PUNTO ISOELÉCTRICO EN AMINOÁCIDOS

Integrantes:

Julio Leiton 4-821-849

Jorhan Espinosa 4-818-1827

Aron Del Cid 4-830-2322

Albis Núñez 9-765-330

Docente:

De Bioquímica laboratorio, Manuela Del P. Miranda S. Entrega: 20/5/2024

RESUMEN

La práctica de laboratorio esta relacionada en conocer sobre el punto isoeléctrico de

algunos aminoácidos proporcionados en la clase (el ácido glutámico y la glicina). Los
aminoácidos pueden presentar diferentes formas ionizadas en solución debido a la
presencia en sus moléculas de grupos de carácter ácido o básico, y esta forma es
dependiente del pH. El aminoácido con el que nos correspondió trabajar fue la glicina, en
un Erlenmeyer de 250 ml teníamos 25 ml del aminoácido. Iniciamos midiendo el
aminoácido con el Potenciómetro y luego se tituló con la bureta hidróxido de sodio
adicionando 1 ml hasta alcanzar el pH de 10, a la glicina se le agrego 10 ml de NaOH. El
pH inicial de la glicina sola fue de 2,2, en las medidas siguientes se fue agregando 1 ml de
NaOH se llegó a 10 ml obteniendo un pH de 10,2. En cada proceso se debían hacer las
debidas anotaciones. Bien como estudiantes debíamos conocer el punto isoeléctrico(pl.) de
los aminoácidos, se refiere a el pH al cual la cantidad de carga positiva de un aminoácido es
exactamente igual a la cantidad de carga negativa, Presentes, nos da 0. Es el pH que no
tiene carga neta.

PALABRAS CLAVES: punto isoeléctrico, aminoácido, anfóteros

INTRODUCCIÓN ser humano puede sintetizarlo a partir de
otros compuestos. Pertenece al grupo de los
Un aminoácido puede existir en varias
llamados aminoácidos ácidos, o con carga
formas iónicas, dependiendo del pH del
negativa a pH fisiológico, debido a que
medio en donde se encuentre disuelto. Esta
presenta un segundo grupo carboxilo en su
propiedad se describe mejor utilizando la
cadena secundaria. Es el neurotransmisor
ecuación de Henderson. Los aminoácidos
excitatorio por excelencia de la corteza
tienen al menos dos grupos disociables, el
cerebral humana. Su papel como
amino y el carboxilo; pueden tener más si el
neurotransmisor está mediado por la
grupo R tiene a su vez grupos que se puedan
estimulación de receptores específicos,
ionizar. Para cada uno de estos grupos
denominados receptores de glutamato.
existe un pKa. (Fernandez-Sanchez, 2008)
(Guyton, 2016)
Una forma conveniente de expresar la
OBJETIVOS
relativa fortaleza de un ácido es mediante el
valor de su pKa, que permite ver de una ➢ Determinar los pka y pI de un
manera sencilla en cambios pequeños de aminoácido mediante curva de
pKa los cambios asociados a variaciones titulación.
grandes de Ka. Valores pequeños de pKa ➢ Determinar el punto isoeléctrico (pI)
equivalen a valores grandes de Ka de una proteína de la leche mediante
(constante de disociación) y, a medida que la técnica de precipitación.
el pKa decrece, la fuerza del ácido aumenta. ➢ Expresar las estructuras de
Un ácido será más fuerte cuanto menor es disociación de los aminoácidos.
su pKa y en una base ocurre al revés, que es ➢ Utilizar correctamente el
más fuerte cuanto mayor es su pKa. (Harris, potenciómetro.
2001) ➢ Desarrollar habilidades y destrezas
en la utilización de la
El ácido glutámico es crítico para la función
instrumentación de volumetría.
celular y no es nutriente esencial porque el
MARCO TEÓRICO disociación, resulta que a pH fisiológico
(7,4), la concentración de la forma catiónica
La característica más llamativa de los
es prácticamente despreciable (una de cada
aminoácidos (AA) es la existencia en una
151.000 moléculas en la forma zwitterión).
misma molécula de grupos ácidos (capaces
El segundo grupo en disociarse es el NH +.
de ceder H+) y grupos básicos (capaces de
Como el pK2 es 9,86, la concentración de la
captar H+). Por lo tanto, en medio ácido se
forma aniónica es muy pequeña en
comportan como bases, y en medio básico
comparación con la forma zwitterión (1
se comportan como ácidos. Las moléculas
molécula en forma aniónica por cada 300 en
que presentan esta característica se dice que
forma zwitteriónica).
son anfóteros o anfolitos.

El AA se comporta a pH fisiológico como

Los grupos ácidos y básicos pueden
un ácido débil que está disociado al 0,35%.
neutralizarse mutuamente, constituyendo
una sal interna formada por un ión híbrido Existe un pH para el cual la carga eléctrica
(carga positiva y carga negativa), que se media de las moléculas es cero. Este pH se
llama zwitterión. llama punto isoeléctrico (pI). La pI es el pH
en el que la molécula se disocia por igual en
Si consideramos un AA sencillo, éste
ambos sentidos, y como equidista de los dos
puede adoptar tres formas iónicas
valores de pK, puede obtenerse por su
diferentes:
semisuma:
El primer grupo que se disocia es el
carboxilo (pK1 = 2,22). Por la proximidad
del grupo NH +, el COOH se comporta
como un ácido moderadamente fuerte. Si
aplicamos la ecuación de Henderson-
Hasselbalch al primer equilibrio de
el AA contiene otros grupos ácidos o comportamiento de los aminoácidos y
básicos, el poder amortiguador gana proteínas en solución. Así, la presencia de
posibilidades. Así, el ácido glutámico tiene grupos ionizables en estas moléculas tiene
tres grupos disociables, cuyos pKa son: importantes consecuencias sobre la
pK1=2,1; pK2=3,9 y pK3=9,8: solubilidad.

La forma I (totalmente protonada) tiene una Los aminoácidos y las proteínas son menos
carga neta positiva. La forma II tiene carga solubles en su punto isoeléctrico si las
neutra (una positiva y una negativa), la demás condiciones permanecen iguales.
forma III tiene una carga negativa y la Esto se debe a que los iones dipolares no
forma IV tiene dos cargas negativas. presentan carga neta y cristalizan en forma
de sales insolubles a ese pH.
El punto isoeléctrico del ácido glutámico
será aproximadamente 3,0 (la semisuma de
pK1 y pK2, los pK que flanquean a la forma
zwitterión). La proporción de moléculas en
la forma IV (2 cargas negativas) es tan
pequeña que puede considerarse como
despreciable a la hora de calcular la pI.

Los puntos isoeléctricos proporcionan

información útil para razonar sobre el Figura.1. Punto isoeléctrico (pI) de un aminoácido
 Cuadro 1. Valores de los pka de los MATERIALES
aminoácidos.
NaOH 0.2 M, Prolina (pura) (0.5%), lisina
Aminoácido Abrev Letra α α NH + 3 RH o RH+ (0.5%), triptófano(pura), ácido aspártico
COOH
pKa1 pKa2 pKa3 (0.5%), acido glutámico(pura), HCI (0.1 M.
Glicina Gly G 2,34 9.60 0.2 M), leche. pH-metro OAKLON, pH 700.
Alanita Ala A 2,34 9.69
• Probetas 50 mL,
Valina Val V 2,32 9,62
• Vasos químicos de 100 mL
Leucina Leu L 2,36 9,68

Isoleucina Ile I 2,36 9,68 • volumétrico de 50 mL,

Serina Ser S 2,21 9,15
• tubos de ensayo 25 mL
Treonina Thr T 2,63 10,4
3 • gradilla policial
Metionina Met M 2,28 9,21
• espátula.
Fenilalanina Phe F 1,83 9,13

Triptófano Trp W 2,38 9,39 MÉTODOS O TÉCNICA

Aspargina Asn N 2,02 8,80 OPERATORIA

Glutamina Gln Q 2,17 9,13
Aminoácido
Prolina Pro P 1,99 10,6
0 1. Prepare las soluciones de aminoácido
Ácido Asp D 2,09 9,82 3,86 *
aspáratico (ácido glutámico y glicina) 0,5% en
Acido glutámico Glu E 2,19 9,67 4,25 * HCl 0,1 M.
Histidina His H 1,82 9,17 6,0 * 2. Coloque una alícuota de 25 mL del
Cisteína Cysh C 1,71 10,7 8,33 * aminoácido en un Erlenmeyer de 250
8
Tirosina Tyr Y 2,20 10,0 9,11 * mL y lea su pH.
7
3. Titule con NaOH 0,2 M adicionando
Lisina Lys K 2,18 8,95 10,53
de 1,0 mL y anote el pH de cada
Arginina Arg R 2,17 9,04 12,48
adición. Continúe hasta alcanzar un
pH de 10. Reporte los valores de pka
Para estos aminoácidos la ionización del y calcule el punto isoeléctrico pI.
grupo R ocurre antes que la ionización que
la α NH+3 4. Grafique los resultados pH versus
Fuente: Bohinski, 1987. meq de NaoH.
 Grafique los resultados pH

Glicina
mL de NaOH pH
1mL 2.2
1mL 2.7
1mL 7.9
1mL 8.5
1mL 8.9
2. El punto isoeléctrico (pI) de la fenilalanina es 1.83.
1mL 9.2 El pI es el pH al que un aminoácido no tiene carga neta,
1mL 9.3 es decir, la cantidad de carga positiva es igual a la
1mL 9.8 cantidad de carga negativa. En este punto, todos los
1mL 10.2 grupos del aminoácido están ionizad.

Acido aspártico
mL de pH
NaOH
0 2.1
1 2.4
2 2.8
3 3.2
4 3.6
5 4
1. Grafica del PI. El punto isoeléctrico (pI) de la glicina 6 4.5
es 5,97. El pI es el pH en el que una molécula tiene una 7 5.1
carga neta cero, es decir, En el caso de la glicina, la zona 8 9.7
isoeléctrica se extiende desde aproximadamente un pH 9 10.3
4,5 hasta un pH 7,5.
Fenilalanina
mL de NaOH pH
1mL 1.8
1mL 2.1
1mL 3.2
1mL 7.7
1mL 8.3
1mL 8.6
1mL 8.7
1mL 9 Grafica 3. Acido aspártico. Podemos observar que los pKa que
1mL 9.3 corresponden a las liberaciones de H+ por los dos grupos –COOH,
que representan los pK1 y pK2, varían con los valores esperados.
1mL 9.7
Este hecho guarda mucha relación con el cuidado a la hora de
1mL 10.5 realizar la prueba, donde se debe considerar que esté aminoácido
posee un punto isoeléctrico más bajo y tres pKa distintos, por lo
cual los cambios de pH entre los Pka se tornaban menos
perceptibles.
 Cisteína
mL de NaOH pH
0 1.7
1 2.1
2 2.7
3 8.8
4 9.4
5 9.6 Grafica 5. Prolina. El punto isoeléctrico (pI) del

6 10 aminoácido prolina es 6,3. El pI es el pH en el que una

molécula tiene carga neta cero, es decir, la suma de todas las
cargas positivas iguala a la de las negativas. el PI subió
drásticamente debido a que puede ser una confusión con el
hecho de que la carga neta de la prolina cambia drásticamente
al agregar NaOH, llevándola a una forma aniónica a pH altos.
El punto isoeléctrico en sí es una propiedad intrínseca del
aminoácido y no cambia con la adición de bases o ácidos; lo
que cambia es el estado de protonación a diferentes pH.

Grafica 4. Cisteína. En el pH isoeléctrico, la fuerza Prolina

repulsiva que normalmente previene que las moléculas ml de NaOH pH
de proteína se unan es mínima como un resultado de no
haber una carga neta en la molécula de proteína y por 0 2.4
1 2.3
ello se impulsa la máxima precipitación.
2 3.7
3 10
REALIMENTACIÓN

• pI (punto isoeléctrico): 6.06

1. Calcule la pI de los aminoácidos
utilizados en el laboratorio.
Estructura: NH2-CH2-COOH
➢ Glicina

PI: 2.34+9.60/2

PI: 5.97

➢ Cisteína

PI=1,71+10,78/2

PI=6.24

➢ Lisina

PI=2,18+8.95/2
2) Ácido aspártico (Asp):
PI:5.56
• pKa del grupo carboxilo (COOH):
➢ Prolina 1.88
• pKa del grupo amino (NH2): 9.60
PI=1,99+10.60/2 • pKa del grupo R (cadena lateral):
3.65
PI=6.29 •
• pI (punto isoeléctrico): 2.77
➢ Ácido aspártico
Estructura: NH2-CH(COOH)-CH2-COOH
PI=2,09+9,82/2

PI=5.95

2. Haga las estructuras de

disociación de tres aminoácidos
indicando el pka y el pI.

1) Glicina (Gly):

• pKa del grupo carboxilo (COOH):

2.34
• pKa del grupo amino (NH2): 9.60
 3) Lisina (Lys): forma de sales insolubles a ese pH.

• pKa del grupo amino (NH2): 10.53 4. Investigue el rango de pH de los 20

• pKa del grupo R (cadena lateral): aminoácidos naturales.
2.18
• = El punto isoeléctrico (pI) de un
• pI (punto isoeléctrico): 9.74 aminoácido es el valor de pH en el que la
• Estructura: NH2-CH2-CH2-CH2-
CH2-NH2 carga neta del aminoácido es cero. Para la
mayoría de los aminoácidos, el pI se
encuentra entre 6,04 y 9,17.

1. Alanina: 6.0 pH
2. Arginina: 10.76 pH
3. Asparagina: 5.41 pH
4. Ácido aspártico: 2.77 pH
5. Cisteína: 5.07
6. Ácido glutámico: 3.22 pH
7. Glutamina: 5.65 pH
8. Glicina: 5.97 pH
9. Histidina: 7.59 pH
10. Isoleucina: 6.02 pH
11. Leucina: 5.98 pH
12. Lisina: 9.74 pH
13. Metionina: 5.74 pH
14. Fenilalanina: 5.48 pH
15. Prolina: 6.30 pH
3. Por qué las moléculas con 16. Serina: 5.68 pH
grupos ionizables en los 17. Treonina: 5.60 pH
aminoácidos se hacen menos 18. Triptófano: 5.89 pH
solubles en el punto isoeléctrico. 19. Tirosina: 5.66 pH
20. Valina: 5.96 pH
= Esto se debe a que los iones dipolares
no presentan carga neta y cristali-zan en
RESULTADOS Y DISCUSIÓN tiene un pKa (nombrado en los gráficos
como pK1) de 2,35 (recordemos que pH y
Punto isoeléctrico en aminoácidos.
pKa son simplemente notaciones
En el laboratorio realizamos diferentes convenientes en para concentración de
pruebas con Glicina, Prolina, Acido protones y una constante del equilibrio de
aspártico, Cisteína, donde evaluamos el pH ionización, respectivamente. El pH en el
hasta llegar a pH de 10 en todos los punto medio de este estado es 9,78; que
aminoácidos de 1 mL en 1mL. equivale al pKa del grupo -NH3 + (llamado
Denominamos punto isoeléctrico (pI) de un pK2).
aminoácido al pH al cual no tiene carga neta.
La titulación se completa esencialmente a
En otras palabras, es el pH al cual la
un pH cercano a 12, donde la forma
cantidad de carga positiva de un aminoácido
predominante de glicina es H2N-CH2-
es exactamente igual a la cantidad de carga
COO-. En consecuencia, tendremos. Un
negativa.
punto Isoeléctrico de 6,06.
Pues el punto isoeléctrico es importante ya
En la primera parte de esta experiencia, se
que la extracción de proteína a partir de
requería conocer el punto isoeléctrico de la
residuos agroindustriales surge como una
Glicina a través de su titulación con NaOH,
alternativa de aprovechamiento y desarrollo
en resultado tenemos el Grafico 1, que
de nuevos productos. Para esto, es
muestra el avance del pH al ir añadiendo
fundamental conocer su punto isoeléctrico,
equivalentes de OH- al aminoácido.
pH en el cual la proteína presenta su
Además, se observan los pK1 y pK2,
mínima solubilidad y por tanto precipita.
necesarios en el cálculo del punto
(Angélica M. Serpa Guerra1, 2014)
isoeléctrico.
Iniciamos midiendo el aminoácido con el
Potenciómetro y luego se tituló con la
bureta hidróxido de sodio adicionando 1 ml
hasta alcanzar el pH-.

Glicina: Para la glicina el pH en el punto

medio es de 2,34; por lo tanto, el grupo -
COOH Gráfico 1. Titulación de Glicina 0,5% con

NaOH 0,2M.
El pH en el punto medio de este estado es El ácido glutámico posee tres valores de
9,78; que equivale al pKa del grupo -NH3 + pKa (2,1; 4,1; 9,5), los cuales corresponden
(llamado pK2). La titulación se completa al ácido carboxílico, el ácido carboxílico de
esencialmente a un pH cercano a 12, donde la cadena lateral y el grupo amino,
la forma predominante de glicina es H2N- respectivamente. El punto isoeléctrico del
CH2-COO-. En consecuencia, tendremos ácido glutámico es el promedio de los
Un punto Isoeléctrico de 6,06. valores del pKa de los dos grupos -COOH;
el punto isoeléctrico se da a pH 3,1.
Prolina: Su función es la producción de
colágeno, por lo que es fundamental para el Cisteína: En este pH, las moléculas de
sistema osteo-articular. (EQUISALUD, s.f.) proteína existen como zwitterion.

Cuando se añade NaOH (hidróxido de sodio) En el punto isoeléctrico, la precipitación de

a una solución de prolina, el NaOH actúa proteínas es máximo, en otras palabras, la
como una base fuerte y aumenta la solubilidad de las proteínas es mínima. En
concentración de iones hidróxido (OH-) en el pH isoeléctrico, la fuerza repulsiva que
la solución. Los iones hidróxido pueden normalmente previene que las moléculas de
reaccionar con el grupo amino de la prolina, proteína se unan es mínima como un
neutralizando su carga positiva. resultado de no haber una carga neta en la
molécula de proteína y por ello se impulsa
La concentración de iones hidróxido
la máxima precipitación. La caseína podría
aumenta, lo que conduce a una mayor
ser separada de la leche simplemente al
neutralización de la carga positiva de la
ajustar el pH de la Leche al del punto
prolina. Esto hace que el punto isoeléctrico
Isoeléctrico de la caseína, un pH de 4.6
de la prolina suba drásticamente.

Acido aspártico: Los aminoácidos acídicos

(ejemplo: ácido aspártico y el ácido
glutámico) tienen puntos isoeléctricos más
bajos, mientras que los aminoácidos básicos
(ejemplo: lisina, arginina) tienen puntos
isoeléctricos más altos.

PUNTO ISOELÉCTRICO
CONCLUSIÓN REFERENCIA

El pKa representa la fuerza que tienen las Bohinski, R. 1987. Bioquímica. Segunda
moléculas de disociarse, un ácido será más Edición. Addison-Wesley Iberoamericana.
fuerte cuanto menor es su pKa y en una México. 620 p.
base ocurre al revés, siendo más fuerte
Guyton, A.C. & Hall, J.E. (2016) "tratado
cuanto mayor es su pKa. Las curvas de
de fisiología médica". 13ª Edición.
titulación nos permitieron determinar el pKa,
Interamericana McGraw-Hill. Madrid.
y por medio de este, el punto isoeléctrico
del aminoácido de la glicina y ácido http://www.ehu.eus/biomoleculas/

glutámico. El conocer el comportamiento buffers/buffer3.html

ácido-base de los aminoácidos es de vital Malaga, C. 2013. Punto isoeléctrico de los

importancia para realizar este aminoácidos naturales https://
procedimiento. www.saberespractico.com/bioquimica/punto

Los aminoácidos por tener al menos un -isoelectrico-de-los-aminoacidos-naturales/

grupo ácido y un grupo amino pueden Society, A. C. (2005). Química. España:

considerado como anfolitos, es decir, Reverté
sustancias que pueden comportarse como
Timberlake, K. (2013). Química general,
ácidos o como bases.
orgánica y biológica: estructuras de la vida.
Las curvas de titulación son útiles para el México: Pearson Educación.
análisis de la capacidad amortiguadora de
Yurkanis Bruice, P. (2008). Química
los aminoácidos, por lo que deben realizarse
orgánica. México: Pearson Educación.
de manera correcta.

La curva de titulación son componentes

importantes en el punto isoeléctrico, se debe
manejar correctamente estos análisis.

Las anfótera permítete que lo aminoácidos

sean capaces de ionizarse, dependiendo del
pH, y su base conjugada.
 ANEXOS

Glicina, aminoácido utilizado para Tarar el vaso química y pesar

determinar el pl. 0.12g de Glicina

Titulación con NaOH Midiendo el PH de la glicina.