UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

Química
LABORATORIO DE FISICOQUÍMICA V

Práctica 7
“Descomposición de urea por ureasa”

Equipo 4

Integrantes:
Enriquez Tavera Alan
Flores Galván Aldo
Montiel Sanchez Alan Ian
Pineda Estrada Camilo
Ruíz Urbina Ericka
Sánchez Moreno Axel Joel

Profesores: Cabrera Hernández Juana

Raúl Javier Revilla Vázquez

Grupo: 2601 BD 28 de abril de 2023

INTRODUCCIÓN

La ecuación de Arrhenius describe la relación entre la velocidad de una reacción y la

temperatura. La ecuación establece que, a medida que la temperatura aumenta, la
velocidad de reacción también aumenta. Matemáticamente, la ecuación de Arrhenius se
expresa de la siguiente manera:

k = Ae^(-Ea/RT)

Donde k es la constante de velocidad de la reacción, A es el factor de pre-exponencial, Ea

es la energía de activación requerida para la reacción, R es la constante de los gases
ideales y T es la temperatura en kelvin.

En el caso de las reacciones enzimáticas, la ecuación de Arrhenius puede ayudar a

entender cómo cambia la actividad enzimática a medida que cambia la temperatura. Por
debajo de la temperatura óptima, la velocidad de la reacción se rige por la ecuación de
Arrhenius, y a medida que la temperatura aumenta, la velocidad de la reacción también
aumenta. Por encima de la temperatura óptima, sin embargo, la actividad enzimática
disminuye debido a la desnaturalización de la enzima.

Otro factor importante a considerar en las reacciones enzimáticas es el pH. La mayoría de

las enzimas tienen un pH óptimo en el cual funcionan mejor, y por encima o por debajo de
ese pH, la actividad enzimática disminuye. Esto se debe a que el pH afecta la estructura y la
carga eléctrica de la enzima y del sustrato, lo que a su vez afecta la capacidad de la enzima
para unirse y reaccionar con el sustrato.

Además, la actividad enzimática puede ser afectada por otros factores, como la
concentración de sustrato y la presencia de inhibidores. A medida que la concentración de
sustrato aumenta, la velocidad de la reacción también aumenta, pero llega un punto en el
cual la velocidad de la reacción se estabiliza debido a que todas las moléculas de enzima
están ocupadas. Los inhibidores pueden unirse a la enzima y disminuir su actividad, ya sea
de forma reversible o irreversible.

En general, la actividad enzimática es un equilibrio entre la estabilidad de la enzima y su

capacidad para interactuar con el sustrato. Por lo tanto, entender los factores que afectan la
actividad enzimática es importante para optimizar la producción de enzimas y para entender
los procesos bioquímicos que ocurren en los seres vivos.

OBJETIVOS ACADÉMICOS

● Investigar la cinética de descomposición de urea por ureasa

● Utilizar a la enzima ureasa extraída de soya
● Estudiar el mecanismo de reacción para reacciones biocatalíticas
● Obtener los parámetros cinéticos: constante de Michaelis (Km) y rapidez máxima
(rmax) mediante la ecuación de Lineweaver-Burk.
● Seguir el avance de reacción por medidas de conductividad
● Investigar el efecto de la temperatura sobre la rapidez de reacción en la catálisis
enzimática.
 ● Obtener la temperatura de máxima actividad de un biocatalizador (ureasa)
● Determinar la energía de activación de una reacción.
● Calcular energía interna, entalpía, entropía y energía de Gibbs de activación (ΔU≠,
ΔH≠, ΔS≠ y ΔG≠) de hidrólisis biocatalítica de la urea.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Diagrama de flujo

Equipo(s), reactivo(s) y material(es)

Material Equipo Reactivos

Por equipo: Por equipo: Por equipo:

5 barras de agitación magnética 1 parrilla de calentamiento con 15mL de disoluciones
5 tubos de ensaye de agitación magnética stock de urea 0.2M, para
 20×200mm 1 puente de conductividad preparar:
1 vaso de precipitados de 100mL digital con celda 100mL de solución de urea
1 pipeta volumétrica de 20mL 0.02M
2 perillas 20mL de solución de urea
1 soporte universal 0.016M
1 pinzas para matraz 20mL de solución de urea
1 cronómetro 0.012M
1 jeringa para insulina 20mL de solución de urea
1 matraz volumétrico de 100mL 0.008M
4 matraces volumétricos de 2mL de solución de urea
25mL 0.004M
1 vaso de precipitados de 600mL 6mL de etanol
1g de frijol de soya

Por grupo:
1 centrífuga
1 mortero con pistilo
2 tubos para centrífuga

RESULTADOS

Tabla 1. Resultados de conductividad en función del tiempo (microSiemens/cm)

Tiempo (s) TEMPERATURA (°C)

30 40 50 60

0 7.20 7.39 10.66 7.43

10 48.2 54.7 15.04 49.4

20 48.7 55.0 15.07 54.3

30 52.3 55.4 15.11 55.5

40 55.0 56.3 15.15 55.9

50 56.7 57.0 15.96 56.4

60 57.8 57.7 16.91 56.8

70 58.9 58.1 16.84 56.8

80 59.6 58.9 17.74 57.1

90 60.4 59.2 21.0 57.8

100 60.7 59.8 21.6 57.8

110 61.3 60.1 22.7 57.3

120 61.5 60.5 23.1 58.4

 Tabla 2. Resultados de conductividad. Temp: 30°C microSiemens/cm
Tiempo (s) CONDUCTIVIDAD

0.004M 0.008M 0.012M 0.016M 0.02M

0 12.46 8.45 13.47 13.86 9.55

10 68.0 80.9 86.7 92.5 89.9

20 72.5 88.1 92.9 100.4 92.8

30 74.5 91.8 98.1 104.8 95.6

40 76.3 95.0 102.7 107.9 98.0

50 78.6 97.8 106.0 110.7 100.1

60 81.8 100.2 108.7 114.0 102.1

70 83.0 102.1 111.4 117.0 103.8

80 85.2 103.6 113.7 118.7 105.4

90 87.1 105.0 115.2 120.8 106.9

100 88.2 106.5 116.0 122.7 108.3

110 89.4 107.3 118.2 124.0 110.5

120 90.4 108.0 119.4 125.9 111.6

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Para el inicio del análisis del experimento es necesario plantear la reacción que se lleva a
cabo así como el cambio en las concentraciones conforme se lleva a cabo la reacción.

Tabla 3. Reacción y Variación de Concentración

Con. In. t=0 (20mL)(0.2M)=4

mmol

Con. Rxn. t=t X

Con. Queda t=t 4 mmol-X X 2X X

Se grafica las conductividades tomadas a 30°C y diferentes concentraciones para
determinar los valores de rapidez inicial.

Gráfico 1. Conductividad en función del tiempo de cada concentración

A partir de la regresión polinómica obtenida para cada sistema es posible obtener la rapidez
inicial para cada sistema de la siguiente manera:

Tomando el ejemplo de la concentración de 0.004M , se obtuvo la siguiente expresión:

σ(𝑡) = 0. 1991𝑡 + 68. 309

𝑑[𝐶]
La derivada de esta expresión, por definición, es la rapidez: 𝑟 = 𝑑𝑡

𝑑[σ]
𝑟(𝑡) = 𝑑𝑡
= (0. 1991)

Por lo tanto la rapidez inicial es :

𝑟0 =− 0. 1991

Siguiendo el mismo procedimiento para cada concentración se muestra la siguiente tabla.

Tabla 4. Concentración y rapidez inicial de cada concentración de Sustrato [S]

[S] mol/L
r0

0.004 0.1991
 0.008 0.2249

0.012 0.2801

0.016 0.2785

0.02 0.192

Graficando los datos obtenidos en la tabla anterior obtenemos :

Gráfico 2. Rapidez inicial r0 en función de la concentración de cada concentración

No es posible obtener la constante de Michaelis, ya que no hay valores suficientes en la

gráfica empleada, ni se trabajó con un valor de concentración de 0.05 M. Un caso límite de
la ecuación de Michaelis-Menten es que es de orden cero respecto al sustrato, y este se
observa cuando la rapidez inicial es constante pesar de un aumento de [C] del sustrato,
esto sucede en el intervalo de concentraciones 0.012M a 0.016 M de Urea. Por otra parte el
orden 1 respecto al sustrato se observa con un aumento de la rapidez inicial conforme se
incrementa la concentración de sustrato, esto sucede en el intervalo de 0.004 M a 0.012 M
de Urea.
 Gráfico 3. Rapidez inicial r0 en función de la concentración de cada concentración,
observándose el valor de r max

Para verificar que nuestros datos competen con los teóricos y determinar los parámetros
(rmax) y la Km se recurre a las ecuaciones de Lineweaver-Burk, Eadie-Hofstee y Hanes.
La ecuación de Lineweaver-Burk tiene la siguiente forma:

Requerimos adecuar nuestros datos para poder determinar los parámetros por lo que

Tabla 5. Parámetros de ecuación de Lineweaver-Burk

1
1
[𝑠]
𝑟0

250 5.022

125 4.4464

83.33 3.5701

62.5 3.5906

50 5.2083

Se omite el valor obtenido de 0.02 M ya que se observó un error experimental al momento

de tomar dichas mediciones
 Gráfico 4. Regresión obtenida con la ecuación de Lineweaver-Burk.

Mediante la ecuación de Lineweaver-Burk se obtiene que :

𝑟𝑚𝑎𝑥 = 0. 32014
−3
𝐾𝑚 = 2. 5291 × 10

Ahora procedemos a usar la ecuación de Eadie-Hofsee la cual tiene la forma:

Procedemos a hacer un tratamiento de nuestros datos para poder calcular los parámetros

Tabla 6. Parámetros de ecuación de Eadie-Hofstee

𝑟0
[𝑠]
𝑟0

49.775 0.1991

28.1125 0.2249

23.3416 0.2801

17.4062 0.2785

9.6 0.192

Se omite el valor obtenido de 0.02 M ya que se observó un error experimental al momento

de tomar dichas mediciones

Gráfico 5. Regresión obtenida con la ecuación de Eadie-Hosftee

Mediante la ecuación de Eadie-Hofstee se obtiene que :

𝑟𝑚𝑎𝑥 = 0. 3214
−3
𝐾𝑚 = 2. 6 × 10

Por último utilizamos la ecuación de Hanes , que tiene la forma de :

Procedemos a hacer un tratamiento de nuestros datos para poder calcular los parámetros

Tabla 7. Parámetros de ecuación de Hanes

[S] mol/L [𝑆]
𝑟0

0.004 0.0200

0.008 0.03557

0.012 0.04284

0.016 0.05745

0.02 0.104

Gráfico 6. Regresión obtenida con la ecuación de Hanes

Mediante la ecuación de Hanes se obtiene que :

𝑟𝑚𝑎𝑥 = 83. 33
𝐾𝑚 = 0. 7583

Realizando una tabla de comparación , entre los parámetros obtenidos mediante el gráfico
[S] vs r y las demás ecuaciones.

𝑟𝑚𝑎𝑥 𝐾𝑚

Gráfico [S] vs r 0. 2801 2 × 10

−3

Lineweaver-Burk 0. 32014 2. 5291 × 10

−3

Eadie-Hofstee 0. 3214 2. 6 × 10
−3

Hanes 83. 33 0. 7583

Se observa que la ecuación de Hanes dio los valores más alejados de los obtenidos
gráficamente , mientras que Lineweaver-Burk y Eadie-Hofstee dieron una mejor
aproximación a los valores de 𝑟𝑚𝑎𝑥 y 𝐾𝑚

Debido a la ley de acción de masas se sabe que al aumentar la concentración de un

reactivo se verá favorecida la formación de productos por lo cual también cambiará el valor
de la constante esto es porque el sustrato tiene una mayor cantidad de enzima con la cual
reaccionar por lo tanto la 𝐾𝑚 es directamente proporcional a la concentración de la enzima
por lo que si esta se duplica, la constante también lo hará. En cuanto a la velocidad máxima,
ésta disminuye al aumentar la concentración de la enzima.
Al reducir a la mitad la concentración de la enzima, se ve favorecida la formación de
reactivos, por lo que la constante de Michaelis también va a disminuir, y la disminución en la
concentración del sustrato provoca que aumente la rapidez máxima. Cuanto menor sea la
𝐾𝑚 menor será la cantidad de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad
máxima.

Se retoman los datos de la tabla 2, con tal de construir un gráfico de conductividad vs

tiempo para las temperaturas de trabajo, obteniendo lo siguiente:

Gráfico 5. Conductividad en función del tiempo para cada temperatura de trabajo

Para determinar la rapidez inicial se obtiene la regresión polinómica (que se puede observar
en el gráfico) de cada una y se evalúa su derivada en 0, como se realizó previamente en
este reporte para cada valor de concentración; en este caso, se realiza a cada valor de
temperatura.

T (°C)
r0

30 0.3306

40 0.0344

50 0.1157

60 0.4177

Con estos datos obtenemos un gráfico de temperatura vs rapidez.

 Gráfico 6. Rapidez inicial contra temperatura.

La temperatura óptima se observa a 60°C, ya que a este valor se observa que hay un
máximo en la rapidez inicial, que indicaría que se realiza una conversión de reactivos a
productos más velozmente que a otras temperaturas.

A partir de suponer que la rapidez inicial es la constante de rapidez se puede obtener la

energía de activación y factor frecuencia, mediante la ecuación de Arrhenius:

−𝐸𝑎/𝑅𝑇
𝐾 = 𝐴𝑒
𝐸𝑎 1
𝑙𝑛 𝐾 = 𝑙𝑛 𝐴 − 𝑅 𝑇

Con los datos obtenidos se realiza una regresión lineal para después hacer los cálculos
respectivos para obtener los parámetros deseados:

T (°C) T (K) K (s-1) ln K 1/T (K-1)

30 303.15 0.3306 -1.1068 0.0032987

40 313.15 0.0344 -3.3697 0.0031934

50 323.15 0.1157 -2.15675 0.0030945

60 333.15 0.4177 -0.8730 0.0030017

Pendiente m (K) -1705.22396

Ordenada b 3.489871
La energía de activación es igual a:
𝐸𝑎
𝑚 =− 𝑅
− 𝑚𝑅 = 𝐸𝑎
−1 −1
𝐸𝑎 =− (− 1705. 22396 𝐾)(8. 3145 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )
−1
𝐸𝑎 = 14178. 0846 𝐽𝑚𝑜𝑙

Para obtener el factor frecuencia realizamos lo siguiente:

𝑏 = 𝑙𝑛 𝐴
𝑏
𝐴 =𝑒
3.489871
𝐴 =𝑒
−1
𝐴 = 32. 7817 𝑠

Para calcular los parámetros de activación se hace uso de la ecuación de Eyring:

𝐾𝐵𝑇 ≠ ≠
∆𝑆 /𝑅 −∆𝐻 /𝑅𝑇
𝐾= ħ
𝑒 𝑒
𝐾 𝐾𝐵 ∆𝑆
≠ ≠
∆𝐻 1
𝑙𝑛 𝑇
= 𝑙𝑛 ħ
+ 𝑅
− 𝑅 𝑇

Haciendo uso de los resultados previos, se realiza la siguiente regresión lineal:

T (°C) T (K) K (s-1) ln K/T 1/T (K-1)

30 303.15 0.3306 -6.821074 0.0032987

40 313.15 0.0344 -9.116384 0.0031934

50 323.15 0.1157 -7.934871 0.0030945

60 333.15 0.4177 -6.681585 0.0030017

Pendiente m (K) -1387.629

Ordenada b -3.271523

≠
Para el cálculo de ∆𝐻 :
≠
∆𝐻
𝑚 =− 𝑅
≠
∆𝐻 =− 𝑚𝑅
 ≠ −1 −1
∆𝐻 =− (− 1387. 629 𝐾)(8. 3145 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )
≠ −1
∆𝐻 = 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙

≠
Para obtener ∆𝑆 se realiza lo siguiente:

𝐾𝐵 ≠
∆𝑆
𝑏 = 𝑙𝑛 ħ
+ 𝑅
≠ 𝐾𝐵
∆𝑆 = 𝑅(𝑏 − 𝑙𝑛 ħ
)
−23 −1
≠ −1 −1 1.380649*10 𝐽𝐾
∆𝑆 = (8. 3145 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )(− 1. 37539242 − 𝑙𝑛 −34 )
6.62607*10 𝐽𝑠
≠ −1 −1
∆𝑆 =− 224. 7535 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾

≠
∆𝑈 se obtiene de la siguiente forma:

≠ ≠
∆𝑈 = ∆𝐻 + ∆𝑛𝑅𝑇
≠ ≠
∆𝑈 = ∆𝐻 + (𝐸 + 𝐷 + 𝐶 − 𝐴 − 𝐵)𝑅𝑇
≠ ≠
∆𝑈 = ∆𝐻 + (𝐸 + 𝐷 + 𝐶 − 𝐴 − 𝐵)𝑅𝑇
≠ −1
∆𝑈 = 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 + (1 + 2 + 1 − 1 − 3)𝑅𝑇
≠ −1
∆𝑈 = 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 + (0)𝑅𝑇
≠ −1
∆𝑈 = 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙

Para calcular la energía de gibbs de activación se usa la siguiente igualdad:

≠ ≠ ≠
∆𝐺 = ∆𝐻 − 𝑇∆𝑆
A 30°C (303.15 K)
≠ −1 −1 −1
∆𝐺 = ( 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 ) − (295. 15 𝐾)(− 224. 7535 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )
≠ −1
∆𝐺 = 79672. 15866 𝐽𝑚𝑜𝑙
A 40°C (313.15 K)
≠ −1 −1 −1
∆𝐺 = ( 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 ) − (295. 15 𝐾)(− 224. 7535 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )
≠ −1
∆𝐺 = 81919. 69366 𝐽𝑚𝑜𝑙
A 50°C (323.15 K)
≠ −1 −1 −1
∆𝐺 = ( 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 ) − (295. 15 𝐾)(− 224. 7535 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )
≠ −1
∆𝐺 = 84167. 22866 𝐽𝑚𝑜𝑙
A 60°C (333.15 K)
≠ −1 −1 −1
∆𝐺 = ( 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 ) − (295. 15 𝐾)(− 224. 7535 𝐽𝑚𝑜𝑙 𝐾 )
≠ −1
∆𝐺 = 86414. 76366 𝐽𝑚𝑜𝑙
De acuerdo a un estudio de Krajewska, Van Eldik y Brindel (2012), la temperatura óptima de
la ureasa se da a los 60°C, coincidiendo con nuestro resultado obtenido. Otro estudio de
Moyo, Kissel y Cabrera indica que la energía de activación de la ureasa puede estar en
−1 −1
rango de 15000 𝐽𝑚𝑜𝑙 a 96000 𝐽𝑚𝑜𝑙 , aunque nuestro valor estuvo un poco por debajo del
rango inferior podemos decir que los resultados obtenidos aún coinciden con la literatura.
Finalmente, Jespersen (1974) reportó que el valor de entalpía de esta reacción es de
−1
16000 𝐽𝑚𝑜𝑙 , pero variaba de acuerdo a la concentración y el pH (así como del buffer
−1
utilizado), que en comparación con nuestro valor de 11538. 135135 𝐽𝑚𝑜𝑙 , tomando en
cuenta la variación de acuerdo a la concentración que el artículo indica, es un valor que se
comporta cercano a lo reportado.

CONCLUSIONES

Se conoció y se estudió la descomposición de la urea por ureasa, se comprendió y se

estudió la cinética para reacciones catalizadas por enzimas, se obtuvieron los parámetros
cinéticos: constante de michaelis (𝐾𝑀) y rapidez máxima (𝑟𝑚𝑎𝑥) mediante la ecuación de
lineweaver-burk, Eadie-Hofstee y Hanes, se siguió el avance de reacción por medidas de
conductividad debido a el electrolito que se formaba en solución, Se estudió el efecto de la
temperatura sobre la rapidez de reacción en la catálisis enzimática y se determinó
experimentalmente la temperatura óptima de máxima actividad de un biocatalizador
(ureasa) y Se determinó la energía de activación de una reacción. Calcular energía interna,
entalpía, entropía y energía de Gibbs de activación (ΔU≠, ΔH≠, ΔS≠ y ΔG≠) de hidrólisis
biocatalítica de la urea.

REFERENCIAS

● Vargas, Y., Obaya, A. Cálculo de parámetros de rapidez en cinética química, cinética

enzimática y catálisis heterogénea. Universidad Nacional Autónoma de México.
México. 2011.
● Rodríguez Vargas, L. Termodinámica. Addison Wesley. México.
● Moyo, C. C., Kissel, D. E., & Cabrera, M. L. (1989). Temperature effects on soil
urease activity. Soil Biology & Biochemistry, 21(7), 935–938.
https://doi.org/10.1016/0038-0717(89)90083-7
● Krajewska, B., Van Eldik, R., & Brindell, M. (2012). Temperature- and
pressure-dependent stopped-flow kinetic studies of jack bean urease. Implications for
the catalytic mechanism. Journal of Biological Inorganic Chemistry, 17(7),
1123–1134. https://doi.org/10.1007/s00775-012-0926-8
● Jespersen, N. D. (1975). Thermochemical study of the hydrolysis of urea by urease.
Journal of the American Chemical Society, 97(7), 1662–1667.
https://doi.org/10.1021/ja00840a006

ANEXOS
El Factor de eficiencia viene dado por

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑅𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑜𝑠 [𝑘𝑔]

𝐸𝑚 = 𝑃𝑟á𝑐𝑡𝑖𝑐𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝐸𝑞𝑢𝑖𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑇𝑟𝑎𝑏𝑎𝑗𝑜

Durante toda la práctica se generaron 100 ml de residuo por equipo , por lo que el factor de
eficiencia es
0.100
𝐸𝑚 = 1
= 0. 100
Por otro lado, la economía atómica viene dada por cuanto de los reactivos pasaron a
productos al final de la reacción:
𝑀
𝐸𝐴 = 𝑛 × 100
∑𝑚
𝑖=1

Donde:
M es la masa molecular del producto
La sumatoria es la suma de las masas moleculares de los reactantes multiplicadas por su
coeficiente estequiométrico.

Para la práctica realizada la economía atómica queda de la siguiente manera:

𝐸𝐴 = 100%

Realizando el análisis de cada principio de la química verde aplicado a este experimento, se

obtiene lo siguiente:

Tabla 4. Análisis del experimento desde el punto de vista de la química verde

No. Observación del principio en la práctica Cumple

1 La mezcla de los reactantes es la necesaria para cubrir el EV = 0.100

electrodo, cada equipo genera 100mL de residuos. Sí

2 Se tiene una eficiencia atómica del 100% AE = 100%

Sí

3 Se utilizan y producen sustancias con poca toxicidad. Sí

4 Se redujo la toxicidad de los residuos. Sí

5 El avance de la reacción sólo se siguió por medidas de Sí

conductividad.

6 Todo el experimento se realizó a temperatura ambiente. Sí

7 La materia prima no es renovable. No

8 No es necesaria la formación de grupos de bloqueo. Sí

9 Se utiliza la catálisis. Sí

10 Los residuos son biodegradables. Sí

11 La reacción es monitoreada completamente. Sí

12 Se utilizaron soluciones diluidas, disminuyendo su riesgo. Sí

Este experimento cumple con once de los doce principios de la química verde, por lo
tanto, al diagrama de flujo ecológico le corresponde el matiz RGB: 122,185,41.
Los residuos son biodegradables, matiz RGB: 79,174,50.

Los residuos son biodegradables, por lo que se recomienda utilizarlos como abono.