FACULTAD MEXICANA DE MEDICINA

UNIVERSIDAD LA SALLE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Practica 2. EXUDADO FARINGEO

Práctica 3. Prueba de susceptibilidad antimicrobiana

Grupo 202

Arauz Arredondo Bárbara Montserrat

 Practica 2. EXUDADO FARINGEO

Medio de cultivo, técnica de siembra, placa y asa bacteriológicas

Un medio de cultivo es una sustancia o conjunto de sustancias, que proporciona un ambiente
favorable para el crecimiento, desarrollo y multiplicación de microorganismos, como bacterias en un
ambiente controlado. (3)

La técnica de siembra
La técnica de siembra se refiere al proceso de transferir microorganismos a un medio de cultivo con
el objetivo de iniciar su crecimiento y multiplicación en condiciones controladas. Esto generalmente
implica el uso de un asa bacteriológica para tomar una muestra de la fuente de microorganismos y
sembrarla en el medio de cultivo. (2)

Placa bacteriológica
Una placa bacteriológica, también conocida como placa de agar, es un recipiente que contiene un
medio de cultivo sólido, generalmente agar-agar, en el que los microorganismos se siembran de
manera uniforme. Esto permite el crecimiento de colonias individuales de bacterias, lo que facilita su
identificación y estudio. (3,4)

El asa bacteriológica es una herramienta en forma de asa pequeña y alargada, que se utiliza para
tomar muestras de microorganismos y transferirlas a un medio de cultivo. Puede ser de metal o
plástico y se esteriliza previamente de su uso para evitar la contaminación cruzada.

2. ¿Para qué se utiliza un medio de cultivo?

Los medios de cultivo se utilizan para el aislamiento, identificación y el estudio de microorganismos,
la investigación de enfermedades infecciosas.

3. 10 medios de cultivo para bacterias

Tabla 1. Medios de cultivo para bacterias

Medios de Cultivo Objetivo principal

No selectivos

Agar Sangre Recuperación de bacterias y hongos. (1)

Agar chocolate Recuperacion de bacterias, incluidas Haemophilus y Neisseria

gonorrhoeae. (1,4)

Caldo tioglicolato Cantidades pequeñas de bacterias aerobias y anaerobias. (1,3)

Agar Mueller-Hilton Medio recomendado para estudios de sensibilidad bacteriana a

antibióticos.(1)
Selectivos

Agar MacConkey Bacilos gramnegativos, diferencial para las especies que fermentan
lactosa.

Agar sal-manitol Aislamiento selectivo de estafilococos, diferencial para Staphylococcus

aureus.

Agar Selectivo para Salmonella Y Shigella en cultivos entéricos.

xilosa-lisina-desoxicato

Especializados

Agar BCYE Recuperación de Legionella y Nocardia.

Agar de cultivo Lim Recuperación de Streptococcus agalactie.

Agar TCBS Recuperación del género Vibrio.

(1,5)

4.Cuáles son las características de un medio de cultivo

El cultivo general de la mayor parte de las bacterias requiere un medio con abundantes nutrientes
metabólicos. Estos medios por lo general comprenden agar, una fuente de carbono, y un hidrolizado
ácido o una fuente de material biológico sometida a degradación enzimática (p. ej., caseína). Puesto
que la composición de estos últimos es indefinida, se denominan medios complejos. Los factores que
deben controlarse durante la proliferación incluyen nutrientes, pH, temperatura, aireación,
concentración de sales y fuerza iónica del medio. (3)

5. Cuántos tipos de medios de cultivo hay de acuerdo con sus consistencia y al recipiente que
los contiene.

Los medios de cultivo pueden presentarse como como medios sólidos, semisólidos y líquidos. A los
medios líquidos pueden añadirse productos como el Agar. Este material gelatinoso convierte los
medios líquidos en semisólidos o sólidos, dependiendo de cómo se requiera. (5)

A.Medios en caldo- El empleo de medios de cultivo lı ́quidos permite la detección de pequeñas con-
centraciones de microorganismos o de microorganismos anaerobios a partir de una muestra de la
que se recuperan anaerobios de modo infrecuente (p. ej., LCR).(4)

B.Medios solidificados con agar-Los medios de cultivo se pueden clasificar en cuatro grupos
generales.
1) Medios no selectivos enriquecidos: Ideados para sustentar el crecimiento de la mayorıa
́ de los
microorganismos.(1,4)
2) Medios selectivos: Ideados para sustentar el crecimiento de ciertos microorganismos.(4)
3) Medios diferenciales: Los medios selectivos se hacen diferenciales agregando ingredientes
específicos que permiten la identificación del germen en una mezcla (p. ej. anñadiendose lactosa y
un indicador de pH ). (1)
4) Medios especializados: Detectar gérmenes específicos, que pueden ser exigentes o que se
presentan mezclados con muchos otros. (1)

6.Tipos de siembras bacteriológicas y para qué sirve cada una

Para obtener un cultivo bacteriano, se debe sembrar por estría cruzada en medio de cultivo de
aislamiento (Agar nutritivo) el inóculo (suspensión bacteriana), o colocar porciones de la muestra
(tejido o material propagativo) sobre el medio de cultivo, para propiciar el desarrollo y multiplicación
de las bacterias. (2)
A.Cultivo en placa
Método de vertido en placa - Se mezcla una suspensión sobre una placa con agar líquido a 50º y
se vierte en una caja de Petri. Se espera a que solidifique para posteriormente, las células
permanecen inmóviles en éste y proliferan dando origen a colonias. Las células aisladas proliferan
en colonias y se utilizan para establecer cultivos puros. (3)

Siembra en estría en placa- Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos.
Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se
hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas Petri
también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el
asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A
continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se
continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este
proceso varias veces se logra separar células individuales. (3)

Técnica extensión en placa- Un pequeño volumen de suspensión microbianan diluida que contiene
30-300 células se transfieren hacia el centro de la placa de agar y se extiende en forma uniforme con
una varilla estéril. El número de colonias debe ser similar al de microorganismos, por lo tanto se
utiliza para contar la población microbiana.(3)

B.Dilución
Se realizan diluciones seriadas de la suspensión y las muestras de cada dilución se cultivan en placa.
Si sólo unas cuantas muestras de una dilución en particular muestran crecimiento, se supone que
algunas de las colonias iniciaron a partir de una sola célula. Sólo puede utilizarse para aislar el tipo
predominante de microorganismo en una población mixta. (3)

7.¿Qué es un aislamiento bacteriano?

A fin de estudiar las propiedades de un microorganismo dado, es necesario manipularlo en cultivos

puros sin otros tipos de microorganismos. Para llevar a cabo esto, debe aislarse una sola célula de
todas las demás y cultivarse de forma tal que su progenie permanezca aislada. Se dispone de varios
métodos. (3)
En la obtención de un cultivo bacteriano puro extraído de un ambiente a otro mediante diversas
técnicas de laboratorio con la finalidad de inducir su crecimiento en medios de cultivo artificiales con
el objetivo de realizar su identificación. (2)

Metodología
1. Toma de la muestra.

Imagen 1.1 Toma de muestra.

2. Se frota firmemente la pared posterior de la faringe con un hisopo estéril,
especialmente las áreas blancas y las que presente signos de inflamación o
 exudación.
3. Con el hisopo realiza una descarga en las placas de agar sangre, agar chocolate y
agar sal manitol.

Imagen 1.2 placas de agar sangre, agar chocolate y agar sal manitol.

4. Se realizó Tinción Simple.

5. Se realizó tinción de Gram

Imagen 1.3 Se muestra material para tinción Gram e inicio de la tinción.

Resultados
Figura1.1 Se observa la muestra de tinción azul de metileno. Cocos Gram positivos.

Figura 1.2 Tincion de Gram. Se observa célula con bacterias Cocos grampostivos.

Figura 3.1 Agar sangre. Se observan colonias grises, granulosas con bordes irregulares. El
color del agar es rojo por lo que es Gamma-hemolítico, lo que nos dice que el hemocultivo
es negativo.

Figura 3.2 Agar sal manitol. Podemos observar que el color de agar cambio a amarillo. Los
Staphylococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acificando el medio, por lo que lo
vuelven e un color amarillo brillante. Lo que nos señala que es positivo para estafilococos
coagulasa + (Staphylococos aureus).
Figura 3.3 Agar chocolate. Se observan colonias de bacterias de una forma no muy bien
definida de color grisaceo .

Figura.4 Muestra obtenida del cultivo Agar Sangre. Se observan Gram positivo Micrococos.

Figura.5 Muestra obtenida del cultivo de Agar Chocolate Gram positivo.

Figura.6 Muestra obtenida del cultivo de Sal manitol. Se observan Gam +

Figura.7 Prueba de actividad de la catalasa. En la imagen se observa la reacción, que

puede describirse como`` burbujas´´ después de haber agregado el H2O2.
Se utiliza para diferenciar a los catalasa positivo (Staphylococcus aureus) de los catalasa
negativo por lo que podemos concluir que es un cocos catalasa positivo.

Figura.8 Prueba coagulasa positiva. Una prueba coagulasa positiva es el criterio clave para
la identificación de Staphylococcus aureus.

Análisis de resultados

Los resultados sugieren que todas las tinciones que obtuvimos fueron positivos para tinción
de Gram, ya que se observaban de un color azul-violeta. Además, morfologicamente
podemos describir las colonias con una forma redondeada por lo que son cocos.
En la muestra de agar sal manitol se observa un cambio a un color amarillo brillante, por lo
que podimos comprobar que el microorganismos inoculado era un Staphylococcus aureus,
el cual creció y fermentó el manitol del medio.
El hecho de que el agar sangre sea color rojo nos sugiere que no hay evidencia de
hemólisis en el agar, por lo que el hemocultivo es gamma-hemolítico.
Se realizó la prueba de actividad de la catalasa, en el cultivo que se nos proporcionó y en
nuestro cultivo de agar sal manitol, esto indica que las bacterias son catalasa positivas, lo
que sugiere que podrían ser Staphylococcus aureus u otros cocos catalasa positivos.
La última prueba fue la de coagulasa, solo la realizamos en el cultivo que se nos
proporcionó y salió positiva, aunque la falta de tiempo para esperar los resultados hicieron
que no se apreciara bien.

Práctica 3. Prueba de susceptibilidad antimicrobiana

Antibiogramas
Las pruebas de sensibilidad se utilizan para determinar la susceptibilidad de un
microorganismo frente a medicamentos antimicrobianos, a partir de la exposición de una
concentración estandarizada del gérmen a los fármacos.

Métodos para determinar un patrón de susceptibilidad bacteriana a los antibióticos

-Método del disco-placa: El antibiograma disco-placa consiste en depositar, en la superficie de agar

de una placa de petri previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel secante
impregnados con los diferentes antibióticos. Tan pronto el disco impregnado de antibiótico se pone en
contacto con la superficie húmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibiótico difunde al agar. El
antibiótico difunde radialmente a través del espesor del agar a partir del disco formándose un
gradiente de concentración. Transcurridas 18-24 horas de incubación los discos aparecen rodeados
por una zona de inhibición.
-Método del Epsilon test: Consiste en una tira de plástico no poroso de 6 cm de largo por 5 mm de
ancho que incorpora un gradiente predefinido de antimicrobiano equivalente a 15 diluciones. El
protocolo para preparar el inóculo es el mismo que para la difusión en disco.
-Método de dilución: La cuantificación de la actividad in vitro de los antimicrobianos se evalúa
habitualmente mediante alguna de las variantes de los métodos de dilución. Estos métodos se basan
en la determinación del crecimiento del microorganismo en presencia de concentraciones crecientes
del antimicrobiano, que se encuentra diluido en el medio de cultivo (caldo o agar).(7)

Candidatos para probar susceptibilidad bacteriana

Según el Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiano, la elección de los antibióticos

que se utilizan en las pruebas de susceptibilidad bacteriana dependen de varios factores,
incluyendo el tipo de infección, el organismo causante de la infección y la disponibilidad de
antibióticos. Sin embargo, en general, se prueban una serie de antibióticos que son
comúnmente utilizados para tratar infecciones bacterianas. Estos incluyen:
 (8) M100: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, 30th
Edition. (n.d.). National Institute of Health. Retrieved September 7, 2023, from
https://www.nih.org.pk/wp-content/uploads/2021/02/CLSI-2020.pdf

Penicilinas: Incluyen antibióticos como la penicilina, la amoxicilina y la ampicilina. Son efectivos

contra una amplia gama de bacterias grampositivas y algunas gramnegativas.

Cefalosporinas: Estos antibióticos, como la cefalexina y la ceftriaxona, son efectivos contra una
variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas.

Aminoglucósidos: Incluyen antibióticos como la gentamicina, la amikacina y la estreptomicina. Son

efectivos contra muchas bacterias gramnegativas.

Macrólidos: Incluyen antibióticos como la eritromicina, la claritromicina y la azitromicina. Son

efectivos contra una variedad de bacterias, especialmente aquellas que causan infecciones
respiratorias.

Tetraciclinas: Antibióticos como la doxiciclina y la tetraciclina son efectivos contra una variedad de
bacterias, incluyendo algunas que causan infecciones de la piel y las vías urinarias.

Sulfonamidas y trimetoprim: Estos antibióticos se utilizan a menudo en combinación y son

efectivos contra una variedad de bacterias gramnegativas y algunas grampositivas.

Vancomicina y teicoplanina: Estos antibióticos son efectivos contra bacterias grampositivas,

especialmente contra cepas resistentes a la meticilina, como Staphylococcus aureus resistente a la
meticilina (MRSA). (12)
 Criterios para seleccionar adecuadamente un antibiótico

En la elección del antimicrobiano deben considerarse las tasas de curación demostradas en

la práctica clínica, la tolerabilidad y el posible impacto en la selección de mecanismos de
resistencia, tanto sobre los patógenos infectantes como de los microorganismos que
integran la microbiota en cualquier localización. Por todo esto, podemos detreminar que
existen tres claves para la adecuada selección de antibióticos orales en las infecciones
respiratorias: la efectividad, los posibles efectos adversos y el impacto en la microbiota,
incluyendo la emergencia y selección de resistencias.(13)

Resultados

Tabla 2. Prueba de Susceptibilidad Antimicrobiana

Microorganismos aislado: Staphylococcus

Antibiótico [Microgram Sigla Caducidad Halo Gram

os] Bacter

S I R

Sulfamethoxazole 23.75 µg SXT 28/02/2022 25 mm Cocos Gram

positivo

Trimethoprim 1.25 µg

Vancomycin 30 µg VA 31/05/2023 13 mm Cocos Gram

positivo

Streptomycin 10 µg S 30/04/2022 19 mm Cocos Gram

positivo

Penicilina 10 UI P 30/11/2020 0 mm Cocos Gram

positivo

Cefotaxime 30 µg CTX 30/11/202 17 mm Cocos Gram

positivo
(8)
Imagen 2. Antibiograma en cultivo bacteriano con técnica de Kirby-Bauer.

Discusión
Las pruebas de susceptibilidad de un microorganismo a los antimicrobianos es una de las
funciones más importantes de los laboratorios de microbiología clínica. Su realización se
desarrolla mediante las pruebas de sensibilidad o antibiograma, cuyo principal objetivo es
evaluar en el laboratorio la respuesta de un microorganismo a uno o varios antimicrobianos,
traduciendo, en una primera aproximación, su resultado como factor predictivo de la eficacia
clínica. (4)
● Sensible: es probable, aunque no garantizado totalmente, que el fármaco es capaz
de inhibir al microorganismo patógeno; puede ser una elección apropiada para el
tratamiento.
● Intermedio: el fármaco puede ser efectivo a elevadas dosis o con dosificaciones más
frecuentes, o efectivo solamente en algunas zonas del organismo en las que el
antibiótico penetra fácilmente alcanzando concentraciones adecuadas.
● Resistente: el fármaco no es efectivo para inhibir el crecimiento del microorganismo;
no es un fármaco de elección para el tratamiento. (7)

Cada lote de Mueller-Hinton se debe evaluar utilizando una serie de cepas de control de
calidad. Uno de los problemas que pueden plantearse con el caldo de Mueller-Hinton es el
contenido en timidina que puede inducir a errores en la determinación de la CMI de
sulfamidas, como en este caso que utilizamos Sulfamethoxazole y de trimetoprim.(9)

Análisis de Antibiograma

En esta evaluación de la susceptibilidad de antibióticos para Staphylococcus aureus, según

los diámetros de las zonas de inhibición proporcionados parece ser sensible al
sulfametoxazol, (el diámetro de la zona de inhibición para el sulfametoxazol es de 25 mm),
pero resistente a la mayoría de los otros antibióticos probados, incluyendo la vancomicina,
estreptomicina, penicilina y cefotaxima.
Conclusión

Los medios de cultivo desempeñan un papel fundamental en la práctica clínica al

permitirnos aislar y identificar microorganismos para obtener diagnósticos precisos. La
selección cuidadosa de medios de cultivo específicos es esencial para el crecimiento de
bacterias particulares. Además, se emplean pruebas como la tinción de Gram y pruebas
bioquímicas, como la catalasa y la coagulasa, para una identificación más segura de los
microorganismos.

La prueba de susceptibilidad antimicrobiana es un paso crucial en la determinación del

tratamiento adecuado para las infecciones bacterianas. Su objetivo es identificar qué
antibiótico es más efectivo contra el agente causante de la infección. En este contexto, el
laboratorio de Microbiología Clínica juega un papel esencial al proporcionar información
rápida sobre el agente causal de la infección. En casos en los que una bacteria no muestra
una sensibilidad uniforme a los antibióticos, es importante informar sobre el antibiograma.
Esto se vuelve aún más relevante en un contexto de creciente resistencia antimicrobiana,
donde la elección adecuada de antibióticos se convierte en un desafío crítico para el
tratamiento y la evolución favorable de los pacientes.

Como en el caso de esta práctica, en la cual Staphylococcus aureus es resistente a la

penicilina.

Referencias Bibliográficas

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ELSEVIER EDITORIAL.
2. Senasica. Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria.
(2020). Ficha Técnica: Aislamiento de bacterias fitopatógenas y pruebas de
patogenicidad [Versión 1.0]. A
3. Jawetz, E., Melnick, J. L., Riedel, S., & Adelberg, E. A. (2019). Microbiología médica
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4. Bennett, J. E., Dolin, R., & Blaser, M. J. (2020). Mandell Douglas y Bennett.
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