HISTOQUIMICA

S
HISTOQUIMICA
Es el estudio de los componentes tisulares y celulares por medio de colorantes
especiales, reacciones bioquímicas y reacciones inmunológicas.
La histoquímica es el conjunto de técnicas de coloración destinadas a visualizar
sustancias específicas en los tejidos. Este propósito es tanto cualitativo como
cuantitativo. Puede realizarse con fines diagnósticos y desde ya resaltemos que los
procedimientos histoquímicos (en especial la inmunohistoquímica) se convirtieron
en un instrumento invalorable en el diagnóstico y/o pronóstico de innumerables
enfermedades. El método histoquímico en sentido estricto es microscópico
debiendo cumplirse varias condiciones:
1) la sustancia original debe ser inmovilizada y visualizada por el microscopio en su
localización celular original
2) la sustancia debe ser identificada por un procedimiento que sea específico para
ella o para el grupo químico al que pertenece.
PRINCIPALES SUSTANCIAS DE INTERÉS BIOLÓGICO
DEMOSTRABLE HISTOQUÍMICAMENTE.
1. IONES
• IÓN HIERRO
- EL ión férrico se demuestra por la reacción con la mezcla de

ferrocianuro potásico y ácido clorhídrico (azul de Prusia) que
forma un precipitado azul oscuro de ferrocianuro férrico.
- Sirve para localizar los macrófagos del SRE en el hígado y
diagnosticar enfermedades en las cuales hay depósitos de hierro
en los tejidos. Por ejemplo hemocromatosis y hemosiderosis.
2- LÍPIDOS.
Utilizando colorantes tipo Sudán III, insolubles en agua y muy solubles
en grasa. No es un verdadero método de coloración, sino un proceso de
transferencia de color por disolución de la sustancia empleada en el
lípido. Otros colorantes son Sudán IV, Rojo escarlata, Sudán negro B,
entre otros. Tener en cuenta que cuando se quiere proceder al
reconocimiento de lípidos, es necesario elegir un fijador que no los
disuelva, aconsejándose formol al 10 % o líquido de Bouin en cortes con
micrótomo de congelación.
Sirven para el diagnóstico de enfermedades metabólicas que producen
depósitos intracelulares de lípidos.
-Por ejemplo Enf. de Gaucher, Enf. de NiemannPick, Enf. de Fabry,
esteatosis hepática (hígado graso).
3. ÁCIDOS NUCLÉICOS.
DNA .
-Se usa la reacción de FEULGEN que consiste : Hidrólisis del DNA
con ácido clorhídrico para extraer las bases púricas y dejar en
libertad los grupos aldehídicos del azucar.
- El reactivo de SCHIFF (PAS) reacciona con el aldehído y forma
un precipitado rojo.
RNA.
-Tiene gran afinidad por los colorantes básicos (basofília) lo que
hace que se tiña intensamente con el AZUL DE TOLUIDINA o de
METILENO.
Para identificar al ADN y ARN se cuenta con dos métodos:
• Métodos comunes a ambos ácidos nucleicos: A través del uso de colorantes nucleares
o básicos como la Hematoxilina, Azul de metileno o de Toluidina; a través la absorción
de rayos ultravioletas de determinadas longitudes de onda; o bien, con el empleo de
isótopos radioactivos, como timidina tritiada que pone en evidencia la Timina del
ADN, o uridina tritiada para demostrar Uracilo en el ARN.
• Métodos de identificación diferencial: REACCIÓN DE FEULGEN O DE FEULGEN –
ROSEMBECK: Es específica para ADN, pues depende del azúcar Desoxirribosa. Tras una
hidrólisis ligera por la acción breve sobre los cortes de ácido clorhídrico diluido, se
logra la extracción del ARN y la desintegración de la unión desoxirribosa – purina, con
liberación de grupos aldehídos, sobre los cuales actúa el reactivo de Schiff (fucsina
básica decolorada con anhídrido sulfuroso), con el que se tratan los cortes. Se obtiene
un color púrpura o violeta oscuro en las estructuras que contienen ADN, color tanto
más marcado, cuanto mayor es su concentración. Se demuestra así la ubicación del
ADN en la cromatina de núcleos interfásicos, en cromosomas durante la mitosis, y muy
pequeña cantidad en mitocondrias y en los cloroplastos de las células vegetales.
4. PROTEÍNAS
Técnicas de coloración para proteínas: Se basan en el
reconocimiento y localización de determinados
aminoácidos o bien se utilizan anticuerpos específicos
marcados para determinadas proteínas.
Su identificación se basa en métodos de detección de
aminoácidos. - Reacción de aminobenceno.
- Reacción de Sakaguchi que detecta la arginina de las
proteínas básicas como las histonas y protaminas.
- Para Dx. de proteinosis pulmonar.
5.- POLISACARIDOS
Dentro de los hidratos de carbono o glúcidos encontramos a los polisacáridos que
están formados por más de diez moléculas de monosacáridos (azúcares simples).
Se pueden dividir en polisacáridos simples(glucógeno, galactógeno) o polisacáridos
complejos (mucopolisacaridos, mucoproteínas y mucolípidos).
Fijación: Bouin, Carnoy, fríos.
Polisacáridos simples(glucógeno, galactógeno):
Reacción APS (PAS) o ácido peryódico –reactivo de Schiff y método del carmín de
Best.
Polisacáridos complejos(mucopolisacaridos ácidos):
Método de Hale y métodos del azul alcián.
Polisacáridos complejos(mucopolisacaridos neutros, mucoproteínas,
mucolípidos);
Reacción APS (+) y método del azul alcián (-).
POLISACARIDOS
La reacción más usada es la del PAS (ácido periódico-Schiff). El ácido
oxida a los azucares en posición 1-2 y deja grupos aldehídos libres que
reaccionan con el reactivo de SchifF dando un compuesto de color
magenta . De este modo se demuestra la presencia de:
-Glucógeno en el hígado y músculo.
-Depósito intracelular de glucógeno en enfermedades congénitas.
-Glucosaminoglicano o mucopolisacárido que forman parte de los
proteoglicanos.
-Glucoproteínas.
-Los azucares ácidos también reaccionan con el colorante AZUL DE
ALCIAN.
Técnicas de coloración para Hidratos de Carbono (Carbohidratos o
Glúcidos): Se utilizan los siguientes métodos:
• Reacción de PAS (Peryodic acid Schiff): Se basa en la liberación de grupos

aldehídos por la acción oxidante del ácido periódico y su evidencia ulterior por
medio del reactivo de Schiff. Tiñe de rojo o rojo púrpura a las estructuras que
han liberado los aldehídos. Será positiva para las siguientes estructuras:
Membrana basal, células caliciformes, células que contengan glucógeno como
por ejemplo los Hepatocitos y las células musculares. Existen otras sustancias
que no son hidratos de carbono pero que son Pas positivas como los lípidos no
saturados, fibras colágena y reticular.
• Método de Alcian Blue: Tiñe selectivamente los polisacáridos ácidos en
solución de pH de 2,2 o menos. Tiene también especial afinidad por los grupos
sulfatados, coloreando de azul a los mucopolisacáridos ácidos, y no tiñe a los
neutros.
6.- ENZIMAS
FOSFATASA ÁCIDA
-Se usa el método de GOMORI que consiste en incubar
cortes de tejidos en una solución que contengan glicerol
fosfato sódico y nitrato de plomo a pH 5 .
-Se usa para localizar lisosomas.
DESHIDROGENASAS
-Se usan cortes no fijados junto con tetrazol para formar
un precipitado coloreado llamado formazan.
-Se usa para detectar mitocondrias.

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