Mecanismos de Transducción Del Lipopolisacárido: Trabajos Originales Original Works

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MECANISMOS DE TRANSDUCCIÓN DEL LIPOPOLISACÁRIDO 121


TRABAJOS ORIGINALES
ORIGINAL WORKS

Mecanismos de transducción del


lipopolisacárido
Mechanisms of transduction of lipopolysaccharide

BERMEJO A. Y DUARTE J.

Departamento de Farmacología. Facultad de Farmacia.


Campus de Cartuja. 18071. Universidad de Granada. España.
E-mail: almus@airtel.net

RESUMEN

El lipopolisacárido, componente de la pared de las bacterias Gram negativas, es el principal agente causante del
shock séptico. Una vez en el torrente sanguíneo, el lipopolisacárido activa los sistemas de contacto y estimula
diferentes tipos celulares mediante moléculas de reconocimiento como el CD14 y los recientemente conocidos recep-
tores TLR, disparando diversas vías de transducción que interaccionan entre sí. Dentro de éstas destacan la vía de
las MAP kinasas y la cascada de los TLR, que a su vez actúan sobre factores de transcripción. Uno de los principales
κB, con un papel fundamental en la inducción de enzimas implicadas en la producción
factores nucleares es el NF-κ
de citokinas y autacoides, tales como la óxido nítrico sintasa o la ciclooxigenasa inducibles. El aumento en la
producción de óxido nítrico, tromboxanos, prostaglandinas y otros agentes vasoactivos derivados de las enzimas
sintetizadas da lugar a las graves alteraciones cardiovasculares características del shock séptico.
PALABRAS CLAVE: Shock séptico. Lipopolisacárido. CD14. TLR. MAP kinasas. Tyrosinkinasas. NF-κB.

ABSTRACT

The lipopolysaccharide, a component of the Gram negative bacteria wall, is the principal agent causing septic shock.
Once in the blood stream, the lipopolysaccharide activates contact systems and stimulates different types of cell through
recognition molecules, such as CD14 and the recently described TLR receptors, triggering diverse interacting transduction
pathways. The MAP kinase pathway and the TLR cascade are highlighted as prevalent factors, which in turn, act upon
transcription factors. One of the main nuclear factors is NF-κB, which has a fundamental role in the induction of
enzymes involved in the production of cytokins and autacoids, such as inducible nitric oxide synthase or inducible
cyclooxygenase. The increase in production of nitric oxide, tromboxanes, prostaglandins and other vasoactive agents,
derived from the synthesised enzymes, gives rise to serious cardiovascular disorders characteristic of septic shock.
KEY WORDS: Septic shock. Lipopolysaccharide. CD14. TLR. MAP kinases. Tyrosinkinases. NF-κB.

INTRODUCCIÓN INTRODUCTION

Los compuestos causantes del proceso sépti- Compounds causing septic processes may be
co pueden ser de distinto tipo (generalmente, com- of differing types (generally, components of Gram
ponentes de bacterias Gram positivas o Gram positive or Gram negative bacteria) and initially
negativas) e inicialmente disparan mecanismos trigger non-identical transduction mechanisms.
de transducción no idénticos, pero existe una gran However, a great similarity exists in the physio-
similitud en la fisiopatología y manifestaciones pathology and clinical manifestations of sepsis
clínicas de la sepsis ya que en definitiva, el huésped given that finally, the host reacts to the systema-
reacciona ante la invasión sistémica con una tic invasion with a inmunoinflamatory response

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respuesta inmunoinflamatoria que en todos los that in all cases is regulated by common media-
casos está regulada por mediadores comunes. Éstos tors. These ethiological factors give rise to an
factores etiológicos dan lugar a un síndrome de initial systematic inflammatory response syndrome
respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) inicial (SIRS) that is generally characterised by hyper-
que se caracteriza en líneas generales por hipo- tension, fever, disseminated intravascular coagu-
tensión, fiebre, coagulación intravascular dise- lation and the so called multiple organ dysfunc-
minada y el denominado síndrome de disfunción tion syndrome 1. After a series of complications
orgánica múltiple 1. Tras una serie de complica- starting from SIRS, a septic shock would occur.
ciones, a partir del SRIS desencadenaría el shock Clinically speaking, SS has a series of meta-
séptico (SS). bolic type manifestations such as fever (someti-
Clínicamente, el SS tiene una serie de mani- mes hypothermia), metabolic acidosis, and a high
festaciones de tipo metabólico como fiebre (a protein production involved at the acute stage of
veces hipotermia), acidosis metabólica, y gran inflammatory processes. It is also concurrent with
producción de proteínas que intervienen en la hormonal and glucose cycle alterations. The most
fase aguda de los procesos inflamatorios. Tam- frequent haematological alterations are granulo-
bién concurre con alteraciones hormonales y del cytopenia with leukocytosis, trombocytopenia and,
ciclo de la glucosa. Las alteraciones hematológi- as the most characteristic type, disseminated
cas más frecuentes son granulocitopenia, con intravascular coagulation. The pulmonary func-
estados de leucocitosis, trombocitopenia, y la más tion is altered and pulmonary edema, broncho-
característica es la coagulación intravascular di- constriction, tachypnea, cyanosis and hypoxia,
seminada. La función pulmonar se ve alterada y the oliguria is symptomatic of renal necrosis, and
se produce edema pulmonar, broncoconstricción, cases of gastro-intestinal affections in the form
taquipnea, cianosis e hipoxia; la oliguria es sín- of diarrhoea may arise. The nervous system is
toma de necrosis renal, y puede haber casos de altered giving rise to lethargy and confusion.
afecciones gastrointestinales en forma de diarreas. Dermatological manifestations such as petechias
El sistema nervioso se ve alterado dando lugar a and vasculitis have also been known to exist1-4 .
letargia y confusión. También existen algunas Cardiovascular disorders are attributed to a
manifestaciones dermatológicas como petequias complicated process caused by the interaction of
y vasculitis 1-4. all of these mediators with elements of the vas-
Las alteraciones cardiovasculares se deben a cular wall and the different components of the
un complicado proceso debido a la interacción blood stream. The characteristic hyper-response
de todos estos mediadores con los elementos de to vasoactive agents has been widely studied as
la pared vascular y los distintos componentes de much in vivo as in vitro. Throughout such a process
la sangre. La característica hiporrespuesta a agentes two states have been differentiated:
vasoactivos ha sido muy estudiada tanto in vivo
como in vitro. En dicho proceso se distinguen 1-. Initially a hyperdynamic exists: In seve-
dos estadíos: re sepsis, vascular resistance decreases (influen-
ced to begin with by the liberation of bradidinin
1-. Inicialmente hay una fase hiperdinámica: and histamine) and cardiac output increases, al-
en la sepsis severa la resistencia vascular decre- though in spite of this, tissue perfusion decrea-
ce (mediada al principio por la liberación de ses and consequently oxygen consumption. The
bradikinina e histamina) y el gasto cardíaco au- formation of diffuse intravascular fibrin and the
menta, aunque a pesar de ello la perfusión tisu- addition of thrombocytes and blood platelets alters
lar disminuye y por lo tanto el consumo de oxí- the flow of blood, forming microthromocytes.
geno. La formación de fibrina intravascular difusa The migration of such, through the vascular
y la agregación de plaquetas y neutrófilos altera endothelium, frees the numerous mediators that
el flujo sanguíneo formando microtrombos; la act, promoting filtration and favouring edema
migración de éstos a través del endotelio vascu- in tissues. Furthermore, the activation of nume-
lar hace que se liberen numerosos mediadores rous cells liberates vasoactive agents in such a
que actúan promoviendo la filtración y favore- way, that in some areas of the vascular bed, dilation
ciendo el edema en los tejidos. Además, la acti- occurs, whilst in others constriction. The endo-
vación de numerosas células libera agentes va- thelial damage may also contribute to tissue is-

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soactivos de modo que en algunas zonas del le- chemia. On the other hand, tachycardia may exist
cho vascular hay dilatación, y en otras constric- and at this stage the arterial pressure may be
ción. El daño endotelial también puede contri- normal or slightly reduced 5.
buir a la isquemia tisular. Por otra parte, existe
taquicardia y en esta fase la presión arterial puede 2-. The second stage, also known as hypoten-
normal o ligeramente reducida 5. se or hypodynamic, is characterised by a mar-
ked decrease in systemic vascular resistance and
2-. La segunda fase, llamada también hipo- myocardial depression, decreased volume of ejec-
tensa o hipodinámica, se caracteriza por un gran tion, and left ventricular dilation.
descenso de la resistencia vascular sistémica y Arteriolar dilation and an increase in capilla-
depresión miocárdica, disminuye el volumen de ry permeability favours hypovolemia which de-
eyección y se dilata el ventrículo izquierdo. La creases venous return, and therefore, pressure and
dilatación arteriolar y el incremento de la per- cardiac output 3-5.
meabilidad capilar favorece la hipovolemia que
disminuye el retorno venoso, y por tanto, la pre-
sión y el gasto cardíaco 3-5. STRUCTURE

Since the role of LPS was confirmed as being


ESTRUCTURA the main cause of shock induced by Gram nega-
tive bacteria 3,4,6 , many studies have been carried
Desde que se confirmó el papel del LPS como out in an attempt to establish what the transduc-
causa principal del shock inducido por bacterias tion mechanisms generated in the organisms res-
Gram negativas 3,4,6, muchos han sido los estu- ponse are. This endotoxin consists of a phospho-
dios que se han realizado para intentar estable- glycolipid fixed to the bacterial membrane (lipid
cer los mecanismos de transducción generados A) covalently bonded to a hydrophilic heteropo-
en la respuesta del organismo. Esta endotoxina lysaccharide 7, conferring the molecule with its
consiste en un fosfoglicolípido anclado a la biological activity 6,8 . The heteropolysaccharide
membrana bacteriana (lípido A) unido covalen- is comprised of two regions: The O-specific chain
temente a un heteropolisacárido hidrofílico 7, que also known as O-antigen, made up of repetitive
es la que confiere actividad biológica a la molé- units of oligosaccaride, and the core. This in turn
cula 6,8. El heteropolisacárido comprende dos is subdivided into the external core (made up of
regiones: la cadena O-específica también llama- hexoses), through which the O-antigen and the
da antígeno O, formada por unidades repetitivas internal core (made up of heptoses) are linked.
de oligosacárido; y el core. Éste a su vez se The A lipid is joined to this parcel by means of
subdivide en core externo (formado por hexo- a residue known as KDO (2-keto-3-deoxyocta-
sas), mediante el cual se une al antígeno O; y el noic acid). The variability of LPS plays an im-
core interno (formado por heptosas). El lípido A portant role with regard to immunological capa-
se une a esta porción mediante un residuo llama- city and is dependant upon the region that is
do KDO (ácido 2-keto-3-deoxioctanoico). La being taken into consideration, as indicated in
variabilidad del LPS juega un papel importante Figure 1 7,8 .
en cuanto a la capacidad inmunológica y depen-
de de la región que estemos considerando, como
se indica en la figura 1 7,8 .

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CO 2 -
Kdo -
P
P CO 2 -
Hep - Kdo GlcN
P
CO 2 -

Hep Hep Kdo


GlcN
-
n
P -
P

Cadena o-específica Core externo Core interno Lípido A

Variabilidad alta intermedia baja muy baja

FIGURA 1. Estructura y variabilidad del LPS.

CO 2 -
Kdo -
P
P CO 2 -
Hep - Kdo GlcN
P
CO 2 -
Hep Hep Kdo
GlcN
-
n
P
P
-

o-específica chain External Core Internal Core Lipid A

High variability Intermediate Low Very low

FIGURE 1. Structure and variability of LPS.

MECANISMOS DE TRANSDUCCIÓN TRANSDUCTION MECHANISMS

Interacciones del lipopolisacárido en el torrente Lipopolysaccharide interactions in the blood


sanguíneo stream

Según se esquematiza en la figura 2, cuando As outlined in Figure 2, when LPS enters into
el LPS llega a la sangre formando parte de las the blood forming part of the bacteria or in a
bacterias o en forma libre (por ejemplo, proce- free form (for example, from the lysis of micro-
dente de la lisis de microorganismos por los organisms through antibiotics) 9, it interacts with
antibióticos) 9, interacciona con algunas de las some of the molecules that it finds in the blood
moléculas que se encuentran en el torrente san- stream: Among these molecules, there are bacte-
guíneo. Entre estas moléculas están las proteínas ricidal proteins that increase permeability (BPI),
bactericidas que incrementan la permeabilidad cationic proteins known as CAP 18, CAP 37, &
(BPI), las proteínas catiónicas denominadas CAP P15A/P15B, high density lipoproteins (HDL), other
18, CAP 37, y P15A/P15B, las lipoproteínas de lipoproteins, and other proteins such as albumin,
alta densidad (HDL), otras lipoproteínas, y pro- haemoglobin (Hb), etc. 3,8 . In order for the hosts
teínas como la albúmina, la hemoglobina (Hb), reaction to take place the so called endotoxic
etc. 3,8. Para dar lugar a la reacción del hospeda- conformation must be adopted, which seems to
dor tiene que adoptar la llamada conformación be a monomeric form 10. One of the molecules
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endotóxica, que parece ser que es una forma to which it binds, the binding protein to LPS
monomérica 10. Una de las moléculas a las que (LBP), with somewhat less affinity than the blood
se une, la proteína de unión al LPS (LBP), con lipoproteins and BPI, forms a complex with LPS
algo menos de afinidad que las lipoproteínas by means of a bond with lipid A 11 , which seems
sanguíneas y BPI, forma un complejo con el LPS to represent the commencement of a cascade of
mediante su unión con el lípido A 11, que al parecer immune reactions. LBP may act by catalysing
es el inicio de la cascada de reacciones inmunes. the flow of the LPS aggregates to monomers and
La LBP podría actuar catalizando el paso de los transferring them to the lipoproteins 12, to the
agregados de LPS a monómeros y transfiriéndo- integrins, leukocyte β-integrin CD11c/CD18, and
los a las lipoproteínas 12, a las integrinas β-integrina preferably, to the antigen of monocytic differen-
leucocitaria CD11c/CD18, y preferentemente, al tiation CD14 6,8,13-15 . Even so, it has been disco-
antígeno de diferenciación monocítico CD14 6,8,13- vered that LPS may bind directly and/or through
15
. Aun así, se ha descubierto que el LPS puede the LPS-CD14 complex, to P and L soluble se-
unirse directamente y/o mediante el complejo lectins or fixed in the membrane of platelets and
LPS-CD14, a las selectinas P y L solubles o endothelial cells 16. This bond to various pro-
ancladas en la membrana de plaquetas y células teins of various molecular weights has also been
endoteliales 16. También se ha descrito dicha unión described, although in the majority of cases, its
a varias proteínas de diversos pesos molecula- identification and the role that they have to play
res, aunque en la mayoría de los casos, su iden- in the SS process is yet to be determined 15-17.
tificación y el papel que poseen en el proceso Among these is the family of receptors with a
del SS están aún pendientes de dilucidar 15-17. similar structure to that of the receptors of the
Entre ellas está la familia de receptores con es- immune response of Drosophila, known as Toll
tructura similar a la de los receptores de res- like receptors (TLR). This group of receptors
puesta inmune de Drosophila, llamados recepto- belongs to the great superfamily of the so called
res tipo Toll (Toll like receptors -TLR-). Este TIR (Toll/IL—1—interleukin 1-receptors), given
grupo de receptores pertenece a la gran superfa- that all have a dominion of great structural simi-
milia de los llamados TIR (receptores Toll/IL-1 larity and posses similar transduction mechanis-
-interleukina 1-), ya que todos ellos tienen un ms with common secondary mediators 18. Fina-
dominio de gran semejanza estructural y poseen lly, LPS has the capacity to interact with different
mecanismos de transducción semejantes con systems in the blood stream 3,4,19; thus activating
mediadores secundarios comunes 18. Por último, factor XII coagulation complexes -prekalikrein -
el LPS tiene la capacidad de interaccionar con kininogens of high molecular weight 20 , and con-
diversos sistemas en el torrente sanguíneo 3,4,19; sequently, the coagulation intrinsic pathway, also
así, activa los complejos del factor XII de la the extrinsic pathway, the fibrinolysis 21 and the
coagulación-prekalikreína-kininógenos de alto peso classical and alternative pathways of complement
molecular 20, por tanto, la vía intrínseca de la 22
.
coagulación, también la vía extrínseca, la fibri-
nolisis 21 y las vías clásica y alternativa del com-
plemento 22.

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FIGURA 2. Interacciones del LPS en el torrente sanguíneo y reacciones que genera. (LPS)n: Monómeros de LPS.
LBP: Proteína de unión al LPS. sCD14: CD14 soluble. HDL y LDL: Lipoproteínas de alta y baja densidad,
respectivamente. CAP: Proteínas catiónicas. Hb: Hemoglobina. C1 y C3b: Factores del complemento.

FIGURE 2. LPS interactions in the blood stream and the reactions that are generated. (LPS)n: Monomers of LPS.
LBP: Binding Protein to LPS. sCD14: soluble CD14 . HDL & LDL: High and low density Lipoproteins, respectively.
CAP: Cationic Proteins . Hb: Hemoglobin. C1 y C3b: Complement Factors.

Receptores y vías intracelulares activados por Receptors and intracellular pathways activated
el lipopolisacárido by the lipopolysaccharide

El CD14 es uno de los principales responsa- CD14 is one of the main elements responsi-
bles de la activación celular inducida la endo- ble for induced cellular activation by endotoxin.
toxina, si bien se han postulado mecanismos de Activation mechanisms that are independent of
activación independientes de dicha molécula this molecule have been considered to be invol-
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implicados en el SS mediante la integrina CD11/ ved in SS by means of the integrin CD11/18, the
18, los receptores TLR y otras moléculas 6,8,15,16 . TLR receptors and other molecules 6,8,15,16. This
Éste puede encontrarse de forma soluble en el may be found in soluble form in serum (sCD14)
suero (sCD14) (fundamentalmente liberado por (fundamentally liberated by the monocytes), or
los monocitos), o asociado a la membrana associated with the membrane (mCD14) of some
(mCD14) de algunos tipos celulares como mo- types of cells such as monocytes, macrophages
nocitos, macrófagos y leucocitos polimorfos and polymorph- nuclear leukocytes (Figure 3).
nucleares (Figura 3). La forma soluble parece The soluble form seems to facilitate transfer to
ser que facilita la transferencia a las lipoproteí- the lipoproteins 12 and although it was formerly
nas 12 y aunque antes se creía que iba asociada believed to be associated with LBP-LPS, it can
al complejo LBP-LPS, puede unirse de forma bind directly with LPS, and/or through the ca-
directa al LPS, y/o mediante el proceso catalíti- talytic process mediated by LBP 23. The com-
co mediado por la LBP 23. El complejo formado plex formed, would act upon other membrane
actuaría sobre otras moléculas de membrana en molecules in cells with a lack of CD14 on their
células carentes de CD14 en su superficie (célu- surfaces (endothelial cells, smooth muscle cells,
las endoteliales, células musculares lisas, algu- some other epithelial cells). However, LPS may
nas otras células epiteliales). Sin embargo, el LPS interact directly forming complexes with sCD14,
puede interaccionar directamente formando com- mCD14, and when in large concentrations with
plejos con el sCD14, con el mCD14, y cuando the TLR receptors 6,8,13,15,17,24. Within the last of
está en grandes concentraciones, con los recep- these, it was believed that it was TLR2 and TLR4
tores TLR 6,8,13,15,17,24. Dentro de éstos últimos, se which intervened in the response to the endo-
pensaba que eran el TLR2 y el TLR4 los que toxin 25 , but recent studies imply that only the
intervenían en la respuesta a la endotoxina 25, latter of these were involved 18,26.
pero estudios recientes implican solamente al
último de ellos 18,26.

FIGURA 3. Mecanismos de activación celular del LPS.

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FIGURE 3. Mecanisms of cellular activation of LPS.

Una vez unido al CD14, y/o a los distintos Once bound to CD14, and/or to the different
receptores, se produciría la cascada de reaccio- receptors, the cascade of intracellular reactions
nes intracelulares que daría lugar a la activación would occur, giving rise to the activation of several
de diversos tipos de células. Los mecanismos de types of cells. The transduction mechanisms of
transducción del LPS están por esclarecer y for- LPS are yet to be clarified and form a very com-
man un entramado muy complejo de reacciones plex structure of cross reactions (Figure 4). On
cruzadas (Figura 4). Por una parte, puede inter- the one hand, they may be of an internal nature
nalizarse y actuar sobre receptores citosólicos acting upon cytosolic receptors that are not yet
aún desconocidos. Por otro lado, aún se discute known. On the other, whether intermediate mo-
si se requieren moléculas intermedias en la mem- lecules in the membrane are required, in order to
brana para el inicio de las señales 6,15,17. initiate the signals 6,15,17 , is still a matter under
discussion.

Figura 4. Receptores y proteínas celulares implicados en los mecanismos de transducción del LPS. S-P y L: Selectinas
P y L. SM: Esfingomielasa. CAK: Kinasa activada por ceramida. PK y PPT: Proteinkinasas y proteinfosfatasas.
SrcK: Kinasas Src. pG: Proteínas G. ppG: Pequeñas proteínas G. PLA2 y PLC: Fosfolipasas A2 y C. DAG:
Diacilglicerol. IP3 : Inositol 3,4,5-trifosfato. PKC: Proteinkinasa C. JAK-2: Janus kinasa-2.

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MECANISMOS DE TRANSDUCCIÓN DEL LIPOPOLISACÁRIDO 129

Figure 4. Receptors and cellular proteins involved in the transduction mecanisms of LPS. S-P & L: Selectins P & L.
SM: Sphingomielase. CAK: Kinase activated by ceramide. PK y PPT: Proteinkinases y proteinphosphatases. SrcK:
Src Kinases. pG: G Proteins. ppG: Small G proteins. PLA2 & PLC: Phospholipases A2 & C. DAG: Diacilglycerol.
IP3: Inositol 3,4,5-triphosphate. PKC: Proteinkinase C. JAK-2: Janus kinase-2.

En diversos estudios in vitro con monocitos, Differing in vitro studies with monocytes,
macrófagos y fibroblastos se han implicado pro- macrophages and fibroblasts point to the invol-
teínas G (pG) y pequeñas proteínas G (ppG) que vement of proteins G (pG) and small proteins G
pueden participar en la activación de tirosinki- (ppG) that may participate in the activation of
nasas (TK) 6,27 , la fosfolipasa C (PLC) y A2 (PLA2) tyrosinkinases (TK) 6,27 , the phospholipase C
28-30
, así como la calmodulina 31,32 . También se ha (PLC) and A 2 (PLA2) 28-30, as well as calmodulin
31,32
atribuido el papel de segundo mensajero a la . Additionally, the role of a second messen-
esfingomielasa (SM), que hidrolizaría la esfin- ger has been attributed to sphingomielase (SM).
gomielina en ceramida, la cual activaría diferen- This would hydrolyse the sphingomielin in cera-
tes proteinfosfatasas (PPT) y proteinkinasas (PK), mide, which in turn would activate different protein
como la PK activada por ceramida (CAK) 33, que phosphatase (PPT) and proteinkinase (PK), as
podrían intervenir en la señal del LPS activando PK activated by ceramide (CAK) 33, which could
o inhibiendo diversas enzimas como la PK C be involved in the LPS signal, either by activa-
(PKC), las fosfolipasas PLC y PLA 2, y la ci- ting or inhibiting differing enzymes such as PK
clooxigenasa inducible (COX-2) 34,35 . Sin embar- C (PKC), the phospholipase PLC and PLA 2, and
go, la vía que más importancia parece tener es la the inducible cyclooxigenase (COX-2) 34,35 .
formada por las PK, en la cual están implicadas However, the most significant pathway seems to
varios grupos: Las serin-treonin PK A (PKA) y be that formed by the PK, in which several groups
C 36,37 y un gran conjunto de TK 38. Dentro de are involved: Serine-threonine PK A (PKA) y C
éstas están las Src kinasas (SrcK): ésta familia 36,37
and the large group of TK 38. Forming part
de kinasas (familia de TK del sarcomavirus) parece of these are the Src kinase (SrcK): This family
ser que participa en las señales de transducción of kinases (family of TK of sarcoma virus) ap-
mediadas por el CD14 desde la membrana hacia pears to participate in transduction signals me-
el citoplasma, aunque el papel que desempeñan diated by CD14 from the membrane to the cyto-
no se ha esclarecido aún. También se ha descrito plasm, although the role that they play is yet to
que pueden ser activadas por la vía de la cerami- be determined. The possibility that they may be
da 39. Además, se ha hipotetizado según diversos activated by the ceramide pathway has also been
estudios in vitro, que pueden actuar sobre ppG described 39. Furthermore, according to several
de la familia Ras, por lo que podrían actuar en in vitro studies, it has been hypothesised they

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las vías de activación de éstas. Sin embargo, otros may act upon the ppG of the Ras family, which
estudios eliminan esta posibilidad, por lo que may act on their activation pathways. However,
aún existe controversia sobre su actuación en los other studies have eliminated this possibility.
eventos generados por el LPS 40-43. También las Consequently, controversy about their involve-
TK janus kinasas (JAK) participan en la activa- ment in the events generated by LPS still exists
40-43
ción celular inducida por el LPS, dentro de esta . TK janus kinases (JAK) also participate in
familia parece que la proteína implicada, JAK-2, LPS induced cellular activation. Within this fa-
fosforila al factor de transcripción STAT-1α (pro- mily, the protein involved, JAK-2, seems to
teína transductora de señal y activadora de la phosphorilize the transcription factor STAT-1α
transcripción), el cual actuaría sobre diversos genes (signal transductor protein and activator of the
44,45
. transcription), which would act upon differing
El conjunto de las llamadas PK activadas por genes 44,45.
mitógenos, MAP kinasas (MAPK) también par- The so called group of PK activated by the
ticipan en gran medida en las señales intracelu- mitogens, MAP kinases (MAPK) also participa-
lares del LPS. Esta gran familia consta de PK te to a large degree on the intracellular signals
que fosforilan restos de serina-treonina y of LPS. This large family consists of PK that
tirosina-treonina. Según diferentes estudios in vitro phophorilises remains of serine-threonine and
realizados en macrófagos, otros leucocitos, célu- tyrosine-threonine. According to different in vi-
las endoteliales, células musculares lisas y otros tro studies carried out on macrophages, other
tipos celulares 42,46-49 , existen al menos cuatro leukocytes, endothelial cells, smooth muscular
subgrupos de MAPK, de los cuales se ha descri- cells and other types of cells 42,46-49, at least four
to que tres están relacionados con las respuestas subgroups of MAPK exist, of which three have
inducidas por el LPS. been described as being related to reponses in-
El descubrimiento de la activación de la pri- duced by LPS.
mera familia de MAPK por el LPS, las kinasas The discovery of the activation of the first
reguladas por señales extracelulares (ERK) , se family of MAPK by LPS, the kinases regulated
llevó a cabo por Weinstein et al. 50. Más tarde by extracellular signals (ERK), was made by
identificaron la existencia de dos proteínas, la Weinstein et al. 50. Subsequently, the existence
ERK1 y la ERK2 51. Al parecer, la secuencia of two proteins, ERK1 and ERK2 was identified
51
comienza mediante el efector Ras en la membra- . Seemingly, the sequence commences through
na, que interactúa con la molécula Raf-1 52, di- the Ras effector in the membrane which inte-
cha molécula es fosforilada por una kinasa y así racts with the Raf-1 molecule52. This molecule
activada, puede fosforilar a la kinasa-1 de la is phosphorilised by a by a kinase and thus ac-
MAPK, llamada también MEK (MKK-1 o tivated, possibly phosphorilising the kinase-1 of
MEK-1), que a su vez fosforila las ERK 53 . Los MAPK, also known as MEK (MKK-1 or MEK-1),
sustratos de estas últimas pueden ser los factores which in turn phosphorilises the ERK 53. The
de transcripción ELK-1 y c-Myc entre otros, sustrates of the latter of these may, among others,
proteínas citoplasmáticas como la fosfolipasa A2 represent the transcription factors ELK-1 and c-
citosólica (PLA2C), y diferentes PK, como se Myc, cytoplasmatic proteins, such as phospholi-
esquematiza en la figura 5. La fosforilación de pase A2 cytosolic (PLA2C), and different PK, as
la PLA2c daría lugar a la producción de ácido outlined in Figure 5. The phosphorilisation of
araquidónico, con la consecuente activación de PLA2c would give rise to the production of ara-
las formas no clásicas de PKC y la producción chidonic acid, with the consequent activation of
de eicosanoides 42. Las otras vías relacionadas the non-classical forms of PKC and the produc-
con las MAPK incluyen el conjunto proteínas tion of eicosanoids42. The other pathways asso-
que forman la subfamilia de PK del factor de ciated with MAPK include the group of proteins
transcripción c-Jun, llamadas JNK (Figura 5). that make up the PK subfamily of transcription
Aunque aún permanecen sin conocerse los pri- factor c-Jun, known as JNK (Figure 5). Although
meros iniciadores de esta vía, y algunos elemen- the first initiators of this pathway and some in-
tos intermedios, están implicadas ppG de la fa- termediary elements are still unknown, ppG of
milia de las Rho GTPasas, Rac y Cdc42, las cuales the Rho GTpases family, Rac and Cdc42 are
son más potentes activadoras de las JNK que las involved. These are more powerful activators of

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MECHANISMS OF TRANSDUCTION OF LIPOPOLYSACCHARIDE 131

proteínas Ras, pero pueden actuar de forma si- the JNK than the Ras proteins, but may act sy-
nérgica con ésta 54. Una vez activadas, Rac y/o nergically with them 54. Once activated, Rac and/
Cdc42 se unen y activan la kinasa PAK1 54, se or Cdc42 bind together and activate the kinase
activa la MEKK-1 (implicada en la activación PAK1 54, MEKK-1 is then activated (involved in
de NF-κB) y se suceden fosforilaciones sucesi- the activation of NF-κB) and successive phos-
vas de las MKK4/7 y JNK1/2 que están asocia- phorilisations of MKK4/7 and JNK1/2 oc-
das a la fosforilación de factores de transcrip- cur. These are associated with the phosphorili-
ción, entre ellos c-Jun, AP-1 (proteína activadora sation of transcription factors, among which -c-Jun,
1) y CREB (proteína de unión de elementos de AP-1 (activating protein 1) and CREB (binding
respuesta al adenosín monofosfato cíclico -AMPc-) protein of response elements to cyclic adenosine
42,55-58
. Las p38 MAPK forman la otra familia de monophosphate -AMPC-) 42,55-58 are to be en-
este tipo de proteínas implicadas en la activa- countered. The p38 MAPK make up the other
ción celular por LPS. El inicio de esta vía per- family of this type of protein that is involved in
manece también por determinar, algunos estu- cellular activation by LPS. The initiation of this
dios implican a ppG de la superfamilia Ras pathway has also yet to be determined. Some
comunes a la activación de las JNK, a las proteí- studies have implied ppG from the Ras superfa-
nas Rho y a las serin-treoninkinasas activadas mily common to the activation of JNK, to the
por la proteína p21 (PaKs) 18,42,59. Se sabe que proteins Rho and to the serine-threoninkinase
luego actúa la MEKK5 sobre las MKK3/6 y éstas activated by the protein p21 (PaKs) 18,42,59. MEKK5
fosforilan a las p38 55,59 , siendo la isoforma p38α is known to act subsequently upon MKK3/6 and
la más estudiada. Los sustratos de la familia de these phosphorilise p38 55,59. The isoform p38α
proteínas p38 MAPK son diversos factores de has been the most studied example. Of the sus-
transcripción, enzimas como la PLA 2c y diver- trates of the p38 MAPK protein family, diverse
sas PK, en algunos casos iguales a las activadas transcription factors are enzymes such as PLA2c,
por ERK 42 (Figura 5). Aunque estas vías de trans- diverse PK, and in some cases are the same as
ducción estén específicamente reguladas, pueden those activated by ERK 42 (Figure 5). Although
actuar de modo sinérgico además de establecer these transduction pathways are specifically re-
una red con efectores comunes y producir las gulated, they may act synergically, in addition to
mismas respuestas, como ocurre con los factores establishing a network of common effectors,
de transcripción. producing the same responses, as occurs with
other transcription factors.

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FIGURA 5. Cascadas de activación de los receptores TLR y las MAPK e interrelaciones entre ellas.

FIGURE 5. Activation cascades of receptors TLR and the MAPK and interactions between them.

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MECANISMOS DE TRANSDUCCIÓN DEL LIPOPOLISACÁRIDO 133

Otras señales de transducción recientemente Other recently studied transduction signals


estudiadas han sido las derivadas de los recepto- have been those derived from the TLR recep-
res TLR. Este tipo de receptores forma parte de tors. This type of receptor forms part of a large
una gran superfamilia en la que están incluidos superfamily in which interleukin 1 (IL-1R) re-
los receptores de interleukina 1 (IL-1R) y siguen ceptors have been included. These follow the same
el mismo patrón de activación (Figura 5). Exis- activation pattern (Figure 5). Several proteins are
ten varias proteínas implicadas en esta vía de involved in this signalling pathway after LPS
señalización tras la unión del LPS. Una de ellas binding. One of these is known as MD-2, a
es la llamada MD-2, proteína de membrana ex- membrane protein expressed in macrophages and
presada en macrófagos y otras células, que tiene other cells that have the capacity to bind to TLR
la capacidad de unirse al TLR4 60. Otra es la 460. Another is the yuxtamembranal protein known
proteína yuxtamembranal llamada moesina, aun- as moesin. However, the function of each one of
que aún no se ha determinado cuál es la función these has not been determined 61. In the cyto-
de cada una 61. En el citoplasma, se requiere la plasm, binding to the TLR of the differentiation
unión al TLR de la proteína de diferenciación protein myeloid MyD88 is required 62. This faci-
mieloide MyD88 62. Ésta facilita la unión del litates the binding of the receptor to its sustrate,
receptor a su sustrato, la kinasa asociada al IL-1R the kinase associated with IL-1R (IRAK) 63. The
(IRAK) 63. La IRAK se une a otra proteína adap- IRAK is joined to another adapting protein, the
tadora, el factor asociado al receptor del factor associated factor with the receptor of the tumour
de necrosis tumoral (TRAK-6) 64, la cual se une necrosis factor (TRAK-6) 64, which combines with
a la kinasa activada por el factor de crecimiento the kinase, activated by the transformant growth
transformante β (TAK-1) para facilitar la fosfo- factor ? (TAK-1) to facilitate the phosphorilasa-
rilación de ésta última por IRAK 65. Esta kinasa tion of the latter by IRAK 65. This intermediary
intermediaria (TAK-1) puede activar la vía de kinase (TAK-1) may activate JNK pathways.
las JNK, aunque no se ha determinado a que However, the level at which it would act has not
nivel actuaría. La proteína asociada a TAK-1 yet been determined. The protein associated with
(llamada TAB-1) podría estar implicada, junto TAK-1 (known as TAB-1) may be involved in
con ésta, en la activación de las MAPK tipo JNK conjunction with this, in the activation of MAPK
y/o p38 18. Se ha postulado también que podría type JNK and/or p38 18. It has also been postu-
interaccionar directamente con Rac 18 . Según lated that it could interact directly with Rac 18.
algunos estudios, MyD88, IRAK y TRAF-6 tam- According to some studies, MyD88, IRAK and
bién podrían activar las familias de JNK y p38 TRAF-6 may also activate JNK families and p38
18 18
. Existe la posibilidad de que Rac y MyD88 . The possibility that Rac and MyD88 may
interaccionen entre sí activando sus respectivas interact with each other, activating their respec-
cascadas. Por otra parte, se ha descrito que TRAF-6 tive cascades, also exists. On the other hand,
puede activar a Rac (aunque aún no se ha dilu- TRAF-6 as an activator of Rac has been descri-
cidado si lo haría mediante TAK-1). También bed (although whether or not this would occur
podría seguir otra secuencia de señales mediante through TAK-1 has not been clarified). Similar-
la proteína llamada ECSIT (intermediario evolu- ly, another sequence of signals, through the pro-
tivo conservado de señales en la vía Toll), que tein known as ECSIT (evolutionary conserved
conduciría a la activación de la MEKK1 18,66 . Por intermediary of signals in the Toll pathway), would
último, parece que tras el intermediario TRAF-6, lead to the activation of MEKK1 18,66. Finally, it
existe una activación de la proteína Ras, sin haberse seems that behind the intermediary TRAF-6, an
podido determinar a través de qué moléculas activation of the Ras protein occurs. The inter-
intermedias se realiza. Al parecer la activación mediate molecules through which this would take
de Ras ocurre con posterioridad a la activación place have not yet been determined. Apparently,
de TRAF-6 y se postula que ésta actúa, directa the activation of Ras is subsequent to the activa-
o indirectamente, sobre las MKK3/6 activadoras tion of TRAF-6. It has been postulated that this
de la p38 18. acts, directly or indirectly, upon MKK3/6, the
Otro tipo de actuación del LPS estudiado en activators of p38 18.
macrófagos es la ADP-ribosilación de proteínas Another type of LPS action studied in macro-
citosólicas 67. Esta modificación reversible se phages is the ADP-ribosilation of cytosolic pro-

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asocia con la activación celular, ya que constitu- teins 67 . This reversible modification is associa-
ye un modo de regular la función proteica por ted with cellular activation, given that it consti-
parte de las células. A esta ribosilación se le tutes a way of regulating proteic function by the
atribuye la activación de proteínas diferentes de cells. The activation of proteins that are diffe-
las MAPK y se le relaciona con la producción de rent from MAPK is attributed to this ribosilation
otras proteínas y ARNm de TNF-α e IL-6 68 . Por and it is related to the production of other pro-
otra parte, diferentes estudios concluyen en que teins and ARNm of TNF-α and IL-6 68. On the
la ADP-ribosilación lleva consigo la inhibición other hand, different studies conclude that ADP-
de ciertas enzimas, e implican este proceso en la ribosilation carries in itself, the inhibition of certain
depleción de ATP y la energía celular 69,70. enzymes and imply this process in the depletion
Tal como hemos descrito, el LPS activa una of ATP and cellular energy 69,70.
compleja red de proteínas citoplasmáticas que As we have described, LPS activates a com-
puede dar lugar a la formación de distintos men- plex network of cytoplasmatic proteins that may
sajeros secundarios intracelulares. Uno de ellos give rise to the formation of differing secondary
es el factor nuclear NF-κB, cuya activación pue- intracellular messengers. One of such is the nu-
de ser realizada por distintas vías (Figura 4 y 5). clear factor NF-κB, whose activation may be
Este factor de transcripción está formado por varias carried out through different pathways (Figure 4
subunidades: p50/105, p65 (Re1A), p52/100, c-Rel and 5). This transcription factor consists of se-
y Re1B, que se dimerizan para dar lugar a dis- veral sub-units: p50/105, p65 (Re1A), p52/100,
tintas isoformas inducibles por muchos factores c-Rel and Re1B, are dimerised in order to give
71
. Los diferentes modos en que este factor pue- rise to different isoforms that are inducible by
de ser activado son múltiples, entre ellos desta- many factors 71. There are many different ways
camos: that this factor may be activated, of which we
highlight the following:
1-. La vía de las MAPK. Numerosos experi-
mentos han demostrado que la MEKK1, inter- 1-. MAPK pathways. Numerous experiments
mediario en la activación de las JNK que tiene have demonstrated that MEKK1, intermediary in
semejanza estructural con la proteína inductora the activation of JNK, with a similar structure to
del factor NF-κB (NIK), es capaz de inducir el the factor inducing protein NF-κB (NIK), is ca-
NF-αB in vivo e in vitro 42,64. La proteína MEKK1 pable of inducing NF-αB in vivo and in vitro
42,64
actuaría mediante la fosforilación de residuos de . The protein MEKK1 would act through the
tirosina del complejo IKK-1/2 o IKKα/β 72,73 de phosphorilisation of residues of tyrosine from the
las kinasas del inhibidor (IκBα/β) del NF-κB 74. complex IKK-1/2 o IKKα/β 72,73 of the kinase of
Las IKK interaccionan con la proteína NIK para the inhibitor (IκBα/β) del NF-κB 74. The IKK
fosforilar a las IκB 75. Estas últimas, una vez interact with the protein NIK to phosphorilise
fosforiladas, se separan del factor nuclear y son the IκB 75. The latter of these, once phosphori-
degradadas, permitiendo la translocación del lised, separate from the nuclear factor and are
NF-κB al núcleo 56,74 . Sin embargo, no sólo la degraded, allowing the translocation of NF-κB
familia JNK conduce a la activación de este fac- at the nucleus 56,74. However, it is not only the
tor de transcripción, ya que existe interrelación JNK family that leads to the activation of this
entre las distintas cascadas de la familia MAPK transcription factor, given that an interrelations-
para la activación del NF-αB 42. hip already exists between the different cascades
2-. La señalización a través de los receptores of the MAPK family, in order to activate NF-αB
42
TLR también puede conducir a la activación del .
NF-κB. Otro posible sustrato de la TAK-1, cuya 2-. Signalling through the TLR receptors may
activación aún se discute, podría ser la kinasa also lead to the activation of NF-κB. Another
inductora del NF-αB (NIK) 26,64. possible sustrate of TAK-1, whose activation is
3-. También se ha estudiado la capacidad de still a matter of debate, may be the inductor kinase
la PKC y otras kinasas como la PKA, la PKG of NF-αB (NIK) 26,64.
(PK GMPcíclico-dependiente), distintas MAPK 3-. The capacity of PKC and other kinases
específicas, o la PK dependiente de calmoduli- such as PKA, PKG (PK GMPcyclic-dependant),
na, de fosforilar el IκB in vitro, aunque la inhi- different specific MAPK, or calmodulin depen-

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MECHANISMS OF TRANSDUCTION OF LIPOPOLYSACCHARIDE 135

bición especifica de estas kinasas no previene la dant PK to phosphorilise IκB in vitro have also
activación del NF-αB en respuesta al LPS 76. been studied. However, the specific inhibition
4-. Se ha descrito que la proteína Rac una vez of these kinases does not prevent the activation
activada, también puede actuar directamente so- of NF-αB in response to LPS 76.
bre la subunidad p65 del NF-κB y colaborar con 4-. Once activated the protein Rac has also
otras vías en su activación 77. been described as having the ability to act direc-
5-. Por último, hay experimentos que demues- tly upon the sub-unit p65 of NF-κB and to colla-
tran la activación de las cascadas ERK y JNK borate with other pathways in its activation 77.
por la CAK de la vía de la ceramida 78, y por lo 5-. Finally, there are experiments that have
tanto, la activación de este factor nuclear. demonstrated activation of the ERK and JNK
cascades by CAK from the ceramide pathway 78,
El NF-κB es un factor de transcripción impli- and consequently the activation of this nuclear
cado en la respuesta de muchos estímulos, entre factor.
ellos la IL-1, TNF-α y el LPS. Su importancia
radica en que casi todos los genes de los media- NF-κB is a transcription factor involved in
dores principales que se inducen en el SS son the response of many stimuli, among which IL-1,
regulados por dicho factor 79: entre ellos TNF-α, TNF-α and LPS are to be found. Its importance
IL-1β, IL-6, IL-8, la COX-2 y la óxido nítrico is based on the fact that almost all of the genes
sintasa inducible (NOSi), donde además se han of the main mediators that are induced in the SS
descrito dos sitios de unión al NF-κB en el gen are regulated by this factor 79: Among which
que la codifica 80-82. TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, COX-2 and the indu-
El conjunto de mecanismos activados por la cible nitric oxide sintase (NOSi), where additio-
interacción del LPS con las células y numerosas nally two binding sites to NF-κB in the gene
moléculas plasmáticas hace que se dispare la that codifies it, have been described 80-82.
producción de diversos mediadores implicados The group of mechanisms activated by the
en los procesos de la inflamación y una gran interaction of LPS with the cells and numerous
cantidad de hormonas que generan la respuesta plasmatic molecules cause the production of di-
del hospedador. Dentro de los mediadores infla- verse mediators, involved in the processes of
matorios podemos destacar las citokinas TNF-α inflammation, and a large quantity of hormones
83,84
y las interleukinas IL-1 85, IL-6 86 e IL-8 87, that generate the host’s response, to rise drama-
el interferón (IFN) 2 o el PAF 88 . De menos tically. Within the inflammatory mediators, we
importancia tenemos la IL-2 4, y el factor inhi- may highlight the cytokinase TNF-α 83,84 and the
bidor de la leucemia 89. Los mediadores antiin- interleukins IL-1 85, IL-6 86 and IL-8 87 and the
flamatorios principalmente implicados en el SS interferon (IFN) 2 or PAF 88. The IL-2 4, and the
son el factor β transformante del crecimiento inhibitor factor of the leukemia89 are of less
(TGF-β) 90 , la IL-4 91, la IL-10 92, la IL-13 93, el importance. The anti-inflammatory mediators that
antagonista de receptores IL-1R 94, receptores are principally involved in SS are growth factor
solubles de TNF y esteroides 95. También se ha β transformant (TGF-β) 90, IL-4 91, IL-10 92, IL-13
estudiado la participación de β-endorfinas 96, 97, 93
, IL-1R receptor antagonists 94 , soluble recep-
la lipotropina 96 , y el péptido intestinal vasoacti- tors of TNF and steroids 95. Similarly, the par-
vo 98, aunque aún no se ha determinado su papel. ticipation of β-endorphins 96, 97 , lipotropin 96, and
Por lo tanto, considerando que el LPS también the vasoactive intestinal peptide 98 have also been
tiene la capacidad de activar las vías de la coa- studied but their roles have not been determined.
gulación, la kininogénesis 20, la fibrinolisis 21 y Therefore, considering that on the one hand, LPS
el complemento 22; y que por otra parte induce la also has the capacity to activate coagulation
producción de moléculas de adhesión como pathways, the kininogenesis 20 , fibrinolysis 21 and
ICAM-1, CD11b/18, VCAM, y las selectinas P, the complement 22; and on the other hand, indu-
L y E, de metabolitos del ácido araquidónico ces the production of molecules of adhesion such
(leucotrienos, prostaglandinas y tromboxanos) as ICAM-1, CD11b/18, VCAM, and the selec-
19,99,100
, radicales libres y especies oxígeno reac- tins P, L and E, the metabolites of arachidonic
tivas 101-103 y óxido nítrico 104, 105; es evidente que acid (leucotriens, prostaglandins and thromboxanes
19,99,100
el shock producido por esta molécula conlleva , free radicals and reactive oxygen species

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136 BERMEJO A Y DUARTE J

101-103
grandes alteraciones a nivel celular con graves and nitric oxide 104, 105; it is evident that the
manifestaciones patológicas sistémicas. Además, shock produced by this molecule entails great
existe gran interrelación entre las distintas molé- alterations at a cellular level with serious syste-
culas: muchas de ellas actúan de manera sinérgi- mic pathological manifestations. Furthermore a
ca en sus mecanismos de acción e inducen la great interrelationship exists between the diffe-
producción de otras potenciando así la cascada rent molecules: Many of them act synergically
de eventos que tienen lugar en el SS y aumen- in their action mechanisms and induce the pro-
tando la magnitud de los efectos del LPS. duction of others, which thus promotes the cas-
cade of events that take place in the SS and
increases the magnitude of the effects of LPS.

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