Tesis David Paredes
Tesis David Paredes
Tesis David Paredes
AUTOR:
PAREDES MENDIETA JOSE DAVID
TUTOR:
Blga. VILMA SALAZAR, MSc.
GUAYAQUIL - ECUADOR
2017
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
ESCUELA DE BIOLOGÍA
GUAYAQUIL - ECUADOR
2017
© Derechos de autor
DAVID PAREDES MENDIETA
2017
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
ESCUELA DE BIOLOGÍA
…………………………………………
Blga. Vilma Salazar MSc.
DIRECTORA DE TESIS
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
CARRERA DE BIOLOGÍA
……………………………………………….
Agradezco a Dios por proveerme vida, salud y sabiduría por guiarme y protegerme en
cada paso que doy, por permitirme ser de bendición por donde camine y por permitir
alcanzar este sueño tan anhelado.
A mis queridos padres Cristóbal Paredes y María Mendieta gracias por ese apoyo
incondicional que me brindaron durante toda mi formación académica, por confiar en mí,
hoy me veo realizado y todo esto se los debo a ustedes.
A mi querida esposa Miriam Guartazaca por ser esa ayuda idónea por sus consejos y
consuelos dados durante esta ardua carrera, gracias por ese amor brindado que día a día me
motivaba para alcanzar este logro.
De igual manera a toda mi familia a cada uno de ellos a mis hermanas Nancy, Rosa y
mis hermanos Geovanny, Marcelo, Israel y Cristhian les agradezco por toda su ayuda
brindada.
A mi directora de tesis, Blga. Vilma Salazar MSc. por su esfuerzo y dedicación, quien
con sus conocimientos, su experiencia, su paciencia y su motivación ha logrado en mí que
pueda terminar mis estudios con éxito.
También me gustaría agradecer a mis profesores durante toda mi carrera profesional
porque todos han aportado con un granito de arena a mi formación, y en especial al Blgo.
Antonio Torres MSc. por sus consejos, su enseñanza y más que todo por su amistad.
De igual manera agradecer a mi profesor de Investigación y de Tesis de Grado, Blgo.
Jorge Chávez por su visión crítica de muchos aspectos cotidianos de la vida, por su rectitud
en su profesión como docente, por sus consejos, que ayudan a formarte como persona e
investigador.
A mis amigos Rodrigo Yambay, Manuel Alvarez y Marco Villamar quienes formaron
parte de este Proyecto “Camarón Urbano” los llevo en el corazón muchachos ustedes no
son simplemente mis amigos los considero mis hermanos RODAMACH.
A todos mis amigos en especial a mis dos mejores amigas Jessica Cuasapaz y Juliana
García que durante todo este tiempo siempre estuvieron alentándome y aconsejándome a
ellas les digo que las considero como mis hermanas.
Son muchas las personas que han formado parte de mi vida profesional a las que me
encantaría agradecerles su amistad, consejos, apoyo, ánimo y compañía en los momentos
más felices y difíciles de mi vida. Algunas están aquí conmigo y otras en mis recuerdos y
en mi corazón, sin importar en donde estén quiero darles las gracias por formar parte de mí,
por todo lo que me han brindado y por todas sus bendiciones.
RESUMEN
Para controlar las patologías surgidas durante la segunda fase de cultivo se aplicó 5ppm
de ácido orgánico (de nombre comercial Viracid Plus) al alimento durante 7 días y se
empleó hidróxido de calcio al agua para flocular agentes patógenos.
viii
ABSTRACT
The study was conducted in the laboratory of aquaculture of the Faculty of Natural
Sciences of the University of Guayaquil, aiming to determine the pathologies associated
with the intensive culture of whiteleg shrimp Litopenaeus vannamei in closed recirculation
systems. The same one which consisted of 3 phases, where 170 samples of shrimp, 144
sample of water tanks (raceways), 36 water samples from the biofilter and 36 samples of
sediment ponds, were analyzed during the 90 days of hard study.
Analyzed samples fresh shrimp where evaluated the external characteristics observed
melanización and necrosis mostly in antennas and b. during the three phases of cultivation.
We also evaluated internal characteristics presented in the second phase of cultivation,
deformity grade 2 of the tubules of the hepatopancreas and low quantity of lipids (3/4),
indicating the presence of Necrosis of the Hepatopancreas Septic (NHP-S). In addition,
gills presented mostly necrosis in the third stage of cultivation.
Analysis of bacteria both for shrimp, water, biofilter and sediment, arising during the
second phase of growing concentrations of 105UFC/g of Vibrio alginolyticus in shrimp,
affirming the presence of NHP-S which was caused by this bacterium, being this pathology
of most affected during the culture arising mild deaths less than 10%.
5 ppm of organic acid (from Viracid Plus brand name) was appliced to control the
pathologies that emerged during the second phase of cultivation to food for 7 days and was
used to water calcium hydroxide to flocculate pathogens.
ix
ÍNDICE
x
4.4.2. Análisis bacteriológico ................................................................................... 19
5.-RESULTADOS ................................................................................................................ 24
5.1. Análisis de Datos ................................................................................................... 24
5.2. Sintomatología causada por los microorganismos encontrados ............................ 24
5.3. Análisis de Bacteriología ....................................................................................... 25
5.4. Control de la patología observada.......................................................................... 26
5.5. Discusión ............................................................................................................... 27
6.-CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ............................................................... 30
6.1. Conclusiones .......................................................................................................... 30
6.2. Recomendaciones .................................................................................................. 31
7. GLOSARIO ................................................................................................................... 32
8. BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................... 33
9. ANEXOS ....................................................................................................................... 44
xi
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Grado de severidad de la deformación tubular en hepatopáncreas. ....................... 14
Tabla 2. Interpretación de crecimiento bacteriano en agar TCBS en camarones. ................ 14
Tabla 3. Identificación de Microorganismos en agares selectivos. ...................................... 20
Tabla 4. Numero de muestras analizadas durante todo el cultivo. ....................................... 21
Tabla 5. Patógenos encontrados durante el cultivo. ............................................................. 24
Tabla 6. Análisis de las características externa. Los datos están expresados en %. ............. 25
Tabla 7. Análisis de las características internas. .................................................................. 25
Tabla 8. Especies de bacterias encontradas durante el cultivo. ............................................ 26
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Área de estudio. ................................................................................................................. 17
xii
1.- INTRODUCCIÓN
En las últimas décadas, el cultivo del camarón ha sido una de las actividades productivas
de mayor desarrollo en el país, exportándose hacia diferentes mercados como; Europa, Asia
y América. La producción de camarón en cautiverio en el Ecuador tuvo sus inicios en los
años 1958 – 1959 en la provincia del El Oro, siendo los pioneros los señores Alfonso
Grunauer, Robinson Serrano y Jorge Káiser (Silva, 2014).
1
De acuerdo con la Organización Mundial de Sanidad Animal, (OIE), durante la década
pasada, la producción mundial de especies acuícolas se ha visto afectada por numerosas
enfermedades infecciosas, las que han impactado severamente el desarrollo y
sustentabilidad de la acuicultura convirtiéndose en una restricción primaria para su
desarrollo (OIE 2010).
Al respecto Villón, (2009) explicó que a medida que el crecimiento de la industria del
cultivo del camarón ejerza mayor presión en los recursos naturales costeros, se hace cada
vez más necesaria la implementación de técnicas y formas de manejos del cultivo que
contribuyan a reducir los impactos ambientales y ayuden a sostener la base natural de
recursos.
Cabe concluir que Morales, (2013) indicó que la producción camaronera mundial ha ido
en aumento, en la última década se ha caracterizado por diversas restricciones en la
producción, siendo la ocurrencia de enfermedades de origen viral la más importante.
Actualmente la Organización Mundial de Sanidad Animal, considera a la enfermedad del
Síndrome de Taura (TSV), la enfermedad de la Mancha blanca (WSS), la enfermedad de la
Cabeza Amarilla (YH), la Necrosis Hipodérmica y Hematopoyética Infecciosa (IHHN), la
Mionecrosis Infecciosa (IMN) y la Hepatopancreatitis Necrotizante (NHP), como
enfermedades de declaración obligatoria.
2
acción es más económica y ambientalmente amigable que cualquier otra medida de
remediación aplicada.
2.- ANTECEDENTES
Las enfermedades que afectan a los camarones marinos pueden ser causadas
habitualmente todos los tipos existentes de microorganismos (virus, bacterias, hongos, etc.).
Aunque los virus juegan el papel de los agentes etiológicos principales responsables de
pérdidas en los cultivos, las bacterias se destacan también por estar naturalmente presentes
en el agua, que cumplen un papel importante en los ciclos biogeoquímicos en ambientes
acuáticos y son potencial etiología causante de enfermedades primarias o secundarias
(Lavorante, 2009).
Cabe tener en cuenta que una de las causas principales de brotes de enfermedades y
epidemias para el camarón, está dada por la transferencia de agentes infecciosos vía
transporte de organismos vivos (OIE 2009; Lightner y Redman 1994; Lightner 1996; Tang
et al., 2003; Briggs et al., 2005).
Lotz et al., (2005), evaluó la infestación del Virus del Síndrome de Taura en juveniles de
camarón blanco, en salinidades de 0 a 24, y se observó que las mayores mortalidades
generadas por este patógeno ocurren a menor salinidad.
Estudios de Morales, (2010) relataron que los ambientes de cultivo han sido invadidos
por bacterias oportunistas en general del orden de las Vibrionaceas del género Vibrio y
como también las Aeromonas (Morales-Covarrubias et al., 2010). Junto a esto, la
combinación de un manejo inadecuado y una mayor densidad de siembra, tanto intensiva y
semi-intensiva, promueve una reducción en la calidad del agua de los cultivos, lo que lleva
a los cambios ambientales que generan estrés en los animales con alteraciones en el sistema
inmune, que puede resultar en la aparición de enfermedades (CUNHA, 2008).
De acuerdo al trabajo realizado por Álvarez et al., (2003) en los ejemplares analizados
se encontró áreas melanizadas en el exoesqueleto relacionadas con la presencia de vibrios
spp y Vibrio harveyi predominando esta última.
3
En estudios realizados por Aguirre et al., (2013), se observó que concentraciones de V.
harveyi en el agua de 105 y 107 UFC/ml provoca una sobrevivencia baja en larvas de
Litopenaeus vannamei, siendo la última dosis la que presentó los valores más bajos de
sobrevivencia. Además, en los sub-estadios larvarios y en el de post-larva fueron más
resistentes a este patógeno al aumentar la edad de los mismos.
Así por ejemplo el Vibrio peneicida que es una bacteria altamente patógena capaz de
causar mortalidades masivas en pocos días, se manifiesta en la especie Penaeus stylirostris
sólo durante los períodos de cambio de temperatura y salinidad (Alexander, 1999; Citado
por Rodríguez, y Sandoval, 2010).
De ahí que Aguilar et al., (2003) juntamente con estudiantes de Costa Rica llegaron a
Balao provincia del Guayas a investigar los problemas presentados en el área y propusieron
un proyecto para demostrar la factibilidad del cultivo basado en tecnología y la
implementación de microorganismos eficaces, formado por bacterias, actinomicetos y
levaduras que mejoran las condiciones fisicoquímicas y biológicas del ambiente (Citado
por Silva, 2014).
De acuerdo a lo anterior Vicente y Lotz, (2005), deducen que los signos clínicos más
evidentes de la enfermedad NHP-B incluye a una reducción en la actividad de
alimentación, intestinos vacíos, músculos y exoesqueleto flácidos, presencia de branquias y
4
pleópodos oscurecidos, palidez y atrofia del hepatopáncreas, y natación errática, entre
otros.
Por otro lado, Rubio et al., (2012), indicó la presencia de manchas color café a negro en
el camarón Litopenaeus vannamei constituye un síndrome relacionado con infecciones en
la cutícula, apéndices o branquias que se la conoce como “enfermedad del caparazón” y es
causada por patógenos oportunistas, entre ellas se encuentran las Pseudomonas y
Aeromonas (Ibarra, 1999).
5
Los epicomensales encontrados con mayor prevalencia (20 a 40%) en camarones de
cultivo con baja salinidad son Zoothamnium sp, Epistylis sp, Vorticella sp y Ascophrys sp,
causando altas mortalidades cuando atacan a las branquias, la región oral y la cutícula de
juveniles y adultos; las postlarvas tardías y los subadultos son los más afectados en los
cultivos con medianas y altas densidades. En grados de severidad 3 y 4 de la infestación, la
superficie corporal del camarón se torna rojiza y se dificultan la locomoción, la
alimentación, la respiración y la reproducción, finalmente sobreviene la muerte (Morales et
al., 2012).
Por otra parte, la especie Nematopsis penaei perteneciente al grupo de las Gregarinas, es
la única reportada en causar daños en camarones; en grados de severidad altos (3 y 4)
provocando, en los camarones de cultivo, una disminución en el consumo de alimento,
reducción en el crecimiento y altas mortalidades. Las Gregarinas infectan la mucosa de los
intestinos medios y posterior y los ciegos de camarones silvestres y cultivados; asimismo,
causan la destrucción del epitelio intestinal y afectan la absorción del alimento, por lo que
es posible observar el intestino con secciones sin heces (Morales, 2010).
6
3.-MARCO TEÓRICO
El camarón blanco del Pacífico Litopenaeus vannamei, debido a su alta tolerancia a una
amplia gama de las condiciones ambientales, una mayor resistencia a diversas
enfermedades, y su excelente rendimiento acuícola, es en realidad la especie de camarón
más ampliamente cultivado en todo el mundo. Sin embargo, la cultura global de este
camarón ha enfrentado recientemente serios problemas, especialmente aquellos relacionada
con la prevalencia y la gravedad de una serie de enfermedades virales y bacterianas
(Lightner, 2011).
En camarones cultivados se han descrito alrededor de 20 virus que los han afectado de
manera directa o indirecta (Lightner, 2011).
7
como uno de los virus más pequeños. Infecta casi todos los órganos y tejidos de los
camarones (Morales, 2010).
Este virus ha sido identificado en muchas otras islas del Pacífico, así como en América
desde Perú a México, este y el sudeste de Asia, Oriente Medio y Australia (OIE, 2009).
Cabe concluir que Bell (1984), reporta dos enfermedades graves que afectan al camarón:
siendo la primera el IHHNV, provocando deformidades en el rostro y anomalías del
crecimiento (enanismo), afectando a los camarones de cultivo esencialmente Litopenaeus
stylirostris, y la segunda enfermedad aún más grave conocida como el Virus del Síndrome
de la Mancha Blanca o WSSV (por sus siglas en ingles), que apareció en China en 1993, en
el Ecuador y América Latina, en el año 1998 con un carácter epidémico severo, sin
precedentes en el continente americano (Citado por Silva, 2014).
El Virus de la Mancha Blanca es uno de los virus más complejos que infectan al
camarón y presentan una forma de elíptica a cilíndrica, con una membrana trilaminar y
viriones de 80-120 x 250-380 nm (Morales, 2010).
8
desarrolla la actividad. Este hecho afectó negativamente la producción con un grave
impacto a la economía y reduciendo las plazas de trabajo (Citado por Chávez, 2016).
El virus del Síndrome de Taura (TSV), uno de los patógenos más importantes que
afectan a los camarones criados en granja, se informó por primera vez en 1992 en L.
vannamei colectado en las camaroneras de Taura, Ecuador (Lightner et al., 1995).
Es así como Thompson (2004), señala que los sistemas de cultivo intensivos crean un
ambiente modificado para los organismos marinos incrementando de por sí el crecimiento
bacteriano, las bacterias llegan a tomar ventajas de los cambios ecológicos introducidos en
los sistemas, llegando a causar enfermedades en sistemas donde normalmente predominan
las bacterias gram negativas. En particular los miembros de la familia Vibrionaceae y
principalmente el género Vibrio son causantes de septicemias o enfermedades en los
camarones cultivados (Citado por Rodriguez y Sandoval, 2010).
3.3.1. Vibrios
En este contexto Aguirre et al., (2013), afirma que los Vibrios sp. son bacterias que
están presentes en la microflora normal de los camarones peneidos, siendo agentes
patógenos oportunistas de los cambios ecológicos que ocurren dentro de los estanques en
9
los cultivos acuícolas, ocasionando bajas sobrevivencias y pérdidas económicas en la
producción de camarón.
Las especies de género Vibrio son bacilos Gram-negativos, que miden entre 2 y 3 μm de
largo, dotados de un único flagelo polar que les permite una elevada movilidad. Soportan
bien los medios alcalinos, así como las concentraciones salinas. Existen 74 especies
descritas (Suarez, 2005; Citado por Rodriguez y Sandoval, 2010).
Es decir, dentro del ecosistema marino los vibrios cumplen funciones importantes como
biodegradación de la materia orgánica y regeneración de nutrientes, también actuan como
patógenos de organismos acuáticos de importancia comercial, que bien pueden llegar
afectar al hombre (Vanova et al., 2004).
3.3.3. Pseudomonas
Las bacterias del género Pseudomonas son causantes de altas mortalidades en el cultivo
de camarón, son bacterias muy patógenas comunes a baja salinidad se combaten
mayormente con el uso de probióticos (Rubio et al, 2012).
10
3.3.4. Género Bacillus
Las tetraciclinas se han utilizado para erradicar diversa Rickettsia en los animales
(Hussain et al., 2014).
11
célula a través de transporte facilitado (Boxall y Ericson, 2012), bloqueando el sitio de
unión de la 50S subunidad ribosomal. Sin embargo, a pesar de la eficacia de los análogos
de cloranfenicol contra las Rickettsia, el uso de FF no está muy extendido en las
camaroneras.
Los protozoos epibiones tienen afinidades de fijación fuerte para las superficies de
invertebrados marinos (Carman y Dobbs, 1997), los que se consideran generalmente como
agentes etiológicos de enfermedades importantes de crustáceos (Morado y Small, 1995). Al
hacerlo obtienen el alimento, que, en los protozoos ciliados filtradores, llega a ser cualquier
partícula orgánica pequeña, viva o muerta, particularmente bacterias, que estén suspendidas
en el agua, mientras que los suctorios se alimentan de otros ciliados (Ruppert y Barnes,
1993). Así, la vida de los ectocomensales incluye duplicación continua; en la cual el
camarón afectado adquiere una creciente carga de estos protozoos hasta que la pérdida del
exoesqueleto le proporcione un alivio durante la muda (Chang, 1991; Johnson, 1995).
3.4.1. Ectoparásitos
Estos protozoarios son organismos cosmopolitas (Mayén y Aladro, 2001) que se
encuentran naturalmente en los estanques de cultivo, siendo los más comunes los géneros
Zoothamnium sp., Epistylis sp., Acineta sp. y Ascophrys sp. Los camarones cultivados en
sistemas de producción semi-intensivos, intensivos o súper-intensivos, con altas densidades
de siembra en los estanques o aguas de baja calidad, frecuentemente desarrollan formas de
enfermedades causadas por estos microorganismos que se adhieren a las branquias o a la
12
superficie del animal (Gilbert y Schröder, 2003; Cuéllar, 2008; Morales-Covarrubias,
2010). Una vez que los organismos se acumulan en el exoesqueleto, tienden a captar el
detrito, provocando una apariencia verdosa o grisácea (Chanratchakool et al., 1998).
3.4.2. Endoparásitos
Las Gregarinas son los endoparásitos de mayor prevalencia en sistema de cultivo con
baja salinidad. Pueden encontrarse inter o intracelularmente en su hospedero, siendo las
células individuales destruidas por las fases intracelulares del parasito, casi todas las
especies (Nematopsis sp, Cephalolobus sp y Paraophioidina sp) son consideradas de poca
patogenicidad en Farfantepenaeus duorarum, Litopenaeus setiferus y Litopenaeus
vannamei (Morales, 2010).
13
Tabla 1. Grado de severidad de la deformación tubular en hepatopáncreas.
GRADO DE
SIGNOS CLÍNICOS
SEVERIDAD
Hemolinfa Hepatopáncreas
Tipos de UFC (UFC/mL) (UFC/g)
>103 <103 <105 >105
Verdes Lum. 100 % muy grave grave grave grave
Verdes >50% grave serio Serio serio
Verdes < 50% Serio serio-normal Serio serio-normal
Amarillas Serio normal Normal normal
14
3.6. Justificación
En este contexto se considera válido implementar cultivos súper intensivos en los cuales
se mantengan protocolos adecuados para minimizar el impacto de microorganismos en lo
referente a virus, bacterias, hongos y protozoarios, llenándose así vacíos de información
referentes a prevención de enfermedades en este tipo de sistemas.
Además, este trabajo servirá como una guía de apoyo para investigadores, estudiantes y
productores camaroneros, interesados en identificar y controlar enfermedades patógenas del
camarón blanco desarrolladas a nivel de raceways para postlarvas de pl 12 hasta juvenil de
8 gramos.
3.7. Hipótesis
15
3.8. Objetivos
16
4.-MATERIALES Y METODOS
4.2. Metodología.
El siguiente estudio se llevó a cabo en 2 tanques rectangulares tipo Raceways con las
siguientes dimensiones: Longitud: 4m por 2m de Ancho y por 1m de Altura, recubiertos
con geomembrana o Liners de polietileno de alta densidad de 1mm, HDPE (por sus siglas
en ingles), para abastecer al sistema con aireación se utilizará un blower eléctrico (marca
Fuji Electric Systems de capacidad de 2.5hp - Monofasico), distribuido en los tanques a
través de mangueras difusoras Aero 2 (3mm la burbuja) instaladas en el fondo del estanque
en líneas paralelas cada 60 centímetros.
17
4.3. Muestreos
4.3.1. Primera Etapa
Esta etapa duró 21 días y se manejaba a una densidad de 800 camarones/m3. Se analizó
10 prejuveniles de camarón cada 3 días, examinando características externas e internas,
esas mismas muestras fueron utilizadas para efectuar el análisis bacteriológico, también se
tomó muestras de agua y se realizó análisis bacteriológico.
Esta etapa tuvo una duración de 54 días con una densidad de 300 camarones/m3, se
analizaron 5 juveniles de camarón cada 4 días examinando características externas e
internas y además esas mismas muestras fueron utilizadas para realizar el análisis
bacteriológico, al mismo tiempo se realizó los análisis bacteriológicos al agua.
18
• Se revisó la coloración del músculo: rojos, amarillos, pigmentados.
Con una tijera cortamos la cutícula que recubre la altura de las branquias, mediante una
pinza se extrajo una muestra y se colocó en un portaobjeto, se agregó una gota de solución
salina (5 ups) se colocó el cubre objeto y rápidamente se observó al microscopio teniendo
en consideración los arcos branquiales, si había parásitos y necrosis.
Se cortó el último segmento del abdomen por donde se extrajo mediante una pinza la
ampolla rectal juntamente con el intestino, se colocó en un portaobjeto se agregó una gota
de solución salina (5ups) se colocó el cubre objeto y se observó al microscopio teniendo en
cuenta la presencia de Gregarinas.
Se examinó una muestra del musculo cortándolo con una tijera a la altura del tercer
segmento, se sujeta con una pinza y se golpea suave en una placa portaobjeto se agrega una
gota de solución salina (5ups) colocamos el cubre objeto y se observa al microscopio para
reportar la presencia de microsporidios.
19
Tabla 3. Identificación de Microorganismos en agares selectivos.
Manual de Medios de Cultivos Merck, (1974). Cuadro resumido por Chávez, J. (2014).
Agar TCBS Microorganismo
Grandes; amarillas Vibrio alginolyticus
Pequeñas, con el centro verde-azulado Vibrio parahaemolyticus
Planas de 2-3 mm de diámetro; amarillas Vibrio cholerae
Color crema como mancha (amorfa) Pseudomonas, Aeromonas
Diminutas, trasparentes Enterobacterias
Agar McCONKEY
Incoloras; transparentes Salmonella, Shigella
Grandes; rojas con halo turbio Escherichia coli
Grandes; rosadas con mucosa Enterobacter, Klebsiella
Diminutas; crecimiento aislado, opaca Enterococos, Estafilococos
Agar CETRIMIDE
Colonias verde-azuladas, fosforescentes al UV Pseudomonas sp.
Para este análisis se utilizó un total de 195 placas de agar durante todo el cultivo el cual
se distribuirá de la siguiente manera (Tabla 4):
20
Tabla 4. Numero de muestras analizadas durante todo el cultivo.
PRIMERA ETAPA
Medios de cultivo Nº muestra x Duración Total de Observaciones
semana de la etapa muestras
TCBS 2 camarón X2 semanas 12 Se analizó 2
2 agua/raceways muestras de
1 biofiltro camarón y 2 de
1 sedimento agua porque se
McCONKEY 2 camarón X2 semanas 12 trabajó en un
2 agua/raceways solo tanque en
1 biofiltro esta etapa.
1 sedimento
CETRIMIDE 2 camarón X2 semanas 12
2 agua/raceways
1 biofiltro
1sedimento
SEGUNDA ETAPA
TCBS 4 camarón X3 semanas 30 Se trabajó en
4 agua/raceways dos tanques
1 biofiltro (raceways) por
1 sedimento tal motivo se
McCONKEY 4 camarón X3 semanas 30 analizó 4
4 agua/raceways muestras para
1 biofiltro camarón y 4
1 sedimento para agua por
CETRIMIDE 4 camarón X3 semanas 30 semana.
4 agua/raceways
1 biofiltro
1 sedimento
TERCERA ETAPA
TCBS 4 camarón X8 semanas 80 Se analizó 4
4 agua/raceways muestras de
1 biofiltro camarón y 4 de
1 sedimento agua porque se
McCONKEY 4 camarón X8 semanas 80 trabajó en los
4 agua/raceways dos raceways.
1 biofiltro
1 sedimento
CETRIMIDE 4 camarón X8 semanas 80
4 agua/raceways
1 biofiltro
1 sedimento
TOTAL 366
21
4.4.2.1. Preparación de los Medios de Cultivo
22
cultivo. Se utilizó 100ml de agua de los tanques para la siembra. Se trituro y macero 10gr
de sedimento para luego ser sembrado directamente. Se tomó 100ml de agua que salía del
biofiltro para ser sembrado.
Se utilizó una aza de platina con capacidad de 10 microlitros para sembrar las muestras
de agua, camarón, sedimento y biofiltro.
Las muestras se las colocó en una incubadora por 48 horas a 30 ºC, luego se procedió a
contar las unidades formadoras de colonias (UFC) (Anexo 4).
23
5.-RESULTADOS
5.1. Análisis de Datos
Para la identificación de patógenos en el cultivo se procedió a analizar 170 muestras de
camarón, 144 muestras de agua de los raceways, 36 muestras de agua del biofiltro y 36
muestras del sedimento donde se encontró patologías asociadas 4 tipos de especies de
bacterias siendo el Vibrio alginolyticus y Pseudomonas cepacia las que estuvieron
presentes en las 3 fases del cultivo (Tabla 5).
IDENTIFICACIÓN DE PATÓGENOS
Virus Bacterias Hongos Protozoarios
Vibrio alginolyticus
FASE I - - -
Pseudomonas cepacia
Vibrio alginolyticus
Pseudomonas fluorescens
FASE II - - -
Pseudomonas cepacia
Aeromona veronii bio sobria
Vibrio alginolyticus
Pseudomonas fluorescens
FASE III - - -
Pseudomonas cepacia
Aeromona veronii bio sobria
24
Tabla 6. Análisis de las características externa. Los datos están expresados en %.
CARACTERISTICAS EXTERNAS
Rostro Abdomen Cefalotórax Antenas Anténulas Periópodos Pleópodos Urópodos Telson
FASE NECROSIS 0 0 0 3 3 18 10 0 0
I MELANOSIS 0 0 0 5 0 0 0 3 0
FASE NECROSIS 0 0 0 9 7 6 4 2 1
II MELANOSIS 0 0 0 15 0 0 0 12 0
FASE NECROSIS 0 4 0 6 3 5 3 0 1
III MELANOSIS 0 0 0 13 0 0 0 6 0
CARACTERISTICAS INTERNAS
25
Tabla 8. Especies de bacterias encontradas durante el cultivo.
ANALISIS DE BACTERIOLOGÍA
BACTERIAS Camarón Agua Biofiltro Sedimento
1.38 x104 1.8 x103 3.8 x103 1.9 x103
Vibrio alginolyticus UFC/g UFC/ml UFC/ml UFC/ml
FASE I
2.6 x103 3 x102 4 x102 1.6 x103
Pseudomonas cepacia UFC/g UFC/ml UFC/ml UFC/ml
26
5.5. Discusión
Son escasos los estudios realizados en cultivo intensivo de camarón en sistemas cerrados
de recirculación, debido al espacio restringido que comparten estos animales, promueve la
competencia por el espacio y así las peleas entre organismos ocasionan laceraciones,
raspones o heridas en el exoesqueleto, antenas, Pereiópodos o en cualquier parte del mismo
siendo una puerta de entrada para bacterias oportunista que según Ponce et al., (2005)
constituye uno de los problemas más comunes que aparece con mayor intensidad en los
sistemas con altas densidades de siembra. Esta afección se considera una infección
secundaria, aunque algunas especies o cepas causantes de este proceso como Vibrios han
sido identificadas como patógenos primarios (Peña et al., 1995). Concordando con el autor
que la necrosis ocasionada mayormente en antenas y pereiópodos fue por las altas
concentraciones de UFC de la especie Vibrio alginolyticus presentadas en el agua durante
la investigación.
Morales (2008), indica que esta infección debe controlarse debido a que cuando no es
detenida en la superficie cuticular, las bacterias pueden continuar degradando hasta penetrar
al interior de los tejidos dañándolo severamente llegando a convertirse hasta en una
vibriosis sistémica (González y Prado, 2003, Morales 2008) con la formación de nódulos
sépticos hemocíticos en el órgano linfoide, corazón, tejido conectivo de las branquias,
27
glándula antenal, cordón nervioso, músculos y principalmente al hepatopáncreas
(Jiravanichpaisal y Miyazaki, 1994) donde los hepatopáncreas infectados pueden parecer
pobremente vacuolados, indicando bajas reservas de lípidos y glucógeno, lo dicho por este
autor concuerda con el presente estudio dado que primeramente se presentó necrosis en los
apéndices, posterior a eso apareció la Vibriosis sistémica: deformación de los túbulos del
hepatopáncreas y bajas reservas de lípidos en los camarones cultivados.
Los resultados concuerdan con lo dicho por Lightner, (1996), quien indica que,
diferentes Vibrio se encuentran presentes en todos los crustáceos marinos y que se
convierten en patógenos oportunistas cuando los mecanismos de defensa natural del
hospedero están suprimidos. Los miembros del género Vibrio han sido asociados con la
mortalidad de camarones peneidos en diferentes países del mundo, siendo V. harvey, V.
alginolyticu, V. parahaemolyticus, y V. mimicus algunas de las especies reportadas en
asociación con importantes daños en todas las fases de cultivo del camarón (Aguirre et al.,
2001; Robertson et al., 1998; Schuwerack et al., 2001; Vanderbergh et al., 1999). Por otra
parte Gómez et al., (1998), encontraron Vibrio harveyi, Vibrio parahaemolyticus y Vibrio
spp en hemolinfa de camarones aparentemente sanos, siendo común una carga inferior de
1x103 UFC, sin tener mortalidad estos resultados coinciden con los del presente estudio
teniendo en cuenta que se analizaron muestras de hepatopáncreas donde el V. alginolyticu
28
se presentó en la primera y segunda fase de cultivo con una carga inferior a 1x103 UFC la
cual no presentó ningún problema en los camarones.
Las deformaciones observadas en los túbulos del hepatopáncreas coinciden con las
reportadas por (Lightner y Pantoja, 2005; Morales, 2010) cuando describen mediante el
análisis en fresco del órgano deformación y atrofia severa de los túbulos con y sin
melanización, desprendimiento celular y formación de nódulos hemocíticos en el tejido
conectivo intertubular, desprendimiento de células con núcleos hipertrofiados en el lumen
de los túbulos, procesos de necrosis rodeados por hemocitos y fibroblastos (Morales, 2010)
correspondiente a la NHP-S, en conclusión las características descritas por estos autores
para determinar NHP-S fueron las mismas que presentó este estudio dando positivo para
esta patología.
Sin embargo, de acuerdo al trabajo realizado por Haws et al., (2001), sobre buenas
prácticas de manejo en el cultivo de camarón, donde asocia a las especies de Vibrio con
enfermedades en camarones, tales como vibriosis, enfermedad bacterial, septicemia
bacteriana de los peneidos, vibriosis de los peneidos, vibriosis luminiscente y enfermedad
de las patas rojas, mostrando signos tales como letargia, intestino semi-vacío, anorexia y
melanización de los apéndices.
29
6.-CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
6.1. Conclusiones
Por ser este estudio un cultivo intensivo de camarón y debido a las altas densidades de
siembra, se utilizó grandes cantidades de alimento balanceado, lo cual muchas veces por
factores abiótico o bióticos el camarón no consume en su totalidad lo suministrado o por el
contrario los animales excretan más, y además las algas que cumplen su ciclo de vida y
mueren, en resumen:
1.- Los desperdicios se precipitan al fondo del estanque formándose así la materia
orgánica la misma que fue controlada y desdoblada biológicamente mediante la aplicación
de un consorcio bacteriano 3 días antes de la siembra de los animales.
3.- La ausencia de patógenos por parte de virus, protozoarios y hongos está vinculada al
tratamiento de desinfección que se efectuó tanto en los tanques como al agua antes del
llenado de los tanques.
6.- El tratamiento aplicado para contrarrestar el ataque bacteriano tuvo buen efecto
debido a que se pudo detectar a tiempo el problema.
30
6.2. Recomendaciones
31
7. GLOSARIO
Autoclave: Dispositivo que sirve para esterilizar material médico o del laboratorio,
utilizando vapor de agua alta presión y temperatura.
Patología: Es la parte de las ciencias médicas, humanas y animales encargadas del estudio
de las enfermedades en su más amplio sentido es decir, como procesos o estados anormales
de causas conocidas o desconocidas.
Postlarvas: Estado que ocurre después del estado larval, parecido al juvenil pero aún le
faltan crecer.
Urópodos: Apéndices del sexto segmento de un camarón que están dirigidos hacia atrás y
junto con el telson forman el abanico caudal.
Virus: Es una entidad biológica capaz de autor replicarse utilizando la maquinaria celular.
Es un agente potencial patógeno compuesto por una capsula de proteínas que envuelve al
ácido nucleico que puede ser ADN o ARN.
32
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43
9. ANEXOS
ANEXO 1
Adquisición de las post larvas del Laboratorio Chalarva.
44
ANEXO 2
CARACTERISTICAS EXTERNAS
1
1
2
1
2
Figura 10. Procesamiento de las muestras Figura 11. Muestra de hepatopáncreas, branquias,
de camarón. intestino y musculo.
Figura 12. Túbulos del hepatopáncreas normal con buen grado Figura 13. Necrosis en branquias.
lipídico.
46
Figura 14. Túbulos deformes (grado 1). Figura 15. Túbulos deformes (grado 2).
Figura 16. Baja cantidad de lípidos (grado 3). Figura 17. Cumulo bacteriano.
ANEXO 4
ANÁLISIS DE BACTERIOLOGÍA
Preparación de los medios de cultivos:
Figura 18. Pesando Agar TCBS. Figura 19. Pesando Agar McCONKEY. Figura 20. Pesando Agar CETRIMIDE.
47
Figura 21. Calentando medio de Figura 22. Calentando medio de Figura 23. Calentando medio de
cultivo TCBS. cultivo McCONKEY. cultivo CETRIMIDE.
Figura 24. Colocando medios Figura 25. Colocando medio de Figura 26. Colectando muestra
de cultivo en autoclave. cultivo en cajas de petri. de agua.
Figura 30. UFC en medio de Figura 31. UFC en medio de Figura 32. UFC en medio de
cultivo TCBS. cultivo McCONKEY. cultivo CETRIMIDE.
48
Prueba bioquímica Microgen GN-ID:
Figura 33. Preparación de solución Figura 34. Colecta de colonia mediante Figura 35. Homogenización de colonia en
salina. un isópodo. solución salina.
Figura 36. Colocando muestra en los 24 Figura 37. Obtención del código. Figura 38. Introduciendo el código en el
pocillos. programa.
49
ANEXO 5
CONTROL DE PATOLOGÍAS
Figura 39. Aplicación de consorcio Figura 40. Aplicación de Hidróxido de calcio. Figura 41. Aplicación de ácido orgánico.
bacteriano.
50