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    Taller-Separación Proteinas 2410

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    Luisa Fernanda Gutierrez Jaramillo
    El documento proporciona instrucciones para separar una mezcla de proteínas (A, B, C, D) utilizando diferentes técnicas cromatográficas. Se utilizará filtración en gel para separar las proteínas en orden de menor a mayor peso molecular. Luego, se utilizará cromatografía de intercambio iónico a diferentes pH para retener selectivamente proteínas basadas en su punto isoeléctrico. Finalmente, se usará electroforesis SDS-PAGE para determinar el peso molecular de una proteína desconocida en relación

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    Taller-Separación Proteinas 2410

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    El documento proporciona instrucciones para separar una mezcla de proteínas (A, B, C, D) utilizando diferentes técnicas cromatográficas. Se utilizará filtración en gel para separar las proteínas en orden de menor a mayor peso molecular. Luego, se utilizará cromatografía de intercambio iónico a diferentes pH para retener selectivamente proteínas basadas en su punto isoeléctrico. Finalmente, se usará electroforesis SDS-PAGE para determinar el peso molecular de una proteína desconocida en relación

    Descripción original:

    taller de proteinas

    Título original

    Taller-separación proteinas 2410

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    El documento proporciona instrucciones para separar una mezcla de proteínas (A, B, C, D) utilizando diferentes técnicas cromatográficas. Se utilizará filtración en gel para separar las proteínas en orden de menor a mayor peso molecular. Luego, se utilizará cromatografía de intercambio iónico a diferentes pH para retener selectivamente proteínas basadas en su punto isoeléctrico. Finalmente, se usará electroforesis SDS-PAGE para determinar el peso molecular de una proteína desconocida en relación

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    El documento proporciona instrucciones para separar una mezcla de proteínas (A, B, C, D) utilizando diferentes técnicas cromatográficas. Se utilizará filtración en gel para separar las proteínas en orden de menor a mayor peso molecular. Luego, se utilizará cromatografía de intercambio iónico a diferentes pH para retener selectivamente proteínas basadas en su punto isoeléctrico. Finalmente, se usará electroforesis SDS-PAGE para determinar el peso molecular de una proteína desconocida en relación

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    Pontificia Universidad Javeriana

    Bioquímica Básica

    Se tiene una mezcla de proteínas A, B, C y D con las características indicadas en la tabla I:


    TABLA I
    1. Para separar proteínas utilizando el método de filtración en gel se utiliza
    PROTEÍNA PESO PUNTO
    una columna de sephadex G-75, la cual permite separar proteínas que MOLECULAR ISOELÉCTRICO
    estén en un rango de peso molecular entre 3 y 70 KDaltons. Teniendo en (KiloDaltons)
    cuenta que la filtración en gel permite separar proteínas de acuerdo a su A 40 7.5
    peso molecular y al tipo de columna utilizada, indique cuál será el orden de B 130 9.0
    C 230 4.5
    elución (salida) de las proteínas _______________
    D 30 7.0

    2. A la derecha se representa el perfil de elución de la cromatografía de filtración en gel realizada en la


    columna de sephadex G-75. Allí se representa la absorbancia medida
    para las fracciones (1, 2, 3) tomadas en diferentes tiempos. Cada 1 2 3
    pico corresponde a una proteína o a una mezcla de ellas, según sea
    el orden de elución. El primer pico corresponde a la(s) proteína(s)
    que salieron de la columna primero y el último corresponde a la(s)
    proteína(s) que salieron al final de la elución. De acuerdo a las
    propiedades de las proteínas y a la columna utilizada, indique que
    proteína (s) estará (n) posiblemente en cada fracción.
    1. ________ 2. ________ 3._________

    3. Se realiza una cromatografía de intercambio iónico a pH 7,2, utilizando una resina de intercambio anionico
    (la resina tiene carga positiva). Indique cuáles proteínas quedan retenidas en la columna
    ___________________________
    Explique________________________________________________________________________________
    _______________________________________________________________________________________

    4. Se realiza una cromatografía de intercambio iónico a pH 8,0, utilizando una resina de intercambio
    catiónico (la resina tiene carga negativa). Indique qué proteínas quedan retenidas en la columna
    ____________________
    Explique________________________________________________________________________________
    _______________________________________________________________________________________

    5. Se realiza una cromatografía de intercambio iónico a pH 6,5 con una resina de intercambio catiónico (la
    resina tiene carga negativa). Indique cuales proteínas quedan retenidas en la columna _________________.
    La columna contiene algunas proteínas retenidas y ahora se le adiciona una solución buffer de pH 8,5.
    Teniendo en cuenta este nuevo valor de pH, indique cuales de las proteínas que estaban en la columna
    continuan retenidas.

    6. Las proteínas A, B, C y D se utilizaron como marcadores de peso molecular para determinar el peso de
    una proteína desconocida (X). Se realizó una electroforesis denaturante con SDS (todas las proteínas tienen
    la misma relacion carga/masa). En el pozo 1 se encuentran los marcadores de peso molecular y en el pozo 2
    se muestra el desplazamiento de la proteína X.
    a. Indique frente a cada banda del pozo 1 a qué proteína corresponde (A, B, C, D)
    b. Mida con una regla la distancia de migración de cada proteína del pozo 1 y elabore una curva de
    calibración de distancia de migración vs. Peso molecular. Teniendo en cuenta esta curva, determine
    el peso molecular de la proteína X que fue separada en el pozo 2.

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