Manual de Hematologia

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
DE HEMATOLOGIA
INDICE
INTRODUCCION …………………………………………………………………………………………………………………… ….2
REGLAMENTO INTERNO EN EL AREA TECNICA DEL LABORATORIO CLINICO ………………………… …3
NORMAS DE BIOSEGURIDAD …………………………………………………………………………………………………… 3
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD …………………………………………………………………………………………..…. …..5
OBJETIVO GENERAL ………………………………………………………………………………………………………..……… .6
OBJETIVOS ESPECIFICOS …………………………………………………………………………………………………..…….. 6
1.0 TOMA DE MUESTRA CAPILAR PARA EXAMENES HEMATOLOGICOS ……………………………….….7
2.0 TOMA DE MUESTRA VENOSA PARA EXAMENES HEMATOLOGICOS …………………………….…....8
3.0 PREPARACION Y TINCION DEL FROTIS DE SANGRE ……………….…………………..…………………….11
4.0 EXAMEN MICROSCOPICO DEL FROTIS SANGUINEO PARA FORMULA
DIFERENCIAL……………………………………………………………………………………………………………………..13
5.0 FROTIS DE SANGRE PERIFERICA ……………………………………………………………………………………..…15
6.0 HEMATOCRITO………………………………………………………………………………………………………………….18
7.0 HEMOGLOBINA…………………………………………………………………………………………………………………20
8.0 RECUENTO DE LEUCOCITOS………………………………………………………………………………………………22
9.0 PLAQUETAS………………………………………………………………………………………………………………………26
10.0 RECUENTO DE RETICULOCITOS……………………………………………………………………………………30
11.0 VELOCIDAD DE ERITROCEDIMENTACION ……………………………………………………………………32
12.0 TIEMPO DE SANGRAMIENTO………………………………………………………………………………………34
13.0 TIEMPO DE COAGULACION ………………………………………………………………………………………..35
14.0 CONCENTRADO DER STRAUT……………………………………………………………………………………..37
15.0 BIBLIOGRAFIA…………………………………………………………………………………………………………….40
16.0 ANEXOS…………………………………………………………………………………………………………….……….41
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INTRODUCCION
El objetivo de este manual es proporcionar al licenciado en laboratorio clínico las técnicas
necesarias utilizadas para el estudio hematológico de la sangre que se realizan en los
laboratorios de primer nivel de pruebas básicas. Dado que la sangre fue considerada como el
líquido esencial para la vida y se le atribuye ser la fuente que mantiene el equilibrio en el organismo, por
ello su estudio y adecuado procesamiento dentro del laboratorio clínico es de vital importancia para la
población y el mundo.
En la actualidad se han desarrollado técnicas cualitativas y cuantitativas de los componentes celulares,

que en conjunto constituyen la CITOMETRÍA HEMÁTICA: Determinación de hemoglobina y hematocrito,
cuenta de eritrocitos, leucocitos, plaquetas, observación del frotis sanguíneo y cálculos de los índices
eritrocitarios.
La Citometría hemática es sin lugar a dudas el primer paso para el diagnóstico, dado que numerosos
trastornos se acompañan de alteraciones en las células por lo cual es importante hacer la diferenciación.
Las células pueden sufrir alteraciones no sólo en su forma sino también en su cantidad y su función, que
pueden ser secundarias a algunas alteraciones fisiopatológicas, enfermedades crónicas, terapias con
medicamentos, déficit de algún componente, neoplasias, etc., lo cual lleva a alterar las funciones que
desempeñan como es: defensa contra infecciones, aporte de oxígeno. Etc.
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REGLAMENTO INTERNO EN EL AREA TECNICA DEL LABORATORIO CLINICO.
1. El equipo del laboratorio no puede ser extraído de su lugar de origen.
2. Todo equipo, material y reactivo deberá encontrarse buenas condiciones.
3. Queda prohibido el ingreso a personas no autorizadas a las instalaciones del laboratorio
técnico.
4. El personal regente y de labor técnica debe de presentarse en el laboratorio con su
respectiva gabacha blanca hasta la rodilla y manga larga con elástico en los puños, la
cual siempre debe de mantenerse bien abotonada, ropa formal o uniforme, zapatos de
cuero (cubriendo todo el pie).
5. Es obligación del personal de regencia y labor técnica utilizar protección personal que
estos cumplan con las normas de bioseguridad establecidas. ( mascarillas, guantes,
lentes protectores y gorro)
6. El personal regente y de labor técnica deberán comportarse de manera responsable
durante la realización de las pruebas, dedicándose exclusivamente al procesamiento de
los exámenes clínicos dentro del laboratorio.
7. El personal regente y de labor técnica deberán respetar la hora de entrada y de salida
programada según su horario laboral.
8. Es obligación de las personas que laboran en el laboratorio que estos cumplan con las
normas de bioseguridad establecidas.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1. Todo el personal que ingrese al laboratorio deberá usar gabacha blanca hasta la rodilla,
manga larga y elástico en los puños; con el fin de proteger la ropa con posible material
toxico y/o contaminante.
2. No se puede fumar, maquillarse, peinarse, beber, comer ni guardar alimentos dentro del
laboratorio.
3. Las mesas de trabajo debes de desinfectarse antes y después de cada jornada laboral.
4. Todo material contaminado y no contaminado debes de ser descartados en su
respectivo recipiente. Nota: bolsa roja material contaminado, bolsa negra material no
contaminado.
5. Todo material cortopunzante se debe descartar en garrafones con hipoclorito de sodio

al 10% y estos deben de estar debidamente rotulados.
6. La cristalería utilizada se debe de descartar en recipientes con hipoclorito de sodio y
estos deben estar debidamente rotulados para cada cristalería.
7. En caso de derrame de una muestra contaminante en el piso o la mesa de trabajo, de
bebe de aplicar la solución desinfectante alrededor y encima del derrame cubrirlo con
papel periódico o similar, dejarlo por 30 minutos para después limpiar el área.
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8. Durante el desarrollo de los procedimientos operativos debe de evitarse el contacto con
los ojos, nariz, boca y cabello, porque este es uno de los principales riesgos de
contaminación.
9. No se debe de tener las uñas largas, para evitar acumulación de suciedad o
contaminación; así también evitar el uso de prendas como anillos, pulseras, relojes u
otras prendas que pueden contribuir con la contaminación.
10. Al procesar toda muestra biológica, siempre deben usarse guantes de látex, por
considerarse estas potencialmente con contaminantes.
11. Debe hacerse uso de mascarilla, lentes protectores, gorro al procesar muestras que
produzcan esporas, aerosoles contaminantes o sustancias que produzcan emanaciones
toxicas.
12. Para hacer uso de pipetas serológicas, volumétricas, etc. se debe utilizar propipetas y
nunca debe hacerse directamente con la boca.
13. No debe de levantarse la tapa de las centrifugas, mientras este funcionando, ni tratar de
detenerla con las manos.
14. Debe de realizarse el aseo de manos después de tocar material contaminante, antes y
después de usar guantes de látex y antes de retirarse del laboratorio.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
1. Tanto el personal regente y de labor técnica deberán portar la gabacha blanca hasta las
rodillas, manga larga y con elástico en el puño, así se evitara cualquier accidente.
2. Todo el personal regente y de labor técnica deberá desinfectar la mesa de trabajo antes
y después de sus procedimientos operativos.
3. El personal a cargo de regencia y de labor técnica debe de limpiar la mesa de trabajo
descartando todo lo que no utilice en sus respectivos descartes y basureros.
4. El personal que labora dentro de la labor técnica nunca deberá de abrir la tapa de la
centrifuga mientras esta aun se encuentre funcionando ni destapar tubos
inmediatamente después de centrifugar y agitar.
5. En caso de derrame de una muestra en el piso o la mesa de trabajo, aplicar la solución
desinfectante, cubrir con papel periódico, dejarlo por 30 minutos antes de limpiar el
área.
6. Todo el personal del laboratorio no podrá retirarse del laboratorio sin antes realizarse el
aseo de manos por haber manipulado material contaminante.
7. Todo el personal que labora en el área técnica, no podrá beber, fumar, comer,
maquillarse, peinarse, comer ni guardar alimentos dentro del área técnica.
8. En el laboratorio esta prohibida la practica de pipetear con la boca.
9. Toda muestra biológica se considera potencialmente peligrosa e infecciosa, por lo que
debe de tratarse con las medidas del caso.
10. Todo objeto cortopunzante deberá de manejarse con el extremo cuidado evitando así
accidentes por pinchazo o cortaduras.
11. Si se nota alguna vibración o ruido anormal de la centrifuga hay que detener su
funcionamiento inmediatamente, revisar si esta correctamente calibrada.
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OBJETIVO GENERAL
Brindar las diferentes técnicas utilizadas para el análisis hematológico de la sangre empleados
en laboratorios clínicos de primer nivel que desarrollan pruebas básicas.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
1. Que el Licenciado en laboratorio clínico encargado del área técnica conozca el

adecuado procedimiento de toma de muestra venosa para análisis
hematológicos
2. Que el Licenciado en laboratorio clínico conozca todos los procedimientos
empleados para el estudio hematológico de la sangre.
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1.0 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXÁMENES HEMATOLÓGICOS
PROPÓSITO:
Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematológicas.
MUESTRA REQUERIDA:
Sangre capilar, Obtener 5 capilares heparinizados.
MATERIALES:
- Torunda de algodón.
- Alcohol etílico (70%).
- Marcador de vidrio.
- Capilares heparinizados.
- Plastilina para sellar capilares con su respectiva base numerada.
- Lancetas desechables.
- Láminas esmeriladas.
- Guantes descartables.
PROCEDIMIENTO:
- Lavar, secar las manos y colocar los guantes.
- Explicarle al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Seleccionar el dedo anular de la mano a puncionar y dar masaje para mejorar la irrigación sanguínea.
- Realizar asepsia con torunda de algodón humedecida con alcohol etílico al 70%.
- Con lanceta desechable efectuar la punción limpia y rápida de 2 a 3mm. de profundidad.
- Eliminar la primera gota de sangre con un trozo de algodón seco.
- Colocar el capilar de modo que penetre la sangre libremente.
- Cuando se ha obtenido la cantidad de sangre adecuada se presiona el lugar de la punción con un trozo
de algodón humedecido con alcohol etílico al 70% hasta que cese el sangramiento.
- Colocar los capilares verticalmente en la plastilina.
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FUENTES DE ERROR:
- Presión excesiva hace que salga líquido intersticial que puede diluir la muestra y acelerar la
coagulación.
- Punción inadecuada.
- Puncionar con el dedo húmedo.
RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista.
2.0 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXÁMENES HEMATOLÓGICOS
PROPÓSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas hematológicas.
MUESTRA REQUERIDA:
De 2 a 3 mL de sangre venosa con anticoagulante para hematología (se emplean de 1 mg ± de EDTA por
mL de sangre).
MATERIALES:
- Jeringa estéril para extraer 3 mL con aguja 21 X 1 ½ o sistema de extracción al vacío.
- Torundas de algodón.
- Alcohol etílico (70%).
- Láminas esmeriladas.
- Torniquete.
- Tubos con anticoagulante 12 x 75 mm y tapón de hule o tubos del sistema de extracción al vacío.
- Gradilla.
- Guantes decartables.
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PROCEDIMIENTO:
- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo y la lámina adecuadamente.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Sentar cómodamente al paciente para la extracción tomando en cuenta que el área de sangría debe
contar con suficiente iluminación.
-Seleccionar la vena apropiada para la punción.
- Realizar asepsia con torunda de algodón humedecida con alcohol etílico al 70% de adentro hacia fuera.
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre la mano
varias veces para favorecer la dilatación de las venas.
- Proceder a puncionar la vena seleccionada.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrás el émbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en la jeringa hasta
llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado al vacío introducir el tubo en el
dispositivo (holder) de manera que al ejercer presión se atraviese el extremo inferior de la aguja, para
que la sangre fluya hacia el tubo por efecto del vacío.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodón sobre la piel donde
se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rápido por debajo de la pieza de algodón, pedir al paciente que
presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la sangre por las
paredes del mismo.
- Mezclar la sangre invirtiendo los tubos suavemente varias veces.
- Verificar nuevamente la identificación del paciente.
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FUENTES DE ERROR:
- Mezcla inadecuada de la sangre.
- Relación inadecuada de sangre y anticoagulante.
- Prolongada aplicación del torniquete.
- Extracción violenta de la sangre, que puede provocar hemólisis.
- Empleo de tubos mal lavados.
- Dejar los tubos con muestras destapados (evaporación del plasma, y contaminación).
RESPONSABLE:
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3.0 PREPARACIÓN Y TINCIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEOS
PROPÓSITO:
Obtención de un frotis sanguíneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de la

sangre.
MUESTRA REQUERIDA:
Sangre capilar o venosa recién extraída sin anticoagulante o sangre con anticoagulante EDTA.
MATERIAL Y REACTIVOS:
- Portaobjeto de vidrio con extremo esmerilado.
- Alcohol etílico al 70%.
- Torunda de algodón.
- Bandeja o soporte para la coloración.
- Aceite de inmersión.
- Reloj marcador.
- Perilla de hule.
- Papel toalla.
- Solución de Wright.
- Buffer pH 6.8.
PROCEDIMIENTO:
- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar con agua.
- Identificar la lámina adecuadamente en el extremo del portaobjeto (parte esmerilada).
- Colocar en el portaobjeto una pequeña gota de sangre de 2 mm de diámetro a una distancia de 2 a 3

mm del extremo del portaobjeto y hacer rápidamente el extendido.
- Para evitar la coagulación; se puede utilizar sangre con EDTA. (Siempre conviene realizar cuando
menos dos frotis).
- Poner la lámina extensora a un ángulo de 45° del portaobjeto y moverla hacia atrás para que haga
contacto con la gota, que debe extenderse rápidamente.
- El extendido debe tener unos 30 mm. de largo.
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- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Colocar la preparación de sangre, completamente seca, sobre un soporte. (no necesita fijación previa
pues el metanol del Wright fija la preparación).
- Cubrir todo el frotis con coloración de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o el tiempo necesario
según la maduración del colorante).
- Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8) evitando derramar el Wright, mezclar con una perilla de
hule con suavidad para asegurar una mezcla uniforme, aparecerá una película verde metálico, dejarlo en
reposo por 5 minutos o el tiempo necesario según la maduración del Wright.
- Lavar la lámina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla.
- Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodón impregnada con alcohol, para
eliminar todos los restos de colorante.
- Dejar secar la preparación al aire colocando la lámina en posición vertical en una rejilla para
portaobjeto.
FUENTES DE ERROR:
- Falta de mezclado de la sangre previo a la elaboración del frotis
- Irregularidades en la superficie del frotis y espacios en blanco.
- Que el frotis se extienda hasta el borde de la lámina.
- Extendidos gruesos o muy delgados.
- Tiempos de coloración inadecuados.
- Mal lavado de la lámina.
- Buffer con pH muy ácido o alcalino.
- Falta de filtración del colorante del Wright.
- Uso de portaobjetos con polvo, grasa o huellas dactilares.
RESPONSABLE:
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4.0 EXAMEN MICROSCÓPICO DEL FROTIS SANGUÍNEO PARA FÓRMULA DIFERENCIAL
PROPÓSITO:
Establecer y evaluar las características morfológicas de cada tipo de células y ver la frecuencia de las
diferentes líneas leucocitarias.
MUESTRA REQUERIDA:
Frotis de Sangre coloreado.
MATERIALES:
- Frotis de sangre coloreado.
- Papel limpia lente.
EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
- Contómetro diferencial manual.
PROCEDIMIENTO:
- La observación inicia con el objetivo 40x para obtener un cuadro general del número de células, la
distribución de las mismas y la calidad de la tinción.
- Seleccionar las áreas a observar con objetivo de inmersión 100x buscando una distribución homogénea
de las células.
- Realizar el recuento diferencial identificando las características y grado de desarrollo de las células;
estos se reportan en porcentajes para lo cual tiene que contarse un mínimo de 100 leucocitos estos
pueden convertirse en número de células por mm³ (número absoluto).
- Observar en los eritrocitos: el tamaño, la forma, la reacción de coloración, las inclusiones

intracitoplasmáticas y la presencia del núcleo (eritroblastos).
FUENTES DE ERROR:
- Observación de los leucocitos en los extremos de la lámina.
- Realizar el recuento diferencial con un objetivo que no sea el de inmersión.
- Hacer la fórmula diferencial en base de menos de 100 células blancas.
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FORMA DE REPORTE:
El recuento diferencial de leucocitos se reporta en términos porcentuales según las diferentes líneas
observadas.
LEUCOCITOS NIÑOS (1-8 años) ADULTOS

NEUTRÓFILOS SEGMENTADOS 20 – 45 % 60 – 70 %
NEUTRÓFILOS EN BANDA 0–4% 2 –6 %
LINFOCITOS 40 – 60 % 15 – 40 %
EOSINÓFILOS 1–5% 1–4%
BASÓFILOS 0–1% 0–1%
MONOCITOS 2–8% 2–8%
Las cifras de Leucocitos también pueden expresarse en valores absolutos, aplicando la siguiente
formula:
NÚMERO DE GB X C/U DE LA FORMULA DIFERENCIAL (N, L ,B, M, E)
100 %
GB: Glóbulos Blancos.
N: Neutrófilos.
L: Linfocitos.
B: Basófilos.
M: Monocitos.
E. Eosinófilos.
Esto nos dará como resultado el valor absoluto de leucocitos por milímetro cúbico, donde la suma es
igual al recuento del total de los leucocitos.
RESPONSABLE:
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5.0 FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA
PROPÓSITO:
Observación detallada de todos los elementos de la sangre, con el fin de evaluar la condición
hematológica del paciente.
MUESTRA REQUERIDA:
Frotis de sangre periférica coloreado con Wright.
MATERIALES:
- Papel limpia lente.
EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
PROCEDIMIENTO:
Cada técnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el
recuento diferencial. Debe formar el hábito de verificar los puntos siguientes.

ERITROCITOS:
- Tamaño: microcitosis, macrocitosis y normocitos. El grado de variación en tamaño se reduce al
término de anisocitosis.
- Forma: esferocitos, codocitos, eliptocitos, megalocitos, drepanocitos, acantocitos, equinocitos
etc. El grado de variación en forma se reduce al término de poiquilocitosis.
- Concentración de hemoglobina: Grado importante de hipocromía, e hipercromía aparente,
observar el aumento aparente o evidente de la proporción de glóbulos rojos policromáticos.
- Otros hallazgos anormales: La policromatofilia (basófilia difusa), punteado basófilo, anillo de
Cabot, cuerpos de Howell-Joly, etritroblastos, las células parasitadas y la formación de
Rouleaux.
LEUCOCITOS:
- Observar la madurez de los leucocitos, el número promedio, anormalidades morfológicas,
signos de malignidad, la variante de leucocitos que predominan.
- Comparar el recuento de leucocitos por milímetro cúbico con lo observado en el frotis.
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PLAQUETAS:
- Observar si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de tres a ocho
plaquetas por cien glóbulos rojos). La disminución de las plaquetas en un frotis puede deberse a
la manera de realizarlo, pero su falta o su disminución considerable, en un frotis bien hecho
pueden hacer sospechar de trombocitopenia. Debe observarse si las plaquetas que se
encuentran parecen normales o existen muchas formas gigantes (macroplaquetas) o
notablemente pequeñas.
- Comparar el recuento de plaquetas por milímetro cúbico con lo observado en el frotis.
FUENTES DE ERROR:
- Observar los elementos celulares en la parte más gruesa del frotis.
- Coloración defectuosa del frotis.
- Observar el extendido con un objetivo diferente al de inmersión.
- Equipo en mal estado.

- Aceite de inmersión de mala calidad o en malas condiciones.
FORMA DE REPORTE:
LÍNEA ROJA:
- Anisocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio).
- Poiquilocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio).
- Hipocromia: leve, moderada o severa.
- Otros: reportar cualquier hallazgo anormal.
LÍNEA BLANCA:
- Madurez de los leucocitos.
- Variante de leucocitos que predomina.
- Alteraciones encontradas en los leucocitos.
LÍNEA PLAQUETARIA:
- Cantidad.
- Tamaño: macro o micro plaquetas.
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Valores de referencia:
Eritrocitos normocrómicos.
Leucocitos maduros sin presencia de anormalidades.
Plaquetas distribución y tamaño normal, comparar los observado en recuento con mm³.
RESPONSABLE:
6.0 HEMATOCRITO
PROPÓSITO:
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados en porcentaje del volumen de sangre
como una fracción del volumen de sangre, para determinar si un paciente presenta o no
anemia.
MUESTRA REQUERIDA:
Sangre venosa con EDTA o sangre capilar tomada directamente en tubos capilares
heparinizados.
MATERIALES:
- Tubos capilares heparinizados o no heparinizados.
- Plastilina.
- Lector de hematocrito.
EQUIPO:
- Micro centrífuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 13,000 rpm.
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PROCEDIMIENTO:
- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante acción capilar, ya sea por una punción que hace
que la sangre fluya libremente o por sangre venosa bien mezclada. Los tubos capilares deben
estar llenos en dos terceras partes.
- El extremo opuesto y exento de sangre se llena con plastilina para sellarlo.
- Colocar el capilar sellado en una centrífuga para el micro hematocrito, con el extremo abierto
hacia el centro de la microcentrífuga.
- Centrifugar a velocidades de 10,000 a 13,000 rpm por 5 minutos.
- Después de centrifugado leer en la tabla para hematocrito haciendo coincidir el menisco del
plasma con el final de la marca de la tabla y el fondo del empacado de eritrocitos que coincidan
con el inicio de la marca de la tabla.
- Leer siempre en la dirección de la numeración ascendente cuantos mL de empacados de
eritrocitos tiene la muestra.
FUENTES DE ERROR:
- Presencia del líquido intersticial si se obtiene de una punción dactilar.
- Éstasis prolongado en la toma de la muestra.
- Exceso de anticoagulante.
- Llenado incorrecto del tubo capilar.
- Mezcla inadecuada de la sangre.
- Incluir en la lectura la capa de leucocitos.
- Lectura del hematocrito en posición paralela.
- Evaporación del plasma durante la centrifugación.
- Dejar transcurrir el tiempo sin hacer la lectura.
- Formación de burbujas en el plasma.
- Centrifugación inadecuada.
- Instrumento de lectura en malas condiciones o deteriorados.
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FORMA DE REPORTE:
Se reporta el volumen de eritrocitos empacados en porcentaje del volumen total.
Hombre: 42%-51%
Mujer: 38%-42%
Niños: 33%-38%
Recién nacidos: Hasta 55%
RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista
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7.0 HEMOGLOBINA
MÉTODO DE LA CIANAMETAHEMOGLOBINA
PROPÓSITO:
Evaluar la presencia y la severidad de la anemia. Este método consiste en efectuar una dilución
exacta de sangre en una solución que contiene ferrocianuro de potasio, que convierte la
hemoglobina en cianametahemoglobina y se compara colorimetricamente con una solución
patrón de cianametahemoglobina de concentración exacta y estable.
MUESTRA REQUERIDA:
Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
MATERIAL Y REACTIVO:
- Cubetas estandarizadas de lectura.
- Pipeta automática de 20 µL.
- Tubos de 13 x 100 mm.
- Gradilla para tubos.
- Puntas plásticas.
- Papel parafilm.
- Pipeta serológica.
- Propipeta o bulbo de hule.
- Reactivo de cianametahemoglobina.
- Estándar de hemoglobina.
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EQUIPO:
- Espectrofotómetro.
- Mezclador mecánico (opcional).
Reloj marcador.
PROCEDIMIENTO:
- Hacer una serie de tres tubos con el estándar de hemoglobina para calcular el factor de
calibración.
- Colocar al primer tubo 5 mL de estándar puro.
- Colocar al segundo tubo 2.5 mL de estándar puro.
- Colocar al tercer tubo 1 mL de estándar puro.
- Llevar al volumen de 5 mL con cianametahemoglobina el segundo y tercer tubo.
- Mezclar y dejar reposar 10 minutos.
- Leerlos en espectrofotómetro a 540 nm y anotar la densidad óptica de los tubos.
- Obtener la concentración de cada tubo en gramos por decilitros.
- Dividir la concentración de cada tubo entre la densidad óptica.
- Sumar los 3 factores y sacar un promedio.
- Este será el factor de calibración por el cual se multiplicarán las densidades ópticas de las
muestras.
- La preparación de la cianametahemoglobina estará sujeto a las indicaciones del fabricante del
reactivo.
- Medir exactamente 5 mL solución de cianametahemoglobina en un tubo de 13x100 mm.
- Con pipeta automática colocar 20 microlitos de sangre.
- Mezclar bien y dejar reposar por 10 minutos.
- Transferir a la cubeta de lectura y leer en el espectrofotómetro a 540 nm.
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FUENTES DE ERROR:
- Toma inadecuada de muestra.
- Éstasis prolongada que resulta de dejar un torniquete en el brazo.
- Presencia de líquido insterticial que diluye la muestra de sangre.
- Mezclar incorrectamente de la muestra.
- Errores de pipeteado o dilución.
- Coagulación de la muestra.
- Sangre hiperlipémica (afecta el color)
- Numero alto de glóbulos blancos por mm. cúbico.
- Calibración incorrecta.
- Reactivo expuesto a la luz.
FORMA DE REPORTE:
La hemoglobina se reporta en gr/dL.
Lectura de muestra x Concentración de estándar
Lectura del estándar
Hombre: 14.0-17.0 gr/dL
Mujer: 12.5-15.0 gr/dL
Niños: 11.0-13.0 gr/dL
Recién nacidos: Hasta 18 gr/dL
RESPONSABLE:
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8.0 RECUENTO DE LEUCOCITOS
PROPÓSITO:
Evaluar la cantidad de células nucleadas que se encuentran en la muestra de sangre (leucocitos
y eritroblastos).
MUESTRA REQUERIDA:
2-3 mL de sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
MATERIALES Y REACTIVOS:
- Tubos de 12x75 mm.
- Cámara de Neubauer.
- Laminilla para cámara de Neubauer.
- Gradillas para tubos.
- Acido acético glacial al 3%.
EQUIPO:
- Microscopio.
- Contómetro manual.
- Agitador.
PROCEDIMIENTO (Técnica en tubo):
- Colocar 0.4 mL de ácido acético glacial al 3% en un tubo 12x75mm.
- Mezclar perfectamente la sangre, y tomar exactamente 20 µL con pipeta automática. Y

colocarla en el tubo que contiene el acido acético glacial al 3 % lo que hace una dilución de la
sangre 1:20.
- Mezclar por un mínimo de 2 minutos.
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- Dispensar con pipeta automática o con capilar la dilución en el borde de la laminilla para
cámara Neubauer.
- Esperar 3 - 5 minutos Para que la célula se estabilicen.
- Luego se procede a contar los glóbulos blancos en el microscopio con el objetivo 10x y con
poca luz en las dos áreas primarias opuestas de la cámara, contar las células que aparecen.
Cuando el trabajo no es excesivo se cuentan las cuatro áreas primarias para tener un dato más
exacto.
- En caso de una leucopenia de menos de 1,000 leucocito/mm³, la dilución se hace 1:10.
- En caso de una leucocitosis de mas de 30,000 leucocito/mm³, la dilución se hace 1:200 con
diluyente de leucocitos.
FUENTES DE ERROR:
- Desintegración de los leucocitos cuando se deja la muestra mucho tiempo sin procesar.
- Pipeta mal calibradas.
- Dilución incorrecta.
- Llenado incorrecto de la cámara.
- Presencia de levaduras o suciedad en el liquido de dilución.
- Calculo erróneo de las células contadas.
- Usar cámara y laminilla sucios y húmedos.
- Usar laminillas corrientes.
- Puntas defectuosas.
- Cámaras de mala calidad.
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FORMA DE REPORTE:
Reportar el número de leucocitos contados en las dos áreas opuestas de la cámara y reportar
por mm³.
Cálculos:
- Cuando la dilución es 1:20 el número de leucocitos contados en las dos áreas primarias
opuestas de la cámara se multiplica x 100 = Nº de leucocitos/mm³, y se multiplicará por 50 si se
cuentan 4 área primarias.
- Cuando la dilución es 1:10 el factor por el cual se multiplican los leucocitos, será 50 si se
cuentan dos áreas primarias opuestas y será 25 si se cuentan 4 áreas primarias.
- Cuando la dilución es 1:200 y se cuenta toda el área central, el factor será 2,000. Cuando en
una fórmula diferencial se obtienen más de 10 eritroblastos por 100 células blancas contadas,
se hará la siguiente corrección, debido a que el líquido de dilución de los leucocitos no destruye
el núcleo de los eritroblastos y cuando se efectúa el recuento se cuenta como si fueran
leucocitos.
Nº de células contadas en cámara x 100 = Nº leucocitos verdaderos
100 + % de eritroblastos encontrados
Si en una formula diferencial salieron 80% de eritroblastos, en realidad se han contado 180
células nucleadas, luego de 180 células Nucleadas 80 son eritroblastos, en el número de
leucocitos contados se obtendrá una cantidad “X” de eritroblastos.
Adultos: 5,000-10,000 x mm³
Niños: 5,000-12,000 x mm³
Recién nacidos: 10,000-30,000 x mm³
RESPONSABLE:
25
RECUENTO DE PLAQUETAS (Método directo en cámara)
PROPÓSITO:
Evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para lo cual se diluye una muestra de
sangre con una sustancia con un líquido diluyente que hace a las plaquetas más visibles.
MUESTRA REQUERIDA:
MATERIAL Y REACTIVOS:
- Tubos de vidrios 12x75mm.
- Cámara Neubauer.
- Laminilla para cámara de Neubauer.
- Tubo capilar.
- Papel filtro.
- Caja de Petri.
- Solución de Gower.
EQUIPO:
- Microscopio.
26
- Reloj marcador.
PROCEDIMIENTO (técnica en tubo):

- Colocar 2 mL de reactivo de Gower en un tubo de 12 x75 mm.
- Mezclar bien la muestra de sangre varias veces.
- Colocar exactamente 10 µL de sangre en el tubo que contiene el diluyente.
- Mezclar por un mínimo de 3 minutos.
- Dispensar con pipeta automática o con capilar la dilución en el borde de la laminilla de la
cámara Neubauer. (Anexo 8)
- Colocar la cámara en una caja de petri sobre un disco del papel filtro húmedo, para evitar la
evaporación, se tapa y se espera de 10 a 20 minutos para que se depositen bien las plaquetas.
- Proceder al conteo de las plaquetas en el microscopio con el objetivo 40x y poca luz.
- Contar toda el área central.
- Observar las plaquetas como pequeñas partículas de gran refringencia.
- Correlacionar el recuento de plaquetas obtenido en la cámara con las plaquetas que se
observan en el frotis.
FUENTES DE ERROR:
- Desintegración de las plaquetas cuando se deja mucho tiempo la muestra sin procesar, y
adherencia a las paredes del tubo de vidrio.
- Tomar la muestra de sangre en área con cianosis.
- Pipetas mal calibradas.
- Dilución incorrecta.
- Mal almacenamiento del líquido de dilución el cual debe conservarse en refrigeración.
- Presencia de bacterias en el líquido de dilución.
- Falta de filtración del diluyente antes de su uso.
27
- Cámara y laminilla sucias o húmedas.
- Uso de laminilla corriente.
- No comparar el recuento directo con el indirecto.
FORMA DE REPORTE
Las plaquetas contadas en la cámara se multiplican por el factor correspondiente y se reportan
por mm³ de sangre.
Calculo:
Nº de plaquetas contadas X 2,000 = Nº de plaquetas/mm³
150,000-450,000/mm³
RESPONSABLE:
ESTIMADO DEL NÚMERO DE PLAQUETAS (Método indirecto)
PROPÓSITO:
Evaluar el número de plaquetas presentes en la sangre, a través de la observación de un frotis

coloreado, con el fin de comparar con el conteo directo.
MUESTRA REQUERIDA:
Frotis de sangre coloreado con Wright.
- Papel limpia lentes.
EQUIPO:
- Contómetro.
- Microscopio.
28
PROCEDIMIENTO:
- Colocar la lámina coloreada en la platina del microscopio.
- Observar con el objetivo 40x.
- Colocar una gota de aceite de inmersión en la lámina coloreada.
- Observar con el objetivo 100x.
- Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos deben
contener aproximadamente 100 glóbulos rojos).
FUENTES DE ERROR:
- Hacer el conteo en los márgenes del frotis.
- Aceite de inmersión de mala calidad o contaminado.
- No comparar el recuento indirecto con el directo.
FORMA DE REPORTE:
Calcular el número de plaquetas de la siguiente forma:
Estimado de plaquetas mm³ = No. Plaquetas observadas X No. Glóbulos Rojos mm³
1,000
No. Glóbulos Rojos mm³ = Hematocrito + 5% del Hematócrito
100,000
RESPONSABLE:
29
10.0 RECUENTO DE RETICULOCITOS
PROPÓSITO:
Evaluar el funcionamiento de la médula ósea ya que los reticulocitos son glóbulos rojos jóvenes
que constituyen un índice de la respuesta eritropoyética.
MUESTRA:
- Tubos de 12 x 75 mm.
- Capilares.
- Láminas portaobjeto en buen estado.
- Azul de cresil brillante.
EQUIPO:
- Microscopio.
- Baño de María o estufa a 37° C.
PROCEDIMIENTO:
- Verter un capilar lleno de azul cresil brillante y dos capilares llenos de sangre en un tubo 12x75
mm.
- Mezclar bien e incubar a 37°C o a temperatura ambiente durante 15 minutos.
- Preparar frotis de la mezcla de la forma usual, dejar secar.
30
- Leer al microscopio con objetivo de inmersión.
Contar 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos
observados.
FUENTES DE ERROR:
- No incubar los capilares a 37°C.
- Colorante con precipitados.
- Observar en campos donde los eritrocitos no estén uniformemente distribuidos.
FORMA DE REPORTE:
Se reportan los reticulocitos por cada 100 eritrocitos observados.
CALCULO:
% Reticulocitos = Total de reticulocitos observados en 10 campos
10
Adultos: 0.5% - 1.5%
Recién nacidos: 2.5% - 6.5%
RESPONSABLE:
31
11.0 VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIÓN
PROPÓSITO:
La velocidad de Eritrosedimentación mide la velocidad de sedimentación de los glóbulos rojos
en el plasma.
MUESTRA REQUERIDA:
3 mL de Sangre venosa con EDTA.
MATERIALES:
- Tubos Westergren
- Soporte para tubos de sedimentación.
EQUIPO:
- Reloj marcador.
PROCEDIMIENTO:
- Mezclar la muestra de sangre.
- Llenar un tubo de Westergren hasta la señal cero, introduciendo cuidadosamente la sangre al
tubo , conteniendo la sangre hasta el fondo del tubo, cuidar de que no formen burbujas.
- Colocar en el soporte, en posición perfectamente vertical durante 1 hora.
- A la hora exacta leer de arriba hacia abajo el valor numérico en mm, midiendo la distancia que
hay entre el punto más bajo del menisco de la superficie y el límite superior del sedimento de
glóbulos rojos; los mm, leídos corresponden a la velocidad de sedimentación por hora.
Hacer lectura anexada en el soporte.
FUENTES DE ERROR:
- Dejar transcurrir más de 2 horas entre la toma de la muestra y el montaje de la prueba.
- Efectuar la prueba en temperaturas muy altas o muy bajas.
32
- No leer a la hora exacta.
- Presencia de coágulo en la sangre.
- No realizar la debida corrección cuando es necesaria.
- No hacer una buena mezcla de la muestra.
- Que el tubo no este en posición completamente vertical.
- La presencia de burbujas al llenar el tubo.
FORMA DE REPORTE:
Velocidad de eritrosedimentación se expresa en milímetros por hora (mm/h).
Mujeres: 0-15 mm/h
Hombres: 0-7 mm/h
Niños: 0-20 mm/h
Recién nacidos: 0-2 mm/h
RESPONSABLE:
12.0 TIEMPO DE SANGRAMIENTO

PROPÓSITO:
Evaluar el funcionamiento y número de plaquetas así como la contractilidad capilar.
33
MUESTRA:
Sangre capilar del dedo o del lóbulo de la oreja.
MATERIALES:
- Lanceta descartable estéril.
- Papel filtro.
- Torundas de algodón humedecidas con alcohol.
EQUIPO:
- Cronómetro.
PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Desinfectar cuidadosamente el área de punción.
- Puncionar el dedo índice a modo que corte transversalmente la dirección de las huellas
Digitales, o el lóbulo de la oreja.
- Secar con el papel filtro cada medio minuto hasta que cese el sangramiento.
- Realizar el secado en forma descendente o circular sin tocar la piel.
- Anotar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangramiento y reportar.
FUENTES DE ERROR:
- Presionar el dedo para que fluya la sangre.
- Rozar el papel filtro al dedo.
34
- Punción inadecuada.
- No marcar el tiempo en el momento de la punción.
- Puncionar el área seleccionada cuando aún está húmeda.
FORMA DE REPORTE:
Reportar el tiempo de sangrado en minutos y segundos.
Valor de referencia:
1 - 4 minutos.
RESPONSABLE:
13.0 TIEMPO DE COAGULACIÓN.

MÉTODO DE LEE Y WHITE
PROPÓSITO:
Evaluar en forma global el mecanismo intrínseco de la coagulación.
MUESTRA:
Sangre venosa.
MATERIALES:
- Jeringas descartables.
- Tubos 12x75mm.
- Torundas de algodón.
- Gradillas para tubos.
- Alcohol etílico al 70%.
- Torniquete.
EQUIPO:
- Baño de María a 37°C.
- Reloj marcador.
35
- Termómetro.
PROCEDIMIENTOS:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Obtener sangre venosa con una jeringa descartable y estéril.
- Poner en marcha el cronómetro en el momento en que la sangre penetre en la jeringa.
- Verter cuidadosamente 1 CC de sangre en 3 tubos, mantenerlos en baño María a 37ºC.
- Invertir cada medio minuto (sin agitar) los 3 tubos hasta que cada uno pueda invertirse sin que
se vierta su contenido.
- Tomar el tiempo de coagulación de cada uno de los tubos y luego sacar un promedio de los
tres.
FUENTES DE ERROR
- Uso de material mal lavado.
36
- No tomar el tiempo en el momento de la extracción.
- Temperatura del Baño de María inadecuada.
- No cumplir con los intervalos de tiempo indicados en el procedimiento.
- Invertir bruscamente el tubo.
FORMA DE REPORTE:
El tiempo de coagulación se reporta en minutos.
5-10 minutos.
RESPONSABLE:
14.0 CONCENTRADO DE STROUT

PROPÓSITO:
37
Concentrar los parásitos por medio de la centrifugación repetida de tal modo que permita
observarlos microscópicamente.
MUESTRA REQUERIDA:
5 – 10 mL de sangre venosa sin anticoagulante o sangre en tubos con anticoagulante.
La sangre se obtendrá posterior a los 6 días de la picadura de la chinche.
- Jeringas descartables.
- Tubos de 13x100 mL.
- Pipeta Pasteur.
- Portaobjetos.
- Cubreobjetos.
- Torundas de algodón humedecidas con alcohol.
- Aplicadores de madera.
- Torniquete.
- Colorante Giemsa o Wright.
- Buffers pH 6.8.
EQUIPO:
- Centrífuga.
- Microscopio.
- Reloj marcador.
PROCEDIMIENTO:
- Extraer 5 – 10 mL de sangre venosa. Dejar que la sangre se coagule y que el coágulo se
retraiga espontáneamente (si se toma sin anticoagulante); o centrifugar la sangre con
anticoagulante.
38
- Decantar el suero o plasma así obtenido a un tubo de centrífuga.
- Centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos, para separa los glóbulos rojos.
- Centrifugar sobrenadante a 3000 rpm por 1 minuto.
- Observar el sedimento entre porta y cubreobjeto con objetivo 10x y 40x, buscando formas
móviles.
- Siempre que una prueba resulte positiva hacer lámina (gota gruesa o frotis) coloreada por
Giemsa o Wright para enviar a control de calidad al Laboratorio Central.
- Es aconsejable examinar de 3 a 4 preparaciones para mayor sensibilidad del examen.
- Si en la preparación se obtiene un resultado negativo, repetir el examen por segunda vez, si
esta resultara negativa nuevamente se realizará una tercera prueba, este muestreo se realizará
con intervalos de 5 días.
FUENTES DE ERROR:
- Centrifugación inadecuada.
- Extracción inadecuada del sobrenadante.
- Realizar la prueba en la fase crónica después de los 30 días o antes de los 6 días posteriores a
la picadura.
FORMA DE REPORTE:
“Se observa Trypanosoma cruzi” cuando se observa presencia del parásito en la preparación.
“No se observa Trypanosoma cruzi en la presente preparación”. Cuando en la preparación no se
observa ningún parásito.
RESPONSABLE:
15.0 BIBLIOGRAFIA
39
- Kahleen Morrison Treseler. Laboratorio Clínico y pruebas de diagnóstico, manual modernos,
primera edición, México, 1998.
- Detmer, William ; “Manual de Pruebas Diagnosticas” Nicolli, Diamer Mexico, Editorial

Manual Moderno, 1ra Edición 1997.
- Lynch Método de Laboratorio, 2da Edicion, Mexico Editorial Interamericana 1972.
- OPS, Manual de técnicas básicas para un laboratorio de salud, 1ra edición Paltex N°2 /
EEUU 1983, OPS.
- Angel G. y Angel M. Interpretación clínica de laboratorios, quinta edición, Colombia, 1996
Elaborado por Revisado por Autorizado por

Lic. Jeimy Stefany Vasquez Lic. Vanessa Iveth Herrera de Lic Jeimy Stefany Vasquez
Martinez Martinez Martinez
16.0 ANEXOS
40
41
42
43

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS

En la actualidad se han desarrollado técnicas cualitativas y cuantitativas de los componentes celulares,

5. Todo material cortopunzante se debe descartar en garrafones con hipoclorito de sodio

1. Que el Licenciado en laboratorio clínico encargado del área técnica conozca el

Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematológicas.

Sangre capilar, Obtener 5 capilares heparinizados.

- Alcohol etílico (70%).

- Plastilina para sellar capilares con su respectiva base numerada.

- Lavar, secar las manos y colocar los guantes.

- Explicarle al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.

- Con lanceta desechable efectuar la punción limpia y rápida de 2 a 3mm. de profundidad.

- Eliminar la primera gota de sangre con un trozo de algodón seco.

- Colocar el capilar de modo que penetre la sangre libremente.

- Colocar los capilares verticalmente en la plastilina.

- Puncionar con el dedo húmedo.

Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista.

2.0 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXÁMENES HEMATOLÓGICOS

Obtener sangre venosa para realizar pruebas hematológicas.

- Jeringa estéril para extraer 3 mL con aguja 21 X 1 ½ o sistema de extracción al vacío.

- Alcohol etílico (70%).

- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes.

- Identificar el tubo y la lámina adecuadamente.

- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.

-Seleccionar la vena apropiada para la punción.

- Proceder a puncionar la vena seleccionada.

- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.

- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.

- Mezclar la sangre invirtiendo los tubos suavemente varias veces.

- Verificar nuevamente la identificación del paciente.

- Mezcla inadecuada de la sangre.

- Relación inadecuada de sangre y anticoagulante.

- Prolongada aplicación del torniquete.

- Extracción violenta de la sangre, que puede provocar hemólisis.

- Empleo de tubos mal lavados.

Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista.

Obtención de un frotis sanguíneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de la

- Portaobjeto de vidrio con extremo esmerilado.

- Alcohol etílico al 70%.

- Bandeja o soporte para la coloración.

- Identificar la lámina adecuadamente en el extremo del portaobjeto (parte esmerilada).

- Colocar en el portaobjeto una pequeña gota de sangre de 2 mm de diámetro a una distancia de 2 a 3

- El extendido debe tener unos 30 mm. de largo.

- Lavar la lámina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla.

- Falta de mezclado de la sangre previo a la elaboración del frotis

- Irregularidades en la superficie del frotis y espacios en blanco.

- Que el frotis se extienda hasta el borde de la lámina.

- Extendidos gruesos o muy delgados.

- Tiempos de coloración inadecuados.

- Mal lavado de la lámina.

- Buffer con pH muy ácido o alcalino.

- Falta de filtración del colorante del Wright.

- Uso de portaobjetos con polvo, grasa o huellas dactilares.

Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista.

Frotis de Sangre coloreado.

- Frotis de sangre coloreado.

- Papel limpia lente.

- Microscopio con objetivo 40x y 100x.

- Contómetro diferencial manual.

- Observar en los eritrocitos: el tamaño, la forma, la reacción de coloración, las inclusiones