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    Automatizacion en Microbiologia Clinica

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    Les Rodri
    Este documento describe varios métodos automatizados y rápidos para la detección, identificación y enumeración de microorganismos en muestras clínicas, de alimentos e industriales. Estos métodos incluyen la detección de crecimiento mediante turbidez, metabolitos radiactivos, impedancia eléctrica y bioluminiscencia. También se describen métodos rápidos como colorimetría, cromatografía, métodos inmunológicos y moleculares. Finalmente, se mencionan ejemplos específicos de sistem

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    Automatizacion en Microbiologia Clinica

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    Este documento describe varios métodos automatizados y rápidos para la detección, identificación y enumeración de microorganismos en muestras clínicas, de alimentos e industriales. Estos métodos incluyen la detección de crecimiento mediante turbidez, metabolitos radiactivos, impedancia eléctrica y bioluminiscencia. También se describen métodos rápidos como colorimetría, cromatografía, métodos inmunológicos y moleculares. Finalmente, se mencionan ejemplos específicos de sistem

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    Este documento describe varios métodos automatizados y rápidos para la detección, identificación y enumeración de microorganismos en muestras clínicas, de alimentos e industriales. Estos métodos incluyen la detección de crecimiento mediante turbidez, metabolitos radiactivos, impedancia eléctrica y bioluminiscencia. También se describen métodos rápidos como colorimetría, cromatografía, métodos inmunológicos y moleculares. Finalmente, se mencionan ejemplos específicos de sistem

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    Este documento describe varios métodos automatizados y rápidos para la detección, identificación y enumeración de microorganismos en muestras clínicas, de alimentos e industriales. Estos métodos incluyen la detección de crecimiento mediante turbidez, metabolitos radiactivos, impedancia eléctrica y bioluminiscencia. También se describen métodos rápidos como colorimetría, cromatografía, métodos inmunológicos y moleculares. Finalmente, se mencionan ejemplos específicos de sistem

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    Automatizacin en Microbiologa Clnica

    PhD (c ). Juan Agapito Panta

    Atutomatizacin y mtodos rpidos


    Estudia la mejora de los mtodos
    Aislamiento Deteccin precoz La caracterizacin (identificacin) y La enumeracin de los microorganismos y sus productos

    En muestras
    Clnicas De alimentos Industriales y ambientales

    Mtodos
    Automatizados Deteccin de crecimiento
    Turbidez Metabolitos radiactivos Impedeancia elctrica Bioluminiscencia

    Rpidos

    Identificacin
    Colorimetria Cromatografa para Ag y metabolitos Mtodos inmunolgicos

    Antibiograma

    Para identificacin y diagnstico Sistemas manuales Sistemas mecanizados Sistemas inmunolgicos Sistemas moleculares Otras tcnicas

    Turbidez
    Por densidad ptica Por nefelometra o dispersin de la luz Como indicador de crecimiento y desarrollo Determinar si existe microorganismos en muestras Medicamentos estriles Orinas (deteccin de infeccin clnicamente significativa) Indicador de crecimiento En presencia de inhibidores especficos Sensibilidad a Antibiticos Formato cubetas microdilucin Agitador incubador

    Mtodos radiactivos
    Produccin de metabolitos radiactivos Un ejemplo Biotec
    Produccin de CO2 radiactivo gaseoso Por microorganismos que metabolizan sustancias marcadas con 14 C : glucosa, aminocidos y alcoholes

    Hemocultivos
    Se analiza produccin de 14C

    Impedancia elctrica
    Se mide los cambios de impedancia
    Las variaciones en el flujo de corriente elctrica que atraviesa el medio en el cual se esta incubando la muestras

    Rpido y automtico
    Control contnuo Primer signo de variacin No requiere manipulacin
    manual ni tcnica (industria alimentaria)

    Bioluminiscencia
    Basado en luciernagas (reaccin qumica)
    Conversin del sutrato luciferina en oxiluciferina y luz Catalizada por la enzima luciferasa con energa proveniente de la desfosforilacon de ATP

    Luminmetro (similar al fotmetro)


    Mide la luz generada por esta reaccin

    Cantidad de luz producida


    Es directamente proporcional al ATP presente

    Bioluminiscencia
    Gen Reporter Deteccin de viabilidad del crecimiento bacteriano por bioluminescencia (Luciferasa) Tambin se ha observado variacin de la intensidad de luz producida por cepas sensibles y resistentes
    TM4

    luciferina

    FTON
    ATP

    Colorimetra
    Pruebas bioqumicas convencionales Cambios de color de los indicadores de pH Presencia de productos finales del metabolismo Clula fotoelctrica Mide cambios de color Combinacin colorimetra + nefelometra Combinacin identificacin + antibiograma

    Un ejemplo VITEK
    Automatizacin total / rapidez 2-6 hrs Cartuchos o placas
    30-45 micropocillos con sustratos

    Varios cartuchos
    Gram negativos 90 especies Gram positivos 49 especies Anaerobios 80 especies Neisseria y Haemophylus 30 especies

    Antibiogramas MIC varias configuraciones Varios modelos

    Cromatografa
    Diagnstico de enfermedad infecciosa
    Mediante identificacin de constituyente antignico Mediante identificacin de productos del metabolismo bacteriano

    Cromatografa en fase gaseosa


    Anaerobios

    Comatografia lquida de alta performancia (HPLC)

    Identificacin inmunolgica
    Anticuerpos monoclonales Mtodos automatizados
    Contrainmunoelectroforsis Nefelometra RIA (Radioinmunoanalisis) ELISA
    Ampliamente utilizado Para detectar Ag- Ab Para virus, bacterias, hongos y parsitos

    Rpidos

    Para identificacin y diagnstico


    Multiples pasos
    Identificacin convencional Cdigo numrico

    Sistema unitario
    Ms rpido

    API 20E (Enterobacteriaceae)


    20 pruebas bioquimicas

    Sustancias deshidratadas En 5 8 h prfil de cifras

    Biochemical reactions:
    API 20E
    Enterobacteriaceae + 18-24 h Generate profile #

    Biochemical reactions: ENTEROTUBE II 12 tests O/N MICRO-ID & MICRO-ID Listeria* 15 tests 4h

    Identificacin automatizada
    VITEK (2 6 h) 300 especies clnicas Biolog Microplacas Cataboliza 95 fuentes de C Tetrazolium: indicador de actividad microbiana BBL cristalTM Gram positivo ID Kit
    121 G + Entericos y no fermentadores, identificacion de bact Gram aerobias y bacilos gram negativos no fermentadores de glucosa

    BIOLOG

    Kits inmunolgicos rpidos


    Ms tiles cuando
    No es posible cultivar (Treponema) Es peligroso (Rickttsias) Es demasiado complejo (Mycobacterium)

    Fcil de usar Rpidos Sensibles Especificos

    Ejemplos de deteccin de Ag
    Estreptococo grupo A en frotis farngeo
    Culturette Group A Strep ID kit, Directige

    Virus sincitial respiratorio en frotis nasofarngeo VHS (Virus Herpes Simple) en 1-2 minutos En LCR Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae
    Bactigen, Directigen

    Detectar y confirmar Staphylococcus aureus


    Staphaurex en 30 segundos

    Ejemplos de detccin de Ac.


    Ac. contra VIH
    SUDS HIV-1 en 10 minutos

    Ac. contra Helicobacter pylori en suero


    Quick Vue H pylori Test en 7 minutos LINK H. PYLORI en 5 minuto LINK2 H. PYLORI en 1 minuto

    Inmunocromatografia
    Microesferas latex
    coloreadas (azul)

    Ligadas a sustancia (250)


    Ag o Ac (Ac Listeria)

    Reaccionan con muestra


    complejo Ag-Ac migracin lateral

    Ac inmovilizado
    retiene complejo Ag-Ac evidencia lnea de color

    TUBO INDICADOR DE CRECIMIENTO MYCOBACTERIANO (MGIT)


    Lectura 7 10 das No radiomtrico No requiere de equipos automatizados Requiere espacio limitado para la incubacin Puede usarse para pruebas de ADN y bioquimicas.

    METODOS RADIOMETRICOS (SISTEMABACTEC SEMIAUTOMATIZADO)


    Detecta automticamente el crecimiento micobacteriano midiendo la cantidad de 14CO2 producido por la metabolizacin de sustratos (cidos grasos) marcados con 14C

    MEDIOS DE CULTIVO BIFASICO NO RADIOMETRICOS (MB-SEPTI-CHECK)

    Medio bifsico suplementado : - Chocolate - Lowestein Jeensen - Middlebrook La identificacin es visual sobre el medio slido. Puede observarse pigmento y morfologa

    Caldo 7H12

    BACTEC 9000
    MGIT (Mycobacteria growth indicator tube, B&D) Automatizado Fluorimtrico (Noradiomtrico) Resultados en 5 das a 10 das

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