Identificación de Aa y Proteínas

Práctica 1: DETERMINACIÓN DE
PROTEÍNAS y AMINOÁCIDOS
Nombre del alumno: Cota Castro Luz Adriana, Ochoa Rojo Anel Paulina, Quintero Belázquez Iván
de Dios, Salcido Valenzuela Pablo Guillermo, Sepúlveda Verdugo David. Docente: Dra. Castro
Ochoa Lelie Denise.
Instituto Tecnológico de Los Mochis, Materia: Bioquímica del Nitrógeno, Grupo: T1O.
Resumen. Esta práctica consiste en la identificación de proteínas a través de distintos métodos con
los reactivos de Ninhidrina, Biuret y Millon, utilizando las siguientes muestras: glicina, tirosina,
albúmina, caseína y gelatina, no obstante, solo se utilizaron las primeras tres mencionadas.
Posteriormente reaccionan con los reactivos para su identificación, lo que produce un cambio de
color en las muestras dependiendo si se encuentra o no concentración de proteínas. Las técnicas son
muy sencillas y resultan muy útiles para su determinación.
Introducción proteínas de una variedad en relación con las

limitaciones y la validez de los materiales
La proteína es un macronutriente esencial para biológicos, pero los estudios de este método
el crecimiento y el mantenimiento de las han sido pocos [3].
estructuras corporales. Un concepto
importante en nutrición proteica es la calidad En esta ocasión el objetivo es emplear tres
de la proteína que viene, principalmente, métodos colorimétricos con aplicación de tres
determinada por el perfil y proporción de los reactivos diferentes que interactúan de
aminoácidos que la componen, aunque pueden diferente manera según la naturaleza proteica.
intervenir otros factores como la solubilidad y
el grado glicosilación. Para evaluar la calidad Materiales y Métodos
de la proteína existen diversos métodos que se
pueden clasificar en químicos, biológicos y Iniciamos vertiendo, con ayuda de una pipeta
microbiológicos [1]. de 5mL y una propipeta, 3 mL de los
aminoácidos disponibles de los cuales eran
Existen diversos métodos, sin embargo, sólo Tirosina y Glicina. Nos aseguramos de que la
se utilizan con frecuencia algunos de estos Tirosina estuviera bien concentrada, pues era
métodos y la razón de la elección del método muy espesa y difícil de insertar al tubo con la
utilizado en muchos estudios rara vez se propipeta. También agregamos 1 mL de
describe. Esto puede deberse a una variedad proteína Ovoalbúmina. Estos fueron añadidos
de factores, por ejemplo, la tradición tres veces en tres diferentes tubos de ensayo.
(utilización de procedimientos analíticos Posteriormente, los 3 tubos de ensayo de cada
establecidos en los laboratorios). Los análisis aminoácido, fueron clasificados y luego
con reactivos salvan los problemas de transportamos los tubos hacia donde llevamos
compatibilidad que se observan con los a cabo la reacción usando 3 diferentes
métodos de absorbancia UV. Ejemplos de reactivos, las cuales fueron: Ninhidrina,
análisis con reactivos para la cuantificación de Biuret y Millon.
proteínas son los que utilizan métodos Para determinar las proteínas se ocuparon
colorimétricos, como el método Biuret, ácido diferentes cantidades de reactivos, se inició
bicinconínico (BCA), y los análisis de Lowry primero con el reactivo de Biuret, que fue el
y Bradford) [2]. más sencillo, vertiendo solamente 1 mL del
mismo, con ayuda de una pipeta y una
El procedimiento de Biuret ha sido propipeta, a un tubo de cada proteína. El
ampliamente utilizado para la estimación de siguiente fue el reactivo de Millon, el cual le
agregamos 3 gotas al segundo tubo de cada Para esta reacción se puede observar en la
proteína. El último reactivo que utilizamos tabla 1 que hubo cambio de tonalidad en la
fue el de Ninhidrina donde vertimos 5 gotas a glicina y ovoalbúmina, de un azul, visto en la
los últimos 3 tubos de cada proteína. imagen 2 a un morado intenso y un morado
Para que se llevara a cabo la reacción con los tenue respectivamente.
reactivos Millon y Ninhidrina, los 3 tubos de
ensayo de proteína (donde se añadieron sus La ninhidrina reacciona con el grupo amino
respectivos reactivos) fueron colocados en un libre de la glicina, formando el típico
vaso de precipitado de 500 mL con agua, producto de color púrpura intenso. La glicina,
arriba de una placa de calentamiento a 60°C. al ser una molécula pequeña, generalmente da
Finalmente se esperó mientras se calentaban una reacción más limpia y fuerte que
los reactivos hasta que se notó un cambio aminoácidos con cadenas laterales más
visible en la reacción realizada.
complejas.
Resultados y discusión
En la determinación de aminoácidos y proteínas
observamos los resultados reflejados, registrados
en la tabla 1 en el cambio de color de cada una de
nuestras muestras, lo cual nos indicaba si fue un
resultado positivo o negativo, igualmente visto en
la imagen 1.
Tabla 1. Resultado de las reacciones

Ninhidrin Biuret Millon
a
Tirosina Negativo Negativo Positivo
Glicina Positivo Negativo Negativo
Ovoalbúmina Positivo Positivo Negativo

La reacción de la ovoalbúmina con ninhidrina
es menos Imagen 2. Adición de Nihidrina a las muestras
intensa,
pero también produce color, dependiendo de
los grupos de aminoácidos libres disponibles .
Reacción de Biuret
Para esta reacción se puede observar en la
imagen 1 que únicamente reaccionó la
ovoalbúmina provocando un cambio de color
Imagen 1. Resultado de la reacción de Ninhidrina a un violeta tenue.
El reactivo de Biuret reacciona con los
enlaces peptídicos en la ovoalbúmina,
formando un complejo de color violeta
característico. Cuantas más proteínas o
Reacción de Ninhidrina péptidos haya en la muestra, más intensa será
la coloración violeta.
Reacción de Millon
Para esta reacción se puede observar en la
imagen 1 que únicamente reaccionó la
tirosina provocando un cambio de color a un
rojo tenue.
El grupo fenol de la tirosina reacciona con el
mercurio presente en el reactivo de Millon en
medio ácido, formando un compuesto de
color rojo. Este color es característico y se
utiliza para la detección de la tirosina en
proteínas y soluciones de aminoácidos.
Bibliografía
[1]. Martínez, A. (Mayo de 2006). Proteínas y péptidos en nutrición enteral. Nutrición Hospitalaria, 21(2). Recuperado el
Octubre de 2024, de https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0212-16112006000500002
[2]. Angell, A., Mata, L., de Nys, R., & Paul, N. (30 de Junio de 2015). The protein content of seaweeds: a universal
nitrogen-to-protein conversion factor of five. Journal of Applied Phycology , 18, 511-524. Recuperado el Octubre de
2024, de https://link.springer.com/article/10.1007/s10811-015-0650-1
[3]. Pande, S., Tewari, K., & Krishnan, P. (1961). A critical study of the biuret method of protein estimation as applied to
fungal mycelium. Archiv fur Mikrobiologie, 343-350. Recuperado el Octubre de 2024, de
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/13732416/

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Práctica 1: DETERMINACIÓN DE

Introducción proteínas de una variedad en relación con las

Tabla 1. Resultado de las reacciones

Tirosina Negativo Negativo Positivo

Glicina Positivo Negativo Negativo

Ovoalbúmina Positivo Positivo Negativo

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