Cátedra de Biotecnología – Titular: Ing. Ricardo Puglisi – JTP: Ing.

Noelia Robles

TRABAJO PRÁCTICO DE LABORATORIO Nº4: Optimización de un medio de cultivo para levaduras

empleando el diseño robusto de Taguchi

MATRIZ DE TAGUCHI para 4 variables con 2 niveles

Para elegir el diseño definitivo que tendría un producto es importante experimentar distintas
posibilidades para ver cual resulta más adecuada. Este proceso se conoce como Diseño Experimental o
Diseño de Experimentos.

Sin embargo, experimentar un diseño puede implicar múltiples tareas: construir un prototipo, someterlo
a diversas pruebas técnicas de laboratorio, hacer ensayos con público real para estudiar sus reacciones,
etc. todas estas medidas implican costos que pueden llegar a ser muy altos.

Si no se experimenta con distintas posibilidades, corremos el riesgo de acabar fabricando un diseño que
esté lejos de ser el mejor. Pero si experimentamos con todas las posibilidades, podríamos incurrir en
costos muy elevados. Lo mejor sería alcanzar un equilibrio entre riesgo y costo es decir utilizar
procedimientos de experimentación que nos permitan encontrar un buen diseño (aunque no sea el
mejor) realizando un número de experimentos relativamente reducido.

Las técnicas de Diseño Experimental de Genichi TAGUCHI permiten alcanzar este equilibrio. Se basan en
la aplicación de una serie de matrices ortogonales que indican los experimentos a realizar.

Supongamos que deseamos diseñar un aliño para ensaladas que será envasado industrialmente y
vendido en grandes centros comerciales. Para ello tenemos 10 posibles ingredientes y 4 alternativas
para cada uno: incluirlo o no incluirlo. El número total de aliños que podemos hacer será el número de
combinaciones de 10 elementos tomados de a 4, (no se pueden repetir y el orden no importa) es decir:

𝑛! 10!
=
𝑟! (𝑛 − 𝑟)! 10! (10 − 4)!

Que da un valor de 210.

Para comprobar la aceptación de un aliño se comprobaría la reacción de 1.000 clientes potenciales para
lo cual ¡habría que preparar 210.000 ensaladas!

Esto puede suponer un costo enorme además de un consumo de tiempo y una logística muy
importante.

Siguiendo las técnicas de TAGUCHI encontraríamos un buen aliño experimentando únicamente 4 aliños
que elegiríamos de acuerdo a los criterios tradicionales de consumo de los potenciales clientes. Por
ejemplo en Argentina podríamos eliminar una salsa de algas o la salsa de soja.

Si elegimos los 4 ingredientes principales y dos niveles de agregados para cada uno de ellos, las matrices
de TAGUCHI nos permiten reducir este número a 16 (es decir 2 elevado a la 4).

Nuestro diseño que aunque no necesariamente el mejor es bastante bueno y reducimos el coste en
(210.000 – 16.000)/210.000 x 100 = 92,3%!!!!!!!

para cuatro variables con dos niveles el diseño de TAGUCHI nos presenta esta matriz:

1
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Corrida A B C D AB AC BC ABC AD BD ABD CD ACD BCD ABCD Resultado

1 1 1 1 1 2 2 2 1 2 2 1 2 1 1 2
2 2 1 1 1 1 1 2 2 1 2 2 2 2 1 1
3 1 2 1 1 1 2 1 2 2 1 2 2 1 2 1
4 2 2 1 1 2 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2
5 1 1 2 1 2 1 1 2 2 2 1 1 2 2 1
6 2 1 2 1 1 2 1 1 1 2 2 1 1 2 2
7 1 2 2 1 1 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
8 2 2 2 1 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1
9 1 1 1 2 2 2 2 1 1 1 2 1 2 2 1
10 2 1 1 2 1 1 2 2 2 1 1 1 1 2 2
11 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 1 2 1 2
12 2 2 1 2 2 1 1 1 2 2 2 2 1 1 1
13 1 1 2 2 2 1 1 2 1 1 2 2 1 1 2
14 2 1 2 2 1 2 1 1 2 1 1 2 2 1 1
15 1 2 2 2 1 1 2 1 1 2 1 2 1 2 1
16 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2

En ella A, B, C y D son las variables y en las columnas respectivas los niveles para cada una de ellas,
indicando con 1 sus niveles por debajo de un valor tomado como referente y 2 los niveles por encima
del mismo. Las otras columnas indican las interacciones entre cada una de las variables y es tema de
otra asignatura.

La columna “resultados” son los valores experimentales obtenidos para cada una de las experiencias.

El método es aplicable a todas las ramas del diseño y la ingeniería. Por ejemplo, las variables de un
proceso químico podrían ser la presión, la temperatura y las concentraciones de dos reactivos
considerados claves para la reacción química de fabricación.

Por supuesto hay matrices de TAGUCHI para más variables y niveles de variables.

Aplicaremos la metodología de TAGUCHI para optimizar la composición de un medio de cultivo para

Saccharomyces cerevisiae considerando como importantes de acuerdo a nuestra experiencia los niveles
de 4 componentes de un medio de cultivo de referencia.

Medio de cultivo para Saccharomyces cerevisiae (pH 4,5; 28º a 32ºC).

Disponible en
COMPOSICIÓN DE REFERENCIA [g/l] Cantidad
laboratorio

Glucosa 20

Fosfato diamónico 6 PO4H(NH4)2

Fosfato monopotásico 1,5 PO4H2K

Magnesio 0,2 SO4Mg.7H2O

Sodio 0,005 ClNa

Zinc 0,001 ClZn

Hierro 0,001 Cl3Fe

Calcio 0,010 Cl2Ca.2H2O

Cobre 0,0005 SO4Cu.5H2O

2
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Actividades

1. Preparar el inóculo (o pie de cuba, en la industria vitivinícola) de los frascos de la experiencia

sembrando 0,5 g de levadura prensada de panadería durante 24 horas en mesa agitada en un
medio compuesto de 5 g de extracto de levadura, 10 g de peptona de carne y 10 g de glucosa a
pH 4,5. CONSERVAR EN LA HELADERA si no se utiliza de inmediato.
2. Elegir 4 variables y asignar 2 niveles.
3. Preparar el medio de cultivo sin agregar las variables.
4. Fraccionar 40 ml de medio de esta solución en 20 Erlenmeyers de 250 ml.
5. Para agregar las variables en sus niveles preparar 4 soluciones de las que se agregarán los
niveles inferior y superior. Los agregados de las variables de soluciones para cada una de las
variables deben estar en el orden de 1 a 2 ml.
6. A los 16 frascos correspondientes al diseño del experimento agregar 4 más como duplicados de
las variables que corresponderán a las muestras, N° ___;___;___ y ___, respectivamente,
completando el siguiente cuadro:

VARIABLES
CORRIDA
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

7. Completada la composición de medio de cultivo en cada frasco, inocular cada uno con 1 ml del
inóculo preparadosegún (1). Esto elimina en nuestros experimentos la posibilidad de que el
estado de nuestros microorganismos fueran diferentes en cada ensayo. ¡Eliminar este
inconveniente es FUNDAMENTAL EN BIOTECNOLOGÍA!
8. Cultivar durante 24 horas a temperatura de 28º a 32ºC.
9. Medir la densidad óptica a 450 nm o la turbiedad con un turbidímetro en cada frasco,
completando el siguiente cuadro con los resultados obtenidos (en caso de ser necesario,
efectuar una dilución 1:___ de cada muestra para poder medir la turbidez correspondiente a
cada una).

3
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Nº de Turbidez
muestra (NTU)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

10. Determinar para qué combinación de niveles de las variables se obtuvo mayor concentración
celular.
11. Conservar en heladera el cultivo para utilizarlo como inóculo del próximo Trabajo Práctico.
12. Con las referencias previas se desea conocer:

 ¿Qué criterio hubiera empleado para decidir qué muestras dejaba fuera de la mesa, sin
agitación?
 ¿Qué conclusión puede sacar sobre las muestras que estuvieron en agitación y las que no?
 ¿Qué conclusión puede sacar sobre las muestras y los controles colocados en agitación?
Correspondientes a los pares ___-___; ___-___; ___-___ y ___-___.
 Al momento de poner a punto su experimento, ¿Qué formulación desarrollaría como medio
de cultivo óptimo para las levaduras y cuál sería su composición?

CÁLCULOS

Sodio

Variable A: Sodio (como ClNa)

𝑃𝑀 𝐶𝑙𝑁𝑎: 35,5 𝑔 + 23 𝑔 = 58,5 𝑔 ∴ 58,5 𝑔 𝐶𝑙𝑁𝑎 → 23 𝑔 𝑁𝑎

𝒈 𝑵𝒂
Nivel de referencia: 𝟎, 𝟎𝟎𝟓𝟎 𝒍

23 𝑔 𝑁𝑎 → 58,5 𝑔 𝐶𝑙𝑁𝑎

4
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𝑔 𝑁𝑎 0,005 𝑔 𝑁𝑎 𝑔 𝐶𝑙𝑁𝑎
0,005 𝑙
→ 𝑋𝑁𝑎 = 23 𝑔 𝑁𝑎 𝑙
𝑥 58,5 𝑔 𝐶𝑙𝑁𝑎 = 0,013 ~ 0,015 𝑙

𝒈 𝑪𝒍𝑵𝒂
𝑋Na = 0,015 (cantidad de ClNa que se debe agregar para obtener 0,005 g Na por litro de
𝒍
Medio de cultivo)

Como el medio de cultivo en cada Erlenmeyer tendrá un volumen de 40 ml, se calcula la

cantidad de ClNa a agregar proporcionalmente.

1000 ml medio → 𝟎, 𝟎𝟏𝟓 𝒈 𝑪𝒍𝑵𝒂

40 ml MC
40 ml medio (MC) → X = 𝒙 0,015 g ClNa = 0,0006 𝑔 𝐶𝑙𝑁𝑎
1000 ml MC

𝒎𝒈 𝒈
Se prepara una solución de 600 (0,6 ) de ClNa, es decir 1000 veces más concentrada. En
𝒍 𝒍
𝒎𝒈
esta última, 1 ml contiene los 0,6 de ClNa para los 40 ml del MC, éste es el NIVEL DE REFERENCIA.
𝒍

Se eligen ahora los niveles inferior y superior:

𝒈 𝑵𝒂 𝒈 𝑵𝒂
Inferior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟐𝟓 Superior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟕𝟓
𝒍 𝒍

Para los 40 ml de MC se deberá agregar:

𝒈 𝑵𝒂
Nivel de referencia: 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0050 𝒍

𝒈 𝑵𝒂
Nivel inferior: 0,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0025
𝒍

𝒈 𝑵𝒂
Nivel superior: 1,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0075
𝒍

___________________________________________________________________________

Hierro

Variable B: Hierro (como Cl3Fe)

𝑃𝑀 𝐶𝑙3 𝐹𝑒: 3 . 35,5 𝑔 + 56 𝑔 = 162,5 𝑔 ∴ 162,5 𝑔 𝐶𝑙3 𝐹𝑒 → 56 𝑔 𝐹𝑒

𝒈 𝑭𝒆
Nivel de referencia: 𝟎, 𝟎𝟎𝟏
𝒍

56 𝑔 𝐹𝑒 → 162,5 𝑔 𝐶𝑙3 𝐹𝑒

𝑔 𝐹𝑒 0,001 𝑔 𝐹𝑒 𝑔𝐶𝑙3 𝐹𝑒
0,001 → 𝑋𝐹𝑒 = 𝑥 162,5 𝑔 𝐶𝑙3 𝐹𝑒 ≅ 0,003
𝑙 56 𝑔 𝐹𝑒 𝑙 𝑙

5
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𝑔𝐶𝑙3 𝐹𝑒
𝑋Fe = 0,003 𝑙
(cantidad de Cl3Fe que se debe agregar para obtener 0,001 g Fe por litro de
Medio de cultivo)

Como el medio de cultivo en cada Erlenmeyer tendrá un volumen de 40 ml, se calcula la

cantidad de Cl3Fe a agregar proporcionalmente.

1000 ml medio → 𝟎, 𝟎𝟎𝟑 𝒈 𝑪𝒍𝟑 𝑭𝒆

40 ml MC
40 ml medio (MC) → X = 𝒙 0,003 g 𝐶𝑙3 𝐹𝑒 = 0,00012 𝑔 𝐶𝑙3 𝐹𝑒
1000 ml MC

𝒎𝒈 𝒈
Se prepara una solución de 120 𝒍
(0,12 𝒍
) de Cl3Fe, es decir 1000 veces más concentrada.
𝒎𝒈
En esta última, 1 ml contiene los 0,12 𝒍
de Cl3Fe para los 40 ml del MC, éste es el NIVEL DE
REFERENCIA.

Se eligen ahora los niveles inferior y superior:

𝒈 𝑭𝒆 𝒈 𝑭𝒆
Inferior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟓 Superior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟓
𝒍 𝒍

Para los 40 ml de MC se deberá agregar:

𝒈 𝑭𝒆
Nivel de referencia: 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,001 𝒍

𝒈 𝐹𝑒
Nivel inferior: 0,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0005 𝒍

𝒈 𝐹𝑒
Nivel superior: 1,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0015 𝒍

_____________________________________________________________________________

Calcio

Variable C: Calcio (como Cl2Ca.2H2O)

𝑃𝑀 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂: 2 . 35,5 𝑔 + 40 𝑔 + 2 . 18 𝑔 = 147 𝑔 ∴ 147 𝑔 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂 → 56 𝑔 𝐶𝑎

𝒈 𝑪𝒂
Nivel de referencia: 𝟎, 𝟎𝟏𝟎
𝒍

40 𝑔 𝐶𝑎 → 147 𝑔 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂

𝑔 𝐶𝑎 0,010 𝑔 𝐶𝑎 𝑔𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂

0,010 → 𝑋𝐶𝑎 = 𝑥 147 𝑔 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂 ≅ 0,040
𝑙 40 𝑔 𝐶𝑎 𝑙 𝑙

6
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𝑔𝐶𝑙2 𝐶𝑎.2𝐻2 𝑂
𝑋Ca = 0,040 𝑙
(cantidad de 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂 que se debe agregar para obtener 0,01 g Ca por
litro de Medio de cultivo)

Como el medio de cultivo en cada Erlenmeyer tendrá un volumen de 40 ml, se calcula la

cantidad de 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂 a agregar proporcionalmente.

1000 ml medio → 𝟎, 𝟎𝟒𝟎 𝒈 𝑪𝒍𝟐 𝑪𝒂. 𝟐𝑯𝟐 𝑶

40 ml MC
40 ml medio (MC) → X = 𝒙 0,040 g 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂 = 0,0016 𝑔 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂
1000 ml MC

𝒎𝒈 𝒈
Se prepara una solución de 1.600 𝒍
(1,6 𝒍
) de 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂, es decir 1000 veces más
𝒎𝒈
concentrada. En esta última, 1 ml contiene los 1,6 𝒍
de 𝐶𝑙2 𝐶𝑎. 2𝐻2 𝑂 para los 40 ml del MC, éste es el
NIVEL DE REFERENCIA.

Se eligen ahora los niveles inferior y superior:

𝒈 𝑪𝒂 𝒈 𝑪𝒂
Inferior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟓 𝒍
Superior: 𝟎, 𝟎𝟏𝟓 𝒍

Para los 40 ml de MC se deberá agregar:

𝒈 𝑪𝒂
Nivel de referencia: 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,010
𝒍

𝒈 𝐶𝑎
Nivel inferior: 0,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,005 𝒍

𝒈 𝐶𝑎
Nivel superior: 1,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,015 𝒍

_____________________________________________________________________________

Cobre

Variable D: Cobre (como SO4Cu.5H2O)

𝑃𝑀 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂: 32 𝑔 + 4 . 16 𝑔 + 63 𝑔 + 5 . 18 𝑔 = 249,5 𝑔

∴ 249,5 𝑔 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂 → 63,5 𝑔 𝐶𝑢

𝒈𝑪𝒖
Nivel de referencia: 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟓𝟎 𝒍

63,5 𝑔 𝐶𝑢 → 249,5 𝑔 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂

𝑔 𝐶𝑢 0,0005 𝑔 𝐶𝑢 𝑔𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂

0,00050 → 𝑋𝐶𝑢 = 𝑥 249,5 𝑔 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂 ≅ 0,002
𝑙 63,5 𝑔 𝐶𝑢 𝑙 𝑙

7
 Cátedra de Biotecnología – Titular: Ing. Ricardo Puglisi – JTP: Ing. Noelia Robles

𝑔𝑆𝑂4 𝐶𝑢.5𝐻2 𝑂
𝑋Cu = 0,002 𝑙
(cantidad de 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂 que se debe agregar para obtener 0,0005 g Cu
por litro de Medio de cultivo)

Como el medio de cultivo en cada Erlenmeyer tendrá un volumen de 40 ml, se calcula la

cantidad de 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂a agregar proporcionalmente.

1000 ml medio → 𝟎, 𝟎𝟎𝟐 𝒈 𝑺𝑶𝟒 𝑪𝒖. 𝟓𝑯𝟐 𝑶

40 ml MC
40 ml medio (MC) → X = 𝒙 0,002 g 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂 = 0,00008 𝑔 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂
1000 ml MC
= 0,08 𝑚𝑔 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂

𝒎𝒈 𝒈
Se prepara una solución de 80 (0,08 ) de 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂, es decir 1000 veces más
𝒍 𝒍
𝒎𝒈
concentrada. En esta última, 1 ml contiene los 0,08 de 𝑆𝑂4 𝐶𝑢. 5𝐻2 𝑂para los 40 ml del MC, éste es
𝒍
el NIVEL DE REFERENCIA.

Se eligen ahora los niveles inferior y superior:

𝒈 𝑪𝒖 𝒈 𝑪𝒖
Inferior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟐𝟓 Superior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟕𝟓
𝒍 𝒍

Para los 40 ml de MC se deberá agregar:

𝒈 𝑪𝒖
Nivel de referencia: 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0005 𝒍

𝒈 𝐶𝑢
Nivel inferior: 0,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,00025 𝒍

𝒈 𝐶𝑢
Nivel superior: 1,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,00075
𝒍

_____________________________________________________________________________

Zinc

Variable E: Zinc (como ClZn)

𝑃𝑀 𝐶𝑙𝑍𝑛: 35,5 𝑔 + 65 𝑔 = 100,5 𝑔 ∴ 100,5 𝑔 𝐶𝑙𝑍𝑛 → 65 𝑔 𝑍𝑛

𝒈𝒁𝒏
Nivel de referencia: 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟎
𝒍

65 𝑔 𝑍𝑛 → 100,5 𝑔 𝐶𝑙𝑍𝑛

𝑔 𝑍𝑛 0,001 𝑔 𝑍𝑛 𝑔𝐶𝑙𝑍𝑛
0,001 → 𝑋𝑍𝑛 = 𝑥 100,5 𝑔 𝐶𝑙𝑍𝑛 = 0,0015
𝑙 65 𝑔 𝑍𝑛 𝑙 𝑙

8
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𝑔𝐶𝑙𝑍𝑛
𝑋𝑍𝑛 = 0,0015 𝑙
(cantidad de 𝐶𝑙𝑍𝑛 que se debe agregar para obtener 0,001 g Zn por litro de
Medio de cultivo)

Como el medio de cultivo en cada Erlenmeyer tendrá un volumen de 40 ml, se calcula la

cantidad de 𝐶𝑙𝑍𝑛 a agregar proporcionalmente.

1000 ml medio → 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟓 𝒈 𝑪𝒍𝒁𝒏

40 ml MC
40 ml medio (MC) → X = 𝒙 0,0015 g 𝐶𝑙𝑍𝑛 = 0,00006 𝑔 𝐶𝑙𝑍𝑛 = 0,06 𝑚𝑔 𝐶𝑙𝑍𝑛
1000 ml MC

𝒎𝒈 𝒈
Se prepara una solución de 60 𝒍
(0,06 𝒍
) de 𝐶𝑙𝑍𝑛, es decir 1000 veces más concentrada. En
𝒎𝒈
esta última, 1 ml contiene los 0,06 𝒍
de 𝐶𝑙𝑍𝑛para los 40 ml del MC, éste es el NIVEL DE REFERENCIA.

Se eligen ahora los niveles inferior y superior:

𝒈 𝒁𝒏 𝒈 𝒁𝒏
Inferior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟓 Superior: 𝟎, 𝟎𝟎𝟏𝟓
𝒍 𝒍

Para los 40 ml de MC se deberá agregar:

𝒈 𝑍𝑛
Nivel de referencia: 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0010
𝒍

𝒈𝑍𝑛
Nivel inferior: 0,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0005 𝒍

𝒈 𝑍𝑛
Nivel superior: 1,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,0015 𝒍

_____________________________________________________________________________

Magnesio

Variable F: Magnesio (como SO4Mg.7H2O)

𝑃𝑀 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂: 32 𝑔 + 4 . 16 𝑔 + 24 𝑔 + 7 . 18 𝑔 = 246 𝑔

∴ 246 𝑔 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂 → 24 𝑔 𝑀𝑔

𝒈𝑴𝒈
Nivel de referencia: 𝟎, 𝟐 𝒍

24 𝑔 𝑀𝑔 → 246 𝑔 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂

𝑔 𝑀𝑔 0,2 𝑔 𝑀𝑔 𝑔𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂

0,2 → 𝑋𝑀𝑔 = 𝑥 246 𝑔 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂 = 2,05
𝑙 24 𝑔 𝑀𝑔 𝑙 𝑙

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𝑔𝑆𝑂4 𝑀𝑔.7𝐻2 𝑂
𝑋𝑍𝑛 = 2,05 𝑙
(cantidad de 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂 que se debe agregar para obtener 0,2 g Mg por
litro de Medio de cultivo)

Como el medio de cultivo en cada Erlenmeyer tendrá un volumen de 40 ml, se calcula la

cantidad de 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂 a agregar proporcionalmente.

1000 ml medio → 𝟐, 𝟎𝟓 𝒈 𝑺𝑶𝟒 𝑴𝒈. 𝟕𝑯𝟐 𝑶

40 ml MC
40 ml medio (MC) → X = 𝒙 2,05 g 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂 = 0,082 𝑔 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂
1000 ml MC
= 82 𝑚𝑔 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂

𝒎𝒈 𝒈
Se prepara una solución de 82.000 𝒍
(82 𝒍 ) de 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂, es decir 1000 veces más
𝒎𝒈
concentrada. En esta última, 1 ml contiene los 82 de 𝑆𝑂4 𝑀𝑔. 7𝐻2 𝑂 para los 40 ml del MC, éste es el
𝒍
NIVEL DE REFERENCIA.

Se eligen ahora los niveles inferior y superior:

𝒈 𝑴𝒈 𝒈 𝑴𝒈
Inferior: 𝟎, 𝟏 𝒍
Superior: 𝟎, 𝟑 𝒍

Para los 40 ml de MC se deberá agregar:

𝒈 𝑀𝑔
Nivel de referencia: 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,2 𝒍

𝑔𝑀𝑔
Nivel inferior: 0,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,1 𝑙

𝒈 𝑀𝑔
Nivel superior: 1,5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑝𝑜𝑟𝑡𝑎 0,3
𝒍

10