CONTENIDO TEMÁTICO

LABORATORIO CLÍNICO N° IV

1. PARASITOLOGÍA
2. PARÁSITOS INTESTINALES LUMINALES Y TISULARES
3. PRODUCTO DE REPRODUCCIÓN DE DIFERENTES PARÁSITOS
INTESTINALES, HEPÁTICOS, PULMONARES Y SANGUÍNEOS: HUEVOS,
LARVAS, QUISTES, TROFOZOITOS, OOQUISTES
4. ESTIMACIÓN DE LA INTENSIDAD DE LA INFECCIÓN DE
NEMÁTODOS TRANSMITIDOS POR EL SUELO
5. CUENTA DE HUEVOS. INTERPRETACIÓN
6. MÉTODO DIRECTO O FROTE
7. MÉTODO DE KATO, VARIACIÓN KATZ
8. MÉTODO DE DILUCIÓN DE STOLL
9. RECOBRAR PARÁSITOS ADULTOS DE HECES
10. MÉTODO DE LA CINTA ADHESIVA TRANSPARENTE
11. FLOTACIÓN POR SULFATO DE ZINC
12.SHEATHER
13. SEDIMENTACIÓN POR FORMALINA-ACETATO DE ETILO
14. DIFERENCIACIÓN DE LARVAS DE NEMÁTODOS
15.HARADA MORI
16.VARIACIÓN EN CAJA DE PETRI
17. MÉTODO DE BAERMANN
18.MIGRACIÓN DE LARVAS EN AGAR

Hojas de texto reproducidas con fines de Capacitación

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 PARASITOLOGÍA

PARÁSITOS INTESTINALES LUMINALES Y TISULARES

PRODUCTO DE REPRODUCCIÓN DE DIFERENTES PARÁSITOS

INTESTINALES, HEPÁTICOS, PULMONARES y SANGUÍNEOS: HUEVOS,
LARVAS, QUISTES, TROFOZOITOS, OOQUISTES

PROPÓSITO:

a) En solución salina fisiológica

Reconocer trofozoítos de protozoos y otros estadios de diagnóstico de

helmintos y protozoos y elementos que aparecen en situaciones anormales. El
mejor método para detectar trofozoítos en una amebiasis invasora por
Entamoeba histolityca. Para ejecutar cuenta de huevos de algunos helmintos
para estimar intensidad de la infección.

b) En solución de Lugol

Colorear en forma temporal trofozoítos y quistes de protozoos. Inmovilizar

larvas.

MUESTRA REQUERIDA:

Heces frescas recolectadas en un frasco de vidrio, plástico o de cartón, de boca

ancha, con tapadera y correctamente etiquetado con la identificación del
paciente.

CUANDO LA MUESTRA ES DIARREICA O LÍQUIDA:

Debe tomarse una muestra del fondo del frasco, o centrifugar una porción y
examinar el sedimento. Si la muestra contiene moco, hacer otra preparación
tomando muestra del moco. Cuando la muestra contiene moco con o sin
sangre, tomar de este moco para hacer otra preparación, ya que aquí podrían
encontrarse los elementos patógenos en mayor cantidad. Ejemplo: larvas de S.
stercoralis, trofozoítos o quistes de G. lamblia, ooquistes de apicomplexa

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intestinales, trofozoítos de f. histolytica hematófaga en caso de disentería,
trofozoítos y quistes de Balantidium coli, huevos de T. tríchiura atrapados en el
moco.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:

Solución salina fisiológica

Cloruro de sodio 8.5 g

Agua destilada 1000 mL

Mezclar y guardar en frasco rotulado y tapado. Para usar dispensar en frascos

goteros rotulados.

Solución de Lugol. Solución madre

lodo en cristales 2.5 g
loduro de potasio 5.0 g
Agua destilada 50 mL

Mezclar en un matraz hasta disolución completa de los cristales. Guardar en

frasco oscuro rotulado «solución madre (o stock) de Lugol». Para utilizar, diluir
0.5 mL de esta solución stock en 5.0 mL de agua destilada y mantener en frasco
gotero color ámbar rotulado.

MATERIALES:

• Porta-objetos, 7.5 X 2.5 cm (3 X 2 pulgadas) limpio y seco

• Cubre-objetos, 22 X 22 mm, N° 1 ó N° 2
• Aplicadores de madera
• Solución salina fisiológica (0.85% cloruro de sodio)
• Solución de Lugol
• Frasco con desinfectante para descartar material (clorox, fenol, lugol)

PROCEDIMIENTO:

• Identificar el porta-objetos con la muestra a examinar.

• Colocar 1-2 gotas de solución salina en un extremo del porta-objetos y 1-
2 gotas de Lugol en el otro extremo.

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 • Con un aplicador tomar una muestra de heces y hacer una emulsión
uniforme,
• primero en la gota de solución salina, y luego en la solución de Lugol.
Calcular más o menos 1.5-2 mg de heces.
• Cubrir cada preparación con un cubre-objetos.
• Observar, primero con el objetivo de 10 X, en forma sistemática toda la
preparación en solución salina. Para confirmar estructuras, usar objetivo
40 X. Anotar hallazgos.
• Regresar a 10 X y continuar el examen hasta terminar.
• Proceder de igual manera con ¡a preparación en solución de Lugol,
buscando quistes de protozoos para su identificación, la cual debe hacer
con objetivo 100 X. Para ello colocar una gota pequeña de aceite de
inmersión sobre el cubre-objetos y observar con el objetivo
correspondiente.
• Informar otras estructuras, cuando estén presentes, ya que indican
alguna patología: leucocitos, eritrocitos, macrófagos, cristales de
Charcot-Leyden.
• Ejecutar cuenta de huevos de: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura o
Uncinaria cuando amerite e informar el número de cada especie por
separado indicando que la cuenta es en 2 mg de heces.

Las larvas requieren diferenciación específica: Strongyloides stercoralis:

primordio genital grande, cápsula bucal corta.

Huevos de Paragonimus sp. por infección pulmonar son operculados de color

café y miden 80-118 pm x 48-60 μm. No embrionados. Se recolectan también de
esputo y aspirado pleural.

Huevos de Fasciola hepática, son también operculados, miden 130-150 /¿m x

63-90 ¿un. No embrionados. En infección espuria los huevos desparecen de las
heces en pocos días.

Huevos de Schistosoma mansoni, miden 120 x 45 pm, hasta 170 x 65 pm y

tienen una espina grande lateral cerca de un extremo.

Ooquistes de Cydospora cayetanensis, deben ser redondos, refringentes, con

una masa interna bien organizada, miden entre 8 y l0 μm.

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Ooquistes de Isospora belli, tienen forma alargada, cascara fina, transparente y
miden entre 20 y 30 μm por 10-13 μm. Contienen un esporoblasto en el interior
del ooquiste.

Ooquistes de Cryptosportdium parvum, miden 4-6 μm, redondos, con un

granulo brillante u oscuro en el interior, visibles pero no fácilmente
identifícables. Es necesario colorearlos por ácido-resistente modificado y
diferenciarlos de otras estructuras.

• Descartar materiales usados en el frasco con desinfectante.

CAUSAS DE ERROR O RESULTADOS POCO SATISFACTORIOS:

• Esperar más de una hora antes de buscar trofozoítos de protozoos

• Preparación muy gruesa o muy fina
• Demasiada fibra, arenilla, burbujas
• Demasiada iluminación, poca iluminación
• Solución de Lugol muy fuerte o muy diluida
• No examinar la preparación en forma sistemática
• Preparación reseca
• Informe incompleto
• El no encontrar trofozoítos en una muestra líquida, diarreica o con moco
y sangre que no es fresca, no tiene ningún significado.

PARA ASEGURAR UN CONTROL DE CALIDAD:

• Verificar que la solución salina esté limpia, sin contaminación de

bacterias, hongos o protozoos de vida libre.
• Verificar que la solución de Lugol tenga la concentración adecuada.

ESTIMADO DE LA INTENSIDAD DE INFECCIÓN CUENTA DE HUEVOS DE

NEMÁTODOS TRANSMITIDOS POR EL SUELO

PROPÓSITO:

- Estimar la intensidad de una infección intestinal por Ascarís lumbricoides,

Trichuris trichiura y uncinarias del humano en forma práctica, en una
cantidad conocida de heces.

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 - Evaluar la efectividad de tratamiento terapéutico. Se asume que la
producción de huevos estará en relación directa con el número de
hembras fecundas que deponen huevos.
- Una variable importante es el propósito para determinar esta intensidad:
puede ser clínica, para encuestas, evaluar terapéutica, etc.

MÉTODOS:

Los más utilizados son tres (3):

1. MÉTODO DIRECTO, en frote (2 mg) de heces;

2. MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR KATO, variación KATZ, en 41.7 mg de
heces;
3. CUENTA DIRECTO DE GUSANOS ADULTOS EXPULSADOS DESPUÉS DEL
TRATAMIENTO, el cual es más preciso si el tratamiento es efectivo y si se
cumplen las instrucciones.

- MÉTODO DE DILUCIÓN DE STOLL, en 1 g de heces; no se ha estandarizado

y ya no se usa.

INTERPRETACIÓN DE DATOS DE CUENTA DE HUEVOS:

Estimados de intensidad de infecciones son muy variables y dependerán de:

edad del individuo, estado nutricional y dieta del individuo parasítado, duración
de la infección, número de gusanos, especie de uncinaria, presencia de otros
parásitos, fibra, grasas, moco; proficiencia técnica del examinador, interés. Para
fines clínicos: cualquier tipo de infección por Ascarís debe tratarse; infecciones
por Trichuris y Necator con cuentas de 5 huevos/2 mg de heces o menos no
tienen importancia clínica (leves); una cuenta de 5 huevos/2 mg para
Ancyhstoma ya podría ser importante clínicamente; cuentas de más de 25
huevos/ 2 mg ó 2,500 huevos/ca g para Necator y 40 huevos/2 mg ó 20,000
huevos/ca g para Trichuris (severas) producen síntomas clínicos importantes.

Entre las leves y las severas están las infecciones moderadas, que se tratan. La
tendencia actual es tratar todas las infecciones.

Interpretación de cuentas de huevos de Geohelmintos según métodos de

laboratorio.

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Umbrales de intensidad para la clasificación de la infección de nematodos
transmitidos por el suelo (NTS) o Geohelmintos y especies de Schistosoma,
método de Kato-Katz huevos por gramo de heces.

1. METODO DIRECTO EN FROTE DE HECES

PRINCIPIO:

Este método es una simplificación del método estándar de Beaver en 2 mg de

heces en el que se utiliza una célula foto-eléctrica adaptada y calibrada que
mide con precisión 2 mg de heces en una preparación en solución salina. La
simplificación deriva del conocimiento que las preparaciones directas que se
utilizan en la rutina para el examen de heces contienen entre 1.5 mg y 2.5 mg
especialmente las preparadas por técnicos con experiencia.

MUESTRA REQUERIDA:

Heces frescas, recolectadas en frasco (vidrio, plástico o cartón) limpio, de boca

ancha, sin contaminación de agua, orina, tierra etc.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:

• Solución salina fisiológica

• Cloruro de sodio 0.85 g.
• Agua destilada 100 mL
• Mezclar hasta disolución completa de los cristales. Guardar en frasco
rotulado. Para uso diario mantener en frasco gotero rotulado.

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MATERIALES:

• Porta-objetos de 3 X 1 pulgada (7,5 x 2.5 cm) ó 3 X 2 pulgadas {7.5 x 5cm)

• Cubre-objetos de 22 X 22 mm, #1 ó #2
• Aplicadores de madera
• Solución salina fisiológica (0.85%)
• Marcador
• Contador manual
• Frasco con solución desinfectante para descartar material

PROCEDIMIENTO:

• Identificar el porta-objetos con la muestra de heces a examinar

• Colocar 1 - 2 gotas de solución salina en cada extremo del porta-objetos
• Con un aplicador, tomar una porción de heces y emulsificar en cada una
de las gotas de solución salina
• Cubrir cada preparación con un cubre-objetos
• Contar en forma individual los huevos según la especie: de Ascaris,
Trichuris y/o uncinaria presentes en cada preparación. Sacar la media.
• Informar por especie de parásito: No. de huevos/frote de heces o bien
No. de huevos/2 mg de heces
• Descartar material usado en el frasco con desinfectante.

CAUSAS DE ERROR:

- Preparación muy gruesa o muy fina

- Observación no sistemática de la preparación
- Falta de práctica en ejecutar conteos
- Huevos no distribuidos al azar en la preparación, o aglomerados por la
presencia de mucho moco
- Heces líquidas

2. MÉTODO DE KATO (VARIACIÓN KATZ), EN 41.7 MG DE HECES

PRINCIPIO: Aclarar con glicerina un frote grueso de heces no diluidas. El

método, originalmente introducido por japoneses para hacer encuestas
epidemiológicas de schistosomiasis, ha sido mejorado y modificado varias veces.

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La variación KATZ entrega una cantidad conocida de heces, que depende del
tamaño del templete utilizado, con la condición quesean heces formadas. El
tamaño del templete varia; para asegurar resultados comparables, el templete
debe estandarizarse en el país a una sola medida. El que se describe aquí
entrega 41.7 mg de heces. Huevos de Taenia sp o de Hymenolepis nana se
informan sin contar. La Organización Mundial de la Salud considera este método
como el de elección y el más adecuado en encuestas, monitoreo y evaluación de
programas de control de nemátodos transmitidos por el suelo y schistosomiasis.

VENTAJAS:

Las heces no se diluyen, se utiliza materiales baratos y accesibles, puede

transportarse una vez preparado en el campo, puede guardarse varios meses
para verificar resultados, puede estandarizarse para encuestas en diferentes
regiones geográficas por diferentes investigadores.

DESVENTAJAS:

Tiene varias limitantes: sólo puede utilizar heces frescas; no es adecuada para
heces diarreicas, líquidas o mucoides; no se aplica para la detección de
protozoos ni larvas de nemátodos; huevos frágiles como los de uncinaria y a
menudo de Hymenolepis nana se vuelven irreconocibles en pocas horas; no es
indicado para heces que contengan mucha fibra o grasa.

PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN DE GLICERINA Y AGUA:

- Glicerina pura 100 mL

- Agua destilada 100 mL
- Verde de malaquita al 3% 1 mL (Solución acuosa)

Mezclar bien en frasco de boca ancha con tapadera e introducir los cuadrados
de celofán para sumergir en esta solución 24 horas o más antes de usar. (El
verde de malaquita no es indispensable en caso que no se cuente con él).

Un templete de 9 mm X 1 mm entrega 50 mg de heces. El factor de

multiplicación para determinar huevos por gramo será de 20.

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Un templete de 6 mm de diámetro X 1.5 mm de grosor entrega 41.7 mg de
heces. El factor de multiplicación será de 24.

MATERIALES:

• Cuadrados de celofán que miden 22 X 30 mm. Sumergir durante 24 horas

o más en la solución de glicerina
• Espátulas plásticas de madera o palos de paletas o de helados
• Templete de plástico del tamaño seleccionado, en este caso de 6 mm de
diámetro X 1.5 mm de grosor
• Cuadrados de 4 cm X lado de tela metálica o nylon de trama 210 o de
nitrel de 250/rni
• Papel absorbente
• Papel de periódico
• Pinzas
• Frasco con desinfectante para descartar material
• Porta-objetos 7.2 x 2.5 cm (3 X 1 pulgada) ó 7.5 x 5 cm (3 X 2 pulgadas)
• Marcador
• Baja-lenguas o palo de paleta o de helados, que es más barato
• Contador manual

PROCEDIMIENTO:

- Extender el papel periódico o de estraza sobre la mesa de trabajo

- Identificar el porta-objetos con la muestra a examinar. Colocar sobre éste
el templete de plástico
- Con el palo de paleta tomar una cantidad de heces y colocarla sobre una
superficie plana (tapadera del frasco, papel periódico)
- Colocar sobre estas heces un cuadrado de tela metálica, plástica o nylon
que hace las veces de colador
- Raspar la superficie de la tela con la espátula plástica tomando
suficientes heces coladas para llenar el agujero del templete. Descartar la
espátula si es de madera
- Remover el templete, descartar éste y la tela en desinfectante y cubrir el
redondel de heces con un cuadrado de celofán empapado en glicerina
- Invertir el porta-objetos con esta preparación sobre una hoja de papel
absorbente y hacer presión con el pulgar hasta extender las heces por
todo el cuadrado

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 - Darle vuelta y colocar sobre una superficie protegida de insectos (mosca,
cucaracha) y agua. Esperar que aclare. Esto dependerá de la temperatura
y humedad del ambiente, entre 30 miny45 min. Si se desea interrumpir el
aclaramiento, invertirla lámina sobre una superficie plana lo necesario
hasta continuar el proceso.

Observar al microscopio óptico con objetivo de 10 X. Contar sistemáticamente y

en forma individual todos los huevos de Ascaris, Trichuris, uncinaria en toda la
Preparación Multiplicar el resultado por 24 e informar «No. de huevos/gramo
de heces». Descartar material usado en desinfectante

Los huevos de Taenia se confirmarán si se observan los ganchos de la oncósfera

con objetivo X40

3. RECOBRAR Y CONTAR PARÁSITOS ADULTOS EXPULSADOS DESPUÉS DE

TRATAMIENTO

PRINCIPIO: Recobrar los gusanos adultos, hembras y machos presentes en una

infección intestinal para determinar la intensidad de la infección, o para
comprobar la efectividad de un antihelmíntico. Se requiere la colaboración fiel

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del (los) participante(s) durante todo el tiempo que dure la recolección y contar
con un antihelmíntico efectivo.

PROCEDIMIENTO:

Informar al personal (de hospital si es clínico; al voluntario si es de encuestas)

para que colecte heces de 24 horas durante 4-5 días después de iniciado el
tratamiento. La forma de hacerlo dependerá de los recursos e ingenio de cada
investigador.

Lavar diariamente y por separado las heces de 24 horas recogidas en bolsas

plásticas con el nombre de cada individuo, utilizando pascones o un tamiz y
bandejas esmeriladas o de acero inoxidable y recobrar los parásitos de este
lavado. Ayudarse con pinceles finos para recoger los parásitos más pequeños.

En caso de Ascaris lumbricoides: medirlos, secarlos y pesarlos (opcional); fijarlos

con formalina caliente al 5%, en frascos apropiados.

En caso de Trichuris trichiura y uncinarias: contarlos y separarlos por sexo si se

desea y fijarlos. Beaver et al comentan que gusanos pequeños se estiran en
ácido acético glacial, se lavan y se fijan, guardándolos en alcohol etílico al 70%
con 5% de glicerol. Otro fijador que da buenos resultados para todo tipo de
gusanos es una mezcla a partes iguales de formalina al 10% y alcohol etílico de
95%, al que se agrega 5% de ácido acético (5 partes de ácido acético y 95 partes
de formalina-alcohol).

En situación de campo, los datos iniciales del estimado de la intensidad de la

infección por cuenta de huevos más la cuenta de adultos proveerá datos
epidemiológicos más correctos que documenten la relación entre la cuenta de
huevos y el número de gusanos adultos. Esta carga parasitaria variará según las
diferentes regiones del país, las distintas condiciones epidemiológicas y
condiciones de la población.

MÉTODO DE DILUCIÓN DE STOLL

PRINCIPIO: La cantidad de heces es medida por desplazamiento; al final del

proceso se cuentan los huevos en una alícuota de la dilución. El diluyente,

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hidróxido de sodio, saponifica la grasa de las heces y ayuda a liberar los huevos
de impurezas.

La mayor desventaja es el equipo que requiere y el tiempo de preparación.

Impráctico en encuestas. No se ha estandarizado y ha caído en desuso.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:

- Hidróxido de sodio
- Hidróxido de sodio 4 g
- Agua destilada 1,000 mL
- Disolver inicialmente el hidróxido de sodio en un volumen pequeño del
agua destilada.
- Completar después a 1,000 mL. Guardar en frasco tapado y rotulado.

MATERIALES:

• Frasco de Stoll, marcado 2 veces: a 56 mL de volumen y a 60 mL de

volumen; en su defecto, probeta graduada con tapón de hule, que tenga
las dos marcas, a 56 mL y a 60 mL.
• Solución de hidróxido de sodio
• Pipetas graduadas a 0.15 mL (dispensador automático para serología)
• Porta-objetos 7.5 X 2.5 cm ó 7.5 X 5 cm
• Cubre-objetos 22 X 40 mm
• Aplicadores de madera
• Frascos con desinfectante para descartar material
• Perlas de vidrio
• Contador manual
• Marcador
• Frascos con desinfectante para descartar material sucio.

PROCEDIMIENTO:

• Identificar el frasco de Stoll con la muestra a examinar

• Añadir hidróxido de sodio hasta la marca 56 mL en el frasco para ello
• Con cuidado agregar heces hasta subir el nivel del líquido a la marca 60
mL

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 • Agregar las perlas de vidrio, tapar y agitar vigorosamente. Si las heces son
muy duras, deberá dejarse 24 horas agitando esporádicamente.
• Con la pipeta Stoll remover 0.15 mL del centro de la suspensión
inmediatamente después de agitar y antes que los huevos comiencen a
sedimentarse
• Colocar esta suspensión sobre un porta-objetos y cubrir con un cubre-
objetos
• Contar todos los huevos presentes en toda la preparación. Multiplicar el
resultado por 100 y reportar No. de huevos/g o No. de huevos/ mi de
heces, sin factor de corrección
• Para reportar con factor de corrección, debe considerarse la consistencia
de las heces y multiplicar por 2 para heces blandas; por 3 para heces
diarreicas. Cuentas en heces líquidas no son confiables.

HUEVOS DE TAENIA SP Y DE ENTEROBIUS VERMICULARIS

MÉTODO DE LA CINTA TRANSPARENTE ADHESIVA

PROPÓSITO:

Recobrar huevos de Taenia sp. o de Enterobius vermicularis de la región anal y

perianal de individuos infectados. Hembras de E. vermicularis migran del ciego e
intestino grueso a la región exterior del ano, adonde depositan huevos casi
infectantes, razón por la cual casi nunca se ven en las heces. Los proglótidos
grávidos de Taenia saginata y a veces de T. solium que se desprenden de la
estróbila y forzan el esfínter anal, dejan rastros de huevos en la región perianal
mientras tienen movimientos de extensión o retracción. Para diagnosticar
infecciones por E. vermicularis, la cinta transparente adhesiva es el método
indicado; para identificar individuos infectados con Taenia sp.

Este método, en combinación con otros métodos y la observación clínica,

aumenta la probabilidad de diagnóstico.

PREPARACIÓN DEL PACIENTE:

La toma de esta muestra es fácil de realizar aún por personas de poca

preparación o analfabetas, siempre que se provea una explicación clara y
sencilla. Para este o cualquier otro método que se utilice, la muestra debe

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tomarse antes que el paciente se lave, bañe o defeque, durante la noche o
inmediatamente al levantarse por la mañana (F. vermicularis) o en cualquier
momento (Taenia) antes del examen.

NOTA: En ocasiones se pueden ver los gusanos adultos al separar los glúteos o
sobre las heces al defecar. Si esto sucede, deberán llevarse al laboratorio para la
confirmación morfológica. Como instrucción a la madre, se le indica de
recogerlos y colocarlos en alcohol o vinagre en un bote limpio y llevarlos al
laboratorio.

MATERIALES:

• Porta-objetos de 7.5 X 2.5 cm

• Baja-lenguas o palo de paleta
• Cinta transparente adhesiva de 2 cm de ancho
• Xilol
• Etiquetas
• Pipeta Pasteur y bulbo o perilla de goma
• Frasco con desinfectante para descartar material

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PROCEDIMIENTO:

- Colocar una tira de cinta transparente adhesiva sobre un porta-objetos

limpio y seco, dejando un extremo doblado por debajo de la lámina y en
el otro pegar una etiqueta y escribir la identificación del paciente.
- Al momento de tomar la muestra, pelar la cinta suavemente del porta-
objetos, tomándola por la parte etiquetada.
- Colocar el porta-objetos sobre un baja-lenguas o palo de paleta y doblar
la cinta sobre un extremo de éste, con la parte adhesiva hacia fuera.
- Con el paciente en decúbito, apartar los glúteos con una mano y apretar
la cinta adhesiva firmemente a un lado y otro de los pliegues perianales.
- Volver a colocar la cinta sobre el porta-objetos y descartar el baja-
lenguas.
- La muestra puede transportarse o guardarse protegida, hasta el
momento del examen.
- Para examinar, desprender la cinta transparente hasta la parte expuesta,
agregar 1-2 gotas de xilol a la lámina y apretar de nuevo la cinta en su
lugar. El xilol (puede ser tolueno) aclara la preparación, elimina las
burbujas de aire y hace más visibles los huevos. Examinar inmediata-
mente al microscopio.

CARACTERÍSTICAS DE LOS HUEVOS DE TAENIA Y DE

ENTEROBIUS VERMICULARIS:

Los huevos de Taenia se reconocen por su forma redonda, de igual tamaño (31 a
43 μm), pero se ven café, densos y en unos pocos ejemplares se pueden
visualizar los ganchos de la oncósfera. Utilizar mayor aumento para ver detalles.
Los huevos de Enterobius vermicularis se observan de cáscara transparente,
alargados u ovoides, con un lado más aplanado; tienen un embrión en su
interior y miden entre 50- 60 μm por 20-30 μm.

QUISTES DE PROTOZOOS Y HUEVOS DE HELMINTOS

MÉTODO DE FLOTACIÓN POR SULFATO DE ZINC

PROPÓSITO: Concentrar huevos de ciertos helmintos y quistes de protozoos

cuando las infecciones son muy leves y no se detectan en preparaciones
directas.

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MUESTRA REQUERIDA:

Heces frescas recolectadas en frasco {vidrio, plástico o cartón) de boca ancha,

con tapadera, limpio, sin contaminantes (agua del inodoro, orina, tierra etc.)
debidamente identificado.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO:

- Disolver 330 g de cristales de sulfato de zinc en 670 mL de agua destilada.

- Para verificar la densidad, verter dentro de un cilindro de 1,000 mL de
capacidad e introducir el hidrómetro, dejándolo flotar libremente, sin
tocar las paredes del cilindro.
- Debe leerse 1.18. Agregar más agua si está más denso, o más cristales si
está menos denso. Se recomienda verificar la densidad cada vez antes de
usar o una vez por semana. Cuando la muestra de heces fue fijada, usar
una solución con densidad 1.20.

EJERCER PRECAUCIÓN PARA NO QUEBRAR EL HIDRÓMETRO

MATERIALES:

• Hidrómetro (Curtis Matheson Scientific Inc) para medir gravedad

específica, rango 1,000-2,000)
• Solución de sulfato de zinc, densidad 1.18 (para heces frescas)
• Cuadrados de gasa de 16 X 16 cm, en 2 dobleces
• Embudos de 5 cm de diámetro
• Aplicadores
• Tubos de ensayo, vasos de papel o vasos plásticos pequeños para hacer
una suspensión de heces
• Porta objetos, 7.5 x 2.5 cm (3 X 1 pulgada) ó 7.5 x 5 cm (3 X 2 pulgadas)
• Cubre-objetos 22 X 22 mm, N° 1 o N° 2
• Solución de Lugol
• Asa bacteriológica de 5-7 mm de diámetro
• Gradilla para tubos
• Solución salina fisiológica

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PROCEDIMIENTO:

• Identificar la muestra con el vaso y el tubo de ensayo a trabajar.

• Con un aplicador, tomar 1-1.5 g de heces y hacer una suspensión en unos
pocos ml de agua destilada en un vaso o tubo.
• Filtrar a través de gasa humedecida a un tubo de ensayo.
• Centrifugar a 1,500-2,000 rpm por 2 minutos. Descartar el sobrenadante.
• Agregar 2-3 mL de solución de sulfato de zinc y agitar con un aplicador
hasta suspender totalmente el sedimento. Agregar más solución de
sulfato de zinc hasta 1 cm abajo del borde del tubo de ensayo, sin dejar
de agitar.
• Centrifugar a 2,000 por 2 minutos. Los tubos deben tener posición
vertical en la centrífuga, no inclinada.
• Sin sacar el tubo de la centrifuga, remover varias asadas de la película
superficial y colocarlas sobre un porta-objetos. Esterilizar el asa por
flameo.
• Cubrir con un cubre-objetos. Examinar sistemáticamente la preparación.
Para colorear los quistes, remover con cuidado el cubre-objetos y añadir
una gota pequeña de Lugol.

Para identificar los quistes se procede a examinarlos con el objetivo X100, para
lo cual debe colocarse antes una pequeña gota de aceite sobre el cubre-objetos.
Puede ejecutarse este método cuando se reciben heces fijadas, para lo cual la
solución de sulfato de zinc debe tener una densidad de 1.20. Para trabajar la
muestra, mezclar bien las heces fijadas, filtrar si necesario y continuar con el
procedimiento como se ha descrito.

CAUSAS DE ERROR O RESULTADOS POCO SATISFACTORIOS:

- En general, si no se sigue el método fielmente

- Solución de sulfato de zinc de otra gravedad específica
- Esperar mucho tiempo después de preparar la muestra, antes de
observarla al microscopio (más de 20 minutos)
- Deformación de los quistes de protozoos, que dificulta su identificación
- A veces no flotan los huevos infértiles de Ascaris
- No es el método adecuado para huevos de céstodos ni de tremátodos
- Las larvas se encogen y no se puede reconocer su morfología específica

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OOQUISTES DE ISOSPORA BELLI

FLOTACIÓN POR SHEATHER

PROPÓSITO:

Separar, concentrar y recobrar ooquistes de Isospora belli de las heces para

facilitar el diagnóstico de isosporiasis en el laboratorio. Ooquistes de
Cryptosporidium spp. Y Cyclospora cayetanensis pueden también concentrarse;
sin embargo, para asegurar el diagnóstico de estas dos especies es preferible
además, procesar la muestra por otros métodos (coloración, concentración por
Webery medición de ooquistes).

IMPORTANCIA DEL DIAGNÓSTICO:

El hallazgo de Isospora belli ha cobrado importancia desde 1983 en que se

recobró de 3 homosexuales con diarrea crónica, pérdida de peso y una
inmunodeficiencia severa. Aunque se le ha informado en el pasado en brotes de
gastroenteritis en personas inmunonormales, cada vez más se le relaciona con
estados inmuno-deficientes y SIDA.

El hallazgo de Isospora belli requiere informe inmediato al médico. El Servicio de

Parasitología del Hospital-Escuela, Tegucigalpa, Honduras, acostumbra agregar
una nota diciendo: “Investigar causa de posible inmunocompromiso”.

MUESTRA REQUERIDA:

• Heces frescas recolectadas en frasco {vidrio, plástico, cartón) de boca

ancha, con tapadera, limpio y debidamente identificado. Aspirado
duodenal.
• Heces líquidas

a) Tomar una muestra del fondo del frasco con una pipeta Pasteur; o
b) Mezclar las heces con la pipeta Pasteur y aspirar una cantidad; o
c) Mezclar las heces, verter 2-3 mL en un tubo de ensayo rotulado,
centrifugar, descartar el sobrenadante al frasco con la muestra
original de heces o en un recipiente con desinfectante y continuar
trabajando con el sedimento.

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 • Heces con moco

a) Tomar una porción del moco y examinar al microscopio como frote

directo; o,
b) Utilizar un mucolítico (10 gotas de KOH al 10%) para disolver el moco
y liberar ooquistes que estuvieran atrapados. Dejar actuar el
mucolítico a temperatura ambiente durante 15 minutos, agitando con
un aplicador. Una vez disuelto, agregar agua destilada, mezclar,
centrifugar, decantar y continuar la técnica utilizando el sedimento.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:

- Solución concentrada fenolada de azúcar

- Azúcar en cristales 500 g
- Agua destilada 320 mL
- Fenol en cristales. 6.5 g
- Disolver el azúcar en el agua destilada, usando calor sin dejar llegar a
ebullición.
- Filtrar por gasa. Agregar el fenol y agitar hasta disolución. Guardar en
frasco tapado y rotulado. Para trabajar es más fácil mantener la solución
de trabajo en un frasco con dispensador.

MATERIALES:

- Vasitos de plástico para preparar suspensión

- Tubos de ensayo de 13 X 100 mm
- Cubre-objetos 22 X 22 mm, N° 1 o N°2
- Porta-objetos de 3 X 1 pulgadas (7.5 X 2.5 cm) o de 3 X 2 pulgadas (7.5 cm
X 5 cm)
- Asa bacteriológica, 5-7 mm de diámetro
- Marcador
- Aplicadores sin algodón
- Gasa quirúrgica
- Solución fenolada de azúcar
- Mechero de gas o lámpara de alcohol
- Embudo de 5 cm de diámetro
- Agua destilada
- Frasco con desinfectante para descartar material
- Parafilm o tapón de hule para tubos de ensayo

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PROCEDIMIENTO:

• Identificar los tubos de ensayo con la muestra a examinar.

• Hacer una suspensión de una pequeña porción de las heces (±1 mL ó 1 g)
en un vasito plástico o tubo con la ayuda de un aplicador.
• Colocar gasa en 2 dobleces dentro del embudo introduciendo éste en
otro tubo de ensayo rotulado y filtrar la suspensión de heces para
remover fibras y partículas grandes. Tapar con parafilm o tapón de hule.
• Equilibrar el tubo en balanza de 2 platos.
• Centrifugar a 1,500 rpm por 2 minutos. Destapar. Decantar el
sobrenadante.
• Añadir un poco de solución fenolada azucarada al sedimento y agitar
vigorosamente con un aplicador. Completar con más solución hasta 2 cm
bajo el borde del tubo sin dejar de agitar. Tapar con parafilm o tapón de
hule.
• Equilibrar el tubo en balanza de 2 platos.
• Centrifugara 1000 rpm durante 10 minutos.
• Remover el tapón con sumo cuidado para no agitar. Tomar 2-3 asadas de
la superficie del menisco y colocar sobre un porta-objetos. Flamear el asa
en el mechero.
• Cubrir la preparación con un cubre-objetos y examinar en el microscopio
óptico toda la preparación.
• Buscar los ooquistes con objetivo 10X a diferentes profundidades; a
menudo flotan y se colocan justo debajo del cubre-objetos.
• Para confirmar, utilizar mayor magnificación. Puede usar esta
preparación para colorear; basta remover el cubre-objetos, dejar secar y
colorear.
• Descartar el material utilizado en frasco con desinfectante.

CARACTERÍSTICAS DE LA FLOTACIÓN:

Los ooquistes de apicomplexa pueden deformarse un poco; pueden tomar un

color rosa pálido en su interior. Habrá que diferenciar de levaduras, Blastocystis
hominis, otras estructuras.

Existen otros métodos de flotación en los que se utiliza un detergente (Tween

80) y gradientes discontinuos de solución de azúcar de densidades 1:2 y 1:4 o
Percoll (Arrowood M. y SterlingJ. Journal of Parasitology 1987, 73:314-319),

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recomendado para trabajos de investigación. Deberá experimentar en el
laboratorio hasta perfeccionar la técnica antes de implementarla.

HUEVOS Y LARVAS DE HELMINTOS; OOQUISTES Y QUISTES DE PROTOZOOS

CONCENTRACIÓN POR FORMALINA - ACETATO DE ETILO

PROPÓSITO:

Concentrar huevos y larvas de helmintos y ooquistes y quistes de protozoos de

las heces. Se recurre a este método cuando el examen directo es negativo,
cuando la excreción de quistes/ooquistes es baja e intermitente o para
descartar infecciones leves en general, sobre todo si otros métodos (sulfato de
zinc por Ej.) no han ofrecido resultados esperados.

El método original utilizaba éter, pero esta sustancia se ha sustituido por

acetato de etilo por ser menos inflamable y explosiva que el éter. Algunos
sugieren centrifugar por 10 minutos en vez de dos minutos para recobrar
ooquistes de apicomplexa, pero encontramos que se forma demasiado
sedimento que impide realizar el examen parasitológico.

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VENTAJAS:

Puede utilizarse con heces frescas o heces fijadas previamente en formalina o

en MIF; los quistes de protozoos no se deforman; puede demorarse en
examinar el sedimento más que en métodos por flotación; es adecuado tanto
para huevos de nemátodos como de céstodos y tremátodos; produce menos
errores técnicos que otras concentraciones.

DESVENTAJAS:

Los huevos infértiles de Ascarís y en ocasiones quistes de Giardia pueden flotar

y descartarse inadvertidamente con el tapón de detritus; utiliza tubos de ensayo
de vidrio (cuando se usa éter), ya que los tubos de plástico son dañados por
éste; no es adecuado para concentrar trofozoítos de protozoos.

MUESTRA A EXAMINAR:

Heces frescas recolectadas en frasco limpio y seco, de boca ancha, identificado

correctamente.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:

• Formalina al 10%
• Formaldehído 10 mL
• Solución salina 0.85% 90 mL (Puede usar agua destilada en vez de
solución salina).

MATERIALES:

- Vasitos de plástico o cartón (30 ml de capacidad)

- Tubos de centrífuga de ensayo 13 X 100 mm
- Aplicadores
- Marcadores
- Embudos de 5 cm de diámetro
- Gasa quirúrgica en rectángulos de 16 X 16 cm en 2 dobleces
- Parafilm o tapones de hule
- Solución de formalina al 10%
- Acetato de etilo

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 - Aplicadores con algodón en un extremo
- Porta-objetos de 7.5 X 2.5 cm (3 X 1 pulgada) o de 7.5 X 5 cm (3 X 2
pulgadas)
- Cubre-objetos
- Gradilla para tubos
- Pipeta graduada de 5 mL
- Balanza de 2 platos para equilibrar tubos
- Solución de Lugol
- Acetato de etilo
- Frascos con desinfectante para descartar material

PROCEDIMIENTO:

• Identificar frascos, tubos y láminas con la muestra a examinar.

• Transferir 1-2 g de heces a un vaso de plástico o cartón y agregar 10 mL
de formalina.
• Desmenuzar y suspender completamente las heces con ayuda de
aplicadores.
• Descartar aplicadores. Dejar fijar mínimo 30 minutos.
• Filtrar por 2 dobleces de gasa a un tubo cónico o de ensayo ayudado por
embudo.
• Descartar gasa. Tapar tubos
• Equilibrar los tubos en balanza de 2 platos junto con los tapones.
• Centrifugara 1,500 rpm por 2 minutos; destapar.
• Descartar el sobrenadante.
• Agregar más formalina al sedimento, agitando éste con un aplicador,
hasta ± la mitad del tubo.
• Agregar 2-3 mL de acetato de etilo.
• Tapar el tubo con parafilm o tapón de hule y agitar vigorosamente 15
segundos.
• Centrifugara 1,500 rpm por 2 minutos.
• Al final de la centrifugación se obtienen 4 capas: sedimento, formalina,
tapón de detritus y acetato de etilo. Destapar con cuidado y con un
aplicador desprender el tapón de detritus todo alrededor y decantar el
sobrenadante de un solo movimiento.
• En el fondo quedará el sedimento a estudiar.
• Con un aplicador con algodón limpiar las paredes interiores del tubo.

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 • Transferir el sedimento a un porta-objetos, cubrir con un cubre-objetos y
examinar toda preparación con objetivo 10X. Pasar a mayores
magnificaciones cuando sea necesario.
• Para colorear quistes, agregar una gota de solución de Lugol.
• Descartar material utilizado en desinfectante.

CONTROL DE CALIDAD:

Procesar una muestra de heces de diagnóstico conocido y comparar resultados.

DIFERENCIACIÓN DE LARVAS DE NEMÁTODOS Y VIABILIDAD DE

ALGUNOS HUEVOS

MÉTODO DE HARADA-MORI

PROPÓSITO:

Para estudiar la distribución regional o geográfica de las uncinarias de humanos

Necator americanus y Ancylostoma duodenale; para la diferenciación entre
larvas de uncinaria y de los «huevos parecidos a los de uncinaria»
(Trichostrongylus, Temidens, Strongyloides fulleborni); en la diferenciación
entre larvas de uncinaria y otras larvas, para determinar la viabilidad de los
huevos y/o larvas en estudios sobre efectividad anti-helmíntica, para cultivar
estadios de vida libre de Strongyloides, para embrionar huevos de tremátodos
(Paragonimus y Fasciola) y de céstodos (Diphyllobothrium y Spirometra), para
estadios similares en parasitología veterinaria.

Estas preparaciones pueden transportarse del campo al laboratorio, cuidando

de no agitarlos, derramarlos ni permitir que se sequen.

MUESTRA REQUERIDA:

• Heces frescas, sin refrigerar, recolectadas en frasco (vidrio, plástico o

cartón) limpio, de boca ancha, con tapadera, debidamente identificado,
sin contaminación.

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VARIACIONES:

Existen 2 variaciones: una en tubo de ensayo y otra en preparación inclinada en

caja de Petri. Se describirá la original en tubo de ensayo y se mencionará lo más
importante en la que utiliza caja de Petri.

Nota: Las larvas recobradas pueden ser infectantes. Aplicar medidas de

seguridad: usar guantes, limpiar inmediatamente cualquier cultivo derramado
con una solución de clorox, Lugol o fenol, descartar material en frascos con
desinfectante.

MATERIALES:

• Tubos de ensayo de preferencia cónica, de 15 mL de capacidad, en su

defecto, tubos de ensayo de 25 X 175 mm

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 • Tiras de papel filtro (Whatman #2 u otro similar) cortadas 2 mm menos
anchas que el diámetro del tubo y 2 cm más largas, con un extremo más
afinado.
• Agua destilada, en una pipeta
• Baja-lenguas, palos de paleta o aplicadores de madera
• Gradilla o soporte para tubos
• Guantes
• Lente de aumento o lupa de mano (opcional)
• Pipetas Pasteur
• Bulbo de goma o perilla para pipetas
• Lápiz de grafito
• Cajas de Petri de 5 cm de diámetro
• Porta-objetos de 7.5 x 2.5 cm (3 X 1 pulgada)
• Cubre-objetos 22 X 22 N° 1 o N° 2
• Frasco con desinfectante para descartar material

PROCEDIMIENTO EN TUBO DE ENSAYO

- Con un lápiz de grafito, escribir la identificación de la muestra en el

extremo más delgado de la tira de papel filtro.
- Con un aplicador o palo de paleta tomar y extender unos 0.5-1.0 g de
heces sobre el tercio medio de la tira; descartar aplicador.
- Insertar esta tira con la parte escrita dentro del tubo de ensayo. Quedará
una porción extendida fuera del tubo por la que pasarán elementos
solubles de las heces.
- Con todo cuidado agregar agua destilada hasta que el nivel llegue por
debajo del extendido de heces. Tener cuidado de no mojar las heces
(aunque no es necesario tapar los tubos, en lugares muy calientes se
prefiere hacerlo para evitar la evaporación rápida del agua).
- Colocar los tubos así preparados en una gradilla y mantener en lugar
seguro a temperatura ambiente.
- Revisar diariamente el nivel de agua. Reemplazar aquélla perdida por
evaporación, con mucho cuidado. Para verificar si hay larvas móviles en
el sedimento.
- Colocarse los guantes.
- Obtener una porción del sedimento con una pipeta Pasteur, colocarlo en
la caja de Petri y observar al microscopio estereoscópico.

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 - Para estudiar la morfología diferencial, deberá aspirar larvas con la pipeta
y colocar las larvas entre porta y pubre, calentar suavemente o agregar
solución de Lugol para inmovilizarlas; observar al microscopio óptico.
Identificar por morfología.
- Descartar material en frasco con desinfectante. Descartar guantes.

VARIACIÓN EN CAJA DE PETRI

El propósito es el mismo que el método en tubo de ensayo, excepto que aquí

puede utilizar mayor cantidad de heces y puede observar el sedimento
directamente al microscopio, para determinar la presencia de larvas. La
identificación específica requiere observar en detalle la morfología de las larvas.
Puede utilizar una caja de Petri de 9 cm, o una de 14 cm de diámetro, según
cuanto material desee obtener y una tira de papel filtro del tamaño de un porta-
objetos de 3 X 2 pulgadas u otro soporte conveniente para heces. La
identificación específica requiere observar en detalle la morfología de las larvas.

PROCEDIMIENTO:

• Extender las heces sobre la tira de papel, la que se coloca sobre el porta-
objetos u soporte.
• Colocar esta preparación en la caja de Petri soportada en un extremo por
aplicadores o por una varilla de vidrio para lograr una inclinación.
• Agregar agua destilada a la caja de Petri asegurando que el agua ascienda
por capilaridad en la tira de papel con heces.
• Tapar y dejar a temperatura ambiente por 2-3 días. Asegurar que la
preparación no se seque.
• Al cabo de 2-3 días, colocarse los guantes.
• Colocar la preparación en el microscopio estereoscópico y buscar larvas
en el agua. Si no se observan, Con una pipeta Pasteur obtener una
porción del agua de la caja y examinar entre porta y cubre en un
microscopio óptico buscando larvas. O bien, verter el líquido en un tubo
de ensayo, centrifugar y recobrar las larvas del sedimento. Identificarlas
según características morfológicas específicas.
• Todo material se descarta en la solución desinfectante.
• Consultar con los diagramas provistos para identificar larvas.

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EXTRACCIÓN DE LARVAS

MÉTODO DE BAERMANN

PROPOSITO:

Recobrar larvas de nemátodos y en algunos casos gusanos adultos, de las heces,

suelo, tejidos, etc. Es el método de elección más eficiente para recobrar larvas
de infecciones por Strongyloides stercoralis.

Existen 2 variaciones: una que utiliza un embudo de vidrio y otra que utiliza un
vaso de sedimentación o de cerveza. El principio del método es exactamente
igual en ambos: recobrar larvas sedimentadas en el fondo del embudo o del
vaso. Se considerará aquí el método en vaso de sedimentación.

Baermann en vaso de sedimentación

IMPORTANCIA DEL DIAGNÓSTICO: Detectar una estrongiloidiasis latente en

aquellos pacientes en riesgo a quiénes se les provoca o desarrollan una
inmunodeficiencia; en personas desnutridas, alcohólicas, quemadas severas,

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que recibirán radiaciones. Para verificación terapéutica. Se aumenta la
probabilidad de diagnóstico con exámenes repetidos durante varios días o
semanas.

NOTA: Es posible encontrar larvas de primer estadio de Angiostrongylus

Costaricensis en heces de algunos individuos infectados. Son menos móviles que
las de Strongyloides, miden 260-290 ym de largo y poseen una muesca en la
terminación de la cola, característica de larvas de Metastrongilídeos.

MUESTRA REQUERIDA:

Heces frescas, recolectadas en frasco (vidrio, plástico, cartón), limpio, de boca

ancha, con tapadera, correctamente identificado. No se deben refrigerar, ya
que esto inmoviliza las larvas y les impide migrar al agua.

MATERIALES:

- Vaso de sedimentación de 250 mL de capacidad

- Círculo o cuadrado de papel filtro
- Círculo o cuadrado de gasa quirúrgica en 4 dobleces
- Baja-lenguas o palos de paleta
- Marcador
- Pipetas Pasteur, tallo de 9 cm de largo
- Bulbo de hule para las pipetas
- Agua corriente a 37° C
- Cajas de Petri de 5 cm de diámetro
- Porta-objetos de 7.5 X 5 cm (3 X 2 pulgadas)
- Cubre-objetos de 22 X 22 mm N° 1 o N° 2
- Frasco con desinfectante para descartar material

PROCEDIMIENTO:

• Identificar el vaso con la muestra a examinar.

• Verter el agua a 37°C dentro del vaso de sedimentación más o menos
hasta 3 cm antes del borde.
• Tomar un redondel de papel filtro y con un baja-lenguas o palo de paleta,
extender unos 5 g de heces frescas en capa delgada sobre éste, descartar
baja-lenguas.

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 • Cubrir esta preparación con la gasa.
• Colocar esta preparación con la gasa hacia abajo, dentro del vaso,
procurando que las heces queden sumergidas en el agua.
• Esperar una hora. Las larvas migrarán de las heces al agua y caerán al
fondo del vaso.
• Después de la hora, preparar la caja de Petri identificándola. Colocar el
bulbo de hule en la pipeta Pasteur. Con un aplicador de madera apartar
suavemente la gasa, apretar el bulbo entre índice y pulgar e introducir la
pipeta hasta el fondo del vaso.
• Absorber sedimento del fondo sin removerlo.
• Colocar este sedimento en la caja de Petri. Esta operación puede
repetirse 2-4 veces.
• Examinar bajo microscopio estereoscópico, buscando larvas en el fondo
de la caja.
• Para identificarlas específicamente, aspirar algunas con la pipeta Pasteur,
colocarlas sobre un porta-objetos, cubrir con un cubre-objetos y
buscarlas con objetivo 10X primero. Si están muy móviles, calentar
suavemente la preparación o agregar por capilaridad una gota de
solución de Lugol. Para determinar los detalles morfológicos, utilizar
objetivo de 40X.
• Reconocer las características: Cápsula bucal corta, primordio genital
grande.
• Descartar material en frasco con desinfectante.

LARVAS DE STRONGYLOIDES STERCORALIS

MIGRACIÓN DE LARVAS EN AGAR

PROPÓSITO:

Aumentar la sensibilidad de detección por métodos no agresivos una infección

por Strongyloides stercoralis. Incidentalmente podrían recobrarse larvas de
Necator americanus y Ancylostoma duodenale si la infección está presente.

IMPORTANCIA DEL DIAGNÓSTICO: Detectar una estrongíloidiasis latente en

aquellos pacientes a riesgo a quienes se provoca o desarrollan una
inmunodeficiencia; en personas desnutridas, alcohólicas, quemadas severas,
cirróticos, que reciben radiación, etc. Estudios epidemiológicos.

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VENTAJAS:

Sensibilidad de diagnóstico aumentada, adecuado en casos problema o para

diagnosticar la infección en niños en quienes no puedan realizarse exámenes
más agresivos (aspirado duodenal, biopsia).

DESVENTAJAS:

Necesidad de más equipo de laboratorio, más tiempo para preparar el método,

mayor tiempo de espera antes de ofrecer un resultado, menor cantidad de
heces de donde se podrían extraer las larvas, necesidad de personal de
laboratorio muy calificado, trabajo laborioso, impropio en lugares con una
rutina voluminosa y pocos empleados poco calificados, material potencialmente
infectante.

MUESTRA REQUERIDA:

• Heces frescas, recolectadas en frasco (vidrio, plástico, cartón) limpio, de

boca ancha, con tapadera, correctamente identificado. No se debe
refrigerar la muestra, ya que esto inmoviliza las larvas.

MATERIALES:

• Cajas de Petri de vidrio o plástico, tamaño estándar (10 cm de diámetro)

• Cajas de Petri de 5 cm de diámetro Agar simple Extracto de res
• Peptona
• Cloruro de sodio
• Erler-Meyer de capacidad según la cantidad de medio a preparar
• Mechero de gas
• Bolsas plásticas
• Baja-lenguas de madera o palos chatos de paleta o aplicadores de
madera
• Formalina al 10% en una pizeta
• Porta objetos de 7.5 X 5.0 cm (3 X 2 pulgadas)
• Cubre-objetos de 22 X 22 mm
• Pipetas Pasteur tallo corto
• Bulbo de goma o perilla

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 • Incubadora (opcional) a 37°C
• Microscopio estereoscópico
• Microscopio óptico
• Guantes desechables
• Tubos de centrífuga de 13 X 100 mm
• Centrífuga
• Cuaderno para anotar y lápiz
• Frascos con desinfectante para descartar material

PREPARACIÓN DEL MEDIO (suficiente para 10 placas):

• Agar 1.5 g
• Peptona 1.0 g
• Extracto de res 0.5 g
• Cloruro de sodio 0.5 g
• Agregar 100 mL de agua destilada. Llevar a baño María hasta completa
disolución de las sustancias. Esterilizaren autoclave a 121°C, 21 libras de
presión, durante 15 minutos.
• Verter en capa fina (10 mL/caja de Petri), dejar endurecer toda la noche y
guardar en bolsa plástica sellada a 4° C. Antes de usar cada placa, dejar
un rato a temperatura ambiente.

PREPARACIÓN DEL CAMPO DE TRABAJO:

- Tener a mano y listo: Microscopio estereoscópico Pipetas Pasteur y bulbo

o perilla Cajas de Petri de 5 cm de diámetro Formalina al 10% en una
pizeta Tubos de ensayo de 13 X 100 mm, previamente rotulados
- Solución desinfectante: clorox, solución yodada, etc.
- Cuaderno para anotar y lápiz

ATENCIÓN:

Material potencial mente infectante. Utilizar guantes durante todo momento de

la observación de las muestras. La literatura japonesa ofrece otras ideas, pero
en nuestra experiencia el uso de guantes y el tener solución desinfectante a
mano es adecuado. Limpiar con desinfectante inmediatamente cualquier líquido
derramado. Se necesita determinar circunstancias de bioseguridad en la
adecuación del método para estudios epidemiológicos.

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PROCEDIMIENTO:

- Identificar la placa de agar con la muestra de heces a examinar.

- Con la ayuda de baja-lenguas, palo de paleta o aplicadores de madera,
colocar 1 g de heces en el centro de la placa. Si las heces están duras o
formadas, ablandar con unas gotas de agua destilada estéril. Tratar de
que las heces queden extendidas lo más posible y en contacto con el
medio de agar.
- Tapar la placa.
- Incubar a 37°C. Pueden asimismo dejarse en un lugar protegido a
temperatura ambiente, pero el tiempo de observación se prolonga.
- Incubar 24 horas.
- Antes de sacar las placas de la incubadora, ponerse los guantes. Sacar las
placas y llevar a la mesa de trabajo.
- Colocar una placa en el microscopio estereoscópico y sin destapar buscar
caminos de larvas y/o larvas en la superficie del medio. Si se forma agua
de condensación en la tapadera, limpiar ésta con papel absorbente y
descartar en desinfectante. Volver a tapar y continuar.
- Si no se observan caminos ni larvas, dejar en incubación otras 24 h. Al
cabo de ese tiempo, volver a examinar en microscopio estereoscópico.
- Anotar resultados. Verter formalina al 10% sobre la superficie del agar,
sin verterla sobre las heces.
- Inclinar la placa y con una pipeta Pasteur aspirar la formalina y colocar en
un tubo de ensayo previamente identificado.
- Centrifugar a 1,500 rpm durante 2 minutos.
- Decantar o extraer cuidadosamente el sobrenadante.
- Recobrar el sedimento con otra pipeta y colocaren un porta-objetos,
cubrir y observar al microscopio óptico.
- Identificar larvas presentes por morfología específica bajo objetivo 40 X:
cápsula bucal corta y primordio genital grande para larvas rabdiformes;
esófago largo y punta de la cola en forma de M para larvas filariformes
de S. stercoralis.

En ocasiones se han observado larvas dentro del medio. Enfocar bien al buscar
para no perderlas en caso de que no se encuentren en la superficie. No basta
con observar la presencia de surcos. Es necesario recobrar las larvas y
diferenciarlas.

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 CUESTIONARIO DE EXAMEN
LABORATORIO CLÍNICO N° IV

1. ¿Cuáles son los principales parásitos intestinales luminales

y tisulares que se hallan en los estudios humanos?

2. ¿Cómo puede llevarse a cabo la estimación de la intensidad de

la infección de nemátodos transmitidos por el suelo?
3. ¿En qué consiste la cuenta de huevos?

4. Hable sobre las consideraciones que deben tomarse en cuenta para

aplicar el método de dilución de Stoll.
5. ¿En qué consiste el estudio de flotación por sulfato de zinc?
6. ¿Cómo puede lograrse la diferenciación de larvas de nemátodos?
7. Hable sobre el método de Baermann.

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