter2000) y
pescado blanco de lago (Rogers y Bernatchez 2007), radiaciones de cíclidos de los lagos del rift de
África Oriental (Kocher2004), y radiaciones confinadas a pequeños lagos o pequeños lagos de cráter
o lagunas (Schliewen y Klee2004; Schliewen et al.1994,2001; Strecker et al.1996). El carácter
adaptativo de la mayoría de estas radiaciones sugiere que la selección natural es una fuerza
importante que da forma a su diversidad; sin embargo, los escenarios de selección sexual, deriva,
hibridación y aislamiento se encuentran entre las posibles explicaciones complementarias o
alternativas (Danley y Kocher2001; Dieckman et al.2004; Mazo2007). Hallazgos recientes de
especiación de impulsos sensoriales descubiertos en cíclidos que habitan en las rocas del lago
Voctoria (Seehausen et al.2008) sugiere que, de acuerdo con la evidencia de evolución reticulada en
bandadas de especies (Schliewen y Klee2004; Seehausen2004), al menos algunas de estas
alternativas pueden contribuir significativamente a la divergencia en las bandadas de especies.
3 Pejerreyes Sailfin en los Lagos Malili
“Wallace's dreamponds”, el sistema de lagos Malili en las tierras altas de Sulawesi

Central (Indonesia), constituyen, con radiaciones lacustres o linajes endémicos de
caracoles, crustáceos y peces (Kottelat1990a,1990b,1991; von Rintelen y Cai2009;
Figura 1El sistema de los lagos Malili y su radiación endémica de pejerreyes de aleta vela, con enfoque en el lago
MatanoTelmatherina. “aletas redondas”: (a)Telmatherina antoniae “grande", (b)T. antoniae “pequeño",
(C)T. prognatha. “Aletas afiladas”: (d)T. sarasinorum, (mi)T. sarasinorum “boca grande", (F)T. sarasinorum "cabeza
grande", (gramo)tsp. “labio grueso”, (h)T. opudi, (i)T. abendanoni, (j)T. wahjui, (k)tsp. “alargado”. Las imágenes de
peces dentro del lago Towuti representan grupos principales de grupos lacustres compartidos con L. Mahalona;
aquellos además de los arroyos visualizan partes de la diversidad del pejerrey aleta vela del arroyo. Todas las
imágenes muestran machos, con polimorfismos de color (típicamente amarillo o azul, en algunos casos también azul
amarillo) presentes en la mayoría de los Telmatherinidae del sistema de los lagos Malili. Véase Herder et al.2006apara
la diversidad del pejerrey de aleta de vela; mapa por T. von Rintelen, modificado (con permiso)
T. von Rintelen et al.2004,2007b; K. von Rintelen et al., en prensa; Schubart y Ng 2008; Schubart et al.
2008), un punto crítico de diversidad de agua dulce. El sistema consta de tres lagos principales
interconectados por ríos empinados y dos lagos satélite adicionales (Fig.1). El antiguo lago graben
Matano cubre un área de aprox. 32 - 6 km, y es el lago más alto del sistema (Ahmad1977; Arroyos
1950). Tiene una profundidad extraordinaria de 590 m, tiene paredes en su mayoría empinadas y no
tiene barreras importantes dentro del lago por encima de aprox. 400 m de profundidad (Haffner et
al.2001). Investigaciones limnológicas recientes demostraron que es anóxico por debajo de los 100 m
de profundidad (Crowe et al.2008a,b). El lago Matano es drenado por el extremadamente empinado
río Petea hasta el relativamente pequeño y poco profundo lago Mahalona, que a su vez está
conectado por el río Tominanga con el lago más grande del sistema, el lago Towuti. A pesar de su
tamaño de aprox. 560 kilometros2, L. Towuti es menor que
la mitad de profundidad que L. Matano. Las aguas de L. Towuti drenan desde una bahía en su costa
occidental hasta el mar en el Golfo de Hueso.
La radiación de los pejerreyes de aleta vela (Telmatherinidae) endémica de los lagos Malili ha
recibido un interés sustancial como un nuevo sistema modelo para estudiar los procesos de
especiación y la evolución de los polimorfismos de color. Los pejerreyes de aleta vela son peces de
agua dulce pequeños, ateriniformes (Teleostei: Atheriniformes), que son sexualmente dimórficos,
muestran policromatismo masculino conspicuo y son fáciles de observar en las aguas cristalinas de
los lagos oligotróficos. El endemismo local de uno o algunos de los lagos o arroyos en combinación
con dimensiones intermedias tanto en diversidad como en tamaño geográfico brinda excelentes
condiciones previas para probar hipótesis con respecto a la mayoría de los factores realmente
discutidos como potencialmente impulsores de procesos de especiación.
Basado en el trabajo taxonómico de Kottelat a principios de la década de 1990 (Kottelat1990a,
1991), la exploración de la diversidad del pejerrey aleta vela en lagos y arroyos de la zona (Herder et
al.2006a) fue el primer paso esencial para establecer el sistema como modelo para la investigación
de la especiación. Los estudios de los ríos y la mayoría de los arroyos permanentes del sistema de
drenaje de Malili dieron como resultado el descubrimiento de varias poblaciones nuevas de
pejerreyes de aleta vela que habitan en los arroyos, que mostraron indicios de diferenciación local
(Herder et al.2006a). Del mismo modo, se descubrieron pejerreyes de aleta vela que habitan en lagos
adicionales o morfos de color previamente desconocidos. Sin embargo, los principales patrones de
distribución en el lago Telmatherinidae confirmaron registros previos (Kottelat1990a,1991; Higo.1),
siendo la mayoría de las especies endémicas de L. Matano o de los lagos Towuti y Mahalona (Herder
et al.2006a). Descripciones del comportamiento de apareamiento por Gray y McKinnon (2006)
proporcionó una línea de base importante para estudios de comportamiento posteriores centrados
en la ecología evolutiva y el mantenimiento de polimorfismos de color.
4 Patrones de Hibridación
Con base en muestras individualizadas de pejerreyes de aleta vela que habitan en lagos y
arroyos, se aplicaron marcadores de ADN mitocondrial (ADNmt) y polimorfismo de longitud de
fragmento amplificado (AFLP) para reconstruir la historia filogenética de Telmatherinidae
(Herder et al.2006b). Las filogenias robustas basadas en el muestreo de taxones densos son
un requisito previo para probar hipótesis sobre la evolución de las radiaciones y son
especialmente importantes para identificar clados monofiléticos que son adecuados como
candidatos para estudios de especiación. Sin embargo, las reconstrucciones filogenéticas de
bandadas de especies jóvenes o en evolución son un desafío, especialmente debido a los
posibles efectos de la evolución reticulada (hibridación) y la clasificación de linajes incompleta.
De hecho, el marcador de mtDNA heredado de la madre mostró solo una congruencia
limitada con los conceptos morfológicos de Telmatherinidae (Herder et al.2006a), y los datos
de ADNmt que cubren toda la bandada indicaron varios casos de hibridación entre pejerreyes
de aleta vela que habitan en lagos y arroyos (Herder et al.2006b). En el caso del lago Matano,
las “aletas redondas” morfológicamente bien definidas fueron claramente identificadas como
un grupo monofilético, mientras que las “aletas puntiagudas” altamente diversas llevan dos
grupos de haplotipos: uno que forma el clado hermano de las aletas redondas, el otro que forma un clado
separado que comprende haplotipos compartidos con los habitantes de los arroyosTelmatherina.
El análisis paralelo de numerosos marcadores AFLP independientes dispersos aleatoriamente a lo
largo del genoma (Vos et al.1995) es especialmente adecuado para el análisis de señales filogenéticas
recientes (Albertson et al.1999; Schliewen y Klee2004). Aquí, los AFLP sirvieron como una herramienta
para evaluar críticamente las señales filogenéticas derivadas del mtDNA y para probar hipótesis
sobre la hibridación introgresiva según se deduce de las inconsistencias entre el mtDNA y los datos
morfológicos. Con base en los individuos del conjunto de datos de ADNmt descrito anteriormente,
los marcadores AFLP multilocus nucleares apoyaron fuertemente a la mayoría de los grupos
morfológicamente bien definidos de pejerreyes de aleta vela como monofiléticos (Herder et al.2006b;
Higo.2). En el lago Matano, los AFLP resolvieron “aletas redondas” y “aletas afiladas” (Figs.1y2) como
dos clados monofiléticos, que contrastan marcadamente con el patrón de tres grupos de haplotipos
mitocondriales. Sin embargo, la monofilia de Lago Matano Telmatherinaen su totalidad no fue
significativo dado el conjunto completo de datos de AFLP (pero ver más abajo).
En resumen, los datos nucleares, mitocondriales y morfológicos sugirieron que los pejerreyes de
aleta de vela que habitan en los arroyos probablemente se hibridan con las poblaciones de los lagos.
Estadísticas de ordenación subsiguientes y pruebas de exceso de homoplasia bootstrap (Seehausen
2004) demostraron que la señal filogenética compartida por aletas afiladas y poblaciones de arroyos
es muy significativa en el conjunto de datos multilocus, lo que proporciona evidencia de hibridación
masiva. A su vez, las aletas redondas y agudas del lago Matano se identificaron como un monofilo
antiguo, que está enmascarado en los datos de AFLP y mtDNA debido a la introgresión de los
invasores fluviales (Herder et al.2006b).
La introgresión de las aletas afiladas de L. Matano por parte de las poblaciones de arroyos indujo
algunos problemas en los estudios que se basan únicamente en grupos de haplotipos
mitocondriales. Basado en la suposición de que el Lago MatanoTelmatherinala radiación está
físicamente aislada de todos los pejerreyes de aleta de vela restantes, Roy et al. (2004) no incorporó
muestras de grupos externos de otros lagos o ríos y arroyos del sistema de lagos en los análisis
filogenéticos. Por lo tanto, los tres clados de haplotipos de mtDNA presentes en el lago Matano
Telmatherinase discutieron a medida que evolucionaban tres linajes principales de pejerreyes de
aleta vela en el lago Matano, en lugar de identificar el carácter introgresivo de los aletas afiladas y los
aletas redondas claramente monofiléticos. En consecuencia, los resultados y predicciones derivados
de un conjunto de estudios (Roy et al.2004,2007a,b) tendrá que vincularse cuidadosamente con
conceptos basados en la monofilia nuclear1.
Las marcadas diferencias fenotípicas y aparentemente también ecológicas entre los aletas
redondas y afiladas llevaron a la conclusión de que los pejerreyes de aleta vela del lago
Matano muy probablemente representan una radiación adaptativa (Herder et al.2006b).
1Las inferencias de la historia evolutiva de las radiaciones a partir de datos filogenéticos requieren un muestreo
taxonómico adecuado, incluidos los grupos externos relevantes (ver Herder et al. (2006a,2006c), Schliewen et al. (2006
) y Schwarzer et al. (2008) para discusión con respecto a publicaciones sobre radiaciones de peces en Sulawesi (Roy et
al.2004,2007a,b) y en los lagos de cráter de Nicaragua (Barluenga et al.2006). Además, el control de calidad de las
inferencias a posteriori depende de manera crítica de la disponibilidad de material de prueba “individualizado”, para
permitir la verificación cruzada de los resultados. Esto es especialmente importante para los estudios de especiación
incipiente, donde la variación fenotípica no es necesariamente discreta y la asignación inequívoca de individuos a
especies (emergentes) no siempre es posible.
Figura 2Red de red vecina filogenética basada en la distancia, reconstruida utilizando 1327 fragmentos
polimórficos de AFLP (redibujados de Herder et al.2006b). En contraste con los datos de haplotipos
mitocondriales, los AFLP nucleares admiten "aletas agudas" y "aletas redondas" monofiléticas en el lago
Matano, y también distinguenParatherina, Tominanga,yTelmatherina celebensisde los lagos Towuti y
Mahalona de los arroyosTelmatherinacf. “bonti”poblaciones Los datos multilocus contienen una señal fuerte
y significativa para la antigua monofilia de L. Matano.Telmatherinaen total (aletas afiladas + aletas redondas).
Sin embargo, esta señal es confundida por alelos derivados de la introgresión de poblaciones alóctonas de
arroyos en las aletas afiladas de L. Matano (Herder et al.2006b)
Llamativamente, las aletas afiladas introgresadas son más diversas en términos de forma corporal
que las aletas redondas simpátricas claramente no introgresadas. Esto llevó a la idea de que la
introgresión podría forzar la evolución de novedades adaptativas (Nolte et al.2005) – ideas que son
objeto de estudios focales adicionales y en curso que prueban críticamente las correlaciones entre
una mayor diversidad fenotípica y la evolución reticulada (Herder y Schliewen, en preparación).
5 ¿Un papel clave del río Petea?
ElTelmatherinaLa población que habita el río Petea, la única salida de L.

Matano, es la única población conocida de aletas afiladas que habitan en el río
(Herder et al.2006a,b). Portando el haplotipo mitocondrial "introgresado", este
La población en el área de “cuello de botella” que separa la parvada de L. Matano de la

diversidad de Telmatherinidae río abajo es especialmente adecuada para probar si la
introgresión detectada en los aletas afiladas es un evento pasado, o posiblemente un
fenómeno aún en curso. Evaluación del flujo potencial de genes a lo largo del río Petea (Fig.1)
también parecía apropiado dado que Roy et al. (2004) basaron escenarios de especiación en el
supuesto de que este río constituye una barrera importante que impide el flujo de genes entre
L. Matano y el resto del sistema de los lagos Malili. Por lo tanto, un estudio de enfoque se
centró en la variación genotípica y fenotípica a lo largo de este notable río, perdiendo 72 m de
altitud a lo largo de sus únicos aprox. 9 km de longitud (Schwarzer et al.2008). Los conjuntos
de datos que consisten en AFLP a nivel de población, análisis de formas morfométricas
geométricas y mediciones adicionales sugieren altos niveles de flujo de genes entre los
tramos superior e inferior de R. Petea, así como entreTelmatherinasp. “Petea” y aletas
lacustres. La similitud fenotípica y genotípica disminuye con la distancia a lo largo de este
corto rango geográfico, lo que indica un intercambio genético a lo largo del río y entre las
aletas afiladas lacustres y las que habitan en los arroyos. En consonancia con estos resultados,
el trabajo de campo a lo largo del río Petea demostró que la cascada principal suponía servir
como una barrera estricta que evitaba la dispersión (Roy et al.2004,2006) está ausente.
En resumen, los estudios disponibles respaldan dos clados bien separados de pejerreyes de aleta
vela dentro del lago Matano, que juntos constituyen un monofilo antiguo. Las poblaciones de arroyos
introgresan “aletas puntiagudas” morfológicamente muy diversas, un proceso que parece continuar
a la luz de los resultados que muestran el flujo de genes entre L. Matano y el río Petea. Por el
contrario, las aletas redondas simpátricas no muestran indicios de introgresión, ni en términos de
haplotipos mitocondriales ni en las firmas AFLP. La gran falta de resolución filogenética a nivel de
especie dentro de ambos clados indica que los procesos de especiación están en curso en las aletas
afiladas y las aletas redondas, lo que a su vez es un requisito previo principal para analizar los
mecanismos que dan forma a la divergencia (Dieckmann et al. 2004; Nosil et al.2009; Vía y Oeste2008
).
6 Especiación simpátrica en el lago Matano
Las indicaciones de especiación adaptativa dentro del espacio confinado del antiguo lago
Matano, junto con la evidencia de su monofilia, hacen que ambos clados del lago Matano
Telmatherinaposibles candidatos para la especiación simpátrica. Evidentemente no
introgresado, con solo tres morfoespecies de diversidad fenotípica limitada, y caracterizado
por polimorfismos de color masculinos conspicuos, los aletas redondas fueron el primer clado
monofilético de pejerreyes de aleta vela que se analizó en detalle (Herder et al. 2008). Las tres
morfoespecies de aleta redonda son grandes y de cuerpo profundo.Telmatherina antoniae “
grande, pequeño y delgadoT. antoniae “pequeño” y grande, esbelto
T.prognatha (Higo.1a–c). Los machos de las tres morfoespecies tienen una coloración de
cortejo amarilla, azul o azul-amarilla, mientras que las hembras son de color gris oscuro
(Herder et al.2006a). Los análisis morfométricos confirmaron que las morfoespecies son
distintas según el tamaño y la forma de la cabeza y el cuerpo, pero no respaldaron ninguna
diferenciación entre los morfos de color conspicuos (Herder et al.2008; Higo.3).
Fig. 3“Aleta redonda” endémicaTelmatherinadel antiguo y extraordinario profundo lago Matano.

(a)Las tres morfoespecies policromáticas (i) Telmatherina antoniae”grande", (ii) Telmatherina antoniae”pequeño y (iii)
Telmatherina prognathason distintos según la forma del cuerpo (* 98% de asignaciones correctas y significativas
cuando se omite del 10 al 30% de los individuos en las estimaciones de Jackknife sobre el desempeño de las
asignaciones; las imágenes muestran hombres adultos). (b)La estructura de la población de aletas redondas refleja
significativamente las tres morfoespecies, pero no muestra indicaciones para un aislamiento reproductivo estricto (los
datos que se muestran son resultados de reasignación basados en datos AFLP;negroreasignación específica de
morfoespecies,grisasignación a otra morfoespecie). Las morfoespecies muestran diferentes patrones de uso de
recursos tróficos (importancia alimentaria a partir del contenido estomacal;verdeartrópodos terrestres, marrón
moluscos,azulcopépodos,fi amarillosh,blancoalimentos restantes). Datos de Herder et al. (2008); mapa por T. von
Rintelen, modificado (con permiso)
Todos los fenotipos de aleta redonda ocurrieron en plena simpatía en seis lugares de muestreo
distribuidos alrededor del lago, pero mostraron diferencias en la abundancia y el uso del hábitat.
Telmatherina antoniae “small” es, con diferencia, la morfoespecie más abundante, cortejando y desovando
en gran número principalmente en las horas de la mañana en fondos abiertos de fondos blandos.
hábitats de playa. Sin embargo, estos peces abandonan las áreas de desove más tarde en el día, pero
no hacia otras áreas costeras bénticas. Registros deT. antoniae “small” en estado de ánimo no
reproductivo en el área de alta mar apoyó la hipótesis de que los hábitats costeros sirven a esta
morfoespecie predominantemente como lugares de cortejo y desove, mientras que se alimentan
predominantemente en el área pelágica de alta mar. A diferencia de la ecología pelágica deT.
antoniae “pequeño,T. antoniae “grandes” habitan en áreas costeras. Los hábitats de estos pejerreyes
de aleta vela son típicamente sitios empinados caracterizados por fondo de grava o roca. Hay
Telmatherina prognathaocurren con mayor frecuencia en sitios similares, pero principalmente en
áreas menos profundas que brindan refugio por un dosel denso de vegetación colgante y
estructurado por vegetación sumergida.
La ecología trófica de las aletas redondas se ajusta a las predicciones de la forma del cuerpo y el
uso del hábitat (Herder et al.2008). estómagos deTelmatherina antoniae “pequeños” contenían
principalmente copépodos, que probablemente estén disponibles en alta mar. Por el contrario,
"grande"T. antoniae contenía principalmente pequeños moluscos y artrópodos terrestres como
hormigas aladas, correspondientes a la alimentación costera.Telmatherina prognatha,caracterizado
por una apariencia similar a un depredador, de hecho contenía restos de pequeños peces además de
artrópodos terrestres. En resumen, los datos ecológicos sugieren que las tres morfoespecies de aleta
redonda son totalmente simpátricas en el lago Matano, comparten áreas de desove, pero habitan
nichos ecológicos distintos.
El genotipado AFLP a nivel de población apoyó el aislamiento reproductivo sustancial pero
incompleto de las tres morfoespecies, pero no indicó barreras estrictas para el flujo de genes
entre morfos de color, ni en las morfoespecies "pequeñas" ni en las "grandes" deT.antoniae.
Las pruebas de asignación mostraron una consistencia fuerte pero no completa de los grupos
de genotipos definidos por morfología, lo que apoya la hipótesis de que las diferencias entre
morfoespecies son significativas pero no inequívocamente distintas en cada individuo.
Centrándose en loci AFLP únicos, solo pequeñas proporciones del conjunto de datos
multilocus nucleares resultaron estar significativamente diferenciados, lo que a su vez sugiere
que las huellas de selección están restringidas solo a pequeñas partes del genoma, un
resultado que se ajusta a ideas recientes sobre las etapas iniciales de la especiación ecológica.
(Fitzpatrick et al.2008b; Vía y Oeste2008; Wu2001; revisado por Nosil et al.2009). En línea con la
diferenciación genética significativa pero incompleta entre las morfoespecies de aleta
redonda, los datos de transectos de observación destacan un apareamiento muy fuerte pero
no absoluto de morfoespecies. Curiosamente, se detectó una estructura intrapoblacional
significativa entre los sitios de muestreo en
T. antoniae “grande” claramente no aumenta con las distancias dentro del lago. Esto indica que estas
poblaciones predominantemente bentónicas están estructuradas espacialmente, posiblemente
como resultado de la baja dispersión y la formación de bancos de arena. Sin embargo, la
diferenciación para- o alopátrica, que sirve como hipótesis nula para los modos simpátricos de
especiación, predeciría que la diferenciación aumentaría con la distancia geográfica o la presencia de
barreras. Como ninguna de las dos fue sustentada, se rechaza esta hipótesis nula.
De acuerdo con la evidencia de una ecología pelágica predominante derivada de datos de
transectos y muestreo en alta mar, los datos de AFLP no detectaron restricciones del flujo de genes
entre los sitios de muestreo bentónicos en la forma pequeña deT. antoniae (Herder et al. 2008). Un
estudio reciente basado en loci de microsatélites centrado en la dispersión en
T. antoniaeausencia confirmada de estructura espacial (Walter et al.2009a). Población
los conglomerados detectados en ese estudio que no coinciden con los sitios de muestreo pueden
ser el resultado de diferentes morfoespecies de aletas redondas, que no se tuvieron en cuenta
explícitamente en este estudio (Walter et al.2009a). Niveles similares de estructura genética
detectados [FCALLE= 0,03 (microsatélites; Walter et al.2009a), F.CALLE= 0,019 (AFLP; Herder et al.2008)]
apoyan esta interpretación. Asimismo, un segundo estudio de microsatélites centrado en los
polimorfismos de color (Walter et al.2009b) también confirmaron la ausencia de diferenciación entre
los morfos de color masculino amarillo y azul enT. antoniae “pequeño". El último estudio también
proporcionó las primeras indicaciones de la falta de un patrón específico de morfología de color en la
competencia macho-macho deT. antoniae “pequeño".
Los datos morfológicos, ecológicos, conductuales y genéticos combinados son consistentes con
un modo simpátrico de especiación en las aletas redondas del lago Matano, según los criterios
propuestos por Coyne y Orr (2004). Los aletas redondas también son claramente simpátricos en el
nivel microgeográfico, ya que todos los fenotipos regularmente se encuentran directamente entre sí.
Según los datos genéticos y las observaciones de elección de pareja, su aislamiento reproductivo es
sustancial, pero solo afecta a pequeñas partes del genoma, y los escenarios alo- o parapátricos son
muy poco probables. El criterio de la relación de grupo hermano (Coyne y Orr2004) parece
inadecuado en el presente caso, ya que la especiación obviamente no es di- sino trichotomus en la
bandada de aletas redondas. Sin embargo, la intención de este criterio es reclamar evidencia de
divergencia dentro de un grupo monofilético, lo cual se proporciona claramente en el caso de las
aletas redondas de L. Matano.
7 Sobre los mecanismos que impulsan los procesos de especiación
Responder a la pregunta sobre los escenarios geográficos que permiten o incluso

promueven los procesos de especiación es importante, pero sigue siendo solo un paso
inicial hacia la comprensión de los mecanismos que impulsan los procesos de
divergencia (Fitzpatrick et al.2008a). Estudios como el de las aletas redondas de L.
Matano demuestran, en línea con varios otros (Feder et al.2005; Filchak et al.2000;
noakes2008; Rolan-Álvarez2007; Savolainen et al.2006; Schliewen et al.1994,2001;
Steinfartz et al.2007), que la especiación no depende esencialmente del efecto aislante
de las barreras extrínsecas, y llaman la atención sobre cómo la adaptación diferencial
específica de la población ayuda a superar el efecto homogeneizador de la reproducción
sexual entre especies incipientes (Coyne2007; Bolnick y Fitzpatrick2007; jiggins2006).
Hay fuertes indicios de que la respuesta a la selección ecológica es la raíz causal de la especiación
en la teoría de L. Matano.Telmatherina (Herder et al.2006b). El uso del hábitat y la ecología trófica
respaldan de manera concordante las diferencias de nicho a escala fina en las aletas redondas
(Herder et al.2008), que corresponden a los rasgos morfológicos discutidos como adaptativos en las
radiaciones de los peces, es decir, la profundidad del cuerpo y la morfología de la cabeza (Albertson
et al.2003; Kasam et al.2003; R€uber y adams2001). El apoyo adicional para la adaptación proviene de
análisis morfométricos geométricos que comparan la forma del cuerpo entre poblaciones de aletas
redondas, aletas afiladas y habitantes de arroyos que probablemente estén involucradas en la
hibridación introgresiva (Herder et al.2006b). Los ejes multivariados que explican la mayor parte de la
variación de la forma demostraron una segregación sustancial en la forma del cuerpo entre
los tres grupos, lo que muy probablemente refleja una adaptación diferencial a los hábitats de arroyos y
lagos. Complementario a estas dos líneas de evidencia que respaldan que la selección ecológica actúa como
una fuerza importante en la especiación deTelmatherinaen el lago Matano, un estudio de enfoque sobre la
“utilidad del rasgo” en aletas afiladas brinda un apoyo sustancial adicional para la adaptación ecológica
(Pfaender et al.,en prensa). La utilidad de los rasgos, el desempeño de los rasgos en términos de aptitud, es
un criterio central para el reconocimiento de la radiación adaptativa (Schluter2000), y puede servir como
evidencia de adaptación debido a la presión de selección ecológica. Pfaender et al. (en prensa) relacionó la
expresión de posibles rasgos clave, como las formas de los huesos de la mandíbula superior e inferior, las
mandíbulas faríngeas, la forma del cuerpo, el conteo de branquiespinas y el tamaño del cuerpo con el
contenido del estómago, y encontró patrones sorprendentemente finos de diferenciación morfológica entre
grupos de aletas afiladas definidas por contenido estomacal. Los comedores de peces, camarones y huevos
fueron los más distintos, y la expresión de los rasgos fue ampliamente consistente con las expectativas
derivadas de otras radiaciones de peces.
Las adaptaciones morfológicas descritas anteriormente y los distintos patrones de elección de

hábitat y pareja evidentes en las aletas redondas (Herder et al.2008) sugieren fuertemente que la
divergencia enTelmatherinatambién puede afectar el comportamiento. En efecto, una serie de
estudios realizados por el grupo de Gray y McKinnon (Gray and McKinnon2006; Grey et al. 2007,
2008a) demostró en línea con nuestro propio estudio de enfoque (Cerwenka et al., en revisión) un
comportamiento de apareamiento y búsqueda de alimento altamente derivado enTelmatherina
sarasinorum, una especie de aleta afilada polimórfica de color (Fig.1d) alimentándose principalmente
de huevos de con- y heteroespecíficosTelmatherina (Grey y McKinnon2006; Kottelat1991). Los huevos
de pejerrey de aleta vela son, con mucho, la principal fuente de alimento deT. sarasinorumen las
zonas de desove del pejerrey de aleta redondaTelmatherina antoniae “pequeño” (Fig.1b), y se
obtienen utilizando dos estrategias de comportamiento diferentes correlacionadas con la densidad
del huésped (Cerwenka et al., en revisión). Esto también afecta a las especies que se alimentan de
huevos en sí, con el canibalismo filial correlacionado con el número de cornudos involucrados (Gray
et al.2007). Un ejemplo espectacular de adaptación conductual a la alimentación con huevos en
T. sarasinorumha sido reportado recientemente: machoT. sarasinorumhan sido observados
cortejando y tentando a hembrasT. antoniaepara desovar y luego comerse los huevos (Gray et
al.2008a). Grey et al. denominó a esta táctica de comportamiento única "comer a escondidas"
y sugirió que podría haber evolucionado como una posible extensión de la alimentación con
huevos conespecíficos en el entorno de bajos recursos del lago Matano.
8 Selección sexual y evolución de los polimorfismos de color
La teoría sugiere que la selección sexual disruptiva puede promover polimorfismos de color
(Chunco et al.2007; Grey y McKinnon2007) y posiblemente procesos de especiación (Kawata et
al.2007), pero la evidencia empírica de la especiación provocada por la selección sexual está
restringida a muy pocos casos (Seehausen et al.2008). Los espectaculares polimorfismos de
color de los machos de varias especies de pejerreyes de aleta vela (Herder et al.2006a) parecía
muy prometedor para probar hipótesis que vinculan la coloración masculina y los procesos de
especiación. Sin embargo, AFLP a nivel de población o microsatélite
los datos no respaldaron las restricciones en el flujo de genes entre los morfos de color masculinos
conspicuos en las aletas redondas, ya sea enT. antoniae “pequeño” o enT. antoniae “grande” (Herder
et al.2008; Gualterio et al.2009b). Del mismo modo, los datos morfométricos no indicaron ninguna
diferencia en la forma del cuerpo entre los morfos de color de las aletas redondas, que podría
suponerse que se acumulan bajo un flujo de genes restringido. Sorprendentemente, sin embargo,
los análisis exploratorios del conjunto de datos AFLP multilocus revelaron una señal significativa para
la coloración amarilla de los machos en todas las aletas redondas incluidas, lo que sugiere la
heredabilidad de los rasgos de color. Esta heredabilidad, sin embargo, claramente no va
acompañada de una estructura poblacional significativa. Los polimorfismos de color estables
mantenidos por ambientes fluctuantes o heterogéneos, como las condiciones de iluminación que
cambian con el día o la estación, o que difieren con la estructura del hábitat, pueden proporcionar
una explicación adecuada para este fenómeno (Chunco et al.2007; Grey y McKinnon2007). El apoyo
reciente a la hipótesis de que la heterogeneidad espacial del entorno visual puede influir en la
selección sexual en la coloración masculina proviene de estudios observacionales sobre colores
polimórficos.T. sarasinorum (Grey et al.2008b; Higo.1d). Cada uno de los machos azules y amarillos
resultó tener una aptitud reproductiva significativamente mayor en uno de los dos hábitats
alternativos probados, que se caracterizan por condiciones de iluminación opuestas que
corresponden a un contraste de coloración igualmente mayor con el fondo. Por lo tanto, la selección
sexual desvinculada de los procesos de especiación puede explicar la existencia de pejerreyes de
aleta vela polimórficos de color; sin embargo, la presencia generalizada de diferentes tipos de
polimorfismos de color en la radiación de los lagos Malili, incluidas las poblaciones que habitan ríos y
arroyos que habitan tipos muy diferentes de hábitats, plantea la cuestión de si la heterogeneidad del
hábitat por sí sola puede explicar el patrón de la bandada. Una combinación de diferentes factores
externos que generan heterogeneidad visual, incluidos los efectos diurnos y estacionales, podría
explicar estos patrones.
9 perspectivas
En resumen, los pejerreyes de aleta de vela de los “estanques de los sueños de Wallace” se han
establecido y utilizado con éxito como un nuevo sistema modelo para la investigación de la
especiación y para el estudio de la selección que mantiene los polimorfismos de color. El tamaño
comparativamente pequeño a mediano de cada uno de los cinco lagos Malili, así como la estructura
geográfica multifacética del sistema de lagos, permite incorporar radiaciones distribuidas
simpátricamente, parapátricamente y alopátricamente en análisis integrales.
Este escenario es difícilmente comparable con cualquier otro sistema modelo acuático, ni con los
muy grandes y complejos Grandes Lagos de África Oriental, ni con los pequeños conjuntos de
especies de lagos de cráteres en Camerún y Nicaragua. Por lo tanto, el sistema del pejerrey de aleta
de vela ofrece un gran potencial para la biología evolutiva, especialmente para la investigación de la
especiación. Sobre la base de los resultados iniciales revisados aquí, cuatro temas principales de
investigación han surgido como especialmente prometedores. En primer lugar, el carácter
adaptativo de ambas radiaciones del pejerrey aleta vela del lago Matano ofrece la oportunidad de
probar la idea de que la selección da forma a paisajes de aptitud adaptativa (Gavrilets2004;
Kingsolver y Pfennig2007) en un entorno espacialmente confinado. Vinculando el fitness individual
se correlaciona con la expresión de caracteres morfológicos y su utilidad ecológica, este enfoque

tiene el potencial de proporcionar una visión más profunda de los procesos de especiación
adaptativa en simpatría. En segundo lugar, y complementario, la introgresión masiva de poblaciones
conocidas que habitan en arroyos en las aletas afiladas que evolucionan dinámicamente del lago
Matano ha establecido el escenario óptimo para probar hipótesis sobre el papel de la hibridación y la
introgresión en la generación de una mayor diversidad fenotípica y genotípica (Rieseberg et al.1999;
Seehausen2004; Stelkens y Seehausen 2009). En tercer lugar, y probablemente lo más importante, el
sistema de Malili ofrece oportunidades únicas para probar hipótesis sobre diferentes consecuencias
genómicas de la especiación simpátrica versus parapátrica o alopátrica (Nosil et al.2009). La
especiación simpátrica adaptativa de las aletas redondas de L. Matano se opone a los entornos
parapátricos y alopátricos en el sistema Towuti-Mahalona, donde los lagos están conectados por un
río suave que puede servir como corredor para el flujo de genes. Escaneos del genoma aplicados a
las aletas redondas de L. Matano (Herder et al.2008) han servido como un primer paso hacia el
análisis genómico del sistema. Disponibilidad de la medaka completa (Oryzias latipes)genoma
(Kasahara et al.2007), una especie mucho más emparentada conTelmatherinaque otras especies
completamente secuenciadas como el espinoso o el pez cebra, puede permitir comprender la base
de los genes relevantes para la especiación. Por último, pero no menos importante, el predominio de
los polimorfismos de color en toda la bandada y los datos genéticos que respaldan la heredabilidad y
las consecuencias de aptitud contingente del entorno sugieren que los entornos heterogéneos
mantienen el polimorfismo de color en la mayoría de las especies de telmaterínidos, pero sus
mecanismos y posibles implicaciones para la especiación siguen siendo solo parcialmente conocidos.
Aunque es poco probable que la divergencia de la población de aletas redondas desempeñe un
papel importante en función de la elección selectiva de las hembras por el polimorfismo de color
masculino alternativo, este no es necesariamente el caso de los aletas afiladas del lago Matano u
otros pejerreyes de aleta vela. La especiación a través del impulso sensorial (Seehausen et al.2008)
sigue siendo una hipótesis plausible sobre el origen de especies ecológicamente divergentes,
algunas de las cuales son polimórficas y otras no.
Una tarea importante pendiente es proporcionar una escala de tiempo para la radiación del
pejerrey de aleta de vela. Los resultados preliminares derivados de las estimaciones de divergencia
basadas en la distancia respaldan una edad de 0,95 a 1,9 millones de años para los haplotipos de
ADNmt de aleta redonda y de aleta afilada que separan la división (Roy et al.2007b; Clados I y II), que
corresponde aproximadamente a la edad geológica estimada de L. Matano (1–2 millones de años;
citado en von Rintelen et al.2004). Sin embargo, la aplicación de enfoques basados en modelos que
incorporen todos los clados relevantes de los sistemas (Stoeger et al. en preparación) parece
apropiado para abordar este aspecto bastante fundamental.
El sistema de los lagos Malili no solo alberga varias radiaciones de peces independientes o
linajes endémicos. Los datos ahora disponibles sobre la evolución de los caracoles
paquiquílidos (Glaubrecht y von Rintelen2008; von Rintelen et al.2004,2007b, este volumen),
camarones athyid (K von Rintelen y Cai 2009; K von Rintelen et al. en prensa) y cangrejos de
agua dulce gecarcinúcidos (Schubart y Ng2008; Schubart et al.2008) quedan por ensamblar
con los datos del pejerrey de aleta de vela. Un enfoque de este tipo que vincule patrones de
divergencia en organismos de agua dulce fundamentalmente diferentes restringidos a la
misma área finalmente puede proporcionar una idea de los principales efectos ambientales
que dan forma a la diversidad endémica, incluidas las barreras para
dispersión, y podría permitir incorporar efectos potenciales de coevolución (ver T. von Rintelen et al.
2004, este volumen; von Rintelen et al.2007a). Los estanques de los sueños de Wallace sin duda
proporcionan un entorno rico para que los biólogos evolutivos después de Darwin estudien el origen
de las especies, más allá de la especiación simpátrica “simple”.
Expresiones de gratitudAgradecemos al Instituto de Ciencias de Indonesia (LIPI) por el permiso para

realizar investigaciones en Indonesia. Estamos especialmente agradecidos a RK Hadiaty por apoyar
firmemente nuestro proyecto en Indonesia. PT. INCO brindó un destacado apoyo logístico en
Sulawesi. A. Cerwenka, S. Chapuis, J. Frommen, RK Hadiaty, J. Herder, A. Nolte, J. Pfaender y J.
Schwarzer contribuyeron en el campo y/o laboratorio al éxito del proyecto. W. Wickler (MPG) permitió
el estudio financiando un estudio piloto. El trabajo de campo se benefició enormemente del apoyo
logístico en Indonesia por parte de T. von Rintelen. Agradecemos a T. von Rintelen por proporcionar
acceso a mapas digitalizados. Los comentarios y sugerencias de Jobst Pfaender y dos árbitros
anónimos ayudaron a mejorar el manuscrito. Este estudio fue financiado por becas de investigación
de la Deutsche Forschungsgemeinschaft a UKS (DFG SCHL 567/2-1,€en Bonn a FH
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Las bandadas de especies de gasterópodos vivíparos
de agua dulcetilomelania (Mollusca: Cerithioidea:
Pachychilidae) en los antiguos lagos de Sulawesi,
Indonesia: el papel de la geografía, la morfología
trófica y el color como fuerzas impulsoras en la
radiación adaptativa
Thomas von Rintelen, Kristina von Rintelen y Matthias Glaubrecht
AbstractoEl estudio de bandadas de especies en entornos insulares, como lagos antiguos, puede
contribuir significativamente a nuestra comprensión de los procesos evolutivos fundamentales,
como la especiación, la radiación, la adaptación y la coevolución. Aquí usamos gasterópodos de agua
dulce endémicos en lagos antiguos en la isla indonesia de Sulawesi como modelos para obtener
información sobre patrones y mecanismos de diversificación lacustre. En dos sistemas de lagos
centrales de la isla, es decir, el lago Poso y los cinco lagos Malili conectados, el género de caracoles
de agua dulce pachychilidtilomelaniase ha irradiado en un conjunto endémico diverso de c. 53
especies de gasterópodos vivíparos morfológicamente distintos. Los datos filogenéticos moleculares
revelaron que las colonizaciones independientes y múltiples de los dos sistemas lacustres por
antepasados fluviales han dado lugar a cuatro radiaciones adaptativas morfológica y
ecológicamente diversas, una en el lago Poso y tres en el sistema Malili. Es muy probable que la
evolución de las preferencias de hábitat y la especialización trófica impulsen la diversificación en
ambos sistemas, mientras que la geografía, es decir, la especiación alopátrica, es un factor
importante en el sistema de Malili espacialmente fuertemente estructurado. En todos los lagos han
evolucionado formas de conchas lacustres muy características a través de una escalada, es decir,
coevolución con cangrejos moluscívoros. Queda por dilucidar el papel de la llamativa coloración
corporal presente principalmente en las especies del lago Poso. concretamente su papel potencial en
los procesos de diversificación. Finalmente, el escenario de las bandadas de caracoles de Sulawesi
con dos radiaciones independientes bajo condiciones extrínsecas casi idénticas ofrece información
sobre patrones paralelos de evolución adaptativa. Sin embargo, se requerirá un gran esfuerzo de
conservación para preservar las especies espectaculares de los lagos para futuras investigaciones.
Palabras claveEspeciación - Sistema de lagos Malili - Lago Poso - Filogenia molecular -

Colonización - Coevolución - Especialización trófica - Conservación
T. von Rintelen, K. von Rintelen y M. Glaubrecht (*)

Museo f€ur Naturkunde, Leibniz-Institut f€ur Evolutions- und Biodiversit€atsforschung an der
Humboldt-Universit€en zu Berlin, Invalidenstraße 43, 10115 Berlín, Alemania Correo electrónico:
matthias.glaubrecht@mfn-berlin.de

486 T. von Rintelen et al.
1 Introducción
1.1 Antiguos lagos como “Laboratorios Naturales”
La evolución en las islas ha sido un foco principal de la biología organísmica desde Darwin (
1859). El entorno aislado de las islas ofrece la oportunidad de estudiar fenómenos y procesos
evolutivos en un “laboratorio natural” confinado (Whittaker y Fernández-Palacios2007). Las
radiaciones adaptativas en las islas proporcionan un contexto ideal para la investigación que
investiga el origen de la diversidad biológica en general (ver, por ejemplo, Grant1998). Las
islas en un sentido evolutivo también comprenden hábitats similares a islas, como lagos
antiguos, que se sabe que ocasionalmente albergan radiaciones espectaculares, por ejemplo,
las bandadas de especies de cíclidos de África Oriental (ver, por ejemplo, Barlow2000;
Kornfield y Smith2000; Kocher2004). Las especies se congregan en los llamados “lagos
antiguos” (a menudo considerados como lagos longevos que han existido durante más de 100
000 años (Gorthner et al.1994; pero ver también Albrecht y Wilke 2008), a menudo mucho más
largos, como el lago Tanganica y el lago Baikal, han ocupado un lugar destacado en la biología
evolutiva desde Brooks (1950) papel seminal, y estos “teatros ecológicos” (Hutchinson1965) se
consideran puntos críticos de diversificación (para una descripción general, véase, por
ejemplo, Martens1997; Rossiter y Kawanabe2000). La investigación sobre organismos en lagos
antiguos ha arrojado importantes conocimientos sobre los patrones generales de especiación
y radiación (ver, por ejemplo, Streelman y Danley2003; Kocher2004), que se obtuvieron
principalmente de estudios sobre peces. Recientemente, un número cada vez mayor de
estudios sobre invertebrados busca ampliar y probar este marco mediante la exploración de
sus propiedades intrínsecas a menudo muy distintas, como capacidades de dispersión muy
diferentes y muy probablemente una influencia menos prominente de la selección sexual;
para ejemplos recientes, véase, por ejemplo, para moluscos, Glaubrecht (1996,2008), Rintelen
et al. (2004, 2007a), Wilson et al. (2004) y Albrecht et al. (2006), y para crustáceos, Marijnissen
et al. (2006) y Rintelen et al. (2007b). Entre los invertebrados, los gasterópodos de agua dulce
con su amplia gama de estrategias reproductivas son ideales para abordar cuestiones, por
ejemplo, en biogeografía e investigación de biodiversidad (ver, por ejemplo, Glaubrecht1996,
2000, 2004). Utilizamos gasterópodos de agua dulce como modelos para la investigación de
patrones y mecanismos de diversificación mediante el estudio de bandadas de especies del
género pachychilidtilomelaniaSarasin y Sarasin1897, que se ha irradiado a más de 50 especies
morfológicamente diversas en lagos antiguos en la isla indonesia de Sulawesi (Apéndice1).
1.2 Los Gasterópodos en los “Lagos Antiguos” en Sulawesi
el génerotilomelaniaes endémica de Sulawesi, donde está ampliamente distribuida,

actualmente c. 75 especies conocidas (Fig.1; Apéndice1). La especie se congrega en los dos
antiguos sistemas lacustres situados en las montañas centrales de la isla, a saber. El lago Poso
y los cinco lagos Malili (Cuadro 1, Figs.1–4), fueron descubiertos por los suizos
Las bandadas de especies de gasterópodos vivíparos de agua dulcetilomelania 487
T. escalariopsis
T. tomoriensis
T. robusta
LAGO POSO
LAGOS DE MALÍ
T carota
T. helmuti
1cm
T. percónica
100 kilometros
T. celebicola
T. wallacei
T perfecta
Figura 1Sulawesi, estaciones de muestreo fluviales (1999–2007, los sitios de muestreo más cercanos se han
reducido a solopuntos)y todas las especies ribereñas descritas. Los dos antiguos sistemas lacustres se
destacan enrojo
naturalistas Paul y Fritz Sarasin durante sus extensos viajes por toda la isla (Sarasin y Sarasin
1905). Describieron una radiación de 16 especies de gasterópodos peculiares con caparazones
grandes y frecuentemente fuertemente esculpidos en ambos sistemas lacustres (Sarasin y
Sarasin1897,1898). Más de una década después, el geólogo holandés
EC Abendanon tomó muestras de los lagos entre 1909 y 1910, aumentando el número de taxones
endémicos conocidos del lago a un total de 24 especies (Kruimel1913). Esta actividad taxonómica
temprana fue seguida por un siglo de abandono, con solo menciones superficiales por parte de
Woltereck (1931,1941), Wesenberg-Lund (1939) y Davis (mil novecientos ochenta y dos). El interés por
los gasterópodos de Sulawesi solo se revivió en la década de 1990 a través de una primera campaña
de muestreo realizada por el malacólogo francés P. Bouchet (Bouchet et al.1995; Marwoto 1997)
dando lugar a las actuales actividades de investigación de los autores desde 1999 (Rintelen y
Glaubrecht2003,2005; Rintelen et al.2004,2007a; Glaubrecht y Rintelen2008).
Tradicionalmente, las especies de los lagos se asignaban a la familia pantropical de

agua dulce Cerithioidean Thiaridae, y recientemente se ha reconocido que pertenecen a
Pachychilidae (Glaubrecht y Rintelen2003; Kohler et al.2004; Rintelen y Glaubrecht2005),
y que todas las especies de pachychilid de Sulawesi pertenecen a un solo género
endémico, es decir,tilomelania (Rintelen y Glaubrecht 2005), que inicialmente solo se
erigió para tres especies endémicas del lago Poso (Sarasin y Sarasin1897; ver Rintelen y
Glaubrecht2005para obtener detalles sobre la historia taxonómica de los paquiquílidos
de Sulawesi). Los caracoles de agua dulce Pachychilid tienen una distribución aparente
de Gondwana, con representantes en América del Sur (Doryssa, Pachychilus),África (
potadoma),madagascar (Madagascar),Asia meridional y sudoriental (Adamietta, Brotia,
Jagora, Paracrostoma, Sulcospira, Tylomelania),y las Islas del Estrecho de Torres (
pseudopotamis)en el margen australiano (Glaubrecht2000; Kohler et al.2004; Kohler y
Glaubrecht2007, 2010). La viviparidad, que durante mucho tiempo se ha asumido como
un factor intrínseco importante en las radiaciones de los gasterópodos límnicos (ver
discusión, por ejemplo, en Glaubrecht1996, 1999,2006), está confinado a varios géneros
en Asia y en el área geográficamente restringidapseudopotamissolo. Todos los demás
paquiquílidos son ovíparos (Glaubrecht y Rintelen2003; Kohler et al.2004).tilomelania
comparte una anatomía y una estrategia reproductiva únicas, es decir, empollando a sus
crías en el útero, con su grupo hermanopseudopotamis (Glaubrecht y Rintelen2003;
Rintelen y Glaubrecht2005).
1.3 Alcance y Objetivos
Siendo amplias, morfológicamente diversas y melancólicas, las bandadas de especies endémicas de

gasterópodos paquiquílidos en los antiguos lagos de Sulawesi brindan una excelente oportunidad
para estudiar los mecanismos de especiación y diversificación en general. Probamos explícitamente
si la radiación detilomelaniaes un verdaderoadaptadoradiación sensu Schluter (2000) empleando los
cuatro criterios distintivos que proporciona, a saber. origen común (bastante reciente) y especiación
rápida (como criterios filogenéticos que conducen a la radiación), así como correlación fenotipo-
ambiente y utilidad de los rasgos (como criterios ecológicos que dan como resultado la adaptación).
Para las radiaciones de moluscos en particular, a menudo se carece de un enfoque riguroso en este
sentido. Con base en análisis de datos ecológicos, morfológicos y moleculares en varios niveles
jerárquicos, se investiga el papel de los factores extrínsecos e intrínsecos para la especiación y la
radiación para el
radiación endémica de estos caracoles lacustres. Un enfoque particular de nuestro trabajo ha sido el
papel de los factores geográficos frente a los ecológicos en la especiación.
Aquí, resumimos nuestro conocimiento actual sobre los patrones ecológicos y filogenéticos
que han surgido hasta ahora de este sistema modelo. Discutimos hipótesis evolutivas
derivadas de estos datos y esbozamos futuras perspectivas de investigación. Estudios
complementarios en curso sobre otros organismos en los lagos de Sulawesi (crustáceos:
Rintelen et al.2007b, en prensa; Schubart y Ng2008; Schubart et al. 2008; peces: Herder et al.
2006a,b,2008, este volumen; Schwarzer et al.2008) ofrecerá la oportunidad de colocar
nuestros resultados sobre los gasterópodos en una perspectiva más amplia, y las primeras
comparaciones ya se pueden hacer en este artículo. También sugerimos prioridades en la
conservación para ofrecer a las generaciones futuras la oportunidad de estudiar estas
singulares “Galápagos sumergidas” o “estanques de ensueño de Wallace” (Herder et al.2006a)
también.
Nuestros estudios se basan en un muestreo completo en el lago Poso y los cinco
lagos Malili, así como en los ríos adyacentes y de conexión (Figs.2y3) durante nueve
campañas de campo. Las lagunas fueron visitadas en 1999 (temporada seca, MG y TvR),
2000 (temporada húmeda, TvR), 2002 (temporada seca, TvR y KvR), 2003 (temporada
seca, TvR y MG), 2004 (tres viajes, temporada seca y estación húmeda, TvR, KvR y MG),
2005 (temporada seca, TvR, KvR y MG) y 2007 (temporada seca, TvR y MG). Las muestras
se obtuvieron mediante esnórquel y buceo SCUBA.
2 Las bandadas de especies detilomelaniaen los lagos de Sulawesi:

diversidad de especies y endemismo
Actualmente, 35 especies detilomelaniahan sido descritas de ambos antiguos sistemas

lacustres de Sulawesi (Fig.2y3; Apéndice1; Glaubrecht y Rintelen2008; Rintelen y
Glaubrecht2008). Todas las especies son endémicas de su respectivo sistema límnico. Si
bien se reconocen 28 especies en el sistema Malili (Fig.3; Rintelen et al. 2007a,b; Rintelen
y Glaubrecht2008), hasta el momento solo se han descrito siete taxones del lago Poso y
el río Poso (Fig.2; Glaubrecht y Rintelen 2008). Se espera que la diversidad en el lago
Poso sea mucho mayor; actualmente se pueden distinguir 25 morfoespecies (Rintelen et
al., datos no publicados; Marwoto, comunicación personal), lo que arrojaría un total de
53 especies en ambos sistemas lacustres antiguos (Apéndice1). Los lagos de Malili
probablemente también albergan entre 1 y 5 taxones aún no descritos, dependiendo del
resultado de la investigación en curso sobre la diferenciación a escala fina de la genética
y la morfología en ese sistema (compárese con la Fig. 7; Rintelen et al., datos no
publicados).
Sin embargo, en el sistema Malili, el endemismo no se limita al sistema lacustre en su
conjunto, sino que 24 especies (86%) son endémicas de un solo lago (Fig.5; Glaubrecht y
Rintelen2008; Rintelen y Glaubrecht2008). El lago Towuti es el más rico en especies con 10
especies, seis de las cuales son endémicas, mientras que el lago Mahalona alberga nueve
especies (seis endémicas) y el lago Matano siete (seis endémicas). El río Tominanga entre el
lago Mahalona y Towuti alberga cuatro especies, de las cuales sólo una es
T. connectens
T. neritiformis
T. porcellánica
T kuli
carbo
tespecificación D
tespecificación C
tespecificación B
T. toradjarum
1cm
T. centauro
tespecificación A
10 kilómetros
Figura 2Lago Poso con estaciones de muestreo y especies endémicas detilomelania.Se muestran todas las
especies descritas y una selección de taxones aún no descritos.
T. gemmifera CINCO MAHALONA

T. discreto
molesto
T.hannelorae
T. kruimeli
T. patriarchalis
T. mahalonensis
t confunde
T. matannensis
T. marwotoae
T. turriformis
T. wolterecki
T. tominangensis
CINCO
T. zeamais Petea R.
T. cinnabartfeld t atrajo
MAHALONA
T.wesseli
Lo llamamos R.LONTOA
larona r
TOWUTI
Loeha I.
T.baskasti
MASAPI
T.masapensis
10 kilómetros
T.cristinae
T. sarasinorum
T. insulaesacrae
T. bakara T. anfiperita T. towutensis
1cm
T. towutica T. lalemae T.palicolarum
Higo. 3Sistema de lagos fríos con estaciones de muestreo y las especies endémicas detilomelania.Los nombres de los
lagos están impresos enletras mayúsculas. RRío,IIslandia
Higo. 4Hábitats característicos en los antiguos lagos de Sulawesi. (a,b)Sistema frío. (a)Cinco Lagos,
costa con colinas de piedra caliza; (b)rápidos en el río Tominanga. (cd)Lago Poso; (C)playa de arena
típica; (d)Río Post, rápidos de Sulewana. (e–h)Hábitats submarinos en el sistema Frío. (mi) el lago
Towuti, típica zona de plataforma de aguas poco profundas; (F)Lago Towuti, fondo de lodo; (gramo)
Lago Cinco, con fondo blandoOtelia; (h)Lago Cinco, rocas calizas
endémico. Los lagos satélite más pequeños solo albergan una especie (Lago Masapi) o
dos (Lago Lontoa), respectivamente. Dos especies endémicas más ocurren en el río
Larona, que drena todo el sistema.
En el lago Poso, la mayoría de las 14 morfoespecies están ampliamente distribuidas
donde se dispone de sustratos apropiados. Mientras que el proceso en curso de
sustratos blandos
lodo
arena
sustratos duros
grava
cinco lagos rocas
7/6
3/3
9/4
5/4
lago mahalona
Lago Lontoa
4/1 Río Tominanga 2/1
2/2 2
Río Larona 2/2
1/1
Lago Towuti
10/6
5/5
Lago Masapi 1/1

1
5 kilometros
Higo. 5Sistema de lagos fríos, sustratos y diversidad de especies. Los hábitats se han cartografiado por separado para aguas
poco profundas (0–3 m;línea exterior)y aguas profundas (3–20 m;línea interior). Números principalesson el número total de
especies por lago (izquierda)y especies endémicas (derecha), números inferioresson habitantes de sustrato blando (izquierda)y
habitantes de sustrato duro (bien)
La delimitación de especies aún no nos permite proporcionar números definitivos, probablemente solo haya
alrededor de tres o cuatro especies endémicas locales dentro del lago, pero no se puede excluir que para
algunas formas de aguas profundas esto represente más bien un artefacto de muestreo. Las 11
morfoespecies que se encuentran en el río Poso son endémicas allí y solo cinco especies del lago también se
encuentran en el río, la mayoría en un brazo tranquilo cerca del lago.
La gran cantidad de endemismo en cada lago o río es una característica sorprendente del sistema
de Malili, lo que sugiere una fuerte influencia de factores geográficos en la divergencia de especies,
es decir, la especiación alopátrica, lo que quizás no sea del todo inesperado dada la estructura
espacial del sistema. .3; véase también la fig. 10). Solo unos pocos taxones también muestran una
ocurrencia altamente localizada dentro de lagos individuales, por ejemplo, en el lago Towuti
T.Bakara,que aparentemente está confinado a un cabo en el lago Towuti (Rintelen et al.
2007a; Glaubrecht y Rintelen2008) oT.hanneloraeen un afloramiento rocoso en el lago

Mahalona (Rintelen y Glaubrecht).2008). Los datos disponibles no ofrecen una explicación fácil
para estos rangos de distribución restringidos, ya que estos taxones de ninguna manera están
especializados en sustratos que solo ocurren localmente y no hay obstáculos obvios para la
dispersión.
La falta de una estructura geográfica obvia en el lago Poso
aparentemente limita el grado de endemismo local. El número de 25
morfoespecies para todo el sistema es, a primera vista, mucho mayor que
en el sistema de Malili, donde 28 especies se encuentran en cinco lagos de
aproximadamente el doble del área. Sin embargo, si se compara el
número real de especies confinadas a los lagos (sin los ríos de conexión o
drenaje), las cifras resultantes de 14 especies en el lago Poso y 25 en el
sistema de Malili parecen menos paradójicas. La alta proporción de
endémicas de río en el río Poso es bastante sorprendente y contrasta
fuertemente con la situación en el sistema de Malili. Los factores
potenciales que explican esta diferencia son una estructuración más
pronunciada de los hábitats en el río Poso,
La alta diversidad de especies en los lagos y sus ríos de conexión o drenaje contrasta
fuertemente con un bajo número de especies descritas en los ríos de Sulawesi en general.
Sólo nueve taxones ribereños (Fig. 1).1) se han descrito hasta ahora, cinco de los cuales
también se encuentran en las proximidades de los antiguos lagos. Sin embargo, anticipamos
que el número de especies aumentará considerablemente aquí también (comparar el
Apéndice1). Una evaluación preliminar de la diversidad fluvial alrededor de los lagos Malili ha
revelado la presencia de nueve o diez especies en esta área (Rintelen et al., datos no
publicados), de las cuales solo una había sido descrita cuando comenzó el estudio y una más
por los autores ( Rintelen y Glaubrecht2003). La cuenca del lago Poso probablemente alberga
al menos cuatro especies aún no descritas (Rintelen et al., datos no publicados).
3 Una filogenia molecular deTilomelania:Colonización de lagos,

especies e introgresión
Una filogenia molecular basada en dos fragmentos de genes (COI y 16S) de ADN mitocondrial,
con un total de 1535 pb, revela cuatro clados fuertemente respaldados dentro de los lagos: un
clado en el lago Poso y tres clados en el sistema Malili (Fig. 1) .6; Según Rintelen et al.2004;
Rintelen et al., datos no publicados). Los taxones ribereños se identifican como grupos
hermanos de tres clados lacustres, el Poso y dos de los clados Malili. Los datos mitocondriales
sugieren cuatro eventos de colonización independientes en los lagos, tres de ellos solo en los
lagos Malili (Rintelen et al.2004). Una invasión separada del lago Poso y los lagos Malili es un
resultado esperado dado que los dos sistemas de lagos nunca estuvieron conectados. Sin
embargo, parece sorprendente que la colonización se haya producido de forma
independiente en diferentes linajes ancestrales en los tres lagos principales del sistema Malili,
que están directamente conectados por ríos.
a b
Distribución
fluvial M1
lagos frios
Lago Poso
equívoco ver (c)
abajo
M2
*
PD *
* *
* *
*
M3
0.05
*
C *
***
0.01
Higo. 6Filogenia molecular detilomelaniapor inferencia bayesiana (BI) basada en secuencias de mtDNA.
asteriscosindican taxones ribereños en una posición terminal dentro de los clados lacustres. (a)Filograma BI
basado en una alineación combinada de 1535 pb de 16S y COI. Los taxones lacustres se destacan enrojo (
lagos fríos) yverde (Lake Post), especies ribereñas ennegro.El cuatrobarrassobre el bienmarque los cuatro
clados de lagos que representan cuatro eventos independientes de colonización de lagos. M1–M3 se refieren
a los tres clados fríos. Modificado de Rintelen et al.2004. . . . (antes de Cristo)Secciones detalladas del
filograma BI basadas en 660 pb de COI; (b)Clado de posición; (C)Frío 2 clado
Los datos moleculares proporcionan una prueba exitosa de los dos criterios filogenéticos
entre los de Schluter (2000) cuatro criterios para el reconocimiento de una radiación
adaptativa, a saber. ascendencia común y radiación rápida, ya que cada clado del lago es
monofilético y la cladogénesis rápida se puede inferir de longitudes de rama cortas entre
muchos nodos basales dentro de cada uno de los cuatro clados. Como se describe a
continuación en detalle, cada evento de colonización fue seguido por una diversificación en
una variedad de especies morfológicamente distintas y ecológicamente especializadas,
proporcionando así evidencia del cumplimiento de los dos criterios ecológicos restantes para
una radiación adaptativa sensu Schluter (2000) también. La aparición de cuatro radiaciones
adaptativas independientes en condiciones idénticas (sistema frío) o muy similares
(occidentales) ofrece la oportunidad única de estudiar patrones de evolución paralela. Estas
radiaciones adaptativas difieren considerablemente en el grado de su diversificación, con
números de especies y, en consecuencia, "tipos" morfológicos que van desde 3 a 25 (Invierno
1: 13 spp.; Invierno 2: 12 spp.; Invierno 3: 3 spp.; 25 spp. .).
La filogenia mitocondrial proporciona una imagen bastante clara a un nivel superior,
mientras que prácticamente no hay resolución a nivel de especie paratilomelania. Todas
las morfoespecies lacustres de las que se ha secuenciado más de un espécimen o
población aparecen polifiléticas en la filogenia molecular (Rintelen et al. 2004, 1999 .
2007a; Glaubrecht y Rintelen2008). Para una discusión más general de las cuestiones del
árbol de especies-árbol de genes y la taxonomía del ADN, nos referimos, por ejemplo, a
Funk y Omland (2003), Sitios y Marshall (2004), Will y Rubinoff (2004) y Vogler y
Monaghan (2006). Esta falta de resolución es aún más notable ya que no hay falta de
estructura genética per se en los datos, es decir, hay varios subclades bien respaldados
dentro de tres de los cuatro clados principales del lago.
Varios fenómenos podrían explicar este problema, como la clasificación
incompleta del linaje, es decir, el mantenimiento del polimorfismo genético
ancestral a través de los límites de las especies, o la hibridación introgresiva.
Sospechamos particularmente un papel fundamental de la hibridación aquí, como
se concluyó a partir de varios desajustes significativos entre las características
morfológicas observadas de las especies y su ubicación en la filogenia molecular.
2008). Los datos obtenidos del genotipado del polimorfismo de longitud de
fragmento amplificado nuclear (AFLP) para la especie de uno de los lagos Malili
(lago Mahalona) revelan un ajuste considerablemente mejor de los grupos
genéticos a los taxones morfológicos delimitados que la filogenia basada en
mtDNA (Fig. 2).7) y, por lo tanto, proporciona cierto apoyo a la hipótesis del flujo
génico intralacustre, es decir, la hibridación introgresiva.
Además, tanto en el sistema de Malili (clados Malili 2 y 3) como en el lago
Poso, las especies ribereñas aparecen en posiciones terminales dentro de los
clados de ADNmt lacustre (Fig. 2).6), sugiriendo la ocurrencia de hibridación
entre especies lacustres y ribereñas. Si bien esta hipótesis debe probarse
utilizando marcadores nucleares, podría proporcionar el segundo caso de
introgresión generalizada de haplotipos fluviales en poblaciones de lagos o,
viceversa, peces telmaterínidos (Herder et al.2006a; Según Schwarzer et al.
2008) y también se sospecha de la bandada de especies de camarones atyid en
el lago Poso ( Rintelen et al.2007b).
T. mahalonensis
T. wolterecki
T. mahalonensis
t confunde
*
t confunde
0.01
T.palicolarum
T. mahalonensis
* T. wolterecki
T. marwotoae
Higo. 7AFLP Red Vecina de las especies endémicas del lago Mahalonatilomelaniaconstruido con
Splitstree (Huson y Bryant).2006). Análisis basado en 372 loci de seis combinaciones de cebadores.
Las especies están codificadas por colores.Asterixesindican las dos formas diferentes de rádula de
T. wolterecki (ver texto para más detalles)
4 Coevolución con Cangrejos
Los cambios dramáticos en la morfología de las conchas están asociados con la colonización lacustre
en ambos sistemas lacustres antiguos. Con la excepción del clado Malili 1 y partes de la bandada de
Poso, las especies de cada clado lacustre comparten rasgos característicos de la concha, como la
presencia de costillas axiales, lo que proporciona apoyo adicional para la colonización independiente,
en particular del sistema lacustre de Malili (Rintelen et al. .). . . . .2004). Las especies se pueden
distinguir por sus caparazones característicos, aunque la variabilidad intraespecífica es bastante alta
(Rintelen y Glaubrecht).2003; Según Rintelen et al.2007a). En cada clado lacustre, la evolución
convergente de conchas más gruesas en relación con las especies ribereñas ha ocurrido en casi
todos los casos (Fig. 1).8a). El grosor del caparazón puede considerarse indicativo de la resistencia del
caparazón (Fig.8d) y se utiliza aquí como un estimador de la resistencia a la depredación del
cangrejo. Estos hallazgos coinciden con la aparición de una especie de cangrejos moluscívoros
a Frío b
Frío
Semana
d
*
* 1400
1200
Frío
1000
Fuerza de la cáscara (N) 800
600
400
Grosor de la cáscara
< 0,3 mm
0,3 – 0,5 mm 200
> 0,5 mm
equívoco
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
Grosor de la carcasa (mm)
- sustrato duro - taxones lacustres
Higo. 8Fuerza de concha de lacustretilomelaniaespecies y depredación de cangrejos. (a)Árbol de máxima

parsimonia basado en 1535 pb de mtDNA (16S y COI) con colores correspondientes al grosor de la cubierta;
(b)Pinza izquierda de especie de cangrejo lacustre moluscívoro (Syntripsa matannensis (Schenkel, 1902));
(C)Shell con cicatriz de reparación (T. zeamais,cinco lagos). Barra de escala 1 cm; (d)diagrama de dispersión que muestra la
correlación entre el grosor de la cáscara y la resistencia de la cáscara. Modificado de Rintelen et al. (2004)
de Sundatelphusidae y Parathelphusidae en cada uno de los lagos (Fig. 1).8b; Schubart y Ng2008),
que poseen una dentición pronunciada en sus quelas que les permite romper conchas. Estos datos
sobre la resistencia y la estructura de la concha de los gasterópodos lacustres y también la frecuente
reparación de la concha en los gasterópodos lacustrestilomelania (Higo.8c), en combinación con la
aparición de grandes cangrejos moluscívoros, sugiere que la evolución frente a la depredación del
cangrejo es un factor determinante en la divergencia inicial de las conchas tras la colonización de los
lagos (Rintelen et al.2004). La presencia exclusiva de quelas masivas y dentadas solo en las especies
de cangrejos moluscívoros hace muy probable que este sea un ejemplo de verdadera coevolución, es
decir, una respuesta evolutiva también en el lado del cangrejo al desarrollo de caparazones de
gasterópodos más fuertes.
5 Radiación adaptativa a través de la especialización trófica
Un patrón sorprendente que se encuentra en todos los linajes lacustres es la gran variedad de
morfología de rádula (lengua áspera) en ambos sistemas lacustres (Fig. 2).9), lo que contrasta
fuertemente con la situación de las especies ribereñas, donde la gran mayoría de los taxones
aforma de rádula Frío b

paquiquilido tipico
+ - agrandado
ronda grande
plaza grande Frío
gran enganchado C
gran puntiagudo
en forma de cuchara
pequeño, denso
igual
equívoco d
Semana
mi
F
Frío
gramo
k
- sustrato duro - taxones lacustres
Higo. 9Radula diversificación entilomelaniaespecies. (a)Árbol de parsimonia máxima basado en 1535

pb de mtDNA (16S y COI) con colores correspondientes a la forma de rádula que se muestra en
(2010).b–k); negro,principales tipos de rádula de Cold and Lake Week Tylomelania; (b)paquiquilido
típico (río),T perfecto; (C)corto con dientes densos,T. Gemmify; (d)dentículos del mismo tamaño,
T. kruimeli;(mi)dentículos mayores agrandados.T. towutica; (F)dentículos mayores grandes y cuadrados,T. sarasinorum; (gramo)
dentículos mayores grandes y redondeados,T. matannensis; (h)pequeños dentículos mayores en forma de cuchara,
T. insulaesacrae; (i)dentículos simples en forma de gancho,T. carbo; (k)dentículos mayores largos y puntiagudos,T.
spec Semana 2. Barra de escala100metrometro. Modificado de Glaubrecht y Rintelen (2008)
poseen rádulas casi idénticas (Fig. 2).9a; Según Rintelen et al.2004). La rádula es una parte
fundamental del sistema trófico de los gasterópodos, y se ha demostrado que las diferencias
morfológicas de la rádula son indicativas de las preferencias de alimento y sustrato (Hawkins
et al.1989). La rádula de moluscos generalmente se considera un carácter conservador con
poca variación a nivel de especie; pero mira padilla (1998), Reid y Mark (1999), y Reid (2000). En
contraste, al menos nueve morfologías de rádula específicas de especies notoriamente
diferentes que se distinguen por la forma y el tamaño relativo de su dentición están presentes
dentro de los antiguos clados de lagos (Fig. 1).9), con tres a seis fenotipos encontrados en
cada clado del Sistema Frío (Rintelen et al. 2004) y al menos seis fenotipos en el lago Poso
(Rintelen et al., datos no publicados). Estos tipos principales de rádula se complementan con
aún más subtipos, es decir, variaciones menores, por ejemplo, en el tamaño y el número de
dentículos. Aunque con frecuencia más bien
sutiles, estas diferencias también pueden servir para diferenciar especies o poblaciones. Los
dos subgrupos deT. woltereckirevelado por los datos de AFLP (Fig. 2).7), por ejemplo, diferían
consistentemente en el número de dentículos marginales (3 vs. 4+).
Se suponía que la morfología trófica y el sustrato estaban altamente correlacionados
en todos los clados (Fig. 2).9a; véase también Rintelen et al.2004). El mapeo de sustratos
en los tres lagos principales del sistema Malili mostró una distribución bastante
heterogénea de sustratos duros y blandos en los lagos (Fig. 2).5), particularmente en
aguas poco profundas cerca de la costa (ver también el Recuadro 1). Esta
heterogeneidad de hábitat se refleja en las preferencias de sustrato encontradas en las
especies lacustres detilomelania.Todas las especies en los principales lagos del sistema
Malili y el lago Poso para los que tenemos datos sobre las preferencias de sustrato están
especializadas en sustratos blandos (barro, arena) o duros (roca, madera hundida), con
alrededor del 50% de las especies que se encuentran en cualquiera de los dos. categoría
de sustrato (Rintelen et al.2007a). Otras especializaciones ocurren particularmente
dentro de sustratos duros, por ejemplo, algunas especies particularmente en el lago
Poso prefieren rocas o madera (Rintelen et al., datos no publicados). Esta correlación
entre la morfología de la rádula y las preferencias de sustrato sugiere claramente una
correlación fenotipo-ambiente.2000) para reconocer una radiación adaptativa (ver
Introducción). La utilidad dependiente del sustrato de las diferencias de rádula o la
utilidad de los rasgos, que es el segundo criterio ecológico de Schluter, aún debe
probarse. tilomelania.
Las especies de sustrato blando en su mayoría tienen rádulas idénticas o muy similares a las que
se encuentran en los taxones ribereños (Fig. 1).9b), mientras que los taxones de sustrato duro,
particularmente de rocas, a menudo tienen dientes fuertemente agrandados en una variedad de
formas (Fig. 1).9c–k). Esta estrecha correlación entre el agrandamiento de los dentículos de la rádula
y el sustrato duro fue descrita por Rintelen et al. (2004) es generalmente compatible. Sin embargo,
descripciones más detalladas de la rádula han revelado un patrón bastante complejo, como es
evidente en los casos de polimorfismo extenso de la rádula en muchas especies, tanto de sustratos
duros como blandos (Rintelen et al.2007a). La suposición de Rintelen et al. (2004) que la
diversificación de la rádula (es decir, trófica) juega un papel importante en la diversificación ecológica
de las especies del lago permanece incuestionable. Además, está respaldado por la aparición
paralela de rádulas modificadas en consecuencia en habitantes de sustratos blandos y duros en
ambos sistemas de lagos antiguos en Sulawesi.9b–hse comparten entre los dos sistemas lacustres) y
en los únicos taxones ribereños que habitan en rocas de manera consistente encontrados hasta
ahora en el área de Maros en el suroeste de Sulawesi (Rintelen et al., datos no publicados). Estas
observaciones sugieren un papel funcional para las diferencias encontradas, aunque una
comprensión detallada de los mecanismos subyacentes requiere más investigación.
Especialización de hábitats (preferencias de sustrato y, en menor medida, de profundidad)

y diferenciación de rádulas en lagos antiguostilomelaniapermite que más de cinco,
posiblemente hasta siete, especies coexistan en localidades con hábitats suficientemente
estructurados (Glaubrecht y Rintelen).2008y datos no publicados). Este nivel de diversidad de
sitio único solo se observó en taxones del lago Poso y dentro del sistema Malili en el lago
Mahalona y el lago Towuti. Los números absolutos de especies sintópicas en los lagos pueden
no ser impresionantes en sí mismos, pero se vuelven más sorprendentes cuando
contrasta con la situación de los ríos fuera de los sistemas lacustres, donde se encuentra una
sola especie en casi todos los casos.
Por lo tanto, las marcadas preferencias de sustrato de la mayoría de las especies
sugieren un papel importante de los factores ecológicos en la diversificación y
posiblemente incluso en la especiación. tilomelania,junto con una morfología de rádula
(trófica) específica de la especie correlacionada y un agrupamiento genético en algunos
taxones. Sin embargo, estudios detallados sobre especies seleccionadas y complejos de
especies hasta el momento revelan una situación bastante complicada en los sistemas
límnicos de Sulawesi. Los fenómenos encontrados variaron desde especies con rádulas
específicas altamente características, independientemente de su presencia en varios
sustratos, hasta especies en las que dos morfologías de rádula fundamentalmente
diferentes se encuentran en la misma población en el mismo sustrato. Todas las demás
características morfológicas, especialmente la concha, son muy variables en las especies
del lago, pero hasta ahora carecemos de evidencia de que las características
conchológicas jueguen un papel crucial en la causalidad de la especiación. Además,
6 patrones de especiación
En una perspectiva más amplia, estos resultados detilomelaniasugieren una aplicabilidad más
amplia de un modelo de radiación propuesto para vertebrados por Streelman y Danley (2003),
que asume que la especialización trófica y la especialización del hábitat impulsan las etapas
iniciales de la radiación adaptativa.
El hallazgo de tipos de rádula en gran parte específicos de la especie y la correlación entre
la morfología trófica y el sustrato entilomelaniaasí como marcadas diferencias de nicho en las
especies (Rintelen y Glaubrecht).2003; Según Rintelen et al.2007a) sugieren un papel
importante de los factores ecológicos en la especiación de estos caracoles. En gasterópodos,
los estudios sobre especies marinas intermareales delittorinahan indicado diferenciación a
través de ecotonos y apareamiento selectivo entre morfos (Johannesson et al.1995; kyle y
boulding1998; Según Wilding et al.2001). Los gasterópodos límnicos de Sulawesi ofrecen
excelentes oportunidades para probar la importancia de estos factores.
Sin embargo, la especiación alopátrica (es decir, la especiación en la separación geográfica)
es probablemente el modo de especiación predominante al menos en los lagos de Malili. Aquí,
diferentes especies de grupos de especies putativas únicas revelan un patrón de distribución
alopátrica en los tres lagos principales (Fig. 1).10; comparar también Rintelen et al.2007a), y el
endemismo de un solo lago es alto (ver arriba, Fig. 1).5). Sin embargo, la evolución paralela e
independiente de habitantes de sustratos duros y blandos con rasgos tróficos asociados (y
diferencias de tamaño) ocurrió en los tres linajes de Malili, lo que sugiere un papel importante
para la divergencia de diferenciación impulsada por la ecología. Mirando más allá de Cold
Lakes, se pueden encontrar algunos casos sorprendentes de evolución paralela entre ambos
habitantes de lodo de aguas poco profundas (p.t hayfrente a 100% gratisT. gemmifera)y
habitantes de las rocas (p. ej.,tespecificaciónB frente a especificaciónB
T. zeamais)en el lago Poso y el sistema Frío (Figs.2, 1999 .3, y9c–T. gemmifera/ es,9 horas -t
especificaciónB/zeamais).Se pueden sospechar patrones similares para varios otros
1cm
CINCO
T. gemmifera
MAHALONA
T. wolterecki TOWUTI
T.cristinae
10 kilómetros
Higo. 10Diversificación alopátrica entre lagos en Cold Lakes. Rádulabarras de escala0,1 mm
especies entre los clados de Cold Lake, pero el fracaso de un enfoque simple de taxonomía de
ADN en nuestro sistema (ver arriba) prohíbe una discusión más detallada de la evolución
convergente por el momento.
7 La distribución y el papel de la coloración corporal
Una característica llamativa de al menos 10 de las 14 morfoespecies en el lago Poso (excluyendo las
especies del río Poso) es una coloración corporal llamativa y brillante (Fig.11). Esto contrasta
marcadamente no solo con las especies ribereñas de la isla sino también con los taxones del sistema
del lago Malili, donde la mayoría de las especies son negras o negras con puntos blancos, solo cinco
especies tienen puntos amarillos o naranjas y tentáculos de intensidad variable (ver ejemplos en las
figs.11). En la actualidad, las causas de la coloración de algunas especies y la fuerte diferencia entre
los sistemas lacustres siguen siendo en gran parte especulativas. Se ha planteado la hipótesis de que
el color desempeña un papel en el reconocimiento de especies e incluso en la especiación en otros
grupos de agua dulce, como los peces cíclidos (Seehausen et al.2008) o, en los antiguos lagos de
Sulawesi, camarones atyid (Rintelen et al.2007b, en prensa). En Cold Lakes, la radiación del pejerrey
de aleta vela, los polimorfismos de color masculinos conspicuos se correlacionan con el éxito de
apareamiento en diferentes hábitats, pero no están asociados con la divergencia de la población
(Herder et al.2008; Grey et al.2008). Streelman y Danley
Higo. 11color de la carrocería entilomelania. (a,b)Habitantes del sustrato blando del Lago Cinco; (a)T. patriarchalis; (b)
T. gemmifera; (c–h)Lago Poso,tspp. (sin especificar); (c-f)habitantes de sustrato blando; (cd) especies de aguas poco
profundas; (e, f)especies de aguas profundas; (g,h)habitantes de sustrato duro
(2003) han sugerido que la comunicación, por ejemplo a través de la coloración intensa del
cuerpo, juega un papel importante en la etapa final de las radiaciones que conducen a un
aumento considerable en el número de especies en comparación con las radiaciones que
carecen de esta etapa. Si bien esta hipótesis aún debe ser probada para tilomelania,el mayor
número de especies en el lago Poso frente a la diversidad de especies en cualquier lago
individual del sistema Malili podría indicar que la diversificación impulsada por el color juega
un papel más importante en la bandada de especies del lago Poso.
8 Patrones de radiación: mirando más allátilomelania

y los lagos Sulawesi
Radiaciones paralelas de gasterópodos, camarones atyid ( Rintelen et al.2007b, en

prensa), cangrejos parathelphusid (Schubart y Ng).2008; Según Schubart et al.2008)
y peces telmaterínidos (Herder et al.2006a, 1999 .b, 1999 .2008) en los lagos, en
particular el sistema Malili, ofrecen una excelente oportunidad para comparar
patrones de diversificación en organismos que difieren en propiedades biológicas
fundamentales en el mismo entorno ambiental. Si bien se está preparando un
análisis conjunto en profundidad, los resultados publicados (véanse las citas
anteriores) ya sugieren una serie de puntos en común entre algunos o todos los
grupos. Es probable que aparezcan colonizaciones múltiples, por ejemplo, en todos
los grupos, excepto en los pejerreyes de aleta vela; Se sospecha que la hibridación
desempeña un papel en todos los grupos, y la diversificación trófica también se
considera el factor impulsor de todas las radiaciones adaptativas en los lagos. Las
diferencias entre los taxones podrían, por ejemplo, estar relacionadas con el papel
del color en la diversificación y se han sospechado por la edad de las bandadas del
lago (Rintelen et al., datos no publicados).
Centrándose en las radiaciones de moluscos en lagos antiguos, la hibridación y varios de
los otros fenómenos discutidos para las bandadas de especies de Sulawesi también se han
sugerido en otros casos, como, por ejemplo, el conjunto ribereño diverso de Brotiaespecies en
el río Kaek de Tailandia (Glaubrecht y Kohler).2004), que se asemeja a la radiación de un
antiguo lago, al menos en el patrón, si no en el entorno. La radiación más conocida en los
lagos antiguos es quizás la radiación de gasterópodos talasoide (es decir, similar a la marina)
largamente enigmática y llamada en el lago Tanganica de África Oriental, para la cual hay
datos morfológicos (Glaubrecht y Strong).2007; glaubrecht2008) y datos moleculares (p. ej.,
Wilson et al.2004) también han estado disponibles recientemente. Recientemente, los datos
respectivos también han comenzado a estar disponibles para las bandadas de especies de
moluscos en el lago Ohrid (Hauswald et al.2008; Según Schultheiß et al.2008). Finalmente,
debería ser posible descifrar hasta qué punto los diferentes sistemas modelo lacustres y sus
respectivos elementos faunísticos son distintivos con respecto a la influencia de factores
intrínsecos versus extrínsecos (paleohidrología, fragmentación del hábitat), como se describió
inicialmente para limnic Cerithioidea por Glaubrecht (1996). Los primeros intentos de evaluar
estos factores han sufrido con frecuencia de una falta de datos sobre la sistemática y la
morfología (es decir, la biología reproductiva) de los taxones involucrados.
9 Conservación
Los lagos de Sulawesi son un "punto de acceso" de la biodiversidad del sudeste asiático y, al mismo
tiempo, un tesoro científico para la investigación de la biología evolutiva. Desafortunadamente, el
medio ambiente de los lagos está amenazado por varios factores. En ambos sistemas lacustres, la
El crecimiento de las comunidades locales es un punto de preocupación general, ya que parece estar
inevitablemente unido a la contaminación y la destrucción directa del hábitat. Este peligro y también
el riesgo que plantean las continuas actividades de madereros ilegales que amenazan con dañar los
hábitats lacustres por los efectos de la erosión es más grave en los lagos Malili, cuyas orillas han
estado menos densamente pobladas y accesibles durante mucho tiempo que el lago Poso. Si bien
todos estos problemas son notoriamente difíciles de abordar, al menos se deben hacer esfuerzos
para aumentar la conciencia de la comunidad sobre los problemas, que también tienen el potencial
de amenazar el futuro de la población local.
Los riesgos más específicos para los ecosistemas lacustres se derivan
de las actividades de la empresa minera de níquel PT INCO en los lagos
Malili, que, además de su papel en la apertura del área, ejercen un
impacto directo en el entorno sensible de los lagos. Si bien esta empresa
ha realizado esfuerzos apreciables para preservar la calidad del agua en
los lagos, se presta menos atención a la importancia de proteger el medio
ambiente de los lagos y, en particular, los ríos que los conectan y drenan.
La construcción recientemente finalizada de una tercera represa
hidroeléctrica en el río Larona es solo un ejemplo. También se ha
construido una presa en el río Poso, justo encima de los rápidos de
Sulewana, que son un punto de acceso de especies endémicas adaptadas
al agua que fluye rápidamente. En ambos casos, quedan por evaluar los
efectos sobre las especies endémicas de estos ríos.
Esta enumeración de riesgos reales y potenciales para la biota del lago indica que su
conservación debe tener una alta prioridad. Sin embargo, el riesgo de los comerciantes de mascotas
también puede tener efectos secundarios beneficiosos, ya que ha aumentado significativamente la
conciencia pública sobre la fauna única de los lagos en varios países.
10 Conclusiones y Perspectivas
Hemos demostrado que las bandadas de especies de gasterópodos en los antiguos

lagos de Sulawesi son de hechoadaptadoradiaciones probando esta suposición
empleando los cuatro criterios propuestos por Schluter (2000). La existencia de tres
radiaciones adaptativas separadas en los Lagos Fríos, por ejemplo, ofrece, en
combinación con la bandada del Lago Poso, una excelente oportunidad para el estudio.
en paraleloprocesos evolutivos como el origen de la especialización. La implicación
indicada de la coevolución a un nivel basal en este sistema es única entre las radiaciones
en los lagos antiguos. Creemos que, más allá de la singular posibilidad de estudiar la
coevolución en el contexto de la radiación, la relativa simplicidad del sistema de Sulawesi
favorecerá especialmente las pruebas de especiación ecológica comparando la varianza
de los rasgos en diferentes condiciones naturales. Se espera que el trabajo iniciado
recientemente con marcadores nucleares altamente variables (ITS y AFLP) arroje un alto
tabla 1Los antiguos lagos de Sulawesi

Lago Área (km2) máx. profundidad (m) Transparencia
(disco de Secchi), m
Semana 323.2 450 11

Cinco 164.0 590 20
mahalona 24.4 73 20
Towuti 561.1 203 22
Lontoa 1.6 3 <3
en la masa 2.2 4 <3
Basado en datos de Abendanon (1915), Giesen et al. (1991), Giesen (1994),
Haffner et al. (2001)
filogenia resuelta a nivel de población y especie, y debería permitir, junto con datos ecológicos
cuantitativos, una elaboración de nuestras hipótesis sobre la especiación ecológica sensu
Schluter (2004).2000) en los caracoles de Sulawesi. Los patrones contradictorios se
encontraron particularmente en la especialización trófica entilomelaniacomo se describió
anteriormente, sin duda se advierte contra los modelos explicativos simples para la evolución
de la diversidad en las radiaciones de los lagos de Sulawesi. La supuesta importancia de la
hibridación introgresiva en el sistema será otro foco de investigación. En este sentido,
estamos particularmente interesados en cómo contribuye a la especiación y cómo se
mantienen los límites de las especies a pesar de la hibridación, y si nuestros datos se ajustan a
la hipótesis del singameón de la radiación adaptativa de Seehausen (2004) que, sin embargo,
se basa predominantemente en modos de especiación no alopátricos.
Los resultados disponibles de las bandadas de especies de Sulawesi ahora también

permiten comparaciones significativas con las radiaciones de otros organismos en los lagos o
con las radiaciones de moluscos en todo el mundo. Desde una perspectiva aún más general,
los patrones de diversificación encontrados en las bandadas de especies detilomelaniaen los
lagos de Sulawesi son comparables en muchos aspectos, que van desde la diversidad de
especies hasta la variación de la morfología trófica, a las de otras radiaciones adaptativas bien
estudiadasAnolislagartos, y por lo tanto pueden ser considerados como verdaderos "caracoles
darwinianos".
Recuadro 1 Los antiguos lagos de Sulawesi: hidrología, geología y

limnología
Mientras que la Semana del Lago (Fig.2; Mesa1) es un lago profundo y solitario, el sistema
Frío situado c. 80 km al suroeste del lago Poso comprende cinco lagos que comparten un
drenaje común (Fig.3; Mesa1). Los tres lagos más grandes de ese sistema están directamente
conectados: el lago Matano desemboca en el lago Mahalona a través del río Petea, y el lago
Mahalona, a su vez, desemboca en el lago Towuti a través del río Tominanga. El lago Towuti
es drenado por el río Larona hacia el golfo de Bone
(continuado)
(Mira Hueso). Dos lagos satélite más pequeños, el lago Lontoa (también conocido como
Wawontoa) y el lago Masapi, están mucho menos conectados directamente al sistema
(ver Fig. 1).3).
El lago Poso y el lago Matano son de origen tectónico, lo que explica su
extraordinaria profundidad. Deben su origen a la ubicación de Sulawesi en el
centro de quizás la región geológica más compleja del mundo, donde convergen
las placas asiática y australiana. 1997). El lago Matano está situado en una falla de
rumbo, la falla de Matano, que se formó en el proceso final de yuxtaposición del
sur, sureste y este de Sulawesi desde el Plioceno (hace 4 millones de años) hasta
la actualidad (Wilson y Moss). 1999). La edad del lago Matano se ha estimado
entre 1 y 2 millones de años (G. Hope, comunicación personal), mientras que
faltan estimaciones para los otros lagos. Los principales lagos antiguos de
Sulawesi son oligotróficos, con un contenido orgánico y de nutrientes muy bajo y
una alta transparencia de hasta 22 m en el lago Towuti (Giesen et al.1991; giesen
1994; Según Haffner et al.2001). Se ha especulado que el bajo contenido de
nutrientes podría impulsar la especiación en Cold Lakes (Haffner et al.2001).
Los lagos ofrecen una amplia gama de hábitats que van desde fondos blandos con arena
y lodo hasta escarpados desniveles rocosos (Fig.4). Por lo general, una zona de plataforma
poco profunda (2–5 m; Figs.4c) es seguido por una pendiente más empinada con una
profundidad que aumenta rápidamente. Con frecuencia, los sustratos duros dominan en la
costa (0–2 m), con sustrato blando en aguas más profundas. La heterogeneidad del hábitat es
alta en todos los lagos (ver Figs.5para un mapeo detallado de los hábitats en los lagos Malili),
existen diferencias generales entre los lagos, por ejemplo, en la cantidad de sustrato duro
disponible en aguas profundas (>10 m), que falta en gran medida en el lago Mahalona y el
lago Towuti. No hay datos de todo el lago disponibles para el lago Poso, pero las
observaciones de campo de numerosas estaciones de muestreo indican una estructura de
hábitat igualmente variada como en los lagos de Malili.
Las extensas playas de arena son características de grandes áreas del lago
Poso, mientras que los lagos Malili carecen casi por completo. En los ríos que
conectan y drenan ambos sistemas lacustres, las corrientes de fuerza variable
forman un factor adicional que determina el ambiente límnico (Fig. 1).4b, d).
Expresiones de gratitudAgradecemos a Ristiyanti Marwoto (Museo Zoológico de Bogor) quien fue de gran
ayuda en la preparación del trabajo de campo en Indonesia ya A. Munandar quien brindó asistencia en el
campo. Agradecemos a LIPI por los permisos para realizar investigaciones en Indonesia. Estamos muy en
deuda con INCO por su invaluable apoyo logístico en los lagos durante nuestras numerosas visitas. Claudia
Dames, Bettina Gregor, Tanja Miethe, Jutta Simonis (Museo f€ur Naturalist Berlin), Janice Jang (Instituto de
Tecnología de Massachusetts) y Daniela Franz (Universidad Técnica).€en Dresde) fueron de gran ayuda en la
recopilación de datos genéticos y morfológicos de ambos sistemas lacustres antiguos. Este trabajo fue
financiado por las becas de investigación GL 297/1 y GL 297/7 otorgadas a MG por la Deutsche
Forschungsgemeinschaft.
Apéndice 1.Especies detilomelaniaDescrito de los antiguos lagos de Sulawesi y

estimaciones de diversidad de especies para los lagos y toda la isla (basado en Rintelen y
Glaubrecht).2003; Rintelen y Glaubrecht2008; Según Rintelen et al.2007a; datos no
publicados)
Región/Taxón (*=no endémico) Cuando. de especies
Célebes norte =44 + c. 32 sin especificar

Sistema de lago frío norte =28
cinco lagos norte =7 (6 endémicas)
T. gemmiferaSarasin y Sarasin1897
T. matannensisSegún Rintelen et al.2007a
molestoSarasin y Sarasin1897
* T.palicolarumSarasin y Sarasin1897
T. patriarchalisSarasin y Sarasin1897
T. turriformisSegún Rintelen et al.2007a
T. zeamaisSarasin y Sarasin1897
lago mahalona norte =9 (4 endémicas)
t confundeSegún Rintelen et al.2007a
T.hanneloraeRintelen y Glaubrecht2008
T. discretoSegún Rintelen et al.2007a
* T. insulaesacraeSarasin y Sarasin1897
T. kruimeliRintelen y Glaubrecht2003
* T. mahalonensis Kruimel1913
* T. marwotoaeSegún Rintelen et al.2007a
* T.palicolarumSarasin y Sarasin1897
* T. woltereckiSegún Rintelen et al.
2007a río tominanga norte =4 (1 endémica)
* T. tominangensisKruimel1913
* T. mahalonensisKruimel1913
* T. towuticaKruimel1913
T.wesseliSegún Rintelen et al.2007a
Lago Towuti norte =10 (6 endémicas)
T. anfideritaSegún Rintelen et al.2007a
T. bakaraRintelen y Glaubrecht2003
* T. insulaesacraeSarasin y Sarasin1897
T.cristinaeSegún Rintelen et al.2007a
T. lalemaeKruimel1913
* T. marwotoaeSegún Rintelen et al.2007a
T. sarasinorumKruimel1913
T. towutensis sarraceno y sarraceno1897
* T. towuticaKruimel1913
* T. woltereckiSegún Rintelen et al.2007a
Lago Lontoa norte =2 (1 endémica)
t atrajoKruimel1913
* T. tominangensisKruimel1913
Lago Masapi norte =1 (endémica)
T.masapensisKruimel1913
Río Larona norte =2 (endémico)
T.baskastiRintelen y Glaubrecht2008
T. cinnabartfeldRintelen y Glaubrecht2008
(continuado)
Región/Taxón (*=no endémico) Cuando. de especies
Lago Poso norte =7 + c. 18 sin especificar

Lago Poso norte =4 + c. 10 sin especificar
carboSarasin y Sarasin1897
T. centauroSarasin y Sarasin1898
t haySarasin y Sarasin1898
T. toradjarumSarasin y Sarasin1897
bien rio norte =3 + c. 8 sin especificar
T. connectensSarasin y Sarasin1898
T. neritiformisSarasin y Sarasin1897
T porcelanaSarasin y Sarasin1897 ríos
norte =9 + c. 14 sin especificar
divisióntilomelaniaespecies (no enumeradas aquí en detalle)
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Especiación y radiación en un río: evaluación de la
diferenciación morfológica y genética en una
bandada de especies de gasterópodos vivíparos
(Cerithioidea: Pachychilidae).
Frank Kohler, Somsak Panha y Matthias Glaubrecht
AbstractoEl río Kaek en el centro de Tailandia es único en albergar un conjunto de

especies diversas de gasterópodos vivíparos del géneroBrotia.Un tramo de este río de
menos de 100 km de longitud está habitado por siete especies, en su mayoría
endémicas, que se diferencian esencialmente por la morfología de su caparazón.
Anteriormente, se ha sugerido que esta bandada de especies cumple con algunos
requisitos básicos de una radiación (monofilia y correlación fenotipo-hábitat). Sin
embargo, el presente estudio ha demostrado que no existe una correlación estricta
entre la morfología de la rádula y la concha y la utilización de sustratos, como roca o
arena, lo que refuta la hipótesis de que la especiación ecológica puede haber jugado un
papel importante. Los análisis filogenéticos basados en mtDNA muestran que los
haplotipos se agrupan en clados específicos de drenaje en lugar de según la taxonomía.
También hay fuertes indicios de que se ha producido una hibridación introgresiva, que
puede haber resultado del contacto secundario de especies previamente aisladas debido
a la dispersión o capturas fluviales durante el Cenozoico. Se supone que la alta
diversidad de especies en el río Kaek resulta de dos fenómenos que se interrelacionan.
Primero, la fauna del río Kaek puede haberse originado a partir de múltiples invasiones
de especies de diferentes áreas de origen, mientras que los rastros de estos eventos
pueden haber sido oscurecidos por la introgresión de haplotipos específicos del río
Kaek. En segundo lugar, las cascadas del río Kaek parecen afectar la direccionalidad y la
cantidad de flujo de genes entre las poblaciones locales dentro del río y varios afluentes
más pequeños. Junto con los regímenes hídricos que cambian temporalmente,
F. Kohler (*)
Museo f€clock Cliente Natural, Discapacidad Str. 43, 10115 Berlín, Alemania
Museo Australiano, 6 College St, Sydney, NSW 2010, Australia Correo
electrónico: frank.koehler@austmus.gov.au
S. Panha
Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chulalongkorn, Bangkok 10330, Tailandia M.
Glaubrecht
Museo f€clock Cliente Natural, Discapacidad Str. 43, 10115 Berlín, Alemania

DOI 10.1007/978-3-642-12425-9_24, # Springer-Publishing Berlín Heidelberg 2010
514 F. Köhler et al.
1 Introducción
La especiación en el contexto de las radiaciones (adaptativas) se considera un proceso clave en

la creación de diversidad biológica. Al igual que las islas oceánicas, se ha descubierto que los
lagos proporcionan sistemas modelo ideales para dilucidar los mecanismos subyacentes de
este proceso evolutivo. Sin embargo, las bandadas de especies no solo lacustres sino también
ribereñas pueden proporcionar conocimientos cruciales en el estudio de la especiación y la
radiación adaptativa (consulte la revisión de, por ejemplo, Glaubrecht y Köhler).2004). Entre los
invertebrados, se ha descubierto que los gasterópodos límnicos proporcionan los organismos
modelo más adecuados para estos estudios (ver, por ejemplo, Glaubrecht1996, 1999 .1999,
1999 .2006). Además de otras radiaciones de gasterópodos de agua dulce, como en los lagos
de África oriental (para una revisión y literatura reciente, consulte Glaubrecht2008) o las islas
indonesias de Sulawesi (Glaubrecht y Rintelen).2008; véase también, en este volumen, Rintelen
et al. 2010), una bandada de especies únicas y endémicas de gasterópodos paquiquílidos
estrechamente relacionados se encuentra en el sistema del río Kaek en el centro de Tailandia.
Aquí, se describieron originalmente un total de diez taxones a nivel de especie (cinco especies
y cinco subespecies) de un tramo de río restringido de menos de 100 km de longitud,
principalmente con énfasis en el caparazón (Brandt1968, 1999 . 1974). Dos de estas especies,
Brotia binodosayB. paludiformis,previamente informado por Solem (1966) de la cascada
Thung Salaeng. Posteriormente, Brandt (1974) revisó sistemáticamente las especies
tailandesas, pero no reconoció que presumiblemente estaba tratando con una radiación de
especies estrechamente relacionadas. Afilió la especie del río Kaek con uno de dos géneros
distintos,Brotiay Paracrostoma.Aunque este tratamiento traslucía los altos niveles de
distinción morfológica en las conchas de diferentes especies, al mismo tiempo oscurecía la
existencia de una bandada presumiblemente monofilética de especies morfológicamente bien
diferenciadas durante décadas. Davis (Davis)mil novecientos ochenta y dos) notó por primera
vez la singularidad del conjunto del río Kaek al afirmar que “cuandoBrotiase encuentra en los
ríos suele haber una especie, dos como mucho. La excepción a esto es la pequeña radiación
en el río Koek Noi (= río Kaek) (centro norte de Tailandia) del drenaje Nan-Chao Phraya”.
Nuestro estudio preliminar de la diferenciación mitocondrial y morfológica insinuó una radiación
potencialmente adaptativa en el ríoBrotiaespecies del río Kaek (Glaubrecht y Kohler).2004), muy
similar a la encontrada en la lacustretilomelaniaen Sulawesi. En un primer paso, por lo tanto,
revisamos la taxonomía de las especies del río Kaek en base a exámenes de tipos y material
conservado en alcohol recién recolectado. Confirmando la existencia de una fauna de paquiquílidos
notablemente diversa en el río Kaek, reconocimos al menos siete especies distintas y endémicas.
Brotiaespecies en el río (en comparación con los diez taxones originales del grupo de especies).
Hasta el momento, en ningún otro río se ha encontrado una diversidad comparable de especies de
paquiquílidos en todo el mundo. Los análisis moleculares que utilizan secuencias mitocondriales
sugirieron monofilia de la bandada de especies del río Kaek, pero también revelaron un desajuste
rampante del patrón de ramificación de la filogenia basada en ADNmt con la delimitación de
especies por la morfología de su caparazón. Los análisis morfológicos y las observaciones ecológicas
sugirieron que la distribución de morfos de conchas y radulares dentro del río puede estar
correlacionada con el uso de ciertos sustratos por parte de los animales (es decir, sustratos blandos).
Especiación y radiación en un río 515
versus los habitantes de sustrato duro exhibieron morfologías radulares y de caparazón

divergentes). Con base en estos hechos (monofilia, endemismo local, desajuste entre el gen
mitocondrial y el árbol de especies, correlación entre fenotipos y ambiente), Glaubrecht y
Köhler (2004) postuló que la bandada de especies del río Kaek se originó a través de la
radiación adaptativa posiblemente provocada por la especialización trófica a lo largo de las
trayectorias evolutivas descritas para el confamiliartilomelania (Glaubrecht y Rintelen2008;
Según Rintelen et al. 2010).
En contraste con la lacustretilomelania,que irradiaba in situ en los antiguos lagos de
Sulawesi, la bandada de especies del río Kaek aparentemente ha evolucionado en un entorno
fluvial. Las radiaciones fluviales rara vez se conocen y estudian, con solo unos pocos ejemplos
conocidos de gasterópodos, como Asian Triculinae (Davis).1979, 1999 .1981), los Stenothyridae
en el Mekong (Hoagland y Davis).1979), caracoles hidrobioides de Tasmania y el este de
Victoria (Ponder et al.1993; Ponder et al.1994), y caracoles bitinidos en África Occidental
(Brown1988). En todos estos casos, sin embargo, las causas exactas de la radiación seguían
siendo hipotéticas.
Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue comparar casos de
radiaciones intralacustres e intrariverinas en este grupo de gasterópodos
paquiquílidos estrechamente relacionados. Nuestro objetivo ha sido
desentrañar los orígenes de la bandada de especies del río Kaek y
reconstruir los patrones espaciales y temporales de su evolución,
utilizando una combinación de estudios moleculares y morfológicos.
También nos interesó identificar aquellos factores que han estado
impulsando la diferenciación morfológica y genética de estas especies. Se
estudiaron los patrones de diferenciación morfológica y genética dentro y
entre las especies del río Kaek con énfasis en las posibles correlaciones
entre los rasgos morfológicos y los factores ambientales. Recientemente,
2000; Streelman y Danley 2003; Gavrilets y Losos2009). Para evaluar si
estamos tratando con una radiación verdaderamente adaptativa
impulsada por la especiación ecológica en el caso de los paquiquílidos del
río Kaek, abordamos cuatro de los criterios principales, a saber. monofilia,
especiación rápida, correlación fenotipo-ambiente y utilidad del rasgo
como lo sugiere Schluter (2000).
2 El marco sistemático: Filogenia de los Pachychilidae del

sudeste asiático
Pachychilidae Troschel, 1857 es un grupo de gasterópodos de agua dulce reconocido

recientemente como una radiación de agua dulce independiente dentro de la superfamilia de
gasterópodos diversa y predominantemente marina Cerithioidea Ferussac, 1819 (Glaubrecht).
1996; Según Lydeard et al.2002; Kohler et al.2004). Nuevos estudios de
pachychilids proporcionó información sobre la especiación en el contexto de la radiación

adaptativa (Glaubrecht y Köhler).2004; Según Rintelen et al.2004, 1999 .2007; Glaubrecht
y Rintelen 2008), así como fenómenos evolutivos, como el desarrollo del cuidado
parental en estos caracoles vivíparos (Köhler et al.2004). Dentro de los Pachychilidae, la
oviparidad se considera un rasgo plesiomórfico (Glaubrecht).1996, 1999 .1999, 1999 .
2006; Kohler et al. 2004), y se encuentra en el africano (potadomaSwainson, 1840),
malgache (“MelanatríaBowdich, 1822” [nombre reemplazado porMadagascarKöhler y
Glaubrecht, 2010]), y Neotropical (paquichiloI. y H. Lea, 1850,dorysa Swainson, 1840)
taxones (Binder1959; Grossmann1967; Tormenta€uhlner1969; Marrón 1994; simone
2001). Por el contrario, en el sudeste asiático, donde esta familia de gasterópodos es
particularmente diversa, los paquiquílidos son (ovo) vivíparos en todas partes (Brandt
1974; Kohler y Glaubrecht2001, 1999 .2005, 1999 .2006, 1999 .2007; Glaubrecht y
Rintelen2003; Rintelen y Glaubrecht2003, 1999 .2005; Kohler et al.2004; ; Según Rintelen
et al.2007) (Higo.1). Sin embargo, en conflicto con supuestos más tradicionales (por
ejemplo, Morrison 1954; Brandt1968, 1999 .1974; glaubrecht1996), los taxones de
crianza en el sur y sureste de Asia no forman un grupo monofilético. En cambio, se han
identificado tres clados distintos mediante análisis de datos morfológicos y moleculares
(Köhler y Glaubrecht).2001; Kohler et al.2004; Kohler y Dames 2010). En cuanto a su
morfología, estos clados se caracterizan principalmente por su anatomía reproductiva:
Dentro del géneroJagoraKohler y Glaubrecht2003(clado 1), las hembras retienen huevos
ricos en yema en la cavidad del manto de donde se liberan las crías. La yema entregada
con la cápsula de huevo representa la única forma de nutrición provista por la madre
(Köhler y Glaubrecht).2003). A diferencia de,tilomelaniaF. & P. Sarasin, 1898;
pseudopotamisMartens, 1894 (clado 2) son eu-vivíparos y poseen una bolsa de cría
formada a partir del oviducto paleal. Los embriones retenidos se nutren durante un
tiempo considerable de la albúmina materna secretada por la madre (Glaubrecht y
Rintelen).2003; Según Rintelen et al.2007). Finalmente, los representantes del tercer
clado poseen una bolsa de cría subhemocoélica. En estas especies, los nutrientes son
proporcionados exclusivamente por la cápsula del huevo; cualquier tipo de tejido
secretor está ausente de la bolsa de incubación (Köhler y Glaubrecht).2001).
Higo. 1Árbol principal que muestra las

relaciones de los géneros pachychilid
como se deduce de los análisis de
secuencias parciales 16S realizadas por
Köhler et al.
(2004). Los taxones de crianza son
sombreado,los taxones ovíparos no
están sombreados. La explicación
más parsimoniosa es que las tres
estrategias inquietantes seguidas
por
diferentes clados pachychilid han
evolucionado de forma independiente,
mientras que la oviparidad representa
un estado plesiomórfico dentro de la
familia (nótese que
Melanatríaha sido reemplazada
recientemente porMadagascar)
Los tres clados asiáticos de criadores están espacialmente bien separados:Jagoraes

endémica de Filipinas,tilomelaniaypseudopotamisestán restringidas a Sulawesi y dos
islas del Estrecho de Torres (norte de Australia), respectivamente, y las incubadoras
subhemocoélicas muestran una distribución extendida de Sundaland desde India hasta
el sur de China, incluida la península de Malaca, Sumatra, Java y Borneo. Este último
clado ha sido referido como el “clado del continente asiático” (Köhler et al.2004; Kohler y
Glaubrecht2007; Kohler y damas2009). En comparación con los otros dos clados
asiáticos, los reproductores subhemocoélicos muestran una distribución mucho más
amplia, una mayor variación con respecto a su morfología y, en total, una mayor
diversidad de especies. Se sugirieron varias clasificaciones genéricas, en parte
conflictivas, para los miembros de este grupo heterogéneo. Se delimitaron entre dos y
cuatro géneros (sulcospiraTroschel, 1858,BrotiaH. Adams, 1866;paracrostoma Cosmann,
1900,adamietamarca,1974) de varios autores del siglo XX, como Thiele (1928, 1999 .1929
), Morrison (1954), Benthem sobresaliendo (1956), y Brandt (1974). En general, estos
géneros se establecieron sobre la base de ciertas características de la concha, los
opérculos y/o el radular, caracteres que posteriormente demostraron no ser apropiados
en este nivel taxonómico debido a la homoplasia (Köhler y Glaubrecht).2001, 1999 . 2002
, 1999 .2005, 1999 .2006, 1999 .2007). Por ejemplo, estudios recientes han demostrado
que la forma y la escultura de la concha a menudo reflejan una adaptación ecológica en
lugar de relaciones filogenéticas, y se han descubierto casos de paralelismo notable en
estos paquiquílidos (Köhler et al.2008).
Con base en un muestreo exhaustivo de taxones que cubre todo el rango del
grupo desde el sur de la India en el oeste hasta el sur de China en el este y Borneo
en el sureste, Köhler y Dames (2009) abordaron la cuestión de la monofilia de los
géneros nominales de Pachychilidae continentales y analizaron secuencias
parciales de los genes mitocondriales COI y 16S, así como caracteres morfológicos
clave, en particular la anatomía genital femenina y la morfología del caparazón
embrionario. Sugirieron el reconocimiento de tres géneros (Brotia, Paracrostoma,
Sulcospira) entre los reproductores subhemocoélicos del sudeste asiático del
sudeste asiático continental (Fig.2). Dentro sulcospira,que representa la rama más
basal del clado de criadores subhemocoélicos, se han reconocido tres subclados
que revelan una gran estructuración geográfica (con linajes cada uno en Borneo-SE
asiático continental, el sur de China-Vietnam y Java-Borneo). TodosulcospiraSin
embargo, las especies exhiben morfologías brutas ampliamente congruentes,
siendo esta la razón para abstenerse de nombrar formalmente estos clados.
Además, la filogenia molecular de los Pachychilidae del sudeste asiático
proporcionó evidencia de la existencia de un clado monofilético de Brotiaespecies
endémicas de los sistemas fluviales de los ríos Kaek y Kwae Noi (drenaje Nan), los
ríos Loei y Pong (drenaje Mekong) y el río Pa Sak (drenaje Chao Praya).
Los análisis previos de las tasas de diferenciación mitocondrial y morfológica entre
los Pachychilidae asiáticos revelaron dos bandadas de especies independientes
caracterizadas por (1) monofilia, (2) relaciones cercanas entre sus miembros
constituyentes y (3) grados considerables de diferenciación morfológica interespecífica
con respecto a la concha. y rádula, y (4) desajuste rampante de las filogenias del mtDNA
y la delimitación de especies basada en la morfología. Ambas especies rebaños,
Higo. 2Relaciones filogenéticas dentro del clado continental del sudeste asiático de criadores
(géneros) subhemocoélicos.Brotia, Paracrostoma, Sulcospira)como se infiere mediante análisis de
secuencias COI y 16S concatenadas (Köhler y Dames).2009). El clado de Tailandia CentralBrotiaes
códigos de área sombreados:HGK, Hong Kong; IND, India; JAV, Java; KAL, Kalimantán; LAO, Laos;
MYA, Birmania; NEP, Nepal; SAB, Sabah; SUMA, Sumatra; SWK, Sarawak; THA, Tailandia; VN, Vietnam
tilomelaniaen los lagos centrales de Sulawesi yBrotiaen el río Kaek, en el centro de Tailandia,
se ha postulado que son el resultado de radiaciones adaptativas. El caso modelo detilomelania
en Sulawesi se ha estudiado ampliamente durante un período de casi 10 años, y el trabajo en
curso ha demostrado que estos gasterópodos de agua dulce endémicos se han propagado
ampliamente en los dos antiguos sistemas de lagos de la isla (Rintelen y Glaubrecht).1999,
1999 .2005; Según Rintelen et al.2004, 1999 .2007; Glaubrecht y Rintelen2008; véase también,
en este volumen, Rintelen et al.2010).
3 El río Kaek: entornos geográficos y ambientales
El conocimiento de la historia geológica y las condiciones ambientales actuales en el drenaje del río
Kaek es relevante para comprender el origen de la bandada de especies y la importancia de los
factores abióticos que pueden haber influido en su evolución. Los datos geológicos e hidrológicos
presentados en este documento se recopilaron de una variedad de fuentes, como mapas
topográficos e instalaciones en línea. Tenga en cuenta que debido a la ausencia de una
transliteración generalmente vinculante del tailandés al inglés, los nombres de localidades, tal como
se escriben aquí, pueden diferir de las versiones utilizadas en otros lugares. Con respecto a las
localidades dentro del área del río Kaek, nos referimos preferentemente a los nombres escritos por
primera vez por Brandt (1968, 1999 .1974) en aras de la continuidad mientras se hace referencia a la
ortografía tal como se usa en la edición actual del Times Atlas of the World.
El río Kaek (Maenam Kaek en tailandés, también conocido como Klong Talo en sus
tramos inferiores; Brandt1968) desemboca en el río Nan cerca de la ciudad de
Phitsanulok. El Maenam Nan es un afluente de primer orden del Chao Praya, que
serpentea a través de la llanura central de Tailandia y desemboca en la Bahía de
Bangkok. La cuenca Chao Praya se puede dividir en dos partes. La parte inferior es plana
en altitudes bajas y se extiende hacia el norte hasta Ang Thong (ca. 15).-NORTE). Esta
cuenca está llena de depósitos cuaternarios y fue inundada por última vez por el Mar de
China Meridional hace unos 9.000 a 10.000 años, cuando los niveles del mar eran -4 m
más altos que en la actualidad. La llanura superior se extiende hacia el norte por los
valles de los ríos Nan y Ping. Esta planicie se encuentra en elevaciones de más de 20 m
sobre el nivel del mar y no ha estado sujeta a inundaciones de marea significativas en el
pasado más reciente. Los tramos superiores de la cuenca se encuentran en
- 19-N, en las provincias de Mae Hong Son, Chiang Rai y Chiang Mai. El río
Kaek fluye en dirección este-oeste desde la cuenca al oeste de
Phetchabun hacia Phitsanulok. Se encuentra dentro del área de transición
entre la zona de sutura de Nan-Uttaradit, que está delimitada por el valle
del río Nan entre Nan y Saraburi, y el cinturón plegado de Loei-
Phetchabun (Cooper et al.1989). El Parque Nacional Thung Salaeng Luang
está ubicado en los límites occidentales del cinturón plegado Loei-
Phetachbun, mientras que su curso inferior
(Klong Talo) entre Wang Thong y Phitsanulok alcanza las áreas más bajas y planas dentro del
valle de Nan (Chonglakmani y Helmcke).2001). El curso superior a medio del río Kaek ha
cortado un cañón de pendiente pronunciada en un área formada esencialmente por piedra
caliza del Pérmico, así como areniscas, pizarras y capas duras del Jurásico a lo largo de las
cordilleras de Thung Salaeng Luang (DNP).2009) entre altitudes de 300 y 1.028 m.
Durante la mayor parte de su curso de 150 km de largo al este de Wang Tong, el río
Kaek es una corriente rápida. Su agua es clara y relativamente fría. La zona de aguas
arriba se caracteriza por un descenso moderado y suelos de grava y piedras. Las aguas
de la mitad de la corriente fluyen rápidamente sobre un fondo rocoso con grandes
cantos rodados donde pasan una serie de rápidos y cascadas en su camino hacia el
oeste. Entre los tramos rocosos existen también tramos con un declive más moderado
en los que un régimen de caudales reducido provoca el depósito de grandes cantidades
de arena y lodo que forman aquí el sustrato principal. Sin embargo, en general, los
sustratos blandos son raros en el curso superior y medio y pueden proporcionar solo
condiciones inestables dependiendo del régimen hídrico estacionalmente variable. Por
otro lado, en el curso inferior entre Wang Tong y Phitsanulok, solo se encuentran
sustratos arenosos a fangosos. Los bosques de pinos y bambúes, así como los bosques
caducifolios de especies mixtas, dominan el área que rodea al río, mientras que los
pastizales, los matorrales de las tierras bajas y los bosques tropicales siempre verdes de
hoja ancha cubren áreas más pequeñas. El impacto humano es bastante limitado
(principalmente en las zonas de baño, cerca de los asentamientos), pero aumenta en la
región río abajo hacia Phitsanulok con sus tierras de cultivo ampliadas. Aunque el río
Kaek se abastece continuamente de agua, la cantidad de agua cambia según la estación.
Durante y poco después de la temporada de lluvias, desde alrededor de junio hasta
octubre, fluye significativamente más agua por el río que en la estación seca entre
noviembre y abril. Durante la temporada de lluvias, el Kaek es un arroyo de agua salvaje,
mientras que durante la estación seca, la corriente es moderada y algunos de los
afluentes y cabeceras más pequeños incluso se secan por completo.1995). Como predice
el concepto de continuo del río (Vannote et al.1980), los arroyos y su composición y
diversidad orgánica se caracterizan por un flujo continuo, con tramos distintos que no
están delimitados por fronteras fijas. Sin embargo, en términos de la clasificación de
corrientes geomórficas o fisiográficas ampliamente utilizada (Allan1995; Hauer y
Lamberti1996; Giller y Malmqvist1998), quienes interpretan el río Kaek aquí como un río
mediano a grande de tercer orden (siendo los ríos Chao Praya y Nan ríos principales). De
acuerdo con el esquema de clasificación de ríos bióticos más útil desarrollado por Illies (
1961), clasificamos el río Kaek en este documento como una sección de corriente media
o ritral con sus componentes orgánicos que representan el ritrón. El rhitral se
caracteriza típicamente por temperaturas bastante frías, concentraciones de oxígeno
disuelto de altas a moderadas (a menudo variables al menos estacionalmente), con agua
que varía de clara a turbia y oligotrófica a mesotrófica, sustratos medios (semiestables)
bastante variables y gradiente de corrientes más fuertes. El Kaek está ubicado en la
Región Biogeográfica Chao Praya2002); para detalles de zoogeografía ver Rainboth (
1996).
4 Captura fluvial: paleogeografía y paleohidrología
En el Cenozoico, los ríos del sudeste asiático se vieron afectados por dos procesos geológicos
importantes: las fluctuaciones del nivel del mar y los realineamientos causados por cambios
tectónicos o erosión. Las fluctuaciones del nivel del mar han cambiado constantemente las costas
debido a inundaciones o a la superficie de vastas áreas. Por ejemplo, los niveles del mar eran
aparentemente más altos que en la actualidad durante el Mioceno (+150–220 m, a los 24–13 millones
de años) y el Plioceno (+100 m, a los 5,5–4,5 millones de años) (Woodruff).2003), mientras que han
sido considerablemente menores durante el Pleistoceno (hasta 120 m por debajo del nivel actual;
Martinson et al.1987). Los niveles del mar de +100 mo más habrían resultado en una extensión hacia
el norte del Golfo de Siam y la inundación de gran parte de la cuenca del río Chao Praya. Sin
embargo, incluso entonces, el río Kaek en su configuración actual no se habría sumergido, ya que se
encuentra a altitudes aún mayores. Sin embargo, es posible que haya perdido su conexión con otras
partes del sistema de drenaje de Chao Praya.
Los cambios en la configuración del drenaje de los ríos en el centro de Tailandia
pueden haber sido más relevantes a este respecto. Gregorio (1925) señaló por primera
vez que, durante el Cenozoico, los principales sistemas fluviales del centro y sureste de
Asia sufrieron cambios dramáticos debido a procesos tectónicos, como el levantamiento
de áreas y flujos de lava. La historia de estos sistemas fluviales ha sido descrita con más
detalle por Hutchinson (1989) y arcoíris (1996). Según estas reconstrucciones, el Chao
Praya perdió su cabecera ante el creciente Mekong en el Pleistoceno medio y superior.
Hasta alrededor de 2 millones de años, los ríos Irrawaddy, Salween y Mekong se
drenaron en el Chao Praya, a menos que alrededor de 1,5 millones de años la actividad
volcánica separara a los ríos Irrawaddy y Salween de este sistema. Desde entonces, el
Mekong ha cambiado repetidamente el lecho del río hacia direcciones cada vez más
orientales. Después de que su corriente media se haya separado del Salween alrededor
de 2 millones de años, su curso siguió el curso actual del río Ping (drenaje de Chao
Praya) hasta alrededor de 1,5 millones de años. Las fallas del Cenozoico tardío desviaron
el Mekong más hacia el este a lo largo de su curso actual hacia Vientiane hasta que, más
tarde, a mediados del Pleistoceno (-1 millones de años), el Mekong volvió a desembocar
en el Chao Praya, esta vez a través del valle de los ríos Loei y Pa Sak. . . . . Eventualmente,
Si bien los detalles y el momento exacto de la historia geológica del drenaje del
Mekong no se comprenden completamente (Gupta2008), es claro que los cursos de los
ríos menores también fueron afectados por procesos tectónicos. Algunos de ellos
incluso invirtieron su dirección original de flujo debido a levantamientos que afectaron
sus corrientes superiores o medias, como el río Loei que una vez fue parte del proto-
Mekong que fluye hacia el sur pero que hoy fluye en dirección norte, o el río Mun Río
que una vez desaguaba en dirección oeste en el Chao Praya hasta que invirtió su curso
hacia el este debido al hundimiento de la meseta de Khorat durante el Pleistoceno
medio (Hutchinson). 1989). A menor escala, los detalles de la historia geológica del área
del río Kaek son difíciles de reconstruir. Las cabeceras del río Kaek que fluye hacia el
oeste, el río Pa Sak que fluye hacia el sur y el río Loei que fluye hacia el norte están en
estrecha conjunción, separados por cadenas montañosas de hasta 1.700 m de altura.
la Cordillera de Phang Hoei, que son de origen ígneo relativamente reciente (Cenozoico).
Antes del levantamiento de estas montañas aproximadamente durante el Plioceno,
probablemente había un solo río que fluía en dirección N-S a través de los lechos de los ríos
Loei y Pa Sak (Hutchinson).1989). Solo se puede especular sobre cómo eran los sistemas
fluviales antes de este período y si la región aguas arriba del río Kaek también estaba
conectada al drenaje del proto-Mekong en este momento. Más tarde, desde mediados del
Pleistoceno hasta hace 0,05 millones de años, el Mekong fluyó nuevamente a través de los
lechos de los ríos Loei y Pa Sak actuales y volvió a conectar sus faunas, una vez separadas. Es
probable que el río Kaek en sí no se haya visto afectado por estas reconfiguraciones más
recientes de los sistemas de drenaje, ya que su región aguas arriba probablemente ya se
encontraba en elevaciones más altas. Sin embargo, es claro que los fenómenos hidrológicos
como las capturas de ríos han sido efectivos en toda la zona en lo que respecta a la conexión y
separación de los sistemas de drenaje, lo que también debe haber influido en su biota como
sugieren Glaubrecht y Köhler (2004).
5 Diseño de muestreo y sitios de recolección
Para tener en cuenta la posible relevancia de los factores ecológicos,

generalmente recolectamos especímenes que ocurrieron en diferentes
sustratos (roca, madera, arena, lodo) por separado, y también
diferenciamos entre especímenes recolectados a diferentes profundidades
(a niveles de 0, 0.5, 1 ), 1,5 y 2 m de profundidad de agua). Para abordar
las relaciones a mayor escala y revelar los orígenes de la bandada de
especies del río Kaek, recolectamos Brotiamuestras en todos los sistemas
fluviales adyacentes del río Kaek, a saber. los drenajes del Kwae Noi, el
Loei, el Pa Sak y el Pong. La Cordillera de Luang Prabang está ubicada en
las extensiones del sur de las cordilleras Kwae Noi y Kaek, con crestas
montañosas que alcanzan elevaciones de 1035 m, 1356 m (en y cerca de
Khao Kho), 1746 m (Phu Hin Ronkla) y 1468 m ( un pie) (de S a N). Hacia el
noreste, estos rangos separan las áreas de captación de estos dos ríos del
drenaje adyacente del río Loei, que fluye hacia el norte hacia el Mekong.
Las cabeceras del río Pong, que fluye hacia el este a través del río Mun
hacia el Bajo Mekong,3).
Esta base material se complementó con colecciones de otras partes de Tailandia

y regiones vecinas de Laos en un intento de cubrir todos los principales sistemas
de drenaje de la región, es decir, el Salween (con su afluente de primer orden
Maenam Moei) en el oeste de Tailandia, el Chao Praya ( con sus dos afluentes
principales Nan y Ping) en el centro de Tailandia, y el Mekong (con su afluente Mun)
en el noroeste de Tailandia y Laos (Fig.4).
Sin embargo, el muestreo más extenso se realizó dentro del drenaje del río
Kaek. No todos los sectores del río Kaek fueron accesibles durante este estudio
debido a la accidentada topología o a las restricciones de acceso en Thung Salaeng.
18 ̊
W1 Loei
W2
W3
L1
W4
bosque noi L2 L3
W5
W6
W7
P1 Apestar
17 ̊
K13 K12
K1 K6-9
K10 S1 P4 P3
K2-4 K5 P2
Kaek
K11 P5
pa sak
S2-3
Yaya 10 kilómetros
dieciséis
100 ̊ 101 ̊ 102 ̊
Higo. 3Sitios de recolección en el centro-norte de Tailandia y su ubicación dentro de las

áreas de captación de los cinco ríos principales que drenan las montañas Phetchabun, al
este (Pong, afluente del Mun) y al sur (río Pa Sak, afluente del Chao Praya)
Higo. 4Mapa topográfico que

muestra la ubicación de los sitios
de recolección en Tailandia y Laos,
trabajo de campo en 2006–07.
marco en el centro delimita el área
representada en las Figs. 05.
puntos rojosmarcar los sitios
dondeBrotiase encontraron
especies,puntos blancosdonde no
Brotiase encontraron especies.
Respectivamente,Brotiaes
confinado a las regiones
montañosas del noroeste y oeste
de Tailandia, pero ausente de las
llanuras del centro, sur y este de
Tailandia
Parque Nacional o en propiedades privadas. La Carretera Nacional 12 de Phitsanulok a Lom

Sak corre paralela al segmento medio del río. A lo largo de este camino, hay varias áreas que
son de fácil acceso, en su mayoría cerca o en cascadas y rápidos que están señalizados como
atracciones turísticas y también son utilizados con fines recreativos por los turistas locales. El
material descrito por primera vez por Brandt (1968, 1999 .1974) se origina principalmente en
estos sitios. En sus descripciones, Brandt (1974) se refirió a las distancias por carretera de los
sitios de muestreo a lo largo de la autopista 12 desde Phitsanulok. Seguimos haciendo
referencia a estas distancias para garantizar la comparabilidad de nuestros datos y los suyos;
a cada uno de ellos se le asigna un número de referencia. Dado que el río Kaek fluye en
dirección oeste hacia Phitsanulok, a continuación se enumeran los sitios de muestreo en
orden aguas arriba (Fig. 1).5). Además de los sitios de muestreo mencionados por Brandt (
1968, 1999 .1974), nuestro trabajo cubre otros sitios a lo largo del curso del río, así como en
los afluentes permanentemente llenos de agua del río Kaek; algunos de los cuales se encontró
que no albergabanBrotiaespecies. Entre el río Nan cerca de Phitsanulok y Wang Tong, el río
Kaek fluye a través de una llanura sobre sustratos fangosos a arenosos. CuandoBrotiaespecies
fueron encontradas en este segmento inferior. Al este de Wang Thong, el área asciende
abruptamente hacia elevaciones más altas, lo que marca el final de la rápida región del medio
del río. El primer sitio de muestreo accesible son los rápidos de Sakunothayan en el km 33
(K1). Este lugar es seguido por un afluente más pequeño que fluye sobre rocas (km 37), donde
recolectamos muestras a una distancia de aproximadamente 8 km de la corriente principal del
río Kaek (K2). El tercer lugar es un área con rápidos rocosos sin nombre en el km 42 de la
carretera (K3), seguido de la cascada Kaeng Song.
Higo. 5Ubicación de los sitios de recolección en el río Kaek, trabajo de campo en 2006 ypuntos rojosmarca las
localidades en las queBrotiase encontraron muestras,puntos blancosmarcar las localidades en las que noBrotia se
encontró la especie
en el km 45 (K4), un pequeño afluente del norte con sustratos rocosos, el Huay Nam
Yang (K13), la cascada Poi en el km 60 (K5), otra zona con rápidos rocosos sin nombre en
el km 65 (K6), el Cascada de Aeng Gaw, situada en un pequeño afluente del norte en el
km 67 (K7) que atraviesa el pueblo de Yang (K12), las cascadas de Kaeng Sopha en el km
72 (K8) y los rápidos de Kaeng Horm en el km 73 (K9). ). ). Los rápidos de Thung Salaeng
en el km 76 (K10) es el último sitio de recolección a lo largo de la Carretera Nacional 12.
Desde aquí, el río Kaek fluye a través de las áreas protegidas e inaccesibles del Parque
Nacional Thung Salaeng. El siguiente y último sitio de muestreo es Sri Dit Waterfalls
(K11) a unos 40 km al SE de Thung Salaeng. Sitios que se encontró que no albergaban
BrotiaLa especie se encuentra en la parte inferior del río Kaek cerca de Wang Tong, un
afluente del sur cerca de 42 km, y el afluente Huay Chieng Nam al este de Thung
Salaeng. Este último arroyo es la localidad tipo deBrotia subgloriosa (Brandt 1974). Sin
embargo, la deforestación total y la degradación de toda el área obviamente han
afectado este río, que ahora es un arroyo fangoso de flujo lento que no es apto para
Brotia.
La configuración de los sitios de recolección difiere hasta cierto punto (Fig.6). Las rocas son
el sustrato predominante a lo largo de todo el río Kaek. En las cascadas dentro del curso
principal del río (en Kaeng Song, Poi, Kaeng Sopha), el agua corre sobre grandes escalones
con alturas que van de 1 a 4 m. En los rápidos, el agua corre rápidamente sobre un tramo más
amplio de rocas y cantos rodados. Allí, la profundidad del agua suele ser baja (menos de 0,5
m) y no hay parches de arena. Entre las cascadas y los rápidos también hay zonas más
tranquilas con corrientes moderadas y profundidades de hasta 2,5 m. Aquí se encuentran
sustratos arenosos y fangosos que cubren el fondo rocoso del cauce del río. Se encontraron
parches arenosos cerca de Sakunothayan a profundidades de 0 a 2 m y parches fangosos en
Kaeng Song y cerca del km 45 a profundidades de alrededor de 2 m. También se encontraron
áreas más pequeñas con arena entre campos de rocas más grandes en Thung Salaeng y
Kaeng Sopha en profundidades de alrededor de 0,5 a 1 m.
6 Patrones de variación de conchas entre y dentro de las especies

del río Kaek
En comparación con la mayoría de las regiones del sudeste asiático, el río Kaek alberga
una fauna de paquiquílidos excepcionalmente diversa con respecto a la composición de
especies, así como la variabilidad que se encuentra en las conchas de estas especies.
Brandt (1968, 1999 .1974) delimitó inicialmente diez grupos taxonómicos de especies, de
los cuales siete fueron posteriormente también reconocidos por Glaubrecht y Köhler (
2004), considerándose todas ellas como especies distintas, discriminadas esencialmente
por su forma de concha y escultura. En consecuencia, entre las especies del río Kaek, las
conchas varían de alargadas a esculpidas. (B. binodosa)vía cónica y esculpida (B armata),
a globular y liso (B. paludiformis),anchamente cónico y liso (B. pseudosulcospira),
alargada cónica y lisa (B. microescultura)o alargada con torreta y lisa (B. subgloriosa) (
Higo.7).
Higo. 6Sitios de recolección en el río Kaek (en orden descendente). (a)Cascada Sri Dit (K11).
(b)Rápidos de Thung Salaeng (K10). (C)Donde Cascada de Sopha (K8). (d)Cascada de Poi (K5). (mi)Cascada de Aeng
Gaw (K7), fin de la temporada de lluvias, noviembre de 2007. (F)Cascada de Aeng Gaw, fin de la estación seca (K7). (
gramo)Cascada Kaeng Song (K4). (h)Curso inferior del río Kaek en Wang Tong. Todas las fotos excepto (mi)fueron
tomadas en febrero de 2006 al final de la estación seca. Los especímenes fueron recolectados por encima y por
debajo de las cascadas.
B. en pseudosulcusreal academia de bellas artes
B. armata
B. binodosa
B. microescultura
B. subglorioso
B. paludiformis
Brotiasp. 3 de noviembre
K9 Donde los rápidos de Horm
K1 Sakunothayan
Cascada K5 Poi
Cascada K11 Sri Dit

Rápidos K10 Thung Salaeng
Arroyo K2 km 37 + rápidos K3 km 42
Cascada de K4 Where Are You Song
K8 Donde cascada de Sopha

Rápidos K6 km 65 + K7 The Geaw
Higo. 7Distribución deBrotiaespecies dentro del río Kaek.Líneas verticalesindican barreras en el curso del río
formadas por cascadas. Tenga en cuenta que la cascada de Aeng Gaw no está situada directamente en la corriente
principal del río Kaek, sino que forma parte de un arroyo afluente.
Los resultados del presente estudio se basan en la base de material más completa,
que también incluye muestras recién recolectadas de varias localidades dentro y fuera
del drenaje del río Kaek que no estaban disponibles para los trabajadores anteriores.
Confirmaron ampliamente el tratamiento taxonómico de losBrotiaespecies en el río
Kaek por las últimas revisiones sistemáticas (Glaubrecht y Köhler).2004;
Kohler y Glaubrecht2006). Se considera que solo algunos detalles necesitan revisión, como se
describe a continuación. Sin embargo, aquí nos abstenemos de un tratamiento taxonómico
formal y en su lugar nos referimos a nombres informales cuando se considera necesario. Aquí
solo se presentan breves diagnósticos para las especies en aras de la legibilidad del texto;
para descripciones más completas, nos referimos a tratamientos taxonómicos anteriores,
como Brandt (1968, 1999 .1974), Glaubrecht y Köhler (2004) y Köhler y Glaubrecht (2006). Ver
tabla1para una comparación general de los parámetros de shell.
Brotia pseudosulcospiratiene una concha casi parecida a una lapa con no más de dos
verticilos. Generalmente es suave y de caparazón grueso y tiene una abertura ancha y
ovalada, así como un opérculo grande y ovalado que casi se ajusta a la abertura. El verticilo del
cuerpo comprende la mayor parte de la altura de la concha. Tiene un diámetro bien
redondeado; siendo visible una ligera depresión debajo de la sutura superior. Esta especie se
encuentra solo en los rápidos de Sakunothayan (K1), y no se ha encontrado que coexistan
otros congéneres.Brotia armadoGlaubrecht y Köhler (Glaubrecht y Köhler)2004).
Brotia armadoestá muy extendida y se encuentra en el río Kaek entre los rápidos de Kaeng Song (K3) y los rápidos de Thung
Salaeng (K10), en dos arroyos que desembocan en el río (en el km 37 (K2) y Huay Nam Yang (K13)), así como en el drenaje del río
Kwae Noi (W6, W3). No solo es la especie más extendida sino también la más variable con respecto a su caparazón. Las conchas
suelen estar esculpidas con dos a cuatro crestas en espiral, de las cuales una o dos pueden soportar filas en espiral de nódulos
puntiagudos o pequeñas espinas en la periferia de la espiral. Sin embargo, algunas conchas son casi completamente lisas. Las
conchas comprenden entre dos y tres verticilos; el verticilo del cuerpo está inflado y proporcionalmente considerablemente más
grande que los verticilos anteriores. El opérculo es ovalado y casi encaja en la apertura. Aparte de este patrón general, las
poblaciones locales difieren considerablemente en la forma y la escultura de la concha: se encontraron especímenes casi
parecidos a lapas con una sola espiral en los tramos inferiores del río Kaek (Kaeng Song, K3), mientras que se encontraron
especímenes con hasta tres espirales en las regiones intermedias superiores de el río Kaek (entre Poi y Thung Salaeng) así como
en el Kwae Noi (W3). Las poblaciones dentro del río Kaek mostraron en su mayoría una escultura poco desarrollada, mientras
que los especímenes recolectados en un arroyo afluente en el km 37 (K2) exhibieron una escultura bien desarrollada que incluía
la presencia de espinas. Para especímenes espinosos como estos, Brandt ( mientras que se encontraron especímenes con hasta
tres verticilos en las regiones medias superiores del río Kaek (entre Poi y Thung Salaeng), así como en Kwae Noi (W3). Las
poblaciones dentro del río Kaek mostraron en su mayoría una escultura poco desarrollada, mientras que los especímenes
recolectados en un arroyo afluente en el km 37 (K2) exhibieron una escultura bien desarrollada que incluía la presencia de
espinas. Para especímenes espinosos como estos, Brandt ( mientras que se encontraron especímenes con hasta tres verticilos
en las regiones medias superiores del río Kaek (entre Poi y Thung Salaeng), así como en Kwae Noi (W3). Las poblaciones dentro
del río Kaek mostraron en su mayoría una escultura poco desarrollada, mientras que los especímenes recolectados en un arroyo
afluente en el km 37 (K2) exhibieron una escultura bien desarrollada que incluía la presencia de espinas. Para especímenes
espinosos como estos, Brandt (1974) introdujo el nombre de la subespecie 'morissoni',que posteriormente ha sido considerado
sinónimo deB. armata de Glaubrecht y Köhler (2004). Este tratamiento todavía se considera correcto, ya que encontramos todas
las transiciones de espinas a la ausencia total de espinas en esta población, lo que se considera evidencia de que la aparición de
fenotipos que difieren con respecto a la presencia y desarrollo de espinas está controlada por factores ambientales, como,
posiblemente, corriente de agua y depredación.Brotia armadodifiere deB. pseudosulcospirapor su verticilo corporal
relativamente más inflado, la ausencia de una depresión subsural y la presencia de elementos escultóricos generalmente bien
desarrollados.
Brotia binodosaEl río Kaek está ubicado en el río Kaeng entre Kaeng
Song y Thung Salaeng. Se pueden diferenciar tres formas de caparazón,
(1) una forma cónica grande, de caparazón grueso y ancha con
Especiación y radiación en un río
tabla 1Parámetros de concha (mm) del río KaekBrotiaespecies (medias y desviación estándar)
B. pseudosulcospira B. armata B. binodosa (A) B. binodosa (B + C) B. microescultura B. paludiformis B. subglorioso B.sp. 3 de noviembre
Altura de la carcasa 27,1 2,5 18,1 4,8 34,5 4.9 27,7 6,8 15.1 3.1 23,2 3,9 37,7 3,0 14,8 3,6
Ancho de la concha 17,5 1,5 13,3 3,4 22,9 1.9 15,7 3,4 9.8 1.7 18,2 2,6 19,3 1,6 8.6 2.1
Longitud de apertura 17,4 1,8 12,2 2,9 20,3 1,7 14,0 2,9 9,0 2,2 16,0 2,4 15,0 0,9 7.7 1.9
Ancho de apertura 10,8 1,3 7,9 2,0 12,0 1,1 8.5 2.0 5.5 1.2 11.3 2.0 10,1 0,8 4.8 1.3
verticilo del cuerpo 24,0 2,2 16,3 4,5 28,4 2,5 20,6 4,7 12.4 2.1 21,2 3,5 24,4 1,5 11,5 2,8
verticilos 2.1 0.4 2,0 0,8 2,5 0,7 3,2 0,9 2,6 0,7 1.8 0.3 4,2 0,6 3,2 0,9
529
crestas espirales pronunciadas que soportan hasta dos filas espirales de nódulos redondeados, (2)
una forma pequeña con conchas cónicas y puntas puntiagudas con verticilos bastante aplanados y
una o dos filas espirales de espinas bien desarrolladas, y (3) una forma con más conchas alargadas
que generalmente exhiben una depresión sub-sutural y una o dos filas espirales de espinas o
nódulos débilmente desarrollados y un labio basal de la abertura bien formado. Estas tres formas
están espacialmente separadas: la forma A ocurre en el drenaje de Kwae Noi (W5-7), la forma B
ocurre en un afluente del Kaek en Yaeng (K13) y la forma C ocurre en el río Kaek. Las comparaciones
de especímenes muestran que los especímenes de la forma B son similares a los juveniles de la
forma C. Además, un cuadro gráfico de la altura y el ancho de la concha confirma que las formas B y
C exhiben una correlación congruente entre la altura y el ancho de la concha (Fig.8). Concluimos que
ambas formas son conespecíficas y que la forma B representa especímenes predominantemente
juveniles y subadultos. Por el contrario, el formulario A muestra una relación altura-ancho diferente.
Junto con la escultura distintiva, esto es probablemente indicativo del hecho de que las formas A y
(B).þC) representan dos especies distintas. Las conchas de forma A se asemejan a los especímenes
tipo deMelania es científica.Blanford, 1903 más de cerca que los especímenes de las formas B y C.
Mostrando una forma general similar, la típica forma A deB. binodosadifiere de
B. armataesencialmente por su tamaño mucho más grande. La forma del río Kaek deB.
binodosa, sin embargo, se diferencia en cuanto a su forma más alargada, la presencia de más
verticilos y su mayor tamaño.
A diferencia de la especie anterior,B. microesculturatiene un caparazón liso que carece de
elementos escultóricos excepto por líneas de crecimiento tenues. Las conchas comprenden de uno a
tres verticilos, de los cuales el verticilo del cuerpo es el más grande, con un diámetro bien
redondeado o ligeramente aplanado. El verticilo del cuerpo de algunos especímenes está quillado
debajo de la periferia; en otros, es más bien redondeado. La abertura es ampliamente ovalada,
lateralmente redondeada a ligeramente angulada y angostamente puntiaguda en la parte superior.
El opérculo es redondo y más pequeño que la abertura. Ha habido cierta confusión con respecto a la
identidad de esta especie debido a una posible confusión de especímenes. Glaubrecht y Köhler (2004
) representó un caparazón deB. solemianasupuestamente encontrado en los rápidos de Sri Dit
30
25
20
altura de la concha
15
10
forma A
Higo. 8Diagrama que muestra la 5 forma B
relación entre la altura del forma C
caparazón y el ancho del caparazón 0
en las tres formas deB. binodosa 0 10 20 30 40 50
reconocidos por su forma ancho de la concha
(K11) y concluyó queB. solemianaocurre en el curso superior del río Kaek. Sin
embargo, los especímenes recién recolectados de la misma localidad difieren
del espécimen representado. Son más similares al holotipo deB.
microescultura,que en sí mismo no es un espécimen muy representativo de
esta especie debido a su tamaño excepcionalmente grande y la rara presencia
de tres verticilos completos. Aquí, corregimos la afirmación anterior de queB.
solemianaocurre en las cabeceras del río Kaek y atribuye los especímenes
relevantes del curso superior del río Kaek en Sri Dit (K111) aB. microescultura
en lugar de. La especie se encuentra en todo el río entre Kaeng Song (K3) y Sri
Dit (K11).
Cada una de las otras tres especies con conchas lisas,B. paludiformis, B. subgloriosa,y
Brotiasp nov3, solo se encuentra en una sola localidad.
Brothia paludiformistiene una concha pronunciadamente globular que comprende un máximo
de dos verticilos; el segundo verticilo es siempre mucho más pequeño que el verticilo del cuerpo. La
abertura es ampliamente ovalada. El opérculo es ovalado y ligeramente más pequeño que la
abertura. La especie se encuentra solo en las cascadas de Kaeng Sopha (K8).
Brotia subgloriosaSe ha descrito en Huai Chieng Nam, un afluente del río Kaek, donde no
se ha vuelto a encontrar desde entonces. Sin embargo, la especie también se encuentra en el
curso superior del río Kaek entre Sri Dit (K11) y Thung Salaeng (K10). El caparazón tiene una
torreta alargada, relativamente grande y suave. El opérculo es ligeramente ovalado a casi
redondo.Brotiasp. nov3 se encontró en la cascada Aeng Gaw (K7), que se encuentra cerca del
río Kaek. Los especímenes fueron recolectados al final de la temporada de lluvias en el agua
corriente. Sin embargo, el arroyo no es permanente y generalmente se seca en la estación
seca. Durante este período de tiempo, se cree que el río fluye solo a través de cavidades
subterráneas en las rocas calizas, donde aparentemente los caracoles viven la mayor parte del
año. Su cuerpo es completamente blanco (mientras que todos los demás son conocidos).
Brotialas especies son de color marrón o negruzco), posiblemente debido a su estilo de vida
en gran parte subterráneo. Las conchas de esta especie son más bien pequeñas, lisas, cónicas
alargadas y comprenden de tres a cuatro verticilos bien redondeados. El opérculo es casi
redondo.
7 Morfología Radular y Uso de Sustrato
En general, se pueden encontrar tres tipos distintos de rádula entre las especies del río Kaek
(Glaubrecht y Köhler).2004). El tipo 1 corresponde a la morfología radular general que se
encuentra en un gran número deBrotiaespecies (ver Köhler y Glaubrecht 2006) (Higo.9a–b, g–
h). La rádula tiene una longitud de alrededor de 20 a 25 mm (equivalente a aproximadamente
la mitad de la altura del caparazón) con alrededor de 180 a 200 filas de dientes. (-9–10 filas/
mm). Los dientes centrales tienen una forma cuadrada y poseen una glabela bien desarrollada
y una cúspide principal grande, los dientes laterales tienen extensiones laterales cortas y los
dientes marginales en forma de gancho son moderadamente largos con dos cúspides: la
externa es ancha y de forma ovada, la interna uno es mucho más pequeño en tamaño. Este
tipo de rádula se encuentra enB. armata (Higo.9a–b),B. binodosa,
Higo. 9Rádulas representativas deBrotiaespecies del río Kaek. Se muestran dos vistas de cada uno del mismo
segmento de rádula:Izquierda,vista desde arriba;bien,vista frontal a -4-oblicuamente desde arriba. (a,b)Brotia
armata (ZMB 114.009, No hay lugar como el hogar; rádula tipo 1). (cd)Brotia microescultura (ZMB 114.223,
Poi, sobre roca; tipo 3). (e, f)Brotia microescultura (ZMB 114.054, Sri Dit, sobre roca; tipo 2). (g,h)Brotia
subgloriosa (ZMB 114.046, Thung Salaeng, sobre arena; tipo 1).Barras de escala 100metrometro
Tabla 2Tipos de rádula encontrados entreBrotiaespecies en el río Kaek. Se dan las medias y las desviaciones
estándar de la longitud de la cinta radular (mm), el número de filas de dientes y las filas por mm de longitud
de la cinta.
Especies rádulas examinadas longitud radial filas de dientes Filas por mm
Tipo 1
B. armata 31 21,5 ( 4.0) 194 ( 33) 9.1 ( 1.1)
B. binodosa 18 19.6 ( 4.7) 189 ( 32) 9.8 ( 2.0)
B. paludiformis 1 23.2 178 7.7
B. pseudosulcospira 3 25.1 ( 3.2) 224 ( 28) 8.9 ( 0.2)
B. subglorioso 10 17.6 ( 4.1) 185 ( 25) 10.8 ( 1.9)
Tipo 2
B. microescultura (2) 13 16.7 ( 4.1) 182 ( 38) 11.2 ( 2.1)
Tipo
B. microescultura (3) 4 12.6 ( 4.7) 220 ( 86) 17.7 ( 2.2)
B.sp. 3 de noviembre 2 14.1 ( 2.1) 214 ( 18) 15.3 ( 1.0)
B. paludiformis, B. pseudosulcospirayB. subgloriosa (Higo.9g-h) sin diferencias interespecíficas

marcadas y consistentes. El tipo 2 es similar al tipo anterior, pero se diferencia por la presencia
de una glabela más estrecha y corta del diente central, una longitud de cinta ligeramente más
corta y filas de dientes más densamente agrupadas (Fig. 2).9e–f; Mesa2). Estas condiciones se
han encontrado en 13 de 17 especímenes examinados deB. microescultura.El tipo 3 es
bastante distinto y se diferencia de los demás por una longitud de cinta generalmente mucho
más corta (-15 mm), filas significativamente más densas (-15–17 filas/mm), una glabela de los
dientes centrales más débilmente desarrollada, dientes laterales con prolongaciones laterales
más largas y dientes marginales de forma más alargada que soportan dos o tres cúspides
internas accesorias (Fig. 1).9c–d). El tipo 2 se ha encontrado en 4 de 17 especímenes deB.
microesculturay en los dos especímenes examinados deBrotia.sp. 3 de noviembre
Las rádulas de los tipos 1 y 2 son bastante similares, y las diferencias entre ellas son
sutiles, siendo la forma desviada de la glabela del diente central la única característica
distintiva. Además, algunas rádulas deB. armataSe ha descubierto que también poseen
glabelas relativamente cortas y estrechas que representan etapas de transición entre los
dos tipos. El tipo 2 también se ha informado deB. solemianade Glaubrecht y Köhler (
2004) tanto de dentro como de fuera del río (pero nótese que este nombre se atribuyó
erróneamente a ejemplares deB. microesculturadel curso superior del río Kaek). Esta
observación ha sido confirmada por el presente estudio.B. solemianadel drenaje del río
Loei.
Nuestros hallazgos recientes también están de acuerdo con la observación de Glaubrecht y
Köhler (2004) esoB. microesculturatiene la rádula más distintiva entre las especies del río Kaek
(junto con la recién descubiertaBrotiasp. 3 de noviembre de la cascada de Aeng Gaw).
Durante el trabajo de campo en 2006 y 2007, se buscaron especímenes en áreas arenosas y

lodosas, así como en superficies rocosas. En general, todosBrotiaSe encontró que las especies
pastaban en rocas independientemente del tipo de rádula que poseían, mientras que, por regla
general, no se encontró que las planicies de arena y lodo estuvieran habitadas porBrotia
especies. Excepcionalmente, se encontraron individuos únicos de diferentes especies en la arena

(mientras que noBrotianunca se encontró en el barro), lo que sugiere que estos caracoles no suelen
vivir en este sustrato, sino que ocurren allí por accidente. Sólo en los rápidos de Thung Salaeng se
encontraron especímenes deB. subgloriosocon frecuencia (pero no exclusivamente) se encuentra en
pequeños parches de arena dentro de los agujeros de roca formados por la socavación. Junto a
B. subgloriosa,individuos deB. binodosaTambién se encontraron en estos agujeros. Estos agujeros
tenían áreas superficiales limitadas (generalmente no más de -0,5 a 5 m).2), sin embargo, y para
llegar a ellos, los caracoles habrían tenido que arrastrarse sobre mayores extensiones de roca.
En resumen, nuestros hallazgos recientes no indican una correlación entre la
morfología de la rádula y el uso del sustrato.Brotiaespecies en el río Kaek. Primero,
no hay diferencias obvias entre las rádulas tipo 1 de especímenes recolectados en
roca y arena. En segundo lugar, las especies con las rádulas más distintivas,
B. microesculturayBrotiasp. nov3, no difieren de ninguna otra especie en la forma en
que utilizan un determinado sustrato. En cambio, en varios sitios,B. microesculturase
encontró que ocurría sintópicamente con otros herbívoros, comoB. armata.Este
resultado contradice supuestos anteriores de Glaubrecht y Köhler (2004) que existe una
posible correlación entre los fenotipos de rádula y el medio ambiente (sustrato) entre las
especies de la bandada del río Kaek, que se basó en observaciones limitadas.
Con el fin de inferir las respuestas fenotípicas a los sustratos cambiantes, organizamos
experimentos en acuarios que se desarrollaron durante un período de 1 año entre mayo de 2007 y
abril de 2008. Con el fin de probar si el pastoreo en diferentes sustratos afecta la morfología radular,
realizamos experimentos de trasplante. Serie de 10 a 12 individuos cada uno de
B. armata, B. binodosa,yB. microesculturarecogidos en superficies rocosas y de
B. binodosayB. subgloriosorecolectados en la arena se dividieron en dos grupos.
Cada grupo se mantuvo durante todo el período en acuarios que proporcionaron
solo arena o solo rocas como sustrato. En ambos escenarios, los animales fueron
alimentados con alimentos para peces y varios tipos de vegetales. Después del
período de 1 año, las rádulas de estos animales (y sus crías) de diferentes acuarios
se compararon entre sí y con especímenes recolectados en las mismas localidades
en la naturaleza. El número de rádulas comparadas fue bajo ya que algunos
especímenes murieron durante el período de estudio. Las rádulas de algunos
individuos que nacieron y se criaron en los acuarios no fueron analizadas ya que
sus fenotipos intermedios de caparazón sugerían que eran de origen híbrido, lo
que también podría haber afectado la morfología radular. De hecho,
B. armataoB. binodosa,mientras que tenían rádulas de tipo 2 que normalmente se encuentran en
B. microescultura.
Por el bajo número de rádulas comparadas de adultos cautivos (norte1⁄414), que se abstiene de
un análisis estadístico de nuestros resultados. Sin embargo, en general, los ejemplares criados en
acuarios (tanto los animales adultos recogidos en el campo como la mayoría de los ejemplares recién
nacidos en los acuarios) no mostraron cambios significativos en sus patrones de dentición (mediante
la forma de los dientes). con respecto a los especímenes recolectados en las mismas localidades en la
naturaleza, independientemente del sustrato en el que se mantuvieron.
Las rádulas de animales cautivos solo diferían de las recolectadas en el campo por tener cintas
ligeramente más cortas (en promedio, 1 a 2 mm más cortas), mientras que la densidad de
las filas no variaron significativamente con respecto a los especímenes recolectados en la

naturaleza. Independientemente del sustrato proporcionado, las condiciones del hábitat en
los acuarios ciertamente diferían de las del entorno nativo. Por ejemplo, en el campo, BrotiaSe
encontró que las especies pastan en la biopelícula en sustratos duros, mientras que en el
acuario, la principal fuente de alimento era la comida para peces. Dado que estas condiciones
de hábitat alteradas no dieron como resultado una dentición radular significativamente
modificada, concluimos que enBrotiaLa plasticidad fenotípica de la rádula con respecto a la
fuente de alimentación o los sustratos utilizados es bastante limitada. Este hallazgo contrasta
con los informes de inmensa variación intraespecífica observada en Littorinidae que habitan
en rocas, que se atribuyó en parte a la plasticidad fenotípica (Padilla).1998; Red y Mark1999).
La inconsistencia observada subraya la necesidad de más estudios que aborden la plasticidad
de la rádula en diferentes grupos de gasterópodos con respecto a las condiciones ecológicas.
8 Relaciones filogenéticas inferidas por análisis de

genes mitocondriales
Para inferir las relaciones filogenéticas de las especies del río Kaek, se analizó
un fragmento parcial del gen de la citocromo c oxidasa (COI) empleando la
inferencia bayesiana. Estudios previos basados en análisis de datos
combinados de 16S y COI ya han demostrado la monofilia de un clado de
Tailandia central. Brotia,que comprende todas las especies que habitan en los
drenajes de los ríos Kaek, Kwae Noi, Loei, Pa Sak y Pong en el norte de
Tailandia central (Köhler y Glaubrecht).2006; Kohler y damas2009). Un estudio
anterior sugirió la monofilia de la bandada de especies del río Kaek basada en
16S y COI (Glaubrecht y Köhler).2004). En comparación con estos estudios
previos, la filogenia reconstruida aquí se basa en una base de datos
significativamente más completa con respecto al muestreo de taxones y el
área cubierta. El estudio previo de Glaubrecht y Köhler (2004) no incluyó
especies de los drenajes de Pa Sak y Loei y solo una muestra de cada uno de
los drenajes de Pong y Kwae Noi. Sin embargo, se requiere una cobertura
completa de la fauna de paquiquílidos de los cinco ríos si queremos
comprender la evolución de la bandada de especies del río Kaek... La filogenia
actual se ha calculado conBrothia sumatrensisutilizado como un grupo
externo porque Köhler y Glaubrecht (2006) descubrieron que era el grupo
hermano del clado de Tailandia Central. Posteriormente, el grupo externo ha
sido podado del árbol.
En general, el árbol filogenético (Fig.10) tiene una topología muy plana, y las especies
reconocidas por su morfología no caen en grupos monofiléticos sino que permanecen
ampliamente sin resolver. Sin embargo, el árbol contiene clados principalmente
monofiléticos y específicos de drenaje. Las especies del río Kaek forman un gran grupo
corona monofilético, que incluye secuencias mixtas deB. armata, B. binodosayBrotiasp.
B. microesculturaZMB 114.040b (K4) B. . . . sp.
Kaek 3 de noviembre ZMB 114.916 (K7)
B. armataZMB 114.040a (K4)

B. armataZMB 114.944b (K6)
bosque noi
B. binodosaZMB 114.088 (K12)
Apestar B. paludiformisZMB 114.228 (K8)
B. microesculturaZMB 114.943a (K6)
pa sak B. microesculturaZMB 114.943b (K6)
B. armataZMB 114.619a (W3)
B. binodosaZMB 200.202 (W6)
grupo
Loei
B.sp. 2 de noviembre ZMB 114.105d (W4)

B. armataZMB 114.619b (W3)
B. armataZMB 114.620 (W3)
B.sp. 2 de noviembre ZMB 114.103b (W4)
B.sp. 2 de noviembre ZMB 114.105b (W4)
B. armataZMB 114.107 (K4)

B.sp. 2 de noviembre ZMB 114.103a(W4)

B. armataZMB 200 .254 (K4)
B. armataZMB 200 .268a (K5)
B. armataZMB 200 .268b (K5)
grupo
B. microesculturaZMB 114.218 (K2)
B. pseudosulcospiraZMB 200 .196 (K1)
B. armataZMB 113 .253a (K4)
B. armataZMB 113 .253b (K4)
B. armataZMB 113 .253c (K4)
B. armataZMB 113 .253d (K4)
B. armata113 .252b (K4)
B. pseudosulcospiraZMB 114.014 (K1)
B. pseudosulcospiraZMB 114.015 (K1)
B. armataZMB 114.040c (K4)
grupo

B. microesculturaZMB 114.911b (K9)
B. binodosaZMB 200 .192 (K10)
B. binodosaZMB 114.225c (K4)
B.binodosaZMB 114.621 (K10)
B. binodosaZMB 114.225a (K4)
grupo
B. binodosaZMB 114.225b (K4)

se une a la parte 2 aquí
B. microesculturaZMB 200 .200 (K5)
Higo. 10Árbol filogenético basado en análisis de secuencias parciales de COI que muestran las relaciones entre los
Brotiaespecies del centro de Tailandia según lo inferido por la inferencia bayesiana. Grupo externo podado del árbol
(parte 2, vea la página del formulario para la continuación) Lado izquierdo: árbol completo, lado derecho: porción
ampliada
se une a la parte 1 B. binodosaZMB 114.230 (K4)

grupo
aquí B. microesculturaZMB 114.237 (K4)
B. binodosaZMB 114.040d (K4)
grupo
B. microesculturaZMB 114.043b (K10)
grupo
B. binodosaZMB 113 .249 (W7)
grupo
B. subgloriosoZMB 114.046 (K10)
B. solemianaZMB 114.082a (P4)
B. solemianaZMB 114.082b (P4)
grupo
B. solemianaZMB 114.082c (P4)
B muchosZMB 114.058 (S1)
B muchosZMB 114.081 (P2)
B. solemianaex ZMB 114.002 (S2)
B muchosZMB 114.002a (S2)
grupo
B muchosZMB 114.002b(S2)
B. solemianaZMB 114.003a (S3)
B. solemianaZMB 114.003b(S3)
B. solemianaZMB 200 .174 (P1)
B.solemianaZMB 114.078 (P3) grupo
B. solemianaZMB 114.079 (P5)
B. solemianaZMB 114.080 (P5)
B. . . .sp 1 de noviembre ZMB 114.063a (L3)
B pseudoasperataZMB 114.220 (L3)
grupo 11
B sp. 1 de noviembre ZMB 114.063b (N3)

B sp. 1 de noviembre ZMB 114.063c (L3)
B sp 1 de noviembre ZMB 114.063d (L3)
B sp 1 de noviembre ZMB 114.063e (L3)
B. pseudoasperataZMB 114.060a (L2)
B. pseudoasperataZMB 114.060b (L2)
B. pseudoasperataZMB 114.060c (L2)
B. pseudoasperataZMB 114.060d (L2)
grupo 12
B. pseudoasperataZMB 114. 220a (L2) .

B. pseudoasperataZMB 114.2 20b (L2)
B muchosZMB 114.104a (W4)
B.sp 2 de noviembre ZMB 114.105c (W4)
B.sp 2 de noviembre ZMB 114.105a(W4)
B.sp. 1 de noviembre ZMB 114.063 f (N3)
grupo 13
B.sp 2 de noviembre ZMB 114.074a (L1)

Kaek B.sp 2 de noviembre ZMB 114.074b (L1)
B muchosZMB 114.104b (W4)
bosque noi B.sp 2 de noviembre ZMB 114.105b (W4)
B muchosZMB 114.104c (W4)
B.sp. 2 de noviembre ZMB 114.100c (W3)
grupo 14
Apestar
B muchosZMB 114.106a (W2)
B muchosZMB 114.106e (W2)
pa sak B.sp 2 de noviembre ZMB 114.100b (W3)
B muchosZMB 114.106b (W2)
Loei B muchosZMB 114.106c (W2)
0.5 B muchosZMB 114.106d (W2)
Higo. 10 (continuación) (paso 2, vea la página de formularios para la continuación). Lado izquierdo: árbol completo, lado
derecho: porción ampliada
nov2 del clado Forest Noi. Los haplotipos de los ríos Pong y Pa Sak forman un segundo
clado (el clado Pa Sak-Pong), que es el grupo hermano del clado Kaek-Kwae Noi. Un
clado adicional contiene exclusivamente haplotipos específicos del río Pong (clado Pong)
y forma el grupo hermano de los dos clados anteriores juntos (Kaek-Kwae Noi + Pa Sak-
Pong). Finalmente, en la bifurcación más basal del árbol, un clado que contiene
haplotipos de los ríos Loei y Kwae Noi (clado Loei-Kwae Noi) forma el grupo hermano de
todos los clados mencionados anteriormente. Todos los clados de ríos antes
mencionados están bien diferenciados entre sí por medio de distancias genéticas
promedio entre alrededor del 5 y el 12% (Tablas).3y4).
El clado Kaek-Kwae Noi comprende siete grupos de haplotipos más o menos bien
diferenciados, así como dos secuencias únicas que no se agrupan con ninguno de los otros.
Estas secuencias pueden representar otro grupo de haplotipos raros (o raramente
muestreados). La divergencia de secuencia media dentro de los conglomerados no supera un
máximo del 1,5 %, mientras que la divergencia entre conglomerados oscila entre el 1,3 y el 7,5
% (Tabla3).
Los tres grupos de haplotipos en posiciones más basales del clado Kaek-Kwae Noi (5–
7) están especialmente bien diferenciados y contienen solo secuencias de especímenes
recolectados en localidades río arriba (K10–K11) o en el drenaje de Kwae Noi (W5–W7) .,
mientras que los grupos de haplotipos en posiciones más derivadas (1–4) muestran poca
diferenciación genética en general y contienen principalmente especímenes
recolectados en ubicaciones intermedias (K1–K6), pero también secuencias mezcladas
de localidades aguas arriba (K10–K11) (W3– W6). Además, hay uno bien diferenciado
Tabla 3Divergencia de
Grupo 1 2 3 4 5 6 7
secuencia media dentro y
1 0.1
entre el haplotipo
2 0.2 0.2
grupos 1 a 7 del clado
3 1.3 1.7 0.4
Kaek-Kwae Noi (en %,
4 1.4 1.8 1.1 0.4
parámetros Kimura-2)
5 4.1 4.7 4.1 4.4 1.5
6 6.4 7.5 7.0 6.7 5.8 0.2
7 4.8 5.6 5.1 4.9 4.3 5.6 0.6
Tabla 4Divergencia de secuencia media dentro y entre grupos de haplotipos y clados filogenéticos de
diferentes sistemas de drenaje (en %, modelo Kimura-2-parámetros). Cuadros en negrita: divergencia de
secuencia dentro de clados específicos de drenaje
clado kaek-bosque noi Pa Sak-Pong Apestar Loei-Bosque Noi bosque noi
Grupo 1–7 8 9 10 11 12 13 14
1–7 0,1–7,5
8 5.8–6.9 1.1
9 4.9–6.1 3.3 0.9
10 5.8–11.2 5.7 5.7 0.5
11 9.5–11.2 9.5 10.7 10.9 0.5
12 9.6–11.7 9.2 10.1 10.5 3.2 0.4
13 10.2–12.2 9,5 11,1 11,0 2.6 2.6 0.1
14 9.1–11.4 9,1 10,0 10,1 4.4 4.1 4.1 0.1
grupo de haplotipos (6) que contiene exclusivamente secuencias deB. armatay

B. binodosadel drenaje de Kwae Noi.
Dentro del clado Pa-Sak-Pong, hay tres grupos de haplotipos distintos
que están separados entre sí por distancias genéticas entre 3,3 y 5,9 %.4).
El clado Loei-Kwae Noi contiene dos grupos con una divergencia de
secuencia del 2,6 %. Además, hay un grupo específico de río adicional bien
diferenciado dentro de cada uno de los clados de los ríos Pong y Kwae Noi
(Fig. 1).10; Mesa4).
EntreBrotia,Se encontró que las distancias interespecíficas en COI entre especies
morfológicamente bien diferenciadas y alopátricas eran tan bajas como 1.4–1.7% (Köhler
y Glaubrecht).2006). Se considera que este valor representa una estimación
conservadora de un umbral mínimo para las tasas interespecíficas de divergencia de
secuencias en este grupo. En comparación con este umbral, la cantidad de
diferenciación genética dentro del clado de Tailandia CentralBrotiasería equivalente a la
existencia de al menos 12 grupos de genes distintos (específicos de la especie) (o 13 si se
consideran las 2 secuencias individuales que no se agrupan con otras). En consecuencia,
dentro del clado Kaek-Kwae Noi hay entre 5 y 6 de estos grupos distintos (clusters 1).þ2,
þ4, 5, 6, 7, secuencias individuales) más 3 dentro del clado Pa Sak-Pong, 2 dentro del
clado Loei-Kwae Noi y 1 dentro de los clados Pong y Kwae Noi, respectivamente. Este
número de grupos genéticamente bien diferenciados se correlaciona perfectamente con
el número total de 13 especies reconocidas por su morfología. (B. armata, B. binodosa-A,
B. binodosa-B,B. manningi, B. microsculpta, B. paludiformis, B. pseudoasperata, B.
pseudosulcospira, B. solemiana, Brotiasp. 1 de noviembre,Brotiasp. 2 de noviembre,
Brotiasp. 3 de noviembre,B. subgloriosa) (véanse las figuras.11para fotografías de
ejemplares vivos de algunas de estas especies). Además, también existe una buena
correlación entre el número de grupos genéticamente distintos y el número de
"morfoespecies" reconocidas en cada cuenca fluvial (grupo genético/morfoespecies): Río
Kaek (6/7), Kwae Noi (3/4) ; , Loei (3/3), Pong (2/2), Día del Padre (2/2).
En general, sin embargo, existe una falta de coincidencia significativa entre la ramificación del
árbol de genes mitocondriales en grupos o grupos de haplotipos y la distribución de especies
morfológicamente reconocidas a lo largo de esta topología, lo que aparentemente convierte a todas
las morfoespecies en ensamblajes polifiléticos (Fig. 2).10). Las distancias genéticas infraespecíficas
promedio entre la mayoría de estas morfoespecies excedieron con creces el umbral mínimo empírico
de diferenciación interespecífica como se mencionó anteriormente (con valores de hasta 5,8%) y se
encuentran dentro del rango de distancias genéticas interespecíficas observadas de 1,8–10,7%.
9 Hacia una explicación evolutiva: conclusiones de

la incongruencia
Otros estudios de gasterópodos cerithioideanos de agua dulce también han revelado en parte una
gran incongruencia entre los patrones de ramificación de los árboles genéticos mitocondriales y la
delimitación de especies (supuestas) mediante el uso de caracteres morfológicos.
Higo. 11Fotografías de especímenes vivos. (a)Brotia armado. (b)Brotia binodosa. (C)Brotia muchos. (
d)Brotia subgloriosa.Fotos ( Fotosanuncio)cortesía de Chris Lukhaup (Bittenfeld), fotos (antes de
Cristo)cortesía de Andreas Helmenstein (Gummersbach)
(Lydeard et al.2002; Minton y Lydeard2003; Según Wilson et al.2004; Kohler y Glaubrecht2006;

Según Lee et al.2007; Según Rintelen et al.2007; Glaubrecht y Rintelen 2008; Kohler y damas
2009; Kohler et al.2009; Fuerte y Kohler2009). Los trabajadores atribuyeron estas
discrepancias entre los árboles de genes y especies a una amplia gama de fenómenos,
incluida la clasificación incompleta de linajes, la existencia de especies crípticas, la división
taxonómica excesiva de linajes y la hibridación. Sin embargo, se extrajeron conclusiones
sorprendentemente diferentes a partir de observaciones bastante similares según la causa
real que se haya postulado. Por ejemplo, en coreanoSemisulcospira (Semisulcospiridae), genes
tanto mitocondriales (16S) como nucleares (28S) de siete especies reconocidas por su
morfología (S. libertina, S. koreana, S. forticosta, S. gottschei, S. multicincta, S. nodiperda, S.
tegulata)reveló una estructura que seguía trayectorias geográficas más que taxonómicas, con
haplotipos y genotipos agrupados en gran medida en clados específicos de drenaje, pero sin
resolución con respecto a las especies delineadas morfológicamente (Lee et al. 2007). Los
autores concluyeron que, a la espera de la demostración de cualquier diferenciación confiable
dentro de este complejo, todas las especies menos una deberían ser sinonimizadas en un solo
complejo de especies polimórficas:S. libertino.En cambio, ante fenómenos similares en el
taxón pachychilidtilomelania,Según Rintelen et al. (2004) y Glaubrecht y Rintelen (2008)
sugirieron que la clasificación de linaje incompleta y la hibridación introgresiva causaron la
falta de coincidencia de los árboles de genes y especies, y
concluyó que los árboles de genes mitocondriales son engañosos con respecto al
reconocimiento de especies. En general, estamos de acuerdo en que la
omnipresencia de este fenómeno en una variedad de grupos de cerithioidean de
agua dulce, en combinación con los detalles de la herencia del ADN mitocondrial
(Nichols).2001; Funk y Patria2003; ballard y whitlock2004; Según Blanco et al.2008),
corroboran la noción de que los marcadores mitocondriales pueden tener una
utilidad limitada para evaluar el estado a nivel de especie, y que la caracterización
molecular significativa de las especies debe hacer uso de una combinación de
marcadores nucleares mitocondriales y de evolución rápida (además de la
morfología, por supuesto); . . . . Anticipamos que el polimorfismo de longitud de
fragmento amplificado (AFLP) o los análisis de microsatélites son los métodos de
elección para abordar los límites de especies dentro del flujo de grupo actual entre
poblaciones (ver, por ejemplo, Richard y Thorpe2001; Albertson et al. 1999;
Savekoul et al.1999). La aplicación de análisis AFLP es parte del presente proyecto
de investigación; está pendiente la finalización de los análisis.
Sin embargo, incluso en ausencia de análisis comparativos de marcadores nucleares, los patrones de diferenciación
morfológica y mitocondrial brindan información intrigante sobre la evolución de la bandada de especies del río Kaek. Como se
mencionó anteriormente, en principio, varios fenómenos pueden explicar el desajuste entre los árboles de genes y especies en
el presente caso. Excluimos la posibilidad de que la incongruencia sea causada por pseudogenes nucleares ('numts'), porque la
traducción de la alineación de la secuencia COI analizada en secuencias de aminoácidos produjo una alineación altamente
conservada que no contenía codones de terminación ni espacios. Tampoco consideramos el polimorfismo ancestral como una
posible explicación de la incongruencia porque no se consideran las tasas observadas de divergencia de secuencia de hasta 1,5%
dentro de y 5. Se considera que el 8% entre grupos de haplotipos está fuera del rango de polimorfismo infraespecífico. El
polimorfismo ancestral solo puede considerarse como una explicación de las relaciones no resueltas dentro de los subclados
que, en general, muestran bajas tasas de diferenciación genética, como los grupos de haplotipos 1–4. Por el contrario, la
presencia de especies morfológicamente crípticas no se puede descartar por completo como una posible causa de límites de
especies aparentemente no resueltos. La presencia de especies potencialmente mal identificadas (=crípticas) podría explicar por
qué poblaciones morfológicamente similares de diferentes drenajes de ríos, como las atribuidas a Por el contrario, la presencia
de especies morfológicamente crípticas no se puede descartar por completo como una posible causa de límites de especies
aparentemente no resueltos. La presencia de especies potencialmente mal identificadas (=crípticas) podría explicar por qué
poblaciones morfológicamente similares de diferentes drenajes de ríos, como las atribuidas a Por el contrario, la presencia de
especies morfológicamente crípticas no se puede descartar por completo como una posible causa de límites de especies
aparentemente no resueltos. La presencia de especies potencialmente mal identificadas (=crípticas) podría explicar por qué
poblaciones morfológicamente similares de diferentes drenajes de ríos, como las atribuidas aB muchosoBrotia sp. nov2,
aparecen en diferentes posiciones en el árbol, o por qué las especies del río Kaek, comoB. microescultura,parecen tener dos
tipos diferentes de rádula. Sin embargo, es muy poco probable que esta explicación dé cuenta de las mezclas genéticas entre
especies morfológicamente distintivas dentro de un solo sistema de drenaje.Brotiasp. 1 de noviembre y
B. pseudosulcospiraen el drenaje Loei oB muchosyBrotiasp. nov2 en el drenaje de Kwae

Noi. En estos casos, las bajas tasas de diferenciación genética contradicen la presencia
de otras especies no reconocidas. Además, es poco probable que el polimorfismo
morfológico de la concha (p. ej., ecofenotipismo) explique los límites de especies no
resueltos. Se ha demostrado que las modificaciones de las esculturas de conchas
pueden ocurrir en cerithioideans de agua dulce dependiendo del sustrato (Urabe).2000).
Sin embargo, también se ha demostrado que el ecofenotipismo se restringe a
cambios relativamente pequeños, mientras que las diferencias claras (como se encuentran aquí) se
consideran controladas genéticamente (Gittenberger et al.2004; Haase y Misof2009).
Estamos convencidos de que la hibridación introgresiva provocada por el cruzamiento es la
causa más probable de gran parte de la incongruencia observada entre el gen mitocondrial y
el árbol morfológico de la especie; sin embargo, esta es una hipótesis que solo puede
validarse mediante análisis genético comparativo de marcadores de otros grupos de enlace
(es decir, genes nucleares). De hecho, varios estudios de caracoles terrestres han demostrado
que la hibridación introgresiva, aunque difícil de demostrar de manera concluyente, explica
los límites de especies no resueltos en los árboles de genes mitocondriales (Thacker y
Hadfield).2000; Goodacre y Wade2001; En Haase et al.2003; Haase y Misof2009), y se
extrajeron conclusiones similares para los gasterópodos de agua dulce pachychilid
(Glaubrecht y Rintelen).2008; Kohler et al.2009). En la mayor parte de su área de distribución
en el sur y sureste de Asia,Brotialas especies tienen distribuciones restringidas, estando
confinadas a las cabeceras de ríos o arroyos individuales pero ausentes de los cursos
inferiores de arroyos más grandes. Por lo general, hay dos especies como máximo que
coexisten en un hábitat determinado, mientras que la mayoría de las especies se encuentran
en alopatría o parapatría. En consecuencia, Köhler et al. (2009) sugirieron que la separación
geográfica es el factor principal que impulsa la especiación de los paquiquílidos en los ríos de
Asia continental, y que, cuando no se han desarrollado mecanismos de aislamiento para evitar
que las especies se crucen entre sí, el contacto secundario entre poblaciones o especies
originalmente alopátricas con frecuencia conduce a la introgresión de marcadores neutros. De
acuerdo con esta hipótesis, la distribución más o menos aleatoria de morfotipos a través de
clados de haplotipos específicos de drenaje probablemente se explica mejor por la
introgresión de genes mitocondriales en acervos genéticos extraños debido al contacto
secundario de poblaciones o especies previamente aisladas causadas por la translocación de
especímenes. debido a eventos de dispersión o vicarianza. De hecho, esta suposición
concuerda bien con las consideraciones teóricas, que predicen que las invasiones extranjeras
de territorios ya ocupados conducen a una introgresión masiva de genes neutrales si no se
previene severamente el mestizaje entre las especies invasoras y las locales. En tales casos, la
introgresión ocurre casi exclusivamente de la especie local a la invasora, especialmente para
poblaciones ubicadas lejos de la fuente de la invasión, y esto ocurre independientemente de
las densidades relativas de las dos especies (Currat et al.).2008). Los autores también han
argumentado que este patrón es más fuerte en los marcadores que experimentan un flujo de
genes reducido, lo que implica que los genes de los orgánulos a menudo se introgresan
preferentemente a través de los límites de las especies. Tal introgresión masiva tiene el
potencial de explicar las tasas de discordancia observadas en el árbol COI presentado aquí.
Además, creemos que la presencia de dos tipos diferentes de rádula enB. microescultura
puede atribuirse a la existencia de especies híbridas.Microescultura de Brotiaexhibe una
morfología radular muy distinta (tipo 3), mientras que el tipo 2, que es de alguna manera una
forma intermedia entre los tipos 1 y 3, posiblemente se encuentre en híbridos. porque la
mayoríaBrotia las especies tienen rádulas del tipo 1 generalizado de todos modos, sus
híbridos no pueden ser reconocidos por la morfología de la rádula.
10 Dispersión o vicarianza: intercambio genético entre las

faunas fluviales y la relevancia de las capturas fluviales
dentro del sistema de drenaje del Mekong
Anteriormente, hemos postulado que se produjo una introgresión masiva de haplotipos debido al
extenso intercambio de fauna en los cinco drenajes de los ríos estudiados aquí. Estábamos
interesados en saber si existen patrones correspondientes en el momento de los eventos
geológicos en la región (es decir, capturas de ríos) y la ocurrencia de divisiones importantes en el
árbol filogenético. Realizamos una prueba de razón de verosimilitud para probar si nuestros datos de
secuencia permitirían un enfoque de reloj molecular. Sin embargo, una prueba de chi cuadrado
mostró que los árboles bayesianos producidos bajo las condiciones de un reloj estricto dieron como
resultado puntajes de probabilidad significativamente más bajos en comparación con un análisis en
el que se permitió que las ramas evolucionaran a tasas variables. La aplicación de un reloj molecular
bajo el uso de una calibración externa como lo sugiere Wilke (2003) para nuestros datos de COI, por
lo tanto, fue refutado. Por lo tanto, no fue posible probar si ciertas divisiones en el árbol cayeron
dentro del marco de tiempo de los principales eventos tectónicos en el centro de Tailandia.
El registro fósil deBrotiase remonta al Mioceno Medio (Annandale). 1919; Gurung et al.
1997), lo que equivale a una edad mínima de todo el grupo de al menos 8-12 Ma. Aunque el
clado de Tailandia Central se encuentra en una posición derivada en el árbol molecular, es
plausible suponer que se originó hace varios millones de años. En consecuencia, postulamos
que la era del Plioceno tardío al Cuaternario fue crítica para la evolución de los gasterópodos
en estudio. Este fue un momento en que las capturas de corrientes de varias magnitudes
afectaron las alineaciones de los ríos en el norte de Tailandia Central como resultado de
procesos tectónicos o hidrológicos locales (ver arriba). Probablemente el evento más
importante fue el realineamiento del río Mekong, que fluyó entre -1 y 0,05 millones de años a
través de los lechos del río Loei-Pa Sak. PorqueBrotialas especies no suelen habitar las
regiones media y aguas arriba de los ríos más grandes, los cambios en la dirección del flujo
del Mekong pueden haber conectado tanto a las poblaciones en etapas anteriores de la
realineación de la corriente, cuando el régimen de flujo ha sido de menor magnitud, como a
las poblaciones separadas, cuando el Mekong formó una gran corriente que no era un hábitat
adecuado paraBrotia.Por ejemplo, se considera posible que la distribución disyuntiva deB
muchos,que ocurre en los drenajes de Pa Sak y Kwai Noi, puede haber sido causado por el
realineamiento del Mekong. El intercambio genético entre los drenajes de los ríos puede
haber ocurrido ya sea debido a la translocación de especímenes de un río a otro (dispersión) o
debido a eventos relacionados con la historia geológica del área (vicarianza). La importancia
de la dispersión es difícil tanto de rechazar como de confirmar. Sin embargo, creemos que los
eventos y procesos tectónicos desde mediados del Terciario probablemente han influido en la
evolución y distribución de especies al mediar fases de contacto y aislamiento de faunas a
través de la captura o separación de sistemas fluviales. Attwood y Johnston (2001) han
demostrado que los cambios episódicos de las cuencas fluviales han tenido una influencia
significativa en la distribución y evolución de los caracoles pomatiopsidos al separar y
reconectar poblaciones o especies. Hay pocas dudas de que otras aguas dulces
Los animales con baja capacidad de dispersión, como los gasterópodos paquiquílidos,
también pueden haber sido afectados por estos cambios. Sin embargo, mientras que el árbol
mtDNA proporciona información sobre la divergencia de los clados, nos dice poco sobre los
flujos de genes entre clados específicos de drenaje porque los haplotipos foráneos
introducidos se reemplazan rápidamente por haplotipos locales específicos de drenaje (Currat
et al.2008). Por lo tanto, a diferencia de las divergencias, los eventos que conectaron las
faunas fluviales son difíciles de rastrear en la filogenia basada en el mtDNA. Los flujos de
genes a través de los bordes de los sistemas de drenaje probablemente solo puedan
confirmarse si han ocurrido más recientemente, porque entonces es posible que los
haplotipos extraños aún no hayan sido completamente reemplazados por los locales. Este
parece ser el caso en el grupo 1 de haplotipos específicos del río Kaek derivado
filogenéticamente, que también contiene especímenes del drenaje de Kwae Noi. La baja
diferenciación genética sugiere que el flujo de genes subyacente entre los ríos Kaek y Kwae
Noi debe haber ocurrido recientemente.
11 Especiación y radiación deBrotiaen el río Kaek
ElBrotiabandada de especies en el río Kaek muestra algunos aspectos únicos que requieren
una explicación. El número deBrotialas especies que se encuentran en el río exceden las que
se encuentran en cualquier otro río del sudeste asiático en al menos dos veces. Además, estas
especies viven en gran medida en simpatía, mientras que las especies de otros drenajes se
encuentran principalmente en diferentes sectores o afluentes en completo aislamiento
espacial o con zonas de contacto estrechas. El régimen de muestreo denso que cubre toda la
región del norte de Tailandia Central ha revelado que todas las especies menos una (B armata)
son de hecho endémicas del río Kaek y, en consecuencia, deben haber evolucionado dentro
del sistema de drenaje. Glaubrecht y Köhler (2004) argumentó que la falta de resolución en la
filogenia molecular y su topología superficial indican el origen reciente de la bandada de
especies del río Kaek y, en consecuencia, una rápida divergencia morfológica de sus especies
constituyentes. Los resultados preliminares han sugerido que la bandada de especies del río
Kaek puede haber evolucionado como resultado de una radiación adaptativa y que los
factores ecológicos pueden haber impulsado la especiación. El principal objetivo del presente
estudio ha sido probar esta hipótesis. Streelman y Danley (2003) sugirieron para los
vertebrados que las radiaciones suelen seguir trayectorias evolutivas similares. Los grupos
divergen a lo largo de los ejes de hábitat y morfología trófica, así como de comunicación, a
menudo en ese orden. Argumentaron que es probable que la divergencia con respecto al
hábitat y la morfología trófica siga modelos de selección ecológica y que la divergencia con
respecto a la comunicación proceda de acuerdo con modelos de selección sexual. De acuerdo
con este postulado, los estudios del género gasterópodo confamiliartilomelaniahan
demostrado que, de hecho, la elección del sustrato y la especialización trófica parecen
desencadenar la especiación. Quedaba por probar si se encontrarían patrones
correspondientes en la bandada de especies del río Kaek. Sin embargo, aquí mostramos que
la Brotialas especies en el río Kaek no difieren con respecto a su sustrato preferido o la
profundidad del agua en la que se encontraron. La dentición radular de
la mayoría de las especies es muy similar, y solo dos especies difieren claramente de todas las
demás por poseer un tipo de rádula distinto (B. microsculpta, Brothiasp. 2 de noviembre).
Ambos hallazgos sugieren que la segregación mediada por el hábitat y la especialización
trófica no han jugado un papel importante en la evolución de la bandada de especies del río
Kaek. Además, es poco probable que la especiación haya sido provocada por la selección
sexual debido a la probable presencia de especies híbridas, lo que sugiere mecanismos
incompletos de aislamiento poscigótico. En consecuencia, según nuestro conocimiento actual,
no hay evidencia a favor de la suposición de que la especiación ecológica ha explicado la
diversidad de especies en el río Kaek. Alternativamente, la especiación dentro del río Kaek
actualmente se explica mejor por el aislamiento geográfico. En primer lugar, no se puede
descartar que algunas especies se originaron fuera del río Kaek y que el ADNmt específico del
río Kaek introgresado haya reemplazado a los haplotipos extraños.2008). En segundo lugar, la
filogenia basada en el mtDNA sugiere que el flujo de genes dentro del río Kaek ocurre
predominantemente desde las áreas río arriba hacia las aguas abajo porque los grupos de
haplotipos basales pertenecen exclusivamente a las poblaciones río arriba, mientras que los
grupos de haplotipos derivados contienen una mezcla de poblaciones río arriba y río medio. El
río Kaek fluye sobre una serie de saltos de agua y cascadas. Aunque según sus propias
observaciones, los caracoles pueden arrastrarse por encima de la línea del agua y, en
principio, pueden escalar las paredes verticales, las cascadas parecen formar barreras que
delimitan significativamente el flujo de genes a través de las estructuras verticales en contra
de la dirección del flujo. Además, el régimen hídrico del río Kaek es bastante inestable. El
suelo, predominantemente de arenisca y caliza, es muy permeable al agua, lo que puede
provocar que grandes sectores del río se sequen durante períodos prolongados de sequía.
Incluso en estaciones secas regulares, el cuerpo de agua del río Kaek se reduce en gran
medida y algunos de sus afluentes se secan por completo (Fig.4f). Estas fluctuaciones
provocan regularmente extinciones locales en tramos restringidos del río y sus afluentes,
seguidas de recolonizaciones de las áreas durante la temporada de lluvias. Ambos factores, la
fragmentación del río por cascadas y las extinciones locales regulares, pueden ayudar a la
retención de una estructura genética reticulada y la conservación de las tasas de
diferenciación genética local. Además, es posible que se hayan producido períodos
prolongados de sequía durante el Cenozoico y podrían haber desencadenado la especiación
en aislados periféricos, un proceso generalmente considerado como un modo significativo de
especiación alopátrica (Mayr1963). Se ha demostrado en plantas que las poblaciones
pequeñas pueden diferenciarse rápidamente (Ellstrand y Elam).1993), y las limitaciones del
flujo de genes como se describe anteriormente pueden haber ayudado a que persista esta
diferenciación genética. En analogía, se ha confirmado por consideraciones teóricas que la
rápida especiación parapátrica en la escala de tiempo de hasta unos pocos miles de
generaciones es plausible incluso en presencia de un intercambio genético moderado entre
subpoblaciones vecinas. La selección divergente para la adaptación local tampoco es
necesaria para la evolución del aislamiento reproductivo como subproducto de la divergencia
genética (Gavrilets et al.2000). Los autores demostraron que las poblaciones o especies con
tamaños de rango pequeños deberían tener tasas de especiación más altas, circunstancias
que probablemente se aplican en el presente caso.
Por lo tanto, el presente caso modelo de una radiación fluvial aparentemente no sigue las
mismas trayectorias evolutivas que se demostraron recientemente para una serie de casos.
de las radiaciones lacustres de varios grupos de animales, lo que implica un componente

ecológico importante (es decir, la especiación ecológica, sensu Schluter).2000). Por el
contrario, el rebaño deBrotiaLas especies del río Kaek tienen más en común con otras
radiaciones fluviales, como las Triculinae del Mekong. Se ha demostrado que la especiación y
la radiación en estos caracoles de agua dulce fueron desencadenadas por eventos geológicos,
como el levantamiento de cadenas montañosas, flujos de lava y capturas o realineamientos de
ríos, así como oleadas de extinciones locales y recolonizaciones (Davis). 1979, 1999 .1981;
Attwood y Johnston,2001) – todos los cuales probablemente han iniciado la especiación en
aislamientos periféricos. Se han observado patrones similares en el hidrobiido de Tasmania.
Beddomeia (Ponder et al. 1993) y el hidrobiidofluvidonaen Victoria, Australia, (Ponder et al.
1994). Ambas radiaciones involucran especies de rango pequeño. El modo de especiación es
alopátrico o parapátrico y está impulsado principalmente por la vicarianza debido a la
restricción de los rangos que resultan en el aislamiento y posterior diferenciación de las
poblaciones periféricas. Esto no excluye la simpatía secundaria de especies estrechamente
relacionadas, como enfluvidona,que siguió a eventos de especiación en aislamiento debido a
restricciones de hábitats. En resumen, concluimos que, con respecto a las radiaciones
adaptativas de los organismos de agua dulce, los lagos longevos brindan condiciones
ambientales únicas que pueden facilitar la especiación ecológica. En contraste, los ríos
aparentemente brindan diferentes condiciones que favorecen los modelos de especiación
para y alopátricos.
AgradecimientosLos autores agradecen la financiación de la German Research Foundation (DFG, KO

3381/3-1). Además, nos gustaría agradecer al Consejo Nacional de Investigación de Tailandia (NRCT) por
permitir amablemente el trabajo de campo en Tailandia. Le debemos un agradecimiento muy especial a
Claudia Dames (Berlín) por la gran ayuda con todo tipo de trabajo de rutina, como la preparación de
muestras, SEM y mediciones de conchas. También agradecemos a Thomas von Rintelen y Robert Schreiber
(ambos de Berlín) por su ayuda con el trabajo de laboratorio. Finalmente, deseamos expresar nuestro
agradecimiento a dos revisores por leer críticamente una versión anterior del manuscrito. Sus comentarios
constructivos ayudaron a mejorar la calidad de este documento. También se agradece a Rosemary Golding
(Sydney) por las mejoras estilísticas del texto.
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El lado descuidado de la moneda: radiaciones no
adaptativas en caracoles de primavera (porthinellaspp.)
Thomas Wilke, Mandy Bench, Martin H.€otros, Christian Albrecht

y Jean-Michel Bichain
AbstractoRecientemente, ha habido un mayor interés científico entre los biólogos evolutivos tanto en
las causas como en las consecuencias de las radiaciones. Mientras que una forma de radiación, la
radiación adaptativa, se ha estudiado ampliamente, otra forma, la radiación no adaptativa, se discute
de manera controvertida y se comprende poco. De hecho, el concepto de radiación no adaptativa (es
decir, la rápida diversificación de especies no acompañada de adaptación a diferentes nichos y que
da como resultado un grupo de taxones alopátricos) es rechazado por algunos investigadores.
Por lo tanto, el presente artículo tiene como objetivo revisar los patrones y procesos de
radiación(es) en un taxón modelo: el estenoico género caracol de primavera.Bythinella –
dentro del marco teórico de radiaciones adaptativas versus no adaptativas. Sobre la base de
una filogenia de todo el taxón, se aplican varios métodos para identificar las radiaciones,
incluido un nuevo enfoque pragmático basado en el concepto de bandada de especies y un
marco temporal de especiación rápida. Luego, se evalúan los criterios de las radiaciones no
adaptativas y se discuten las fuerzas motrices tanto en general como específicamente para
porthinellaspp. Sobre la base de ocho radiaciones identificadas, así como datos ecológicos,
morfológicos y de distribución de hasta 50 especies, se sugiere la presencia de radiaciones no
adaptativas en este taxón. Las fuerzas impulsoras de estas radiaciones pueden ser la deriva
genética en pequeñas poblaciones subdivididas, aunque también puede estar involucrada la
selección natural. Además, se muestra que las radiaciones adaptativas y no adaptativas
pueden no ser totalmente discretas en el espacio y el tiempo. El presente estudio subraya la
necesidad de una mejor comprensión de los mecanismos subyacentes de las radiaciones
adaptativas y no adaptativas y de un uso juicioso de estos epítetos.
T. Wilke (*), M. Benke y C. Albrecht

Departamento de Ecología Animal y Sistemática, Universidad Justus Liebig, Giessen, Alemania Correo
electrónico: tom.wilke@allzool.bio.uni-giessen.de
Sr. hermano€andén
Departamento de Ecología, Universidad Philipps Marburg, Marburg, Alemania

J.-M. bicadena
Museo Nacional de Historia Natural, París, Francia

DOI 10.1007/978-3-642-12425-9_25, # Springer-Publishing Berlín Heidelberg 2010
552 T. Wilke et al.
1 Introducción
El estudio de las radiaciones juega un papel crucial en la biología evolutiva y, en los últimos
años, ha habido un mayor interés tanto en las causas como en las consecuencias de las
radiaciones. Aunque el término radiación se usa con frecuencia en biología evolutiva, sin
embargo, solo se define vagamente.
Desde un punto de vista estrictamente taxonómico, la radiación constituye un grupo monofilético
relativamente grande de taxones (Gittenberger).1991). La bella y las martas (2004), sin embargo,
sugirió considerar la tasa de especiación cuando se habla de radiaciones, ya que el término se aplica
a grupos monofiléticos relativamente grandes de especies que evolucionaron gradualmente durante
largos períodos de tiempo o son el resultado de una especiación rápida. De hecho, algunos
trabajadores incluso usan el término radiación o especiación “explosiva” (revisado en Schön y
Martens).2004), enfatizando que en estas radiaciones las especies evolucionaron en un período de
tiempo relativamente corto (por ejemplo, Gavrilets y Vose).2005).
Otro aspecto conceptual de la investigación de la radiación que ha desconcertado a los científicos
durante décadas es la diferenciación entre radiaciones adaptativas y no adaptativas. Losos y Miles (
2002) señaló que un mayor progreso en el estudio de las radiaciones se ve obstaculizado por el
hecho de que no existen criterios cuantitativos fiables para determinar si un determinado grupo está
sujeto a radiación adaptativa. De hecho, incluso el término radiación adaptativa se discute de manera
muy controvertida.
La radiación adaptativa clásica fue propuesta por Osborn (1918) y refinado por Simpson (1949)
como una diversificación extrema de un grupo que evoluciona en diferentes direcciones permitidas
por sus propias potencialidades y por los entornos encontrados. Aunque el término radiación
adaptativa se usa en un sentido bastante amplio, el entendimiento común asocia estas radiaciones
con linajes que se multiplican rápidamente, lo que conduce a la evolución de la diversidad fenotípica
y al subsiguiente llenado de nuevos nichos (Simpson).1953; Minkoff1983; Futuyma no está siguiendo
a nadie. Autodesk_new1998; Schluter1998, 1999 .2000; Hermosas y Martas2004; Seehausen2004;
Rundell y precio2009).
El famoso genetista Sewall Wright (1929, 1999 .1931, 1999 .1932) introdujo un
concepto alternativo a las radiaciones adaptativas; la de “tipo no adaptativo” (Wright
1931: p.127) enfatizando el papel de la deriva ("Parece, sin embargo, que las diferencias
reales entre las razas y subespecies geográficas naturales son en gran medida del tipo
no adaptativo que se espera de la deriva aleatoria", Wright1931: p.127) en pequeñas
poblaciones subdivididas ("El aislamiento completo [de poblaciones subdivididas]
origina nuevas especies que difieren en su mayor parte en aspectos no adaptativos...",
Wright 1931: pág. 158). Incluso llegó a decir que "el principal mecanismo evolutivo en el
origen de las especies debe ser, por lo tanto, esencialmente no adaptativo". (Wright
1932: p.364).
Unos 60 años después, Gittenberger (1991) revivió la discusión al señalar que muchos
trabajadores todavía usan el término radiación adaptativa pero que el epíteto “adaptativo”
sugiere que las radiaciones per se no necesariamente implican adaptación. Como
consecuencia, refinó el término "radiación no adaptativa" como una forma especial de
especiación alopátrica, que consideró "un tipo de diversificación no acompañada de
adaptación a varios nichos significativamente diferentes y, por lo tanto, .
El lado descuidado de la moneda: radiaciones no adaptativas en caracoles de primavera 553
dando como resultado un grupo de especies alopátricas que están aisladas debido a interacciones
competitivas” (Gittenberger1991: pág. 263).
Apenas dos años después, Davis (1993) introdujeron el término “radiación morfoestática”
como una radiación monofilética de especies que involucran baja diversidad anatómica, poca
diversificación de hábitat (nicho) y con especies en alopatría. Basándose en una comparación
de radiaciones adaptativas y no adaptativas, sugirió que, en muchos grupos de invertebrados
(y en particular en moluscos), las radiaciones morfoestáticas (en lo sucesivo, sinonimizadas
como radiaciones no adaptativas) no son la excepción sino la regla.
A pesar del interesante concepto teórico y práctico de las radiaciones no adaptativas, esta
forma de radiación sigue sin estudiarse en gran medida, ya que muchos biólogos evolutivos
se centran en las radiaciones adaptativas. Sin embargo, en su libro de texto sobre radiaciones
adaptativas, Schluter (2000: p.18) señaló que “la radiación adaptativa no puede asumirse a
priori, y la radiación no adaptativa es una hipótesis nula lógica”. También afirmó que, en las
radiaciones no adaptativas, la evolución de las especies no está impulsada por el medio
ambiente (ver también Rundell y Price).2009).
Sin embargo, Sudhaus (2004: pp. 127-128) rechazó rotundamente "algo como la radiación
no adaptativa" ya que "no se puede demostrar la no adaptación, ya que es principalmente
imposible demostrar que una estructura no tiene función". En respuesta, Gittenberger (2004)
señalaron que la deriva genética y los efectos fundadores pueden dar lugar a la especiación
en ausencia de una clara diferenciación de nicho, es decir, en una radiación no adaptativa.
Reconociendo que pueden ocurrir situaciones intermedias entre las radiaciones adaptativas y
no adaptativas, sugirió que las radiaciones pueden comenzar con una etapa inicial no
adaptativa y luego volverse adaptativas. En cambio, Davis (1993, 1999 .1994), que realizó
estudios intensivos sobre radiaciones no adaptativas en gasterópodos de agua dulce del
sudeste asiático y bivalvos norteamericanos, rechazó la noción de Gittenberger (2000).1991) y
sugirió que adaptativo y no adaptativo son condiciones discretas y bien discernibles.
A pesar de los puntos de vista parcialmente diferentes de Gittenberger (1991, 1999 .2004) y Davis
(1993), se pueden derivar tres criterios para las radiaciones no adaptativas (ver también Brooks et al.
1985; Donar1997). Dentro de una radiación no adaptativa:
(1) No hay una clara diferenciación de nicho,

(2) Las especies suelen tener un bajo grado de variación fenotípica, y
(3) Las especies suelen evolucionar en alopatría (o peripatría).
Probablemente porque los malacólogos reintrodujeron el epíteto no adaptativo, se han

estudiado varias radiaciones no adaptativas en los caracoles terrestres (p. ej., Gittenberger).
1991; Según Cameron et al.1996; Gittenberger y Hausdorf2004; Wilke y Duncan 2004; Cocinar
2008; Sauer y Hausdorf2009), y particularmente en caracoles de agua dulce (e.g., Davis et al.
1992; Wilke y Pfenninger2002; Según Wilke et al.2002; Atwood et al.2003; Según Clark et al.
2003). De hecho, algunos estudios evolutivos innovadores (p. ej., "¿Qué hace que un taxón de
rango reducido?" de Ponder y Colgan2002) se realizaron utilizando presuntas radiaciones no
adaptativas de caracoles de primavera australianos.
Recientemente, el concepto de radiación no adaptativa también se ha vuelto más
popular en otros grupos sistemáticos, por ejemplo, en peces (Albertson et al.1999), en
anfibios (Kozak et al.2006; Despertar2006), en reptiles (p. ej., Losos y Miles2002), en
554 T. Wilke et al.
Platelmintos (Brooks et al.1985), e incluso en organismos unicelulares (por ejemplo, Leander y

Keeling2003). Sin embargo, muchos estudios de radiaciones no adaptativas están restringidos
a áreas geográficas pequeñas (por ejemplo, lagos antiguos o islas oceánicas) o a pequeños
grupos sistemáticos. Por lo tanto, aún falta una imagen completa de las radiaciones no
adaptativas.
En un excelente artículo de revisión, Barraclough y Nee (2001)
discutieron varios problemas generales en los estudios de especiación y
radiación basados en filogenias moleculares. Entre otros, destacan la
necesidad de utilizar enfoques multilocus y calibrar árboles en tiempo real
(enfoque de reloj molecular), y de distinguir los eventos de radiación de la
especiación regular.
Mientras que se han logrado algunos avances en la resolución de problemas estadísticos y

teóricos en los estudios de radiación (p. ej., Pybus et al.2002; Gavrilets y Vose2005; Freckleton y
Harvey2006; Seehausen2007; Según Oliver et al.2009), persisten problemas de taxón y de muestreo
(p. ej., Guyer y Slowinski1993). En particular, los grupos de animales continentales se han visto
afectados en gran medida por los humanos, ya sea directamente o por la pérdida de hábitat. Esto
hace que sea extremadamente desafiante estudiar los eventos de radiación en, por ejemplo, Europa
o América del Norte porque idealmente se necesitaría un grupo monofilético que se distribuye por
todo el continente, pero que no se ve afectado por los humanos o lo está poco.
Un grupo potencial que podría cumplir con estos criterios es el género de caracoles de
primavera. Bythinella (Rissooidea: Bythinellidae, Radoman1976; véase también Ponder et al.
2008). Los representantes se encuentran en toda Europa continental, desde el norte de
Alemania hasta Sicilia, y desde España hasta Turquía y Ucrania. Sólo están ausentes en
Escandinavia, en el noreste de Europa (las repúblicas bálticas, Bielorrusia y Rusia) y, quizás, en
Portugal. A excepción de la Europa continental, se encuentran en algunas islas del
Mediterráneo, así como en la parte asiática de Turquía. Actualmente, unos 83 europeos
porthinellaSe reconocen especies y subespecies (Servicio Web de Fauna Europaea).2004).
En el presente artículo, nuestro objetivo es revisar los patrones y procesos de las
radiaciones en este taxón modelo dentro del marco teórico de las radiaciones adaptativas
frente a las no adaptativas. Para hacerlo, primero introducimos las características ecológicas y
biogeográficas generales deporthinellaspp. y discutir varios enfoques para identificar
radiaciones dentro de este grupo de caracoles, incluido un nuevo enfoque presentado aquí.
Luego, probamos los criterios para las supuestas radiaciones no adaptativas en este taxón, y
finalmente participamos en una discusión de las fuerzas impulsoras de las radiaciones no
adaptativas en general y deporthinellaradiaciones en particular, concluyendo con un intento
de responder a la pregunta de si las radiaciones adaptativas y no adaptativas constituyen
procesos distintos.
Para dar cuenta de la naturaleza evolutiva de las radiaciones, aquí aplicamos el término
solo a las radiaciones que están asociadas con una especiación rápida en la especie en lugar
de un nivel taxonómico más alto (sensu Mayr1963; Sanderson1998; Schluter1998, 1999 . 2000;
Gittenberger2004; Hermosas y Martas2004) y relacionan específicamente las radiaciones con
las oportunidades ecológicas (Simpson1953; Schluter1998; Rundell y precio 2009).
2 El género del caracol de primaveraporthinella
Especies de caracoles de primavera del géneroporthinellaestán, como sugiere el nombre común,

restringidas principalmente a manantiales con temperaturas del agua relativamente bajas (Fig. 1).1).
Ocasionalmente, también se encuentran en las salidas de manantiales y arroyos asociados, así como en
Higo. 1Hábitats seleccionados paraporthinellaspp. (a)Manantial de reoceno (Alemania,NegroBosque, cerca

de Oberried,B. badensis), (b)Spring Creek (Alemania,NegroBosque, cerca de Baden,B. badensis),
(C)Limnocrene Spring (Croacia, Gacko Pond, cerca de Sinac,B. caminar), (d)Salto helocreno (Alemania,
Hoherodskopf,B. compresas), (mi)Primavera capturada conporthinellapoblación (Alemania, Ródano,
cerca de Sinntal-Schwarzenfels,B. compresas), (F)Primavera capturada conporthinellapoblación
extinguida (España, cerca de Jávea)
556 T. Wilke et al.
hábitats hipogeos como cuevas o aguas subterráneas (por ejemplo, Jungbluth1972; Boeters 1968;
Bichain et al.2007a). Aunque los manantiales per se son hábitats en peligro de extinción y algunos
manantiales de tierras bajas europeas han sido destruidos (p. ej., Szarowska2000), porthinellalos
especímenes a menudo son muy abundantes en áreas montañosas relativamente no afectadas de
las cuales se describen la mayoría de las especies respectivas. Pero incluso en las zonas bajas
pobladas,porthinellapuede ser bastante abundante, siempre que los manantiales proporcionen los
recursos necesarios.
Como señala Radoman (1976: p.134), las características ecológicas de los caracoles de primavera
los convierten en candidatos adecuados para los estudios de especiación y radiación: son
monofiléticos, ricos en especies, ampliamente distribuidos, por lo general tienen hábitats muy
restringidos y “están total y probablemente definitivamente aislados territorialmente” . Aunque los
mecanismos de dispersión enporthinellaspp. son aún en gran parte desconocidos, se ha sugerido
que los individuos adultos son bastante resistentes a la desecación, y se presume que los pájaros o el
viento con hojas los dispersan (Falniowski1992). No obstante, estos y otros vectores potenciales,
como peces, insectos o roedores, son raros en los manantiales (particularmente en los reocrenos,
donde los caracoles de primavera se encuentran con mayor frecuencia).
Además de la supuesta falta de una clara diferenciación de nicho, también hay una variación
anatómica relativamente pequeña enBythinella.La planta de estos caracoles dioicos pequeños (de 2 a
5 mm de altura de la concha) es, como en muchos otros géneros rissooideanos, simple, y la
delimitación de especies, tradicionalmente basada en la morfología de la concha y la anatomía
genital, es a menudo un tema de debate (p. ej., Giusti ) y Pezzoli1977; Mazán y Szarowska2000; En
Haase et al.2007). Sin embargo, algunos caracteres de la concha son más variables y se han utilizado
para diferenciar taxones principalmente de radiaciones presumiblemente diferentes (Fig. 1).2; véase
también Radoman1976). Los primeros estudios genéticos sobre grupos restringidos deporthinella
spp. en el sur de Polonia (por ejemplo, Falniowski et al.1998), sur de Francia (Bichain et al.2007a,
1999 .b), Eslovaquia/Hungría (Szarowska y Wilke2004) y el sur de Austria/Eslovenia (Haase et al.2007)
indicó que la delimitación de especies debe basarse en una combinación de morfología, anatomía y
genética.
Dadas estas características interesantes, no sorprende que los caracoles rissooideanos
restringidos a los hábitats de primavera se hayan utilizado para estudios evolutivos integrales en
Australia (por ejemplo, Colgan y Ponder).1994; Ponder et al.1996; Ponder y Colgan 2002; Pérez et al.
2005) y en América del Norte (p. ej., O'Brien y Blinn1999; Liu et al.2003; Molina et al.2004). Por el
contrario, las radiaciones de los caracoles de primavera en Europa quedaron poco estudiadas, a
pesar de su potencial para inferir las fuerzas impulsoras que desencadenan ráfagas de radiaciones
no adaptativas. Las posibles excepciones incluyen aloenzimas restringidas geográficamente (Klemm
y Schlegel).1989; Según Falniowski et al.1998; Según Szarowska et al.1998; Mazán y Szarowska2000;
hermano€andle et al.2005) y estudios de secuenciación de ADN (Szarowska y Wilke).2004; Bichain et
al.2007a; Bichain et al.2007b; En Haase et al.2007) y el reciente estudio genético de todo el taxón de
Benke et al. (2009).
No obstante, las radiaciones no adaptativas en Europa (y en otros lugares) están poco estudiadas
en general. Hay algunas radiaciones crípticas que se han investigado en partes de Europa (p. ej.,
Gittenberger).1991; Según Pinceel et al.2004), pero no tenemos conocimiento de ningún estudio a
gran escala de grupos de animales continentales que haya intentado abordar el problema de la baja
diferenciación anatómica y de nicho. La falta de estudios relevantes puede deberse, en parte, a los
efectos en gran medida adversos que los humanos han tenido en
Higo. 2Variación en la morfología de la conchaporthinellaspp. Asignaciones a las respectivas radiaciones (véanse las
Figs.3) están dadas porcírculos de colores,si es aplicable. Tenga en cuenta que los especímenes figurados debávara y
B. austriacoasí como deB opacoyB. robicianaocurrió en simpatía. Ver texto para más detalles
la mayoría de los taxones europeos y sus respectivos hábitats, lo que hace muy difícil inferir patrones
de radiación en el espacio y el tiempo.
Las radiaciones relativamente no afectadas del género caracol de primaveraporthinellapodría por
tanto constituir un paradigma para el estudio de las causas y consecuencias de las radiaciones en
general y de las radiaciones no adaptativas en particular.
558 T. Wilke et al.
3 Identificación de radiaciones en el géneroporthinella
Para estudiar la naturaleza de las radiaciones dentro de un grupo dado, es necesario identificar
primero las radiaciones individuales. Si uno considera que todos los grupos monofiléticos
relativamente grandes de especies que evolucionaron gradualmente durante largos períodos de
tiempo son radiaciones, entonces estas radiaciones podrían identificarse fácilmente a partir de
filogenias: todos los clados más grandes constituirían radiaciones con radiaciones anidadas siendo
posibles. todo el genero porthinellaasí como todos los subclados más grandes dentro del género
constituirían radiaciones. Sin embargo, si el concepto de radiación se considera dentro del marco de
la especiación rápida, se requerirán criterios operativos y una estadística de prueba adecuada.
Intentos de estimar las diferencias en las tasas de diversificación con base en gráficos de
linaje a través del tiempo ygramo-Las estadísticas que apuntan al aspecto de cambios rápidos
de diversificación fueron realizadas, por ejemplo, por Pybus y Harvey (2000) y Pybus et al. (
2002). Sin embargo, el propósito original de este enfoque no era identificar radiaciones
(individuales) sino investigar cambios en las tasas de diversificación a lo largo del tiempo en
un taxón determinado.
Guyer y Slowinski introdujeron enfoques explícitos para identificar radiaciones basadas en
diferencias en la topología del árbol.1993) utilizando una prueba de desequilibrio del árbol,
por Purvis et al. (1995) con su prueba de cladogénesis relativa (ECA), de Foote (1996) utilizando
un enfoque de disparidad morfológica, y por Chan y Moore (2004) con SymmeTree. Dos de
estos enfoques se aplican en el presente documento (Fig.3).
El RCT compara dos o más linajes ancestrales de igual edad utilizando el número de
sus descendientes contemporáneos. Si un linaje dejó considerablemente más
descendientes que el otro, entonces se sugiere un evento significativo de especiación
rápida (o extinción reducida).
SymmeTree implementa pruebas de árbol basadas en topología de variación de la tasa de
diversificación, incorporando información sobre la diversidad relativa de todos los nodos internos de un
árbol determinado. La probabilidad de un cambio a lo largo de la rama interna solitaria se calcula como una
función de los cocientes de probabilidad y la probabilidad acumulada para cada estadística se obtiene
mediante simulaciones de Monte Carlo.
Aplicación de ambos enfoques a un citocromo mitocondrialCFilogenia basada en la
subunidad I de oxidasa (COI) de 50 especies nominales deBythinella (taxonomía según
Fauna Europaea Web Service2004) resultó en la identificación de tres posibles
radiaciones con SymmeTree (barras blancas en la Fig. 1).3) y dos radiaciones con el RCT
(barras negras en la Fig. 1).3).
Aunque ambos enfoques se basan en criterios convincentes para identificar
radiaciones (ver arriba), una comparación de los resultados de estas dos pruebas apunta
a varios problemas:
(1) Las radiaciones individuales identificadas son muy diferentes y también difieren en gran medida en
profundidad (mientras que en nuestro ejemplo SymmeTree infirió pocas radiaciones más profundas,
solo se encontraron radiaciones más jóvenes con el RCT);
(2) Ambos enfoques dedujeron radiaciones anidadas haciendo imposibles las comparaciones directas
de radiaciones individuales;
Higo. 3Radiaciones identificadas en el géneroporthinellabasado en tres enfoques diferentes.Círculos negrosen los

nodos ybarras negrasen taxones: prueba de cladogénesis relativa (pag <0.01),círculos blancosen los nodos ybarras
blancasen taxones: SymmeTree,barras de coloresat taxa: un nuevo enfoque introducido en el presente artículo con un
marco de tiempo del Plioceno/Pleistoceno. El árbol COI bayesiano de consenso impuesto por reloj se generó a partir
del conjunto de datos de 458 sujetosporthinellaespecímenes de 142 sitios presentados en Benke et al. (2009) bajo el
modelo de mejor ajuste de la evolución de la secuencia (HKY+I+).GRAMO),podado a 50 taxones según Fauna Europaea
Web Service (2004) (los especímenes no asignables a una especie nominal fueron etiquetados con "sp."). Los grupos
externos se eliminaron posteriormente. Para el análisis del reloj se utilizó el método de Wilke et al. (2009) se usó con
el comienzo del Plioceno estimado a partir de una frecuencia de reloj específica del modelo triand de 1.84 - 0.24% My
-1
560 T. Wilke et al.
(3) Dado que ambos enfoques se basan en cambios en los eventos filogenéticos, los nodos mal
soportados pueden influir gravemente en los resultados (ver el pobre apoyo de las radiaciones
inferidas con SymmeTree en la Fig. 1).3),
(4) Estos enfoques basados en cambios son propensos a errores introducidos por taxones faltantes
(tanto extintos como no muestreados; ver Guyer y Slowinski).1993),
(5) También son propensos a problemas con la identificación de especies (ver Haase et
al. 2007y Bichain et al.2007apara una discusión de conceptos de especies y
problemas asociados enBythinella).
No pretendemos criticar las actuaciones de RCT y SymmeTree utilizadas anteriormente.

Ambos enfoques han demostrado ser útiles en una serie de estudios evolutivos. Más bien,
tratamos de crear conciencia sobre los problemas generales asociados con la identificación de
las radiaciones. Particularmente cuando se estudia la naturaleza y el mecanismo de las
radiaciones, puede ser ventajoso aplicar criterios más directos y sólidos para identificar las
radiaciones. Además, teniendo en cuenta que la naturaleza de las radiaciones puede cambiar
con el tiempo, dicho concepto también debería incorporar la edad absoluta de las radiaciones,
lo que permitiría distinguir las radiaciones a nivel de especie de las radiaciones de nivel
superior.
Una solución potencial podría provenir del concepto de bandada de especies (lago
antiguo) en combinación con información sobre la escala temporal de los eventos de
especiación. Según Greenwood (1984) y Blanco y Marta (2004), una bandada de especies
es un grupo monofilético de al menos tres especies que son típicamente endémicas del
lago. Estos últimos trabajadores también indicaron la sinonimia de los términos especie
bandada y radiación a nivel de especie al ignorar el criterio de endemicidad.
El concepto de bandada de especies, sin embargo, no aborda explícitamente la tasa de evolución. Esto se
debe a que la mayoría de las bandadas de especies generalmente no exceden la edad del lago respectivo y, a
menudo, son del Plioceno o Pleistoceno (por ejemplo, Schultheiß et al.2009). Incluso las bandadas de
especies en el lago antiguo más antiguo de la tierra, el lago Baikal, demostraron ser relativamente jóvenes
(ver, por ejemplo, la discusión en Wilke).2004). Por lo tanto, la edad limnológica del lago respectivo
generalmente proporciona el marco de tiempo de la evolución intralacustre.
La situación es diferente en las radiaciones. Dentro de un taxón más grande, puede haber
radiaciones que comenzaron hace decenas de millones de años o radiaciones que tienen solo unos
pocos cientos de miles de años (p. ej., Streelman y Danley).2003). Las radiaciones pueden ocurrir a
nivel de especie o involucrar grupos taxonómicos más altos. Sin embargo, si los procesos evolutivos
fundamentales son de interés, entonces esto se hace idealmente a nivel de especie porque los
eventos de especiación son los bloques de construcción reales de las radiaciones. Por lo tanto, si se
van a estudiar los procesos de especiación rápida y se van a comparar las radiaciones individuales,
entonces se debe considerar un marco de tiempo apropiado que, en promedio, solo comprende
unos pocos eventos de especiación consecutivos. La extensión real del marco de tiempo puede variar
de un taxón a otro. Los patrones de radiación en los cíclidos, por ejemplo, pueden deducirse dentro
de un marco de tiempo de unos pocos cientos de miles de años (p. ej., Seehausen).2002, 1999 .2006;
Streelman y Danley2003). Paraporthinellaspp., este período de tiempo puede ser más largo. Benke et
al. (2009) mostró que la mayoría de las especies existentes evolucionaron durante el Plioceno/
Pleistoceno, proporcionando así un marco de tiempo potencial para el estudio de las radiaciones en
este grupo.
Combinando el concepto de bandada de especies (Greenwood (1984) con el marco

temporal de especiación rápida (p. ej., Gittenberger2004), aquí sugerimos un enfoque práctico
para identificar las radiaciones a nivel de especie:
Una radiación es un grupo monofilético de al menos tres especies que evolucionaron dentro de un
período específico de taxón relativamente corto, que generalmente comprende solo unos pocos eventos de
especiación consecutivos.
Con base en un marco de tiempo del Plioceno/Pleistoceno, se pueden identificar ocho
radiaciones en nuestroporthinellafilogenia (barras de colores en la Fig.3). La distribución
geográfica de estas radiaciones se muestra en la Fig.4. Reconociendo que un marco de tiempo
apropiado puede ser difícil de establecer, que el marco de tiempo puede diferir entre
radiaciones adaptativas y no adaptativas (ver más abajo), y que tal marco de tiempo requiere,
por ejemplo, análisis de relojes moleculares y conocimiento detallado de patrones evolutivos
en el grupo estudiado, el enfoque sugerido aquí tiene una serie de ventajas sobre los
enfoques basados en turnos.
Figura 4Localidades de poblaciones deporthinellaspp. estudiado en Europa y Asia occidental, y se infiere la

distribución geográfica de las radiaciones.Coloresynúmerosrefiérase a las radiaciones dadas en la Fig.3.
Puntos negrosrepresentan localidades de especies que no pudieron ser asignadas a las radiaciones. Las
poblaciones simpátricas se indican mediantecuadrados (cuadrado amarillo/verde:Glonn Springs en Alemania
conbávarayB. austriaca; Cuadrado azul:manantial en la carretera en Potoče, Eslovenia conB. opaca yB.
robiciana).Tenga en cuenta que el diseño de muestreo para algunas áreas, particularmente en los Balcanes,
las montañas de los Cárpatos orientales y Asia Menor, está incompleto. Por lo tanto, se podrían descubrir
más radiaciones en el futuro.
562 T. Wilke et al.
Las radiaciones individuales son directamente comparables porque comprenden el mismo marco
de tiempo y no están anidadas. Como no se requieren cambios (y, por lo tanto, comparaciones de al
menos dos grupos monofiléticos), este enfoque puede ser menos sensible:
– A problemas asociados con clados pobremente soportados,

– A problemas con taxones extintos o no muestreados, y
– A los artefactos resultantes de problemas asociados a la determinación de especies.
4porthinellaspp. y los Criterios para Radiaciones No Adaptativas
Probar la naturaleza de las radiaciones, es decir, si son adaptativas, no adaptativas o una

combinación de ambas, sigue siendo una tarea desafiante en la biología evolutiva. Esto se
debe a que los diferentes enfoques para identificar las radiaciones pueden verse afectados
por diversos grados de problemas metodológicos (p. ej., taxones faltantes, taxonomía) y
pueden conducir a resultados sustancialmente diferentes (ver Fig.3). Por lo tanto, la
identificación subyacente de las radiaciones ya sigue siendo problemática y, hasta cierto
punto, arbitraria. Otro problema importante está relacionado con los criterios comprobables
para distinguir las radiaciones adaptativas de las no adaptativas. Los principales criterios para
las radiaciones no adaptativas, tal como lo describe Gittenberger (1991,2004) y Davis (1993),
son sencillos: las especies resultantes suelen tener un bajo grado de variación anatómica, no
hay una clara diferenciación de nicho y las especies de la misma radiación suelen ser
alopátricas o peripátricas (ver Introducción). Estos criterios, sin embargo, solo son aplicables a
las radiaciones a nivel de especie porque en radiaciones de nivel superior uno puede
encontrar diferentes patrones en diferentes radiaciones anidadas o posibles transiciones
entre radiaciones adaptativas y no adaptativas como sugiere Gittenberger (2004) y Rundell y
Price (2009).
En tales casos, el nuevo enfoque para identificar las radiaciones presentado anteriormente
podría ser útil porque proporciona una restricción temporal.
Basado en elporthinellaradiaciones identificadas a partir de la filogenia que se muestra en
la Fig.3, aquí proporcionamos datos ecológicos y morfológicos seleccionados, así como
información sobre las relaciones alopátricas/peripátricas versus parapátricas/simpátricas de
porthinellaspp. para probar si los criterios para las radiaciones no adaptativas son aplicables.
4.1 Variación ecológica (nicho) dentroporthinellaRadiaciones
Probar si las especies prefieren diferentes condiciones ecológicas (diferenciación de nicho) es

extremadamente difícil porque la diversificación puede haber ocurrido en dimensiones de nicho
desconocidas para nosotros, no evaluables por nosotros, o durante etapas de la historia de vida no
consideradas (sensu Schön y Martens).2004). Particularmente en radiaciones con especies que están
restringidas a áreas geográficas pequeñas y con principalmente alopátricas
distribuciones, tales estudios son desafiantes, si no imposibles. Esto se debe a que la

separación geográfica provoca inevitablemente una fuerte autocorrelación espacial de, por
ejemplo, las condiciones climáticas y, por lo tanto, una potencial diferenciación ecológica entre
especies.
Para evitar o al menos mitigar estos problemas, elegimos específicamente el género
porthinellacomo paradigma. Sus hábitats de manantial se encuentran entre los hábitats
continentales mejor descritos y más estables que se conocen (a pesar de que algunos
manantiales pueden ser propensos a la desecación o inundación). Además, en todo el rango
de distribución del géneroBythinella,Los manantiales se caracterizan típicamente por
características de hábitat similares, como temperatura del agua baja y constante, bajo flujo de
agua, condiciones oligotróficas, falta de vegetación límnica y aparente falta de competidores
(ver Secc.2). Reconociendo que existen diferentes tipos de resortes como los reocrenos,
limnocrenos, etc. (Fig.1), encontramos que las poblaciones de la misma especie a menudo
viven en diferentes tipos de manantiales (ver Fig.1a, b, y d, e). Por lo tanto, es probable que
estos diferentes tipos de resortes no reflejen variaciones de nicho.
Dada la amplia distribución geográfica deporthinellaspp. en Europa y Asia occidental
existen, por supuesto, gradientes climáticos que pueden afectar la diferenciación de nichos.
Los manantiales en el sur de Europa, por ejemplo, suelen tener temperaturas medias del agua
ligeramente más altas (Schwoerbel1999). También son más propensos a la desecación en
verano. Nuestro análisis de la distribución espacial de las radiaciones (Fig.4), sin embargo,
muestra que los individuosporthinellalas radiaciones suelen estar restringidas a una estrecha
banda latitudinal. Por lo tanto, es probable que las especies dentro de las radiaciones no se
vean afectadas por los gradientes latitudinales. La única excepción es la radiación #8, que
tiene una distribución discontinua al este de los Alpes (norte de España y sur de Francia) y al
norte de los Alpes (Alemania, Francia, Bélgica y Suiza). Como muestran Benke et al. (2009),
esta distribución disjunta está asociada con las glaciaciones del Pleistoceno (Fig.6). Hoy, los
hábitats montañosos en la parte norte del área de distribución tienen condiciones climáticas
comparables a los hábitats montañosos en la parte sur de la distribución. Por lo tanto, los
gradientes latitudinales posiblemente pueden ignorarse al considerar la diferenciación de
nicho deporthinellaespecies dentro de las radiaciones individuales.
Reconociendo las dificultades metodológicas para caracterizar las diferencias de nicho
descritas anteriormente, nuestros estudios no arrojaron ninguna información que pudiera
socavar la suposición de la falta de una clara diferenciación de nicho enporthinellaespecies
pertenecientes a la misma radiación.
4.2 Variación fenotípica entre y dentro deporthinella

Radiaciones
Shell variaciones entre y dentro de individuoporthinellaLas radiaciones se estudiaron

utilizando ambos análisis de variables canónicas (CVA; Haase et al.2007) y análisis de función
discriminante (DFA; artículo actual). Como ejemplos de radiaciones individuales, aquí usamos
dos grupos contrastantes; una radiación relativamente pequeña con un rango restringido
564 T. Wilke et al.
que ocurre al SE de los Alpes en Austria y Eslovenia (radiación #6 en la Fig.3; véase también la fig.4), y
presumiblemente la radiación más grande en nuestra filogenia, que ocurre al W y NW de los Alpes
desde el norte de España hasta el norte de Alemania (radiación #8 en la Fig.3; véase también la fig.4).
Para la radiación n.° 6, se realizó un CVA de siete mediciones cuantitativas de

caparazón de >200 individuos. En el gráfico del CVA (ver Fig.5en Haase et al.2007) sólo la
población deB. robicianaestaba claramente diferenciada de las demás poblaciones; cada
uno de los cuales se superpuso al menos con otras tres poblaciones. No obstante, un
MANOVA rechazó de forma muy significativa la hipótesis nula de muestras idénticas
(Wilk'sL¼0.02659,F54.835,7¼16.04,pag <0,0001). Esto indica cierta diferenciación a nivel de
población y apunta a un problema común en los gasterópodos de agua dulce: una
variabilidad relativamente alta de los caracteres de las conchas a nivel de población, lo
que podría enmascarar las diferencias a nivel de especie. El hecho de que
B. robicianapodría distinguirse de los otros miembros de las radiaciones, sin embargo, no es
sorprendente. Mientras que la mayoría de las especies de esta radiación tienen la típica forma
de caparazón ovado-cónico deBythinella,la concha deB. robicianaes valvatiforme (una forma
de concha que es rara enporthinellaspp.; ver figura2). Cualitativamente, las conchas de las
poblaciones investigadas no pudieron distinguirse en cuanto a estructura de teleoconch o
protoconch (ver figs.2–4en Haase et al.2007). Además, con respecto a la anatomía de partes
blandas (tentáculos cefálicos, número de filamentos branquiales, osfradio, ctenidium,
Figura 5Análisis de función discriminante de cuatro mediciones de caparazones para un conjunto de

datos restringido que comprende 495 individuos de 12 especies de la radiación #8 en la Fig.3basado
en la clasificación del Servicio Web Fauna Europaea (B. badensis¼negro, B. bicarinata¼azul oscuro, B.
compresa¼ blanco, B. dunkeri¼rojo, bcf.Dunkeri¼amarillo, B. padiraci¼rosa, B. parvula¼gris, B.
reyneisii¼cian, B. poujolensis¼verde oscuro, B. rufescens¼verde, Bythinellasp. 13¼rojo oscuro,
Bythinellasp. 14¼azul).La primera función explica el 52% y la segunda función el 33% de la
variabilidad morfológica
riñón, rádula, estómago, recto, ovario, oviducto paleal y renal, glándula albumen, receptáculo
seminal, bursa copulatrix, testículo, vesícula seminal, conducto deferente, próstata y pene con
glándula accesoria típica deBythinella),las especies investigadas también eran prácticamente
idénticas (véanse las Figs.4y6en Haase et al.2007).
Un DFA (todas las medidas se transformaron en log10 antes del análisis) a través de la radiación
#8 (ver Fig.5) revelaron una variación relativamente grande en el morfoespacio de la concha tanto
dentro como entre especies, pero con una superposición sustancial y sin agrupaciones distintas de
individuos. Esto sugiere que, en esta radiación, no se han producido fuertes cambios de adaptación
en la morfología durante la especiación.
Además, un DFA de 1331 individuos de 33 especies diferentes pertenecientes a ocho
radiaciones diferentes también dio como resultado una agrupación deficiente (datos no
mostrados). Por lo tanto, con pocas excepciones, los caracteres de shell utilizados aquí no
pueden distinguir inequívocamenteporthinellaspp. ya sea dentro o entre las radiaciones. Sin
embargo, en un segundo enfoque, dividimos la variación en la morfología entre las
radiaciones y entre las especies dentro de las radiaciones (la función ADONIS en el paquete
VEGAN en R, ver http://vegan.r-forge.r-project.org/). Encontramos que el 32% de la variación
morfológica se distribuye entre las radiaciones y el 19% entre las especies dentro de las
radiaciones, lo que indica que existe algún grado de diferenciación morfológica,
particularmente entre las diferentes radiaciones.
Figura 6Filogeografía del Pleistoceno deporthinellaspp. (modificado de Benke et al.2009) que muestra la distribución
espacial de los principales clados. Los clados I-X se refieren a linajes presentes en el árbol filogenético de Benke et al. (
2009) y están coloreados de acuerdo con las radiaciones identificadas en la Fig.3. Tenga en cuenta que solo se
muestran los clados y las radiaciones que están asociados con los refugios del Pleistoceno. Las regiones que
probablemente sean el refugio glacial de un clado según los resultados combinados de los análisis filogenéticos se
indican medianteeclosiones (véase Benke et al.2009para detalles). La población simpátrica de
bávarayB. austriacaestá indicado por uncuadrado amarillo/verde
566 T. Wilke et al.
4.3 Simpatría versus Alopatría deporthinellaspp.
De un total de 173 manantiales y sitios relacionados que alberganporthinellaspp. estudiado en

toda Europa y Asia occidental (Fig.4), 171 sitios contenían una sola especie. Sólo dos sitios
(Figs.2y4) estaban habitadas por especies simpátricas, los manantiales de Glonn en Alemania (
bávaraþB. austriaca)y un manantial al borde de la carretera en Potoče, Eslovenia (B. opacaþB.
robiciana).Aunque es probable que se encuentren más poblaciones simpátricas en el futuro,
estas cifras sugieren fuertemente una ocurrencia en gran parte alopátrica deporthinellaspp.
De hecho,bávarayB. austriacade los manantiales de Glonn pertenecen a dos radiaciones
diferentes (#1 y #4 en las Figs.3y4), y por lo tanto no violan el supuesto de relaciones
alopátricas o peripátricas de especies pertenecientes a la misma radiación. Benke et al. (2009)
mostró que estas dos radiaciones probablemente estén sujetas a un contacto secundario
resultante de la expansión del rango fuera de los refugios glaciales (Fig.6).
La situación es diferente paraB. opacayB. robicianade Eslovenia. Ambas especies

no solo pertenecen a la misma radiación (radiación #6 en las Figs.3y4), también son
genéticamente casi idénticos (Haase et al.2007), y se ubican en el centro geográfico
aproximado de su radiación (ver Figs.4y6). Esto violaría el supuesto de ocurrencia
alopátrica. Estas dos especies son, sin embargo, morfológicamente muy diferentes.
MientrasB. opacatiene forma de concha ovada-cónica, la concha de
B. robicianaes inusualmente valvatiforme (Fig.2; véase también la información sobre la variación
morfológica proporcionada anteriormente). No sabemos si esta forma atípica de caparazón tiene
algún valor adaptativo. Pero el hecho de que la única ocurrencia simpátrica deporthinella especies de
la misma radiación en nuestro conjunto de datos está asociado con un cambio significativo en la
morfología puede insinuar un barrido adaptativo, lo que en realidad respalda la suposición de
alopatría de especies de la misma radiación no adaptativa.
Todos los datos proporcionados anteriormente cumplen en gran medida los criterios de
Gittenberger (1991, 2004) y Davis (1993) sugerido para especies dentro de radiaciones no
adaptativas. Así, hay evidencia que apunta a la existencia de esta forma de radiación enporthinella
spp. No obstante, al menos con respecto a los caracteres morfológicos, no se pueden excluir
barridos adaptativos ocasionales.
Sin embargo, debe señalarse que una prueba concluyente en cuanto a la existencia
de radiaciones no adaptativas en este punto sigue siendo imposible. En primer lugar,
como comentan Schön y Martens (2004), si se acepta la regla popperiana de que una
hipótesis no puede probarse sino sólo rechazarse, entonces la hipótesis nula lógica para
las radiaciones no adaptativas serían las radiaciones adaptativas (ver también Sudhaus
2004). Pero incluso si se rechaza esta hipótesis nula, la diversificación puede haber
ocurrido en cualquier dimensión de nicho desconocida para nosotros (ver arriba). Por
otro lado, si las hipótesis nulas de radiación adaptativa no pueden rechazarse debido a
diferencias morfológicas/anatómicas o de nicho distintas, es posible que estas
diferencias se deriven puramente del azar y que no tengan ningún valor adaptativo.
Como señala Schluter (2000), la explotación de diferentes entornos solo debe
relacionarse con radiaciones adaptativas cuando se asocian con rasgos que aumentan la
aptitud en estos entornos (ver también von Rintelen et al.2004).
5 Radiaciones no adaptativas enporthinellaspp.
5.1 ¿Qué impulsa las radiaciones no adaptativas?
Para comprender los mecanismos y procesos que impulsan las radiaciones no

adaptativas enporthinellaspp. y otros taxones, podría ser útil observar primero las
radiaciones adaptativas. Existe una abrumadora cantidad de literatura sobre la radiación
adaptativa (p. ej., Gavrilets y Losos,2009y referencias en el mismo) y aunque la
complejidad del asunto ha llevado a numerosas teorías parcialmente contradictorias,
existe un entendimiento común de que las radiaciones adaptativas se asocian
típicamente con adaptaciones a nuevos nichos (ecológicos). La idea básica es que los
cambios rápidos en el entorno ("seguimiento de la adaptación", Eldredge2000), la
colonización de entornos nuevos o infrautilizados libres de competencia y depredación,
o la extinción o sustitución de competidores (“liberación de la competencia”, Simpson
1953; Schluter1998) promover el cambio adaptativo a través de la selección natural (ver
también Schluter1994). Alternativamente, los avances adaptativos pueden permitir la
utilización de los recursos disponibles ("innovaciones evolutivas clave", por ejemplo,
Nitecki y Nitecki1990; Guyer y Slowinski 1993; Hodges1997; Schluter2000; Ree2005).
Mientras que en muchos grupos de animales (y plantas), las radiaciones adaptativas
pueden vincularse a la selección natural, ya sea diversificante o direccional (Schluter2000
; Eldredge2003; Eldredge et al.2005; Gavrilets y Vose2005), las radiaciones adaptativas
en algunos grupos pueden ser el resultado de la hibridación (p. ej., Seehausen2004;
Stelkens y Seehausen2009), selección sexual (disruptiva o diversificadora) o una
combinación de ambas (Seehausen et al.1997,1999; Seehausen2000; Van Oppen et al.
2000; Bolnick2006; salzburgués2009; Sauer y Hausdorf2009).
Estos diferentes escenarios dan cuenta de patrones parcialmente conflictivos observables
en las radiaciones adaptativas. Naturalmente, la diversidad fenotípica (morfológica) es alta en
especies resultantes de radiaciones adaptativas. Aunque, fisiológico (por ejemplo,
Montgomery y Givnish2008), molecular (por ejemplo, Kapralov y Filatov2006), o adaptación del
comportamiento (p. ej., Shaw1995) a nuevos nichos también son posibles, lo que no conduce
necesariamente a la diversidad morfológica. Por otro lado, a menudo es difícil reconocer y
evaluar la diversidad fenotípica. Por lo tanto, la diversidad fenotípica (observada) por sí sola no
es un indicador suficiente para las radiaciones adaptativas. Lo mismo se aplica a las
diversidades de hábitat y nicho de especies de la misma radiación. Por lo general, son altos,
pero pueden ser bajos en los casos en que la radiación adaptativa está asociada, por ejemplo,
con la selección sexual.
Geográficamente, las radiaciones adaptativas a menudo ocurren en regiones
geográficas confinadas con barreras contra la dispersión, lo que impulsa la
diferenciación de especies en parapatriación o simpatría (Schön y Martens2004;
Seehausen2004; Gavrilets y Vose 2005; Bolnick2006; Davison y Chiba 2006; pero véase
Sturmbauer et al.2001y Dieckmann et al.2004para excepciones).
Por el contrario, las radiaciones no adaptativas se relacionan en gran medida con la
especiación alopátrica o peripátrica (Gittenberger1991; Viena2004; Whittaker y Fernández-
Palacios 2007; pero ver Rundell y Price2009que invocan la alopatría en no adaptativo
568 T. Wilke et al.
radiaciones, y la nota sobre la selección sexual a continuación). Aquí, la subdivisión de una

población ancestral en hábitats aislados pero similares a través de eventos de dispersión o
vicarianza puede causar una diversificación que no vaya acompañada de una adaptación a
varios nichos significativamente diferentes (Wright1931; Gittenberger1991). Eldredge (2000)
sugirió que el cambio ambiental puede hacer que los organismos busquen hábitats familiares
a los que ya están adaptados ("seguimiento de hábitats") en lugar de adaptarse a esos
cambios. De hecho, sugirió que esta es una reacción inevitable y más esperada, y Kozak y
Wiens (2006), y Kozak et al. (2006) argumentan que el conservadurismo de nicho podría ser
importante para mantener el aislamiento de las poblaciones locales y, por lo tanto, la
especiación.
Como ya se mencionó en la Introducción, Wright (1931: p.150) destacó el papel de la deriva
genética, particularmente en pequeñas poblaciones subdivididas por radiaciones no adaptativas: “La
separación completa de la especie en subespecies grandes debería ser seguida por una evolución
bastante lenta más o menos paralela, si las condiciones son similares, o por radiación adaptativa,
bajo diversas condiciones, mientras que el aislamiento de pequeños grupos sería seguido por una
radiación relativamente rápida pero en su mayor parte no adaptativa”. Whittaker y Fernández-
Palacios (2007), Gittenberger (2007), y Comes et al. (2008) discutieron las implicaciones de los efectos
fundadores y los cuellos de botella en pequeñas poblaciones aisladas, lo que se sumó al creciente
cuerpo de evidencia de que la deriva genética es una fuerza impulsora importante de las radiaciones
no adaptativas, particularmente en condiciones peripátricas.
Otros mecanismos para las radiaciones no adaptativas informados en la literatura incluyen

el aislamiento reproductivo debido a cambios en la arquitectura cromosómica, duplicaciones
de genes o genomas, hibridación que conduce a poliploidía o infección con patógenos que
confieren incompatibilidades citoplasmáticas (revisado en Schön y Martens2004; véase
también Givnish1997).
Estos mecanismos per se no tienen ningún efecto sobre el fenotipo y, por lo tanto, podrían
ser responsables de la falta de diversidad morfológica que se observa en muchas especies de
radiaciones no adaptativas. Pero, ¿existe siempre estasis morfológica completa en tales
especies? Ciertamente no. Hay una serie de circunstancias y mecanismos que potencialmente
conducen a la diversidad fenotípica (morfológica) dentro y/o a la divergencia entre especies
relacionadas, incluida la expresión ambientalmente controlada de fenotipos, dimorfismo
sexual, características de la historia de vida, parasitismo, mutaciones o simplemente
aberraciones. Estas son posiblemente algunas de las consideraciones que llevaron a
Gittenberger (1991) y Davis (1993) para proponer un bajo grado de variación anatómica en las
radiaciones no adaptativas en lugar de la ausencia total de la misma. Al final, las diferencias
son relativas. Pequeñas variaciones fenotípicas podrían, por ejemplo, detectarse en una
radiación presumiblemente no adaptativa de gasterópodos de agua dulce pirgulínidos del Mar
Negro; estas sutiles diferencias, sin embargo, se vuelven insignificantes al lado de la
espléndida radiación de los gasterópodos pirgulínidos del antiguo lago Ohrid (ver fig.2en
Wilke et al.2007).
De hecho, la esencia de la radiación no adaptativa es la falta de diversificación de nichos, no la
falta de diversificación fenotípica. Además, la diversidad fenotípica y de nicho no está
necesariamente relacionada. Recientemente, incluso la espléndida diversidad de algunos grupos de
cíclidos resultantes de la selección sexual a través del apareamiento selectivo se clasificaron en
radiación no adaptativa (Streelman y Danley2003) ya que la divergencia fenotípica se

limita a rasgos sexuales secundarios que no están relacionados con el ambiente (Schön
y Martens2004).
5.2 Mecanismos potenciales de radiaciones no adaptativas en

porthinellaspp.
Los datos evolutivos presentados anteriormente paraporthinellaspp. indica la presencia de

radiaciones no adaptativas. Sin embargo, la diversidad fenotípica comparativamente baja, la
diversidad de nichos presumiblemente baja y las especies que ocurren principalmente en alopatría o
peripatría son solo patrones y pueden no reflejar completamente los mecanismos subyacentes de las
radiaciones no adaptativas, como la deriva genética, los cambios en la arquitectura cromosómica, la
duplicación de genes o genomas. hibridación o elección de pareja (ver arriba).
El apareamiento selectivo, según nuestro conocimiento, no se ha informado en caracoles de agua
dulce rissooidean. Probablemente también se puede excluir una hibridación sustancial, ya que las
especies ocurren en gran medida en alopatría o peripatría, y los rangos generalmente no se
superponen. Poliploidía u otros cambios cromosómicos o genómicos importantes enporthinellaspp.
tampoco han sido reportados. La explicación más probable de los patrones observados es la deriva
genética en pequeñas poblaciones subdivididas y aisladas. La ocurrencia mayoritariamente
alopátrica y particularmente peripátrica deporthinellaspp. junto con la distribución irregular de los
hábitats primaverales puede respaldar esta suposición. hermano€andle et al. (2005), por ejemplo,
que se encuentra enB. Dunkeribasado en estudios de aloenzimas una correlación positiva entre la
distancia geográfica y la diferenciación genética. Además, los patrones de variación genética dentro
de las poblaciones sugirieron que las poblaciones pueden haber enfrentado efectos fundadores, lo
que también explicaría la cantidad bastante alta de diferenciación genética entre poblaciones.
Falniowski et al. (1998: p.611) encontró resultados muy similares paraporthinellapoblaciones del sur
de Polonia, lo que indica un "alto nivel de aislamiento entre las poblaciones". En contraste con BR€
andle et al. (2005), los trabajadores, sin embargo, sugirieron que los efectos fundadores no son
responsables del alto grado de polimorfismos, sino que las presiones de selección actúan en los loci.
No obstante, la mayoría de los datos de porthinellaspp. revisados aquí indican la existencia de
pequeñas subpoblaciones aisladas (en términos de tamaños de población efectivos) con un flujo de
genes relativamente pequeño entre las poblaciones. Las razones para esto son (1) la ocurrencia a
menudo aislada de hábitats primaverales, (2) las capacidades de dispersión típicamente bajas de
porthinellaspp., y (3) los fuertes cuellos de botella y los efectos fundadores que han actuado (p. ej.,
glaciaciones del Pleistoceno) o aún actúan (p. ej., desecación de manantiales) sobreporthinella
poblaciones Estas son exactamente las condiciones en las que la deriva genética puede desempeñar
un papel importante (sensu Wright1931, 1932).
Finalmente, aquí proporcionamos evidencia sólida para el "seguimiento de hábitat" (sensu

Eldredge 2000) enporthinellaspp. La reconstrucción de la filogeografía del Pleistoceno de grandes
porthinellalinajes basados en datos de secuencias mitocondriales (Benke et al.2009; véase también
la fig.6) indica eventos importantes de dispersión y/o vicariancia enporthinellaspp.
570 T. Wilke et al.
combinado con cambios de rango significativos. A pesar de los cambios geológicos, ecológicos y
climáticos masivos asociados con las glaciaciones del Pleistoceno en Europa, no conocemos, sin
embargo, ningúnporthinellaespecies que se han adaptado completamente a hábitats de agua dulce
distintos de los manantiales y cuerpos de agua asociados. Además, una prueba de independencia
serial (TFSI; Abouheif1999) con un total de 29 nominalesporthinella mostró que taxones
estrechamente relacionados filogenéticamente no ocupaban refugios similares (Benke et al.2009).
Esta falta de concordancia filogenética posiblemente podría explicarse por la estocasticidad de la
supervivencia y la dispersión en los caracoles de primavera. Por lo tanto, el "seguimiento del hábitat"
puede haber jugado un papel importante y un "seguimiento adaptativo" significativo (sensu Eldredge
2000) probablemente puede ser excluido enporthinellaspp. Por supuesto, los manantiales no son
hábitats completamente homogéneos y pueden experimentar cambios ambientales severos a lo
largo del año (p. ej., inundaciones, desecación). Especies de Bythinella,sin embargo, parecen estar
bien adaptados a estos entornos, por ejemplo, debido a la capacidad de estivar en el sustrato.
Además, como individuoporthinellalas especies se encuentran con frecuencia en diferentes tipos de
manantiales, los manantiales en su conjunto pueden proporcionar un solo nicho. Este
conservadurismo de nicho podría no sólo ser responsable de la falta de divergencia fenotípica clara
entre las especies (a pesar de algunos posibles barridos adaptativos), sino también de una presión de
selección relativamente uniforme sobre todas las especies a partir de la misma radiación.
5.3 Radiaciones adaptativas y no adaptativas: ¿procesos

discretos o no?
El barrido adaptativo putativo encontrado enBythinella robiciana (véase Haase et al.2007

; y secta. “Simpatría versus alopatría deporthinellaspp.” arriba) plantea la cuestión de si
las radiaciones adaptativas y no adaptativas constituyen procesos discretos. Esta
pregunta también se relaciona con la disputa entre Gittenberger (1991) y Davis (1993)
reconociendo el primero situaciones intermedias y el segundo rechazando
explícitamente esta noción.
El problema, sin embargo, tiene varias dimensiones. Es decir (1) si hay radiaciones
que no son adaptativas ni no adaptativas, (2) si las radiaciones adaptativas pueden
cambiar a radiaciones no adaptativas y viceversa con el tiempo, y (3) si los elementos
adaptativos y no adaptativos pueden coexistir dentro de una sola radiación.
Las respuestas a estas preguntas dependen en parte de las definiciones de radiaciones
adaptativas y no adaptativas en términos de mecanismos subyacentes, taxonómica existente y tasa
de evolución. Si consideramos aquí solo eventos rápidos a nivel de especie desencadenados por la
deriva o la selección natural, entonces Wright (1931: p.158) ya proporcionó parte de la respuesta al
escribir que, en poblaciones subdivididas “hay una diferenciación continuamente cambiante. . .
intensificada por las diferencias locales en la selección. . .”. En general, se puede suponer que la
deriva y la selección no actúan de manera exclusiva y completamente independiente. Wright (1931)
supuso cierto grado de selección natural en los procesos de especiación alopátrica. Por el contrario,
la especiación mayoritariamente simpátrica y/o parapátrica
en las radiaciones adaptativas puede deberse en gran medida a la selección natural, pero la deriva
resultante de, por ejemplo, los cuellos de botella también puede actuar. Por lo tanto, las radiaciones
adaptativas y no adaptativas pueden no ser del todo discretas. Sin embargo, no conocemos ningún
proceso de radiación en el que la selección y la deriva actúen por igual y, por lo tanto, tenemos dudas
sobre si existe una gama completa de estados intermedios entre las radiaciones adaptativas y no
adaptativas.
En cuanto a si las radiaciones adaptativas pueden convertirse en radiaciones no adaptativas y
viceversa con el tiempo, esto es ciertamente posible (p. ej., Rundell y Price2009). La biodiversidad
existente de lapas de agua dulce del géneroAncilo,por ejemplo, podría ser el resultado de
radiaciones no adaptativas. Un representante de una de estas radiaciones invadió el antiguo lago
Ohrid y se diversificó rápidamente a través de la radiación intralacustre adaptativa (Albrecht et al.
2006). De hecho, muchas radiaciones de alto nivel pueden ser el producto de una serie de
radiaciones adaptativas y no adaptativas junto con procesos de especies regulares. Dado que, en
tales "radiaciones", los patrones típicos de las radiaciones adaptativas, como la diversificación de
nichos y fenotipos, se acumulan con el tiempo, por lo general se clasifican como radiación
adaptativa. Esta es una de las razones por las que muchos trabajadores argumentan que la
aplicación del término radiación debe restringirse a casos de múltiples eventos de especiación
dentro de un período de tiempo relativamente corto (por ejemplo, Gittenberger2004).
Se agrega otro giro a este problema cuando se considera la selección sexual. Streelman y
Danley (2003), por ejemplo, introducen su modelo de "radiación en etapas" en cíclidos y peces
loro, donde consideran que una radiación consiste en una etapa de macrohábitat adaptativa
seguida de una etapa de morfología trófica adaptativa y una etapa presumiblemente no
adaptativa de señalización de fenotipos.
En cuanto a la pregunta de si los elementos adaptativos y no adaptativos pueden coexistir
dentro de una sola radiación, también se puede responder afirmativamente. Los elementos no
adaptativos bien pueden ser parte de una radiación adaptativa. Hay, por ejemplo, una
espléndida radiación de gasterópodos pirgulínidos en el antiguo lago Ohrid (ver arriba).
Dentro de este grupo monofilético relativamente joven, hay, sin embargo, tres taxones del
géneroPyrgohydrobiaque son fenotípicamente muy similares. Uno de ellos ocurre dentro del
lago propiamente dicho y uno en manantiales al sur y al norte del lago (ver placa X en
Radoman1983e higos. 8 y 9a en Albrecht y Wilke2008). Igualmente, las radiaciones no
adaptativas pueden contener elementos adaptativos.
para el generoBythinella,podríamos mostrar que en el único caso de simpatría de especies
de la misma radiación en nuestro conjunto de datos (B. opacayB. robiciana;Higo.2), se ha
producido un desplazamiento de caracteres (ver Secc.4.3arriba). Reconociendo que el valor
adaptativo de este cambio fenotípico sigue sin estar claro, podría verse como un cambio
adaptativo. Procesos similares pueden haber jugado un papel en algunos otros taxones como
B. bicarinata,que tiene un caparazón muy inusual con dos quillas pero está muy relacionado
con otros congéneres (Bichain et al. 2007a; véase también la radiación #8 en la Fig.3).
Curiosamente, no hay evidencia en nuestros datos que indique que las radiaciones
no adaptativas enporthinellatransformados en adaptativos o viceversa. Incluso entre
especies de diferentes radiaciones no adaptativas, no vemos diferencias claras de nicho
o fenotípicas (ver Secc.4.2), y ninguna simpatía sustancial. Estos patrones, sin embargo,
serían de esperar si los elementos adaptativos a través de la selección natural se
acumularan con el tiempo. Esto puede servir como otra indicación de queporthinella
572 T. Wilke et al.
spp. es un excelente ejemplo para estudiar la otra cara de la moneda: las radiaciones no
adaptativas.
5.4 Perspectivas en el estudio de las radiaciones no adaptativas
Como se señaló en la Introducción, nuestro conocimiento actual de las radiaciones no

adaptativas se basa en unos pocos estudios de taxones a menudo restringidos. Aunque
nuestro taxón modelo,porthinellaspp., podría agregar información importante, todavía
estamos lejos de una comprensión integral de las radiaciones no adaptativas. Por lo tanto, la
investigación futura debe centrarse en estudios verdaderamente comparativos de radiaciones
no adaptativas para identificar los procesos evolutivos que impulsan esta forma de radiación.
Podrían ser de interés las preguntas sobre el papel de la deriva genética en las radiaciones no
adaptativas y sobre la tasa de evolución (tanto en términos de velocidad absoluta de evolución
en las radiaciones no adaptativas como en términos de las posibles diferencias de tasa entre
las radiaciones adaptativas y no adaptativas). ). Finalmente, comprender los requisitos de
hábitat de las especies en radiaciones no adaptativas puede ser de gran interés. ¿Es el
“seguimiento de hábitats”, de hecho, responsable de la falta de una clara diferenciación de
nichos dentro de las radiaciones no adaptativas? Y de ser así, ¿Bajo qué condiciones el rastreo
de hábitat constituye una ventaja evolutiva sobre la adaptación a nuevos nichos ecológicos?
Un posible punto de partida para evaluar los requisitos del hábitat podría ser la cuestión de si
las radiaciones no adaptativas son más comunes en sistemas con un grado relativamente
pequeño de diversificación de hábitat, como los sistemas límnicos. Es notable que muchos
ecosistemas límnicos (con la excepción, por ejemplo, de lagos antiguos) albergan especies
similares con baja diversidad morfológica (ver Hebert1998y referencias allí) en comparación
con, por ejemplo, muchos hábitats terrestres que a menudo se caracterizan por fuertes
gradientes ambientales y, por lo tanto, una fuerte diversificación de hábitats. Esto, finalmente,
devolvería la discusión al aspecto del bajo grado de variación fenotípica en las radiaciones no
adaptativas subrayado por Gittenberger (1991) y Davis (1993). Entonces, la pregunta sería si el
plano de planta similar (ya menudo simple) es un carácter plesiomorfo o si hábitats similares
pueden conducir a una homoplasia extensa (por ejemplo, paralelismo o inversión) dentro de
las radiaciones no adaptativas.
6 Mensaje para llevar a casa
Los estudios de radiaciones en general y de radiaciones adaptativas o no adaptativas en particular

están compuestos por varias dificultades conceptuales, prácticas y filosóficas. En primer lugar, no
existe una definición universalmente aceptada para ninguno de los términos ni un entendimiento
común en cuanto a la extensión taxonómica y la tasa evolutiva de las radiaciones. Además, los
diferentes tipos de radiaciones se distinguen principalmente en función de los patrones existentes
en lugar del mecanismo subyacente y, por lo tanto, se malinterpretan fácilmente. Luego, hay
dificultades para establecer criterios operativos que permitan
identificar radiaciones de, por ejemplo, filogenias, y diferentes enfoques pueden

reconocer conjuntos de radiaciones muy diferentes. Finalmente, existe un debate
casi filosófico relativo al papel de la deriva genética en los procesos de especiación
(y por lo tanto de radiación) y si la especiación puede ocurrir en simpatría o no. Sin
embargo, si uno rechaza la noción de especiación simpátrica, entonces la radiación
adaptativa tendría que ocurrir en parapatría y/o alopatría, confundiendo
radiaciones adaptativas y no adaptativas. Asimismo, si uno no cree en el papel de la
deriva genética, entonces el concepto de radiaciones no adaptativas estaría mal
definido. Curiosamente, incluso Sewall Wright,1950: p.117), luego comenzó a tener
algunas dudas. En 1982, escribió: “Recalco aquí que si bien he atribuido gran
importancia a la deriva aleatoria en pequeñas poblaciones locales. . . Nunca he
atribuido importancia a la diferenciación no adaptativa de las especies” (Wrightmil
novecientos ochenta y dos: pág. 12). No obstante, hoy en día, se acepta
generalmente que las pequeñas poblaciones subdivididas (peripátricas) son
exactamente la situación en la que la deriva genética tiene un efecto tan profundo
en los procesos de especiación y radiación. Si las radiaciones no adaptativas, de
hecho, están más asociadas con la deriva genética y las radiaciones adaptativas
más con la selección natural, entonces esto puede conducir a otra diferencia entre
estos dos tipos de radiación, es decir, la tasa de evolución. Como se supone que la
deriva aleatoria suele actuar más lentamente en los loci que la selección natural
(Haldane1949), las radiaciones no adaptativas pueden producir menos especies
durante el mismo período de tiempo que las radiaciones adaptativas. Esta podría
ser otra razón por la que a veces se pasan por alto las radiaciones no adaptativas.
Entonces, ¿qué se puede aprender de Sewall Wright y las discusiones posteriores? Para una mejor comprensión de las radiaciones, es
necesario comprender mejor los mecanismos subyacentes en lugar de los patrones resultantes. El término radiación debe reservarse para
procesos evolutivos rápidos a nivel de especie. Las diferencias entre las radiaciones adaptativas y no adaptativas suelen estar relacionadas
con la deriva y la selección. Como ambos mecanismos no son completamente excluyentes entre sí, no siempre es posible diferenciar
inequívocamente entre estas dos formas de radiación. En tales casos, el término radiación debe usarse sin epíteto. Finalmente, se debe
trabajar más para ajustar mejor los mecanismos de, por ejemplo, hibridación, cambios en la arquitectura cromosómica, duplicaciones del
genoma, y selección sexual en el concepto de radiaciones adaptativas versus no adaptativas, particularmente en invertebrados. La selección
sexual, por ejemplo, per se no está asociada con la diferenciación de nicho y, por lo tanto, puede estar asociada con radiaciones no
adaptativas. Por otro lado, la selección sexual es una forma de selección (quizás incluso una forma de selección natural) y, por lo tanto, puede
estar asociada con radiaciones adaptativas. Por lo tanto, es probable que veamos más debates sobre este tema en los próximos años, y tal
vez los trabajadores decidan establecer una tercera categoría de radiaciones: para mecanismos relacionados con la selección sexual. la
selección sexual es una forma de selección (tal vez incluso una forma de selección natural) y, por lo tanto, puede estar asociada con
radiaciones adaptativas. Por lo tanto, es probable que veamos más debates sobre este tema en los próximos años, y tal vez los trabajadores
decidan establecer una tercera categoría de radiaciones: para mecanismos relacionados con la selección sexual. la selección sexual es una
forma de selección (tal vez incluso una forma de selección natural) y, por lo tanto, puede estar asociada con radiaciones adaptativas. Por lo
tanto, es probable que veamos más debates sobre este tema en los próximos años, y tal vez los trabajadores decidan establecer una tercera
categoría de radiaciones: para mecanismos relacionados con la selección sexual.
AgradecimientosAgradecemos sinceramente a V. Anistrenko, H. Blatterer, M. Bodon, U. Bößneck, M.

Colling, Z. Erõss, A. Falniowski, Z. Fehér, P. Glöer, M. Haase, B. Hausdorf, HJ Hirschfelder,
574 T. Wilke et al.
P. Mildner ({), V. Pešić, C. Renker, D. Reum, SK Şahin, M. Szarowska y Z. Yildirim por brindarnos
muestras deporthinellaspp. y dos árbitros anónimos por sus comentarios. E. Gittenberger y G. Davis
son reconocidos por inspirar nuestro trabajo sobre radiaciones no adaptativas. Este estudio fue
apoyado financieramente por subvenciones DFG WI 1902/5-1 (T. Wilke) y BR 1967/6-1 (M. Br€andle),
así como por un estipendio de la Fazit-Foundation a M. Benke.
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Índice
A Polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados

Comunicación acústica, 451–455 (AFLP), 108, 174–176, 353, 358, 362,
Acrididae, 452 363, 365–367, 470–477, 495–497, 500
Adaptation, 194, 205–209, 308, 316, 319 Cangrejos Análisis de varianza molecular (AMOVA),
de agua dulce radiados adaptativamente 355
pinzones de Darwin, 324 Carácter ancestral, 64, 69, 70 Lagos
especies endémicas, 345–346 antiguos, 468, 474, 486, 506–507 Andina,
diversificación genotípica, 332–342 72
diversificación intra e interespecífica, 344 andrena,104
correlación fenotipo-ambiente, 325 hormiga, 193
modificación fenotípica, vida en cuevas, Mecanismos de antihibridación, 374, 376,

326–332 392–395, 397, 398
Sesarma bidentatum,342 Hormigas, 170–173, 194
dimorfismo sexual, 343 APE, 63
especiación, 345 APETALA1 (AP1),39, 40, 48, 50–54
Radiación adaptativa, 4, 5, 61, 62, 67, 70, 72, APETALÁ3 (AP3),39, 40, 48, 49, 51–53
466–468, 472, 486, 488, 496, 505, 516, Apomixis, 219
551–557, 559, 561–563, 565–573 Cambio forma de árbol, 63
adaptativo, 565, 571 Experimentos en acuarios, 534 Arabidopsis,
Especiación adaptativa, 467–468, 473–476 78–80, 83, 86–87, 89–90, 94 Asia, 7, 10, 12,
Barrido adaptativo, 566, 570 13
Anuncio llamar, 380, 393, 397 AFLPs.Ver Prueba de asignación, 200
Longitud del fragmento amplificado Apareamiento selectivo, 466–467, 475
polimorfismos Atyidae,
África, 5, 7, 8, 10, 12, 13, 285
aglaomorfa,70–72 B
Comportamiento agonista, 295– Clon BAC, 84, 87–89, 94 Factor de
298 Alcanos y alquenos, 104 Bayes, 379, 388 Árbol de
Genealogía de alelos, 23, 26 consenso bayesiano, 361
Especiación alopátrica, 182–187, 439, 501, 552 Inferencia bayesiana de filogenia, 6, 63, 64, 67
Alopatría, 460–461, 553, 566–567, 569, 570, 573 BEAST, 63, 68, 69, 71, 379, 387, 388 Ecología del
Alopoliploidía, 216, 218–219, 222 comportamiento, 475, 477
Alozimas, 242, 247 Experimentos de comportamiento, 111
tambiénphila,8, 12, 13 Radiación de Beringia, 359, 365, 366
Gradiente de altitud Bioacústica, 380, 383, 396
variación genética, 245, 247, 251 Biodiversidad, 3–14, 61, 70 Punto
distribuciones de especies, 241, 243, 245, 246 crítico de biodiversidad, 3–14
579
580 Índice
Biogeografía, 3, 7, 13, 25–26, 42, 418 estrategia de conservación,

Radiación biológica, 61–63 4 coptotermas,295, 298
Proceso nacimiento-muerte, Cópula, 406, 408, 412
63 BiSSE, 64, 69, 70 Coespeciación, 216
Color de la carrocería, 502 Cortejo, 455, 460–462 crematogaster,
Tamaño del cuerpo, 249, 252, 172, 185–186, 193 Creta, 376, 379,
253 Bolivia, 72 380, 386–388, 393 Atracción cruzada,
Cuello de botella, 569, 571 109
brasicáceas,78–79, 83, 86–87, 93–94 Gran Cruce
Bretaña, 241, 243, 253–255 interespecífico, 85, 90–92, 95–96
Brotia,514 intraespecífico, 84–85, 89–91, 95–96
Bythinella,551, 554–571 Experimentos cruzados, 379–380, 389,
391, 396
C Hidrocarburos cuticulares, 286–289
Calibración, 63 Cyathea,11–13
Campylomormyrus,307–319 Cyatheaceae, 14
caninos,218–219 Chipre, 376, 379, 381, 382, 386, 387, 396
Capsella Citocromob,354–356, 359, 361 CitocromoC
ocurrencia, 79–82 subunidad de oxidasa I (COI), 405,
especiación, 79–82, 95–96 407, 417
SRK, 83, 85–87, 91–94
Carbono, 278 D
Caribe, 7, 8 decacrema,193
Ceritioideos, 515 Deforestación, 11
Chao Praya, 521 Helechos derivados, 61–72
Desplazamiento de caracteres, Glándula digestiva, 263–264, 267, 268, 272, 275,
442 Compuestos químicos, 106 276, 278
Fenotipos químicos, 291 diplolepis,216, 222, 225–230, 232 Dispersión, 7,
Quimiotaxonomía, 284 10, 64, 72, 207, 556, 567–570 Análisis de
Clorófilo, 67, 72 dispersión-vicarianza (DIVA), 7, 64,
Cloroplasto, 22, 27–28, 263, 264, 267, 71
268, 274–279 Modelo específico disperso, 150 Selección
Captura de cloroplastos, 177–180 disruptiva, 477–478 DIVA.VerAnálisis de
Haplotipos de cloroplastos, 169, 177– dispersión-vicariancia Divergencia de la genética
180 Cortipo,455–461 de poblaciones (DPG), 120,
christiopteris,71 121, 124, 129, 133
Cronograma, 63, 65, 68, 69, 71 Cirsium Tiempo de divergencia, 387–388 Estimaciones de tiempo de
monspessulanum,254 Cirsium palustre,241, divergencia, 7, 8 Tasa de diversificación, 61–65, 69, 70
251, 253–255 Fluctuaciones climáticas, 4, 5, Estimaciones de tiempo de diversificación, 63, 65, 69, 70
11, 69, 72 co1 (citocromo oxidasa), 455 ADN
Coadaptación, 176, 187–188 Coevolución,
170, 174–176, 187–188, 194, código de barras, 407, 424
mitocondrial, 494
202–205, 216, 228, 233, 498, 505 cartilla, 408
Colonización, 4, 5, 11, 418, 420, 4941 Historia Rosas silvestres, 215, 216, 218–
de la colonización 219 drpanotermas,298
laro,354, 357 drosófila,292, 293
Polimorfismo de color, 466, 468–470, 473, Drynaria,71
475, 477–479 Drynarioide, 66, 70, 71
ascendencia común,
Comoras, 4–7, 9, 12 mi
Competencia, 441, 567 Nichos ecológicos, 475, 476
Conservación, 4, 5, 11, 504–505 Selección ecológica, 468, 476
Índice 581
Especiación ecológica, 307–319, 501, 506 Diversidad genética, 380–383, 388 Deriva
Ecología, 37–39, 42–43, 54–55 genética, 206, 437, 444, 551, 553, 568,
Ecofenotipismo, 541 569, 572, 573
Alimentación con huevos, 476 Incompatibilidad genética, 376, 379, 389–392
elaphoglossum,13 Árbol genético, 246, 254
Pez eléctrico, 307–319 Diversificación genotípica, fresco jamaiquino
Descarga de órgano eléctrico (EOD), 307–319 cangrejos de agua
Factor de elongación1-a (EF1-a),199, 201 clonación, 335–336

Endémica, 69, 70 Antillas Mayores, 332
Especies endémicas, 405, 406, 412 homogeneización, 342
Endemismo, 4, 489, 494 desarrollo larvario, 334
Eoceno, 67, 68 ADN mitocondrial, 341
EOD.VerDescarga de órgano eléctrico Pseudothelphusidae, 332, 334
ETS, 254 cromatogramas de secuencia,
Alpes europeos, 241, 242, 245–247, 252, 254 336 Sesarma delfín,336–339
Eusocial, 284 Sesarmaespecies, 334–335
Tasa evolutiva, 379, 388 Sesarma windsor y Sesarma meridies,
Especies evolutivas, 380, 396 339–340
Fenotipo extendido, 222 Barreras geográficas, 186
Extinción, 31, 558, 567 Historia geológica, 519
Tasa de extinción, 62, 63 Morfometría geométrica, 472, 476, 477
Glaciaciones, 563, 569, 570
F calentamiento global, 4
Especialización en alimentación, 476– Gramítidos, 66–68, 70–72
478 Elección femenina, 380, 393, 453 Graníticos, 5
Ferns, 5–14, 61–72 Saltamontes, 451–462
Canibalismo filial, 477; Esporas verdes, 67, 72
Radiación de peces, 467–468, 471, 472, 476 Hábito de crecimiento, 219
Volátiles florales, 112 gimnosfera,8
Tamaño de la flor, 252
Red alimentaria, 221–231 H
Registro fósil, 63 Hábitat, 4, 9, 11–13
Efectos fundadores, 553, 568, 569 Termitas heterogeneidad, 500
productoras de hongos, 283–300 especialización, 500, 501
seguimiento, 568–570, 572
GRAMO uso, 466, 473–476
Galls, 228, 231, 232 Red de haplotipos, 199
Estadísticas gamma, 63 hentriacontadieno, 294
Cromatografía de gases, 289 Herbívoros, 222
Gastropoda, 515 Complejo de gaviota argéntea, 351–
GC-EAD, 107 368 Heterogamia, 219–220
Gecarcinúcidos, 479 heterosis, 219
Gene heterotermos,298
candidato, 39–41, 45, 48, 50–53 hordeo,17
copias, 45–51 Transmisión horizontal, 194
duplicación, 45–52, 55 Anfitrión
regulatorio, 36, 40, 53 Flujo de elección, 202–203
genes, 240, 244, 247–249, 542 Análisis localización, 202
genéticos, 109 planta, 239–255
Cuello de botella genético, 28 raza, 205, 240–255
Diferenciación genética, 298–299 turno, 176
Distancia genética, 390, 396 Puntos de acceso, 3–14
Divergencia genética, 383–387, 390, 396, 397 Hipótesis del puente híbrido, 249
582 Índice
Hibridación, 7, 13, 55, 105, 177–182, 201, Lecanopteris,67, 69

216, 222, 358, 362, 365, 366, 459, Lepisoroides, 66, 68, 70
461–462, 468, 470–472, 478, 540, Limax
567–569, 573 distribución, 406, 418
introgresivo, 496, 504, 506 género, 406, 408
Población híbrida, 101 especiación, 424
Híbridos Clasificación de linaje, 178–180, 325
cirsio,241–244, 250, 253–255 Linaje a través de diagramas de tiempo (LTTP), 40, 43, 44,
T. conura,239–255 63, 64, 69
especiación híbrida, 107 Linepithema humile,293
Hidrocarburos, 103 Desequilibrio de ligamiento (LD), 119, 129–130
Recolector de basura, 67, 70, 71
I Hipótesis de la cerradura y la llave, 444–
Refugios de la edad de hielo, 445 A largo plazo, 263, 272–279
28, 29 Impronta, 220 Loxogrammoides, 66, 68, 70 LTTP.VerLinaje a
Clasificación de linaje incompleta, 30, 540 través de parcelas de tiempo
Inquilines, 287
Espaciador transcrito interno (ITS), 172 METRO
Introgresión, 105, 124, 127, 129, 130, macaranga,193

177–180, 358, 365, 366 Hibridación rasgos relacionados con las hormigas, 172–
introgresiva, 470–472, 476, 173, 182 distribución, 170, 173
540, 542 hábito, 170, 171
Secuencias de intrones, 353, 354, 359 Islas, 437, interacciones con hormigas, 171–173
438, 442, 443 Aislamiento por distancia, 207, 352 filogenia molecular, 174–176 filogeografía,
Modelo de especificación de aislamiento, 124–125 178–180 estructura de población, 182–187
Modelo de aislamiento con migración (IM/IMa), evolución reticular, 180–182 sección
paquistemon,172–182 secciónpruinosas,
124–125 172–182 secciónWinklerianae,176
Isópteros, 283–300 Macaronésica Crassulaceae-
SU, 254 Sempervivoideae
k (MCS), 35–55
Río Kaek, 514 macropanestia,299
Valores Ka/Ks, 41–42, 52–53 Macrotérminos
Karpathos, 376, 383, 396, 397 M. bellicosus,289, 294
Carácter clave, 263, 264, 280 M falciger,289, 291, 296
Innovación clave, 61–72 M.herus,286, 287, 289
Oportunidad clave, 61–72 M. jeanneli,289, 290
Cleptoplastia, 275 M. michaelseni,289, 294
M. subhyalinus,289–294, 296
L Macrotermitinae, 283–300
Lago Matano, 466, 468–479 Madagascar, 3–14, 69
Lago Ohrid, 568, 571 Rasgo mágico, 317–319
Radiaciones lacustres, 465–479 Haplogrupo mitocondrial principal (MHG),
Larús 380–381
L. argentatus,351–368 Madagascar, 4–8, 10, 11, 14
L. cachinnans,351–368 Malesia, 67, 69–71
L. dominicanus,354, 355, 358–360 Lagos Malili, 465, 468–470
L fuscus,351–368 Mascarenes, 4, 6, 7, 9–13
L. hiperbóreo,353, 355, 356, 358, 360, Elección de pareja, 316–317, 319, 393, 475, 477
362, 364, 365, 367 Comportamiento de apareamiento, 242, 247, 248, 250,
L. marinus,353, 355–359, 362, 364, 366 251 Llamada de apareamiento, 393–395, 398
L. smithsonianus,352, 353, 357, 362, 365 sistema de apareamiento
Índice 583
evolución, 77–78, 80, 93–94, 96 Preferencias de nicho, 4, 8, 11, 12 Radiaciones no

flexibilidad, 80–82, 94–96 adaptativas, 437, 438, 446–447,
Matrocliny, 219, 220 551–557, 559, 561–563, 566–573
Mauricio, 4, 5, 8, 11, 13 Máxima Radiaciones no ecológicas, 452–462
verosimilitud, 6, 7, 63, 64, 67 Máxima Norteamérica, 29
parsimonia, 6, 7, 64, 67 Mediterráneo, nrITS, 218
28 Genoma nuclear, 6–7
Meiosis, 218 Microsatélites nucleares, 178, 180, 181,
Mekong, 522 183–185
Mezquite, 64
Crisis de salinidad de Messiniense (MSC), 385–387, 397 O
Microsatélites, 218 isla oceánica, 4, 5
Microsoroides, 66–68, 70 odontotermas,298
microtérminos,292 Variación de olor, 109
Mioceno, 67, 68, 70 Oligoceno, 67, 68
Zona de falla de Misis-Kyrenia (MKFZ), 386, 387 Ofris, 104
Región de control mitocondrial (HVR-I), 354, orquídeas, 104
360 Ordenación, 12
ADN mitocondrial (ADNmt), 197, 201, Ovipositor, 242, 252–253, 255
245–247, 253, 352–354, 357–359,
366, 367, 459, 541 PAG
Red mitocondrial/ red de haplotipos/ Pachychilidae, 479, 515–519
red de unión mediana, 355, 356, 359, Paleotrópicos, 67
362–364, 366 PAM, 268, 274, 279
Reloj molecular, 42, 63, 68, 379, 387–388, Paraclistis entero,287
554, 561 Evolución paralela, 496
evolución molecular, 63 Especiación parapátrica,
Filogenia molecular, 455–457, 494–497, 501 545 Parasitoides, 231
Mormyridae, 309 Red de parsimonia, 178–180
Morfometría, 472, 473, 476, 477 Patagonia, 29–30
Radiación morfoestática, 553 PCR-RFLP, 83, 87, 89
Tasa de mutación, 379, 388 Mutualismos, p distancia, 377–378, 381, 384, 390, 391, 393
171–173, 194 Mirmecófitos, 170–173, 182– pelofilax
186, 196 P. bedriagae,376, 379, 381, 382, 395, 396
P. cf. bedrigae,376, 377, 381, 382, 389,
norte 390, 392, 394
nasutitermes,297, 298 P. cf. caralitanus,381–383, 389, 394, 396
Selección natural, 468, 551, 567, 570, 571, 573 P. cf. cerigensis,381–383, 389, 396
ND2, 376–378, 381–384, 390, 391, 393, 396 ND3, P. cretensis,376–381, 383, 387, 390, 391,
376–378, 381–384, 387, 390, 391, 393, 393–395
396 P. epeiroticus,376, 377, 379, 382, 383,
Nei distancia, 384 390, 391, 393–395, 398
VecinoNet, 272, 278 P. kurtmuelleri,377, 380–382, 390, 393,
Efecto vecino-extraño, 296 394, 395, 397, 398
Neoendemismo, 3–14 P. lecciones,390, 391, 394, 396, 397
Neotrópico, 67, 72 P. nigromaculatus,391
Análisis de clados anidados (NCA), 355, 356 P. perezi,387
Reconocimiento de Nestmate, 286–289 Control P. plancyi,391
neuronal, 461 P. ridibundus,376, 379, 381–383, 390–392,
Nueva Guinea, 69–71 394–396
Nicho, 551–553, 556, 562–563, 566–573 P. saharicus,387
Conservadurismo de nicho, 437, 447 P. shqipericus,390, 391, 395
Modelado de nicho, 8, 12, 30 Especiación peripátrica, 437, 443, 444
584 Índice
Peripatría, 553, 569 Polypodiaceae, 65–68, 70, 72

Fenología polipodio,66, 68
cirsio,243 Expansión de la población, 125, 127–132
T. conura,250–251, 255 Historia de la población, 241, 253–255
Correlación fenotipo-ambiente, 500 Estructura de la población
Fenotipo, fenotípico, 552, 553, 563–565, cirsio,253
567–572 T. conura,241, 245–247, 253, 255
Fenotipos, 298–299 Subdivisión de la población, 120, 125–133 Barreras
Modificación fenotípica, agua dulce de Jamaica antes y después del apareamiento, 111
cangrejos Depredación, 497, 498, 567
análisis discriminante, 331 Aislamiento previo al apareamiento, 104–105
heterogeneidad genética, 329 Aislamiento reproductivo previo al apareamiento, 451
ADN genómico, 328 Primer paseo, 84, 87
haplotipos, 330–331 Análisis de componentes principales (PCA), 362,
microsatélites, 331–332 datos 363, 365
morfométricos, 327–330 ríos y Pseudogenes, 541
localidades, 326 sesarma Pseudo-autocompatibilidad, 80, 90, 96
windsor,326 Patrón puntuado, 62
red de parsimonia estadística, 332 pirrosia,68, 70
poblaciones subterráneas y superficiales,
327 Filipinas, 69–71 q
Gen de la fosfoenolpiruvato carboxilasa Cuaternario, 5
(PEPC),39–41, 46–48, 51–54
Fotosíntesis, 263, 268, 270–273, 275–277, R
279 Radiación, 104, 263, 264, 268, 278–280,
Actividad fotosintética, 263, 268, 269, 271, 351–368, 405–425, 544–546
273, 274, 277 adaptable, 36–39, 42–45, 263, 264, 268,
fragmidio,215, 216, 225 filodesmio,263–265, 278–279
267–272, 275–280 Análisis filogenético, 83– isla, 36–39, 53–55
86, 409, 413 Reconstrucción filogenética, 37– Rádula, 531, 532
38, 44, 51–52 Filogenia, 6–8, 11, 19, 21, 22, Morfología radular, 531–535
24–25 Selva tropical, 11, 13
Laridae,360 rana
Filogeografía, 23, 30 R. balcánica,396
Fitófagos, 215, 222, 230 Árboles R. tavasensis,389
pioneros, 170, 186 Planta-hormigas, R. temporaria,391
172, 181, 185–186 Reconocimiento ranaCR1, 376, 384, 395, 396
de plantas, 249–251 Genoma rapano,79, 83
plástido, 6, 13 Radiación rápida, 3–14, 61–
Platicerio,68, 70, 72 72 Refuerzo, 244, 248
Pleistoceno, 11, 460, 521 Reproducción, 228, 229
Pleopeltis, 66, 68, 70 Aislamiento reproductivo, 351, 352, 357, 358,
Plioceno, 10, 11, 216 467, 474–476
Dispersión de polen, 187 Evolución reticulada, 216, 465, 466, 468,
Crecimiento del tubo polínico, 85, 92–93 470, 472
Polinización, 104 reticulitermes,292, 295, 296, 298
Selección impulsada por polinizadores, 108–110 Retrotransposón, 376
Cambios de polinizadores, 103, 113 Reunión, 4, 5, 11–13 Rhagoletis,216,
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) 3, 408–409 222, 225–230 Rhodos, 376, 377, 383,
Polimorfismo 396, 397 Modelo de especie de
morfológico, 500 anillo, 352, 354 Captura de río, 543–
Poliploidización, 20 544
Poliploidía, 51, 55, 218 Radiación fluvial, 515
Índice 585
Rosa,216, 218–219, 221 Hongos de SIMMAP, 64

la roya, 215, 216, 221, 225 Gen de copia única, 220
Polimorfismo de un solo nucleótido (SNP), 367 S-
S lugar
Sacoglossa, 263–264, 266–268, 272–280 localización cromosómica, 79, 84, 87–90, 94
Pejerreyes de aleta vela, 465–466, 468–472 S- modelo, 78
alelo S-locus glicoproteína (SLG), 79, 86, 93 S-locus
relaciones de dominancia, 87, 89–92, 95 receptor quinasa (SRK), 79–80, 85–87,
frecuencia, 89–92, 94–95 91–93
identificación, 82–87, 92–93 Barrera Especies de pequeño alcance, 546
de agua salada, 375, 376, 397 Muestreo, Caracoles, 485
119, 121, 123, 125–132 Helecho arbóreo Insectos sociales, 284;
escamoso, 5–14 Canción, 451–462
Schedorhinotermes lamanianus,287 Especiación, 20, 31, 61–63, 65, 69, 70, 72, 105,
SCR/SP11, 79 307–319, 352, 359, 369, 375, 376, 379,
Contacto secundario, 462 397, 460–462, 465–479, 544–546
Dispersión de semillas, 182–183, 187 adaptación, 239–241, 244, 248–253, 255
Selección, 244, 245, 247–249, 251, 253, 308, alopátrica, 240, 246, 255
316–319 geográfico, 244–247
Autofecundación, 77–78, 95 Sistema de peripátrico, 246
autoincompatibilidad (SI), 77–82, 93–94 simpátrico, 240, 244
Semioquímicos, 102 Tasas de especiación, 26, 31, 62, 63, 264, 268, 276,
Divergencia de secuencia, 381, 383, 391, 396 278, 279
Serpocaulón,66, 68, 72 Especies, 4–14, 61–63, 65–67, 69, 70, 72
Intrón 1 de albúmina sérica (SAI1), 376, 384, Delimitación de especies, 197–202
395, 396 Divergencia de especies, 119, 120, 124, 129, 132
Sesarma Diversidad de especies, 453–455
S. bidentatum,335, 342–343, 345 Bandada de especies, 551, 560–561
S. delfinum,334, 336–340, 342, 343, 346 Híbridos de especies, 542
S. meridianos,335, 336, 338–340, 342, 343, Aislamiento de especies, 107
346 Reconocimiento de especies, 453
S. verleyi,326, 335, 340 Rico en especies, 4, 11
s. windsor,326, 327, 331–333, 339–340, 342 esferopteris,11
Manantiales, 555–557, 561, 563, 566, 569–571
Sesarma delfín Sri Lanka, 6, 7
análisis de varianza molecular, 338–339 estenobotrus,455–461
clones secuenciados, 336–337 Estrecho de Gibraltar, 384, 386
red de expansión, 337 Sustituciones sinónimo-no sinónimo,
sesarma windsor 41, 52–53
Árbol de radiación bayesiano, 340 Sustrato, 5
red de expansión, 339 Uso de sustrato, 531–535
Sesquiterpenos, 225, 233 Sulawesi Lakes, 466, 468, 472
Feromonas sexuales, 103 Survival, 250–253
Conflicto sexual, 446; simbiodinio,263–264, 275, 277
Engaño sexual, 102–103 Simbiosis, 194, 202
Selección sexual, 437, 438, 444–447, 452, 453, Evolución simpátrica, 230
466, 468, 477–478, 567, 568, 571, 573 Especiación simpátrica, 465, 466, 473–476, 478
Seychelles, 4–7, 9 Simpatría, 459, 557, 566–567, 570, 571, 573
Análisis de formas, 472, 476, 477 Synntree, 63
Morfología de la concha, 497
Shell variación, 525–531 A corto T
plazo, 274, 275, 278 Revisión taxonómica, 8
Silenciamiento, 220 Muestreo de taxones, 470, 471
586 Índice
Telmatherina,469–477, 479 V
Telmatherinidae, 465–479 Vicarianza, 7, 10, 31, 64, 186, 356, 443
Termitas, 283–300 Volcánica, 4, 5, 13
Termitobia herus,286–288
Termitomyces,285 W
Los estanques de los sueños de Wallace, 465, 468, 478–
Comportamiento territorial,
479 Cascada, 526
286 Residentes territoriales,
Funcionamiento con cera, 203,
297 Terciario, 5, 11
205 Evolución del trigo, 137–158
Tailandia, 514
Wolbachia,231
Utilidad de rasgos, 476
transgéneroS-polimorfismo alelo, Y
87–88, 94 Rendimiento, 263, 268, 271–275, 277
Zona de transición, 394, 395 Helechos
Modelo Yule, 63
arborescentes, 5–14
Reconstrucción de árboles, 269, 272, Z
278 Tricomas, 215, 222–225 cromosoma Z, 367, 368
Ecología trófica, 465–466, 474–476 Zootermopsis nevadensis,293, 298, 299
Especialización trófica, 498–501 Zooxantelas, 264, 267–270, 272, 276–278

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ISBN 978-3-642-12424-2 e-ISBN 978-3-642-12425-9

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Radiaciones o evolución en acción

En todo el mundo, en 2009 hemos conmemorado dos siglos de Darwin

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