Fisiología Celular BC3421

Unidad III
El Ciclo celular y su Regulación
Unidad III.- El Ciclo celular y
su Regulación
Estadios del ciclo celular. Tipos de
ciclos celulares. Proteínas regulatorias del
ciclo celular: la ciclina y el factor de
maduración MPF. El papel de la
fosforilación de proteínas en el acoplamiento
de las distintas fases del ciclo celular. (4 hrs.)
Todos los organismos vivos son producto de repetidos ciclos de crecimiento y división celular, desde que
comenzó la vida en al tierra
 Bacterias Eucariotes
Tipos de ciclos celulares
HUMANO adulto está compuestos por10 15células
que Componen los tejidos y órganos

Muchas se dividen y diferencian

para recambio celular Intestino
Piel

Médula
ósea
Repetidos ciclos de
crecimiento y división celular

CICLO CELULAR
Vías de Señalización del Control del Ciclo Celular
La Función básica del ciclo celular es duplicar el ADN de los cromosomas de manera exacta y segregar
las copias en forma precisa.
La duplicación Interfase. Específicamente en la Fase S (10-12 horas)
División Fase M (mitosis) (< 1 hora)

La división celular en eucariotas vista bajo el microscopio

El ciclo celular en células estándar y en células embrionarias tempranas
 El ciclo celular de divide en cuatro fases principales
1h

Muchas células requieren más tiempo

para crecer y duplicar su masa de
proteínas y organelos. Existen espacios
de tiempo (Gaps) entre la fase M
(mitotica) y S (síntesis)
(G1) y entre la S y M (G2)
23- 24 h

En los organismos multicelulares la

mayoría de células diferenciadas salen
del ciclo celular (p.e. cél. cristalino y
neuronas) Estas entran en G0
El control es importante:
El genoma debe replicarse una vez antes de la mitosis y la mitosis deben finalizar antes de la siguiente
replicación
Proteínas quinasas cíclicamente activadas
Quinasas dependientes de CICLINAS (Cdk)

Permiten la fosforilación de proteínas intracelulares que inician

o regulan los principales eventos del ciclo celular:
• Replicación
• Mitosis
• Citoquinesis

Ciclinas controlan
actividad de cdk
Sin las ciclinas carecen de
actividad de quinasa
Diferentes ciclinas durante progresión del ciclo celular

Ciclinas G1/S: se unen al Cdks al final de G1 y promueve la replicación del DNA

Ciclinas S: se unen a las Cdks durante la fase S y son requeridas para la replicación
Ciclinas M: Promueven la mitosis
 3 clases principales de CDK-
La fosforilación y la degradación regulada de Ciclinas(verde)

las proteínas controla el pasaje a través del

CICLO CELULAR

CICLINAS: Cambios en las concentraciones

controlan los acontecimientos en el CC. Son
subunidades de Proteínas quinasas (Llamadas
quinasas dependientes de ciclinas, CDK)
Se mantienen inhibidos hasta
Las CDKs se pueden asociar a diferentes ciclinas que finalice la síntesis de DNA
y fosforilará determinadas proteínas que
actuarán en un punto específico del ciclo
celular.
Puntos de control del
ciclo celular

Señales negativas controlan el ciclo

Mutaciones eliminan el control

El control no es esencial para la

progresión del ciclo
 Control del ciclo celular

1980 Identificación de proteínas claves

Sistema de control permite la ocurrencia de los pasos secuenciales
durante el proceso:

 Replicación del DNA

 Mitosis
 Citoquinesis
Control central que dispara cada proceso secuencialmente

oEl conjunto de procesos que ocurren durante el ciclo celular llevan un orden y
supervisión estrictos.
oSeñales provenientes del medio y algunos controladores dentro de la célula, se
encargan de dirigir el progreso de ésta a través de las distintas fases del ciclo
celular.
oEntonces hablamos de que hay una regulación extracelular y una regulación
intracelular.
 El ciclo celular y su control ha sido estudiando comúnmente en:

Células de mamíferos en cultivo Líneas celulares inmortales

Embriones de rana Huevos fertilizados

Levaduras Mutantes cds (cell division cycle)

 Experimentos
Líneas celulares de mamíferos
Fusión de células
Experimentos de este tipo ayudaron a contestar si hay factores que regulan el ciclo celular en el citoplasma de las células que se encuentran en dicho ciclo.

1 2 3
 Experimentos

Marcaje con BrdU (5-bromo-2-deoxiuridina)

Análogo de la timina que se incorpora en el DNA de

las células. BrdU se puede marcar con un anti-
cuerpo fluorescente , se incorpora preferiblemente a
DNA recién replicado. Se observan los cambios de
posición que sufre el DNA durante la fase M del ciclo
celular.
Bromodesoxiuridina
(BrdU o 5-bromo-2-
Timidina o timina desoxiuridina)
 Experimentos

Citometría de flujo
Se puede medir la intensidad de fluorescencia de células
marcadas fluorescentemente a una alta velocidad (miles de
células por minuto).

Se marca el DNA de células y se mide la intensidad de

fluorescencia de cada uno. La intensidad de fluorescencia va
a ser proporcional a la cantidad de DNA que hay en la
célula. Las células en G1 tiene cierta cantidad de DNA
(indicado por el número 1 en la escala arbitraria), que
células en S tienen una cantidad intermedia de DNA, ya que
están en el proceso de replicación, y que células en G2 y M
tienen doble la cantidad de DNA en comparación con
células en G1 (indicado con el numero 2).
 Experimentos

Los ovocitos de ranas

Ovocitos no fertilizados están normalmente arrestados en fase G2. Se mantienen así 8 meses, tiempo
en el que aumenta el tamaño hasta 1 mm. Cuando es estimulada por el macho , la hembra libera
progesterona e induce a los ovocitos a llevar a cabo meiosis hasta quedar arrestados en metafase II
(HUEVO MADURO). Cuando se fertiliza el ovocito es que se completa meiosis y entonces ocurre la
fusión de los núcleos de los gametos.
 Experimentos

Los ovocitos de ranas

Ovocitos no fertilizados están normalmente arrestados en fase G2. Se extraen del ovario y son
expuestos a progesterona, los ovocitos llevan a cabo meiosis hasta quedar arrestados en metafase II
(maduración meiótica). Solamente cuando se fertiliza el ovocito es que se completa meiosis y
entonces ocurre la fusión de los núcleos de los gametos.
 Experimentos
Los ovocitos de ranas
Se remueve el citoplasma de ovocitos arrestados en metafase II (expuestos a progesterona). De ese citoplasma, se
aísla un componente necesario para el ciclo celular. En un experimento, se inyectó el citoplasma extraído en un
ovocito arrestado en G2 (no expuesto a progesterona) (1A) y en otro experimento, se inyectó el componente
aislado en un ovocito arrestado en G2 también (1B).
De esta manera se indujo la meiosis en ambos ovocitos que se les inyectó o el citoplasma extraído o el componente
aislado.

El componente aislado que está en el citoplasma de ovocitos arrestados en metafase II induce la maduración de
un ovocito arrestado en G2. Ese componente aislado se nombró MPF (“maturation/mitosis promoting factor”)
 Experimentos

Estudios subsiguientes:
Se estudio la actividad de MPF (Usando sistema de microinyección) a través del ciclo celular de un ovocito
en proceso de maduración, y se observó lo siguiente:
Cuando inyectan citoplasma de células de
mamíferos detenidas en metafase con
colchicina a ovocitos en G2 se induce
maduración del huevo. Mamíferos también se
encuentra el factor MFP

MFP-> Ciclina + CDK

 Experimentos
Embriones de erizos
 Células embrionarias se dividen rápidamente, lo cual
las hace ideal para estudiar el ciclo celular

 Observaron que una proteína alcanzaba nivel

máximo antes del comienzo de la mitosis y luego era
destruida abruptamente antes de la división

 Fue denominada Ciclina B

 Se mide la cantidad de ciclina B y el porcentaje de

células dividiéndose a intervalos de 10 minutos.

El aumento transitorio de ciclina induce a que haya

un aumento en el número de células dividiéndose.
Esto implica que esta ciclina induce/regula la mitosis
 Experimentos
Sistema libre de células
En este sistema, ocurre la división nuclear con la formación del huso mitótico y cromosomas. La ventaja de este
sistema es que se puede controlar qué factores están presentes en el las etapas del ciclo mitótico. (Nota: En este
sistema, ocurre la traducción de proteínas.)

Se incuban las reacciones donde ocurre la

división nuclear y se mide la concentración de
ciclina B y la actividad de MPF a diferentes
tiempos después de iniciar el ciclo de mitosis al
añadir un núcleo de un espermatozoide y ATP.
Las reacciones fueron las siguientes: (a) no
tratada (control), (b) tratada con RNasa, (c)
tratada con RNasa y luego se le añadió el mRNA
que codifica para ciclina B “wild type”, y (d)
tratada con RNasa y luego se le añadió el mRNA
que codifica para una ciclina B que no es
degradable por proteasas.
 Experimentos
Las siguientes gráficas presentan los resultados de los experimentos.

Se requiere la producción (a partir de la traducción del mRNA correspondiente) y destrucción (por proteasas) de
cyclina B—lo cual forma parte del complejo de MPF—para que ocurran todas las etapas de mitosis.
Importante en Mitosis

MPF

Factor promotor de la maduración

Factor promotor de la mitosis

 Experimentos
Levaduras sensibles a temperaturas altas; cdc (“cell-division cycle”) mutantes

Mutantes sensibles a temperaturas altas ->presentan un fenotipo “wild type” a

temperaturas bajas (25°C) y presentan uno mutante a temperaturas altas (37°C).
 Experimentos
Levaduras sensibles a temperaturas altas; cdc (“cell-division cycle”) mutantes
Se observan diferencia morfológicas en la división de dos especies de levadura. Schizosaccharomyces
pombe (“fission yeast”) se alarga antes de dividirse y se divide equitativamente, su envoltura nuclear no
se rompe durante mitosis mientras que Saccharomyces cerevisiae (“budding yeast”) se divide
desigualmente su fase G2 no es normal.
 Experimentos
Saccharomyces cerevisiae (“budding yeast”) (A) División celular de “wild type”; (B)
Células mutantes arrestadas en una etapa de su ciclo celular, dado que no se
desprenden las células hijas y empiezan a incorporar la misma cantidad de
citoplasma comparado con la célula madre.

Schizosaccharomyces pombe (“fission yeast”) El panel superior muestra células “wild

type” dividiéndose; el panel del medio muestra células mutantes arrestadas en una
etapa de su ciclo celular que tienen un largo más grande de lo normal, esto se debe
a que completan anafase pero no completan mitosis ni citokinesis; el panel inferior
enseña células mutantes que se dividen a la mitad del largo normal.
 Experimentos
Levaduras sensibles a temperaturas altas; cdc (“cell-division cycle”) mutantes
Identificación de gen mutado
 Experimentos
Identificación de gen mutado usando
biblioteca de genes humanos

Human genes
library
En todas las células eucariotas se requieren tres clases de ciclinas

Mamiferos Ciclina D en G1
 En todas las células eucariotas se requieren tres clases de ciclinas
Ciclina G1 Inicia el ciclo
Ciclinas G1/S: se unen al Cdks al final de G1 y promueve la replicación del DNA
Ciclinas S: se unen a las Cdks durante la fase S y son requeridas para la replicación
Ciclinas M: Promueven la mitosis

En algunas células existen las ciclinas G1, las cuales promueven el paso del punto de
restricción G1

En levaduras, una única Cdk se une a todas las clases de ciclinas

La cdk fosforila aminoácidos específicos de
algunas proteínas, pero sólo si esta unida a
una ciclina. Se conocen 6 distintas
combinaciones de cdk-ciclina que actúan
en tiempos específicos durante el ciclo
Expresión diferencial de ciclinas en las distintas fases del ciclo.
¿Cómo los diferentes complejos ciclina-Cdk regulan los diferentes eventos del ciclo celular?

Activación de la Cdk por unión a su ciclina y fosforilación de una Treonina por una CAK
Los niveles de ciclina determinan la actividad de Cdk durante el ciclo celular, sin embargo
pueden operar otros mecanismos para afinar el control para que sólo ocurra la activación
en el momento preciso

La actividad del complejo ciclina-Cdk puede ser También puede ser regulado pór unión
inhibido por fosforilación (Mitosis) de inhibidores (CKIs) (S)
Proteolisis de las ciclinas y CDKs

SCF constitutivamente activa

APC activada al final de la mitosis

La actividad Cdk también puede ser

modulada mediante la alteración de su
localización y /o la accesibilidad a los
sustratos, aunque estos mecanismos de
regulación están menos caracterizados
Puntos de
control
 Ciclo celular y cáncer

Punto de restricción
El punto de restricción se encuentra casi
al final de G1 puesto que si la célula lo
pasa se encuentra “comprometida”
irreversiblemente a entrar al ciclo
celular, independientemente de lo que
suceda en el exterior
 Punto de restricción
Señales extracelulares disparan la progresión de G1 a S (inducen ciclina/cdk)
El punto de restricción se encuentra casi al final de G1 se conoce así puesto que si la
célula lo pasa se encuentra “comprometida” irreversiblemente a entrar al ciclo celular,
independientemente de lo que suceda en el exterior

Debe remover los impedimentos negativos para progresar a S

p16 (INK4), se encarga de inhibir a los

complejos cdk4, 6 –ciclina D (G1- Cdk).

La acción de la p16 tiene que ver con el

medio extracelular, pues se sabe que si no
existen suficientes señales del exterior
(mitógenos, factores de crecimiento,
nutrientes, etc.)
p16 tiende a acumularse, por lo que se
hace muy activo.
 Punto de restricción
Señales extracelulares disparan la progresión de G1 a S (inducen ciclina/cdk)
El punto de restricción se encuentra casi al final de G1 se conoce así puesto que si la
célula lo pasa se encuentra “comprometida” irreversiblemente a entrar al ciclo celular,
independientemente de lo que suceda en el exterior

Debe remover los impedimentos negativos para progresar a S

p16 (INK4), se encarga de inhibir a los complejos

cdk4, 6 –ciclina D (G1- Cdk).

La acción de la p16 tiene que ver con el medio

extracelular, pues se sabe que si no existen
suficientes señales del exterior (mitógenos, factores
de crecimiento, nutrientes, etc.)
p16 tiende a acumularse, por lo que se hace muy
activo.
Es desfosforilado después de la mitosis
 E G1/S-CDK promueve la fosforilación de p27 y
este será reconocido por SCF (complejo
multiproteico) que lo ubiquitina y es
degradado liberando complejo S ciclina CDK

S ciclina Cdk complex

G-ciclina-CDK fosforila a Rb, se

libera E2F y se promueve expresión
de ciclina G/S y S. S-CDK
inhibida por p27 y G1/S-CDK la
fosforila para que sea degradada y G1 ciclina Cdk complex
se libere S-CDK
 El control de la progresión de G1 y la iniciación de S es interrumpido en células con cáncer

La actividad de Cdk de Mitosis en G1 es suprimida por activación de Hct1 (Cdh1)* y la de los complejos G1/S y S por la
acumulación de CKI (p27 en mamíferos). Complejo G1-Cdk inhibe p27 y a su vez G1/S fosforila p27 y Hct1 y se degradan.
Entran en S y comienza a acumularse complejo M E2Festá controlada por Rb. G1-Cdk fosforila Rb y lo inactiva.

3 * Transitorio porque marca su propia ciclina para ubiquitinización

1 fosforila a Rb
Aumenta mucho*
4
fosforila a inhibidor p27

2 5

Rb fue identificada en cáncer en niños

* Cdh1-APC (retinoblastoma. Pérdida de ambos
degradan alelos de Rb)
ciclina
mitótica, pero
Cdh1 es
inactivada por
G1-cdk
 Eventos del control intracelular del ciclo celular
DNA debe replicarse con exactitud y sólo una vez
Evidencias de la regulación de la fase S: existen factores en S que hacen que células en G1 pasen a esa fase, pero
una vez que se ha completado (G2) no se vuelve a replicar. Es requerida la mitosis para que pueda volver a S
 Control del inicio de la replicación
Complejo proteico que se une al origen (ORC)
Cdc6 Durante el ciclo

Cdc6 Inicio de G1

Cdc6 es requerido para que se unan las proteínas Mcm

y se forme el complejo pre-replicativo

Complejo S-Cdk se activa al final de G1 y promueve

fosforilación de Cdc6 la cual es degradada (ubiquitinización
por SCF). Ello previene la unión a otro origen.
La fosforilación de ORC ocurre por otra quinasa con
colaboración de S-Cdk

S-Cdk durante G2 y M temprano

evitando inicio de replicación
hasta que finalice S.
M-Cdk también fosforila a Cdc6
Cdh1-APC degradan ciclina mitótica (9),
pero Cdh1 es inactivada por G1-cdk

Se comienza a
acumular M-cdk
(ciclina B)
MITOSIS
 Activación de M-Cdk dispara entrada en la Mitosis
M-ciclina es constante a través del ciclo celular en incrementa durante G2 y M conllevando a la acumulación de M-
Cdk, pero es inactivada por Wee1
En G2 cuando está abundante el complejo ocurre su activación por la fosfatasa Cdc25. M-Cdk fosforilada inactiva
y activa fosforilan a Cdc25.M-Cdk fosforilada activa también inhibe a Wee1.
 Activación de M-Cdk dispara entrada en la Mitosis
M-ciclina es constante a través del ciclo celular en incrementa durante G2 y M conllevando a la acumulación de M-
Cdk, pero es inactivada por Wee1
En G2 cuando está abundante el complejo ocurre su activación por la fosfatasa Cdc25. M-Cdk fosforilada inactiva
y activa fosforilan a Cdc25.M-Cdk fosforilada activa también inhibe a Wee1.
: Es la división nuclear (cariocinesis) asociada a la división de la células somáticas.
 La fosforilación de proteínas disparan los cambios morfológicos durante esta fase del ciclo celular

Se condensan los cromosomas, la membrana nuclear se rompe, el retículo endoplasmático y el aparato

de Golgi se fragmentan, la célula pierde la capacidad de adherencia a otras células y la matriz
extracelular y el citoesqueleto se transforma para producir los movimientos altamente organizados que
segregan los cromosomas y promueven la partición la célula
La primera manifestación visible de una fase M inminente es una compactación
progresiva de la cromatina dispersa en la interfase, en los cromosomas. Esto
acompañado por la fosforilación extensa de moléculas de histona H1
Interacción entre microtúbulos de polaridad opuesta
 La separación de cromatidas hermanas es iniciada por proteolisis

El complejo que promueve anafase (APC) promueve destrucción de proteínas reguladoras de la mitosis
y dispara la anafase
Final de mitosis se da por inactivación de M-Cdk

APC-Cdc20 no sólo conlleva a anafase

sino también a la finalización de la mitosis
Control de APC
Si cinetocoro no está unido a microtúbulo se une complejo Mad1
y Mad2 en estado cerrado. Esto cataliza la conversión de Mad2
abierto (o) en cerrado (c) y éste a su vez interactúa con cdc20, no
pudiendo activar a APC, arrestando la mitosis. Cuando todos los
cinetocoros están unidos a microtúbulos no se forma más Mad2c
y se separa de Cdc activándose APC.
Cdh1-APC degradan ciclina mitótica (9),
pero Cdh1 es inactivada por G1-cdk

Se comienza a
acumular M-cdk
(ciclina B)
Expresión diferencial de ciclinas en las distintas fases del ciclo.
Daños en cromosomas evitan progresión del ciclo celular
2 puntos de control, al final de G1 y al final de G2.

Daños en cromosomas en G2 envía señales para

que se fosforile e inactive cdc25

Daños en cromosomas en G1, se activa p53 por

fosforilación. La falta de este control conlleva a cáncer
Daños en el ADN o exceso de mitógenos

En G1
Daños en cromosomas en G2 envía señales para En G2
que se fosforile e inactive cdc25 y se evita la mitosis
 Resumen

(Cdh1)

* Cdh1-APC
degradan
ciclina
mitótica, pero
Cdh1 es
inactivada por
G1-cdk
Ciclo celular y cáncer
 Ciclo celular y cáncer

CAUSAS
Mutaciones

Inducidas Espontáneas

No son reparadas Fallan los puntos de control

Mutación se fija
 Ciclo celular y cáncer
EL CÁNCER ES UNA ENFERMEDAD GENÉTICA
Datos epidemiológicos y de biología celular han demostrado que se requieren de múltiples cambios genéticos en el
Desarrollo de un tumor
Células con capacidad
invasiva, Metástasis
(Tumor maligno o
secundario)

Mutación: mayor capacidad Otra mutación: Células

Otra mutación: La células y muy anormales en
de división. La célula alterada sus descendientes se dividen
y sus descendientes crecen y crecimiento y forma
de manera excesiva y lucen (Tumor primario)
se dividen muy a menudo anormales (Displasia)
(Hiperplasia)
 Ciclo celular y cáncer
Genes implicados en cáncer

Proto-oncogénes

Genes supresores
de tumor

Genes
reparadores
Ciclo celular y cáncer
Ciclo celular y cáncer
Ciclo celular y cáncer
 Ciclo celular y cáncer
Mutaciones en receptores o vías de señalización

1. Expresión descontrolada de
factores de crecimiento
2. Mutaciones en receptores
que está, activos
independiente de la señal
3. Mutaciones en proteínas en
cascada de señalización que
activan independiente de la
señal
 Ciclo celular y cáncer
Mutaciones en puntos de control del ciclo celular
 Ciclo celular y cáncer
Papel de p16 en el control al final de G1
p16 se encarga de inhibir a los complejos S cdk (4)-ciclina D .

p16 depende del medio extracelular -> si no existen suficientes señales del exterior (mitógenos, factores de
crecimiento, nutrientes, etc.) se acumula.
 Ciclo celular y cáncer
Daños en cromosomas evitan progresión del ciclo celular 2 puntos de control, al final de G1 y al final de G2.

En G1
Daños en cromosomas activan a p53 por
fosforilación. La falta de este control conlleva a
proliferación descontrolada de células
Ciclo celular y cáncer