Mutagenesis

Instituto Politcnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Departamento de Microbiologa
Laboratorio de Gentica Microbiana
Prctica 2:
Induccin de Mutantes en Escherichia coli
Mutagnesis
Hidroxilamina como agente mutagnico para
Neurospora crassa
Mutacin.
Se define como el cambio de estructura primaria en el
material gentico, heredable a la trascendencia y no se
debe a fenmenos de recombinacin.
Caractersticas de las mutaciones

1. Especificidad: cada mutacin afecta a uno carcter
determinado.
2. Adaptacin. Capacitan al microorganismo
adaptarse a cambios en el medio.
3. Mecanismos de reparacin. Producen
complementarios a la 1era mutacin.
para
cambios
4. Taza de mutacin: Frecuencia de orden de 10-7-10-10
Clasificacin de los diferentes

tipos de Mutacin.
Clasificacin
Grado de Lesin
Macrolesiones
Microlesiones
Origen
Espontneas
Inducidas
Efecto sobre el
fenotipo
Silenciosas
Sentido Equivocado
Sin sentido
Mutacin por grado de lesin

En funcin de su magnitud, longitud o grado de lesin,
permite clasificarlas en:
Macrolesion
es
Alteraciones graves en
la molcula del DNA o
en un segmento
grande.
Microlesione
s
Alteracin producida
en una o pocas bases
del DNA.
Microlesiones (puntuales)
Sustituciones
Transversiones
Transiciones
Inserciones
Deleciones
Alteran el marco de lectura
Sustitucin
Es aquella mutacin en la que donde debera haber una base se
encuentra otra del mismo tipo.
Inserciones y deleciones
Este tipo de mutacin produce un corrimiento en
el orden de lectura.
Pueden ser:
-Adiciones gnicas: Es la insercin de
nucletidos en la secuencia del gen.
-Deleciones gnicas: Es la prdida de
nucletidos.
Marcos de lectura
ORF: Secuencia nucleotdica organizada en tripletes que codifica
una secuencia aminoacdica de un polipptido, incluyendo un
codn de inicio y un codn de terminacin.
Corrimiento del marco de lectura.
Origen
Mutaciones Espontneas
Fuente continua de alteraciones aleatorias de la
informacin contenida en el material gentico, se
producen de forma natural.
Su frecuencia es de 10-7 a10-10 (1 en 10 millones)
Se da por:
Errores por tautomerismo.
Dao oxidativo.
Tautomerism
o Los cambios tautomricos pueden resultar en cambios en el
emparejamiento de bases, o mutaciones.
Tautomerismo en las replicaciones
El cambio de la forma normal cetnica a la forma

enlica produce transiciones
Dao oxidativo
Radicales libres
Las formas activas de los radicales del oxigeno,
como el perxido de hidrgeno (H2O2) y los
superxidos (O2) generan rupturas en el enlace
glicosdico por la oxidacin del azcar generando
sitios apurnicos o apirimidnicos .
Glicol de timidina
8-Oxo-hidrodesoxiguanisina
(8-Oxo-G)
Mutacin inducida
Mutgeno: cualquier agente fsico o qumico aumenta

la frecuencia de mutacin
Mutagnesis: Proceso de formacin de un organismo
mutante.
Mutacin inducida
Agentes Mutagnicos
Fsicos
Rayos X
o Poseen un poder de penetracin mas alto que los rayos UV.
o Producen radicales libres de OH hiperreactivos, responsables de la
abertura de un anillo de una base, o fracturas monocatenarias o
bicatenarias en el ADN, esto puede ocasionar mutaciones por delecin.
Fsicos
LUZ UV
Causa la unin o dimerizacin
de pirimidinas adyacentes en
el DNA.
Hidroxilacin de citosina y
uracilo
Entrecruzamientos entre DNA
y protenas
Rotura de la cadena y
desnaturalizacin del DNA
Fsicos
TEMPERATURA
T (37C) produce mutaciones puntuales en el ADN,
como son:
Despurinizacin: Prdida de bases pricas
Desaminacin. Prdida de grupos aminos de las
bases.
Despurinizacin
Se produce la prdida de purina en una molcula de doble
cadena de DNA, se produce por rompimiento del enlace
glucosdico que une al carbono 1 de la desoxirribosa a la
posicin 9 del anillo de purina.
Existe una ruptura del enlace glicosdico entre la base

nitrogenada y el azcar al que esta unida con prdida de
una A o una G.
Desaminacin
Prdida de grupos amino.

El U no forma parte del ADN, laglucosidasa de uracilo se encarga de
detectar U en el DNA y retirarlo producindose una base apirimidnica.
Desaminantes: HNO2
T es una base normal en el ADN y no se

retira, por tanto estos errores no se
reparan.
GCAT
Anlogos de bases
Son compuestos qumicos que

pueden remplazar a una base
determinada.
5-Bromouracilo (5BU)
Es anlogo de la Timina (T) y
puede remplazarla.
Puede provocar un error tras la
replicacin
del
DNA,
es
inestable
y
provoca
transiciones .
2-Aminopurina
La 2-Aminopurina (2AP) es anlogo de la Adenina (A).
La 2AP aparea con la Timina (T) pero en su forma imno (2AP*)

empareja con la Citosina (C).
Esta alteracin produce transiciones.
Hidroxilamina (HA).
(NHOH): Reacciona con la citosina donde el grupo amino es
reemplazado por un grupo hidroxiamino.
Este derivado de la citosina se aparea con adenina
producindose transiciones GC AT.
Alquilantes
Etilmetanosulfonato (EMS): produce las sustituciones:
transiciones y transversiones.
Nitrosoguanidina (NTG/N-metil, N'-nitro, N-nitrosoguanidina):
produce transiciones y transversiones GCTA
Intercalantes
Colorantes de acridina
Molculas planas, inician la mutacin insertndose en la
doble hlice del DNA, provocando su deformacin;
provocando adiciones y deleciones en la replicacin.
Clasificacin de mutgenos por su dao, direccin y efecto

Clasificaci
Mutgeno
Dao
Direccin
Efecto
n
Dmeros de
Insercin, delecin,
Luz UV
Fsico
Unidireccional
pirimdinas
sustitucin
Hidroxilamina
cido nitroso
Qumico
Qumico
Hidroxilante
Desaminante
Unidireccional
Transiciones de GC-AT
Bidireccional
Transiciones de GC-AT y
trasversiones
AT-CG
Transiciones de GC-AT,
AT-GC
Transiciones de GC-AT,
AT-GC
EMS
Qumico
Alquilante
Bidireccional
5-Bromouracilo
Qumico
Anlogo de base
Bidireccional
Nitrosoguanidina
Qumico
Alquilante
Unidireccional
Transiciones de GC-AT
ICR-170
Qumico
Intercalante
Bidireccional
Insercin o delecin
9-Aminoacridina
Quimico
Intercalante
Bidirecccional
Insercin o delecin
Efecto sobre el fenotipo

Mutacin Silenciosa:
Son cambios sutiles en las secuencias de DNA, irrelevantes en
un comienzo en cuanto a la codificacin protenica.
Mutacin sin sentido:

Tiene lugar una sustitucin de bases en un codn dado, en
donde en vez de formar otro aminocido distinto, se crea uno
de los tres codones stop (UAA, UAG, UGA)
Mutacin
en sentido
Mutacin
En sentidoerrneo:
errneo
Cambian
la secuencia
de un
dado,
sustituyendo
una
Mutaciones
que cambian
la codn
secuencia
de un
codn
dado,
sustituyendo
una base
por otra,que
lo que
base por
otra,
lo que puede
producir
el puede
aminocido
producir
codificado
no sea el que
codificado
noque
seaelelaminocido
que se haba
especificado
antes.
se haba especificado antes.
Mutaciones no reversibles
(unidirecionales)y reversibles
(bidireccionales).
Si se trata de una mutacin unidireccional no
reversible, puede reemplazar al alelo del que se
origin. (A1
A2) pero muy a largo plazo.
Si se trata de una mutacin bidireccional
reversible, se puede establecer una situacin de
equilibrio que depende solo de las tasas de
mutacin (u) y retromutacin (v) (A1 A2).
Reversin
Es una segunda mutacin, se restaura total o parcialmente el
genotipo y/o fenotipo daado por la primera mutacin.
Verdadera: mutante que a revertido a su genotipo anterior,
restauracin del genotipo (ADN) silvestre.
No verdadera (por supresin): reversin del fenotipo mutante
al silvestre a causa de una mutacin en otro lugar que
suprima o compense la deficiencia de la primera
Supresin intragnica: se produce cuando la segunda
mutacin se da dentro del mismo gen en que se dio la
primer mutacin.
Supresin intergnica: las segunda mutacin se da en un
gen diferente a donde se dio la primer mutacin.
Artculo:
Hidroxilamina como agente
mutagnico de Neurospora crassa
Hydroxilamine as a mutagenic agent por

Neurospora crassa
H. V. MALLING
Biology 3' Division,
Oak Ridge National Laboratory),
Oak Ridge, Tenn. (U.S.A.)
(Received June 21st, I966)
Neurospora crassa
o Es un hongo perteneciente a la
divisin Ascomycota
o Es utilizado como organismo
modelo por su haploida, su ciclo de
vida rpido y sencillo, y por la
facilidad con la que se puede
cultivar.
o Un sistema preferido para estudiar
el mecanismo de la mutacin es el
gen ad-3, porque los mutantes ad-3
son morados y se detectan
INTRODUCCIN
La mutagenicidad de la Hidroxilamina en Neurospora crassa se
probo en 8 mutantes diferentes que requieren adenina (ad-3B)
La reaccin entre DNA y HA es con citocina y con RNA con
uracilo
A un pH de 6.1 la reaccin es mas rpida con citocina que con

uracilo
HA ha sido usada para inducir dao cromosmico en clulas

de mamferos
No se ha podido identificar la alteracin por HA en eucariotes

a nivel molecular
Objetivos
Determinar la especificidad de HA
para producir reversiones en mutantes
dependientes de adenina.
Obtener informacin ms detallada
sobre los efectos de HA en Neurospora

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Caractersticas de las mutaciones

4. Taza de mutacin: Frecuencia de orden de 10-7-10-10

Clasificacin de los diferentes

Mutacin por grado de lesin

Alteran el marco de lectura

Corrimiento del marco de lectura.

Tautomerismo en las replicaciones

El cambio de la forma normal cetnica a la forma

Mutgeno: cualquier agente fsico o qumico aumenta

Existe una ruptura del enlace glicosdico entre la base

Prdida de grupos amino.

T es una base normal en el ADN y no se

Son compuestos qumicos que

La 2-Aminopurina (2AP) es anlogo de la Adenina (A).

La 2AP aparea con la Timina (T) pero en su forma imno (2AP*)

Esta alteracin produce transiciones.

Clasificacin de mutgenos por su dao, direccin y efecto

Efecto sobre el fenotipo

Mutacin sin sentido:

Hydroxilamine as a mutagenic agent por

A un pH de 6.1 la reaccin es mas rpida con citocina que con

HA ha sido usada para inducir dao cromosmico en clulas

No se ha podido identificar la alteracin por HA en eucariotes

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