CARACTERÍSTICAS ASOCIADAS A LAS REACCIONES ANTIGENO Y ANTICUERPO

PROPIEDADES GENERALES DE LOS ANTIGENOS

CAPITULO 1
INMUNOLOGÍA: Principios básicos y Aplicaciones en el banco de sangre

La ciencia de la inmunohematología encarna el estudio de antígenos y anticuerpos de grupos sanguíneos. La inmunohematología

está estrechamente relacionada con el campo de la inmunología porque implica la respuesta inmune a la transfusión de elementos
celulares. Los glóbulos rojos (eritrocitos), los glóbulos blancos (leucocitos) y las plaquetas son componentes celulares que
potencialmente pueden iniciar respuestas inmunitarias después de la transfusión. Para mejorar la comprensión del lector de la
fisiología involucrada en esta respuesta inmune, este texto comienza con una descripción general del sistema inmunológico con un
énfasis en la naturaleza clínica y serológica de los anticuerpos y antígenos.

Un antígeno es una molécula que se une a un anticuerpo o receptor de células T. Este enlace puede ocurren dentro del cuerpo (in vivo) o en una
prueba de laboratorio (in vitro). En términos químicos, los antígenos son proteínas de gran peso molecular (incluidas las proteínas conjugadas,
como las glicoproteínas, lipoproteínas y nucleoproteínas) y polisacáridos (incluidos los lipopolisacáridos).
Estos antígenos de proteínas y polisacáridos pueden ubicarse en las superficies de las membranas celulares o pueden ser una parte integral de la
membrana celular. Los antígenos están localizados en virus, bacterias, hongos, protozoos, células sanguíneas, órganos y tejidos.

Los glóbulos rojos transfundidos contienen antígenos que pueden ser reconocidos como extraños al individuo recibiendo la sangre. Estos antígenos
se llaman alogénicos porque no son familiares al individuo que se transfunde, pero se derivan de la misma especie. Estos antigenos extranjeros
pueden provocar una respuesta inmune en el receptor. El sistema inmunológico del cuerpo normalmente reconoce y tolera los auto-antígenos.
Estos antígenos se denominan autólogos porque se originan a partir del individuo. Sin embargo, el hecho de no tolerar los antígenos propios puede
causar una respuesta inmune contra las células o el tejido de uno mismo. Esta respuesta inmune a sí mismo puede dar lugar a diversas formas de
enfermedad autoinmune. En términos de transfusión, la transfusión alogénica implica la exposición a antígenos que son diferentes del individuo al
recibir una transfusión, mientras que una transfusión autóloga involucra antígenos que han originado en el destinatario.
El concepto de un antígeno que tiene un tamaño suficiente para inducir una respuesta inmune contrasta con un hapteno, que es una partícula de
peso molecular pequeño que requiere un molécula portadora para iniciar la respuesta inmune. Haptenos puede incluir medicamentos tales como
la penicilina y en ocasiones se denominan antígenos parciales.
La respuesta inmune a antígenos extraños o potencialmente patógenos implica un complejo interacción entre varios tipos de leucocitos. En el
contexto de la transfusión, la respuesta inmune es principalmente humoral, involucrando principalmente linfocitos B (células B). Siguiendo un
transfusión, las células B del receptor pueden "reconocer" estos antígenos extraños de glóbulos rojos a través de receptores de células B (fig. 1-1).
Este reconocimiento hace que las células B presenten el antígeno a los linfocitos T (células T). Después de la presentación, las citocinas de células T
señalan a las células B a transformarse en células plasmáticas que producen anticuerpos con la misma especificidad que los receptores de células B
originales. Estos anticuerpos son moléculas de glicoproteínas que continúan circulando y reconocen específicamente y se unen al antígeno extraño
que se creó originalmente la respuesta.
Las células de memoria B también se hacen en este
momento si hay una reexposición más tarde.
A la fecha, las células B de memoria pueden
responder rápidamente y convertirse en células
plasmáticas productora de anticuerpos; Las células B
de memoria no requieren presentación a la célula T
para activarse. Las células B de memoria permiten
una respuesta rápida a un antígeno, un principio
importante utilizado en la vacunación.
Muchos anticuerpos diferentes contra antígenos
extraños pueden producirse en la respuesta inmune,
cada unión a un antígeno diferente en la superficie.
Por ejemplo, los glóbulos rojos tienen muchos
diferentes antígenos en su superficie. Cuando las
células rojas de un donante se transfunden a un
paciente, se pueden producir varios anticuerpos
diferentes en la respuesta inmune a la transfundida
a los glóbulos rojos. Los diferentes determinantes
antigénicos, también llamados epítopos, en un
glóbulo rojo pueden provocar la producción de
diferentes anticuerpos. Cada célula B tiene una especificidad única, que es "Seleccionado" por el determinante antigénico para expandirse en un
clon de células plasmáticas idénticas haciendo anticuerpos con la misma especificidad que el receptor de células B original.
El término antígeno a menudo se usa inapropiadamente como sinónimo de un inmunógeno. Un El inmunógeno es un antígeno que es capaz de
provocar una respuesta inmune en el cuerpo.
La capacidad del sistema inmunitario para reconocer un antígeno y responder a él varía entre individuos e incluso pueden variar dentro de un
individuo en un momento dado. Varias características importantes de una molécula contribuyen a su grado de inmunogenicidad (Tabla 1-1). por
Por ejemplo, diferentes materiales biológicos tienen diversos grados de inmunogenicidad. Las moléculas proteicas son las más inmunogénicas,
seguidas de los carbohidratos y los lípidos, que tienden a ser inmunológicamente inerte. Además, los compuestos complejos, como un
proteincarbohidrato combinadas, son más inmunogénicas que las moléculas más simples. Antígenos en los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las
plaquetas varían en su capacidad para provocar una respuesta inmune.

PROPIEDADES GENERALES DE LOS ANTICUERPOS

Estructura molecular
Las moléculas de anticuerpos son glicoproteínas compuestas de cuatro cadenas polipeptídicas unidas por enlaces disulfuro (fig. 1-2). Los términos
anticuerpo e inmunoglobulina (Ig) se usan a menudo sinónimo Cinco clasificaciones de anticuerpos se designan como IgG, IgA, IgM, IgD, e IgE. Las
cinco clases se diferencian en función de ciertos factores físicos, químicos y características biológicas. Cada molécula de anticuerpo tiene dos
cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas unidas por puentes de enlace disulfuro (S-S). Estos puentes moleculares proporcionar
flexibilidad a la molécula para cambiar su forma tridimensional.

Las cinco moléculas distintivas de cadena pesada distinguen la clase

o isotipo. Cada cadena pesada imparte características que les
permiten tener funciones biológicas únicas. Por ejemplo, la familia
IgA, que posee cadenas pesadas alfa, es el único clase de
anticuerpo capaz de residir en revestimientos mucosos. Los
anticuerpos IgE pueden activar los mastocitos provocando
reacciones de hipersensibilidad inmediatas. IgD es un receptor de
antígeno en la célula B naive. Las inmunoglobulinas más
involucradas en la medicina de transfusión son IgM e IgG, y estos se
discuten con más detalle posteriormente. Hay dos tipos de cadenas
ligeras: cadenas kappa y cadenas lambda. Los anticuerpos poseen
dos cadenas kappa o dos lambda pero nunca uno de cada uno.
Cada molécula de cadena pesada y cadena ligera también contiene
regiones variables y regiones constantes (o dominios). Las regiones
constantes del dominio de la cadena pesada imparten el único
funciones de clase de anticuerpos, tales como la activación del
complemento o la unión a ciertas células. Las regiones variables de
las cadenas pesadas y ligeras se refieren a la unión con el antígeno
y constituyen el área del anticuerpo que contiene idiotopo (La parte
idiotípica). Esta área es el sitio de unión o bolsillo en el que encaja
el antígeno (Fig. 1-3). Los receptores de células T también tienen
receptores específicos de unión a antígenos denominados idiotope la región bisagra de la molécula de anticuerpo imparte flexibilidad a la molécula
para combinación con el antígeno.

Regiones Fab y Fc
Los primeros experimentos para identificar la estructura y función de los anticuerpos utilizaron enzimas para escindir la molécula de
inmunoglobulina. Las enzimas como la pepsina y la papaína pueden dividir la molécula de inmunoglobulina para producir dos fragmentos
conocidos como Fab (fragmento, unión a antígeno) y Fc (fragmento, cristalizable). Fab contiene la porción de la molécula que se une al
determinante antigénico. Fc consiste en el resto de los dominios constantes de las dos cadenas pesadas unidas por enlaces disulfuro (ver Fig. 1-2).
Ciertas células inmunes, como
los macrófagos y los neutrófilos poseen receptores para la región Fc de una inmunoglobulina. Estas células inmunitarias son capaces de unirse a la
porción Fc de los anticuerpos que están unidos a la Células rojas o patógenos y ayudan a su eliminación por fagocitosis. Este mecanismo es una
manera en que los anticuerpos facilitan la eliminación de posibles antígenos dañinos (Fig. 1-4). En medicina transfusional, los anticuerpos unidos a
los antígenos de células rojas pueden indicar la eliminación en el hígado y el bazo, un proceso llamado hemólisis extravascular.

COMPARACIÓN DE ANTICUERPOS IgM e IgG

Debido a que los anticuerpos IgM e IgG tienen la mayor importancia en
inmunohematología, la siguiente discusión se centra en estas dos inmunoglobulinas.
Tabla 1-2 resume características importantes de los anticuerpos IgM e IgG.

Anticuerpos IgM
Cuando las células B responden inicialmente a un antígeno extraño, primero
producen anticuerpos IgM. La molécula de IgM consta de cinco unidades básicas de
inmunoglobulina que contienen dos cadenas pesadas Mu y dos cadenas ligeras
unidas por una cadena de unión (cadena J) (Fig. 1-5). Clasificado como un gran
pentámero estructuralmente, una molécula de IgM contiene 10 posibles
combinaciones de sitios antígenicos o tiene una valencia de 10. Debido a su gran
estructura y alta valencia, estas moléculas son capaces de aglutinación visible de
glóbulos rojos positivos a antígeno suspendidos en solución salina.
La aglutinación de los antígenos de glóbulos rojos por los anticuerpos IgM también
se conoce como giro inmediato y aglutinación directa. Los anticuerpos IgM
constituyen aproximadamente el 10% del suero total de concentración de inmunoglobulina. Una característica funcional importante asociada con
los anticuerpos IgM es la capacidad de activación de la vía clásico del complemento con gran eficacia. Sólo una molécula de IgM se requiere para el
inicio de la ruta clásica en la activación del complemento. Completar la activación de la vía clásica de los resultados del complemento en la
hemólisis de los glóbulos rojos y destrucción intravascular (hemólisis intravascular). Anticuerpos del sistema del grupo ABO son típicamente IgM y
pueden causar hemólisis rápida de glóbulos rojos si es incompatible si se transfunde la unidad de sangre. El sistema del complemento se discute
más adelante en este capítulo.

Anticuerpos IgG
La molécula de anticuerpo IgG consiste en una unidad de cuatro cadenas con dos cadenas pesadas gamma y dos cadenas ligeras, kappa o lambda
en estructura. Esta forma de una inmunoglobulina la molécula es conocida como un monómero. Los anticuerpos IgG constituyen alrededor del 70%
al 75% de la concentración total de inmunoglobulina en el suero. La molécula es bivalente; posee dos sitios de combinación de antígeno. Debido al
tamaño relativamente pequeño y la estructura bivalente de esta molécula, la mayoría de los anticuerpos IgG no son efectivos para producir un
aglutinación visible con glóbulos rojos positivos al antígeno suspendidos en solución salina. Los complejos antígeno-anticuerpo pueden ser vista
con el uso de la prueba de antiglobulina discutida en el Capítulo 2. Los receptores Fc en las células placentarias permiten la transferencia de
anticuerpos IgG a través de la placenta durante el embarazo. Esta transferencia de anticuerpos IgG de la madre al feto protege a recién nacidos de
infecciones. Los anticuerpos IgG de la madre también pueden causar la destrucción de glóbulos rojos fetales en una condición llamada enfermedad
hemolítica del feto y el recién nacido (HDFN). Esta condición ocurre si la madre produce un anticuerpo contra los antígenos de los glóbulos rojos de
la exposición a través de transfusiones o embarazos previos. Si el feto tiene el antígeno correspondiente, los anticuerpos IgG se dirigen a los
glóbulos rojos para su destrucción. Pruebas de laboratorio para detectar este proceso se discute en los siguientes capítulos.
Existen cuatro subclases de IgG (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) como resultado de variaciones menores en las cadenas pesadas de gamma. Las diferencias
de aminoácidos en estas cadenas pesadas afectan la actividad biológica de la molécula. Las subclases IgG1 e IgG3 son las más eficaces para activar
el sistema del complemento. Debido a su estructura de inmunoglobulina, dos moléculas de IgG son necesarios para iniciar la ruta clásica de
activación del complemento.

RESPUESTA INMUNE PRIMARIA Y SECUNDARIA

La respuesta inmunológica después de la exposición a un antígeno se ve influenciada por el tratamiento previo del huésped historia con el material
extraño. Hay dos tipos de respuestas inmunes: primaria y secundario. La respuesta inmune primaria es provocada en la primera exposición al
antigeno extraño. La respuesta primaria se caracteriza por una fase de retraso de aproximadamente 5 a 10 días y está influenciado por las
características del antígeno y el sistema inmunológico del anfitrión. Las propiedades del anfitrion que pueden contribuir a la respuesta del antígeno
incluyen lo siguiente:
• Años
• Ruta de administración
• Marca genético
• Salud general: estrés, fatiga, enfermedad
• Medicamentos (inmunosupresores)
Las fases de retraso pueden extenderse por períodos más largos. Durante este período, no se detectó circulación de los niveles de anticuerpos
existen dentro del huésped. Después de este período de retraso, las concentraciones de anticuerpos aumentan y mantener una meseta antes de
una disminución en los niveles de anticuerpos detectables. Anticuerpos IgM se producen primero, seguido de la producción de anticuerpos IgG. La
especificidad de la molécula de IgM original (determinada por la región variable) es la misma que la especificidad de la molécula de IgG observada
más adelante en la respuesta inmune. Como resultado de un proceso de gen reordenamiento en la célula B, la afinidad del anticuerpo producido
después de cada exposición aumenta este proceso se llama maduración de afinidad, y es la razón por la cual los anticuerpos a menudo producen
una reacción más fuerte en las pruebas de laboratorio si el paciente ha tenido repetida exposición al antígeno.
El segundo contacto con el antígeno idéntico inicia una respuesta inmune secundaria, o respuesta anamnésica, dentro de 1 a 3 días de la
exposición. Debido a la producción significativa de las células B de memoria de la exposición inicial, las concentraciones circulantes de los
anticuerpos son mucho más altos y sostenidos por un período mucho más largo. Los niveles de anticuerpos son muchas veces mayor debido a la
mayor cantidad de células plasmáticas los anticuerpos IgM también generan la respuesta inmune secundaria. Sin embargo, el principal anticuerpo
producido es de la clase IgG (Fig. 1-6). En el ámbito clínico, detectando un mayor nivel de la forma de Ac IgM puede indicar una exposición aguda o
temprana a un patógeno, mientras que encontrar un aumento en la forma de IgG de un anticuerpo de la misma especificidad puede indicar una
infección crónica o tardía.

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPOS
Propiedades que influyen en la unión
La unión de un antígeno y un anticuerpo sigue la ley de acción masiva y es un proceso reversible. Esta unión cumple con los principios de una
reacción química que ha alcanzado equilibrio. Cuando el antígeno y el anticuerpo se combinan, un complejo antígeno-anticuerpo o se produce
complejo inmune. La cantidad de formación de complejo antígeno-anticuerpo es determinado por la constante de asociación de la reacción. La
asociación impulsa la constante de la velocidad de reacción directa, mientras que la velocidad de reacción inversa está influenciada por la
disociación constante. Cuando la velocidad de reacción directa es más rápida que la velocidad de reacción inversa, se favorece la formación de
complejos antígeno-anticuerpo. Una asociación superior a influencias constantes da mayor formación de complejos inmunes en equilibrio (fig. 1-7).
Varias propiedades influyen en la unión de antígeno y anticuerpo. La bondad del ajuste y la naturaleza complementaria del anticuerpo por su
epítopo específico contribuye a la fuerza y velocidad de la reacción. Factores como el tamaño, la forma y la carga de un antígeno determina la
unión del antígeno al anticuerpo complementario. Este concepto de bondad de ajuste se ve más fácilmente al ver la unión antígeno-anticuerpo
como un ajuste de bloqueo y llave (Fig. 1-8). Si se altera la forma del antígeno, el ajuste se cambia el antígeno para el anticuerpo. Del mismo modo,
si se altera la carga del antígeno, la carga de las propiedades de unión del antígeno y del anticuerpo se ven afectadas. La fuerza de unión entre un
único sitio de combinación de un anticuerpo y el epítopo de un antígeno se llama afinidad, cuando el complejo inmune se ha generado, el complejo
se mantiene unido por un agente no covalente. Fuerzas atractivas, incluidas las fuerzas electrostáticas (enlace iónico), enlace de hidrógeno, unión
hidrofóbica, y fuerzas de van der waals. La influencia de estas fuerzas sobre el sistema inmune. la estabilidad del complejo se describe con más
detalle en la Tabla 1-3. El efecto acumulativo de estas fuerzas. Mantiene la unión entre el antígeno y las moléculas de anticuerpos. La avidez es la
general. La fuerza de unión de varias reacciones antígeno-anticuerpo y depende de la afinidad del anticuerpo, la valencia del antígeno y las fuerzas
atractivas no covalentes. El objetivo de procedimientos de pruebas de laboratorio en el banco de sangre es crear condiciones óptimas para unión
antígeno-anticuerpo para facilitar la detección e identificación de anticuerpos y antigenos

CARACTERÍSTICAS ASOCIADAS CON CELULAS ROJAS

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPOS
Antes de analizar los antígenos y anticuerpos de glóbulos rojos, el lector debe tener un conocimiento sólido de la ubicación de estos conceptos.
Cuando una muestra de sangre se somete a centrifugación, los glóbulos rojos más densos viajan al fondo del tubo. La porción líquida de la muestra
es conocido como plasma (si se agregó un anticoagulante) o suero (no se agregó anticoagulante y la muestra se deja coagular).
• Los antígenos de glóbulos rojos se encuentran en los glóbulos rojos. Son parte de la membrana celular o sobresalen de la membrana celular.
• Los anticuerpos de glóbulos rojos son moléculas en el plasma o suero (fig. 1-9).

ANTIGENOS CELULARES
Los investigadores han definido 30 sistemas de grupos sanguíneos con
más de 250 de antigenos glóbulos rojos únicos. Un sistema de grupo
sanguíneo está compuesto de antígenos que se han agrupado de
acuerdo con a los patrones de herencia de muchos genes de grupos
sanguíneos. Cada individuo posee un conjunto único de antígenos de
células rojas. Debido a la diversidad de la herencia genética de un
grupo sanguíneo, ciertas poblaciones raciales pueden poseer una
mayor prevalencia de antigenos de glóbulos rojos La investigación
científica ha determinado las características bioquímicas de muchos
antigenos eritrocitarios y su relación con la membrana de los
glóbulos rojos. En términos bioquímicos, estos antígenos pueden
tomar la forma de proteínas, proteínas junto con moléculas de
carbohidratos (glicoproteínas), o carbohidratos junto con lípidos
(glicolípidos). En general, los antígenos eritrcitarios sobresalen de la
superficie de la membrana de la célula roja en configuraciones
tridimensionales (Fig. 1-10). Debido a esta orientación en la superficie
de la célula roja, los antígenos son accesibles a las moléculas de
anticuerpos para reacciones de aglutinación. Aglutinación el uso de glóbulos rojos se llama hemaglutinación determinación de la especificidad de la
célula roja.
El antígeno o anticuerpo en la mayoría de los procedimientos de bancos de sangre de rutina se realiza mediante hemaglutinación pruebas que se
pueden hacer en un tubo, en una microplaca o en un microtubo lleno de partículas de gel (la prueba de gel). La prueba en fase sólida es un método
alternativo que utiliza glóbulos rojos adheridos a un soporte sólido en lugar de hemaglutinación. Los capítulos 2 y 9 discuten estos los métodos y
los reactivos utilizados en estas pruebas de laboratorio.
Algunos antígenos de glóbulos rojos son más inmunogénicos que otros y deben coincidir con los paciente que recibe una transfusión. Por ejemplo,
el antígeno D dentro del grupo sanguíneo Rh el sistema es altamente inmunogénico en comparación con otros antígenos de glóbulos rojos. La
posibilidad de la estimulación de la producción de anticuerpos anti-D es alta en un individuo que carece de antígenos D que se transfunde con
glóbulos rojos que poseen antígenos D. Los pacientes que carecen del antígeno D deben recibir componentes que contienen glóbulos rojos que
también carecen del antígeno D.

Anticuerpos de células rojas

Las inmunoglobulinas más significativas en medicina de transfusión son IgG e IgM. Más los anticuerpos clínicamente importantes reaccionan a la
temperatura corporal (37 ° C), son IgG y pueden causar destrucción inmune de glóbulos rojos transfundidos que poseen el antígeno
correspondiente la destrucción de los glóbulos rojos puede causar reacciones de transfusión, anemia y HDFN. Los anticuerpos IgM reaccionan
mejor a temperatura ambiente (20 ° C a 22 ° C) o inferior (a 4 ° C) y generalmente no están implicados en la destrucción de glóbulos rojos
transfundidos. Los anticuerpos
Los antígenos ABO son una excepción importante a esta regla. Los anticuerpos contra los antígenos ABO son de la clase IgM y reaccionar in vitro a
temperatura ambiente e in vivo a temperatura corporal. Una transfusión del grupo sanguíneo ABO incorrecto (antígeno) activaría efectivamente el
sistema del complemento y causa hemólisis de las células transfundidas.

INMUNOHEMATOLOGÍA: REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO EN VIVO

Transfusión, embarazo y respuesta inmune
Durante la transfusión y el embarazo, la paciente está expuesta a muchas situaciones potencialmente extrañas, antígenos en glóbulos rojos,
glóbulos blancos y plaquetas que poseen diversos grados de inmunogenicidad. Debido a esta exposición a antígenos extraños, el sistema
inmunológico de un paciente puede ser activado o "sensibilizan" con la producción resultante de anticuerpos circulantes. Los anticuerpos
producidos en respuesta a la transfusión y el embarazo se clasifican como aloanticuerpos.
La prueba de detección de anticuerpos se realiza en el paciente antes de la transfusión para detectar cualquier aloanticuerpos de células rojas
existentes. Si se detecta un aloanticuerpo de glóbulos rojos, se realiza una prueba para identificar la especificidad del anticuerpo. Una vez
identificada la especificidad, las unidades donantes que carecen del antígeno de glóbulos rojos se seleccionan para transfusión. Detectar e
identificar anticuerpos.
en el paciente antes de la transfusión es importante evitar la formación de complejos antigeno- anticuerpos in vivo (dentro del cuerpo del
paciente), lo que disminuiría la supervivencia de las células transfundidas.
La inmunización también puede ocurrir durante el embarazo, ya que las células sanguíneas fetales pueden ingresar a la circulación materna al
parto. La producción de aloanticuerpos se puede observar como respuesta del sistema inmune a glóbulos rojos, glóbulos blancos o antígenos
plaquetarios de origen fetal. Las mujeres son examinadas rutinariamente durante el primer trimestre del embarazo para detectar la presencia de
aloanticuerpos eritrocitario que pueden destruir los glóbulos rojos del feto antes o después del parto. La destrucción de los glóbulos rojos puede
llevar a complicaciones clínicas de anemia y altos niveles de bilirrubina en el feto o recién nacido.

Complemento de proteínas
El sistema del complemento es un grupo de proteínas séricas que
tienen numerosas funciones biológicas relacionado con el
aclaramiento de antígenos, la lisis celular y la vasodilatación (fig.
1-11). Estas proteínas normalmente circulan en estado inactivo o
proenzima. En la activación, se convierten en enzimas activas que
potencian los procesos inmunológicos. Nueve componentes de la
familia del complemento se designan de C1 a C9. Cuando la
activación se produce por un anticuerpo en la vía clásica, el
complejo C1q, C1r, C1s divide las proteínas C4 y C2 en dos partes.
Cada proteína se convierte en fragmentos de proteína y dada la
distinción a o b (por ejemplo, C4 se convierte a C4a y C4b) el
fragmento más pequeño se designa como a, y el más grande se
designa como b. Típicamente, cuanto más grande el fragmento b
se une a la célula, y el fragmento a más pequeño aumenta el
efecto de respuesta inflamatorio. A partir de la división de C4 y
C2, los fragmentos C4b y C2a se unen para formar C3 convertasa,
que divide C3 en C3a y C3b. El C3 convertasa se une con C3b a
formar C5 convertasa, que divide C5. La formación final de un
complejo de ataque de membrana causa la lisis de varias células
(hemólisis de glóbulos rojos), bacterias y virus al interrumpir la
membrana celular. La unión directa del complejo de ataque a la
membrana, consiste en las proteínas del complemento C5 a C9, a la superficie celular produce agujeros en la membrana celular y la lisis osmótica.
Si el complejo de ataque a la membrana se une a glóbulos rojos transfundidos, la hemólisis se produce con una liberación posterior de
hemoglobina libre en la circulación.

Los primeros pasos en la activación de las proteínas del complemento pueden ocurrir en cualquiera de dos caminos
• La ruta clásica se activa por la presencia de un anticuerpo unido a un antígeno. La destrucción de glóbulos rojos que puede resultar de los
glóbulos rojos recubiertos de anticuerpos es causada por la
activación de esta vía.
• La ruta alternativa no requiere un anticuerpo específico para la activación. Constituyente externo de la superficie celular, como bacterias, virus y
proteínas o carbohidratos extraños, iniciarlo Independientemente del modo de activación, los pasos finales involucrados en la lisis celular son
comunes para ambas vías. Además, las consecuencias de la activación del complemento, que sirve de un importante amplificador del sistema
inmunológico, son comunes a ambas vías. Los Los péptidos generados durante la formación de la unidad de ataque de membrana tienen los
siguientes funciones adicionales (tabla 1-4):

• Las anafilatoxinas C3a, C4a y C5a ayudan en el reclutamiento de células fagocíticas y la promoción de la inflamación. Estas proteínas del
complemento se adhieren a los mastocitos y promueve la liberación de aminas vasoactivas, que ayudan a que los vasos sanguíneos sean
permeables.
para que el fluido y las células entren en el área.
• La proteína C5a es quimiotáctica para los neutrófilos y atrae a estas células al sitio de lesión.
• El complemento también funciona como una opsonina, que es una sustancia que se une a un antígeno para promover la fagocitosis. Las células
fagocíticas son generalmente ineficientes si la sustancia es recubierta con una opsonina, el proceso de fagocitosis se vuelve extremadamente
eficiente.
Los receptores en la superficie de la célula fagocítica tienen una mayor afinidad por las opsoninas. C3b y los anticuerpos son opsoninas, que
promueven la eliminación de bacterias y otras células a las que se unen las opsoninas. Una prueba para determinar si la célula roja es recubierta
con componentes del complemento es una herramienta serológica útil cuando la destrucción de glóbulos rojos esta siendo investigado las
proteínas C3b y C4b están formadas por una "c" y una "d" complejo. Los productos de descomposición C4d y C3d también se pueden detectar en
los glóbulos rojos.
Eliminación de complejos antígeno-anticuerpo. Los complejos antígeno-anticuerpo se eliminan de la circulación del cuerpo a través del sistema
fagocito mononuclear. Este sistema actúa como un filtro para eliminar microbios y células viejas.
El sistema está presente en los órganos linfoides secundarios, como el bazo, los ganglios linfáticos, hígado y pulmones. El órgano linfoide más
grande, el bazo, es particularmente efectivo para extirpar glóbulos rojos viejos y dañados de la sangre y limpiando el cuerpo de complejo antígeno-
anticuerpo Los glóbulos rojos que tienen IgG unida o componentes del complemento se eliminan mediante el bazo.

INMUNOHEMATOLOGÍA: REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO IN VITRO

Resumen de la aglutinación
Las reacciones antígeno-anticuerpo que ocurren in vitro (en pruebas de laboratorio) son detectadas por aglutinación visible de glóbulos rojos o
evidencia de hemólisis al finalizar la prueba. La ausencia de hemaglutinación en pruebas inmunohematológicas (una reacción negativa) implica la
falta de formación de complejos antígeno-anticuerpo. Se interpreta una reacción negativa significa que el anticuerpo en el sistema de prueba no es
específico para el antígeno. Una reacción positiva indica que se formó un complejo inmune antígeno-anticuerpo. La especificidad del anticuerpo
coincide con el antígeno en el sistema de prueba. La prueba de aglutinación debe ser realizado correctamente para llegar a la conclusión correcta
con respecto a la presencia o ausencia del antígeno o anticuerpo.
La siguiente sección describe los factores que afectan la reacción de hemaglutinación, que ocurre en dos etapas, referidas como la etapa de
sensibilización y la etapa de formación de enrejado.

Etapa de sensibilización o unión de anticuerpos a las células rojas

En la primera etapa de la aglutinación de glóbulos rojos, el anticuerpo se une a un antígeno en la membrana celular. Esta etapa requiere un
reconocimiento inmunológico entre el antígeno y anticuerpo. Durante esta etapa de reconocimiento, los determinantes antigénicos en la célula
roja se combinan con el sitio de unión a antígeno de la molécula de anticuerpo. No se observa aglutinación visible.
En este punto la unión física de un antígeno y un anticuerpo es esencialmente un par aleatorio de dos estructuras determinadas en gran parte por
el azar. Concentración de anticuerpos y receptor de antígeno. La accesibilidad y la cantidad pueden influir en la probabilidad de esta colisión un
aumento
en la concentración de anticuerpos aumenta la probabilidad de eventos de colisión con el correspondiente antígeno. Este concepto se conoce
como el efecto general del suero a la célula.

Relación o concentración de antígeno y anticuerpo en pruebas inmunohematológicas aumentan la cantidad de suero colocado en el tubo de
ensayo aumenta la concentración de anticuerpos disponibles para unirse a antígenos de glóbulos rojos. Cuando el suero de un paciente se
manifiesta reacciones débiles en las pruebas de aglutinación, esta técnica simple se puede utilizar para mejorar la primera etapa de la reacción de
aglutinación.
Aumentar la cantidad de antígeno o glóbulos rojos. La concentración no aumenta la probabilidad de reacción.

Factores que influyen en la primera etapa de la aglutinación

Además de la relación de suero a célula, ciertos factores ambientales pueden influir en la sensibilización y formación de enrejado en las dos etapas
de la reacción de aglutinación.

Temperatura de reacción
La mayoría de los anticuerpos de relevancia clínica en transfusión son anticuerpos IgG que reaccionan a aproximadamente 37 ° C. Combinando las
fuentes de antígeno y anticuerpo e incubándolos a esta temperatura, se mejora la primera etapa de la reacción de aglutinación. A diferencia de, los
anticuerpos IgM son más reactivos a temperaturas más bajas, generalmente a temperatura ambiente (temperatura ambiente) o inferior.

Tiempo de incubación
Permitir el tiempo adecuado para que la combinación de antígeno y anticuerpo alcance el equilibrio también mejora la primera etapa de la
reacción de aglutinación. El tiempo recomendado para una reactividad óptima antígeno-anticuerpo varía con el procedimiento de prueba y los
reactivos utilizados en las pruebas. Algunos procedimientos de prueba pueden indicar una incubación predeterminada período realizado a
temperaturas variables, como 37 ° C, temperatura ambiente o 1 ° C a 8 ° C. Además, los procedimientos de prueba pueden indicar un paso de giro
inmediato que indica una combinación de reactivos de prueba y muestra sin período de incubación.

pH
El pH óptimo para la hemaglutinación es alrededor de 7.0, que es el rango de pH fisiológico. Este rango de pH es adecuado para la mayoría de los
anticuerpos de células rojas importantes.

Fuerza iónica
En un entorno isotónico, como la solución salina fisiológica, los iones Na + y Cl− son atraídos por los grupos con carga opuesta en moléculas de
antígeno y anticuerpo. Como resultado de esta atracción, la combinación de antígeno y anticuerpo se ve obstaculizada. Si el ambiente iónico se
reduce, este efecto de protección se reduce, y la cantidad de captación de anticuerpos en el se incrementa el glóbulo rojo.

Etapa de formación de celosía o interacciones célula-célula

Después de que los glóbulos rojos han sido sensibilizados con moléculas de anticuerpos, se producen colisiones aleatorias entre los glóbulos rojos
recubiertos de anticuerpos son necesarios para desarrollar enlaces cruzados para la visualización del agrupamiento o aglutinación de glóbulos rojos
dentro del tubo de ensayo (Fig. 1-12). La aglutinacion visible se forman cuando los glóbulos rojos están muy cerca para promover la formación de
la red de sitios de unión de anticuerpos a determinantes antigénicos en glóbulos rojos adyacentes.

Factores que influyen en la segunda etapa de la aglutinación

Distancia entre las células rojas
El potencial zeta, o la fuerza de repulsión entre los glóbulos rojos en una solución
salina fisiológica, ejerce una influencia sobre la reacción de aglutinación. Los glóbulos
rojos poseen un neto carga negativo sobre la superficie celular en una suspensión
salina. Cationes (iones cargados positivamente) del ambiente salino se siente atraído
por estas cargas negativas. Una nube catiónica estable rodea cada célula y aporta una
fuerza de repulsión entre moléculas de similar carga. Como consecuencia de esta
fuerza repulsiva, los glóbulos rojos permanecen a una distancia de uno al otro. Esta
distancia entre las celdas es proporcional al potencial zeta (Fig. 1-13).
Debido al tamaño más grande, la forma del pentámetro y las propiedades multivalentes de las moléculas de IgM, la aglutinación se facilita entre los
glóbulos rojos adyacentes que tienen IgM unida a ellos. En contraste, las moléculas de anticuerpos IgG son más pequeñas y menos capaces de
cubrir la distancia entre células rojas adyacentes generadas por el potencial zeta. Las moléculas de IgG pueden unirse, pero son visibles la
aglutinación puede no ocurrir.

Concentraciones óptimas de antígeno y anticuerpo

Se observan cantidades máximas de aglutinación cuando las concentraciones de antígenos (glóbulos rojos) y el anticuerpo (suero) se encuentran
dentro de la zona de equivalencia (fig. 1-14). Cuando el la concentración de anticuerpo excede la concentración de antígeno, exceso de anticuerpo
(o prozona) existe, lo que disminuye la cantidad de glóbulos rojos aglutinados. En contraste, la postzona ocurre cuando la concentración de
antígeno excede el número de anticuerpos presentes. La cantidad de aglutinantes formados bajo estas circunstancias también es subóptima y
disminuido.
Las pruebas inmunohematológicas están diseñadas para obtener reacciones dentro de la zona de equivalencia. Las preparaciones de anticuerpos
comerciales se diluyen a concentraciones de anticuerpos óptimas para las pruebas. Las preparaciones de glóbulos rojos se diluyen a una suspensión
del 2% al 5% en solución salina para concentraciones óptimas de antígeno. El uso de suspensiones de eritrocitos superiores al 5% puede afectar la
capacidad de la reacción de prueba para caer dentro de la zona de equivalencia y causar una
Reacción "falso-negativa" debido a la poszona.

Efecto de la centrifugación
El tiempo y la velocidad de centrifugación son factores importantes para la detección de aglutinados glóbulos rojos. La centrifugación ayuda a
facilitar la formación de una red enrejada por forzando a los glóbulos rojos a acercarse en el entorno de prueba. Las centrífugas están calibradas
para definir la velocidad y el tiempo óptimos para la mejor reacción. Sobrecentrifugación o subentrifugación y las velocidades demasiado altas o
demasiado bajas pueden causar reacciones falsos positivos o falsos negativos.

Reacciones de aglutinación de grado

En inmunohematología, las reacciones antígeno-anticuerpo se miden cualitativamente. La presencia de una reacción antígeno-anticuerpo se
detecta con aglutinación de glóbulos rojos, pero la concentración del complejo inmune no se determina de manera cuantitativa. El antígeno
eritrocitario celular y las reacciones de anticuerpos pueden realizarse en tubos de ensayo, en pozos de microplacas, y en microtubos rellenos de
partículas de gel. Debido a la naturaleza cualitativa de la medición, la lectura y clasificación de las reacciones de aglutinación son subjetivas.
Para estandarizar este elemento de subjetividad entre el personal que realiza las pruebas, se ha establecido un sistema de clasificación para las
reacciones de aglutinación. La clasificación convencional. El sistema para la prueba de tubos utiliza una escala de 0 a 4+ (Fig. 1-15).
Se pueden establecer ligeras variaciones en este sistema de clasificación convencional en individuos instituciones Las reacciones de aglutinación se
leen agitando e inclinando los tubos de ensayo hasta que el botón de glóbulos rojos se ha eliminado de la parte inferior del tubo. Aglutinación
negativa las reacciones se interpretan después de que el botón de glóbulos rojos se haya resuspendido por completo. Una lámpara del visor de
aglutinación con un espejo de aumento se usa generalmente para evaluar las reacciones de aglutinación. Los laboratorios que utilizan una lectura
microscópica en algunas pruebas tienen criterios establecidos para calificar estas reacciones.

La hemólisis como indicador de reacciones antígeno-anticuerpo

Además de la aglutinación como indicador de una reacción antígeno-anticuerpo en la inmunohematología. En el laboratorio, la hemólisis de
glóbulos rojos observada en el tubo también es un indicador de la reactividad de un antígeno y anticuerpo in vitro. Si el sistema de complemento
está activado por un complejo inmune, puede ocurrir hemólisis de los glóbulos rojos junto con la aglutinación.
Los pasos finales en el proceso de activación del complemento inician el complejo de ataque de membrana, causando daños en la membrana.
Como consecuencia de este daño, el fluido intracelular se libera al ambiente de reacción. El botón de celda roja es a menudo más pequeño en
comparación
con el botón de glóbulos rojos presente en otros tubos. Un sobrenadante de rosado a rojizo es observado después de haber centrifugado los tubos.
Para la clasificación de un tubo con hemólisis, una H se usa tradicionalmente cuando se observa este fenómeno. Algunos anticuerpos de glóbulos
rojos característicamente mostrar hemólisis in vitro, como anticuerpos contra los antígenos del sistema de Lewis y anti-Vel, que se analizan en
capítulos posteriores. Es importante reconocer la hemólisis como reacción antígeno-anticuerpo. La hemólisis se detecta in vitro utilizando muestras
de suero frescas.
El suero tiene proteínas del complemento activo. Porque los anticoagulantes se unen al calcio, que es necesario para la activación del
complemento, las muestras de plasma no demuestran activación complemento.

SISTEMA DE ANTIGENO DE LEUCOCITO HUMANO (HLA) Y LA INMUNOLOGÍA DE PLAQUETAS

ANTIGENOS DE LEUCOCITO HUMANO
Aplicaciones de prueba en el laboratorio clínico.
La mayoría de las células nucleadas, como los leucocitos y las células tisulares, poseen antígenos heredados en la superficie celular llamados
antígenos leucocitarios humanos (HLA). Los antígenos HLA y los anticuerpos que provocan están involucrados en la medicina de transfusión y
trasplante. Los anticuerpos contra HLA, similares a los anticuerpos de glóbulos rojos, resultan de la exposición a antígenos extraños durante las
transfusiones de hemoderivados y durante el embarazo. Estos anticuerpos pueden causar una respuesta plaquetaria pobre o refractariedad en
pacientes que requieren transfusiones de plaquetas. Para mejorar la respuesta de las plaquetas, pueden ser necesarias las plaquetas del donante
que son HLA coincidentes con el receptor. Los anticuerpos contra HLA también son responsables de las reacciones que causan escalofríos y fiebre
en algunos pacientes que reciben transfusiones de glóbulos rojos. En esta situación, los productos sanguíneos que son "reducidos de leucocitos"
para evitar los antígenos HLA y las citoquinas residuales generalmente evitan reacciones adicionales. Las pruebas de HLA no son rutinarias en el
servicio de transfusión o en el banco de sangre; sin embargo, una comprensión de su herencia, nomenclatura y aplicación es importante para el
apoyo óptimo del paciente. La tabla 1-6 enumera las aplicaciones de las pruebas de HLA.
 TABÑA 1-6: Aplicaciones de prueba HLA
• Trasplantes de células progenitoras hematopoyéticas.
• Trasplantes de órganos sólidos.
• Selección de plaquetas para pacientes refractarios.
• Asociación de enfermedades
• Espondilitis anquilosante - B27
• Enfermedad celíaca - DQ2
• Optimizar ciertos regímenes de terapia con medicamentos.
• Sensibilidad al abacavir (para el tratamiento del VIH) y alelo B * 57: 019

Los trasplantes de células progenitoras de órganos y hematopoyéticos se basan en la compatibilidad HLA para el mejor resultado. Además, las
pruebas de HLA se utilizan para evaluar los factores de riesgo de susceptibilidad a la enfermedad. Estas pruebas no son diagnósticas para las
enfermedades asociadas, pero se utilizan para evaluar el riesgo relativo. Una aplicación creciente de la tipificación HLA ha sido en aplicaciones
farmacogenómicas. Ciertos antígenos HLA están asociados con regímenes de terapia farmacológica óptimos para ciertas enfermedades.

Herencia y Nomenclatura de HLA

Los genes que codifican la expresión de los antígenos HLA son parte del sistema de genes del complejo de histocompatibilidad principal (MHC)
ubicado en el cromosoma 6. Aunque el sistema MHC se reconoció por primera vez y se nombró en experimentos de trasplante de tejidos, ahora se
sabe que el papel del El MHC es esencial en el reconocimiento de sí mismo y no de sí mismo, la coordinación de la inmunidad celular y humoral y la
respuesta inmune a los antígenos. Los genes MHC se dividen en tres categorías o clases (Fig. 1-16). La clase I incluye los loci A, B y C; la clase II
incluye los loci DR, DP y DQ; y la clase III incluye genes que codifican algunas proteínas del complemento y citoquinas. Los genes están
estrechamente relacionados y se heredan como un haplotipo. Cada persona hereda un haplotipo de cada padre y ambos se expresan. Este patrón
de herencia se ilustra en el ejemplo de la figura 1-17. Hay cientos de posibles variaciones de cada gen, llamados alelos, en cada locus (Tabla 1-7).
Cada expresión de antígeno se identifica con un número único que se determina mediante métodos serológicos (reacciones antígeno-anticuerpo) o
métodos moleculares, que se analizan más detalladamente en el Capítulo 3. La región MHC es el sistema de genes más polimórfico en los seres
humanos debido a las muchas posibilidades. Alelos en cada localización. La probabilidad de que dos individuos expresen los mismos antígenos HLA
es extremadamente baja. La denominación de los antígenos HLA consiste en una letra que designa el lugar, incluidos A, B, C, DR, DQ y DP, y un
número que indica el antígeno, por ejemplo, A2, B27, Cw7, DR1, DQ5. Para el locus C, la "w" se incluye en la nomenclatura para distinguir los
antígenos del locus C del HLA de los componentes del complemento. La nomenclatura HLA comenzó cuando el único método de prueba fue el
ensayo de linfocitotoxicidad serológica. Hoy mas se utilizan ensayos de tipificación molecular precisos y específicos. Como resultado de la mayor
sensibilidad de los métodos de tipificación y el mayor conocimiento de la estructura de las glicoproteínas de los antígenos HLA, el número de alelos
que se puede determinar continúa aumentando, mientras que el número total de antígenos se ha mantenido igual. La Organización Mundial de la
Salud es responsable de estandarizar la nomenclatura HLA.5 Por ejemplo, al utilizar la nomenclatura correcta, a partir de enero de 2010, A2 se
expresa como A2 para la resolución del nivel de antígeno determinada por pruebas serológicas, HLA-A * 02 para tipificación de baja resolución y
HLA-A * 02: 01 si se realizan pruebas de alta resolución. La tipificación de alta resolución a nivel de alelo es particularmente importante para la
supervivencia del injerto hematopoyético (se explica más adelante).

Pruebas e identificación de HLA y anticuerpos.

Pruebas para identificar HLA
Como se describió anteriormente en este capítulo, los antígenos de los glóbulos rojos y los anticuerpos se identifican principalmente mediante
reacciones de aglutinación o métodos de prueba de hemaglutinación. Debido a la naturaleza de los antígenos y anticuerpos leucocitarios, las
técnicas de aglutinación no son efectivas. La identificación serológica de los antígenos HLA requiere el método de prueba de linfocitotoxicidad, que
se describe posteriormente. Los antígenos de clase I se encuentran en la superficie de las plaquetas, los leucocitos y la mayoría de las células
nucleadas en el cuerpo. Los glóbulos rojos maduros carecen de antígenos HLA, aunque los reticulocitos expresan antígenos HLA de clase I. Los
antígenos HLA de clase II se encuentran en las células presentadoras de antígenos: macrófagos, células dendríticas y células B. En la circulación, el
número de células que expresan antígenos de clase I es mayor que el número de células con antígenos de clase II. Debido a que los antígenos de
clase II no se encuentran en las plaquetas, no es necesario que coincidan con los antígenos de clase II cuando se solicitan plaquetas compatibles
con HLA. En los métodos de tipificación serológica, se agrega una suspensión de linfocitos T o B a la microtitulación
Placas que contienen especificidades de anticuerpos conocidas. Después de la incubación, se añade complemento de conejo. Si el anticuerpo en la
placa coincide con el antígeno en la célula, el complemento se activa, causando una lesión celular o una reacción positiva. El daño celular se detecta
mediante la adición de un tinte. Esta lesión permite que el tinte entre en la célula, lo que proporciona un medio visual para distinguir las células
positivas de las células no reactivas. Cada pozo se califica mientras se mira bajo el microscopio, y un patrón de reactividad determina la clase I o la
clase II. La tipificación serológica de los antígenos HLA no siempre está clara debido a los anticuerpos que a menudo pueden reaccionar a más de un
epítope (reactivo cruzado). En muchos casos, no se han desarrollado anticuerpos específicos para reconocer los muchos antígenos HLA diferentes
que pueden expresarse. Por estas razones, la prueba de linfocitotoxicidad (Fig. 1-18) se está reemplazando o complementando con métodos
moleculares más sensibles y específicos, que se describen en el Capítulo 3.

Detección e identificación de anticuerpos

La compatibilidad con ABO es esencial para el éxito de todos los trasplantes de órganos sólidos. En segundo lugar a la compatibilidad con ABO, la
combinación cuidadosa de antígenos HLA en pacientes con anticuerpos existentes es importante para la supervivencia a largo plazo del injerto para
trasplantes de riñón, corazón y pulmón. Fig. 1-19
muestra que el grado de compatibilidad con HLA para los trasplantes de riñón corresponde a la supervivencia del injerto6. La naturaleza soluble de
los antígenos HLA en el hígado permite una mayor flexibilidad en la selección de tejido donante para los trasplantes de hígado, incluso cuando los
anticuerpos preformados
existe. Los candidatos a trasplante de órganos se examinan periódicamente para detectar anticuerpos contra HLA, de modo que se pueda
determinar una compatibilidad adecuada cuando un órgano esté disponible.
Los pacientes pueden sensibilizarse a los antígenos HLA por los siguientes tipos de exposición a aloantígenos7:
• Embarazos. Alrededor del 30% al 50% de las mujeres con tres o más embarazos desarrollan anticuerpos HLA. En algunas mujeres, los anticuerpos
están presentes solo por un corto tiempo (semanas a meses), mientras que pueden persistir durante muchos años en otras mujeres.
• Transfusiones de sangre. Alrededor del 50% de los pacientes que reciben transfusiones múltiples desarrollan anticuerpos. Hoy en día, la mayoría
de los pacientes que requieren transfusiones de sangre reciben sangre leucocytereduced, lo que disminuye las posibilidades de que un paciente se
sensibilice.
• Trasplante previo. Alrededor del 90% de los pacientes desarrollan anticuerpos HLA dentro de las 2 semanas posteriores a la falla del injerto.
El término anticuerpo reactivo a panel (PRA) se desarrolló a partir de pruebas serológicas realizadas en bandejas de microtitulación compuestas por
un panel de antígenos comunes. Una PRA mayor significaba que el receptor tenía muchas reacciones y era menos probable que fuera compatible
con los órganos disponibles.
Con el aumento de la sensibilidad y la especificidad de los métodos más nuevos en fase sólida, la PRA determinada por métodos serológicos se ha
reemplazado con un anticuerpo reactivo de panel calculado (CPRA) .7 Este número se basa en los antígenos contra los cuales el órgano candidato
es reactivo, llamado antígenos inaceptables, y proporciona una guía estadística para determinar la reactividad dentro de la población. El cálculo
utiliza una fórmula y frecuencias HLA derivadas de los tipos HLA que se encuentran en más de 12,000 donantes. Este número se usa como una
evaluación para determinar la ubicación de un candidato en la lista de espera para los órganos disponibles. La comparación cruzada del suero
receptor con las células T y las células B del posible donante es otro procedimiento importante para evitar el rechazo causado por los anticuerpos
del tejido del donante. Las pruebas cruzadas son posibles para los trasplantes de riñón y páncreas, cuando hay suficiente tiempo; sin embargo, no
siempre es posible con trasplantes de corazón, pulmón y corazón / pulmón. El cultivo mixto de linfocitos (MLC), utilizado históricamente para la
comparación cruzada, se ha reemplazado con técnicas de citometría de flujo inmunofluorescente.

TRASPLANTES DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS

Las células progenitoras hematopoyéticas (HPC) se pueden obtener de la médula ósea, la sangre periférica y la sangre del cordón umbilical. Las
enfermedades tratadas con HPC incluyen, entre otras, deficiencias inmunitarias congénitas, anemia aplásica, leucemia, linfoma y enfermedad de
Hodgkin. La concordancia de HLA a nivel de alelo entre el donante y el receptor de trasplantes de HPC es importante para evitar el rechazo del
trasplante y la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD, por sus siglas en inglés). Los anticuerpos HLA preformados y la compatibilidad con
ABO son menos importantes en los trasplantes de HPC en comparación con los trasplantes de órganos sólidos.

Enfermedad de injerto contra huésped

En el trasplante de HPC, el riesgo de GVHD aumenta si el emparejamiento HLA no está cerca. La coincidencia de alelelos es importante para la
supervivencia óptima del injerto. La GVHD ocurre cuando las células inmunocompetentes injertadas de un donante montan una respuesta inmune
contra el tejido del huésped.
Debido a que los receptores de los trasplantes de HPC a menudo están inmunosuprimidos para permitir el injerto celular del donante, este proceso
es más probable que ocurra. Los síntomas clínicos incluyen erupción cutánea, diarrea e ictericia, y la GVHD puede ser fatal si no se trata. GVHD
también puede ocurrir en pacientes inmunocomprometidos que reciben componentes sanguíneos de donantes relacionados. La irradiación de los
componentes sanguíneos de los familiares de primer grado se realiza para reducir el riesgo de proliferación de leucocitos transfundidos en el
huésped. La irradiación evita que los leucocitos viables dentro del componente sanguíneo se repliquen. Leucocito la reducción de los componentes
sanguíneos es insuficiente para evitar la GVHD porque incluso pequeñas cantidades de leucocitos pueden proliferar en un paciente susceptible. Sin
embargo, en el caso de un receptor de médula ósea, la irradiación de las células progenitoras está contraindicada porque las células madre viables
que son capaces de proliferar son esenciales. Los productos sanguíneos, como las plaquetas y los glóbulos rojos, que a menudo se proporcionan a
los pacientes después de un trasplante de médula ósea, deben ser irradiados. El capítulo 15 proporciona una discusión más detallada del
trasplante.

ANTIGENOS DE PLAQUETAS
Las plaquetas poseen proteínas de membrana heredadas que también pueden provocar una respuesta inmune. Los anticuerpos plaquetarios se
encuentran con menos frecuencia porque hay menos variabilidad de antígenos en la población. Los anticuerpos contra los antígenos plaquetarios
son la causa principal de aloinmunidad neonatal trombocitopenia (NAIT), en la cual los aloanticuerpos maternos contra el antígeno heredado del
padre pueden causar la destrucción de plaquetas fetales. La púrpura postransfusión (PTP), en la cual las plaquetas de un receptor de transfusión se
destruyen después de la transfusión, es causada por Anticuerpos plaquetarios. Los anticuerpos plaquetarios también pueden disminuir el
incremento esperado de plaquetas después de una transfusión de plaquetas. El anticuerpo plaquetario más común está dirigido contra el antígeno
HPA-1a, también conocido como PlA1. La HPA-1a está presente en las plaquetas de aproximadamente el 98% de la población.2 En los casos de
NAIT, en los que el anticuerpo de la madre se dirige contra el antígeno plaquetario del lactante, la terapia consiste en plaquetas maternas lavadas o
plaquetas antígeno negativo de un donante que es HPA-1a-negativo. Los receptores de plaquetas que se han vuelto refractarios, además del
emparejamiento HLA, se pueden comparar con un método de prueba diseñado para detectar plaquetas incompatibilidad antigénica.

INTRODUCCIÓN A LAS PRUEBAS RUTINAS EN INMUNOHEMATOLOGÍA

Los procedimientos básicos en inmunohematología se derivan del principio de colocar una fuente de antígeno y una fuente de anticuerpo en un
entorno de prueba para detectar una reacción Ag-Ab (fig. 2-1). La evidencia de la formación de una reacción de Ag-Ab in vitro ha sido
tradicionalmente la visualización de aglutinantes o la presencia de hemólisis dentro del tubo de ensayo. Técnicas alternativas para la detección de
reacciones de Ag-Ac están disponibles basado en sistemas de detección que utilizan gel y tecnología de adherencia en fase sólida. Estos métodos
todos comparten denominadores comunes: una fuente de antígeno y una fuente de anticuerpos agregados a un entorno de prueba.
Selección de la fuente apropiada de antígeno o anticuerpo para su inclusión en el procedimiento depende del propósito o intención de la prueba.
Es la prueba dirigida hacia la detección ¿La presencia o ausencia de un antígeno de glóbulos rojos en particular? O es la prueba dirigida hacia
¿Detectando la presencia o ausencia de un anticuerpo de célula roja particular? En cualquier situación, no independientemente de qué variable se
desconoce en las pruebas, se utiliza una fuente conocida para la otra variable.
Si la variable desconocida es el antígeno, la fuente de antígeno desconocida se combina con una fuente conocida de anticuerpos para permitir
reacciones de Ag-Ab. En el procedimiento para detectar la presencia del antígeno B en los glóbulos rojos de un paciente, los glóbulos rojos se
combinan con una fuente de anticuerpo comercial, reactivo anti-B. Si el antígeno B está presente en las células rojas, la aglutinación se observa en
el tubo de ensayo. Si el antígeno B está ausente en los glóbulos rojos, no hay aglutinación se observa en el tubo de ensayo (fig. 2-2).

Fig. 2-1 Pruebas de rutina en el laboratorio de inmunohematología. Se añaden fuentes de antígeno de glóbulos rojos y fuentes de anticuerpos del
suero. Un resultado positivo es la reacción de Ag-Ab mostrada como aglutinación. (Modificado de Immunobase, Bio-Rad Laboratories, Inc.,
Hercules, CA.)

Fig. 2-2 Ejemplo de una prueba de rutina. Los glóbulos rojos del paciente se analizan para detectar la presencia de antígeno B con un reactivo de
anticuerpo comercial, anti-B. La presencia de aglutinación indica que los glóbulos rojos del paciente contienen antígenos B. (Modificado de
Immunobase, Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA.)
FUENTES DE ANTIGENO PARA PRUEBAS
Las fuentes de antígeno para pruebas inmunohematológicas incluyen los glóbulos rojos reactivos o los glóbulos rojos de muestras de sangre del
paciente o donante. Los glóbulos rojos reactivos son células preparadas comercialmente suspensiones El fabricante de glóbulos rojos reactivos ha
identificado previamente muchos de los antígenos de células rojas. Por lo tanto, estos glóbulos rojos reactivos proporcionan fuentes conocidas de
antigenos de glóbulos rojos. Al usar un antígeno conocido, se puede detectar o identificar un anticuerpo desconocido basado en una reacción
positiva o negativa.
Cuando se usan suspensiones de glóbulos rojos de la muestra de un paciente, los antígenos de glóbulos rojos son los factor desconocido. Los
glóbulos rojos del paciente se analizan con un anticuerpo conocido para determinar La identidad del antígeno. Cuando se usa un anticuerpo
conocido, los antígenos desconocidos en los glóbulos rojos del paciente se pueden detectar en función de la reacción de aglutinación. Si el antígeno
está presente,
la aglutinación es visible. Si el antígeno está ausente, no se observa aglutinación (ver Fig. 2-2).

FUENTES DE ANTICUERPOS PARA PRUEBAS

Las fuentes de anticuerpos para pruebas inmunohematológicas incluyen antisueros comerciales o suero o plasma del paciente. Los antisueros
comerciales contienen anticuerpos de glóbulos rojos conocidos y se utilizan para identificar antígenos desconocidos.
Los anticuerpos también pueden estar presentes en el suero o plasma de muestras de sangre de pacientes o donantes. Al igual que los antígenos
de los pacientes, los anticuerpos producidos por los pacientes suelen ser desconocido. Las muestras de suero o plasma del paciente se analizan
para detectar la presencia de anticuerpos de glóbulos rojos utilizando una fuente de antígeno conocida para identificación o detección (Tabla 2-1).

PROCEDIMIENTOS DE PRUEBAS RUTINAS EN EL LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGÍA

Varios procedimientos universales en inmunohematología aplican estos principios en las pruebas de muestras de pacientes antes de la transfusión
con hemoderivados que contienen glóbulos rojos o en las pruebas de muestras de donantes. La tabla 2-2 enumera las fuentes de antígeno y
anticuerpo en estos procedimientos
• Escritura ABO y D para la detección de los antígenos A, B y D
• Pruebas de suero / plasma ABO para la detección de anticuerpos
ABO, anti-A y anti-B
• Determinación de la presencia o ausencia de antígenos de células
rojas de otros grupos sanguíneos sistemas en muestras de pacientes
y donantes (por ejemplo, analizando una unidad donante para el
antígeno E de el sistema del grupo sanguíneo Rh)
• Pantalla de anticuerpos (detección de anticuerpos) para la
detección de anticuerpos preformados contra rojo antígenos
celulares como resultado de la exposición previa a los glóbulos rojos
a través de la transfusión y el embarazo
• Identificación de anticuerpos para la determinación de la
especificidad de anticuerpos de glóbulos rojos después de detección
con la pantalla de anticuerpos.
• Prueba cruzada para el control serológico de la unidad donante y la
compatibilidad del paciente antes de transfusión
INTRODUCCIÓN A LOS REACTIVOS BANCARIOS DE SANGRE
Como se introdujo en la sección anterior, los glóbulos rojos reactivos y los anticuerpos comerciales se usa habitualmente en el banco de sangre
para detectar reacciones de Ag-Ab. Estos reactivos son las herramientas de bancos de sangre, permitiendo el suministro de productos sanguíneos
seguros y viables. Tecnologos usan estas herramientas que requiere un conocimiento técnico del uso correcto de los reactivos y las limitaciones de
cada reactivo para interpretar los resultados de las pruebas de pacientes y donantes rápidamente. Una discusión de la composición, fuentes, usos y
limitaciones de los reactivos se presenta a continuación una visión general de los aspectos regulatorios de la fabricación de reactivos.
REGLAMENTO DE FABRICACIÓN DE REACTIVOS
Los productos comerciales de antisueros y glóbulos rojos reactivos están autorizados por el Centro de Biológicos Evaluación e investigación de la
Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA). La publicación, Código de Regulaciones Federales, describe los criterios de la
FDA para la licencia de Reactivos en conjunto con otras regulaciones para la fabricación de sangre y componentes de la sangre. La FDA ha
establecido estándares mínimos relacionados con la especificidad del producto y potencia para uso en bancos de sangre y servicios de transfusión
antes de que se asigne una licencia a un reactivo comercial. La especificidad refleja el reconocimiento único del determinante antigénico y su
correspondiente molécula de anticuerpo. Por ejemplo, los comerciales anti-D reaccionan con glóbulos rojos que poseen antígenos D y no reacciona
con glóbulos rojos que carecen de antígenos D. La potencia aborda la fuerza de la reacción Ag-Ab. Por ejemplo, anti-A comercial los reactivos se
fabrican para aglutinar fuertemente (3+ a 4+) con glóbulos rojos que poseen el antígeno.
Cuando un fabricante ha demostrado que un producto cumple con la especificidad de la FDA y requisitos de potencia, al reactivo se le asigna un
número de licencia de producto que se muestra en la etiqueta del producto. Cada producto también está etiquetado con la fecha de vencimiento
del fabricante.
De acuerdo con las regulaciones de la FDA, los reactivos de bancos de sangre de rutina no se pueden usar en las pruebas después de la fecha de
vencimiento. Se pueden hacer excepciones a esta regla para los antisueros raros y las células rojas si el reactivo tiene resultados de control de
calidad aceptables. Si se producen reactivos para uso interno (dentro de las instalaciones), no se requiere una licencia. En esta situación, la FDA los
requisitos de especificidad y potencia también deben cumplirse y documentarse.
Cada fabricante proporciona un paquete o inserto de producto al consumidor que describe en detalle el reactivo, uso previsto, resumen, principio,
procedimiento para el uso adecuado, las características de rendimiento específicas y las limitaciones del reactivo. Laboratorio los procedimientos
operativos estándar (SOP) se escriben para reflejar los procedimientos descritos en estos insertos de productos. A medida que se reciben nuevos
lotes de reactivos en el banco de sangre, el producto los insertos deben ser revisados para cualquier cambio de procedimiento. Cualquier revisión
debe ser incorporada en los SOP antes de la introducción del reactivo en las pruebas de rutina. El cumplimiento total con las instrucciones del
fabricante no se puede exagerar porque ese documento detalla los procedimientos apropiados y recomienda los controles de reactivos apropiados
para la interpretación precisa de los resultados de las pruebas.

CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS

El control de calidad es el término asignado a los procedimientos técnicos diseñados para determinar si la fase de prueba analítica está
funcionando correctamente El control de calidad incluye controles en reactivos y equipos de bancos de sangre antes de su uso en pruebas en
pacientes o donantes
muestras Los requisitos para el control de calidad se obtienen de las regulaciones, acreditación de estándares, inserciones de productos del
fabricante y requisitos estatales y locales. Usando estos requisitos, cada laboratorio establece protocolos de control de calidad para la validación y
documentación de reactivos y función del equipo. El control de calidad de los reactivos es realizado diariamente en reactivos comerciales de
eritrocitos y antisueros. Estos reactivos son probados para determinar si cumplen con los criterios de rendimiento aceptables preestablecidos.
Los componentes de un programa de control de calidad para reactivos de bancos de sangre incluyen los siguiente:

1. Declaración de criterios para el rendimiento aceptable de los reactivos. Los requisitos para el rendimiento aceptable de un reactivo se detallan en
las COMPENSACIÓN. Típicamente, la potencia de la reacción de aglutinación define la aceptabilidad de el rendimiento del reactivo cuando se
desafía con el antígeno de glóbulos rojos correspondiente por ejemplo, el anti-A se prueba contra los glóbulos rojos reactivos que se sabe que
poseen el antígeno A. Cuando el reactivo anti-A y los glóbulos rojos del grupo A se combinan, se produce una reacción de 3+ a 4+.
esperado para el rendimiento óptimo del reactivo. Cuando el anti-A reacciona con el grupo B células rojas, no se espera aglutinación. Si los
resultados de la aglutinación son menos de 3+ en fuerza con glóbulos rojos del grupo A (por ejemplo, 2+ o menos), la potencia del reactivo anti-A
puede ser deteriorándose La pérdida de la fuerza de aglutinación a lo largo del tiempo es un indicador de una pérdida de potencia, y la capacidad
de detectar antígenos A en muestras de pacientes es potencialmente comprometida.
2. Documentación de uso de reactivos. Los reactivos se prueban y los resultados de las pruebas de control de calidad se registran y revisan.
Se deben mantener registros de las pruebas de control de calidad, incluidos los resultados, interpretaciones, fecha de prueba e identidad del
personal que realiza la prueba.
3. Acciones correctivas por falta de rendimiento. Acciones correctivas apropiadas para los reactivos que no cumplen con los requisitos de
rendimiento
Debe ser descrito en el SOP.

REACTIVOS DE ANTICUERPOS COMERCIALES PRODUCTOS DE ANTICUERPOS POLICCLONALES VERSUS MONOCLONALES

Un producto de anticuerpo reactivo ideal contiene una suspensión concentrada de alta especificidad, moléculas de inmunoglobulina reactivas
uniformemente bien caracterizadas. Preparado comercialmente los reactivos de anticuerpos pueden ser policlonales basados en anticuerpos o
monoclonales productos a base de Si múltiples clones de células B secretan anticuerpos en una respuesta inmunológica a un antígeno extraño, el
antisuero producido se llama policlonal. Si el anticuerpo es el producto de un solo clon de células B, el reactivo producido se llama monoclonal

Fig. 2-3 Comparación de las respuestas inmunes policlonales y monoclonales. Respuestas inmunitarias policlonales:
después de la exposición al antígeno, la respuesta inmune activa múltiples clones de células B para secretar anticuerpos
de diferentes especificidades. En respuesta, el antígeno, anti-1, anti-2, anti-3 y anti-4 fueron secretados por diferentes
clones de células B. Respuestas inmunitarias monoclonales: un solo clon de células B está activo por la respuesta
inmunitaria y secreta un anticuerpo con una especificidad (anti-1).
 Reactivos de anticuerpos policlonales
Hasta la introducción más reciente de reactivos de bancos de
sangre basados en anticuerpos monoclonales, los antisueros
comerciales se derivaron de fuentes policlonales como resultado
de la inmunización de animales y humanos con antígenos
purificados. Técnicas de separación que consumen tiempo se
utilizaron para producir los antisueros policlonales. En la
respuesta inmune policlonal, las células B secretan anticuerpos
que son específicos para los epítopos múltiples del antígeno
inyectado. Una población heterogénea de anticuerpos es hecho
reconociendo diferentes epítopos en un solo antígeno. Ejemplos
de antisuero policlonal producidos para las pruebas en el banco
de sangre se conocen como reactivos de globulina antihumana
(AHG). Estos productos contienen múltiples especificidades de
anticuerpos dirigidos hacia diferentes antígenos en la inyección
de inmunización o hacia diferentes partes de un antígeno
purificado inyectado para una respuesta inmune.
El suero policlonal de IgG antihumana se produce al inmunizar
conejos purificados moléculas de IgG humana. Los conejos
responden mediante la activación de múltiples clones de células B. Cada clon de células B produce un anticuerpo dirigido a un epítopo específico de
la molécula de IgG.
La combinación de los múltiples clones de células B que secretan muchos anticuerpos en el conejo. El suero produce un reactivo de anticuerpo
policlonal (fig. 2-3).

Reactivos de anticuerpos monoclonales

En contraste con los antisueros policlonales, la producción de anticuerpos
monoclonales crea un inmortal clon que fabrica anticuerpos de una
especificidad definida (Fig. 2-4). Anticuerpos monoclonicos se fabrican in
vitro utilizando tecnología de hibridoma. Anticuerpos monoclonicos son los
productos de un solo clon de células B. Los ratones se inmunizan con
antígeno; los bazos se recolectan y fusionan con una célula anormal de un
ratón que produce mieloma células híbridas. Estas células híbridas
(hibridomas) se cultivan, crecen rápidamente y se criban para la producción
de anticuerpos. Cada hibridoma desciende de un único clon de células B.
Todas las células de la línea celular de hibridoma producen la misma
molécula de anticuerpo, llamada anticuerpo monoclonal. En contraste con
los anticuerpos policlonales, los anticuerpos monoclonales reconocen un
epítopo específico del antígeno inmunizado. Reactivos basados en
anticuerpos monoclonales se introdujeron en el banco de sangre para
reemplazar reactivos de base policlonal por necesidad y conveniencia.
Ejemplos de FDA aprobados los anticuerpos monoclonales incluyen anti-A,
anti-B, anti-A, B, anti-D, anti-C, anti-E, Anticuerpos anti-c, anti-e, anti-IgG,
anti-C3b, anti-C3d y otros sistemas de grupos sanguíneos.

Fig. 2-4 Producción de anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales son los productos de un único clon de células B. A, los ratones se
inmunizan con antígeno. B, los bazos se recogen para las células inmunes. C, las células formadoras de anticuerpos se fusionan con una célula
tumoral de un ratón en un proceso llamado fusión. D, las células híbridas (hibridomas) se forman, se cultivan y crecen rápidamente. E, los
hibridomas se seleccionan para la producción del anticuerpo deseado. F, cada hibridoma desciende de un único clon de células B. G, la línea celular
del hibridoma se expande y forma la misma molécula de anticuerpo. (Modificado de Immucor, Norcross, GA.)

Los reactivos de anticuerpos monoclonales tienen la ventaja de producir grandes cantidades de anticuerpo deseado con consistencia de lote a lote
de una sola especificidad.
Los reactivos basados en anticuerpos monoclonales se utilizan correctamente en las pruebas serológicas siguiendo estas pautas:
• Revisión cuidadosa de las inserciones de los productos del fabricante para su uso limitado y uso correcto
• Adherencia a las instrucciones del fabricante para la prueba.
• Reconocimiento de las características relevantes del clon de hibridoma.
Los anticuerpos monoclonales pueden variar en el reconocimiento de un antígeno de glóbulos rojos porque los GR pueden no expresar todos los
determinantes antigénicos. Algunos reactivos de anticuerpos monoclonales son mezclas de más de un anticuerpo monoclonal para permitir un
mejor reconocimiento del antígeno.
• Revisión de la formulación del fabricante.
Concentraciones de proteínas en la formulación de productos producidos por diferentes fabricantes puede variar. La mayoría de estos reactivos de
anticuerpos monoclonales poseen una baja concentración (3% a 8%) de proteína.

Reactivos de anticuerpos monoclonales y policlonales

Los anticuerpos monoclonales y policlonales también se mezclan para producir reactivos con ventajas en pruebas de banco de sangre. Reactivos
antiglobulina, discutidos más adelante en este capítulo, puede ser una combinación de anticuerpos policlonales de conejo y un anticuerpo
monoclonal murino (ratón).
Se resumen las diferencias entre los reactivos basados en anticuerpos monoclonales y policlonales. en la tabla 2-3.

REACTIVOS PARA EL TIPO ANTÍGENO ABO

Los reactivos comerciales anti-A y anti-B se utilizan para determinar si el rojo de un individuo las células poseen los antígenos A o B del sistema de
grupos sanguíneos ABO. Las células rojas del donante o paciente (antígeno desconocido) se combinan con antisueros comerciales (anticuerpos
conocidos) y observado por la presencia o ausencia de aglutinación. La aglutinación indica la presencia de antígeno; ninguna aglutinación indica la
ausencia de antígeno en los glóbulos rojos analizados (Tabla 2-4).
Según los resultados de las pruebas, se asigna un tipo de sangre ABO al paciente o al donante.
Existen cuatro tipos de sangre principales en el sistema de grupos sanguíneos ABO: Grupo A, B, AB y O. Los individuos A poseen el antígeno A y
carecen del antígeno B. Grupo B posee antígeno B y carece del antígeno A. Los individuos del grupo AB poseen antigenos tanto la A como la B los
individuos del grupo O carecen de los antígenos A y B. El procedimiento para determinar la asignación del sistema de grupo sanguíneo ABO se ha
denominado agrupación ABO, ABO adelante Agrupación, escritura frontal y pruebas de glóbulos rojos ABO. El Manual Técnico de la AABB.
(anteriormente, la Asociación Americana de Bancos de Sangre) se refiere al acto de escribir, o determinar el ABO de los glóbulos rojos de un
individuo como un tipo en lugar de un grupo. Este libro de texto adopta la terminología AABB y se refiere a la determinación de un individuo Tipo
ABO (fenotipo), no un grupo ABO. Muchas otras referencias aún conservan la terminología de la agrupación ABO. El nombre de la FDA para estos
reactivos sigue siendo "agrupación ABO reactivos ".
Los primeros reactivos de tipificación de glóbulos rojos ABO se derivaron de plasma humano agrupado fuentes. Los anticuerpos policlonales se
obtuvieron de individuos que fueron estimulados con A o B sustancias del grupo sanguíneo para producir anticuerpos de alto título. Fabricantes de
hoy se use anticuerpos monoclonales para formular reactivos de tipificación ABO. Fabricantes de reactivos citan muchos beneficios a la adopción
de reactivos monoclonales murinos, incluyendo el reconocimiento de antígenos A y B más débiles, la eliminación de anticuerpos contaminantes,
rentabilidad y la disponibilidad de una fuente de reactivo que no dependa de los fuentes de recursos humanos.
Los reactivos de tipificación ABO del anticuerpo monoclonal murino se probaron para cumplir con la potencia de la FDA y requisitos de
especificidad antes de la licencia. Los anticuerpos se suspenden en un diluyente que generalmente no excede un 6% de concentración de albúmina
bovina y se considera una medio bajo en proteínas. Los reactivos de tipificación de células rojas anti-A y anti-B se formulan para demostrar fuertes
reacciones de aglutinación (3+ a 4+) para la mayoría de los antigenpositivos glóbulos rojos. Las pruebas se realizan en fases de giro inmediato.
Fabricantes recomendar que las pruebas se confirmen comprobando los anticuerpos ABO esperados usando Reactivo de glóbulos rojos. Anti-A
siempre contiene un tinte azul, mientras que anti-B contiene un amarillo colorante. Estos tintes se agregaron para reducir posibles errores en las
pruebas. Un resumen de ABO Los reactivos de mecanografía se presentan en la figura 2-5.

Los reactivos de tipificación ABO están etiquetados con la especificidad del anticuerpo y una frase que especifica cómo se puede utilizar el
producto. Por ejemplo, una botella de anti-A puede contener la frase “Para pruebas de diapositivas, tubos y microplacas”. Esta declaración
especifica el método de prueba en el que el producto se puede utilizar de acuerdo con su licencia de la FDA. Los métodos detallados se
proporcionan en el prospecto del producto, junto con las características únicas de cada producto.

REACTIVOS PARA EL TIPO DE ANTIGENO D

De los antígenos dentro del sistema de grupo sanguíneo Rh, el antígeno D es el más importante en los bancos de sangre de rutina. El antígeno D se
ha relacionado con consecuencias adversas en pacientes, incluidas las reacciones de transfusión hemolítica y la enfermedad hemolítica del feto y
recién nacido (HDFN). Debido a su mayor inmunogenicidad como antígeno del grupo sanguíneo, D la tipificación de antígenos de todas las muestras
de pacientes y donantes es requerida por los Estándares AABB para Bancos de sangre y servicios de transfusión. Este requisito permite la distinción
de Individuos D-positivos y D-negativos.
En el procedimiento de tipificación D, el anti-D comercial se combina con el paciente o el donante rojo células. La aglutinación indica la presencia
del antígeno D en los glóbulos rojos analizados (por ejemplo, D-positivo), y no hay aglutinación en estas pruebas indica la ausencia del antígeno D
(por ejemplo, D-negativo). Un control de reactivo negativo garantiza que no se presente un resultado falso positivo (Tabla 2-5).
Fig. 2-5 Resumen de los reactivos ABO. Los bancos de sangre están utilizando anticuerpos monoclonales para los reactivos ABO en las pruebas de
rutina. (Modificado de Immucor, Norcross, GA.)

Históricamente, los reactivos para la tipificación D se han obtenido de diversas fuentes los reactivos se dividieron en dos categorías: reactivos con
alto contenido en proteínas y con bajo contenido en proteínas. Alto en proteína Los reactivos de origen policlonal humano se utilizaron por
primera vez para la mayoría de la tipificación D de rutina. Reactivos de baja proteína formulados con anticuerpos anti-D monoclonales o
monoclonales y las mezclas de anticuerpos policlonales han reemplazado estos reactivos de alto valor proteico. Similar a ABO reactivos de
tipificación, los reactivos de tipificación D se marcan con la especificidad del anticuerpo y una frase que especifica cómo se puede utilizar. Esta
declaración especifica el método de prueba en el cual el producto se puede utilizar de acuerdo con su licencia de la FDA. Los métodos detallados y
los únicos. Las características de cada producto se proporcionan en el folleto del producto (Fig. 2-6). Adicionalmente a D, se encuentran disponibles
productos similares para la fenotipificación de otros antígenos dentro del sistema de grupos sanguíneos Rh, como C, E, c y e.

Fig. 2-6 Resumen de los reactivos para el fenotipo D-antígeno. Los bancos de sangre están usando anticuerpos monoclonales o mezclas de
anticuerpos policlonales y monoclonales para el reactivo D en las pruebas de rutina. (Modificado de Immucor, Norcross, GA.)

Los reactivos monoclonales anti-D poseen una formulación diluyente baja en proteínas, similar en concentración de proteína en el diluyente de los
reactivos ABO (aproximadamente 6% de bovino albúmina). Los reactivos monoclonales anti-D se derivan de un heterohibridoma humano-murino
las fuentes, son IgM y, a menudo, se formulan con varios clones diferentes para garantizar la reactividad con el antígeno D. Algunos fabricantes
mezclan monoclonal (IgM) y anticuerpos policlonal (IgG) para permitir la detección de antígeno D débil con el mismo reactivo. El diluyente bajo en
proteínas no promueve la aglutinación falsa positiva asociada con el uso de reactivos de tipificación D de alta proteína. Estos reactivos no requieren
un Rh separado prueba de control
Se han producido discrepancias en el fenotipo del antígeno D en pacientes como consecuencia de formulaciones anti-D de anticuerpos
monoclonales diferentes utilizadas en la fabricación de reactivos. Las formulaciones de anticuerpos monoclonales para anti-D pueden variar en la
capacidad de detectar D parcial antígeno y fenotipos débiles. Los laboratorios de servicios de transfusión y bancos de sangre pueden Utilice
diferentes reactivos de anticuerpos monoclonales anti-D. Se pueden observar discrepancias de tipografia dependiendo de la fuente comercial de
anti-D. Una comprensión del fabricante las formulaciones de clones y las limitaciones de los reactivos son importantes en la resolución de estas
discrepancias.

CONTROL DE REACTIVOS DE BAJA PROTEINA

Se utiliza un control de reactivos para garantizar que los resultados de tipificación se interpretaron correctamente el control no debe mostrar
aglutinación (un resultado negativo). Los reactivos tipográficos ABO y D están formulados con concentraciones de proteínas similares a las del
suero humano (aproximadamente 6%). albúmina bovina). A esta baja concentración proteica, la aglutinación espontánea del las células rojos se
producen con menos frecuencia que con los reactivos formulados con concentraciones más altas de proteína. La aglutinación espontánea de
glóbulos rojos puede causar un resultado falso positivo en la tipificación. Pueden producirse resultados de pruebas falsos positivos si se producen
autoanticuerpos fríos fuertes o anomalías de proteínas Están presentes en la muestra de sangre. Un resultado negativo utilizando reactivos ABO
bajos en proteínas puede servir como control de reactivos. Un control de reactivo adicional en la tipificación ABO y D no es esencial si el paciente o
el donante de glóbulos rojos no muestran aglutinación con anti-A, anti-B o Anti-D en la prueba de glóbulos rojos. Si los glóbulos rojos se aglutinan
con anti-A, anti-B y anti-D, se requiere control de reactivos para interpretar los resultados. El control del reactivo debe ser realizado según lo
descrito por el fabricante del reactivo (Tabla 2-6).

Células rojas del reactivo

A1 Y B CELULAS ROJAS PARA PRUEBAS DE SERUM ABO

Probar el suero o plasma de un paciente con glóbulos rojos del grupo A1 comercial y del grupo B confirma la tipificación ABO realizada en los
glóbulos rojos del paciente. Conocido como ABO inverso agrupando o pruebas de suero ABO, este procedimiento detecta anticuerpos ABO. Los
pacientes poseen el anticuerpo dirigido contra el antígeno del sistema ABO que falta en su GR. Los pacientes con antígeno A en sus glóbulos rojos
(por ejemplo, grupo A) poseen el antígeno A y falta el antígeno B. Estos pacientes poseen anticuerpos anti-B en su plasma. Suero o las muestras de
plasma de los individuos del grupo A se aglutinan con los glóbulos rojos del reactivo B pero no con reactivo A1 glóbulos rojos. Pacientes con el
antígeno B en sus glóbulos rojos (por ejemplo, grupo B) posee el antígeno B y carece del antígeno A. Estos pacientes poseen anticuerpos anti-A en
su plasma. Muestras de suero o plasma de individuos del grupo B aglutinados con reactivo de GR A1 pero no con glóbulos rojos reactivos B.
Comparado con las pruebas de células rojas con comerciales reactivos anti-A y anti-B, los resultados de los anticuerpos ABO proporcionan una
confirmación o verificación de la escritura ABO asignada (Tabla 2-7).
Los glóbulos rojos reactivos para la prueba del suero se obtienen de donantes humanos seleccionados y son fabricado en varios paquetes
opcionales. El paquete más utilizado consiste en de un conjunto de dos frascos de glóbulos rojos A1 y B. Dependiendo del fabricante, la fuente de
células rojas
se puede obtener de un solo donante o de un grupo de varios donantes. Durante el proceso de fabricación, todos los reactivos se lavan para
eliminar de la sangre los anticuerpos del grupo y se resuspenden a una concentración del 2% al 5% en un conservante tamponado solución para
minimizar la hemólisis y la pérdida de antigenicidad durante el período de datación.
Estas preparaciones de glóbulos rojos son generalmente negativas para los antígenos Rh D, C y E. Cada uno del lote de reactivos se prueba para
cumplir con los estándares de especificidad de la FDA; Sin embargo, no hay estándar de potencia. Existe requisito para este reactivo. Los glóbulos
rojos reactivos no deben utilizarse si las células rojas se oscurecen, se aglutinan espontáneamente en el vial de reactivo o muestran una hemólisis.

Fig. 2-7 Ejemplo de un antigrama para células de cribado comercial. El antigrama es un perfil de tipificación de antígenos
de cada donante utilizado en las células de cribado. +, El antígeno está presente en la célula de selección; 0, el antígeno
está ausente en la célula de cribado.

Células de detección
Las células de detección se utilizan en las pruebas de detección de anticuerpos (detección de anticuerpos). Este procedimiento se ve para
anticuerpos con especificidad a antígenos de glóbulos rojos en muestras de pacientes y donantes. Pacientes y los donantes pueden tener
anticuerpos preformados para antígenos de glóbulos rojos como resultado de la exposición a antígenos de glóbulos rojos extraños de transfusiones
o embarazos previos. Para fines de transfusión, la detección de estos anticuerpos de glóbulos rojos preformados en una muestra de paciente o
donante es un paso importante en la provisión de productos de glóbulos rojos. Los glóbulos rojos reactivos se obtienen de fuentes donantes del
grupo O y son comercialmente disponible como conjuntos de dos o tres viales. Los donantes del grupo O son seleccionados porque el grupo del
fenotipo O carece de antígenos A y B, por lo que estos glóbulos rojos no reaccionan con los anticuerpos ABO presente en suero o plasma de
paciente o donante. Suero o plasma de cualquier ABO el tipo se puede usar en la prueba de detección de anticuerpos sin interferencia de los
anticuerpos ABO.
Cada vial en estos conjuntos representa los glóbulos rojos recolectados de un solo donante. Adicionalmente, un producto con células de cribado
agrupadas está disponible comercialmente y contiene un grupo O glóbulos rojos derivados de dos donantes en proporciones iguales.
Según los Estándares AABB para Bancos de Sangre y Servicios de Transfusión, las pruebas para anticuerpos realizados en especímenes receptores
(por ejemplo, especímenes de un paciente que puede ser recibir una transfusión) requieren células de detección no agrupadas. Las pruebas de los
receptores deben maximizar la sensibilidad para detectar la presencia de anticuerpos débilmente reactivos. Porque un pooled el reactivo de
glóbulos rojos disminuye la capacidad de detectar un anticuerpo débilmente reactivo, este reactivo no se recomienda para las muestras receptoras.
Las células de cribado agrupadas son aceptables en cribado de donantes para anticuerpos de glóbulos rojos.

Cada lote de células de cribado de reactivos llega con un perfil antigénico acompañante, o Antigrama, de cada donante (fig. 2-7). Las células de
cribado autorizadas por la FDA requieren un perfil antigénico capaz de detectar la mayoría de los anticuerpos de células rojas clínicamente
significativos. Los antígenos de grupo sanguíneo que deben expresarse en las células de selección incluyen D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1, Lea, Leb, K, k,
Fya, Fyb, Jka y Jkb. La reactividad del reactivo disminuida puede ser observado a medida que las células de detección se acercan al final de su
período de datación. Debido al peligro de deterioro del antígeno, estas células de detección no deben utilizarse más allá de su fecha de caducidad.
Cualquier signo de hemólisis, decoloración o aglutinación importantes podría indicar contaminación.

PANELES DE IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS

Se requieren paneles de identificación de anticuerpos de glóbulos rojos para determinar la especificidad de un anticuerpo de glóbulos rojos en un
procedimiento de banco de sangre llamado identificación de anticuerpos (discutido en el capítulo 7). El suero del paciente o del donante se analiza
con las células del panel de reactivos para identificar un anticuerpo contra los antígenos de células rojas. Estos glóbulos rojos reactivos poseen las
mismas fuentes como las células de cribado (donantes individuales del grupo O). Los paneles de identificación de anticuerpos son empaquetado en
juegos de 10 o más, dependiendo del fabricante individual. El donante seleccionado para los paneles de identificación poseen la mayoría de los
heredados más frecuentemente antígenos de células rojas. Se proporciona un perfil antigénico de cada donante con cada número de lote de celdas
del panel. Un laboratorio a menudo tiene varios paneles obsoletos para ayudar a resolver problemas de anticuerpos.
Es importante utilizar el antigrama correcto de acuerdo con el número de lote del panel cuando la selección del panel utilizado para la
identificación de anticuerpos. La figura 2-8 resume los distintos tipos de Reactivos de glóbulos rojos.

ANTIGLOBULINA DE PRUEBA Y REACTIVOS

PRINCIPIOS DE LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA
En 1945, Coombs, Mourant y Race10 demostraron que los glóbulos rojos pueden combinarse con anticuerpos sin producir aglutinación. Estos
investigadores prepararon un anticuerpo que reaccionaron con globulinas humanas (por ejemplo, una familia de proteínas humanas) y usaron este
reactivo para aglutinar los eritrocitos recubiertos de anticuerpos. El reactivo se llamó globulina antihumana (AHG); el procedimiento se conoce
como la prueba de antiglobulina. Esta prueba se aplica a mucha sangre de protocolos de pruebas bancarias y proporciona información importante.
La prueba de antiglobulina es Importante porque detecta anticuerpos IgG y proteínas del complemento que se han adherido a los glóbulos rojos, ya
sea in vitro o in vivo, pero no muestran aglutinación visible en las pruebas.
El principio de la prueba de antiglobulina no es complicado. La prueba utiliza un reactivo que ha sido preparado inyectando animales (por ejemplo,
conejos) con moléculas de anticuerpos humanos (IgG humana) y proteínas del complemento. En estos animales se reconocen las proteínas
inyectadas como antígenos extraños, estimulando el sistema inmune del animal para producir anticuerpos a moléculas de anticuerpos humanos y
proteínas del complemento. El reactivo, poliespecífico AHG, contiene anticuerpos contra moléculas de IgG (anti-IgG) y proteínas del complemento
(anti-C3d, anti-IgG, C3b). Este reactivo AHG reacciona con el anticuerpo IgG humano y las proteínas del complemento ya sea libremente presente
en suero o unido a antígenos en las células rojas. Es esencial que los glóbulos rojos primero se lavan con solución salina fisiológica para eliminar
cualquier molécula no unida antes de la adición del reactivo AHG. El paso de lavado de una prueba de antiglobulina requiere la Relleno de tubos de
ensayo con solución salina para mezclar con los glóbulos rojos ya presentes en el tubo los glóbulos rojos en suspensión salina se centrifugan. El
lavado salino se decanta de las células rojas botón, y este proceso se repite durante dos o tres ciclos adicionales. Al término de el tercer o cuarto
lavado, la solución salina se elimina y el tubo se seca para eliminar la mayoría de los rastros de la solución salina.
El lavado de glóbulos rojos es un aspecto técnico importante en el desempeño de una prueba antiglobulina. Si los glóbulos rojos de prueba no se
lavan adecuadamente, cualquier anticuerpo o complemento no unido presente en el suero puede potencialmente unirse al reactivo AHG e inhibir
su reacción con anticuerpos o moléculas del complemento adheridas a los glóbulos rojos. Este efecto se conoce como neutralización del reactivo
AHG. La neutralización del reactivo AHG es una fuente de error en la prueba de antiglobulina porque puede enmascarar una prueba positiva de
antiglobulina. Para detectar la neutralización potencial, se agregan células sensibilizadas a IgG a los tubos con reacciones negativas. Después de la
centrifugación, debe observarse una reacción positiva para confirmar que el lavado fue adecuado.

Fig. 2-10 Prueba de antiglobulina directa. A, en el DAT, los glóbulos rojos del paciente se lavan para eliminar las
inmunoglobulinas no unidas. Se agrega B, reactivo AHG, ya sea poliespecífico o monoespecífico. Si las moléculas de IgG o
C3d están presentes en los glóbulos rojos del paciente, se observa aglutinación. El paciente tiene un resultado DAT
positivo.

Después de un lavado adecuado de glóbulos rojos, el reactivo AHG se agrega a la prueba. Si las celulas rojas en la prueba se sensibilizan con IgG o
complemento, los reactivos de AHG se entrecruzan y causan aglutinación. El anti-IgG en el reactivo AHG se adhiere a la porción Fc de la IgG
molécula que está unida a la célula roja; el anti-C3 en el reactivo AHG se une a C3 las moléculas se unen a los glóbulos rojos como consecuencia de
la activación del complemento. La formación de glóbulos rojos aglutinados después de la adición de AHG muestra que IgG o complemento las
proteínas se unieron a los glóbulos rojos (fig. 2-9). La aglutinación se interpreta como un positivo prueba de antiglobulina. No se interpreta
aglutinación al finalizar la prueba de antiglobulina como prueba de antiglobulina negativa e indica que no se detectaron proteínas IgG o del
complemento unido a los glóbulos rojos.

Fig. 2-11 Prueba de antiglobulina indirecta. En la IAT, una fuente de anticuerpos y glóbulos rojos se incuban a 37 ° C para
una Tiempo especificado para permitir que ocurran reacciones de Ag-Ab. Tras la incubación, los glóbulos rojos se lavan
para eliminar los no unidos. moléculas. Reactivo AHG, se añade anti-IgG monoespecífico. Si hay presencia de IgG en los
glóbulos rojos, la aglutinación es observado. El resultado es un IAT positivo. (Modificado de Stroup MT, Treacy M:
antígenos de grupo sanguíneo y anticuerpos.
En el laboratorio de inmunohematología se realizan dos tipos de pruebas de antiglobulina: prueba de antiglobulina directa (DAT) y prueba de
antiglobulina indirecta (IAT). La distinción entre estas pruebas a menudo son difíciles para las personas que ingresan a este campo porque ambas
pruebas usan el reactivos AHG. El DAT es una prueba en inmunohematología para detectar anticuerpos unidos al rojo Células in vivo o dentro del
cuerpo. En contraste, el IAT se utiliza en pruebas de inmunohematología para detectar anticuerpos unidos a glóbulos rojos in vitro o dentro de un
tubo de ensayo.

Prueba directa de antiglobulina

En circunstancias normales, los glóbulos rojos no están sensibilizados con IgG o complemento in vivo. El DAT está ordenado para detectar proteínas
IgG o complementarias unidas a las células del paciente, que es una consecuencia de ciertos eventos clínicos, incluyendo anemia hemolítica
autoinmune, HDFN, un mecanismo relacionado con el fármaco o una reacción de anticuerpos a los glóbulos rojos transfundidos. Un DAT positivo
es un indicador importante de la posible destrucción de glóbulos rojos mediada por el sistema inmunitario en el cuerpo. Como consecuencia de la
unión de IgG o complemento a glóbulos rojos, macrófagos están señalados para eliminarlos utilizando el sistema fagocítico mononuclear,
particularmente en el bazo. Este evento puede indicar la destrucción inmune de los glóbulos rojos y con frecuencia conduce a la anemia.
En el procedimiento DAT, los glóbulos rojos del paciente se lavan primero tres o cuatro veces con solución salina fisiológica para eliminar proteínas
no unidas. El reactivo AHG se añade después del proceso de lavado. La aglutinación con reactivo AHG indica que los anticuerpos IgG, complemento
moléculas, o ambas están unidas a los glóbulos rojos del paciente. Aglutinación después de la adición del reactivo AHG se interpreta como un DAT
positivo (Fig. 2-10). Si es poliespecífico se usa el reactivo antiglobulina, puede detectar tanto las moléculas de IgG como las del complemento en el
GR. Si el resultado de la prueba es positivo, la prueba se repite utilizando reactivos AHG monoespecíficos que son específicos para IgG y se
complementan por separado para determinar qué molécula estaba en la célula roja. No se interpreta aglutinación después de la adición del
reactivo AHG poliespecífico como un DAT negativo. Volver a realizar la prueba con AHG monoespecífico es innecesario.
Como se señaló anteriormente, un DAT positivo reconoce el anticuerpo o complemento adjunto como un resultado de un proceso clínico o evento
(Tabla 2-8). La incubación no es necesaria porque el anticuerpo unido in-vivo. La importancia de un DAT positivo debe evaluarse en relación con la
historia clínica y al estado clínico del paciente.
La muestra elegida para un DAT se recoge en un ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) tubo. Porque el complemento se puede unir
inespecíficamente a las células rojas cuando las muestras almacenados, es importante utilizar una muestra de EDTA anticoagulada al realizar esta
prueba. Debido a que el EDTA niega la activación in vitro de la vía del complemento, la prueba detecta solo las proteínas del complemento que se
han unido a los glóbulos rojos in vivo. En otras es decir, los anticuerpos dependientes del complemento no se detectarán cuando se use plasma.

Prueba de antiglobulina indirecta

El IAT está diseñado para detectar la sensibilización in vitro de los glóbulos rojos. Esta prueba es de dos etapas de procedimiento. Los anticuerpos
primero deben combinarse con antígenos de glóbulos rojos in vitro a través de una incubación paso. En esta primera etapa, una fuente de suero se
incuba a temperatura corporal con una fuente de glóbulos rojos para permitir la unión de anticuerpos IgG a antígenos de glóbulos rojos específicos
la suspensión de glóbulos rojos se lava con solución salina fisiológica para eliminar el anticuerpo no unido a complemento de proteínas. Después
del lavado de glóbulos rojos, el reactivo AHG se agrega a la prueba y centrifugado cualquier aglutinación en este paso se interpreta como un IAT
positivo. Un IAT positivo indica una reacción específica entre un anticuerpo en el suero y un antígeno presente en los glóbulos rojos (fig. 2-11).
Ninguna aglutinación en este paso se interpreta como una IAT negativa. El IAT se usa habitualmente en inmunohematología para evaluar tanto al
paciente como al muestras del donante. Varias pruebas inmunohematológicas incorporan una reacción antiglobulina indirecta. Fase en sus
procedimientos. Estos procedimientos incluyen detección de anticuerpos, anticuerpos identificación, comparación cruzada y tipificación de
antígenos (Tabla 2-9). Todos estos procedimientos son importantes en el laboratorio de inmunohematología y se analizan en capítulos. La tabla 2-
10 compara los procedimientos DAT e IAT.

FUENTES DE ERROR EN LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA

Las fuentes de error en las pruebas de antiglobulina pueden llevar a resultados falsos negativos o falsos positivos. Un resultado falso negativo es
un resultado de prueba que indica incorrectamente una reacción negativa. En la prueba de antiglobulina, no se observa aglutinación, pero los
glóbulos rojos en la prueba están sensibilizados con IgG o complemento. Se ha producido una reacción de Ag-Ab, pero no se muestra en pruebas. A
la inversa, un resultado falso positivo es un resultado de prueba que indica incorrectamente reacción positiva En las pruebas de antiglobulina, se
observa aglutinación, pero los glóbulos rojos en las pruebas no están sensibilizadas con IgG o complemento. No se ha producido ninguna reacción
de Ag-Ab en pruebas. Con una cuidadosa atención a los procedimientos de prueba, las personas que realizan el AHG las pruebas pueden evitar
muchos de estos resultados falsos positivos y falsos negativos. Fuentes comunes de error en la prueba de antiglobulina se resumen en las Tablas 2-
11 y 2-12.5

Fig. 2-12 Reactivos de globulina antihumana poliespecíficos. (Texto del Código de regulaciones federales, 21CFR 660.55,
Washington, DC, Oficina de Impresión del Gobierno de los Estados Unidos, revisada anualmente. Ilustración modificada
de Immucor, Norcross, GA.)
Fig. 2-14 Reactivos de globulina antihumana monoespecífica anti-C3d y anti-C3b. (Texto del código de federal
regulaciones, 21CFR 660.55, Washington, DC, Oficina de Impresión del Gobierno de los EE. UU., revisadas anualmente.
Ilustración modificada de Immucor, Norcross, GA.)

REACTIVOS ANTIGLOBULINA
La prueba de antiglobulina es importante para la detección de anticuerpos IgG y complemento proteínas que se han adherido a los glóbulos rojos
pero que no han resultado en una aglutinación visible.

Existen dos categorías de reactivos antiglobulina: poliespecíficos y monoespecíficos. El AHG los reactivos pueden ser productos de anticuerpos
monoclonales o productos de antisuero policlonales.

Reactivos de globulina antihumana poliespecíficos

Los reactivos de AHG poliespecíficos se utilizan principalmente en el DAT para determinar si las moléculas de IgG o complemento se han unido a los
glóbulos rojos in vivo. Este reactivo contiene anticuerpos anti-IgG y anti-C3d y detectan moléculas tanto de IgG como de C3d en células rojas. La
detección de cualquiera de las moléculas implica que la formación del complejo Ag-Ab de glóbulos rojos tiene clínicamente ocurrió. Varias
preparaciones de reactivos están disponibles comercialmente para poliespecífico.
Productos derivados de fuentes de anticuerpos policlonales o monoclonales. Otro anticuerpos del complemento también pueden estar presentes,
incluyendo anti-C3b. Todos estos productos cumplen los requisitos de la FDA para obtener la licencia y se describen en la Fig. 2-12.

Reactivos de globulina antihumana monoespecífica

Los reactivos de AHG monoespecíficos se utilizan en la investigación de un DAT positivo para determinar la naturaleza de las moléculas unidas a los
glóbulos rojos. ¿Están los glóbulos rojos del paciente sensibilizados? ¿Con IgG, complemento, o ambas proteínas? Para responder a esta pregunta,
un DAT diferencial es realizado con reactivos de AHG monoespecíficos que utilizan fuentes individuales de anti-IgG y anti-C3d / anti-C3b (Tabla 2-
13). Los reactivos de AHG monoespecíficos se preparan separando las especificidades de los reactivos poliespecíficos de AHG.
Los productos de AHG monoespecíficos anti-IgG contienen anticuerpos contra cadenas gamma humanas están disponibles comercialmente como
productos de anticuerpos policlonales o monoclonales.
A menudo, estos productos están etiquetados como específicos de cadenas pesadas, lo que significa que el antisuero contiene anticuerpos
específicos para las cadenas pesadas gamma de la molécula de IgG. Productos Sin esta etiqueta puede contener anticuerpos que reaccionan con las
cadenas ligeras de inmunoglobulina. Recordemos de la discusión sobre inmunología en el Capítulo 1 que las cadenas ligeras de inmunoglobulina
(kappa y lambda) son comunes a todas las clases de inmunoglobulinas (por ejemplo, IgG, IgM, IgA). Además de su uso en la investigación de un DAT
positivo, los reactivos anti-IgG se usan en muchos laboratorios para la detección de anticuerpos, identificación de anticuerpos y pruebas cruzadas
procedimientos La figura 2-13 resume los productos monoespecíficos anti-IgG.
Los reactivos monoespecíficos anti-C3b y anti-C3d no contienen reactividad a la inmunoglobulina humana moléculas. Estos reactivos detectan
específicamente proteínas del complemento que tienen se ha adherido a la superficie de los glóbulos rojos como resultado de la activación de la
via clásica. La activación de la vía del complemento puede conducir a la destrucción de glóbulos rojos in vivo ya sea por hemólisis intravascular o
hemólisis extravascular. Para la detección de cualquier proteína del complemento unida in vivo, un producto requiere especificidad para el
fragmento C3d.
Este fragmento de complemento suele ser la única proteína que permanece unida a Los glóbulos rojos del paciente. Anti-C3d está disponible
comercialmente como policlonal o monoclonal Productos de anticuerpos (fig. 2-14).

Células Rojas Sensibilizadas IgG

Los Estándares AABB para Bancos de Sangre y Servicios de Transfusión7 requieren un sistema de control para pruebas de antiglobulina
interpretadas como negativas. El sistema de control consta de glóbulos rojos que se han preparado comercialmente con anticuerpos IgG unidos. La
suma de requieren células rojas sensibilizadas con IgG para pruebas de AHG negativas para la detección de anticuerpos y procedimientos de
prueba cruzada. Este control a menudo se conoce como celdas de verificación o control de Coombs . Debido a que la prueba de antiglobulina tiene
su propio conjunto de limitaciones de prueba que pueden afectar interpretación de los resultados, los glóbulos rojos sensibilizados con IgG se
diseñaron como un sistema aditivo para pruebas de antiglobulina negativas para controlar la posibilidad de resultados falsos negativos. Además a
una prueba de AHG negativa, los glóbulos rojos sensibilizados con IgG deben reaccionar con el reactivo de AHG y mostrar aglutinación.
Los glóbulos rojos sensibilizados con IgG no pueden garantizar que todas las causas de resultados falsos negativos son controlados A continuación
se presentan tres posibles razones para que se detecte un resultado falso negativo mediante el uso de glóbulos rojos sensibilizados con IgG en una
prueba de antiglobulina:
• Falla en agregar el reactivo antiglobulina a la prueba
• Fallo de reacción del reactivo antiglobulina agregado
• Falta de lavado de glóbulos rojos adecuadamente

PRINCIPIOS DE POTENCIANTES Y LECTINAS DE ANTICUERPOS

Como se discutió en el Capítulo 1, el potencial zeta, o la fuerza de repulsión entre rojo las células en una solución salina fisiológica, influyen en la
reacción de aglutinación. Debido al tamaño más grande, la forma pentametérica y las propiedades multivalentes de las moléculas de IgM, la
aglutinación se facilita entre los glóbulos rojos adyacentes que tienen IgM unida a ellos. Los anticuerpos IgM pueden reaccionar fácilmente en un
medio salino. Por el contrario, el anticuerpo IgG las moléculas son más pequeñas y menos capaces de abarcar la distancia entre las células rojas
adyacentes generadas por el potencial zeta. Las moléculas de IgG pueden unirse, pero la aglutinación visible podría no ocurrir.
Los potenciadores de anticuerpos, o medios de mejora, son reactivos disponibles comercialmente que mejoran la detección de anticuerpos IgG al
aumentar su reactividad. Mejora los medios pueden reducir el potencial zeta de la membrana de los glóbulos rojos ajustando el in vitro entorno de
prueba para promover la aglutinación. También se agregan potenciadores al banco de sangre.
Pruebas para mejorar la detección de la formación de complejos de Ag-Ab. En este rol, los potenciadores pueden mejorar la captación de
anticuerpos (primera etapa de la aglutinación), promover la aglutinación directa (segunda etapa de aglutinación), o cumplir ambas funciones. Los
principales tipos de potenciadores utilizados en el laboratorio del banco de sangre incluyen reactivos antiglobulina, solución salina de baja fuerza
iónica (LISS), polietilenglicol (PEG) y enzimas proteolíticas (ficina y papaína). Estas Los reactivos se resumen en la Tabla 2-14.

SALINA DE BAJA FUERZA IÓNICA (LISS)

La incubación de suero y glóbulos rojos en un ambiente iónico reducido aumenta la tasa de la unión del anticuerpo a los sitios específicos del
receptor de antígeno en los glóbulos rojos.11 En solución salina fisiológica, los iones de sodio y cloruro se agrupan alrededor de las moléculas de
antígeno y anticuerpo. Ag-Ab la formación de complejos está influenciada por la atracción de cargas opuestas, y la agrupación de estos iones libres
de sodio y cloruro se dificulta la formación del complejo. Cuando la fuerza ionica se reduce, las moléculas de antígeno y anticuerpo son capaces de
combinarse a una tasa más rápida. En 1974, Löw y Messeter aplicaron este principio en las pruebas de rutina para detectar anticuerpos de glóbulos
rojos desconocidos mediante el uso de LISS como medio de suspensión para las células rojas (el fuente de antígenos conocidos en la prueba). Otros
investigadores confirmaron que LISS mejoró reacciones de anticuerpos, especialmente en las fases de prueba de antiglobulina indirectas.
El ambiente de bajo contenido iónico se puede lograr de dos maneras:
• Suspensión de eritrocitos de la prueba en reactivo LISS.
• Uso de reactivo LISS aditivo junto con glóbulos rojos en solución salina
El reactivo LISS contiene cloruro de sodio, glicina y albúmina pobre en sal (aproximadamente 0,03 M) de fuerza iónica en comparación con la
solución salina (aproximadamente 0,17 M) y es formulado para prevenir la hemólisis de los glóbulos rojos, que es una preocupación cuando se usa
LISS. In
Además, algunos reactivos en solución salina de bajo contenido iónico pueden contener aditivos macromoleculares para potenciar la aglutinación
directa de glóbulos rojos positivos de antígeno por algunos anticuerpos. El reactivo proporciona un ambiente de bajo contenido iónico para
mejorar la captación de anticuerpos y mejorar la detección en las fases de antiglobulina de la prueba. El resultado final es la sensibilización o la
potenciación de la primera etapa en la reacción de aglutinación. La ventaja del aumento de anticuerpos la captación es la reducción del tiempo de
incubación y el tiempo hasta un resultado final.

POLIETILENGLICOL
El aditivo de polietilenglicol (PEG) en un medio salino iónico bajo se concentra eficazmente anticuerpo en la mezcla de prueba, a la vez que crea un
ambiente de bajo contenido iónico que mejora la tasa de captación de anticuerpos. El medio de mejora es un polímero soluble en agua, que tiene
se ha informado que aumenta la sensibilidad del IAT.16 El reactivo PEG elimina moléculas de agua en el entorno de prueba para permitir una
mayor probabilidad de colisión entre moléculas de antígeno y anticuerpo.17 Debido a que el PEG puede afectar directamente la agregación de rojo
En las células, el reactivo se puede usar solo en pruebas de antiglobulina indirectas. Los tubos no deben ser centrifugar y leer antes del lavado. Sólo
es adecuado el reactivo anti-IgG AHG monoespecífico para usar con PEG debido a informes de aglutinación no específica con Reactivos AHG
poliespecífico.

ENZIMAS
Las enzimas proteolíticas comúnmente utilizadas en el laboratorio de inmunohematología incluyen papaína, ficina y bromelina, todos los cuales
están disponibles comercialmente. El término proteolítico se refiere a la descomposición de las moléculas de proteína. Estas enzimas poseen la
propiedad de modificar membranas de glóbulos rojos eliminando las moléculas cargadas negativamente de la membrana de la célula roja y
desnaturalizantes de ciertos determinantes antigénicos. La pérdida de estos negativamente. Las moléculas cargadas reducen el potencial zeta y
aumentan la aglutinación de algunos antígenos a sus correspondientes anticuerpos. Si la especificidad del anticuerpo está en el Rh, Kidd, y los
sistemas de grupos sanguíneos de Lewis, hay una reacción mejorada utilizando enzimas. Ciertos otros antígenos de glóbulos rojos se desnaturalizan
cuando se exponen a estas enzimas proteolíticas. Estos antígenos de glóbulos rojos incluyen M, N, S, Xga, Fya y Fyb. Dependiendo del anticuerpo de
células rojas, el uso de enzimas en las pruebas puede mejorar, deprimir o inhibir completamente la fomacion de complejo Ag-Ac. Un buen
conocimiento de los sistemas de grupos sanguíneos ayuda en la interpretación de estas pruebas de enzimas.

ALBÚMINA DE SUERO BOVINO

La albúmina de suero bovino (BSA) se prepara a partir de suero o plasma bovino y se comercializa disponible en una concentración del 22% o del
30%. Este reactivo es menos frecuente utilizado que otros medios de mejora. A diferencia de LISS, la albúmina no promueve la etapa de captación
de anticuerpos de la aglutinación, pero influye en la segunda etapa al permitir las células sensibilizadas con anticuerpos se acercan más de lo que
es posible en un medio salino sin aditivos. La adición de BSA a los tubos de reacción favorece la aglutinación directa de anticuerpos Rh y aumenta la
sensibilidad de la IAT para una amplia gama de anticuerpos específicos.

Se han propuesto varias hipótesis para explicar las propiedades de mejora de BSA. Pollack et al18 sugirieron que la albúmina reduce el potencial
zeta al dispersar algunos de los iones cargados positivamente que rodean cada glóbulo rojo cargado negativamente. En esta teoría, la albúmina
aumenta la constante dieléctrica del medio, definida como una medida de la capacidad para disipar una carga. Otros investigadores creen que la
albúmina se une a la membrana celular afecta el grado de hidratación con agua de la propia membrana de glóbulos rojos.

LECTINAS
Las lectinas son alternativas útiles a los antisueros para la tipificación de la sangre en la serología de grupos sanguíneos. Algunos extractos de
semillas conocidas como lectinas tienen especificidad hacia ciertos antigenos glóbulos rojos. Estos extractos contienen proteínas que se comportan
de manera idéntica a la de los anticuerpos pero no son de inmunoglobulina en la naturaleza. Las lectinas se unen específicamente a los
carbohidratos.
Determinantes de ciertos antígenos de glóbulos rojos con aglutinación resultante. A pesar de que no existen anticuerpos en estos reactivos, las
lectinas pueden ser útiles para identificar los antígenos presentes sobre los glóbulos rojos del paciente o donante. La tabla 2-15 revisa las
principales lectinas utilizadas en el grupo sanguíneo serología.

OTROS MÉTODOS PARA DETECTAR REACCIONES ANTIGENO ANTICUERPOS

Los reactivos del banco de sangre se han utilizado en pruebas diseñadas para detectar aglutinación en pruebas tubos. Otros métodos disponibles
comercialmente para detectar reacciones de Ag-Ab utilizan diferentes técnicas de detección de aglutinación. Esta sección presenta una breve
descripción de estos técnicas
Fig. 2-15 Pruebas de gel. A, Pantalla de anticuerpos contra prueba de gel (IAT). 0,8% de suspensiones de células de detección y suero del paciente o
se agrega plasma a los microtubos de la tarjeta MTS Anti-IgG. La tarjeta de gel se incuba durante 15 minutos a 37ºC. La tarjeta de gel se centrifuga.
Después de la centrifugación, se observa la tarjeta de gel para las reacciones de aglutinación. B, rango de Reacciones en pruebas de gel. La reacción
de aglutinación se califica de 4+ a 0. El grado asignado depende de la Posición de las células rojas en el microtubo de gel. (A, modificado de
Immucor, Norcross, GA. B, Cortesía orto-clínica Diagnóstico, Raritan, Nueva Jersey; y Micro Typing Systems, Pompano Beach, Florida.)
Metodo de tecnologia de gel
La tecnología de gel autorizada por la FDA por Micro Typing Systems, Inc. (Pompano Beach, Florida) como la tarjeta de gel ID-MTS en 1994.
Desarrollada por Lapierre et al20 en 1985, La tecnología utiliza partículas de gel de acrilamida de dextrano para atrapar glóbulos rojos aglutinados.
Lapierre et al. desarrollaron tecnología de gel para estandarizar los métodos tradicionales de prueba de tubos. Las técnicas tubo para volver a
suspender el botón de glóbulos rojos en las pruebas de tubos varían entre los tecnólogos. Esta variación técnica afecta la calificación e
interpretación de los resultados de las pruebas. La tecnología de gel proporciona puntos finales estables y definidos de hemaglutinación,
proporcionando un método en el que son posibles interpretaciones objetivas y consistentes de la aglutinación. En la prueba de gel, las partículas de
gel combinadas con diluyente o reactivos están predispensadas en microtubos especialmente diseñados fabricados en tarjetas de plástico. La
tarjeta de gel es de aproximadamente
El tamaño de una tarjeta de crédito y contiene seis microtubos. Cada microtubo consiste en una cámara de reacción superior y una sección que
contiene gel y reactivos predispensados. El gel actúa como el medio para separar los glóbulos rojos aglutinados del células rojo no aglutinado.
En la parte superior de la tarjeta de gel hay una tira de papel de aluminio para evitar el derrame o el secado del contenidos de microtubos. La
configuración de seis microtubos de la tarjeta de gel permite posibles prueba de muestra por lotes (es decir, más de una muestra de paciente
puede analizarse en una tarjeta de gel).
Debido a que esta tecnología es adecuada para la automatización, se dispone de instrumentos de banco de sangre. Para la realización de pruebas
de gel.
Dos categorías principales de tarjetas de gel tienen licencia para realizar pruebas en el banco de sangre. Reactivo especifico el anticuerpo se
incorpora en el gel.
• Tarjetas de fenotipado para tipificación ABO y D y otros antígenos Rh (C, c, E, e)
• Tarjetas AHG (anti-IgG y anti-IgG, -C3d) para IAT (detección de anticuerpos, identificación de anticuerpos, y pruebas de compatibilidad) y DAT
Para realizar una prueba de gel, se agregan volúmenes medidos de glóbulos rojos y plasma / suero a la cámara de reacción del microtubo. La
cámara de reacción permite la sensibilización de glóbulos rojos a ocurrir durante la incubación de un IAT. El paso de centrifugación da tiempo para
los contactos de glóbulos rojos con antisueros y partículas de gel. La centrifugación también separa positivos y resultados de aglutinación
negativos. En reacciones positivas, los glóbulos rojos aglutinados quedan atrapados en el gel en varios niveles, dependiendo de la fuerza de
aglutinación y el tamaño de los aglutinantes.
En reacciones negativas, los glóbulos rojos no aglutinados pasan a través del gel y forman un Botón en la parte inferior del microtubo. La tecnología
de gel se aplica en la detección de anticuerpos de la siguiente manera:
1. Agregue 50 μL de 0,8% de suspensión de células de cribado de reactivos a los microtubos del tarjetas de gel anti-IgG.
2. Agregue 25 μL de suero o plasma del paciente a los microtubos.
3. Incubar la tarjeta de gel a 37 ° C durante un tiempo predeterminado y centrifugar.
4. Después de la centrifugación, los resultados de la prueba se leen y se califican. No se requiere ningún paso de lavado para la prueba de
antiglobulina. No se requieren glóbulos rojos sensibilizados con IgG. Los aglutinantes más grandes están atrapados en la parte superior de los
microtubos de gel y no viajan a través del gel durante el proceso de centrifugación. Aglutinados más pequeños viajan a través de los microtubos de
gel pueden quedar atrapados en la mitad superior o inferior de los microtubos.
Las células de escrutinio no aglutinadas viajan sin impedimentos a través de la longitud del microtubo y forme un botón de glóbulos rojos en la
parte inferior después de la centrifugación (Fig. 2-15).
MÉTODOS DE PRUEBA DE MICROPLACA
Desde finales de la década de 1960, los métodos de microplacas se han utilizado para el procesamiento de rutina en sangre centros de donantes.
Una placa de microtitulación con 96 pocillos sirve como tubos de ensayo sustituidos para que se aplican los principios del banco de sangre. Cada
pozo se considera una prueba corta tubo. La técnica de microplaca puede adaptarse a las pruebas de antígenos de glóbulos rojos o pruebas de
suero para la detección de anticuerpos. Los principios que se aplican a la aglutinación en tubos de ensayo también se aplican.
Para ensayos en métodos de microplacas. La microplaca puede tener una forma de U o una parte inferior en forma de V en el pocillo de la placa de
microtitulación; El pozo con fondo en U es más ampliamente utilizado pequeñas cantidades de glóbulos rojos y antisueros se agregan a los pocillos
de microtitulación, seguidos de centrifugación de las placas de microtitulación. Los botones de la celda son resuspendidos manualmente. Golpear
la placa o con la ayuda de un agitador mecánico. Un botón concentrado de color rojo las células son indicativas de reacciones de Ag-Ab, mientras
que las células rojas en un resultado negativo están dispersas a lo largo del pozo (fig. 2-16). Los dispositivos fotométricos automatizados están
disponibles para leer e interpretar las reacciones en los platos. Alternativamente, las placas de microtitulación pueden ser observado para un
patrón de transmisión de glóbulos rojos cuando la placa se coloca en un ángulo.
El método de prueba de microplacas para el fenotipo de glóbulos rojos se realiza de la siguiente manera:
1. 1 gota de anti-A y 1 gota de anti-B se colocan en pozos separados de un fondo en U microplaca
2. Se agrega 1 gota de una suspensión salina de eritrocitos de 2% a 5% a cada pocillo.
3. Los pozos se mezclan tocándolos suavemente.
4. La placa se centrifuga a un tiempo y velocidad adecuados.
5. El botón de la celda se resuspende tocando manualmente la placa o usando un agitador mecánico, o colocado en ángulo para el método de
inclinación y flujo.
6. Las reacciones son leídas, interpretadas y registradas.
La aglutinación o hemólisis en cualquier pozo es un botón concentrado de glóbulos rojos y es interpretado como un resultado positivo. Una
suspensión suave de glóbulos rojos después de la resuspensión del botón de celda o un patrón de transmisión de celdas rojas cuando la placa se
coloca en un ángulo es interpretado como no aglutinación y un resultado de prueba negativo (Fig. 2-17).

MÉTODOS DE ADHERENCIA DE CÉLULAS ROJAS EN FASE SÓLIDA

Otro método serológico utilizado en el banco de sangre es la adherencia de glóbulos rojos en fase sólida. Los procedimientos comerciales de
prueba en fase sólida han estado disponibles para la detección de ambos anticuerpos de glóbulos rojos y plaquetas desde finales de la década de
1980 (Captura; Immucor, Norcross, Georgia). Esta tecnología utiliza pozos de prueba de microplacas con glóbulos rojos reactivos inmovilizados.
La tecnología de fase sólida actualmente tiene licencia para detección de anticuerpos, identificación de anticuerpos, y pruebas de compatibilidad.
Como se identificó previamente con la tecnología de gel, los principales las ventajas de la tecnología de fase sólida incluyen la estandarización y la
estabilidad, definida puntos finales, lo que lleva a interpretaciones más objetivas y consistentes de las reacciones de aglutinación.
Esta tecnología también es adecuada para la automatización y la instrumentación de bancos de sangre está disponible.
El antígeno o anticuerpo se inmoviliza en la parte inferior y los lados de la microplaca pozos En una prueba directa, el anticuerpo se fija a los pozos.
Antígenos positivos a células rojas de las fuentes de donantes o pacientes se adhieren a los lados y al fondo de los pozos. Antigeno negativo los
glóbulos rojos del donante o las fuentes del paciente se asientan en el fondo del pozo y forman un rojo botón de la célula después de la
centrifugación. En una prueba indirecta, las membranas de los glóbulos rojos se unen a los pozos Se agrega suero desconocido de paciente o
donante y se deja reaccionar. Este paso permite la captura de anticuerpos IgG del suero del paciente o donante a la membrana celulares. Una
etapa de lavado elimina los anticuerpos IgG no unidos y es seguida por la adición de glóbulos rojos indicadores recubiertos de anti-IgG. En una
prueba indirecta positiva, la
Las células indicadoras se adhieren a los lados y al fondo del pozo. En una prueba indirecta negativa, las células indicadoras se asientan en la parte
inferior de los pozos y forman un botón de celda roja después de centrifugación.
El procedimiento para la prueba de detección de anticuerpos en glóbulos rojos es el siguiente:
1. Las microplacas de poliestireno se compran con membranas de glóbulos rojos, como las células de detección. Ligado a la superficie de los pozos.
2. Se agregan suero de pacientes o donantes y solución salina de baja fuerza iónica a estos pozos.
3. La microplaca se incuba a 37 ° C durante un tiempo predeterminado.
4. La microplaca se lava para eliminar los anticuerpos no unidos.
5. Se añaden células indicadoras (glóbulos rojos recubiertos con anti-IgG) a los pocillos.
6. La microplaca es centrifugada.
7. Los resultados de las pruebas son leídos e interpretados.
Una reacción de aglutinación negativa aparece como un botón de glóbulos rojos en la parte inferior de la pozos Una reacción de aglutinación
positiva se indica mediante la unión de células indicadoras a los lados y el fondo de los pozos. Las reacciones de aglutinación débil dan resultados
intermedios.
Se dice que los glóbulos rojos se han adherido a los pozos (Fig. 2-18).

CAPITULO 3
GENETICA GRUPO DE SANGRE

TERMINOLOGIA GENETICA
Un gen es una unidad de herencia que codifica una proteína particular y es la unidad básica para herencia de un rasgo. La información genética se
lleva a cabo en doble hebra de ADN conocida como cromosomas (fig. 3-1). Los seres humanos tienen 23 pares de cromosomas: 22 pares de
autosomas
y 1 par de cromosomas sexuales.
La división celular permite que el material genético en las células se replique para que cromosomas idénticos se puede transmitir a las células hijas.
Esta división celular se produce a través de una proceso llamado mitosis en células somáticas y por meiosis en gametos.
Antes de que se estableciera el conocimiento de los genes y el ADN, los patrones de herencia se observaron ciertos rasgos detectables y se
establecieron teorías de herencia. Estas teorías son aplicables al estudio de la genética de grupos sanguíneos. En esta sección, los términos
genéticos
se describen como pertenecientes a patrones de herencia de antígenos de glóbulos rojos y como productos de genes específicos.

Fenotipo versus genotipo

Las pruebas serológicas determinan la presencia o ausencia de antígenos en los glóbulos rojos. El fenotipo, o la expresión física de los rasgos
heredados, se determina reaccionando en células rojas con antisueros conocidos y observando la presencia o ausencia de hemaglutinación.
Los reactivos utilizados para este propósito se describieron en el Capítulo 2. Por ejemplo, pruebas de rojo las células con reactivos anti-A o anti-B
pueden determinar si una persona tiene el antígeno A o B.
Si ni el anti-A ni el anti-B muestran aglutinación, los glóbulos rojos se clasifican como grupo O. Esta determinación se llama fenotipo.
El genotipo, o los genes reales heredados de cada padre, pueden inferirse del fenotipo. Se requieren estudios familiares o pruebas moleculares
para determinar el real genotipo. Si el fenotipo de un individuo es A, el genotipo puede ser A / A o A / O. A / A indica que ambos padres
contribuyeron con el gen A. El genotipo A / O indica que uno los padres contribuyeron con el gen A, y el otro contribuyó con el gen O. Porque el gen
O no tiene un producto detectable, solo el antígeno A se expresa cuando el genotipo A / O es heredado. Si el individuo A / O tiene un grupo O hijo,
se hace evidente que el individuo llevaba el gen O. Dos personas con glóbulos rojos del grupo A tienen el mismo fenotipo pero pueden tienen
diferentes genotipos.

Cuadro punnett
El examen de los antecedentes familiares es un componente importante en la investigación de los patrones de herencia. La Fig. 3-2 es un ejemplo
de genotipos y fenotipos para la sangre ABO sistema grupal.
Un cuadro de Punnett ilustra las probabilidades de fenotipos de lo conocido o inferido genotipos Representa visualmente los genotipos de la
descendencia potencial o la probable genotipos de los padres. La figura 3-3 muestra posibles combinaciones de genes del sistema de grupo
sanguíneo ABO a través del uso de los cuadros de Punnett. A partir de esta figura, sería fácil determinar que dos padres del grupo A pueden tener
un grupo O hijo. También podría ilustrarse que el los padres de un grupo AB hijo pueden ser grupo A, B o AB pero no grupo O.
Genes, alelos y polimorfismo
Los genes, las unidades básicas de herencia en un cromosoma, se encuentran en lugares específicos llamados loci geneticos Pueden existir varias
formas diferentes de un gen, llamadas alelos, para cada locus (Fig. 3-4). Por ejemplo, A, B y O son alelos en el locus del gen ABO. El término
antitético,
significado opuesto, se refiere a los antígenos producidos por los genes alélicos. Por ejemplo, el Kpa. el antígeno es antitético al antígeno Kpb. Kpa y
Kpb son ejemplos de alelos en el Kell sistema de grupo sanguíneo.
El término polimórfismo se refiere a tener dos o más alelos en un locus dado, como con el sistema de grupos sanguíneos ABO. Algunos sistemas de
grupos sanguíneos son más polimórficos que otros; en otras palabras, existen muchos más alelos en un locus dado. El grupo sanguíneo Rh sistema
es altamente polimórfico en comparación con el sistema de grupo sanguíneo ABO debido a El mayor número de alelos. La frecuencia de un
fenotipo particular en una población.
Depende del grado de polimorfismo dentro de un sistema de grupo sanguíneo. Un material muy polimórfico. El sistema hace que sea menos
probable encontrar dos individuos idénticos. Un ejemplo de una alta sistema polimórfico es uno que involucra a los genes que codifican HLA.
Porque la médula ósea y los trasplantes de órganos requieren compatibilidad HLA, el polimorfismo HLA contribuye a reto de encontrar donantes
adecuados. Si se utilizan varios sistemas polimórficos para determinar un fenotipo de un individuo, encontrar dos individuos idénticos se vuelve
cada vez más difícil.

Patrones de herencia
En la mayoría de los casos, los antígenos del grupo sanguíneo se heredan en un patrón codominante autosómico, o la expresión igual de ambos
alelos heredados que se encuentran en los autosomas. El producto de cada alelo puede identificarse cuando se hereda como un rasgo
codominante. Si uno de los padres pasa en un gen A y el otro padre transmitió un gen B, tanto el antígeno A como el B se expresaría igualmente en
los glóbulos rojos. La herencia recesiva requeriría que el mismo alelo de ambos padres se heredará para mostrar el rasgo. Un ejemplo es un grupo
O fenotipo que requiere que ambos padres transmitan un gen O (O / O). En grupo sanguíneo en la genética, un rasgo recesivo puede ser causado
por glóbulos rojos que expresan un fenotipo nulo como los fenotipos Lu (a − b−), Rhnull u O debido a la homocigosidad para un silencio o amorfo
gen.2
Una expresión dominante requeriría solo una forma del alelo para expresar el rasgo, como un fenotipo del grupo A que hereda un gen A de un
progenitor y un gen O del otro padre (A / O). Los alelos del sistema de grupo sanguíneo ABO muestran dominantes patrones de herencia recesivos
y codominantes.

Genes silenciosos
En algunos sistemas de grupos sanguíneos, los genes no producen un producto antigénico detectable. Estos genes silenciosos se llaman amorfos.
Los fenotipos a menudo se llaman tipos nulos porque las expresiones del sistema de grupo sanguíneo los antígenos no son evidentes. Por ejemplo,
un individuo Rhnull carece de la presencia de todos los antígenos del sistema Rh. El gen amorfo debe ser heredado de ambos padres (homocigotos)
para producir un fenotipo nulo. Si el gen es raro, este fenómeno es infrecuente. Debido a que el alelo O tiene una alta frecuencia en la población,
sin embargo, el fenotipo O es común. Ejemplos de fenotipos nulos incluyen Rhnull, O, y Lu (a − b -). 2
Los fenotipos inusuales también pueden resultar de la acción de los genes supresores. Estos genes actúa para inhibir la expresión de otro gen para
producir una expresión nula. La ocurrencia de los genes supresores que afectan la expresión del antígeno del grupo sanguíneo es raro. Un ejemplo
de un gen de supresión es In (Jk), que afecta la expresión del sistema del grupo sanguíneo de Kidd el fenotipo Jk (a − b−). Además del gen
silencioso, Lu, el gen In (Lu) suprime antígenos del sistema de grupos sanguíneos luteranos que dan como resultado el fenotipo Lu (a − b−).
Fenotipos nulos
puede ser el resultado de un gen amorfo o supresor. La tabla 3-1 incluye ejemplos de genes supresores y amorfos.

Principios mendelianos
Mendel observó ciertos patrones hereditarios en sus primeros experimentos genéticos que posteriormente se aplicaron al estudio de la genética
del sistema de grupos sanguíneos. La ley de Mendel de la independencia segregación se refiere a la transmisión de un rasgo de una manera
predecible de uno generación al siguiente.2 Este concepto se describió anteriormente con el cuadro de Punnett utilizando los genes del sistema de
grupo sanguíneo ABO. La segregación independiente ilustra que cada el padre tiene un par de genes para un rasgo particular, cualquiera de los
cuales puede transmitirse al próxima generación. Los genes se “segregan” y permiten que solo un gen de cada padre sea pasado a cada niño. Otra
ley importante, el surtido independiente, queda demostrado por el hecho de que los antígenos del grupo sanguíneo, heredados en diferentes
cromosomas, se expresan por separado y discretamente. La Fig. 3-5 ilustra que los genes del sistema de grupo sanguíneo ABO, ubicado en el
cromosoma 1, y los genes del sistema del grupo sanguíneo Kell, ubicados en el cromosoma 7, se heredan independientemente el uno del otro.

Asignación cromosómica
Se han determinado los loci genéticos de la mayoría de los genes del sistema de grupos sanguíneos. tabla 3-2 muestra la asignación cromosómica
para sistemas de grupos sanguíneos comunes.1 La mayoría de los Los genes asociados a grupos sanguíneos están en autosomas. Los patrones de
herencia son los mismos independientemente de género. El sistema de grupo sanguíneo Xg es una excepción. Codificación de genes para este
sistema se encuentran en el cromosoma X. En este sistema, si el alelo Xga se lleva en la base del padre cromosoma X, se lo pasaría a todas sus hijas,
pero a ninguno de sus hijos. A la inversa, si el padre carecía del gen Xga y la madre llevaba el gen, ambos hijos y las hijas expresarían el antígeno
Xga.
La heterocigosidad y la homocigosidad un individuo cuyo genotipo se compone de genes idénticos, como AA, BB u OO, es llamado h omocigoto. Un
individuo que ha heredado diferentes alelos de cada padre, como AO, AB o BO, se denomina heterocigoto (Fig. 3-6).

En las pruebas serológicas, el concepto de herencia homocigótica y heterocigótica es importante con algunos antígenos del grupo sanguíneo. Como
se discutió en los capítulos anteriores, la aglutinación. Las reacciones varían en fuerza. Esta variación puede ser debida a la fuerza del anticuerpo o
La densidad de los antígenos en las células rojas. Cuando la densidad del antígeno varía entre los glóbulos rojos de diferentes individuos, a menudo
se debe a la herencia de la expresión del antígeno. Un individuo que hereda diferentes alelos del sistema de grupo sanguíneo de cada padre (MN)
tiene una “dosis única” de ese antígeno en los glóbulos rojos (una M y una N). La aglutinación la reacción puede demostrar una expresión
antigénica más débil, o una menor densidad del antígeno, en la célula roja. Cuando el mismo alelo se hereda de ambos padres (MM o NN), un más
fuerte el antígeno de glóbulos rojos es evidente porque una "dosis doble" del antígeno M o N está presente en los glóbulos rojos. La variación en la
expresión del antígeno debido a la cantidad de alelos presentes se llama efecto de la dosis (fig. 3-7). El efecto de la dosis no se observa con toda la
sangre.
Grupo de antígenos o con todos los anticuerpos de una especificidad determinada.

Interaccion genetica
A veces los genes pueden interactuar entre sí, dependiendo de si se heredan o no en el mismo cromosoma (cis) o en el cromosoma opuesto (trans).
Esta interacción puede debilitar la expresión de uno de los antígenos codificados por los genes. Por ejemplo, los genes Ce y D del sistema de grupos
sanguíneos Rh se heredan en diferentes loci genéticos. El gen Ce codifica el antígeno Ce, y el gen D codifica el antígeno D. Cuando ce es heredado
en trans a D, debilita la expresión del antígeno D en el glóbulo rojo (Fig. 3-8) .2

Vinculación y haplotipos
En algunos sistemas de grupos sanguíneos, los antígenos están codificados por dos o más genes cercanos juntos en el mismo cromosoma y se
heredan de cada padre como una unidad. Los genes que están tan juntos en un cromosoma que se heredan como una unidad son vinculado. El
surtido independiente no ocurre cuando los genes están vinculados. Estas unidades genéticas se llaman haplotipos. Por ejemplo, en el sistema de
grupos sanguíneos MNS, M y N son alelos en un gen mientras que S y s son alelos en otro gen. Debido a que los genes están cerca,se heredan como
haplotipos: MS, Ms, NS o Ns (Fig. 3-9). Los haplotipos se producen en la población a una frecuencia diferente de la que se esperaría si los genes no
estuvieran vinculados.
El desequilibrio de ligamiento se refiere al fenómeno de los antígenos que se producen en una diferente frecuencia en la población, dependiendo
de si fueron heredados por vínculos o genes desvinculados. En otras palabras, si el gen M y S no estuvieran vinculados, la frecuencia esperada del
antígeno M y S en la población sería del 17% según el cálculo de probabilidades de frecuencia.2 Debido al desequilibrio de ligamiento, la frecuencia
observada de MS haplotipo es en realidad el 24%.
La vinculación en el sistema HLA se produce porque estos loci genéticos están muy cerca. El mayor de los genes de histocompatibilidad (MHC) que
codifican los antígenos HLA se heredan como haplotipos. Cada hermano podría potencialmente compartir al menos un haplotipo con el otro y tiene
un 25%. posibilidad de tener la misma escritura HLA. La figura 3-10 ilustra este concepto. Por esta razón, los hermanos probablemente coincidan
cuando se requieren trasplantes de médula ósea o órganos.

Cruzando
Otra excepción a la ley del surtido independiente ocurre si dos genes en el mismo cromosoma recombinante. Cruzar es el intercambio de material
genético durante la meiosis después de que los pares de cromosomas se hayan replicado (Fig. 3-11). Los genes resultantes son intercambiados.
Durante este proceso no se pierden. La recombinación resulta en dos nuevos y diferentes cromosomas Se pueden observar cruces con genes en el
mismo cromosoma pero no suele ocurrir cuando los genes están muy juntos. Porque los genes que expresan los sistemas de grupos sanguíneos
están cerca (vinculados) o en diferentes cromosomas, cruzando rara vez afecta la herencia del sistema de grupo sanguíneo. Se utilizan frecuencias
de cruce.
para mapear las ubicaciones relativas de los genes en un cromosoma porque cuanto más cerca están los genes, más rara es la posibilidad de que
los genes estén separados.

GENETICA DE POBLACION
La genética de poblaciones es la aplicación estadística de los principios genéticos para determinar el genotipo y la aparición del fenotipo, que
depende de la frecuencia del gen. Dos tipos cálculos son aplicables en el estudio de la genética de poblaciones de grupos sanguíneos. El primero
cálculo implica frecuencias fenotípicas combinadas, y el segundo implica genes o estimaciones de frecuencia de alelos.

Cálculos combinados de fenotipo

La determinación de la frecuencia de un fenotipo particular en la población permite encontrar una unidad donante de eritrocitos con ciertas
características antigénicas. Por ejemplo, los pacientes con múltiples los anticuerpos pueden requerir eritrocitos que son negativos para varios
antígenos diferentes. El cálculo de las frecuencias de fenotipo combinadas proporciona una estimación del número de unidades que pueden
necesitar ser probadas para encontrar la unidad con los antígenos deseados. La frecuencia de múltiples rasgos heredados independientemente se
calcula multiplicando la frecuencia de cada rasgo. Si un paciente produce anticuerpos de glóbulos rojos por exposición a transfusiones o embarazos
previos, eritrocitos negativos para la correspondiente.
Se necesitarían antígenos para la transfusión. Por ejemplo, si un paciente produce anticuerpos como las unidades anti-C, anti-E y anti-S, RBC que
son negativas para los antígenos C, E y se requeriría S para la transfusión. El porcentaje de donantes negativos para el individuo.Los antígenos se
expresan como un punto decimal y luego se multiplican.
68% C positivo 32% C negativo = 0,32 C negativo
29% E positivo 71% E negativo = 0.71 E negativo
52% S positivo 48% S negativo = 0,48 S negativo
0.32 × 0.71 × 0.48 = 0.109, redondeado a 0.11 o 11%
Así, el 11% de la población tiene una probabilidad de ser negativa para los tres antígenos.
Esto significa que es probable que aproximadamente 1 de cada 10 unidades de glóbulos rojos sean negativos para el antigenos combinados.
Los porcentajes utilizados son las frecuencias de antígenos establecidas y se pueden encontrar en la AABB.
Manual técnico, prospectos para los correspondientes antisueros, y The Blood Group. Antigen Facts Book.1 Las frecuencias de antígenos varían con
la raza. La raza predominante encontrada en la población de donantes para el área se debe utilizar al calcular las frecuencias de antígenos.
La frecuencia de un antígeno en la población es la aparición del fenotipo positivo. Al restar la frecuencia de 100 se obtiene el porcentaje negativo.
Por ejemplo, si un paciente tiene un anti-Fya, un anti-Jkb y un anti-K, cuántas unidades ¿Debería probarse para encontrar 2 unidades del fenotipo
apropiado?
Si no se puede excluir a un presunto padre, se puede calcular la probabilidad de paternidad Basado en la frecuencia de genes del gen obligatorio en
la población con la misma raza o grupo étnico como el presunto padre. El resultado se expresa como un cociente de probabilidad (paternidad).
índice) o como un porcentaje.2
GENÉTICA MOLECULAR
APLICACIÓN DE LA GENÉTICA MOLECULAR A LA BANCA DE SANGRE
Los procedimientos basados en la detección o análisis de ADN y ARN han hecho importantes Contribuciones a la ciencia biológica. Aplicaciones de
la tecnología molecular en el campo de los bancos de sangre y el trasplante incluyen tipificación HLA, tipificación de glóbulos rojos, marcador viral
Pruebas y determinación del injerto en el trasplante de células progenitoras hematopoyéticas (HPC) (Tabla 3-3) .4 La prueba de ácido nucleico
(NAT) es un término general utilizado para la base molecular métodos de cribado de agentes infecciosos. Esta metodología reduce aún más la
"Período de ventana" en las pruebas virales cuando los anticuerpos pueden estar por debajo de los niveles detectables. NAT se analiza con más
detalle en el Capítulo 13. Los ensayos basados en ADN también han reemplazado en gran medida a los glóbulos rojos y tipificación HLA para
pruebas de identidad (relación), también conocidas como huellas dactilares de ADN. La siguiente sección describe el concepto de la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR) y su aplicación en trasplante y medicina de transfusión.

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

Los genes que codifican muchos de los antígenos de glóbulos rojos y HLA se han secuenciado y clonado, que proporciona "mapas" para las
diferencias de nucleótidos específicas que definen cada alelo. La mayoría de las diferencias de antígeno HLA y de glóbulos rojos son el resultado de
sustituciones de un solo nucleótido en la secuencia de codificación de cada alelo único. Ensayos basados en el ADN identifican un solo nucleótido
polimorfismos (SNP) mediante la amplificación de la parte del ADN donde se encuentran los SNP. Esta amplificación se realiza por PCR, lo que
permite que secuencias específicas de ADN sean se multiplica rápidamente y con precisión (Fig. 3-12). La PCR es una técnica in vitro utilizada para
amplificar.
Secuencias específicas de ADN de interés a través de ciclos de desnaturalización, recocido de cebadores que seleccionan el área del ADN a
amplificar, y la replicación que resulta en un millón de veces copias de un área específica del ADN. Los componentes de la reacción de PCR se
enumeran en la Tabla 3-4.
Procedimientos de tipificación del antígeno leucocitario humano basado en la reacción en cadena de la polimerasa los procedimientos de
tipificación de HLA se basan en la amplificación por PCR de uno o más alelos. Los métodos de prueba varían en las técnicas utilizadas para detectar
e identificar los amplificados Productos.6 En esta sección se describen los principios y la aplicación de varios métodos utilizados en la tipificación
HLA.

Cebadores específicos de secuencia

En el método de prueba de cebadores específicos de secuencia (SSP), los cebadores que son específicos para un determinado seleccione el área del
ADN que se evaluará durante la reacción de PCR descrito anteriormente, la especificidad del material genético que se amplifica se determina por la
cartilla. Cada par de cebadores puede amplificar uno o varios alelos. Los imprimadores pueden ser cualquiera resolución baja o alta, lo que resulta
en resultados de nivel de antígeno o nivel de alelo. Baja resolución los resultados son similares a la identificación por pruebas serológicas, mientras
que los de alta resolución los cebadores definen alelos más específicos. Los cebadores se compran en bandejas de PCR en varios Configuraciones
para las especificidades mas comunes de HLA. El ADN a analizar se añade a la cubeta y amplificada por un termociclador de acuerdo con las
recomendaciones del fabricante protocolo.8
Después de la PCR, la especificidad del ADN amplificado, o amplicones, se evalúa usando gel electroforesis El ADN amplificado de cada pocillo se
transfiere a un gel de agarosa preparado con bromuro de etidio para permitir la detección de ADN bajo luz ultravioleta. Electroforesis del gel se
realiza luego. Los amplicones de bajo peso molecular migran más rápido que los amplicones de alto peso molecular. Un espacio en blanco indica
que la cartilla no detectar la porción de ADN en cuestión. La identidad del alelo que define el antígeno se determina comparando el patrón de
migración del gel con las especificidades del cebador y patrones proporcionados por el fabricante (Fig. 3-13).

Sondas de oligonucleótidos específicas de secuencia

En la técnica de las sondas de oligonucleótidos específicas de secuencia (SSOP), el ADN objetivo es amplificado usando un cebador específico de
grupo en pozos separados (por ejemplo, A, B, C, DR, DQ, DP) .9 Después Amplificación por PCR, el ADN se desnaturaliza e hibrida con una mezcla de
complementarios sondas de ADN conjugadas con microesferas codificadas por fluorescencia (Fig. 3-14). Allí pueden ser 30 a 70 sondas por locus
para caracterizar los distintos alelos. La solución hibridada se evalúa con un analizador de flujo como el Luminex. Se mide la intensidad
fluorescente, y el patrón de reacción es analizado por el software del instrumento y comparado con patrones asociados con secuencias publicadas
de genes HLA. Una asignación de la HLA….

APLICACIONES DE PRUEBAS MOLECULARES EN EL TIPO DE CELULAS ROJAS

La determinación molecular de los antígenos de glóbulos rojos se ha vuelto más disponible en los últimos años para complementar los métodos
tradicionales de hemaglutinación. Hay varias situaciones donde las pruebas moleculares producen resultados más precisos y pueden ser un método
más rentable para tipificación de antígenos de glóbulos rojos donante. La Tabla 3-3 enumera las aplicaciones moleculares para la tipificación de
glóbulos rojos. Procedimientos de tipificación de glóbulos rojos basados en la reacción en cadena de la polimerasa

Tecnología Bead-Chip
Después de que los genes que codifican los principales antígenos del grupo sanguíneo hayan sido secuenciados y clonados, La correlación de las
diferencias en las secuencias de ADN con la expresión del antígeno de glóbulos rojos podría aplicarse al desarrollo y estandarización de pruebas de
laboratorio. En muchos de los sistemas de grupos sanguíneos, sustituciones de un solo nucleótido, descritas anteriormente, codifican para el único
Alelo del grupo sanguíneo.
Los SNP que definen el antígeno se identifican mediante métodos de PCR combinados con beadchip tecnología.12 El principio de la tecnología de
chip de perlas de antígeno eritrocitario humano (HEA) utiliza oligonucleótidos cebadores unidos a perlas de sílice de varios colores. Las cuentas son
unido a un sustrato (por ejemplo, un portaobjetos de vidrio). Un “mapa” que identifica el color y lo específico. Se hace oligonucleótido (cebador).
Cuando se usa el chip, la PCR se amplifica, y el ADN digerido en cuestión está expuesto a la superficie del chip, lo que permite que los cebadores
Se unen a las coincidencias en el ADN monocatenario. El ADN no unido se lava, y el ADN unido se marca con trifosfatos de desoxinucleótidos
marcados con fluorescencia (dNTPs). El análisis por computadora determina qué perlas son fluorescentes y qué cebadores adjunta (fig. 3-15).